BIOFUNCTIONALIZAREA NANOTUBURILOR DE CARBON

Scopul prezentului capitol: Prezentarea principalelor metode de biofuncionalizare a nanotuburilor de carbon (CNT) i aplicaiile acestora n domeniul nanobiotehnologiei. Conjugarea nanotuburilor de carbon cu biomoleculele reprezint un domeniu de cercetare atractiv al nanobiotehnologiei. Utilizarea nanoparticulelor n domeniul medical a fost motivat de urmtoarele caracteristici ale acestora: 1. nanoparticulele prezint proprieti diferite de cele din domeniul macroscopic chiar i atunci cnd prezint aceeai compozitie elemental !. datorit dimensiunii" compoziiei i morfologiei pot circula prin corp #fr s fie mpiedicate de sistemul imunitar$ spre diferite pri ale corpului sau spre celule individuale. %. datorit dimensiunii timpul de circulaie n organism este mai ridicat ceea ce poate reduce necesitatea utilizrii unor doze multiple de medicament #creterea permebilitii i reteniei n organism$ &. e'ist o varietate de nanomateriale multifuncionale #e'(nanotuburile de carbon pot aciona att ca agent de contrast ct i ca sistem cu eliberare controlat$ ). anumite nanomateriale prezint proprieti antibacteriene i antivirale

ASPECTE GENERALE DESPRE CNT

Ce sunt nanotuburile de carbon (CNT)

Carbonul n starea de hibridizare sp! poate forma o varietate de structuri precum cea a grafitului #%*$" grafenelor#!*$" nanotuburilor de carbon(C+, #1*$ i fulerenelor #-*$. +anotuburile de carbon #C+,$ descoperite n anul 1..1 de cercettorul /ijima sunt definite ca fiind nanostructuri unice tubulare caracterizate de un raport lungime(diametru ridicat. C+, alturi de fulerene reprezint o alt form alotrop a atomului de carbon. C+, poate fi privit ca o foaie grafitic nfurat sub forma unui cilindru care are la ambele capete ! jumtti fuleren #C0-$. 1rafit *iamant 2uleren
Schema !. Forme alotrope ale atomului de carbon

Foaie grafitic
Schema ". Formarea CNT prin nfurarea foii grafitice

Schema #. Reprezentarea schematic a CNT

C+, prezint o compoziie chimic similar cu cea a grafitului ns este considerat un material izotropic" proprietate care difereniaz C+, de alte structuri pe baz de carbon i i confer proprieti unice. *atorit proprietilor remarcabile #mecanice" termice" electronice$" structurii unice" C+, sunt recomandate n numeroase domenii precum electronica" domeniul biomedical" obtinerea materialelor compozite. Clasificarea CNT

(Clasificare dup numrul de foi grafitice (grafene) implicate n structura CNT Nanotuburile de carbon cu un singur perete #SWCNT$(constau ntr(o singur foaie grafitic nfurat sub forma unui tub cilindric care la capt prezint o jumtate de fuleren.

Schema 4. Reprezentarea schematic a !CNT

Nanotuburi de carbon cu pere"i dublii (DWCNT)#se prezint sub forma a doi cilindrici concentrici Nanotuburile de carbon cu pereti multiplii #MWCNT$( pot fi privite ca o colecie de cteva tuburi concentrice dispuse asemenea 33ppuii ruseti33.4ceast dispunere este asigurat de prezena forelor 5aals.

Structura MWNT este asemanatoare modelulu

65C+,

73 8pua ruseasc33

Schema 5. Reprezentarea schematic a $!CNT

C+, au dimensiuni n domeniul nanometric" cu un diametru cuprins ntre -"&(! nm #95C+,$ i !(1-- nm #65C+,$ i lungimea cuprins ntre !-(1--- nm. *ensitatea electronic ridicat creat de structura aromatic permite observarea cu uurin a acestor nanomateriale. 95C+, au tendina s se aglomereze #s formeze un mnunchi$ datorit interaciilor puternice van der 5aals" n timp ce 65C+, sunt considerate n principal monodisperse #entiti izolate$.

MWNT

PAPUSA

SWCNT

MWCNT

Fig !a ". %maginile T&$ ale !CNT (st'nga)#( m i $!CNT (dreapta).

# Clasificare dup chiralitatea CNT /n funcie de chiralitatea C+, #modul de nfurare a foii grafitice$ acestea pot fii: (C+, metalice (C+, semi(conductoare (structur zig(zag (structur armchair
Schema #. )iferite structuri ale CNT

(structur dependent de chiralitate #de a'a dup care se infoar foaia grafitic$

Structura zig$zag

Structura %armchair&

SINTEZA SI PURIFICAREA CNT

Sinteza CNT /n prezent C+, pot fi obinute n principal prin trei metode i anume: metoda depunerii chimice n stare de vapori #C:*$ metoda descrcarii n arc electric33arc(discharge33 metoda ablaiei laser 33laser ablation33

1. 2. 3.

6etodele ce implic utilizarea fazei gazoase sunt caracterizate printr(un grad limitat de impuritati" aceste metode avnd posibiliti de a fi aplicate pentru obinerea nanotuburilor de carbon la o scar mai larg.

". Me$%&a &e' (e!ii chimice )( *$a!e &e +a'%!i ,Chemica- +a'% ! &e'%*i$i%( ,C.D))

/n cazul me$%&ei C.D" nanotuburile de carbon sunt sintetizate utilizand ca materie prima hidrocarburi precum metan" etilena" acetilena. ;idrocarburile sunt descompuse in radicali liberi la temperature cuprinse intre ))-(<)-oC. 4ceste specii reactive difuzeaza pe substratul incalzit pe care este depus catalizatorul #metale tranzitionale de tip +i" 2e" Co$. 8rincipiul metodei presupune trecerea hidrocarburilor printr(un reactor tubular incalzit la temperaturi suficient de ridicate pentru a descompune hidrocarburile #Schema /$ si in prezenta unui catalizator. C+, cresc pe catalizator si sunt colectate dupa racirea sistemului la temperatura camerei. /n cazul hidrocarburilor lichide precum benzenul" alcoolii etc. acestea sunt preincalzite iar vaporii rezultati sunt transportati de catre un gaz inert in reactorul in care are loc sinteza C+,. :aporizarea hidrocarburilor solide precum naftalina poate fi obtinuta printr(o incalzire initiala a acestora intr(un alt reactor la temperaturi mai mici decat in cazul reactorului in care are loc sinteza C+,. Catalizatorul utilizat poate fi solid" lichid sau gazos. 9inteza C+, utilizand metoda C:* este influentata de o serie de parametrii precum natura hidrocarburii" tipul catalizatorului si temperatura de crestere. 8entru sinteza 65C+, ca materii prime se utilizeaza in principal acetilena. =ptimizarea conditiilor de crestere a C+,se realizeaza prin incalzirea substratului la 00- oC. *ensitatea si viteza de crestere a C+, se imbunatatesc pe masura ce temperatura creste.

1( hidrocarburi !( reactor %( catalizator &( Controler de temperatura )( >arbotor

Schema /. Reprezentarea schematic a instalatiei utilizate la obtinerea CNT prin procedeul C*) A+a($a0e-e me$%&ei C.D (metoda permite controlul diametrului C+, i vitezei de cretere a C+, (aliniere bun De1a+a($a0e-e me$%&ei C.D (densitatea ridicata a defectelor in structura 65C+, n comparaie cu celelate dou metode. (rezistena la ntindere a C+, este inferioar celor obinute prin metoda descrcrii n arc electric (prezena produilor secundari precum carbon amorf" particule metalice etc. !. Me$%&a &e*c!ca!ii )( a!c e-e$!ic22a!c3&i*cha!ge22 4ceast metod permite obinerea a 65C+, dac se aplic n absena catalizatorului sau sinteza nanotuburilor de carbon cu un singur perete n prezena unui catalizator. 8rincipiul metodei presupune utilizarea a doi electrozi de grafit" un anod i un catod mentinuti intr(o incinta sub vacum si atmosfera inerta. 8rezenta gazului inert favorizeaza cresterea vitezei de depunere a carbonului. /nitial electrozii sunt mentinuti independent urmand a fi conectai ulterior prin intermediul unei atmosfere de heliu i a unui curent electric" care se aplic pn la obinerea unui arc electric stabil. Carbonul" care se evapor de la anod" se depune la catod unde se adun treptat lund natere o cretere solid la e'terior dar care la interior conine nanotuburi i alte particule de carbon. Cei mai importanti parametrii ai acestei metode sunt? 1( controlul arcului electric !( selectarea optima a presiunii gazului inert din incinta in care se afla electrozii

1( anod !( catod Schema 4. )escrierea schematica a instalatiei utilizate in cazul metodei decrcarii n arc electric. A+a($a0e-e me$%&ei (65C+, se poate obine n absena catalizatorului metalic #prezenta catalizatorului #amestec de metale$ este necesar la sinteza 95C+,$. (puritatea ma'im a 95C+, obinut prin aceast metod este de @- A. 5. Me$%&a a6-a7iei -a*e! 8rincipiul metodei const n utilizarea unui fascicul de laser pentru a vaporiza un amestec de grafit i catalizator metalic meninut ntr(o atmosfer controlat de gaz inert" la o temperatur de 1!--BC. *escrierea schematic a instalaiei de obinere a C+, prin metoda ablaiei laser este prezentat n 9chema ..

