Biochimie-Facultatea de Inginerie medicală 2022-2023

Lucrarea nr. 2
Analiza calitativa a glucidelor

1. Introducere
Glucidele (glycos = dulce), cunoscute şi sub numele de hidraţi de carbon (formula generală = C n(H2O)m) sau
zaharuri (sakkharom = substanţă dulce) sunt substanţe de origine predominant vegetală şi se formează în procesul de
fotosinteză care decurge în plantele verzi.
Glucidele, componente principale ale hranei omului şi animalelor, sunt compuşi foarte răspândiţi în natură, atât
sub formă liberă (pentoze, hexoze), cât şi sub formă de combinaţii (glicozide, glicoproteide, glicolipide etc.). Proporţia
lor în regnul vegetal reprezintă peste 50% din substanţa uscată a organismelor vegetale superioare.
În organismele animale există un număr mai mic de reprezentanţi ai glucidelor, aflate într-o proporţie mai
mică, comparativ cu protidele şi lipidele.
Glucidele sunt substanţe ternare, constituite din atomi de: C, H, O (foarte rar N şi S) cu funcţiuni chimice
mixte: polihidroxialdehide (aldoze) şi polihidroxicetone (cetoze).
Glucidele se clasifică în două grupe mari: glucide simple, numite oze (monoglucidele sau monozaharide) şi
glucide compuse numite ozide.
Dintre glucidele cel mai des intalnite pot fi mentionate glucoza, fructoza, zaharoza iar dintre poliglucide
celuloza si amidonul.

CH 2 OH
H O H
CH 2 OH H
OH H
H O O OH
H
H H H OH
OH H
OH OH
Lactoza
(-D-Galactopiranozil -1,4-- D-Glucopiranoza)

Amidon (amilopectina)
 Biochimie-Facultatea de Inginerie medicală 2022-2023

Pentru determinarea structurii unei glucide se pot realiza o serie de teste calitative bazate pe reacţii chimice
determinate de natura grupelor funcţionale constituiente si de structura moleculară a compusului.

2. Analiza calitativa a glucidelor

Materiale necesare:
Solutie glucoza 1%
Solutie fructoza 1%
Solutie zaharoza 1%
Solutie lactoza 1%
Solutie amidon 1%
Reactiv Lugol (solutie iod-iodura)
Reactiv Benedict
Reactiv Seliwanoff
Reactiv Barfoed
Apa distilata
Pipete
Cilindri gradati
Eprubete
Indicator universal de pH

2.1. Testul cu reactiv Benedict

Glucidele reducătoare sunt detectate cu ajutorul reactivului Benedict care conţine ioni de Cu 2+(albastru) si care in urma
unui proces redox datorat grupei aldehidice trec in ioni de Cu + care precipita sub forma de Cu 2O (rosu-cărămiziu).
Reactivul Benedict este preparat din 100 g Na 2CO3 anhidru, 173 g citrat de sodiu și 17.3 CuSO 4 (pentahidrat) dizolvate
intr-un litru de apa. Solutia se utilizeaza si in analiza clinica de laborator pentru determinarea glucozei din urina. Toate
aldozele precum si dizaharidele care au hidroxilul semiacetalic liber dau test pozitiv. Datorita mediului bazic in care
are loc reactia si fructoza dă un test fals pozitiv dupa epimerizare in glucoza si manoza.
Mod de lucru
Se iau 8 eprubete si se eticheteaza sau se marcheaza cu nr. de la 1 la 8. In eprubete se introduc solutiile
conform tabelului de mai jos. Se adauga apoi cate 3 picaturi de reactiv Benedict in fiecare eprubetă, se agita bine si se
introduc simultan intr-o baie de apa la fierbere unde se mentin 5 minute. Se scot si se noteaza culoarea observata pentru
fiecare eprubeta.

Eprubeta nr. Continut Culoare proba finala Observatii

1 3 ml apa
2 3ml sol. glucoza 1%
3 3ml sol. fructoza 1%
4 3 ml solutie lactoza 1%
5 3ml sol. zaharoza 1%
6 3ml sol. amidon 1%
7 0.5 ml glucoza1% + 2.5 ml apa
8 2 ml glucoza1% + 1 ml apa
Obs. Baia de apa este realizata dintr-un pahar de 400-600 ml in care se introduc 200 ml apa si se aduce la fierbere
inainte de inceperea testului.

