GLUCOZA

(COLORIMETRIC)

PRINCIPIUL METODEI Aldo si cetohexozele reactioneaza cu aminele aromatice formnd compusi colorati. Aldohexozele respectiv glucoza, reactioneaza cu orto-toluidina formnd un compus colorat intens n verde-albastru. Cetohexozele si aldopentozele dau o culoare mult mai putin intensa, neglijabila considernd concentratia acestora n snge. Galactoza interfera la reactie, deci n cazuri de galactozemi, metoda da valori cumulative. n asemenea cazuri se aplica metoda enzimatica cu glucozooxidaza. PREZENTAREA TRUSEI !rusa contine doua solutii folosite pentru "#$ determinari% &'AC!() * % &'AC!()+, -' C+,.A&' /!.C% 01 flacoane de *$$ ml.2 continnd amestec de o-toluidina, tiouree si acid acetic glacial. &'AC!() * -' ,+C&+ +n flacon din &'AC!()+, -' C+,.A&' /!.C se dilueaza integral cu acid acetic glacial ntr-un balon cotat de *$$$ ml.&eactivul de lucru astfel obtinut, se pastreaza la rece si ntuneric, bine etans. A!'3!('% sub 4*56C solutia ngheata. &'AC!() 1 % /!A3-A&- G,+C.7A * fiola de *$ ml solutie glucoza 0* mg. glucoza8ml2. -upa spargerea fiolei aceasta se pastreaza la frigider 0456C2 ntr-un vas bine etansat. MATERIAL BIOLOGIC: /e poate folosi ca material biologic% ser, plasma, snge total, ,C&, urina diluata. -aca dozarea se face n mai putin de 9 ore de la recoltare, sngele se poate recolta fara inhibitor de glicoliza si se ve folosi /'&+,. n alte cazuri sngele se recolteaza pe florura de sodiu 0*$mg. :3a 8 ml. snge2. ,C& se va analiza imediat dupa recoltare. +rina se dilueaza de la *8# ; *8#$ n functie de determinarile preliminare. NOTA <inisterul /anatatii impune o deproteinizare a sngelui astfel% $,1 ml plasma 4 *,9 ml. apa distilata 4 $,# ml. solutie 1$= acid tricloracetic. n aest caz, se ia n proba de analizat * ml. supernatantul obtinut la centrifugare. TEHNICA DE LUCRU: n eprubete de centrifuga se vor pipeta >&.?','0>2 un /!A3-A&-0/2 si un <A&!.&0<2% REACTANT /A3G', >,A/<A C'3!&(:+GA!A, ,C&, +&(3A -(,+A!A &'AC!() 1 0/tandard2 A>A -(/!(,A!A &'AC!() * 0&eactiv de lucru2 U. M. ml. ml. ml. ml. P $.* 9.$ S $.* 9.$ M $.* 9.$

'prubetele astupate, se tin pe o baie de apa adusa la fierbere, timp de @ minute. -upa racire 0@ minute2 se citesc extinctiile probei 0'>2 si a standardului 0'/2 fata de martor, la A "9$ nm. CALCUL mg. glucoza 8 *$$ ml 0snge, ser, plasma, ,C&2 A 0'>8'/2 x *$$ VALORI NORMALE: "# ; **$ mg. glucoza 8 *$$ ml. 0snge, ser, plasma, ,C&, etc2 OBSERVATIE ,a rece 04*"6C2 n &'AC!()+, * 0o-toluidina2 pot aparea cristale. n acest caz flaconul cu reactiv se va ncalzi la baia de apa 0max. @$6C2 pna la limpezirea solutiei. ,a fel se procedeaza cu standardul. BIBLIOGRAFIE: *. <inisterul /anatatii% B <etode curente pentru analize de laborator clinicC, 'd. <edicala ?ucuresti 0*D@12. 1. >esce E. A. and FA>,A3, A. ,., B<ethods in Clinical ChemistrGC, !he C. ). <esbG CompanG, Hashington -. C. 0*D@I2