Schema 8. )escrierea schematic instala"iei de abla"ie laser

8rincipalii parametrii ai acestei metode sunt? (cantitatea si tipul catalizatorului (puterea si lungimea de unda a laserului (temperatura (presiunea (tipul gazului inert A+a($a0e 3metoda permite creterea 95C+, cu un diametru controlat ce depinde de temperatura de reacie De1a+a($a0e (prezena produilor secundari precum carbon amorf" particule de grafit" particule metalice 8rodusul obinut prin aceste metode este reprezentat de un amestec de nanotuburi de carbon cu diferite diametre" lungimi" chiraliti i concentraii diferite de impuriti #n principal carbon amorf i particule de catalizator$. Ta6e- - (!. ". Comparaie ntre cele trei metode principale de sintez a C+, Me$%&a Candamentul metodei 95C+, Dec*a!ca!ea i( a!c e-ec$!ic %-(.- A ,uburi scurte diametrul -"0(1"& nm De' (e!ea chimica A6-a7ia -a*e! &i( 9a1: &e +a'%!i ,+a'%!i1a!ea) !-(1-- A D <- A cu ,uburi lungi cu 6nunchi de tuburi diametrul ntre -"0(& lungi #)(!- m$ cu un nm 65C+, ,uburi scurte cu ,uburi lungi diametru individual de 1(! nm cu ,ehnic 65C+, adaptat cu la ((control al diametrului 95C+, costisitoare producerea

diametru ntre 1(% nm diametru cuprins ntre pentru i un diametru e'terior 1-(!&- nm 4vantaje de 1- nm (se pot obine uor (uor 95C+, cteva structurale (se pot (95C+, prezint doar (tuburi de

scar industrial defecte satisfctoare (proces relativ simplu sintetiza (95C+, pot fi

lungime (puritate avansat

65C+, fr adaos de obinute cu un diametru catalizator (metod controlabil i puritate avantajoas ridicat

*ezavantaje

economic (tuburile tind s fie C+, obinute sunt n (tehnic larg a dimensiunii (necesita repetate i cu defecte pe scumpi i

costisitoare poate fi de

scurte cu o distribuie general de tip 65C+, deoarece necesit laseri purificri suprafa considerata consumatoare energie

P !i9ica!ea CNT C+, sintetizate prin metodele amintite anterior conin inevitabil impuritti precum grafitul" carbonul amorf" particule de catalizator metalic" fulerene. 8rincipalele metode de purificare cuprind : (o'idarea (tratamentul cu acizi (funcionalizarea (ultrasonicarea (microfiltrarea (separarea magnetic (tehnici cromatografice 4ceste metode de purificare a C+, pot fi clasificate n trei categorii i anume metode chimice" fizice i o combinaie ntre cele dou.

'etoda chimic( de purificare

)*idarea 8rincipiul metodei const n o'idarea seleciv" astfel impuritile pe baz de carbon sunt o'idate cu o vitez mai mare dect C+,. 4ceast metod permite ndeprtarea carbonului amorf i particulelor metalice. /ntodeauna aceast metod de purificare va influena structura C+, datorit proceselor de o'idare ce au loc. Eficiena acestei metode depinde de o serie de factori precum coninutul de metal" timpul de o'idare" mediul de o'idare" agenii de o'idare i temperatura.

8rincipalul dezavantaj al tratamentului o'idativ este acela c nu doar impuritile sunt o'idate. /n timpul procesului de o'idare este atacat i suprafaa C+, fiind astfel afectate i proprietile acestora. Tratamentul cu acizi /n general tratamentul cu acizi este utilizat pentru ndeprtarea catalizatorilor metalici. /n prima etap" suprafaa metalului trebuie e'pus procesului de o'idare sau sonicare i apoi tratamentului cu acizi. +uncionalizarea ,'odificarea suprafeei CNT 4ceast metod se bazeaz pe obinerea unei solubiliti diferite n solvenii uzuali. 8rin funcionalizarea C+, cu diferite grupri sau lanuri acestea devin mai solubile dect impuritile i astfel se pot separa prin metode clasice #e'(filtrarea$ de impuritile insolubile precum metalele. 'etoda fizic( de purificare

9epararea C+, de impuritile prezente prin aceast metod se bazeaz pe diferenele dintre proprietile magnetice" mrimea fizic" densitate etc. /n general aceast metod permite ndeprtarea nanosferelor de carbon" foilor grafitice" C+, cu diferite rapoarte diametruFlungime. 6orfologia i propriettile fizice ale C+, precum dimensiunea" densitatea" proprietile magnetice" solubilitatea sunt diferite de cele ale impuritilor prezente. 4ceste diferene permit separarea C+, de impuritile prezente prin utilizarea unor anumite tehnici fizice precum filtrarea" cromatografia" centrifugarea" ultrasonicarea la temperaturi ridicate #1&--(!@--oC$. 8unctul forte al acestor metode de separare se bazeaz pe faptul c sunt metode nedistructive care nu implic tratament o'idativ. 6ajoritatea acestor metode implic e'istenta unui mediu lichid care presupune o preparare a probei in vederea atingerii unei bune dispersabiliti n soluia respectiv. 8entru a putea asigura acest lucru" de cele mai multe ori se utilizeaz sonicarea sau prezenta surfactanilor. A+a($a0e-e me$%&ei (nu implic procese de o'idare i de aceea distrugerea C+, este prevenit De1a+a($a0e-e me$%&ei (metod consumatoare de timp i ineficient -ltrasonicarea /n aceast metod particulele sunt separate datorit vibraiilor ultrasunetelor. 4glomeratele diferitelor nanoparticule sub aciunea ultrasunetelor se vor dispersa. 9epararea nanoparticulelor este puternic dependent de tipul surfactantului" solventului utilizate.

Purificarea magnetic( 4ceast metod permite ndeprtarea particulelor feromagnetice #catalizatorilor$. 9uspensia de C+, este amestecat cu nanoparticule anorganice #Gr=!" CaC=%$ ntr(o baie cu ultrasunete. +anoparticulele sunt captate cu ajutorul unor magnei. 'icrofiltrarea 6icrofiltrarea se bazeaz pe diferena dimensiunilor particulelor e'istente n amestec. C+, i o mic cantitate de nanoparticule de carbon sunt reinute pe filtru. Celelalte tipuri de nanoparticule #catalizatorii metalici" fulerenele$ trec prin filtru. 'etoda combinat( de purificare

4ceast metod combin avantajele metodei fizice cu cele ale metodei chimice conducnd la obinerea unor C+, de puritate avansat.

