Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure LP9

Diagnosticul infeciilor produse de fungi filamentoi neseptai

Fungii filamentoi neseptai = ZYGOMYCETE Se caracterizeaz prin: Macroscopic: aspectul lnos al coloniei, culoare alb cenuie, cretere rapid, invaziv. Microscopic: prezenta miceliului neseptat, format din hife hialine, cu diametru neregulat.

nmulirea asexuat o prin endospori produi in interiorul unei structuri = sporociti (sporangi). o sporocitii conin sporangiospori , care sunt eliberai in mediul ambiant prin dehiscenta peretelui sporocistului. o Filamentul micelian care susine sporangele =sporocistofor (sporangiofor) o Jonciunea dintre cele doua elemente =apofiza. sexuat o se realizeaz prin homotalism (ntre structuri ale aceluiai individ) heterotalism( intre structuri ale unor indivizi diferiti) o se materializeaz prin formarea zigosporilor (spor sexuai)

Habitat: sol, materie organica in descompunere, compost, fructe, boabe de cereale, resturi de alimente. Patogenie Fungii familiei Mucorales o Absidia, Rhizopus, Mucor, Rhizomucor, etc. o determin infecii pentru pacienii imunodeprimai o infecii cutanate i viscerale profunde Fungii familiei Entomophthorales o Conidiobolus, Basidiobolus o determin infecii la pacieni imunocompeteni o infecii localizate n esutul subcutanat.

Produse patologice aspirat bronic n infecii respiratorii raclaj sau biopsie n micoze cutanate (frecvent la nivelul feei) LCR n zigomicoz rino-cerebral frecvent de la persoane diabetice

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

Examen microscopic direct Frotiu colorate histologic (Gomori) sau cu calcofluor Se vizualizeaz filamente miceliene largi, cu diametru neregulat, ramificate in unghi drept din loc n loc sunt prezente formaiuni cu aspect i rol de rdcin (rizoizi)

Cultivarea pe medii uzuale fr adaos de cicloheximid probele bioptice nu se mojareaz (se distruge miceliul prob fals negativ) la 32C

Identificarea Caractere de cultur colonii lnoase, cu cretere rapid, de culoare alb-gri la suprafa se observ sporocitii sub form de granule gri-negre

Caractere morfologice pot fi urmrite prin o preparat extemporaneu cu scotch n albastru-lactofenol o dilacerarea miceliului cu ace n albastru-lactofenol se urmresc detaliile morfologice pentru stabilirea genului Rizoizi ++ + + Sporangiofor ramificat Nu Da Da Da Sporocist Sferic Piriform Sferic Sferic Apofiz + ++ Sporangiospori Angulari, striai Rotunzi/ovoizi netezi Rotunzi/ovoizi netezi Rotunzi/ovoizi netezi

Genul Rhizopus Absidia Rhizomucor Mucor

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

Rhizopus oryzae a. aspect general; b. sporangiofor; c. sporangiospori; d. zigospor; e. rizoizi

Absidia coerulea a. sporangiofori; b. columele; c. sporangiospori

Mucor amphibiorum a. sporangiofori; b. columele; c. sporangiospori

Rhizomucor miehei a. sporangiofori; b. sporangiospori; c. zigospor

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

Diagnosticul infeciilor produse de fungi filamentoi septai hialini

HIALIN = lipsa pigmentului brun-negricios de la nivelul hifelor, in vivo. Genuri Aspergillus: A. fumigatus, A. flavus, A. niger, A. terreus Penicillium: peste 200 specii: P. notatum, P. commune, etc. Patogen pentru om: P. marneffei Fusarium: peste 100 specii. Patogene: F. oxysporum, F. solani Acremonium: peste 100 specii

Habitat: sol, aer, plante, insecte. Produse patologice: Aspergillus Aspirat bronic: aspergiloz pulmonar invaziv, aspergiloz bronic obstructive, aspergiloz bronhopulmonar alergic Secreie din puncie sinuzal LCR Raclaj tegumentar Snge n endocardit Biopsie osoas Fragment din excizie de glob ocular n endoftalmit probe din mediu (furaje) pentru identificarea aflatoxinelor

Penicillium Aspirat bronic n afectare pulmonar la pacieni imunodeprimai

Fusarium Fragment din excizie de glob ocular n endoftalmit, keratite snge n endocardit probe cutanate lichid peritoneal, sinovial

