Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Curs Biologie Moleculara
Curs Biologie Moleculara
CURS DE
CHIINU 2000
IGOR CEMORTAN
SVETLANA CAPCELEA
LARISA ARANOV
DUMITRU AMOAII
Curs de
BIOLOGIE MOLECULAR
CZU 577.1/2
C 95
Colectivul de autori
Colaboratorii Catedrei de Biologie molecular i Genetic uman USMF N.
Testemianu:
Igor Cemortan confereniar, doctor n tiine biologice
Svetlana Capcelea lector superior, doctor n tiine medicale
Larisa aranov confereniar, doctor n tiine medicale
Dumitru Amoaii confereniar, doctor n tiine medicale
Recenzeni:
Leonid Lsi profesor universitar , doctor habilitat , eful catedrei
de Biochimie, USMF N. Testemianu
Nicolae Eanu - confereniar universitar, doctor n tiine medicale,
eful Catedrei de Histologie i Embriologie, USMF N.
Testemianu
Galina Lupacu doctor habilitat n tiine biologice, eful
Laboratorului de Imunogenetic, AM
Manualul a fost aprobat de Comisia Metodic Central a USMF N.
Testemianu (2 noiembrie 2000). Cursul este elaborat conform Programului
Universitar pentru studenii Facultii de Medicin general USMF N.
Testemianu.
Coordonator tiinific:
Nicolae Barbacaru Confereniar universitar, doctor n tiine biologice,
eful Laboratorului de Biologie molecular, AM
Consultant:
Natalia Cherdivarenco Profesor universitar, doctor habilitat n tiine
medicale, Catedra de Biologie molecular i Genetic uman, USMF N.
Testemianu
Redactor:
Olga Tagadiuc - confereniar universitar, doctor n tiine medicale, Catedra
de Biochimie USMF N. Testemianu
Desene i tehnoredactare computerizat Valeriu Gudima, inginer
III
IV
Cuprins
Cuvnt nainte ............................................................................. 1
SISTEME BIOLOGICE .............................................................. 6
Organizarea sistemelor biologice ........................................... 6
Nivele de organizare a sistemelor biologice ....................... 7
Formele acelulare de via .................................................... 9
Celula unitatea elementar structural-funcional a viului . 12
Metodele de studiu utilizate n cercetarea celulelor ......... 16
Unele realizri importante n biologia celulei ................... 18
Verificarea cunotinelor:....................................................... 20
ORGANIZAREA CHIMIC A MATERIEI VII ..................... 21
Componenta neorganic a organismelor vii .......................... 22
Componenta organic a materiei vii ...................................... 24
ACIZII NUCLEICI ............................................................... 32
Acidul dezoxiribonucleic ....................................................... 32
Acizii ribonucleici .................................................................. 42
Verificarea cunotinelor:....................................................... 45
MEMBRANELE BIOLOGICE ................................................ 46
Organizarea molecular a membranelor ................................ 47
Membrana plasmatic ............................................................ 51
Particularitile membranelor interne .................................... 51
Biogeneza i evoluia membranelor ....................................... 53
Transportul prin plasmalem ................................................. 54
Adeziunea celular ................................................................. 60
Verificarea cunotinelor:....................................................... 62
V
IX
Cuvnt nainte
Cursul de Biologie Molecular ofer studentuluimedic o
nelegere ampl privind funciile celulei n termeni moleculari.
Aceste cunotine vor fi utile i pentru nelegerea mai profund
a coninutului unor discipline tradiionale ca: histologia,
citologia, anatomia, embriologia, fiziologia, genetica i evoluia.
Cursul de Biologie Molecular prezint ntr-un mod
foarte sumar ipotezele privind structura morfologic i
molecular a celulei, organizarea i funciile componentelor
celulare n termeni moleculari i procesele genetice de baz
exprimate la nivel celular. O realizare important a cursului este
i redarea cunotinelor contemporane cu privire la unele aspecte
patologice
ale
celulei
anomaliile
membranelor
***
Cu ocazia tipririi acestei cri avem posibilitatea s le
exprimm gratitudinea noastr tuturor care au contribuit la
realizarea acestui curs.
n primul rnd dorim s mulumim D-lui confereniar,
doctor n tiine biologice Nicolae Brbcaru, eful laboratorului
de Biologie Molecular la Institutul de Genetic a AM, care
ne-a inspirat interesul ctre
SISTEME BIOLOGICE
Sistemul biologic la nivel molecular reprezint un
complex de biopolimeri (acizi nucleici, proteine, lipide, glucide)
ce interacioneaz ntre ei, asigurnd fluxul permanent de
informaie, energie i materie. Programul activitii sistemului
biologic este nscris n macromoleculele de ADN. Realizarea
acestuia se efectueaz prin intermediul diferitor tipuri de
proteine.
Celulele eucariote
Eucariotele reprezint celule nucleate, de regul cu
dimensiuni cuprinse ntre 10-1000 m, care formeaz
organismele monocelulare, coloniale i pluricelulare. Nucleul
conine majoritatea ADN-ului celular i este principalul loc
unde se desfoar sinteza ARN-ului. Citoplasma din jurul
acestuia este format din citosol i organite celulare (reticulul
endoplasmatic, aparatul Golgi, mitocondriile, lizozomii,
peroxizomii) aflate n suspensie (fig. 1.5). Membranele,
organitele sau particulele din interiorul celulei au funcii
speciale, determinate de setul de proteine pe care l conin.
Celulele eucariote se nmulesc prin mitoz i meioz.
Metabolismul, de regul, se caracterizeaz prin respiraie
aerob. Celulele vegetale sunt autotrofe sau mixotrofe, iar cele
animale sunt heterotrofe.
15
16
Microscopia cu polarizare.
Se utilizeaz pentru
studierea structurilor celulare care polarizeaz lumina (de ex.,
fusul de diviziune, miofibrilele).
Microscopia cu fluorescen. Fluorescena este
proprietatea unor compui chimici de a lumina n cazul
absorbiei luminii de o anumit lungime de und. Spectrul
luminii fluorescente este deplasat spre o lungime de und mai
mare. De exemplu, clorofila iluminat cu raze UV, apare de
culoare roie. Pot fi studiai de asemenea i ali pigmeni, ct i
vitamine, hormoni n celulele vii.
Microscopia histocitochimic. Se bazeaz pe fixarea i
colorarea specific a anumitor structuri sau molecule cu
colorani speciali (de ex., fuxina bazic pentru acizii nucleici;
sudanul negru pentru lipide etc.).
Citofotometria. Se efectueaz determinarea cantitii de
substane organice pe baza absorbiei luminii de o anumit
lungime de und specific pentru diferite clase de compui (de
ex., absorbia maxim pentru acizii nucleici = 260 nm;
pentru proteine = 280 nm).
