5/5/2018

Bacili Gram pozitivi

Bacili Gram pozitivi aerobi

• Nesporulati
– Corynebacterium
– Listeria
– Erysipelothrix
– Lactobacillus

1
 5/5/2018

Corynebacterium
• Bacili Gram pozitivi
– inegal calibrati - extremitati deformate de prezenta unor
granulatii (“aspect de maciuca”)
– inegal colorati
– dispusi in unghiuri ascutite sau palisade (siruri paralele)
• Imobili, nesporulati
• catalazo pozitivi
• Facultativ anaerobi
• Cultiva pe medii simple; exceptie – speciile lipofile, care
necesita medii imbogatite cu lipide (ser, sange, galbenus de ou)
• granulatiile de polimetafosfast – se coloreaza metacromatic (in
rosu cu albastru de metilen policrom)

Corynebacterium
Corynebacterium
Specii toxigene
C. diphteriae difterie
C. ulcerans patogen animal, ocazional imbolnaviri la om:
faringita (inclusiv cu false membrane), infectii ale
tesuturilor moi
C. pseudotuberculosis patogen animal, ocazional imbolnaviri la om
Specii difterimorfe
C. jeikeium Bacteriemii, endocardite, infectii ale protezelor,
infectii ale tesuturilor moi
C. minutissimum Eritrasma, infectii ale tesuturilor moi
C. urealyticum Infectii urinare
C. pseudodiphteriticum endocardita

2
 5/5/2018

Corynebacterium diphteriae
• Bacili Gram pozitivi cu aspect “maciucat” dispusi in unghiuri –
frotiuri din produse patologice sau cultura pe mediu Loeffler
Caractere cultivare
• Cultiva in aerobioza la 37 C pe medii imbogatite cu ser sau sange
• pe mediul Loeffler (mediu cu glucoza, ser de bou, coagulat in
panta) – colonii albe, lucioase, bombate (aspect de “picaturi de
spermantet”)
• Pentru izolarea din produse patologice - medii selective cu
telurit de potasiu – colonii brune sau negre
• m Tinsdale - (mediu cu cistina, telurit de K) – colonii negre,
inconjurate dupa 24- 48 ore de incubare de un halou brun -
diferentiere de bacilii difterimorfi

Corynebacterium diphteriae
• Factori de patogenitate
o Toxina difterica
• produsa de tulpinile care gazduiesc profagul β care contine
gena tox
• expresia genei tox – reglata de un represor (DtxR) care in
prezenta Fe2+ formeaza un complex care se ataseaza pe
secventa reglatoare a operonului si inhiba transcriptia
• exotoxina de tip A-B
– B – legare de receptori membranari si intrare in celula
– A – catalizeaza ADP-ribozilarea factorului de elongare EF2 si inhiba
astfel sinteza proteica (EF2 este necesar pentru translocarea
polipeptidil ARNt din situsul acceptor in situsul donor al ribosomului
eucariot)
• responsabila de efectele necrotic si neurotoxic

3
 5/5/2018

Corynebacterium diphteriae
• Patogenie
o tulpinile toxigene determina infectie localizata la nivelul faringelui
si produc toxina care disemineaza sistemic
• multiplicarea bacililor la nivelul mucoasei faringelui, cu aparitia
inflamatiei locale
• producerea de toxina - efect necrotic
• Toxina difterica difuzeaza in circulatia sistemica si produce
miocardita (degenerare parenchimatoasa, necroza), paralizii de
nervi periferici (demielinizare), afectare renala (necroza
tubulara),
o tulpinile netoxigene: infectii cutanate, respiratorii, articulare

