CAPITOLUL 1.

CARACTERIZAREA SPECIEI
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS

1.1. Caractere generale

Genul Mycobacterium face parte din familia Mycobacteriaceae, ordinul Actinomycetales,
fiind propus de Lehmann i Neumann n 1896. Denumirea provine din limba greac (myces =
fung, mucegai; bakterion = baston mic) datorit morfologiei sub care apare cultura de
Mycobacterium tuberculosis pe mediul lichid, asemntoare cu fungii microscopici filamentoi.
Speciile genului Mycobacterium au urmtoarele caractere comune:
Bacilli subiri, drepi sau uor curbai, uneori ramificai cu aspect de litere unghiulare;
Imobili, nesporulai i necapsulai;
Bacilli acido-alcoolo-rezisteni (BAAR);
Aerobi sau microaerofili;
Pretentioi nutritiv, cresc lent i doar pe medii speciale;
1.2. Clasificare
Ordinul Actinomycetales este alctuit din bacilli Gram pozitivi, unii acido-alcoolorezisteni, care prezint analogii morfologice cu micete filamentoase, speciile patogene au
filament scurte sau care tind sa se rup, putnd fi vzute numai n anumite stadii de cultivare sau
n esuturi infectate. Acest ordin cuprinde 4 familii:

Mycobacteriaceae- miceliu rudimentar sau absent, nu formeaz spori;

Actinomycetaceae spori formai prin fragmentarea miceliului;

Streptomycetaceae miceliul rmne nedivizat, specii productoare de antibiotice;

Actinoplanaceae sporii se formeaz n sporangii;

Mycobacteriile au o larg rspndire n mediul extern. Din totalitatea de specii cunoscute,

aproximativ jumtate prezint interes medical datorit contaminrii unor produse patologice dar
i prin diferitele infecii produse. M. tuberculosis este o specie strict parazit, habitatul su
natural fiind reprezentat de esuturile indivizilor bolnavi.
6

Microbiologia clinic impune o clasificare a mycobacteriilor (Tabelul 1., Tabelul 2.):

Micobacterii patogene (M. leprae, specie care infecteaz natural numai omul);
Micobacterii parazite (M. tuberculosis - infecteaz omul i numai ocazional animale
precum cini, pisici, papagali; M. bovis - infecteaz bovinele i doar excepional
omul);
Micobacterii condiionat patogene, gzduite de psri i mamifere (M. avium,
M. xenopi), de animale cu snge rece (M. marinum) iar altele, fr habitat bine
precizat (M. kansasii).

Tabelul 1. Principalele specii de micobacterii tuberculoase

Specii

Rol n patologie

M. tuberculosis

Produc tuberculoza la om, contagiul poate fi

M. bovis

interuman sau de la bovine iar infecia este

M. africanum (rar)

urmat de persisten n organism

M. ulcerans

Leziuni cutanate

M. leprae

Rezistena la infecie i forma clinic

determinate de starea imunitii mediate celular

Tabelul 2. Principalele grupuri i specii de micobacterii netuberculoase

Grup*
I. Fotocromogene

II. Scotocromogene

Specii

Rol n patologie

M. kansasii

Patogenie asemntoare cu tuberculoza (bovine)

M. marinum

Leziuni cutanate

M. scrofulaceum

Mai ales adenit cervical la copii

M. xenopi
III. Necromogene
IV. Cu cretere rapid

complex M. avium

Patogenie asemntoare cu tuberculoza (psri)

complex M. terrae

Specii nepatogene

M. smegmatis

Specii nepatogene

M. phlei etc.
* Grupele Runyon (I-IV) de mycobaterii netuberculoase stabilite dup timpul de dezvoltare i pigmentogenez
pe mediul Lwenstein Jensen i caractere biochimice.

