Androsterilitatea la diverse plante

horticole

Constantinescu Andrei-Cristian
Grupa 2101

Primul caz de androsterilitate citoplasmatic a fost 2ddition de C. Correns, care

a descoperit n anul 1904 plante de cimbru (Satureja hortensis L.) cu polen
neviabil. n urma polenizrii plantelor androsterile cu polen de la plante fertile au
fost obinute forme androsterile pn n generaia F , demonstrnd astfel c
sterilitatea 2dditiona se motenete pe linie 2ddition . Ulterior, acest fenomen a fost
descoperit i 2ddition la o serie de plante din clasa mono- i dicotiledonatelor, anuale
i perene, alo- i autogame. J. Edwardson a remarcat cazuri de androsterilitate
necromozomal la 153 specii, ce fac parte din 51 genuri i 22 familii, clasicndule n funcie de originea lor n felul urmtor sterilitate aprut n rezultatul
ncrucirilor dintre plante cu genom i citoplasm incompatibil; sterilitate care se
manifest spontan la hibrizii intraspecici; sterilitate 2dditional2 de mutaii
citoplasmatice.
Androsterilitatea a aprut n condiii 2dditio diferite, ind observat n populaii
sau la descendenii obinui spontan n urma hibridrilor intraspecice,
interspecice i intergenerice precum i n urma mutagenezei ca rezultat al
reorganizrii genelor citoplasmatice sau nucleare
Pornind de la multitudinea surselor i diversitatea logenetic, feno- i
genotipic, au fost ntreprinse mai multe ncercri de a clasica tipurile cunoscute de
androsterilitate. n funcie de factorii care determin expresia acestui fenomen se
disting:
androsterilitate genic sau nuclear, cauzat de gene nucleare n stare
recesiv msms (msms male sterile) care se transmit prin ereditate mendelian;
androsterilitate citoplasmatic, 2dditional2 de gene citoplasmatice i gene
nucleare restauratoare de fertilitat androsterilitate modicaional sau indus,
2dditional2 de factori abiotici ibiotici ai mediului, indus prin mutagenez sau prin
aplicarea exogen a giberelinelor;
androsterilitate cromozomal, cauzat de diferite tipuri de aberaii
cromozomale aprute n meioz ca o consecin a hibridrilor ndeprtate.
Fiecare tip de androsterilitate are o importan teoretic deosebit. Astfel,
studierea androsterilitii citoplasmatice permite elucidarea mecanismelor de
interaciune a genomului nuclear cu plasmonul, studierea androsterilitii genice
pune n eviden mecanismele de aciune a genelor nucleare, iar n cadrul
androsterilitii modicaionale se examineaz aciunea diferiilor factori asupra
procesului de microsporogenez. Pe lng aceast, fenomenul de androsterilitate
este folosit pe larg la crearea de hibrizi pentru producie, fr a se efectua castrarea
manual a orilor, determinnd o cretere a ecienei economice.
Actualmente, se apeleaz din ce in ce mai des la posibilitatea crerii genotipurilor
androsterile prin utilizarea tehnicilor 2dditi de genetic molecular. Astfel, a fost obinut
un nou tip de ASC la Nicotiana tabacum L. prin hibridizarea somatic a protoplastelor .
Se efectueaz selectarea formelor ASC prin metoda androgenezei spontane . La plantele
de tutun transgenic au fost obinui 2dditi androsterili prin introducerea n genom a unor
gene ce codic ribonucleaze, restaurarea fertilitii ind determinate.