Imunofluorescena.
Permite studierea repartizrii
diferitor substane pe baza reaciilor imunochimice prin
utilizarea anticorpilor marcai cu ageni fluoresceni.
Autoradiografia. Iniial culturile celulare se cresc pe
medii speciale, care conin precursori radioactivi (nucleotide,
aminoacizi). Dup fixare i colorare, preparatele se acoper cu
un strat fin de emulsie fotografic, care permite identificarea
locurilor n care s-a incorporat precursorul radioactiv.
Microscopia electronic cu transmisie. Utilizeaz un
fascicul de electroni n locul luminii. Capacitatea de rezoluie
este de pn la 1, adic poate fi atins o mrire de 106 ori. Ca
obiecte de studiu servesc seciuni ultrafine prin preparatele
fixate i contrastate cu ageni speciali (sruri ale metalelor
grele).
17
18
19
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: sistem biologic, celul, virus, eucariote,
procariote, prion, autoreproducere.
2. Care este obiectul de studiu al biologiei moleculare?
3. Care sunt proprietile fundamentale ale sistemelor
biologice?
4. Care sunt nivelele de organizare a materiei vii?
5. Care sunt metodele de studiu a sistemelor biologice?
6. Care sunt particularitile celulelor eucariote?
20
Elementul
C
O
N
H
P
S
%
50
20
14
8
3
1
Elementul
K
Na
Ca
Mg
Cl
Fe
%
1
1
0,5
0,5
0,5
0,2
Ap
Ioni neorganici
Hidrai de carbon i precursorii lor
Aminoacizi i precursorii lor
Nucleotide i precursorii lor
Acizi grai i precursorii lor
Alte molecule mici
Macromolecule (proteine, acizi
polizaharide)
70
1
1
0,4
0,4
1
0,2
Numrul
tipurilor de
molecule
1
20
250
100
100
50
~ 300
26
~ 3000
% din masa
total a celulei
nucleici,
Hidraii de carbon.
Formula care caracterizeaz toi hidraii de carbon este
Cx(H2O)y, unde x i y pot avea diferite valori mai mari ca 3.
Dup numrul de resturi monomerice hidraii de carbon se
mpart n monozaharide, dizaharide, oligozaharide i
polizaharide.
Monozaharidele. Au formula general (CH2O)n, unde
9n3. n dependen de numrul de atomi de carbon deosebim:
trioze, tetroze, pentoze, hexoze etc.
- Trioze (C3H6O3) gliceraldehida, dihidroxiacetona sunt
compui intermediari importani n cile metabolice de
sintez i scindare.
- Pentoze (C5H10O5) riboza, ribuloza, dezoxiriboza. Riboza
i dezoxiriboza intr n compoziia acizilor nucleici, ATP,
NAD, NADP, FAD, FMN, CoA.
- Hexoze (C6H12O6) glucoza, fructoza, galactoza
reprezint surse importante de energie. Servesc n calitate de
monomeri n sinteza dizaharidelor (2 monomeri),
oligozaharidelor (pn la 10 monomeri) i a polizaharidelor
(peste 10 monomeri).
Dizaharidele. Dizaharidele se formeaz prin reacia de
condensare ntre 2 molecule de monozaharide, mai frecvent 2
hexoze. Legtura dintre monomeri se numete legtur
glicozidic.
Cele mai frecvente dizaharide sunt:
Maltoza (-glucoz + -glucoz)
Zaharoza (-glucoz + -fructoza)
Lactoza (-galactoza + -glucoza)
Polizaharidele. Reprezint molecule formate dintr-un
numr mare de resturi monomerice, unite prin legturi
glicozidice. Cel mai frecvent polizaharide sunt formate din
resturi de glucoz. Funciile principale ale polizaharidelor sunt
cele structurale (celuloza) i de depozitare (glicogen, amidon).
25
Lipidele
Lipidele sunt substanele organice insolubile n ap, dar
solubile n solveni nepolari (cloroform, eter, benzen). Conform
importanei fiziologice lipidele se mpart n: lipide de rezerv i
lipide structurale. Lipidele structurale particip la formarea
membranelor biologice, nveliurilor protectoare. n calitate de
exemple de lipide structurale pot servi sterolii i fosfolipidele, care
au rol major n realizarea ultrastructurii funcionale a celulei.
Funciile lipidelor:
energetic la scindarea 1g lipide se degaj 39,1 kJ;
structural n componena membranelor celulare
(fosfolipidele, colesterolul);
de emulsionare emulgatorii se orienteaz la limita
ap-ulei, stabilizeaz emulsia, mpiedic stratificarea
lor (fosfogliceridele, acizii biliari - emulgatori pentru
acilgliceroli n intestin);
mecanic protejeaz organele de lezri mecanice;
termoizolatoare pstreaz cldura (esutul adipos
subcutanat);
de solveni pentru alte substane de natur lipidic
(acizii biliari pentru vitaminele liposilubile);
hormonal - toi steroizii (hormonii sexuali, hormonii
corticosuprarenali) sunt de natur lipidic;
vitaminic - vitaminele liposolubile (acizii grai
nesaturai: A, D, E, K).
Proteinele
Proteinele sunt principalele molecule funcionale din
celule i sinteza lor este determinat genetic. Aceti compui
organici sunt alctuii din una sau mai multe catene de
aminoacizi, plicaturate i spiralate ntr-o structur spaial,
tridimensional, care le confer funciile lor biologice.
26
Monomerii
moleculelor proteice sunt
aminoacizii.
Fiecare
aminoacid este format
dintr-o regiune constant,
comun
pentru
toi
aminoacizii i o regiune
variabil,
care
se
deosebete la diferii
aminoacizi (fig. 2.1).
Regiunea
constant
conine la rndul su Fig. 2.1. Structura general a
aminoacidului
grupele carboxil i amino
legat la atomul de carbon din poziia . n dependen de
structura regiunii variabile aminoacizii pot fi acizi, bazici sau
neutri. Din cei peste 150 de aminoacizi cunoscui n natur, n
componena proteinelor intr doar 20 -aminoacizi.
28
29
intr
n
componena
tuturor
compartimentelor celulare i extracelulare;
de sprijin, mecanic determin forma i motilitatea
celular (colagenul, tubulina, actina);
imunologic anticorpii (IgA, IgM, IgG) inactiveaz
antigenele;
de dezintoxicare grupele funcionale ale proteinelor
leag metalele grele, alcaloizii (de ex.: albuminele);
31
ACIZII NUCLEICI
Acizii nucleici sunt biopolimeri reprezentai n celule
prin acid dezoxiribonucleic (ADN) i acid ribonucleic (ARN).
n calitate de monomeri servesc nucleotidele. Ambele tipuri de
molecule poart sarcin negativ i migreaz n cmpul electric
spre polul pozitiv. La fel ca i proteinele, acizii nucleici au
cteva nivele de organizare conformaional.