1.3. Caractere morfotinctoriale

Mycobacterium tuberculosis este reprezentat de bacilli subiri, drepi sau uor curbai,
uneori pot prezenta ramificaii, nesporulai, necapsulai, imobili, strict aerobi.
n frotiuri apar izolai, aezai n cordoane curbate sau mperecheai, dnd aspect de litere
n unghiuri (Fig.1.). n contrast cu alte bacterii, micobacteriile se coloreaz numai la cald datorit
compoziiei chimice particulare a peretelui celular, cantitilor mari de lipide, glicolipide i
ceruri, ce rezist la decolorarea cu alcool i acizi minerali diluai. Cea mai indicat este coloraia
Ziehl-Neelsen (pentru acidoalcoolorezistente), bacilul tuberculos apare colorat n rou aprins
datorit fucsinei.

Fig. 1. M. tuberculosis - bacilli aezai n cordoane sau izolai (http://atlas.microumftgm.ro)

n mediile lichide se dezvolt numai la suprafa, mediul rmnnd limpede, unde se

formeaz un vl care se ngroa progesiv, formeaz pliuri i ulterior se fragmenteaz i cade la
fundul recipientului, lasnd un nou vl s se formeze. M. tuberculosis de tip uman produce un
vl mai gros i alcalinizeaz mediul la nceput iar mai apoi l acidific treptat, aceste aspecte
fiind caracteristice.
Pe mediile solide, coloniile bacililor tuberculoi devin vizibile dup aproximativ 14-21
zile, sunt de tip R: rugoase, cu suprafaa zbarcit, uscate, conopidiforme i cu o pigmentaie
crem. Tulpinile de M. tuberculosis rezistente la izoniazid pot forma colonii de tip S: lucioase,
strlucitoare, ce ader uor de substrat.

1.4. Ultrastructura
Robert Koch a prezentat bacilul tuberculos ca fiind sub form de bastona subire, drept
sau curbat, cu o lungime de 4-6 m i o lime de 0,3-0,4 m, iar pe frotiu bacilii se dispun n
cordoane.
Mycobacterium tuberculosis prezint un perete celular constituit din dou straturi strns
unite, unul extern i unul intern (Fig. 2.). Stratul extern apare difuz i incolor, alctuit din
peptidolipide i lipopolizaharide care sunt capabile sa reacioneze la schimbarea condiiilor de
mediu. Stratul intern are un contrast nalt, foarte evident, denumit i stratul rigid deoarece este
cel care determin forma celulei. n structura sa chimic se gsete mureina (complex de
mucopeptide polimerizate) care formeaz o reea stabil, fiind cea mai rezistent n timpul lizei
sau tratamentului chimic. n trecut s-ar fi descris i un al treilea strat alctuit dintr-un precipitat al
colorantului utilizat, dar acesta nu este vizibil, fiind la poriunea de contact dintre dou celule.

Fig. 2. Ultraseciuni prin celule de M. tuberculosis n care se evideniaz nveliul celular (A) i mezozomii (B)
[dup Klbel, 1982]

Este cunoscut faptul ca peretele celular al micobacteriilor este foarte bogat n lipide ceea
ce le integreaz n grupul germenilor Gram-pozitivi i le confer rezisten fa de acizi, eteri,
aceton dar i fa de aciunea unor enzime proteolitice i substane hidrosolubile. La bacteriile
acido-alcoolo-rezistente de interes medical, precum bacilul tuberculos, peretele celular se
aseamn cu cel al bacteriilor Gram-pozitive dar conine n mod special, acid micolic i o cear
ce le confer caractere tinctoriale deosebite i rezisten crescut.
Sub peretele celular, separat de acesta printr-un mic spaiu, se gsete membrana dubl
citoplasmatic, foarte bine colorat, ce prezint o compoziie lipoproteic iar la suprafa o
structur fibrilar lipidic.

Membrana ndeplinete funcia de barier cu permeabilitate selectiv, de rezisten fa

de procesele de digestie intrafagocitar dar este i locul unei activiti enzimatice complexe.
Prin invaginare, membrana plasmatic formeaz organite variate ca form (lamelare sau
tubulare) cunoscute sub denumirea de mezozomi, ce au rol de mediatori ntre nucleu i
citoplasm, sau formeaz sisteme membranoase intracitoplasmatice reprezentnd sistemul
enzimatic generator de energie.
Citoplasma micobacteriilor este alctuit din granule i incluziuni iar structura
citoplasmei este influenat de vrsta celulei, la cele tinere fiind mai omogen i compact iar la
cele btrne conine un numr mare de vacuole.