PROPRIETATILE CNT
/n ,abelul nr. ! sunt centralizate cele mai importante proprieti ale C+, ,abelul nr. ! 8roprietile C+,

P!%'!ie$a$ea *ensitatea #gFcm%$ 9tabilitatea termic *iametrul 4ria suprafeei specifice Conductivitatea electric #9Fm$ Cezistena la ntindere #18a$

SWCNT 1"%(1") 1 nm

DWCNT 1") D <--oC ) nm 1-(!- m!Fg 1-0

MWCNT 1"@(!"!- nm

)-()--

!%(0%

1-(0-

MODIFICAREA CNT3FUNCTIONALIZAREA
R%- -;im'%!$a(7a 9 (c7i%(a-i1:!ii CNT

/n general C+, au tedina de aglomerare datorit apariiei forelor van der 5aals i de aceea sunt dificil de dispersat n compuii organici uzuali sau matricile polimerice. 6anipularea si procesarea C+, este limitat de insolubilitatea acestora n solvenii uzuali. C+, sunt materiale practic insolubile sau greu de dispersat n orice tip de solvent. 6odificarea chimic a C+, permite lrgirea domeniului de aplicaii incluznd obinerea materialelor compozite" imobilizarea moleculelor biologice. /n vederea utilizrii C+, n domeniul biomedical este necesar o purificare avansat a acestora i modificarea suprafeei acestora #funcionalizarea$ n vederea solubilizriiFdispesiei individuale n medii apoase. 4taarea unor grupri funcionale sau catene alifatice de suprafaa C+, crete substanial solubilitatea acestora. Reac$i+ia$a$ea CNT

/nainte de a discuta despre principalele metode de funionalizarea a C+, sunt necesare informaii cu privire la reactivitatea C+,. Ceactivitatea chimic a nanotuburilor de carbon este similar cu cea a carbonului i n particular cu cea a grafitului" ns structura unic a C+, confer acestora proprieti specifice. Curbarea pereilor C+, conduce la o modificare a orbitalilor moleculari ai atomilor de carbon i o deplasare a densitii electronice ctre suprafaa e'tern a nanotuburilor" acest lucru avnd impact asupra creterii reactivitii suprafeei e'terne. Capetele nanotuburilor de carbon sunt considerate a fi prile cele mai reactive deoarece n aceast zon se localizeaz cea mai mare deformare i n care atomii de carbon au caracter sp%. 8entru a nelege structura i proprietile nanotuburilor de carbon" legarea atomilor de carbon este necesar o e'plicaie a atomului de carbon H)I. 4tomul de carbon prezint ase electroni dintre care doi dintre acetia se situeaz pe orbitalul sp responsabil pentru legarea structurilor precum diamantul" grafitul" nanotuburile i fulerenele # Schema "<$.

Schema "<. tructura diamantului+ grafitului+ nanotuburilor de carbon+ fulerenelor ,-.

/n cazul diamantului cei patru electroni de valen ai fiecrui atom de carbon ocup orbitalul hibrid sp% i creaz patru legturi covalente echivalente pentru a se conecta de ali patru atomi de carbon n patru direcii tetraedrice. 4ceast structur tridimensional face ca diamantul s fie cel mai dur material cunoscut. *eoarece electronii n diamant formeaz legturi covalente i nu e'ist legturi delocalizate" diamantul este un bun izolator electric. Electronii n diamante absorb lumin n domeniul U: dar nu i n domeniul vizibil sau /C i de aceea apar transparente ochiului uman. *iamantul prezint o conductivitate termic neateptat de mare. +anotuburile de carbon pot fi vzute ca nite cilindrii formai prin nfurarea unor foi grafitice. /n cazul C+, legturile sunt n special sp!. Curbura circular determin o rehibridizare n care trei legturi sunt uor orientate n afara planului pentru compensare orbitalul este mai mult delocalizat pe suprafaa e'tern a tubului. 4cest lucru determin o rezisten mecanic superioar a nanotubului" conductivitate termic i electric" activitate biologic i reactivitate superioar grafitului. /n plus" prezint defecte topologice precum pentagoane i heptagoane ncorporate n reeaua he'agonal. Conventional un nanotub de carbon lipsit de defecte prezint n structur doar he'agone.

F -e!e(e-e ,C#<) sunt alctuite din !- he'agoane i 1! pentagoane. Jegatura este de tip sp! combinat cu sp% datorit curbrii pronunate. 9tructura special a fulerenelor asigur proprieti surprinztoare. Me$%&e &e 9 (c7i%(a-i1a!e

+uncionalizarea CNT const n modificarea peretelui e'tern a C+,. 4ceast modificare are impact asupra proprietilor C+,. *e e'emplu" solubilitatea" dispersia C+, ntr(un anumit mediu sunt dependente de agentul de modificare utilizat. 6odificarea suprafeei C+, se poate realiz prin diferite metode" cele mai uzuale fiind funcionalizarea defectelor. funcionalizarea non$co/alent( i cea co/alent( H%I. 4ceste metode au fost clasificate ca fiind metode fizice" chimice sau metode electrochimice. *e asemenea n ultimii ani a fost introdus o nou metod de funcionalizarea a C+, ce are la baz conceptul 22CLIC= C>EMISTR?22.

Me$%&a ce im'-ic: 9 (c7i%(a-i1a!ea &e9ec$e-%! @5A 4ceast metod const n ataarea unor grupri funcionale precum carbonil" carbo'il sau hidro'il pe suprafaa C+,. /n general C+, sunt purificate prin metode o'idative pentru a ndeprta particulele metalice" carbonul amorf. /n urma acestui tratament au loc deschideri ale capetelor C+, i generarea unor grupri funcionale de tip carbo'il" precum i fracturarea C+, n tuburi scurte cu lungimi cuprinse ntre 1--(%-- nm #9chema 11$. +umrul de grupri carbo'il generate pe suprafaa C+, depinde de temperatura tratamentului acid" timpul de meninere a C+, n acid" tria acidului sau mediului o'idant.
.

Schema "". /enerarea gruprilor carbo0il pe suprafa"a CNT

6etodele de titarea au determinat un coninut de centrii activi n 95C+, de apro'imativ 1(% A. ,oate tratamentele o'idative n principal atac capetele nanotuburile de carbon" ns pot fi vizate i defectectele structurale localizate pe perei. /n general nanotuburile de carbon obinute prin descrcarea n arc electric sunt mai rezistente la o'idare #pondere mai mic a defectelor structurale$ i astfel vor fi considerate mai puin reactive. /n ,abelul % sunt prezentate cteva e'emple de tratamente o'ididativ. Ta6e- - (!. 5. &0emple de medii o0idati1e Age(7i &e %Bi&a!e ;+=% + ;!9=& (3:1) ;+=% + ;!9=& (1:1), asistat de microunde ;+=% + ;!9=& + HCl ;+=% K6n=& L ;!9=& K!Cr!=< K!Cr!=< L ;!9=& 4cid )(feno'iizoftalic 8entao'id de fosfor #8!=)$ 4cid polifosforic ;+=% + ;!9=& (3:1) + ;!=! ;!=! 4ceste tratamente o'idative afecteaz n mod diferit nanotuburile de carbon n funcie de tria agentului de o'idare i de durata operaiei #Ta6e- - 4$.
Ta6e- - (!. 4. Compara"ie ntre tratamentele o0idati1e ale CNT

G! ':!i 9 (c7i%(a-e ge(e!a$e 'e * '!a9a7a (a(%$ 6 - i &e ca!6%( 1rupri carbo'ilice

C==;" M=;" =N

T!a$ame($ &e m%&i9ica!e a * '!a9e7ei CNT ,ratament o'idativ cu amestec ;!9=& #.@A O$ L ;+=% #10 6$

C!ac$e!i*$ici CNT 9 (c$i%(a-i1a$ 4ceast metod permite purificarea C+, #amestecul de acizi poate intercala i e'folia foaia grafitic$ ns tuburile sunt tiate n tuburi mai mici. *up acest tratament pe suprafata C+, sunt introduse grupri funcionale de tip MC==; ns apar semnale de distrugere a tubului

Re9e!i(7: 6icrochim 4cta 1)!" !!)M !%! #!--0$

#aparitia defectelor C+,$. *e aceea aceast metod este considerat ineficient ,ratament o'idativ cu ;+=% !.0 6 la temperatura camerei ,ratament o'idativ cu ;+=% !.0 6 cu reflu'are 6etod eficient de purificare a 95C+, bazat pe o'idarea selectiv a carbonului amorf. *atorit e'istenei defectelor de suprafaa a C+, pot aprea deschideri pariale ale tubului i ruperi ale acestora" ponderea acestora depinznd de timpul de reflu'are a C+, n mediul acid. ,impul de reflu'are poate fii privit ca un compromis ntre purificare i distrugerea pereilor C+, /n condiii de o'idare puternic #;+=% si reflu'are &@ ore$ structura grafitic este rupt i tuburile sunt ,ratament cu K=; 1- 6 #o'idare blnd$ fracturate. 4cest tratament al C+, permite introducerea gruprilor hidro'il i carbonil n defectele deja e'istente fr s determine o rupere a foii grafitice sau sectionarea tubului. 6ecanismul de funtionalizare in aceste condiii nu este nc elucidat" ns se presupune c =! dizolvat n soluie poate fii implicat ca agent 2uncionalizarea 95C+, prin metoda reducerii electrochimice a srurilor de aril(diazoniu blnd de o'idare 9rurile de aril(diazoniu sunt cunoscute pentru reaciile pe care le dau cu olefinele #reacia 6eerOein$. 4ceast metod este considerat avantajoas pentru modificarea suprafeelor ce au la baz carbonul( 6icrochim 4cta 1)!" !!)M !%! #!--0$ 6icrochim 4cta 1)!" !!)M !%! #!--0$ 6icrochim 4cta 1)!" !!)M !%! #!--0$ 6icrochim 4cta 1)!" !!)M !%! #!--0$