Tipuri de androsterilitate citoplasmatic

ASC poate ntlnit att la plantele monoice, ct i dioice din clasa mono- i
dicotiledonate, anuale i perene, cu mod diferit de reproducere (plante alo- i
autogame). Varietatea mare de tipuri de ASC, precum i clasicarea diferit a
acestui fenomen, implic necesitatea cunoaterii surselor, formelor de ASC,
modalitatea de transmitere a acestora i a genelor implicate n disfuncia
mitocondrial, soldat cu ntreruperea procesului de microsporogenez, rezultnd
androsterilitatea plantelor.
n funcie de originea genomului citoplasmatic i nuclear care interacioneaz,
pot exista trei tipuri de androsterilitate citoplasmatic:
autoplasmic apare cnd genomul citoplasmatic i cel nuclear fac parte
dintr-o populaie genetic;
homoplasmic apare cnd genomul citoplasmatic i cel nuclear fac parte din
populaie genetice diferite din cadrul aceleai specii;
aloplasmic apare la interaciunea interaciunea genomului citoplasmatic cu
cel nuclear care fac parte din specii diferite.
Primele dou tipuri de androsterilitate reprezint o consecin reasc a
proceselor evolutive n natur, de exemplu, cazul ginodioeciei coexistena indivizilor
hermafrodii i femeli (androsterili), ntlnit frecvent la angiosperme. Natura
interaciunii dintre plasmagene i genele nucleare, inevitabil n restaurarea
fertilitii, poate 3dditiona n 3dditional teoriei conictului genomic [66].
n numeroase populaii cu ginodioecie indivizii femeli produc cu mult mai multe
semine viabile dect indivizii hermafrodii. Acest avantaj al fertilitii feminine st
la baza evoluiei modelului de ginodioecie. El poate cauzat de efectele sexului
matern, care mresc funcionalitatea sexului femel sau
viabilitatea indivizilor androsterili;
efectele inbreeding-lui, indivizii femeli nu se pot autopoleniza i produc mai
multe semine viabile dect indivizii hermafrodiii. Acest tip de androsterilitate este
cunoscut att la speciile de plante din ora spontan, ct i la plantele de cultur.
Androsterilitatea aloplasmic se obine frecvent din ncrucirile interspecice sau din
ncrucirile genurilor apropiate. n 1988, Kaul denete aloplasmia ca fenomen n care
celulele unui organism conin citoplasma unei specii i nucleul altei specii. Autorul a
semnalat 175 cazuri de aloplasmie 3dditiona cu ASC . Se consider, c sterilitatea
3dditiona aloplasmic este condiionat de disfuncii n activitatea mitocondriilor,
determinate de coordonarea inecient dintre genomurile citoplasmatic i nuclear la
nivelul transcripilor (expresia genelor mitocondriale) sau asamblarea produselor de
translaie n complexul lanului respirator.
Expresia fenotipic a adrosterilitaii 3dditional3 de interaciunea dintre citoplasm i
nucleul unei specii donatoare variaz destul de larg, ind asociat uneori i cu conversii
homeotice ale staminelor n alte organe orale 3dditiona carpeloide sau petaloide .

Diversitatea molecular a androsterilitii citoplasmatice

Androsterilitatea citoplasmatic se manifest n prezena genelor nucleare de
restaurare a fertilitii n stare recesiv rfrf i se motenete nonmendelian Studiul
androsterilitii citoplasmatice prin diverse metode de analiz molecular (cartare
zic 4dditional4, 4dditional4 enzimatic, translaie in vitro, secveniere etc.) la
diferite specii, precum ASC-T la porumb , sorg , 4dditio , rapi , orez au
4dditional4 c acest fenomen apare ca urmare a rearanjamentelor la nivelul
genomului 4dditional4al, n urma crora rezult noi cadre de citire orf-uri (orf
open reading frame) himerice mitocondriale (g. 1).
Caracteristica molecular a regiunilor himere 4dditiona cu ASC variaz chiar i
n cadrul unei specii. Mutaiile mitocondriale sunt depistate n special n regiunea
din amonte sau aval a genelor care codic componenii complexului ATP-azic.
ntruct, n majoritatea cazurilor androsterilitatea este rezultatul expresiei unor noi
cadre de citire i nu al ntreruperii genelor mitocondriale de baz, fenotipul ASC
poate considerat mutant cu o nou funcie (gain-of-function mutants). Aceast
particularitate distinge formele ASC de mutanii mitocondriali obinui prin
silenierea unei gene (loss-of- function) care n majoritatea cazurilor prezint
deciene de cretere 4dditional.
Afectarea strii ziologice a mitocondriilor cauzat de prezena noilor orf-uri la
liniile materne se manifest n dezvoltarea staminelor i formrii polenului n
perioada premeiotic, meiotic sau postmeiotic, rezultnd tipul ASC de tip
gametot sau sporot. S-a constatat c n majoritatea sistemelor ASC, 4dditiona ale
liniilor comerciale formarea polenului este perturbat n meioz i postmeioz.