Corynebacterium diphteriae
• Clinic
o Difteria
• incubatie 2-4 zile
• angina cu false membrane, insotita de febra, adenopatie
regionala. Falsele membrane
– au culoare alb- cenusie
– contin fibrina, celule moarte, leucocite, celule epiteliale, bacili difterici
– adera strans la tesutul adiacent, detasarea lor lasa o zona hemoragica
– localizate la nivelul faringelui, amigdalelor, valului palatin
– se pot extinde la nivelul laringelui, determinand asfixie
• complicatii sistemice: miocardita, paralizii de nervi cranieni
(paralizia valului palatin, musculaturii hipofaringelui, dificultati
in deglutitie, strabism, tulburari de acomodare vizuala) si
periferici (deficit motor)

4
 5/5/2018

Corynebacterium diphteriae
• Diagnosticul difteriei – clinic, iar adm tratamentului este
urgenta!
• Diagnosticul de laborator – bacteriologic, are rolul de a
confirma suspiciunea clinica
• Probe: 3 tampoane de exsudat faringian (de la limita falsei
membrane) + tampon nazal
1. Frotiu colorat Gram
2. Insamantare pe medii solide
– Neselective – geloza sange (pentru depistarea eventualilor
streptococi beta hemolitici)
– Selective – m Tinsdale (telurit de K)
3. Insamantare in mediu de imbogatire (mediu OST – ou, ser,
telurit); idem tamponul nazal

Diagnosticul de laborator in difterie

A doua zi (dupa 24 de ore de incubare la 37 °C)
• Colonii suspecte de pe m Tinsdale – repicare pe m Loeffler
• Din mediul OST – repicare pe m Tinsdale (m selectiv)
A treia zi (dupa inca 24 de ore de incubare la 37 °C)
• Colonii suspecte de pe m Loeffler
– frotiuri colorat Gram
– Identificare biochimica: C diphteriae fermenteaza glucoza
si maltoza, nu si zaharoza (diferentiere fata de
difterimorfi)

5
 5/5/2018

Diagnosticul de laborator in difterie

Dupa identificarea preliminara (caractere morfologice,
cultura, caractere biochimice) – identificare
definitiva demonstrarea producerii de toxina
difterica
• Test de neutralizare in vivo – inoculare intradermica la cobai
• Test Elek – reactie de precipitare in agar (vizibila in unghiul
format de cultura si banda de hartie impregnata cu ser
antitoxina difterica, dupa 24 ore de incubare la 37C)
• Toxicitate pe linii celulare Vero – inocularea determina efect
citopatic
• PCR – evidentierea genei tox

Corynebacterium diphteriae
• Tratament - urgenta
• Antitoxina difterica (pentru neutralizarea toxinei circulante) adm i.v. +
• Atb – macrolide (eritromicina, claritromicina) sau penicilina, 14 zile
• varsta si statusul vaccinal al pacientului, precocitatea adm antitoxinei
conditioneaza prognosticul: mortalitate 1% (adm in prima zi) vs. 20%
(adm. dupa a 4a zi)
• Profilaxie
• Nespecifica
– prevenirea transmiterii aerogene (izolarea si tratarea precoce a
pacientilor)
– depistarea purtatorilor asimptomatici
• Specifica
– Vaccinare
– Chimioprofilaxie

6
 5/5/2018

Corynebacterium diphteriae
• Vaccinare
• anatoxina difterica
• adm la copii in varsta de 6-9 luni, sub forma de trivaccin (DTP); 3
doze
• Ac anti-toxina difterica – titru protector - 0.1 UI/ml

• Chimioprofilaxie
• la contactii pacientilor cu difterie
• Eritromicina, 7-10 zile, sau penicilina retard (benzatin penicilina)
• Se poate asocia cu vaccinare (daca titrul Ac anti-toxina difterica
este scazut)

Corynebacterium
Difterimorfi
– similare microscopic cu bacilii difterici
– Colonizeaza tegumentul, mucoasa respiratorie superioara
– Pot produce infectii la imunocompromisi
• C. jeikeium
– Bacteriemii, endocardite, infectii ale protezelor, infectii ale tesuturilor
moi
– Natural rezistenta la majoritatea Atb
– Sensibil la vancomicina, gentamicina
• C. urealyticum
– ureaza pozitiv
– Infectii urinare care favorizeaza producerea de calculi