reacii de reducere electrochimic a srurilor de diazoniu care permit legarea covalent a radicalilor aril de suprafaa pe baz de carbon 6etoda funcionalizrii ce implic utilizarea acizilor concentrai este eficient n vederea generrii gruprilor funcionale carbo'ilice" hidro'ilice pe suprafaa nanotuburilor de carbon" ns creaz defecte i determin o distrugere parial a structurii nanotubului sub aciunea acizilor concentrai. *efectele generate afecteaz semnificativ proprietile mecanice ale nanotuburilor. ,ratamentul nanotuburilor de carbon cu ozon reprezint o metod de modificare a suprafeei" fiind considerat o metod mai blnd. 0cest( metod( bazat( pe crearea unor centrii reacti/i (grup(ri carbo*il. carbonil etc.) nu este eficient( n ceea ce pri/ete dispersia CNT n matricile polimerice. ns( poate fi utilizat( ca o prim( etap( ce inter/ine n funcionalizarea co/alent( a CNT transformarea grup(rilor carbo*ilice n cloruri acide. cu anumite lanuri organice prin

+uncionalizarea nonco/alent( 2ceast metod prezint un interes deosebit deoarece nu implic o compromitere a propriet"ilor fizice a CNT+ permi"'nd totodat mbunt"irea solubilit"ii ia procesabilit"i CNT. $etoda prezint a1anta3ul men"inerii structurii aromatice a CNT i a caracteristicilor electronice. %nterac"iile hidrofobe de tip # sunt de obicei cele care sunt implicate n stabilizarea nonco1alent. 4'n n prezent printre cele mai uzuale molecule implicate n dispersia CNT se numr surfactan"ii+ polimerii# biopolimerii i biomacromoleculele. 9urfactanii sunt utilizai frecvent datorit preului accesibil precum i a disponibilitii ntr(o gam variat. 8olimerii i biopolimerii #acizii nucleici i peptidele$ s(au dovedit a fi foarte eficieni n procesele de dispersie. ( F (c7i%(a-i1a!ea CNT c * !9ac$a(7i

*ispersia C+, s(a realizat utiliznd o serie de surfactani neionici" anionici sau cationici. Cteva e'emple de astfel de surfactanti utilizai la dispersia C+, sunt prezentate n ,abelul ). Ta6e- - (!. 5. 9urfactani utilizai la funcionalizarea C+,

Ti' * !9ac$a($

S$! c$ !a chimic: a * !9ac$a($ - i

P!%'!ie$:7i-e * *'e(*iei &e CNT )( a': 9*9 i ,riton P( 1-- au fost utilizai la obinerea unei suspensii de C+,

Re9e!i(7:

*odecilsulfatul de sodiu #9*9$ ,riton P(1--

C. Klumpp et al. / Biochimica et Biophysica Acta 1758 (2006 !0!" !12

surfactant neionic

de pn la -"1 i -") mgFml. 9tabilitatea acestei suspensii a fost de ma'im 1 sptmn. 9uspensia obinut prezint o stabilitate mai mare de peste 1 lun" atingndu(se o concentraie de 1- mgFml. Combinaia dintre interaciile ( ale fragmentelor organice e'istente n C+, i surfactant precum i catena lung a 9*>9 conduce la o mrire a stabilitii comple'ului.

*odecilbenzensulfonatul de sodiu #9*>9$

C. Klumpp et al. / Biochimica et Biophysica Acta 1758 (2006 !0!" !12

2uncionalizarea non(covalent a C+, cu surfactani const n punerea n contact a C+, cu surfactanii n faza apoas. /n acest caz C+, sunt nconjurate de componenii hidrofobi ai micelelor corespunztoare. /nteracia devine puternic atunci cnd partea hidrofob a surfactantului conine grupri aromatice #9chema 1!$. 4tunci cnd se utilizeaz surfactanii cationici" anionici

#dodecilsulfatul de sodiu(9*9" dodecilbenzensulfonatul de sodiu(+a**>9$ i neionici" agregarea C+, n ap poate fi diminuat. /nteracia dintre surfactanti i C+, depinde de natura surfactantului #lungimea catenei alchil" ncrcarea$. *e e'emplu 9*9 prezint o interacie slab cu suprafaa C+, n comparaie cu +a**>9 sau ,riton P1-- deoarece nu prezint n structura sa nuclee aromatice. /nteraciile benzenului cu suprafata grafitic conduc la o cretere a acoperirii suprafeei C+, cu surfactant. +a**>9 prezint o eficien superioar fa de ,riton P(1-- n dispersia C+, deoarece prezint o caten alchil mai lung H%I.

Schema "C. Reprezentarea schematic a adsorp"iei diferitelor tipuri de surfactan"i pe suprafa"a CNT ,5.. 4ceast metod de dispersare a C+, este limitat n posibilele aplicaiile din domeniul biomedical deoarece surfactanii pot traversa membrana plasmatica i totodat manifest un profil to'ic. ( F (c7i%(a-i1a!ea CNT c 6i%'%-ime!i

Utilizarea C+, n domeniul biotehnologic presupune funcionalizarea acestora cu biomateriale. >iomaterialele includ biomolecule" biopolimeri i alte tipuri de bionanostructuri. 2uncionalizarea C+, cu biomolecule reprezint cea mai adecvat metod de integrare a acestor noi materiale n sistemele vii. 4cizii nucleici sunt considerai candidaii ideali de formare a unor compleci supramoleculari avnd la baz intercatiile ale fragmentelor aromatice i suprafaa C+,. *e asemenea" peptidele reprezint o alt clas de biopolimeri care disperseaz eficient C+,. 8rezena aminoacizilor precum fenilalanina" tirosina i histidina n structura peptidelor joac un rol cheie n procesul de solubilizare n ap. Chitosanul este unul dintre cei mai utilizai biopolimeri n domeniul biomaterialelor. Un e'emplu de metod de funcionalizare a C+, cu chitosan utiliznd o metod nedistructiv #metod noncovalent$ este prezentat n 9chema 1%. 4ceast metod utilizeaz capacitatea de emulsifiere a chitosanului" solubilitatea complet diferit a chitosanului n ap n mediu acid sau bazic i reaciile de reticulare ale acestui polimer.

Schema "5. Functionalizarea CNT cu chitosan i reticularea

6etoda presupune parcurgerea a trei etape i anume 1. C+, #65C+,$ se disperseaz n 1-- ml soluie de chitosan #chitosan dizolvat n soluie de acid acetic 1 A$ i se sonicheaz timp de 1- minute. 4mestecul este agitat timp de 1 h" pentru ca macromoleculele de chitosan s fie adsorbite pe suprafaa C+, #acionnd astfel ca un surfactant polimeric cationic$. !. = soluie diluat de amoniu se adaug n pictur peste suspensia creat #C+,(chitosan$. 8e msur ce p;(ul sistemului crete" chitosanul ionizat este deionizat i astfel devine insolubil n mediul apos formandu(se un strat de chitosan pe suprafaa C+,. %. 4mestecul se nclzete la 0-oC i apoi se adaug glutaraldehida n vederea reticulrii chitosanului depus pe suprafaa C+,. 1lutaralehida este un agent comun utilizat la reticularea chitosanului care determin o fi'are puternic a stratului de chitosan pe suprafaa C+,. 8rodusul obinut se colecteaz prin centrifugare i apoi este splat cu acid acetic diluat n vederea ndeprtrii chitosanului nereticulat. 8rin combinarea proprietilor C+, i versatilitatea i biocompatibilitatea chitosanului" aceste materiale hibride pot viza ca posibile aplicaii domeniul biomedical i anume biosenzori" sisteme cu eliberare controlat precum i alte aplicaii n domeniul biologic. ( F (c7i%(a-i1a!ea CNT c '%-ime!i

'odificarea nonco/alent( a CNT cu polimerii 6odificarea noncovalent a C+, cu polimeri se bazeaz pe adsorptia fizic a polimerilor pe suprafata C+,. 8ereii grafitici laterali ai C+, permit posibilitatea interaciilor cu polimerii conjugai precum i a polimerilor ce contin heteroatomi. 4vantajul acestei metode se refer la conservarea sistemului conjugat al pereilor C+," acest lucru conducnd la pstrarea proprietilor structurale ale acestor materiale.