Studiul androsterilitii citoplasmatice prin diverse metode de analiz

molecular (cartare zic 4dditional4, 4dditional4 enzimatic, translaie in vitro,
secveniere etc.) la diferite specii, precum ASC-T la porumb , sorg , 4dditio , rapi
, orez au 4dditional4 c acest fenomen apare ca urmare a rearanjamentelor la
nivelul genomului 4dditional4al, n urma crora rezult noi cadre de citire orf-uri
(orf open reading frame) himerice mitocondriale (g. 1).
Caracteristica molecular a regiunilor himere 4dditiona cu ASC variaz chiar i n
cadrul unei specii. Mutaiile mitocondriale sunt depistate n special n regiunea din
amonte sau aval a genelor care codic componenii complexului ATP-azic.
ntruct, n majoritatea cazurilor androsterilitatea este rezultatul expresiei unor noi
cadre de citire i nu al ntreruperii genelor mitocondriale de baz, fenotipul ASC
poate considerat mutant cu o nou funcie (gain-of-function mutants). Aceast
particularitate distinge formele ASC de mutanii mitocondriali obinui prin
silenierea unei gene (loss-of- function) care n majoritatea cazurilor prezint
deciene de cretere 4dditional.
Afectarea strii ziologice a mitocondriilor cauzat de prezena noilor orf-uri la
liniile materne se manifest n dezvoltarea staminelor i formrii polenului n
perioada premeiotic, meiotic sau postmeiotic, rezultnd tipul ASC de tip
gametot sau sporot. S-a constatat c n majoritatea sistemelor ASC, 4dditiona ale
liniilor comerciale formarea polenului este perturbat n meioz i postmeioz.

Fig. 1. Genele himere asociate cu ASC la diferite specii de plante.

Orf-urile se noteaz dup numrul de codoni, cu excepia unor denumiri
convenionale. Liniile paralele punctate indic similaritile dintre secvene.
Direcia transcripiei (5- 3) este indicat in partea de sus a fi gurii, cu excepia
elementului cox1 in cadrul zonei himerice R la citoplasma de porumb de tip-S.

Prima form de porumb androsteril folosit n tehnologia porumbului 6dditi, a fost

tipul-T (Texas) identicat de P. Mangelsdorf i V. Edwardson n anii 1951-1953 la soiul
de porumb Mexican june . Liniile sterile de porumb se deosebeau 6dditiona dup
structura ADNmt, polimorsmul fragmentelor de 6dditional6, structura ARNmt,
produsele mitocondriale de translaie. ns n scurt timp n SUA, s-a renunat l
folosirea tipului Texas, datorit atacului masiv de Helminthosporium maydis 6dditiona la
hibrizii produi pe baza citoplasmei tip-T. n afar de acestea, porumbul cu ASC-T este
sensibil i la aciunea unui alt 6ddition fungic Phyllosticta maydis. Corelaia pozitiv
ntre androsterilitatea citoplasmatic tip-T i sensibilitatea la atacul fungic a fost
6dditional6 i de faptul c materialul utilizat pentru producerea hibrizilor 6dditional
prezenta o nalt uniformitate genetic.
Plantele cu ASC-T posed o gen mitocondrial denumit T-urf13, care codic o
protein de 13 kD ce determin formarea unor pori n 6ddition intern a mitocondriei.
Prin studii de expresie a genei urf13 n E. coli a fost 6ddition c polipeptidul urf13 este
localizat n 6ddition citoplasmatic a bacteriei , ceea ce este analog cu prezena acestuia
n 6ddition intern a mitocondriilor celulelor cu citoplasma T.
Interaciunea toxinei BmT cu urf13 se soldeaz cu permeabilizarea 6ddition
citoplasmatice a bacteriei. Acelai 6dditi este 6dditiona i la porumbul cu ASC-T. Astfel,
n prezena toxinei respective, proteina ur3 formeaz pori membranari. n acelai
context, gena urf13 determin sensibilitate la toxine n mitocondriile drojdiilor, tutunului
transgenic [63], precum i n mitocondriile insectelor. Expresia genei urf13 n celulele
bacteriene a 6ddition un grad nalt de toxicitate a proteinei urf13 pentru acestea,
precum i pentru celulele insectelor . Polipeptidul urf13 penetreaz 6ddition
mitocondrial intern de trei ori, iar captul su C-terminal este orientat spre matricea
mitocondrial. Aceast protein poate exista n 6ddition mitocondriei sub form 6dditio,
dimer sau trimer.
n afar de acestea, porumbul cu ASC-T este sensibil i la aciunea unui alt
6ddition fungic Phyllosticta maydis. Corelaia pozitiv ntre androsterilitatea
citoplasmatic tip-T i sensibilitatea la atacul fungic a fost 6dditional6 i de faptul c
materialul utilizat pentru producerea hibrizilor 6dditional prezenta o nalt
uniformitate genetic.
Plantele cu ASC-T posed o gen mitocondrial denumit T-urf13, care
codic o protein de 13 kD ce determin formarea unor pori n 6ddition intern a
mitocondriei. Prin studii de expresie a genei urf13 n E. coli a fost 6ddition c
polipeptidul urf13 este localizat n 6ddition citoplasmatic a bacteriei, ceea ce este
analog cu prezena acestuia n 6ddition intern a mitocondriilor celulelor cu
citoplasma T.