7
 5/5/2018

Listeria
• Bacili Gram pozitivi scurti
• nesporulati, mobili (flageli peritrichi)
• catalaza pozitivi, oxidaza negativi
• facultativ anaerobi
• fermenteaza zaharurile fara producere de gaz
• rezistenta in variate conditii de temperatura (5-45°C), pH (5-9),
presiune osmotica
• specii de interes medical: Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes
• bacili Gram pozitivi scurti, nesporulati
• cultiva pe medii cu sange, ser, glucoza sau lichid ascita, in
atmosfera cu 5-10% CO2
• incubare la temperatura 20-37 °C
• dupa 24-48 ore – colonii mici, rotunde, convexe, translucide
• pe geloza sange – zona ingusta de β hemoliza
• Cultura degaja miros de lapte acidulat
• Tolereaza telurit de K, concentratii crescute de NaCl, limite largi
de pH (5-9)
• Pe medii semisolide – evidentierea mobilitatii (la temperaturi
sub 30°C) – dupa insamantare prin intepare si incubare apare
crestere si pe suprafata mediului (aspect “in umbrela”)

8
 5/5/2018

Listeria monocytogenes
• Factori de patogenitate
• internaline – proteine cu rol in atasarea si patrunderea in celulele
epiteliale
• listeriolizina O – se activeaza la pH-ul acid din interiorul
fagolizozomului si lizeaza membrana acestuia; permite evadarea
bacteriei din fagolizozom si patrunderea in citoplasma
• proteina ActA – rol in polimerizarea actinei; creaza proeminente
in membrana celulara si favorizeaza trecerea in celulele epiteliale
invecinate; permite diseminarea bacteriei fara expunere la Ac,
complement, PMN
• lecitinaza, fosfolipaza
• hemolizina
• siderofori - proteine bacteriene cu afinitate pentru fier mai mare
decat transferina

Listeria monocytogenes
Patogenie
• ingestie de alimente contaminate si neprelucrate termic (in
special lactate, fructe, legume)
• patrundere in enterocite, multiplicare in citoplasma, apoi
translocare in celulele epiteliale invecinate si in submucoasa
• fagocitate de Mf, evadeaza din fagolizozom
• bacteriemie, urmata de captare de catre Mf rezidente in tesuturi
(ficat, splina)
• diseminare sangvina, urmata de afectarea secundara a SNC,
endocardului, placentei
Imunitate
• imunitate mediata celular
• risc crescut de infectii la persoane cu alterari (tranzitorii sau
persistente) ale imunitatii celulare (sarcina, varstnici, SIDA,
transplantati)

9
 5/5/2018

Listeria monocytogenes
• Clinic
• adulti imunocompetenti - infectii asimptomatice sau
gastroenterita febrila autolimitata (1-3 zile)
• imunodeprimati - meningite, meningoencefalite, septicemii,
eventual localizari secundare hepatice, endocardice
• perinatal – avort spontan, nastere prematura
• nou nascuti (in primele 2 sapt de viata): meningita si /sau
septicemie cu evolutie severa; leziuni granulomatoase
diseminate

Diagnosticul de laborator al infectiei

determinate de L. monocytogenes
• Probe biologice:
– sange, LCR – in formele sistemice
– eventual alimente, materii fecale
• Insamantare:
– Bulion tioglicolat, infuzie cord creier; repicare pe geloza
sange
– Medii selective (adaos de polimixina, ceftazidima, esculina
manitol)
• Identificare – caractere microscopice (bacili Gram pozitivi scurti,
nesporulati), cultivare (hemoliza, mobilitate la sub 30°C),
biochimice (catalaza pozitivi, oxidaza negativi, test CAMP
pozitiv, fermentarea anumitor zaharuri)

10
 5/5/2018

Listeria monocytogenes
Tratament
• ampicilina, eritromicina
• rezistenta la cefalosporine, fluorochinolone