/n direcia solubilizrii C+, utilizarea polimerilor reprezint o alternativ bun pentru a nlocui surfactanii. /n acest caz mecanismul dispersiei se bazeaz pe adsorptia polimerului pe suprafata C+,. +uncionalizarea co/alent( 2uncionalizarea covalent presupune crearea unor legturi chimice puternice ntre polimeri i C+,. E'ist dou metodologii de grefare a C+, i anume H0I: (g!e9a!ea -a #22g!a9$i(g $%22$ care implic sinteza unui polimer cu o mas molecular specific i grupri terminale reactive sau precursori radicalici. Catena polimer este ataat de suprafaa C+, prin reacii de adiie. (g!e9a!ea &e -a #22g!a9$i(g 9!%m22$ implic formarea catenei polimere de la suprafaa C+, prin polimerizarea in situ a monomerilor iniiat de speciile chimice imobilizate pe pereii laterali e'terni ai C+, precum i la capetele C+,. 0/anta1ul metodei 22g!a9$i(g $%22 este acela c permite utilizarea unor polimeri comerciali caracterizai prin mas molecular i polidispersie controlat. 2eza/anta1ul metodei 22g!a9$i(g $%22 vizeaz coninutul sczut de polimer grefat datorit reactivitii relativ sczute i mpiedicrilor sterice ridicate ale macromoleculelor.1refarea iniial a catenei polimere mpiedic steric o difuzie suplimentar a unor noi macromolecule ctre suprafaa C+, i de aceea se obine un grad de grefare sczut. *e asemenea pot fii utilizai doar polimerii ce conin grupri terminale reactive. 8olimerizarea monomerilor iniiai de speciile e'istente pe suprafaa C+, este un e'emplu de reacie numit i polimerizare iniiat( la suprafa(. 4vantajul acestei metode const n grefarea unei concentraii ridicate de compus organic datorit diminurii mpiedicrii sterice. Me$%&a 22g!a9$i(g $%22 /n general aceast strategie de funcionalizare presupune reacia dintre catena polimer i suprafaa C+, nemodificat" o'idat sau prefuncionalizat. Cele mai studiateFe'ploatate funcionalizri utiliznd aceast metod implic adiiile radicalilor sau carbanionilor precum i reaciile de cicloadiie la dublele legtturi ale C+,. 4lternativ" zonele de pe suprafaa C+, care prezint defecte aprute n urma procesului de o'idare precum i capetele deschise ale nanostructurilor ce conin grupri carbo'ilice permit legarea covalent a oligomerilor sau polimerilor. 4tunci cnd se iau n calcul zonele cu defecte ale C+, funcionalizarea se bazeaz pe introducerea unor polimeri cu grupri reactive terminale care reacioneaz cu gruprile funcionale de pe suprafaa C+,. Cei mai uzuali polimeri grefai utiliznd aceast strategie sunt cei cu grupri

terminale de tip amino sau hidro'il ataai prin reacii de amidare sau esterificare de suprafaa C+, modificat n prealabil cu grupri carbo'ilice #Schema "4$.

Schema "4. Func"ionalizare CNT utiliz'nd metoda 33grafting to33

Reac7ii &e g!e9a!e a ca$e(e-%! '%-ime!e &e * '!a9a7a CNT ac$i+a$e 8rincipalele reacii studiate n vederea grefrii polimerilor de suprafaa C+, sunt prezentate n cele ce urmeaz. !. 4eacii de esterificare ntre CNT i macromolecule

4ceste reacii au fost utile pentru grefarea polistirenului #89$" alcoolului polivinilic #48:$" polietilenglicolului #8E1$ de suprafaa C+, modificate cu grupri carbo'il" acil. 4( 65C+, nefuncionalizat >( 65C+, nefuncionalizat Miradiat C( 65C+, funcionalizat cu 89 #. 4eacii de amidare

,abel 0. ,ipuri de polimeri grefai Ti' '%-ime! g!e9a$ 8olietilenimin #8E/$ 8olieterimid 8olietileno'id #8E=$ cu grupri amino terminale. 6asa molecular N )--- gFmol CNT m%&i9ica$ C+, acilat C+, acilat 95C+, activat cu grupri acil

". 5refarea prin mecanism radicalic 4ceast metod a fost utilizat la ataarea poli#!(vinilpiridinei$ care prezint o grupare terminal de tip !"!"0"0"(tetrametilpiperidinil(1(o'il #,E68=$ de suprafaa 65C+,. Ja nclzirea polimerului gruparea terminal ,E68= se disociaz i formeaz radicali care permit grefarea macromoleculei pe suprafaa C+, #Schema "5$. Utiliznd aceast metod au fost grefati polimeri precum polistirenul" policaprolactona i diveri copolimeri.

Schema "5. /refarea catenei polimere de suprafa"a CNT printr#o reac"ie ce implic un mecanism radicalic.

6. 0diii nucleofile sau reacii de cuplare 4nionul de polistiril(litiu" obinut prin polimerizarea anionic poate fii grefat printr(o reacie de substituie nucleofil de suprafaa C+, modificat cu grupri acil #9chema 10$.

Schema "#. Reac"ia de substitu"ie nucleofil a anionului de polistiril#litiu cu CNT

7. Cicloadiii

Schema "/. Reac"ia de cicloadi"ie a 4 cu grupri azidice terminale cu suprafa"a CNT

8. 4eacii de condensare 6acromoleculele de poli#uree(uretani$ cu grupri terminale de tip aminopropiltrieto'isilani au fost grefate pe suprafaa C+, funtionalizate cu alco'isilani printr(un proces de condensare hidrolitic a gruprilor alco'i din silani.

Schema "4. Reac"ia de cicloadi"ie a 4 cu grupri azidice terminale cu suprafa"a CNT

3F (c7i%(a-i1a!e CNT c a-7i c%m' Di ,c%m' Di %!ga(ici c ma*: m%-ec -a!: *c:1 $:E age(7i &e *i-a(i1a!eE (a(%'a!$ic -e &e *i-ici E a(*am6- !i '%-ie&!ice &e $i' ,RSiO"E5)( 8rin intermediul acestor grupri funcionale e'istente pe suprafaa nanotuburilor de carbon se pot grefa i alte grupri funcionale sau diferite molecule. Cea mai uzual metod de funcionalizare a C+, cu diveri compui implic pornirea de la C+, cu grupri carbo'ilice e'istente pe suprafaa. 1ruprile carbo'ilice sunt reacionate cu clorura de tionil n vedere generrii gruprilor de tip cloruri acide care ulterior sunt reacionate cu diveri ageni de grefare precum aminele #Schema "8$. +uncionalizarea cu amine C+, funcionalizate cu octadecilamina prezint o dispersabilitate satisfctoare n solveni organici precum cloroform" diclormetan" solveni aromatici" sultura de carbon.

Schema "8. Reprezentarea schematic a func"ionalizrii nanotuburilor de carbon prin intermediul gruprii acil

+uncionalizarea CNT cu ansambluri poliedrice de tip (4Si)!.7)n3POSS 9i n acest caz etapa iniial presupune activarea suprafeei C+, prin grefarea de grupari funcionale carbo'ilice obinute prin tratament o'idativ. 1ruprile carbo'il sunt activate prin utilizarea clorurii de tionil i ulterior gruparile acil obtinute reacioneaz cu gruprile funcionale e'istente n structura substituenilor organici ai 8=99 #Schema C<$.

Schema C<. Func"ionalizare CNT cu 46

+uncionalizarea CNT cu particule magnetice ncapsulate n silice

Schema C". &tapele func"ionalizrii CNT cu particule magnetice ncapsulate n nanosilice +uncionalizarea CNT cu ageni de silanizare

Ceacia C+, cu agenii de silanizare permite introducerea unor grupri funcionale de tip amino" epo'i" hidro'il" acrilice" vinilice pe suprafaa C+,. C+, ce conin grupri hidro'il pe suprafa pot reaciona cu agenii de silanizare precum precum aminopropiltrieto'isilanul #48,E9$ sau %(glicidilo'ipropiltrimeto'isilanul introducnd astfel diferite grupri funcionale precum amino sau epo'i pe suprafaa C+,.