Acidul dezoxiribonucleic
Moleculele
de
ADN
dezoxiribonucleotide (fig. 2.6).
sunt
alctuite
32
din
Fig. 2.9.
35
A
B
Z
ADN
ADN
ADN
Sensul helixului
Dreapta Dreapta Stnga
Numrul de baze n spir
11
10,4
12
Distana dintre baze ()
2,9
3,4
3,7
Diametrul moleculei ()
25,5
23,7
18,4
Incidena cea mai nalt se remarc pentru forma B, care
este constatat n toate celulele (fig. 2.10). Anume forma B de
ADN a determinat modelul
Watson-Crick. Totodat, dup
cum s-a stabilit, n cadrul formei
B mai pot exista unele devieri n
ce
privete
numrul
de
nucleotide per spir i care
poate varia n limitele 10,0
10,6.
Forma mai compact de
tip A este caracteristic n
special pentru moleculele de
ARN. Totodat, s-a constatat c
hibrizii
ADN/ARN,
de
asemenea, se caracterizeaz prin
forma A de conformaie.
Aceasta are o mare importan
37
Parametrii helixului
teriar a
ADN
Acizii ribonucleici
Molecule ARN sunt biopolimeri monocatenari, care
constau din nucleotide unite prin legturi fosfodiesterice 3
5. Spre deosebire de nucleotidele din componena ADN,
monomerii ARN-ului conin n calitate de pentoz riboza, iar
bazele azotate sunt Adenina, Guaniana, Citozina i Uracilul (U),
care substituie Timina din ADN (fig. 2.14). De regul,
42
Fig.
Tipul
celulelor
Procariote
Eucariote
Coeficie
ntul de
sedimen
tare
5S
16S
23S
5S
5,8S
18S
28S
Lungim
ea
(baze)
120
1540
2900
120
160
1900
4700
tipuri de ARNt, sau cel puin 20 tipuri. Fiecare tip de ARNt este
capabil s transporte un singur tip de aminoacid. Structura
secundar a ARN de transport are o configuraie specific,
numit frunz de trifoi, format din trei bucle funcionale, care
se obin datorit secvenelor inversate de nucleotide (fig. 10.3).
ARNsn este reprezentat de secvene de cteva zeci de
nucleotide i intr n componena enzimelor ce catalizeaz
metabolismul acizilor nucleici
(primaza, telomeraza,
splicesomul).
ARN heterogen nuclear este ntlnit doar la eucariote i
reprezint transcripii primari sau produii intermediari ai
processingului.
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: polimer, monomer, structur primar,
structur
secundar,
polipeptid,
nucleotid,
complementaritate, catene antiparalele, heterogenitate,
palindrom, nucleozom, histon, ARNm, ARNr, ARNt.
2. Care sunt constituenii chimici de baz ai materiei vii?
3. Care este rolul biologic al proteinelor?
4. Cum se formeaz structura primar i secundar a ADN?
5. Care este rolul sarcinii negative a acizilor nucleici?
6. Care sunt tipurile conformaionale ale helixului dublu?
7. Care sunt funciile i proprietile moleculelor de ADN?
8. Care este rolul biologic al ARN?
45
MEMBRANELE BIOLOGICE
Celulele ca sisteme biologice sunt delimitate de ambiant
prin membrane semipermeabile. Acestea asigur funciile:
- barier biologic;
- transport selectiv al ionilor i moleculelor;
- recepionarea i transmiterea semnalelor extracelulare i
intercelulare;
- suport pentru enzimele implicate n diferite procese
metabolice;
- compartimentalizare a mediului intern al celulelor eucariote;
- regleaz homeostazia intracelular i intercelular.
Proteinele membranare
Proteinele constituie baza material a funciilor
principale ale membranei: transportul substanelor, cataliza unor
reacii biochimice, recepie. Cantitatea de proteine variaz la
diferite tipuri de celule. Astfel, n teaca de mielin proteinele
constituie 25% din greutate, n plasmalem n medie 50%, n
membrana intern a mitocondriei 75%. Dup localizare se
deosebesc dou categorii de proteine membranare (fig. 3.3):
periferice (extrinseci) - sunt ataate la exteriorul stratului
dublu lipidic, unde interacioneaz n principal cu grupurile
polare ale lipidelor sau altor proteine.
integrale (intrinseci) - ce trec prin stratul lipidic; aceste
proteine penetreaz parial sau total stratul dublu de lipide.
Proteinele care strbat bistratul lipidic de la o fa la alt se
numesc proteine transmembranare. Pot exista proteine cu
mai multe domenii transmembranare. Se consider c i
proteinele au poriuni hidrofile care proemineaz n afara
membranei pentru a contacta cu mediul apos i cu gruprile
polare ale fosfolipidelor. Partea hidrofob se gsete n interiorul
membranei i interacioneaz cu lanurile acizilor grai din
molecula fosfolipidelor.
Citosol
Citoso
l
Fig. 3.4. Structura glicocalixului
50
Membrana plasmatic
Membrana plasmatic
(membrana citoplasmatic,
plasmalema) are grosimea de 6-10 nm, separ celula de mediul
nconjurtor, permite desfurarea schimbului de substane
dintre celul i mediul extern, servete la comunicarea celulei
cu alte celule sau cu mediul nconjurtor.
Membrana plasmatic ndeplinete diverse funcii,
printre care evideniem:
funcia de barier, prin delimitarea mediului intern al celulei
de cel extern;
particip la metabolismul celulei, cataliznd procesul de
transport al substanelor i reglnd proprietile fizicochimice ale celulei (pH, presiune osmotic, potenial electric
etc.);
controleaz fluxul de informaie dintre mediul extern i
celul, prin recepia i transmiterea semnalelor din mediu;
intervine n recunoaterea i adeziunea celular;
funcia de protecie imunologic a celulei i a organismului.
destinaie.
Veziculele endocitare i cele de secreie conin n
cantiti mari proteina clatrina, care faciliteaz procesul de
endocitoz sau, respectiv, exocitoz.
n cadrul organitelor bimembranare membranele intern
i extern se deosebesc att dup compoziia chimic, ct i
funciile exercitate. Funciile membranelor deriv din structur
i compoziie. Astfel, membrana extern a mitocondriilor
conine proteina porina, care asigur transportul unor molecule
mici, inclusiv a unor proteine cu greutate molecular mic.
Membrana intern se caracterizeaz printr-un coninut nalt de
proteine (80%), ce fac parte din lanul transportor de electroni
(succinat-dehidrogenaza, citocromii) i particip la procesul de
sintez a ATP (ATP-sintetaze), ct i lipide specifice, dintre
care se evideniaz cardiolipina (10%)
Anvelopa nuclear
Nucleul este delimitat de citoplasm printr-o membran
dubl, strbtut de pori, numit anvelop nuclear.