Erysipelothrix rhusiopathiae
• Bacili fini, Gram pozitivi (cu tendinta crescuta la decolorare, deci
pot sa apara Gram negativi)
• imobili, nesporulati
• pretentiosi nutritiv – cultiva pe geloza sange sau geloza ciocolat
• facultativ anaerobi, carboxifili (cultiva in atmosfera cu 5-10% CO2)
• colonii mici, rotunde, lucioase, transparente, cu o zona ingusta de
α hemoliza
• catalazo-negativi, oxidazo negativi
• produce H2S (pe TSI) – diferentiere de Listeria si alti bacili Gram
pozitivi

11
 5/5/2018

Erysipelothrix rhusiopathiae
• Factori de virulenta
• adezine, capsula, invazine (hialuronidaza, neuraminidaza)
• Patogenitate
• determina imbolnaviri la vertebrate, inclusiv animale domestice
(porcine, ovine) si pasari (curcani, rate)
• la om, mai ales la cei expusi profesional (lucratori in abatoare,
macelari s.a) determina infectii secundare inocularii prin leziuni
cutanate: erizipeloidul Rosenbach
– la locul inocularii - papula cu margini bine delimitate, dureroasa,
cu tendinta la extindere
– evolutie spre vindecare spontana (3-4 sapt) sau spre limfadenita,
bacteriemie, endocardita

Erysipelothrix rhusiopathiae
• Dgn de laborator - bacteriologic
• Probe biologice – in functie de forma clinica
– Cutanata – biopsii de la limita zonei de celulita
– Sistemica – hemoculturi
• Identificare: bacili Gram poz, α hemolitici, catalaza neg,
imobili; produc H2S
• Tratament
• penicilina G, macrolide
• nu este sensibil la vancomicina
• Profilaxie - nespecifica

12
 5/5/2018

Bacili Gram pozitivi sporulati

• Bacillus
• Clostridium

Bacillus
• Bacili Gram pozitivi mari, dispusi in lanturi
• sporulati
• Mobili
• Aerobi facultativ anaerobi
• Tolereaza limite largi de temperatura
• Catalazo pozitivi (diferentiere de Clostridium)
• majoritatea speciilor – saprofite la nivelul solului; specii de
interes medical:
– patogen: Bacillus anthracis
– oportunisti: B. cereus, B. megatherium, B. thuringiensis
– alte specii: B subtilis, B stearothermophilus

13
 5/5/2018

Bacillus anthracis
• Bacili Gram pozitivi mari, cu extremitati taiate drept,
• Imobili (diferentiere de bacilii antracoizi)
• in frotiuri din produs patologic – asezati in perechi sau scurte
lanturi, capsulati ; aspect metacromatic al capsulei (coloratia
albastru de metilen policrom)
• In frotiuri din cultura – lanturi lungi; pot fi sporulati
• Spor – central, oval, nu deformeaza bacilul

Bacillus anthracis
• Nepretentios nutritiv,
• Facultativ anaerob
• Colonii mari, cenusii, aplatizate, cu contur neregulat, aspect de
“sticla pisata”
• Geloza sange – colonii nehemolitice (diferentiere de bacilii
antracoizi)

14
 5/5/2018

Bacillus anthracis
• Rezistenta in mediul extern
• Forma vegetativa – distrusa la 60 C in 30 min
• Sporii – rezista 10 min la fierbere (distrugere dupa min 30 min);
pot supravietui zeci de ani in solul contaminat
• Factori de virulenta
• Capsula
• Toxina carbunoasa – codificata plasmidic
– Exotoxina de tip A-B
– Subunitatea B – ligand (numit si Antigen Protector, PA)
– Subunitatea A – 2 componente: factor edematogen, EF (Adenilat
ciclaza care creste cAMP in monocite si declanseaza eliberarea de
citokine proinflamatorii) si factorul letal, LF (zinc metaloproteaza
care induce necroza Mf si celulelor endoteliale)