Schema CC. Func"ionalizare CNT cu agen"i de silanizare

F (c7i%(a-i1a!ea 22CLIC= C>EMISTR?22 FTe!me( - &e F2C-icG chemi*$!H22 i($!%& * &e K. >arrQ 9harpless n anul !--1 vizeaz acele reactii chimice de obinere si purificare rapida" simpla a unor compui . Ceactia ;uisgen de cicloaditie 1"%(dipolara catalizata de Cu #/$ reprezinta cea mai uzuala reactie in conceptul 73clicR chemistrQ33 HS.4m.Chem.9oc." !--)" 1!<" 1&)1@(1&)!&I. 4cest metod permite introducerea uuoar a gruprilor de tip azide i alchine n moleculele organice sau polimerice. 1ruprile azidice precum i cele de tip acetilene sunt stabile n numeroase condiii ale reaciilor organice i medii biologice. 8rincipalele avantaje ale metodei T22CLIC= C>EMISTR?22 sunt? (tolerana reaciei n prezena altor grupri funcionale #nu sunt necesare reacii de protecie a gruprilor funcionale$ (stabilitatea gruprilor azidice n numeroase condiii de reacie (timpi de reacie sczui (randament ridicat (puritate ridicat 6etoda T33CJ/CK C;E6/9,CU33 reprezint o alternativ promitoare de introducere a unei game variate de molecule pe suprafaa C+,.

J. Am. Chem. Soc., 2009, 131 (42), pp 1539415402

Schema C5. 7tilizarea metodei C8%C9 C:&$% TR; la func"ionalizarea CNT 8n n prezent nu au fost raportate foarte multe e'emple de funcionalizare a C+, utiliznd metoda 33CJ/CK C;E6/9,CU33. /n 9chema. !& pot fi observate cteva reacii de functionalizare a C+, utiliznd aceast metod.

Schema C4. 2taarea diferitelor func"ionalit"i pe suprafa"a CNT prin metoda << C8%C9 C:&$% TR;<<#<<C8%C9 C6748%N/<< /refarea pe suprafa"a CNT a oligozaharidelor prin metoda C8%C9 C:&$% TR;<< Ciclode'trina este cunoscut pentru capacitatea sa de a ncapsula biomolecule din soluiile apoase n cavitatea sa hidrofob" fiind considerat deosebit de util n obinerea unor sisteme cu eliberare controlat. Ceacia de cicloadiie ;uisgen a fost utilizat la grefarea ciclode'trinei pe suprafaa 95C+,. 9istemul hibrid 95C+, funcionalizat cu ciclode'trina prezint o solubilitate bun n ap i o mbuntire a importanei biologice n aplicaii precum sisteme cu eliberare controlat.

Schema C5. 2plicarea metodei 33C9:C; C<=':ST4><< pentru grefarea biomoleculelor pe suprafa"a !CNT

INTERACTIILE SI FUNCTIONALIZAREA CNT CU BIOMOLECULE

#$ ultimii ani C+, au fost intensiv cercetate n vederea e'tinderii aplicaiilor acestora n domeniul biologic i biomedical datorita proprietatilor fizice unice" dimensiunilor" formei si structurii. 2uncionalizarea C+, cu biomolecule precum acizii nucleici" proteinele sau polimerii sintetici reprezint o direcie in curs de dezvoltare a domeniului bionanotehnologiei. /nteraciile C+, cu moleculele biologice precum lipidele" 4*+ i proteinele determin o dispersie eficient a C+, n ap. 95C+, sunt materiale cu o absorptie optica puternica in +/C #/nfra(rosu apropiat$ si de aceea pot fi utilizate n terapia fototermica a cancerului. /n contrast cu 95C+," utilizarea 65C+, n biologie sau domeniul medical este diferita datorita diferentei de structura" marime" acestea fiind recomandate ca platforma pentru eliberarea unor biomolecule precum 4*+. 8rincipalele aplicatii ale C+, in domeniul biomedical includ senzorii pentru detectarea unor biomolecule #4*+" proteine$" agenti de contrast" sisteme cu eliberare controlata a medicamentelor" suporturi pentru cresteri celulare. +uncionalizarea CNT este o etap( critic( ce influeneaz( utilizarea acestora n domenii de /?rf precum biologia sau domeniul medical. C+, sintetizate prin una din metodele prezentate anterior se caracterizeaz printr(o suprafa puternic hidrofob care limiteaz solubilitatea sau dispersia acestora n mediul apos. 8entru aplicatiile biomedicale este necesara modificarea chimismului suprafetei C+,. 6odificarea suprafeei prin aa numita funcionalizare este necesar pentru a asigura biocompatibilitatea i un nivel sczut de to'icitate n aplicaiile din domeniul biomedical. CNT prezint poteniale aplicaii n domeniul biomedical. Una din cerinele majore pe care trebuie s le ndeplineasc C+, pentru a putea fi utilizate n domeniul biomedical #pentru a se nregistra o cretere a biocompatibilittii$ se refer la solubilitateaFdispersia acestora n ap. /n acest sens au fost dezvoltate o serie de metode de dispersie ce implic modificarea chimic a C+,. E'ist dou metode principale ce stau la baza formrii unor complec%i C+,(biomolecule %i anume? (metoda noncovalent (metoda covalent 'etoda nonco/alent

$etoda nonco1alent reprezint o strategie utilizat la mrirea solubilitii CNT. 2ceast metod permite con3ugarea CNT cu diferite molecule fr s fie afectat structura electronic i proprietile sale ,=. . %n cazul acestei metode sunt e0ploatate interactiile dintre suprafata CNT si domeniile hidrofobe ale moleculelor amfifilice. 'etoda co/alent presupune modificarea suprafeei (pereilor) CNT determin'nd astfel o modificare a structurii electronice ( localizare a electronilor n zona defectelor). Functionalizarea co1alenta presupune formarea unor legaturi chimice intre peretii CNT si moleculele implicate in reactie. 2ceasta modificare a CNT determina o schimbare radicala a proprietatilor fizice a CNT. 1.1. @iofuncionalizarea nonco/alent >iofunctionalizarea non(covalenta prezinta o importanta deosebita in asigurarea biocompatibilitatii C+, si astfel e'tinderii aplicatiilor acestor nanomateriale in domeniul biomedical. *e obicei" aceasta metoda de modificare a suprafetei C+, implica interactii hidrofobe sau interactii ( si astfel nu au loc modificari ale structurii electronice conjugate. 6etoda non(covalenta presupune acoperirea C+, cu o varietate de agenti de functionalizare precum surfactanti #anionici" cationici" neionici$" polimeri" compusi polinucleari aromatici si diferite biomolecule. *e e'emplu dispersia 95C+, poate fi asigurata prin utilizarea unor surfactanti de tipul dodecilsulfatului de sodiu insa cantitatea de C+, dispersate in prezenta acestui surfactant in general este mica #sub ) A$. = functionalizare non(covalenta a C+, cu aplicatii in domeniul biomedical trebuie sa indeplineasca urmatoarele cerinte? 1. moleculele ce acopera suprafata C+, sa fie biocompatibile si neto'ice !. stratul acoperitor al C+, sa fie suficient de stabil in solutiile biologice caracterizate printr(o concentratie ridicata de saruri %. moleculele utilizate la modificarea suprafetei C+, trebuie sa aiba o concentratie critica micelara #C6C$ foarte scazuta &. moleculele ce acopera suprafata C+, trebuie sa detina in structura lor grupari functionale disponibile bioconjugarii cu diverse biomolecule astfel incat sa conduca la obtinerea unor sisteme bioconjugate cu diferite aplicatii biologice. 4ceste conditii au fost indeplinite prin functionalizarea non(covalenta a C+, cu fosfolipide tratate cu polietilenglicol. 2osfolipidele sunt componente majoritare a membranei celulare si de aceea utilizarea acestora este aprobata in domeniul biologic. 8e suprafata C+, se ancoreaza catenele fosfolipidelor in timp ce catenele hidrofile de 8E1 sunt orientate in faza apoasa. 8rintr(o astfel de modificare C+, devin biocompatibile" solubile in apa si stabile in diferite solutii biologice .

Schema !0. !CNT acoperit cu fosfolipide tratate cu 4&/ liniar (l#4&/) si 4&/ ramificat (br#4&/) +umeroase proteine %i lipide" incluznd enzime" peptide %i acizi nucleici se adsorb puternic pe suprafaa C+, #9chema !<$.