52
Citosol
voltaj;
- canale care se deschid ca rspuns la creterea concentraiei
intracelulare a unor ioni.
Transportul activ
Transportul activ - transport contra gradientului
electrochimic, care necesit consum de ATP.
Transportul activ
se efectueaz de proteine
transportatoare integrate n membrana plasmatic.
A) Transportul ionilor - pompa de Na+ i K+ reprezint o
protein-enzim (Na+ - K+ ATP-aza) ce scindeaz ATP n ADP
i fosfat anorganic i necesit Na+ i K+ pentru activitatea sa.
Pentru fiecare molecul de ATP hidrolizat se pompeaz la
exterior 3Na+ i la interior 2K+ (fig. 3.8). Proteina contribuie la
generarea potenialului electric de membran. Pompa de Ca2+
menine concentraia sczut de Ca2+ n citosol fa de
concentraia mai mare a Ca2+ extracelular.
Citosol
57
Uniport
Sinport
Antiport
Cotransport
Fig. 3.9. Tipurile transportului prin membrane
Adeziunea celular
n organismele pluricelulare celulele care ndeplinesc
funcii similare formeaz esuturi, n care, n majoritatea
cazurilor, se stabilesc contacte. Contactul intercelular este
realizat prin intermediul unor structuri specializate numite
jonciuni intercelulare. (fig. 3.10). Jonciunea se realizeaz
cu ajutorul complexului de macromolecule localizat n spaiile
intercelulare numit matrice intercelular.
Jonciunile strnse (jonciuni de ocluzie) se
formeaz prin apropierea puternic a dou membrane vecine.
Reinerea membranelor n apropiere se realizeaz cu ajutorul
unor proteine speciale, care sunt comune pentru ambele
membrane. Ele apar ntre celulele epiteliale ce delimiteaz
lumenul unor caviti (vezica biliar, unele glande endocrine).
Jonciuni de adeziune se ntlnesc, de asemenea,
ntre celulele epiteliale, n apropierea jonciunilor strnse. Astfel
de contacte se menin cu participarea citoscheletului
(filamentelor de actin), distana dintre membranele vecine
pstrndu-se de 15-20 nm.
60
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: plasmalem, glicocalix, receptor, ligand,
transport pasiv, transport activ, endocitoz, exocitoz,
transcitoz, clatrin, jonciune celular.
2. Care sunt funciile membranei plasmatice?
3. Care este structura molecular a membranei plasmatice?
4. Care sunt particularitile organizrii membranelor interne?
5. Care este organizarea molecular i funciile
glicocalixului?
6. Care este importana transportului membranar pentru
activitatea vital a celulelor?
7. Care sunt particularitile transportului pasiv?
8. Care este rolul biologic i particularitile pompei Na+-K+?
9. n ce const evoluia i interaciunea membranelor?
10. n ce const rolul biologic al contactelor celulare?
62
Componenta
Citozolul
Mitocondriile
RE rugos
RE neted i AG
Nucleu
Peroxizomi
Lizozomi
Endozomi
% din volum
54
22
9
6
6
1
1
1
63
Reticulul endoplasmatic
Reticulul endoplasmatic reprezint un sistem complex de
membrane, organizate n canale i cisterne. RE reprezint
aproximativ 10% din volumul celular total.
67
Patologia AG:
boala von Geerke defect genetic enzimatic ce duce la
suprancrcarea celulelor cu glicogen;
sindromul adrenogenital sinteza deficitar a unor steroli;
68
Lizozomii
Lizozomul a fost vizualizat ca organit celular doar prin
microscopia electronic (Cristian de Duve, 1950). El a fost
descris ca o vezicul, limitat de o membran, funcia lui
principal fiind digestia intracitoplasmatic a diverselor
molecule, componente celulare, corpusculi fagocitai. Sub aspect
biochimic, lizozomii au fost prevzui nainte de identificarea lor
morfologic, prin aciunea
hidrolitic pe care o aveau
omogenatele
0.05-0.5 m
obinute
din
celulele hepatice.
Dimensiunea i mEchipament enzimatic
lizozomal:
rimea lizozomului
variaz n limite
Hidrolaze acide:
foarte largi 0,05-0,5
Fosfataze
pH 5
Nucleaze
m, ns nsuirea
Proteaze
comun a acestora
Glicozidaze
+
H
Sulfataze
este
faptul
c
Lipaze
reprezint
depozitul
Citozol
H+
ATP- cu enzimele hidropH
aza
litice acide (enzime
7.2
ATP
ADP
de digestie) (fig.
+Pi lizozomului.
Fig. 4.5. Structura
4.5). n membrana
lizozomului
se
Enzimele lizozomale
gsesc proteine puternic glicozilate, ceea ce o face rezistent la
aciunea hidrolitic a enzimelor din lizozom.
69
Peroxizomii
Peroxizomii au fost identificai prin microscopie
electronic de ctre Rhodin n anul 1954. Organitul are
dimensiuni de 0.5-1m i este nconjurat de o singur membran
cu grosimea de 6 nm. n interior se afl o matrice ce conine
oxidaze (urat-oxidaz, D-aminoacid oxidaz) i catalaza.
71
R' + 2H2O
Reaciile decurg, n deosebi, n celulele hepatice i cele
renale. n absena reaciilor de detoxificare apa oxigenat se
descompune pn la ap i oxigen molecular. n cazul dac
H2O2 nu este descompus de catalaz pot aprea radicali liberi cu
efecte nocive pentru celul.
2H2O2 Catalaza
O2 + 2H2O
Biogeneza peroxizomilor: membrana peroxizomilor
este generat prin rennoirea fosfolipidelor de la RE neted.
Proteinele peroxizomale sunt sintetizate de ribozomii liberi din
citozol. Se presupune, c catalaza are o secven semnal,
orientat spre citozol, ce recunote enzimele peroxizomale
ntegrndu-le n organit. Noii peroxizomi apar prin diviziunea
peroxizomilor preexisteni.
Patologia peroxizomilor:
sindromul Zellweger este cauzat de lipsa peroxizomilor,
ceea ce duce la disfuncii cerebro-hepato-renale, ca rezultat
copii mor pn la vrsta de 1 an;
adrenoleucodistrofii sunt cauzate de diminuarea funciei
peroxisomilor n oxidarea acizilor grai, ceea ce duce la
distrugerea progresiv a substanei albe din creier i a
corticosuprarenalei;
72
Mitocondriile
Mitocondriile sunt prezente n toate celulele eucariote i
sunt responsabile de conversia energiei eliberate din
metabolizarea glucidelor, acizilor grai i aminoacizilor n
legturile macroergice fosfoanhidrice ale ATP. Au lungime de
2-10 m, diametrul de 0.5-1 m i ocup aproximativ 25% din
volumul citoplasmatic. Orientarea i distribuirea lor se
realizeaz prin intermediul asocierii la microtubulii
citoplasmatici.