Acremonium prelevate din leziuni traumatice prelevate cutanate/osoase n suspiciune de micetom snge n infecii sistemice/de cateter, endocardite LCR n afectare cerebral fragmente de unghie

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

Cultivare Mediu PDA (potato-dextrose-agar) sau agar cu mal medii elective pentru fungi filamentoi Mediu Sabouraud cu cloramfenicol Mediu Czapek mediu selectiv pentru Aspergillus

Incubare 37C pentru prelevate profunde 30C pentru prelevate superficiale Aspergillus fumigatus poate crete la 45C

Caractere de cultur A. fumigatus: Colonie albastr-verzui nchis, uneori pigment rou A. niger: suprafaa coloniei neagr (datorit capetelor aspergilare), aspect granular A. flavus: colonie galben-verzuie, aspect granular-pulverulent A. terreus: colonie galben-brun pn la maro Penicillium marneffei: Colonii cu cretere rapid, albe la nceput, apoi verzui, aspect catifelat, pufos sau granular; poate produce pigment galben-rou difuzibil Penicillium spp: colonii cu cretere rapid, pufoase, galbene, albe, verzi sau roiatice n funcie de specie Fusarium spp: colonii lnoase, de culoare roz Acremonium spp: colonii catifelate, de culoare alb-glbui sau roz

Examen microscopic Preparate native n albastru-lactofenol Preparate repetate cu scotch din aceeai zon a coloniei pentru evidenierea hifelor i a capetelor aspergilare Preparate colorate cu calcofluor sau Giemsa (din prelevate n stare proaspt) n prelevatele profunde nu se observ conidii n prelevatele superficiale: hife i conidii

Aspergillus conidiofori drepi vezicul apical care poart o direct fialidele (uniseriate) o metule i fialide (biseriate) conidii produse de fialide, dispuse o columnar o radiar

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

Penicillium conidiofori neramificai sau ramificai fialide terminale conidii produse de fialide conidii

fialide

Conidiofor

Fusarium hife hialine septate conidiofori aciculari fialide conidii o macroconidii o microconidii

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

a. hife i conidiofori; b. macroconidii; c. microconidii Acremonium hife fialide perpendiculare pe hife conidii grupare n grmezi la extremitatea liber a fialidelor

a. fialide i conidii, b. clamidospori

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

Fungi septai dematiacei

DEMATIACEU = nchis la culoare, prezena unui pigment brun n hife/conidii in vivo i in vitro. Specii Habitat sol, materii organice n descompunere, aer, suprafee Alternaria: A. alternata, A. infectoria, A. chlamydospora Aureobasidium: A. pullulans Bipolaris: B. australiensis, B. hawaiiensis

Produse patologice Alternaria fragmente de unghie n onicomicoze secreii din plag n infecii cutanate probe bioptice n feohifomicoz secreie conjunctival n keratit

Aureobasidium secreii din plag n infecii cutanate secreie conjunctival n keratit aspirat bronic snge i biopsie din organe n infecii sistemice la persoane imunocompromise

Bipolaris secreie din puncie sinuzal secreii din plag n infecii cutanate i subcutanate snge n endocardit secreie conjunctival n keratit

Cultivare Sabouraud cu cloramfenicol PDA pentru stimularea sporulrii incubare la 30C (37C n cazul prelevatelor profunde)

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

Caractere de cultur Alternaria: colonii cu aspect lnos, culoare gri, reversul colorat n negru Aureobasidium: colonii plate, umede, iniial albe-crem-roz, ulterior brune sau negre Bipolaris: colonii lnoase sau pulverulente, culoare gri sau brun-negricioas, reversul coloniei este brun-negru

Caractere morfologice Alternaria conidiofori ereci, formai din mai multe celule, pigmentai conidii dispuse n lanuri, n form de grenad, cu baza rotunjit, pigmentate, septate transversal i/sau longitudinal

Alternaria alternata - conidiofori i conidii Aureobasidium hife septate, ntrerupte de zone pigmentate care se vor transforma n artrospori (clamidospori) nu prezint conidiofori conidiile se formeaz lng hife, sunt aezate n grmezi unele conidii sunt nmugurite

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP9

Aureobasidium pullulans a. clamidospori; b. hife i conidii; c. endoconidii; d. conidii i celule nmugurite Bipolaris conidiofori septai, pigmentai, cu traiect de zigzag n poriunea apical conidii pigmentate, septate, cilindrice sau elipsoidale

Bipolaris australiensis - conidiofori i conidii

10