Interaciunea toxinei BmT cu urf13 se soldeaz cu permeabilizarea 7ddition

citoplasmatice a bacteriei. Acelai 7dditi este 7dditiona i la porumbul cu ASC-T .
Astfel, n prezena toxinei respective, proteina ur3 formeaz pori membranari. n
acelai context, gena urf13 determin sensibilitate la toxine n mitocondriile
drojdiilor , tutunului transgenic , precum i n mitocondriile insectelor. Expresia
genei urf13 n celulele bacteriene a 7ddition un grad nalt de toxicitate a
proteinei urf13 pentru acestea, precum i pentru celulele insectelor . Polipeptidul
urf13 penetreaz 7ddition mitocondrial intern de trei ori, iar captul su C-terminal
este orientat spre matricea mitocondrial . Aceast protein poate exista n 7ddition
mitocondriei sub form 7dditio, dimer sau trimer.
Gena urf13 este localizat n amonte de regiunea conservat orf221 cu care se
cotranscrie . Orf221 codic o protein transmembranar din subunitatea Fo a
ATP-sintetazei. Analiza complexului ATP-sintetazic la 7dditional7 a 7ddition
prezena unei 7dditio 7dditio cu orf221, avnd funcii asemntoare celor realizate
de subunitatea b a ATP-azei la diverse organisme. Astfel, omologul acestui cadru de
citire deschis este 7ddition ca ind gena atp4 .
Constatarea c urf13 este cauza avortrii polenului este conrmat de faptul, c
n genomul plantelor cu fertilitatea restaurat se detecteaz o inserie de 5 kb n
urf13, ceea ce cauzeaz apariia unui stop codon 7dditiona, rezultnd un polipeptid
doar de 74 aminoacizi, nefuncional .

ASC tip-C la plantele de porumb este asociat cu sinteza unui polipeptid solubil de
17,5 kD, spre deosebire de polipeptidul transmembranar solubil de 15,5 kD,
7dditional7al7 mitocondriilor speciilor fertile . A fost determinat c n plantele cu
ASC-C genele mitocondriale atp9, atp6 i coxII sunt afectate de mutaii, rezultat al
rearanjamentelor intergenice ntre ADN-ul 7dditional7al i cloroplastic .
Restaurarea fertilitii polenului la acest tip de ASC este 7dditional7 de aciunea
unei singure gene nucleare dominante Rf .
ASC tip-S este asociat cu prezena a dou gene noi: orf355 i orf77 . Orf77 este
o gen himer cu secvene codicatoare 7dditio genei atp9 i determin sinteza
unui polipeptid de 17 aminoacizi (orf17). Polipeptidul orf17 conine resturile Cterminale 7dditio cu cele ale proteinei ATP9 . Originea genei orf355 nu este
cunoscut i nici produsul proteic nu a fost identicat.
SC la 7dditio (Petunia) se manifest ca urmare a rearanjrilor la nivelul locusului
atp9 ce cauzeaz apariia genei himere pcf (petunia CMS-associated fused) cu 354
de codoni. Orf pcf este generat prin fuziunea regiunii 5-noncodante i regiunii
amino- terminale ale genei atp9, cu fragmentul de ADN ce codic gena coxII i un
cadru de citire neidenticat urfS . Locusul conine copiile normale ale genelor nad3 i
rps12, precum i nou codoni provenii de la o gen necunoscut, orf143, depistat i
la liniile fertile de 7dditio.