Bacillus anthracis
• Patogenie
• Infectie a ierbivorelor – evolutie rapid letala; secretiile,
excretele si cadavrele animalelor bolnave contamineaza mediul
• La om – infectie prin contact cu animale bolnave sau produse
provenite de la aceste animale; poarta de intrare cutanata, rar
respiratorie sau digestiva
• Sporii ajunsi in tesuturi trec in forme vegetative, care se
multiplica; fagocitare de catre Mf
• In interiorul Mf bacilii persista si elibereaza toxina, determinand
(prin LF) moartea Mf si eliberarea bacililor in circulatia limfatica
• Diseminare sangvina, cu producerea unor focare secundare
(meningita etc.)

15
 5/5/2018

Bacillus anthracis
• Clinic
• Antrax cutanat (pustula maligna) - 95% cazuri
– Contact direct cu animal bolnav sau elemente de mediu, la nivelul unei
leziuni tegumentare minime
– papula la locul de inoculare, apoi vezicula, congestie, edem, urmate de o
leziune necrotica acoperita de o crusta neagra
• Antrax pulmonar
– frecvent expunere profesionala – industria lanii, pielariei
– pneumonie cu edem pulmonar hemoragic, evolutie rapida spre
mediastinita, septicemie, meningita,
• Antrax digestiv
– forma foarte rara, aparuta dupa ingestia de carne de la un animal
infectat
– gastroenterita hemoragica severa

Diagn de laborator - Bacillus anthracis

• Probe biologice – in functie de forma clinica:
– exsudat vezicular - antrax cutanat
– sputa, hemoculturi, LCR - antrax pulmonar,
– materii fecale - antrax intestinal
• Ex microscopic – frotiu colorat Gram, albastru de metilen
policrom
• Diagn bacteriologic – la nivelul laboratoarelor de referinta

16
 5/5/2018

Diagn de laborator - Bacillus anthracis

• Insamantare
– geloza sange – colonii gri, nehemolitice
– m selective – m PLET (cu polimixina, EDTA, acetat de Thaliu)
– m semisolid – bacterie imobila
• Identificare – caractere microscopice (bacili Gram pozitivi in
perechi, capsulati), cultivare (imobil, nehemolitic), sensibil la
penicilina
• Identificarea prin PCR a genelor plasmidice care codifica toxina
(pXO1) si capsula (pXO2)
• identificarea capsulei prin imunofluorescenta
• test de patogenitate la soarece

Bacillus anthracis
• Tratament
• precoce: Atb (penicilina, eritromicina, doxiciclina) + ser anticarbunos

• Profilaxie
• La animale
– Vaccinarea ierbivorelor cu vaccin viu atenuat,
– Sacrificarea animalelor bolnave si distrugerea prin incinerare a
deseurilor
• La om (expus profesional)
– echipament de protectie
– vaccinare – cu factor protector (componenta B)

17
 5/5/2018

Bacillus cereus
• Habitat
– Saprofit al mediului extern, contamineaza vegetatia
– Sporii pot contamina alimente
• Patogenie
• Infectii ale plagilor, bacteriemii, septicemii, alte infectii
• Toxiinfectii alimentare – 2 forme
– Emetica - ingestia unui aliment (orez, paste) in care B cereus s-a
multiplicat si a produs toxina emetica (cereulid) este urmata in 1-5
ore de greata si varsaturi
– Diareica – ingestia unui aliment (carne, lactate) contaminat cu
spori/ forme vegetative, multiplicarea in lumenul intestinal si
producerea unor enterotoxine determina in 8-16 ore de la ingestie
dureri abdominale, diaree apoasa, uneori varsaturi

Bacillus cereus
• Identificare
• similar microscopic cu B anthracis, dar este mobil, necapsulat si
• formeaza colonii mari, β hemolitice
• este rezistent la penicilina

• Tratament – in infectii sistemice

• Rezistent la penicilina, ampicilina, cefalosporine
• Sensibil la vancomicina, imipenem; uneori si la eritromicina,
aminoglicozide

• Profilaxie - nespecifica

18