Structural mitocondriile constau din dou membrane (cu
grosimea de 6 nm fiecare), compartiment periferic (spaiu
intermembranar) i compartimentul central (matricea
mitocondrial) (fig. 4.7).
Membrana extern este alctuit din proteine (50%),
colesterol i fosfolipide. Are un aspect neted i ndeplinete
funcia de filtru ntre citozol i compartimentul periferic.
Proteina porina funcioneaz ca un canal ce permite
transportarea diferitor molecule cu dimensiuni mai mici de
10kD.
73
75
Patologia mitocondriilor.
n cazul defectului genelor mitocondriale boala poate fi transmis
doar pe linie matern. Bolile provocate se refer la miopatii i
neuropatii:
miopatia mitocondrial;
encefalopatia i encefalomiopatia familial;
neuropatia optic ereditar Leber;
sindromul Kearns-Sayre afeciune neuromuscular,
cauzat de alterarea enzimelor lanului respirator.
Citoscheletul
Una din particularitile celulelor eucariote este
capacitatea lor de a-i pstra forma, de a efectua micri
coordonate i direcionate, care se bazeaz pe existena unui
sistem de filamente proteice numit citoschelet.
Funciile principale ale citoscheletului sunt:
determin i menine forma celulei;
76
77
78
B
Fig. 4.10. A. Microfotografia i schema centriolului.
B. Structura corpuscului bazal al flagelului
79
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: organit, endosom, hidrolaz, catalaz,
citoschelet, tubulin, centriol.
2. Care este rolul compartimentalizrii celulare?
3. Care sunt funciile reticulului endoplazmatic?
4. Care sunt particularitile de organizare ale AG?
5. Care sunt etapele sortrii enzimelor lizozomale?
6. Care sunt funciile peroxizomilor?
7. Care sunt procesele metabolice din mitocondrii?
8. Ce roluri ndeplinete citoscheletul n activitatea celulelor?
80
PROCARIOTELE
Celulele procariote se caracterizeaz printr-o
organizare relativ simpl, dar posed toate nsuirile de baz
ale unei celule vii: membran, aparat genetic, aparat enzimatic
pentru sinteza substanelor organice. Membrana plasmatic
formeaz un singur compartiment citoplasmatic, fr o structur
intern bine organizat. Conin un singur cromozom
(nucleoidul), constituit dintr-o singur molecul inelar de
ADN, fr a prezenta un nucleu bine conturat. Din acest motiv
ele au fost denumite procariote. Principalii reprezentani ai
acestei grupe de organisme vii sunt bacteriile i algele cianofite.
Bacteriile sunt procariotele care se ntlnesc cel mai frecvent n
mediul nconjurtor, fiind considerate cele mai mici entiti vii,
autonome, guvernate de informaia coninut n ADN.
n natur se ntlnesc diverse tipuri de bacterii. n dependen de
form se deosebesc:
bacili bacterii n form de bastona (Escherichia coli);
coci bacterii sferice (Micrococcus cerolyticus);
diplococi doi coci ntr-o capsul (Diplococcus pneumoniae provoac
pneumonia);
streptococi iraguri de coci (Streptococcus pyogenes provoac
angina i scarlatina);
stafilococi ciorchine de coci (Staphylococcus aureus provoac boli
ale cilor respiratorii);
spiril - spiral cu flagel (Spirrilum);
81
82
83
Bacteriile Gram-negative
Bacteriile Gramnegative se caracterizeaz prin existena
a dou membrane: membrana plasmatic intern - membrana,
care comunic direct cu citoplasma, i membrana plasmatic
extern cu grosimea de 7.5-10 nm, situat spre exteriorul
celulei. La majoritatea bacteriilor Gramnegative membrana
plasmatic intern este unit covalent de peptidoglican prin
intermediul lipopoproteidelor. La unele bacterii (E. coli),
membrana extern i cea intern comunic n mai multe locuri,
ceea ce provoac ntreruperea continuitii peretelui de murein.
Membrana plasmatic intern la bacteriile Gramnegative are o organizare i funcii similare cu membrana
plasmatic a bacteriilor Gram-pozitive, cu deosebirea c nu
formeaz mezozomi.
n spaiul periplasmatic exist un strat de murein cu
grosimea de 3-10 nm, unit covalent cu membrana plasmatic
extern prin intermediul unor lipoproteide.
Membrana plasmatic extern are o structur asimetric
format de: fosfogliceride i cardiolipine din stratul intern al
acestei membarane i lipidele A (molecule hidrofobe) din stratul
85
Flagelii i pilii
De la suprafaa celulelor bacteriene pornesc nite
excrescene filiforme care pot fi de dou tipuri: pili i flageli.
Unele bacterii posed ambele tipuri de structuri.
Flagelii sunt prezeni de obicei la suprafaa bacililor, mai
rar a cocilor. Ei reprezint nite tubuli cu grosimea de 10-60 nm
formai din 3-11 filamente asamblate din proteina globular
flagelina. Spre deosebire de flagelii celulelor eucariote, flagelii
bacterieni nu sunt acoperii cu membran plasmatic. Ei se
unesc cu plasmalema i peretele celular prin intermediul unor
discuri, care la bacteriile Grampozitive sunt n numr de o
pereche, iar la bacteriile Gramnegative n numr de dou
perechi. Deoarece flagelina nu posed activitate de ATP-az,
flagelii nu sunt capabili s efectueze micri ondulatorii ca la
eucariote. Micarea lor se datoreaz rotirii flagelului n jurul
axei sale. Ca surs de energie pentru micare servete gradientul
H+ de la suprafaa membranei plasmatice. Flagelii posed
proprieti antigenice (antigenul H).
86
n dependen de numrul
urmtoarele tipuri de bacterii:
de flageli
deosebim
Componente intracelulare
Bacteriile nu conin organite celulare membranare aa ca
RE, AG, lizozomii, peroxizomii, mitocondriile. Unele specii
conin membrane fotosintetizatoare i sunt de asemenea,
descrise vezicule umplute cu gaze.
Celulele bacteriene conin ribozomi cu coeficientul de
sedimentare 70S (30S + 50S), responsabili de sinteza
proteinelor. Ribozomii pot fi dispersai n citoplasm sau pot fi
asociai la ARNm n preajma nucleoidului. n citoplasm se mai
pot gsi i substane de rezerv sub form de granule de
glicogen etc.