2.2. Testul cu reactiv Barfoed

Reactivul Barfoed (solutie de acetat de Cu in acid acetic) contine ioni de Cu 2+ in mediu acid. Conditiile de oxidare sunt
mai blande si numai monozaharidele reducatoare dau test pozitiv in timp ce dizaharidele reducatoare nu dau acest test.
La fel ca in cazul de mai sus si fructoza da un test fals pozitiv datorita reactiei de epimerizare.
Mod de lucru
Se iau 6 eprubete si se eticheteaza sau se marcheaza cu nr. de la 1 la 6. In eprubete se introduc solutiile
conform tabelului de mai jos. Se adauga apoi cate 5picaturi de reactiv Barfoed, se agita bine si se introduc intr-o baie
 Biochimie-Facultatea de Inginerie medicală 2022-2023

de apa adusa la fierbere unde se mentin 10 minute (masurate din momentul in care apa incepe din nou sa fiarba). Se
scot eprubetele si se noteaza culoarea observata pentru fiecare.
Eprubeta nr. Continut Culoare proba finala Observatii
1 3 ml apa
2 3ml sol. glucoza 1%
3 3ml sol. fructoza 1%
4 3 ml solutie lactoza 1%
5 3ml sol. zaharoza 1%
6 3ml sol. amidon 1%

2.3 Test cu reactiv Seliwanoff

Este un test care face distinctia intre aldoze si cetoze. Reactivul Seliwanoff este o solutie formata din rezorcina
dizolvata in acid clorhidric concentrat. Testul se bazeaza pe faptul ca cetozele se deshidrateaza mai rapid decat aldozele
cu formare de hidroximetilfurfurol care condenseaza cu rezorcina formand un produs rosu. Si dizaharidele care contin
cetoze in structura dau raspuns pozitiv la acest test.

Mod de lucru
Se iau 6 eprubete si se eticheteaza sau se marcheaza cu nr. de la 1 la 6. In eprubete se introduc cate 3 ml
reactiv Seliwanoff (atentie –este puternic coroziv!-se manipuleaza cu atenţie). Se adauga apoi cate 0.2ml din solutii
conform tabelului de mai jos, se agita bine si se introduc intr-o baie de apa adusa la fierbere unde se mentin 5 minute
(masurate din momentul in care apa incepe din nou sa fiarba). Se scot eprubetele si se noteaza culoarea observata
pentru fiecare.

Eprubeta nr. Continut Culoare proba finala Observatii

1 0.2ml apa
2 0.2ml sol. glucoza 1%
3 0.2ml sol. fructoza 1%
4 0.2ml sol. lactoza 1%
5 0.2ml sol. zaharoza 1%
6 0.2ml sol. amidon 1%

2.4 Test cu solutie Lugol

Iodul formeaza un aduct de culoare albastra in prezenta amidonului. Iodura de potasiu are rolul de a creste solubilitatea
iodului in apa. Dizaharidele si monozaharidele nu modifica culoarea solutiei de iod-iodura.
Mod de lucru
Se iau 6 eprubete si se eticheteaza sau se marcheaza cu nr. de la 1 la 6. In eprubete se introduc solutiile
conform tabelului de mai jos. Se adauga apoi cate 2 picaturi de reactiv Lugol, se agita bine si se noteaza culoarea
observata pentru fiecare.
Eprubeta nr. Continut Culoare proba finala Observatii
1 3 ml apa
2 3ml sol. glucoza 1%
3 3ml sol. fructoza 1%
4 3ml solutie lactoza 1%
5 3ml sol. zaharoza 1%
6 3ml sol. amidon 1%
 Biochimie-Facultatea de Inginerie medicală 2022-2023

2.5 Invertirea zaharului

Intr-o eprubeta se introduc 5 ml solutie zaharoza 1% si se adauga 5 ml solutie HCl 0.1M. Se fierbe pe baie de apa timp
de 30 minute. Solutia din eprubeta se raceste, se neutralizeaza prin adaugarea a circa 5 ml solutie NaOH 0.1M
(verificare cu hartie de pH!) si se efectueaza testul cu reactiv Benedict si Seliwanoff in doua eprubete separate,
conform modului de lucru anterior, pentru identificarea glucozei si fructozei formate conform modului de lucru
prezentat anterior.

Eprubeta nr. Continut Culoare proba finala Observatii

1 Test Benedict 3 ml zahăr invertit
2 Test Selliwanoff 0.2 ml zahăr invertit

Intrebari:
1. Scrieti structurile ciclice cu formule Haworth pentru urmatorii compusi: α-glucopiranoza, β-glucofuranoza, α-
fructofuranoza, β-fructopiranoza, zaharoza, β-galactopiranoza.

2. Precizati care din urmatoarele glucide prezinta caracter reducator: glucoza, fructoza, trehaloza, lactoza, zaharoza,
manoza, galactoza, ribuloza.

3. Scrieti structura moleculara a unui dizaharid ipotetic format din doua molecule de α-D-glucopiranoza unite prin
legatura C1-O-C1. Precizati daca aceasta glucida are caracter reducator sau nu.

4. In laborator aveti 3 borcane fara eticheta dar in care se cunoaste ca era glucoza, zaharoza si fructoza. Avand la
dispozitie toti reactivii de identificare utilizati in lucrare propuneti o schema de lucru pentru identificarea continutului
fiecaruia din borcane.