Schema C/. &0emple de biomolecule ce se pot atasa de suprafata CNT prin metoda nonco1alnte ,=. 4ceste interacii dintre C+, %i moleculele biologic active determin o solubilizare mai eficient a C+, dect n cazul utilizrii surfactanilor %i polimerilor. /ntr(o manier similar cu cea a surfactanilor" moleculele biologice ce posed n structur uniti hidrofile ct %i hidrofobe" determin o solubilizare a C+, n mediul apos. *e e'emplu 65C+, formez o dispersie stabil n ap dup interacia acestora cu anumii derivai lipidici ce dein n catena principal ntre 1!(1@ atomi de carbon %i grupri polare situate la capetele catenei. = alt metod de biofuncionalizare non(covalent presupune ata%area proteinelor de C+, n prezena surfactanilor #,riton P(1--" ,riton P(&-)$ sau a polimerilor. 8roteinele pot fi imobilizate de 95C+, parcurgand urmatorii pasi. /n prima etapa are loc adsorbia ireversibil a unui compus organicFpolimeric #1(pirenebutanoic acid succinimidQl ester( 18>4$ pe suprafaa hidrofob #grafena$ C+,. /n etapa urmtoare proteina este ata%at covalent de

gruparea funcional #succinimidil$ e'istent n 1(8>4 printr(o substituie nucleofil a gruprii aminice e'istent n catena proteinei #Schema C4$.

Schema C4. %mobilizarea unei proteine pe suprafaa CNT = problem nc neelucidat n acest domeniu vizeaz activitatea biologic a acestor biomolecule imobilizate pe aceste suporturi nanostructurate. 9tudiile viznd acest problem sunt nc limitate. 8n n prezent e'ist studii care evideniaz importana naturii proteinei. 4stfel n funcie de tipul proteinei" 95C+, poate afecta n mod diferen iat activitatea biologic a proteinelor adsorbite.

Schema C8. 95C+, acoperit de 4*+

1.!. @iofuncionalizarea co/alent 2uncionalizarea covalent a C+, este o alternativ promitoare de e'tindere a aplicatiilor C+, in domeniul biomedical. /n funcie de localizarea gruprilor funcionale e'istente n C+, e'ist dou strategii utilizate la funcionalizarea covalent a biomoleculelor: 1. funcionalizarea gruprilor e'istente n defectele C+,

!. funcionalizarea pereilor laterali H!I +uncionalizarea n zona defectelor 8ana in prezent s(au testat o serie de metode de functionalizare covalenta a C+,. Cea mai uzuala metoda de functionalizare covalenta presupune un tratament chimic initial a C+, ce implic utilizarea unor amestecuri de acizi tari #;+=%F;!9=&$. 4ceasta metoda determin o modificare a suprafeei C+, ce implic apariia unor grupri carbo'il" carbonil sau hidro'il deosebit de utile n vederea ancorrii unor noi molecule. C+, o'idate nu pot fi utilizate direct in aplicatiile biologice deoarece tind sa formeze agregate in prezenta unui continut ridicat de saruri ce caracterizeaza solutiile biologice. *e aceea se recomanda o etapa ulterioara de modificare ce consta in atasarea unor polimeri hidrofili precum polietilenglicolul care asigura formarea unor sisteme conjugate stabile in mediul biologic #9chema %-$. Conjugarea C+, o'idate cu polimeri hidrofili

1. ='idarea C+,

!. 4tasarea unor catene hidrofile

Ceactia de cicloaditie ce are loc la capetele aromatice ale C+,.

Ceactia >ingel

1"%(Cicloaditia

Reactiile de aditie la peretii CNT

Reactiile la gruparile carbo0il e0istente in defectele de la suprafata CNT Schema 5<. &0emple de reac"ii de functionalizarea co1alenta a CNT

1ruparile functionale introduse prin modificarea C+, cu (aminoacizii pot fi utilizate mai departe pentru o conjugare cu diferite biomolecule precum peptidele sau pentru atasarea unor medicamente. 1ruprile funcionale de tip carbo'il sunt cele mai utilizate pentru a conecta C+, de biomoleculele ce conin grupri amino terminale. /nainte de modificarea covalent& gruprile acide #carbo'il$ sunt activate prin utilizarea clorurii de tionil" o'alil sau prin utilizarea carbodiimidelor sau esterilor activi n vederea obinerii unor grupri intermediare cu reactivitate ridicat care s permit legarea diferitelor tipuri de biomolecule prin legturi covalente stabile. Chimia Carbodiimidei poate fi utilizat la legarea C+, de numeroase molecule biologice. Carbodiimida activeaz gruparea carbo'ilic acid care poate fi introdus n C+, prin tratamente de o'idare" facilitnd astfel reacia C+, cu gruprile aminice prezente n structura moleculelor biologice.

Schema 5". 2cti1area gruparii carbo0il a CNT in prezenta &)C 6etoda de biofuncionalizare covalent a C+, utiliznd ruta carbodiimidelor prezint o serie de reacii secundare %i anume reaciile nedorite intermoleculare datorit faptului c biomoleculele prezint o concentraie ridicat de grupri aminice %i carbo'ilice. 8onderea acestor reacii nedorite poate fi diminuat utiliznd metoda n dou etape %i anume: n prima etap gruprile carbo'il sunt transformate n grupri esterice prin intermediul activrii cu diimide" care ulterior n etapa a doua reacioneaz cu grupele amino de pe suprafaa biomoleculelor. ,abel <. E'emple de ageni de cuplare de tip carbodiimidici N!.c!$. De( mi!e ca!6%&iimi& 1 1(etil(%(#%(dimetilaminopropil$(t( carbodiimid #E*C$ S$! c$ ! chimic

! %

+"+3(diciclohe'ilcarbodiimid #*CC$ diisopropilcarbodiimid #*/C$.

/n 9chemele %1 si %! sunt prezentate cteva din reaciile carbodiimidelor.

>6(biomolecule #proteine sau 4*+ cu grupri amino terminale$ E*C(1(etil(%(#%(dimetilaminopropil$(carbodiimide +;9(+(hidro'isuccinimida *CC(diciclohe'il(carbodiimid *62(dimetilformamid Schema "!. +uncionalizarea co/alent a CNT utiliz?nd procedeiul carbodiimidei = alt metod des utilizat la formarea unei legturi amidice" presupune reacia cu E*C n prezena +(hidro'isucciniminei #+;9$ care poate reaciona cu gruparea carbo'ilic din C+, n vederea formrii unui intermediar esteric activ #9chema %1(ruta b$. 4ceast metod a fost des utilizat la funcionalizarea C+, cu proteine %i 4*+ ce contine grupri amino terminale. *e asemenea" C+, pot fi modificate prin introducerea unei anumite cantit i de amin care ulterior poate reaciona cu moleculele biologice #Schema 5C$.

96CC(9uccinimidil(&#+(maleimidometil$ciclohe'ane(1(carbo'ilat

Schema 5C. Funcionalizarea !CNT cu biomoleculele utiliz'nd procedura maleimidei /n prima etap gruparea carbo'ilic a 95C+, #introdus prin o'idarea cu acid azotic$ reacioneaz cu clorura de tionil n vederea obinerii unui intermediar de tip acil care ulterior este tratat cu etilendiamin n vederea obinerii unui 95C+, cu grupri amino(terminale #95C+,(+;!$. 95C+,(+;! poate fi atasat covalent de 4*+ prin introducerea unei grupri maleimidice prin utilizarea unui compus de tipul 96CC. /n ultima etap are loc reacia cu 4*+ ce conine grupri de tip tiolic. = alt rut utilizat la obinerea C+, solubile n ap presupune urmtoarele etape. 1. 4minoacizii sunt condensai cu paraformaldehida n prezena C+, dispersai n dimetilformamid #*62$(Schema 55(1 !. ruperea gruprii protejate +(tetrabuto'icarbonil #>oc$ prin reacia cu ;Cl #9chema %%(!$ %. C+, funcionalizat cu aminoacidul prezint o solubilitate remarcabil n ap #!- mgFml$. 4cesta reacioneaz cu aminoacizii cu grupri amino protejate #2moc(1lQ(=;$ printr(o reacie de cuplare activat de +(hidro'ibenzotriazoli #;=>t$ %i diisopropilcarbodiimid #*/C$.

>oc(buto'icarbonil *62(*imetilformamid *C6(diclormetan */E4(diizpropiletilamina */C(diizopropilcarbodiimid ;=>t(+(hidro'ibenzotriazol 2moc(.(fluorenilmeto'icarbonil 1lQ(acid glicolic

Schema 55. Funcionalizarea co1alent a CNT cu aminoacizii

+uncionalizarea pereilor laterali (capetelor) CNT 6etodele ce vizez funcionalizarea lateral a C+, includ reaciile de fluorurare" adiia radicalic" adiia nucleofil" adiia electrofil %i cicloadiiile. ,abel. E'emple de sisteme conjugate de tip C+,(ageni terapeutici H!I

Con1ugarea CNT cu proteine si peptide

8roteinele pot fi conjugate cu C+, prin adsorptie spontana pe suprafata C+, sau prin imobilizarea controlata ce implica reactii de functionalizare. 8roteinele comune constituie agenti de dispersie eficienti ai C+," capacitatea acestora de dispersie depinzand de o serie de factori precum structura primara si p;. 8roteinele cu un caracter bazic s(au dovedit a fi mai eficiente in dispersia 95C+,.