Numeroase specii bacteriene pot forma endospori
structuri care permit supravieuirea speciei n condiii
nefavorabile. Au fost descoperii spori care au existat n stare
latent peste 25 milioane ani, pstrndu-i capacitatea de
87
90
91
Verificarea cunotinelor
1. Definii noiunile: procariot, murein, nucleoid, plasmid,
conjugare, mezozom, transducie, transformare.
2. Care sunt componentele celulei procariote?
3. Care sunt particularitile nveliului celular la bacterii?
4. Care este caracteristica genomului bacterian?
5. Care sunt tipurile de recombinare genetic la bacterii?
6. Ce rol biologic i medical are recombinarea genetic la
bacterii?
93
NUCLEUL
Nucleul este o structur intracitoplasmatic prezent n
toate celulele eucariote cu excepia hematiilor adulte (fig. 6.1).
Anvelopa nuclear
Anvelopa nuclear este o membran dubl prevzut cu
pori. Membrana extern a nveliului nuclear continu cu RE
rugos, membrana intern e lipsit de ribozomi. n locurile unde
foia intern continu cu cea extern se formeaz porii nucleari,
iar spaiul dintre membrane este numit perinuclear (20-40nm) i
comunic cu RE. Porii reprezint circa 10% din toat suprafaa
nveliului nuclear (la mamifere).
Complexul porului nuclear
Complexul porului este compus din porul propriu-zis de
form octagonal cu un diametru de 60 nm, trei inele (annulus)
cu diametrul de 120 nm. Inelul e format din opt granule proteice
globulare cu diametrul de 15 nm care dau form o octagonal. n
centru e prezent granula central cu rol de diafragm fin, care,
conform unor ipoteze, de fapt reprezint molecule sau particule
n tranziie. Canalul porului are lungimea de 15 nm i diametrul
de 9 nm. Porul nuclear interacioneaz cu matricea nuclear prin
intermediul unor filamente cu diametrul de 4-8 nm, care se
termin cu o extremitate pe inelul intern. (fig. 6.3).
Funcia porilor: prin intermediul lor se realizeaz n
special transportul macromoleculelor din nucleu n citoplasm i
invers:
(i) din citoplasm sunt importate n nucleu proteine ale
matricei nucleare, enzime de sintez a acizilor nucleici,
proteine ce fac parte din componena cromatinei, proteine
ribozomale;
(ii) din nucleu n citoplasm se export precursorii
ribozomilor, particule formate din complexe de ARNm cu
proteine speciale, ARNt.
96
Matricea nuclear
Matricea nuclear este denumirea atribuit scheletului
de natur proteic care nglobeaz cromatina i nucleolii i care
se sprijin pe membrana nuclear. Ea are un rol esenial n
organizarea nucleului i sinteza ADN sau ARN, n medierea
semnalelor hormonale, diviziune i alte funcii nucleare.
Matricea nuclear este compus din dou pri:
matricea nuclear propriu-zis reprezentat de scheletul
sau reeaua proteic i alctuit din proteine stabile cu mas
molecular mare;
fraciunea labil a matricei care este legat lax de reeaua
proteic i conine proteine solubile cu mas molecular
mic, molecule organice mici, substane anorganice i ap.
Cea mai mare parte din proteinele ce intr n alctuirea
matricei nucleare (att n matricea propriu zis, ct i n fracia
labil) este reprezentat de aa-numitele proteine nehistonice, la
care se adaug i enzimele nucleare. Proteinele nehistonice sunt
o familie de proteine foarte heterogene att ca mas molecular,
97
Nucleolul
Nucleolul e prezent la toate celulele eucariote cu
excepia celulelor blastomerilor, n care nu are loc biosinteza
proteinelor proprii (fig. 6.4). El conine trei componeni
principali: ADN - 3%; ARN - 7%; proteine - 90%.
99
Biogeneza ribozomilor
n nucleol are loc sinteza a trei fracii de ARNr (5,8S;
18S; 28S) i stocarea precursorilor ribozomali. De pe ADN se
transcrie un precursor - ARNr 45S, care este procesat n trei
fracii mai mici (28S; 18S; 5,8S). ARNr 5S este sintetizat n
afara nucleolilor. Moleculele de ARNr se asociaz cu proteine
ribozomale sintetizate n citoplasm i importate n nucleu.
Particulele ribonucleoproteice (RNP) sunt transportate n
citoplasm sub form de subuniti ale ribozomilor (40S i 60S).
102
Tipul de
histon
H1
H2A
H2B
H3
H4
Aminoacizii predominani
Lizina
Leucina, lizina
Serina, prolina, lizina
Arginina, conine cistein
Arginina, lizina
Numr
aminoacizi
215
129
125
135
102
Masa
molecular
21500
14000
13775
15320
11280
Funciile histonelor
Proteinele histone stabilizeaz dublul helix de ADN,
inducnd o structur teriar nivel elementar de organizare a
ADN la eucariote. Din punct de vedere funcional ele represeaz
nespecific transcripia, mpiedicnd unirea ARN-polimerazei la
ADN.
Proteinele nonhistone - proteine acide (20%) cu un
coninut mrit de aminoacizi acizi (acid glutamic i acid
aspartic). Sunt heterogene, au o mobilitate mare, ndeplinesc
funcii catalitice n metabolismul ADN-ului i expresia
informaiei genetice (polimeraze, ligaze, topoizomeraze, SAR,
factori de transcripie). O cantitate mare a proteinelor
nonhistonice este prezent n esuturile active, pe cnd histonele
sunt prezente n cantiti egale n esuturile active i inactive.
ARN este prezent n cromatin fiind produsul de sintez de pe
ADN, n special transcripi primari i ARNsn (de ex., ARN din
compoziia primazei, telomerazei, etc.).
105
106
Centromerul mparte cromozomul n dou brae: braul p proximal, mai scurt; braul q - distal, mai lung. Regiunea
centromeric a cromozomului este format din ADN i proteine
speciale. ADN centromeric conine secvene repetitive n
tandem i secvene repetitive dispersate cu localizare
pericentromeric, ce intervin n recunoaterea cromozomilor
omologi la conjugare, meninerea celor dou cromatide surori
pn la sfrit de metafaz i separarea lor n anafaz. La drojdii
centromerul are dimensiuni de ~120 pb (fig. 6.9). La eucariotele
superioare regiunea centromeric are dimensiuni mult mai mari,
de ordinul sutelor de mii de nucleotide.
Telomerii reprezint complexe din ADN i proteine
specializate care formeaz capetele cromozomilor eucariotelor.
La procariote toate moleculele de ADN sunt circulare
ceea ce previne degradarea lor enzimatic. La eucariote ADN
are structur liniar, de aceea pentru a asigura protecia de
exonucleaze i individualitatea cromozomilor (mpiedic
reanrajamentele cromozomice) apare o structur specific din
secvene scurte repetate de ADN (tab. 6.2).