Fig. 3. M. tuberculosis seciune longitudinal schematic (dup Steinbrck, 1978)

1.5. Caractere biochimice i metabolice

Bacilul tuberculos uman este o bacterie strict aerob, crete doar pe medii speciale, lent
(2-4 sptmni), la o temperatur optim de 37C i un pH de 7,4. Pe baza caracterelor
biochimice pe care le prezint, Mycobacterium tuberculosis poate fi identificat n cadrul genului:
produce acid nicotinic sau niacin
produce nitrat-reductaz, catalaz, ureaz
sensibil fa de pirazinamid
rezistent fa de hidrazida acidului tiophen-2-carboxilic
1.6. Rezistena la factori fizici i chimici
Mycobacteriile AAR sunt mai rezistente la aciunea agenilor fizici i chimici, comparativ
cu celelalte bacterii ne-AAR, datorit coninutului ridicat n lipide al peretelui celular dar i
gruprii germenilor n grmezi. Dac n jurul bacililor exist un nveli organic protector, de
exemplu sputa, atunci rezistena acestora crete considerabil.
10

Lumina solar direct, cel mai puternic i larg aplicat dezinfectat, distruge germenii n
stare pur n 10-15 minute iar dac se regsesc ncorporai n sput rezistena lor se poate
prelungi pn la 3-4 zile.
Temperatura: frigul nu are nicio aciune, bacilii rezistnd chiar i la -180. n schimb,
cldura uscat i distruge n 45 minute la 100C iar cldura umed n 15 minute. Aceste date sunt
valabile preponderent pentru bacilii suspendai n ap, cei din ser fiziologic necesit 10 min la
60 iar cei din lapte 30 minute la 70 pentru a fi distrui.
Exis mai muli dezinfectani chimici cu efect distructiv asupra bacilului Koch: sublimat
1%, tricrezol 1%, lizol 2%, formol 1% i cloramin la 5-10C n 1 or. In produsele patologice,
acidul fenic 5% distruge BK n 24 ore iar tricrezolul 2%, lizolul 2% si formolul 15% n 2 ore.
Rezist mult timp n cadavre i apele de canal, acest lucru atrage obligativitatea de a
steriliza produsele patologice nainte de a fi evacuate. n practic, cele mai eficace mijloace de
distrugere a germenilor sunt: cldura umed (fierbere, autoclavare), cloramin, razele solare sau
ndeprtarea lor prin splarea minilor cu ap, perie i spun folosite pentru dezinfecie n focarul
de tuberculoz.
1.7. Structura biochimic
Bacilii tuberculoi sunt alctuii din 80-85% ap i 15-20% reziduu uscat format din
sruri minerale i substane organice (lipide, glucide i protide). Caracteristic bacililor acidoalcoolo-rezisteni este coninutul extrem de mare (30-40% din rezidul uscat) de lipide ce se
mpart n multiple fraciuni:
acidul ftoic cu rol n inflamaia specific (provoac aflux de granulocite, monocite);
fosfolipidele ce determin apariia celulelor gigante i cazeificarea leziunilor;
acidul micolic confer acido-alcoolo-rezisten;
cord-factorul implicat n virulena micobacterian;
fraciune ceroas ce produce efectele toxice ale infeciei.
Glucidele bacilare se gasesc n cea mai mare parte legate de lipide, protide si acizi
nucleici iar singurul polizaharid liber identificat este glicogenul. Activitatea enzimatic este
utilizat n diagnosticul diferenial al diverselor tipuri, a patogenitii i chimiorezistenei.
11