Con1ugarea CNT cu acizii nucleici 02NA04N

9imilar cu proteinele" acizii nucleici pot fi atasati de suprafata C+, prin metode non(covalente #adsorptie$ sau covalente prin reactii de cuplare activate de prezenta carbodiimidelor sau prin utilizarea unui agent de legare bifunctional. 2unctionalizarea C+, cu 4*+ asigura solubilitatea in mediul apos dar si un control mai precis al proprietatilor de interfata. 6ecanismul de prindere a 4*+ de suprafata C+, nu este inca elucidat" propunandu(se o serie de interactii precum formarea de legaturi van der 5aals" interactii hidrofobe ( " interactii electronice intre acidul nucleic si C+,"

APLICATII ALE CNT BIOFUNCTIONALIZATE

9E+G=C/ EJEC,C=C;/6/C/ 8E+,CU *E,EC,/4 >/=6=JECUJEJ=C 9/9,E6E CU EJ/>EC4CE C=+,C=J4,4 9U>9,C4, /+ /+1/+EC/4 ,/9UJ4C4

Sisteme cu eliberare controlat( a medicamentelor

9istemele cu eliberare controlat a medicamentelor sunt ntr(o continu cercetare n vederea mbuntirii profilului farmacologic i propriettilor terapeutice ale medicamentelor administrate. 'copul sistemelo( cu eli)e(a(e co$t(olat *i+ea+ mi$imi+a(ea ,e-(a,(ii me,icame$telo(& c(ete(ea )io,ispo$i)ilitii& sc,e(ea to.icittii i a e/ectelo( secu$,a(e ale me,icame$telo( ca(acte(i+ate p(i$t(0o citoto.icitate (i,icat& eli)e(a(ea co$t(olat i ,imi$ua(ea ca$titii $ecesa(e. A,mi$ist(a(ea co$*e$io$al a me,icame$telo( u$eo(i euea+ ,ato(it solu)ilitii sc+ute a me,icame$telo( p(ecum i ,ist(i)uiei i selecti*itii sc+ute. #$ compa(aie cu sistemele cu eli)e(a(e co$t(olat pe )a+ ,e polime(i& C12 p(e+i$t u$ (apo(t lu$-ime0,iamet(u $et supe(io( ca(e (ep(e+i$t u$ a(-ume$t p(omito( $ *e,e(ea aplic(ii acesto( mate(iale $ ,ome$iul )iome,ical (sistemelo( cu eli)e(a(e co$t(olat . E'tinderea aplicaiilor C+, i n acest domeniu a fost motivat de capacitatea C+, de a penetra celulele. 6ecanismul penetrrii nu este nc elucidat complet. ,ipul moleculei ataate covalent sau noncovalent de pereii e'terni ai C+, joac un rol important n procesul de transport al acestora in celule. Capacitatea C+, de a penetra membrana celular a fost e'plorat n vederea transportului unor molecule organice mic m%-ec -a!e. 6edicamentele caracterizate prin mase moleculari sczute precum antitumoralele #do'orubicin" cisplatin" paclita'el$" anti(fungicele pot fi conjugate covalent de suprafaa C+,.

*e e'emplu" paclita'elul a fost ataat de suprafaa C+, acoperit cu 8E1 prin intermediul legturilor esterice. *o'orubicinul" un alt medicament utilizat n terapia cancerului poate fii ataat de suprafaa C+, modificat cu 8E1 atingndu(se concentraii ridicate de peste & g medicamentF1g C+,. 4taarea medicamentului de suprafaa C+, este dependent de valoarea p;(ului. Utilizarea C+, in aplicatiile biomedicale ca vector sau agent de incapsulare a medicamentelor a fost propusa in numeroase studii" fiind argumentata prin e'istenta unor spatii cu capacitate de incapsulare si lipsa degradarii in corpul uman datorita proprietatilor chimice si mecanice. Cisplatinul este un antitumoral utilizat in tratarea unei game largi de tumori solide. Cisplatinul poate interactiona cu catenele polinucleotide conducand la obtinerea unor structuri reticulate. 4cest comple' pe baza de 8t solubil in apa este sensibil la lumina. /n solutia apoasa ionii de clor sunt inlocuiti si astfel are loc descompunerea acestuia. 4cesta este motivul pentru care solutiile ce contin cisplatin sunt proaspat pregatite si protejate de lumina. 9tabilitatea sa creste in solutiile fiziologice datorita prezentei in e'ces a ionilor de clor. Cisplatinul este stabil in prezenta alcoolului benzilic" parabenilor" glucozei. 4cesta este injectat in corpul uman ca o solutie ce contine apa sterila" clorura de sodiu" manitol si acid clorhdric pentru ajustarea p;(ului. Ja fel ca in cazul majoritatii medicamentelor antitumorale" cisplatinul determina o serie de efecte secundare datorita selectivitatii scazute. Utilizarea C+, ca sistem cu eliberare controlata poate asigura lipsa necesitatii solventilor" prevenirea precipitarii cisplatinului in solutiile apoase si diminuarea degradarii sale. /n plus utilizarea C+, ca nanovector poate diminua o serie de efecte secundare caracteristice acestui antitumoral. Un e'emplu de ruta utilizata pentru incapsularea Cisplatinului in 95C+, presupune urmatoarele etape?

1. 95C+, se disperseaza intr(o solutie ce contine cisplatinul dizolvat in dimetilformamida la &-BC" timp de &@ h. 9olutia obtinuta se filtreaza si se spala cu un amestec acetona(metanol #1?)$. /n final cisplatinul e'istent pe peretii e'terni ai C+, se indeparteaza prin spalare cu apa.

!. C+, ramase pe membrana se sonicheaza in acetona o perioada. 9olutia obtinuta se plaseaza picatura cu picatura pe un substrat siliconic in vederea evaporarii acetonei si obtinerii unei pulberi.

C+, pot fi funcionalizate cu amfotercin > #4m>$(Schema 54" unul din cele mai utilizate antibiotice pentru tratarea infeciilor fungice cronice. 4cest sistem conjugat conduce la o reducere a to'icitii medicamentului n comparaie cu utilizarea individual a medicamentului.

Schema 54. tructura molecular a CNT functionalizate capabile s penetreze celulele i s ndeplineasc o func"ie biologic

TOIICITATEA CNT
) ntrebare la care s$a r(spuns parial este legat( de impactul CNT asupra s(n(t(ii 4ceast ntrebare a determinat apariia a numeroase cercetri cu privire la determininarea biocompatibilitii i to'icitii C+,. Concluzia acestor studii a demonstrat faptul c to'icitatea C+, este o problem comple' ce depinde de numeroi factori precum tipul C+," metoda de sintez" puritatea C+," tipul agentului utilizat la modificarea suprafeei C+," densitatea gruprilor funcionale e'istente pe suprafaa C+," solubilitatea n ap" gradul de dispersie" tipul si concentraia impurittilor #impuriti metalice precum fier" nichel$. *e asemenea dimensiunile #lungimea" diametrul$ C+, influeneaz citoto'icitatea acestora. *e e'emplu" C+, cu o lungime de @!) nm poate determina apariia unor inflamaii puternice. 2uncionalizarea organic a C+, prin o'idarea utiliznd acizi tari n vederea introducerii de grupri hidro'il sau carbo'il determin o to'icitate mai ridicat a C+, o'idate n comparaie cu cele virgine. Un studiu comparativ viznd to'icitatea C+, a demonstrat faptul c tipul nanotubului are o influen semnificativ asupra citoto'icitii. 4stfel" 65C+, nefuncionalizate prezint o to'icitate mai sczut dect 65C+, o'idate. *e asemenea 95C+, prezint cel mai mare efect to'ic urmate de 65C+," Vuar i fulerene. +umeroase e'perimente realizate pe animale au demonstrat o posibil to'icitate a C+,. *e asemenea" sistemele conjugate C+,(peptide bioactive pot traversa membranele celulare i se pot acumula n citoplasm. 4tunci cnd concentraia acestora n celule depaeste 1- 6 atunci manifest un efect citoto'ic.

8n n prezent rezultatele sunt nc contradictorii. Cunotinele n domeniul nanoto'icologiei s(au mbogtit dar nu suficient de mult pentru a nelege complet impactul C+, asupra sntii i de aceea studii suplimentare sunt necesare n acest sens.