107
Specia
Macronucleul ciliatelor (Tetrahymena)
Minicromozomul la Trypanosoma
Cromozomii drojdiei Saccharomyces
Cromozomii plantelor (Arabidopsis)
Cromozomii umani
Secvena repetat
CCCCAA
CCCTA
C2-3A(CA)1-3
C3TA3
C3TA2
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: por nuclear, organizator nucleolar,
eucromatin, heterocromatin, nucleozom, solenoid, histon,
centromer, telomer, cromatid.
2. Care sunt componenii structurali ai nucleului interfazic?
3. Care sunt particularitile organizrii anvelopei nucleare?
4. Ce rol ndeplinete complexul porului nuclear?
5. Care sunt etapele biogenezei ribozomilor?
6. Care sunt nivelurile de compactizare a cromatinei?
7. Care sunt componenii nucleozomului?
108
Aparatul de replicare
Aparatul de replicare include ADN-matri cu punctul de
origine, nucleozide trifosfai ct i proteine pentru despiralizarea
109
polimerizarea
Organismul
E. coli
S. pombe
D. melanogaster
M. musculus
Homo sapiens
Nr.
de
repliconi
1
500
3500
25000
105-106
Lungime medie,
kb
4200
40
40
150
100-1000
Viteza
pb/min
30000
3600
2600
2200
3000
replicrii,
111
Fig. 7.2.
replicrii
Stabilizarea
monocatenei de ADN
timpul
ADN
polimeraza
Localizarea
Nucleu
Funcia sintetic
Sinteza
primerilor
Funcii
suplimentare
Nucleu
Nucleu
Nucleu
Mitocondrii
Sinteza
ADN
Exonucleaz
Reparaie
Reparaie
Replicare
Exonucleaz
Exonucleaz
113
Mecanismul replicrii
Sinteza ncepe prin despiralizarea catenelor de ADN i
formarea furcii de replicare. Fiecare caten reprezint o matri
pentru catena nou format. Despiralizarea este necesar pentru
expunerea bazelor celor dou catene n aa mod ca noile baze s
le poat recunoate i s formeze perechea complementar.
Sinteza decurge bidirecional: de la fiecare punct de origine se
formeaz dou furci replicative n direcii opuse fa de origine
(fig. 7.8).
Replicarea necesit un complex proteic numit replizom
care recunoatere punctul de origine a acesteia i o iniiaz.
Proteina / proteinele de recunoatere (la drojdii sunt cunoscute
cinci proteine) se leag de ori i iniiaz despiralizarea local a
ADN n situsul DUE.
Complexul multifermentativ, numit replizoma, se mic dea lungul ADN-ului i efectueaz sinteza pe ambele catene ale
furcii. Replicarea ar putea fi vzut ca creterea continu a
celor dou catene de ADN n dublul helix. Este necesar de
accentuat c:
- citirea matriei se efectueaz doar n direcia 3 5;
- sinteza catenei noi se efectueaz doar n direcia 53.
n furca de replicare (fig. 7.4):
114
Etapele replicrii
Iniierea include urmtoarele procese:
ataarea replizomului la punctul de origine al replicrii i
despiralizarea local a helixului ADN de ctre helicaze;
sinteza ARNprimerului o secven scurt de
ribonucleotide de ctre primaz (o enzim cu actrivitate
ARN-polimerazic);
adugarea dezoxiribonucleotidelor complementare matriei
la captul 3 al primerului realizat de ADN polimeraz.
2. Elongarea se caracterizeaz prin alungirea catenelor nou sintetizate nfptuit de ADN-polimeraz, ce se deplaseaz rapid
de-a lungul catenelor de ADN, fcnd posibil sinteza pe
ambele pri ale furcii ntr-un mod coordonat i eficient.
Evenimentele principale sunt:
creterea continu a catenei lider;
1.
116
Modele de replicare
Moleculele circulare ale procariotelor (nucleoidul,
plasmidele) se replic prin mecanismul replicrii de tip . Din
situsul ori pornesc concomitent dou furci replicative, ceea ce
duce la formarea unor structuri asemntoare cu litera greceasc
(teta) (fig. 7.6).
B
Fig. 7.7. A. Replicarea de tip la virusuri.
B. Replicarea de tip D n mitocondrii
120
Reparaia ADN
Procesul de restabilire a leziunilor din moleculele de ADN care
asigur pstrarea intact a materialului genetic de-a lungul mai
multor generaii poart denumirea de reparaie. Acest proces
este caracteristic doar pentru moleculele de ADN i este
determinat de particularitile de structur a acestor molecule:
existena a dou catene complementare i antiparalele.
n structura moleculelor de ADN pot surveni dou tipuri de
schimbri:
Modificri structurale. Se formeaz ca rezultat al
apariiei legturilor covalente nespecifice ntre nucleotidele
aceleai catene sau din catene opuse. De exemplu, razele
ultraviolete (UV) duc la apariia dimerilor timinici legturi
ntre resturile de timin alturate, de pe aceeai caten. Astfel de
schimbri pot mpiedica replicarea i transcripia.
Sistemele reparative principale ntlnite la diferite
organisme sunt:
- reparaia direct se ntlnete foarte rar i const n revenirea
moleculei la starea iniial (de ex., prin aminare UC);
- fotoreactivarea este este larg rspndit n natur i const
n nlturarea dimerilor pirimidinici cu ajutorul unei enzime
dependente de lumin;
- reparaia prin excizie const n recunoaterea de ctre
enzime a fragmentelor denaturate i nlturarea fragmentului
monocatenar defect. Ulterior are loc restabilirea catenei lezate
cu ajutorul ADN-polimerazei, utilizndu-se ca matri catena
intact. ADN-ligaza unete fragmentul nou-sintetizat cu restul
moleculei, restabilind integritatea ei (fig. 7.10);
- reparaia prin recombinare const n excizia fragmentului
defectat, urmat de importarea secvenei corespunztoare
normale dintr-o molecul omoloag de ADN (fig. 7.11).