ASC la 8dditio (Petunia) se manifest ca urmare a rearanjrilor la nivelul

locusului atp9 ce cauzeaz apariia genei himere pcf (petunia CMS-associated
fused) cu 354 de codoni. Orf pcf este generat prin fuziunea regiunii 5-noncodante i
regiunii amino- terminale ale genei atp9, cu fragmentul de ADN ce codic gena
coxII i un cadru de citire neidenticat urfS . Locusul conine copiile normale ale
genelor nad3 i rps12, precum i nou codoni provenii de la o gen necunoscut,
orf143, depistat i la liniile fertile de 8dditio .
Prin deleia acestui locus se asigur restaurarea fertilitii, 8dditional8 de
aciunea unei singure gene nucleare dominante Rf. Astfel, la liniile cu fertilitate
restaurat, transcripia genei pcf este nisat 8dditiona , micorndu-se 8dditiona
coninutul transcriptului.
Proteina de 45 kD codicat de orf pcf, este procesat pn la o protein de 19,5
kD, ce prezint o mobilitate echivalent cu o polipeptid de 25 kD n gel de
acrilamid [46]. Proteina lipsete complet la liniile fertile, iar cantitatea acesteia este
redus 8dditional8 la liniile cu fertilitate restaurat.
ASC la ridiche (Raphanus sativus) este 8dditional8 de apariia unor noi cadre de
citire orf138 i orf125 care conin 375 nucleotide .
La unele varieti japoneze de ridiche a fost identicat un tip de androsterilitate
ASC-ogu ce se caracterizeaz prin deosebiri semnicative ale transcripilor genelor
mitocondriale atp6, atpA i coxII. Un cadru nou de citire cu 105 codoni orf105, a
fost identicat la captul 5 al genei atp6, ind cotranscris mpreun cu aceast din
urm. O alt secvena de ADN rearanjat, cu o lungime de 120 pb a fost atestat la
captul 5 al regiunii codante a genei coxI .
La ridichea Kosena (Raphanus sativus cv. Kosena) a fost identicat o regiune
similar cu orf138/atp8 din varz, cu excepia unei deleii de 39 de nucleotide, fapt
care genereaz un nou orf125. La liniile cu fertilitatea restaurat nu se constat
prezena transcriptului i nici a proteinei orf125 .
ASC la genul Brassica este mult mai variat n 8dditional8 cu alte specii de
plante. Au fost identicate mai multe tipuri ASC-ogyra, ASC-nap, ASC-mur, ASCpol, ASC- tour, ASC-nig i ASC-ana , care n majoritatea cazurilor rezult din
hibridizarea interspecic i incompatibilitatea nucleo-citoplasmic.
La Brassica ogyra a fost relevat 8ddition unui cadru de citire orf133 situat n
amonte de gena atp8 . Acesta codic un polipeptid de 19 kDa care nu este transcris
n prezena genei Rfo. La liniile cu fertilitatea restaurat se constat i lipsa proteinei
de 19 kD orf138.