1.8. Structura antigenic

Protidele au ca reprezentant principal tuberculina, un preparat micobacterian obinut
prin uscare n vid i resuspensionarea bacililor tuberculoi n mixtur de ap cu glicerol. Ulterior,
s-a creat Purified Protein Derivative (P.P.D.), produs utilizat i astzi pe scar larg n testele
de determinare a rspunsului imun fa de antigenele bacteriene (Grange J.M., 1990).
Antigenele micobacteriene se clasific n funcie de localizare n antigene citoplasmatice
(solubile) i antigene ale peretelui celular (insolubile) iar dup structura chimic n proteine i
carbohidrai.
Antigenele solubile au fost identificate cu ajutorul imunoelectroforezei (Daniel i Janiki,
1978) i pot fi mprite n 4 categorii n funcie de rspndire:
antigene comune tuturor micobacteriilor;
antigene ale speciilor cu cretere lent (M. tuberculosis);
antigene aparinnd speciilor cu cretere rapid;
antigene particulare fiecrei specii.
Aceste antigene au fost obinute dup ndeprtarea fragmentelor din peretele celular prin
centrifugarea suspensiilor de lizate micobacteriene i sunt reprezentate n special de proteine
citoplasmatice i secretate precum i de carbohidrai solubili. Existena antigenelor comune
tuturor speciilor micobacteriene ar putea fi o explicaie pentru lipsa specificitii testelor
serologice de diagnosticare a tuberculozei.
n filtratul culturii de M. tuberculosis se gsesc aproximativ 200 de proteine, din care mai
mult de 30 de proteine au fost identificate i caracterizate utilizndu-se mai multe tipuri de
tehnici: purificare proteic, metode imunologice i screening-ul coleciilor genice ale ADN-ului
bacililor tuberculoi (Gomez M., 2000).
Proteinele de suprafa eliberate n mediul de cultur, ca i cele secretate activ reprezint
inte importante ale efectorilor sistemului imun chiar de la debutul infeciei tuberculoase.
Acestea sunt antigenele utilizate n studii experimentale ce urmresc obinerea de vaccinuri
antituberculoase vii (tulpini BCG modificate genetic) sau pe baz de peptide sintetice care s
realizeze o protecie mai eficient mpotriva infeciei tuberculoase innd cont de limitele
dovedite ale vaccinarii BCG (Andersen P., 1994).
12

Proteinele secretate de M. tuberculosis se mpart n 3 grupe principale n funcie de

eliberarea lor n supernatantul de cultur:
a. proteine excretate: sunt produse n cantiti mici, n primele zile dup nsmnarea
mediului de cultur;
b. proteine secretate: aparin peretelui celular i sunt eliberate n cursul creterii
bacililor, concentraia acestora crete treptat pe parcursul etapei de cultivare;
c. antigene citoplasmatice: eliberate la moartea bacteriei, concentraia lor crete brusc
spre finalul fazei logaritmice de cretere (ziua a 5-a), odat cu eliberarea masiva de
izocitratdehidrogenaza (indicator al autolizei);
Antigenele insolubile sunt reprezentate de componente ale peretelui bacterian precum
proteine, carbohidrai, lipide, acizi micolici, glicolipide fenolice i se regsesc n sedimentul
format prin centrifugare. Micobacteriile care formeaz suspensii stabile pot fi identificate prin
teste de aglutinare dar nu i M. tuberculosis care autoaglutineaz uor.

1.9. Imunitatea
Infecia cu Mycobacterium tuberculosis reprezint un model clasic de infecie cu un
patogen intracelular fa de care organismul se protejeaz elabornd un rspuns al limfocitelor T
orientat mpotriva macrofagelor ncrcate cu agentul patogen. Dintre factorii rezistenei naturale
principalul rol l joac macrofagele care pot ngloba i distruge un numar mic de bacterii.
Limfocitele T hipersensibilizate acioneaz prin eliberarea de mediatori chimici solubili
(limfokine) n cazul contactului cu antigenele micobacteriene.
Rezistena specific fa de infecia tuberculoas poate fi obinut doar cu administrarea
de bacterii vii cu virulen atenuat. Vaccinul B. C. G. (Bacilul Calmette - Gurin) este un bacil
nevirulent obinut n laborator prin trecerea repetat pe un mediu cu cartof biliat i glicerinat (13
ani) a unei tulpini de M. bovis. Imunitatea antiinfecioas poate fi condiionat de urmtorii
factori: genetici, existnd persoane sau populaii cu o rezisten crescut sau sczut fa de
tuberculoz, starea fiziologic a organismului, boli care scad rezistena precum diabetul,
administrarea de corticosteroizi sau imunodepresoare, malnutriie i stres.

13