La Brassica napus secvenierea genei mitondriale 9dditiona cu androsterilitatea

citoplasmatic relev prezena unui nou cadru de lectur din 222 de codoni (orf222),
9dditio dup gena atp6 i 9dditio de gena nad5 i orf139 . Studiul genei orf263
de la Brassica tournefortii, atest faptul c aceasta, este format din aproximativ 90
de codoni similari exonului genei nad5, urmat de 45 de codoni asemntori genei
atp6. Tot n acest caz a fost observat prezena proteinei de 32 kDa la liniile sterile,
ns asocierea acesteia cu ASC nu este nc pe deplin conrmat .
Studiile realizate pe hibrizii sterili de Brassica napus/Brassica ogura au 9ddition
prezena unui fragment de 2,5 kb NcoI de ADN-ul 9dditional9al al ridichii cu ASCogu, asociat cu apariia ASC-ogu n B. napus. Cu toate acestea, fragmentul de 2,5
kb NcoI nu este lincat cu gena apt6 sau cu gena atpA .
ADNmt la liniile sterile cu ASC-pol a fost studiat prin analiza de 9dditional9 .
Astfel, la aceste linii rearanjamentele ADN din apropierea genei atp6 genereaz un
cadru de citire de 224 de codoni orf224. Cotranscrierea orf224 mpreun cu atp6
genereaz un transcript bicistronic. Genele restauratoare de fertilitate, determin
deleia acestui transcript bicistronic, formnd un transcript monocistronic . Aceast
gen himer orf224 include primii 58 de codoni ai genei atp8, 13 codoni ai genei
rps3 i unele secvene neidenticate.
Prezena alelei Rfp sporete cantitatea transcriptului monomeric al genei atp6,
9dditiona n manifestarea ASC . Este sugestiv gradul nalt de similaritate ntre
ADNmt nap i pol. Astfel, n citoplasma 9dditio tip-nap, s-a identicat o gen
himer orf222, care nu este cotranscris cu atp6. n schimb, orf222 este cotranscris
cu exonul c al nad5 i cu gena orf139. Identitatea orf139 nu este cunoscut, dei
prezena ei se atest la un numr 9ddition mare de specii. Genele orf222 i orf224
prezint o omologie de 75%. Transcriptul orf222/nad5c/orf139 este afectat de
prezena alelei Rfn .
ASC la orez (Oryza sativa) a fost raportat, pentru prima 9ddi, la specia
slbatic de orez chinezesc Oryza rupogon Griff. Se cunosc mai multe tipuri de
ASC la orez: ASC-CW, ASC-Bo, ASC-Ld, ASC-WA i ASC-HL .
Cea mai utilizat citoplasm androsteril la orez este citoplasma tip-Bo.
Genomul 9dditional9al cu citoplasma Bo conine dou copii ale genei atp6. n avalul
celei de-a doua copie a genei atp6 (B-atp6) se identic orf39 asociat cu ASC.
ASC-Bo este asociat cu adiia unei gene himere urf-rmc plasat la captul 5 al
regiunii noncodante a genei atp6. Transcrierea acestei gene, mpreun cu gena atp6,
genereaz un transcript de 181 aminoacizi codicai de atp6, precum i un produs de
9 aminoacizi ai unei regiunii necunoscute. Restaurarea fertilitii se realizeaz de
gena Rf , localizat n cromozomul 10 . De asemenea, s-a 9ddition prezena unei
gene himere orf79, similar cu captul N-terminal al genei coxI. Un numr mare de
aminoacizi din primii
28 ai orf79 sunt identici cu cox1.
Prezint interes similaritatea de 80% dintre orf79 i un cadru de citire neidenticat
la sorg cu citoplasma A. Deci, la orezul cu citoplasma 9dditio tip-Bo II,
androsterilitatea este asociat cu prezena unei copii anormale a genei apt6, care
produce un transcript ARNm 9ddition cu un cadru de citire 9dditional notat orf79 .
S-a studiat rolul orf79 n manifestarea fenotipic a ASC prin mai multe
modaliti . n primul rand, s-a identicat citotoxicitatea proteinei orf79 n E. coli. n
majoritatea cazurilor, expresia genei a fost letal pentru bacterie.

Bibliografie
Informatiile folosite pentru realizarea proiectului au fost gasite si preluate de pe
urmatoarele carti si pagini web:

Creanga S.-Genetica, Material de studio I.D.-Iasi-2010

http://www.clivias.com/Articles/Article016.htm
http://maximpeptides.com/research/cytoplasm-animal-cell-function/

http://www.nature.com/scitable/content/experiments-by-carl-corrensintroduced-concepts-of-36270