Dimerul pirimidinic dup recombinare este nlturat prin
mecanismul reparrii prin excizie (fig. 7.10, B);
- reparaia inducibil SOS - sistemul SOS funcioneaz ca
rrspuns la aciunea unor factori de stres. De exemplu, la E.coli
sub aciunea ocului termic sau a apariiei dimerilor pirimidinici
se sintetizeaz abundent proteina RecA-proteaza, cantitatea
creia este reglat de activitatea altei proteine LexA. Proteina
LexA este unit la o secven de ADN numit blocul SOS care
blocheaz sinteza enzimelor de reparaie. RecA-proteaza, fiind
n cantitate mare, hidrolizeaz proteina LexA, fcnd posibil
activarea unor gene ce codific proteinele de reparaie
122
Metilarea ADN
La procariote exist enzime care asigur metilarea
(adugarea grupelor metil CH3) citozinei i adeninei, din care
rezult metilcitozina i metiladenina. Secvenele metilate sunt
rezistente la aciunea unor enzime specifice endonucleaze de
restricie (restrictaze). La bacterii restrictazele digereaz
moleculele strine de ADN, n timp ce ADN-ul propriu care
este metilat nu se hidrolizeaz. La eucariote metilarea bazelor
azotate conduce la inactivarea genelor nefuncionale. Astfel,
regiunile heterocromatice din nucleu conin secvene de ADN
metilat.
123
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: replicare, replicon, replizom, polimeraz,
fragment Okazaki, reparare, metilare.
2. Care sunt principiile ce stau la baza replicrii ADN?
3. Care sunt particularitile replicrii la pro- i eucariote?
4. Ce componeni intervin n procesul replicrii?
5. Care sunt particularitile sintezei catenei lider i catenei
ntrziate?
6. Ce modele de replicare a ADN cunoatei?
7. Cum se replic capetele cromozomilor?
8. Care sunt mecanismele ce intervin n stabilitatea moleculei
de ADN?
9. Care enzime intervin n procesul de reparaie?
10. Care este importana biologic a metilrii moleculelor de
ADN?
126
GENA
Prima ipotez despre structura i funcia materialului
genetic a fost formulat de Gregor Mendel (1865). Pentru a
explica geneza unor caractere fenotipice ereditare i modul lor
de transmitere la descendeni, el a presupus existena unor
factori ereditari. Aceste elemente, care iniial erau pur
ipotetice, au devenit, n timp, structuri reale, materiale. Dup
descoperirea i descrierea cromozomilor (Waldeyer, 1988)
Boveri i n special Sutton (1902) au emis i susinut ipoteza c
factorii ereditari sau genele (dup termenul introdus de Wilhelm
Johansen, 1903) sunt pri din cromozomi. Aceast idee a fost
confirmat de Thomas Hunt Morgan i colaboratorii si (19101925). n felul acesta, gena nceteaz s mai fie o supoziie
logic, abstract, a geniului mendelian i capt un coninut
concret, material. Cercetrile ulterioare au demonstrat natura
chimic a cromozomilor i genelor. n 1944 Oswald Avery i
colaboratorii si au demonstrat c materialul genetic este
reprezentat de molecula de ADN. n 1953 Francis Crick i
James Watson au descoperit organizarea molecular a ADN i
au determinat c succesiunea de baze azotate (A, G, C, T)
reprezint codul genetic. Informaia genetic perpetueaz
datorit replicrii moleculelor de ADN i se realizeaz prin
transcripia ARN i sinteza de proteine.
n concluzie, gena reprezint un fragment din molecula
de ADN care conine informaia genetic despre sinteza unui
127
Funcia genei
Gena deine secvena de nucleotide ce controleaz
sintez diferitor molecule de ARN (ARNm, ARNr, ARNt,
ARNsn)
i
a
diferitor molecule
de
proteine.
Fiecare gen are o
succesiune
specific de baze,
de regul de pe ea
se sintetizeaz un
singur tip de ARN.
Complexitatea structurii i funciei organismelor vii este
determinat de spectrul proteinelor pe care le conine. De aceea,
organismele simple (de ex., bacteriile) conin cteva sute de
gene, iar organismele mai complexe - cteva zeci de mii de
gene. n setul diploid de cromozomi umani se conin circa
125000 de gene diferite.
Genele care codific ARNm, tradus n lanuri
polipeptidice specifice, sunt denumite gene structurale. Pentru
acestea se utilizeaz frecvent termenul de cistron. Genele care
se transcriu independent poart denumirea de uniti
transcripionale
monocistronice
(caracteristice
pentru
eucariote), iar mai multe gene ce se transcriu n comun uniti
transcripionale policistronice (caracteristice procariotelor).
128
130
131
Boxa
Secvena
Poziia
TATA-box
CAAT-box
GC-box
Octamer
TATAAAA
GGCCAATCT
GGGCGG
ATTTGCAT
- 30
- 75
- 90
Fragmentul
de
ADN
acoperit
10 p.n.
22 p.n.
20 p.n.
20 p.n.
Factorii
de
transcripie
corespunztori
TBP
CTF/NF1
SP1
Oct1, Oct2
Secvene codificatoare
S-a demonstrat c la eucariote structura genei este
discontinu. Paradoxul valorii C confirm c din totalul ADNului genomic doar o parte (10-15%) particip la sinteza
proteinelor. Secvenele neinformaionale au rol diferit:
separ genele (spacieri);
se conin n gene, dar nu sunt reprezentate n secvenele de
aminoacizi (introni);
au rol structural propriu-zis (telomeri, centromeri, satelii).
S-a constatat o discordan ntre dimensiune moleculei
de ARNm, cu cea a ARN precursor (transcript primar) i
dimensiunea secvenei de ADN care a servit ca matri pentru
transcripia ARN respectiv. P. Sharp (1977) a emis ipoteza
structurii discontinue, sau n mozaic, a genei la eucariote.
132
Fig. 8.5. Structura exon-intron a genei -globinei i relaia cu structura proteinei corespunztoare
133
134
Fig. 8.7.
Conceptul clasic
Spaiatori ai exonilor
Reziduuri ale evoluiei
ADN
Conceptul contemporan
Codific biopolimeri
Realizeaz autoclivarea ADN
Particip la realizarea expresiei
genelor
135
137
139
Fig. 8.12. Relaia dintre localizarea, structura i funcia genelor n genomul uman
140
Genomul mitocondrial
Genomul mitocondrial este reprezentat de molecule
circulare de ADN cu lungimea de 16.6 kb. n fiecare
mitocondrie se conine un numr variabil de molecule n
dependen de necesitatea energetic a celulei. Aproape toate
nucleotidele aparin secvenelor codante, secvenele ADN cu
funcii reglatoare fiind foarte mici (ADN mitocondrial al
celulelor umane nu conine introni). Toate genele formeaz dou
uniti transcripionale: una pe catena grea cu promotorul HSP i
una pe catena uoar LSP (fig. 8.14). ADN mitocondrial deine
13 gene structurale, dou gene pentru ARNr i 22 gene pentru
ARNt.
Genele structurale codific enzimele implicate n
metabolismul energetic. O gen pentru citocromul b (cit b), trei
gene pentru subunitile 1-3 ale citocrom-c-oxidazei (COI-III),
ase gene pentru subunitile 1-6 i 4L ale NADH
dehidrogenazei (ND 1-6 i ND4L), dou gene pentru
subunitile 6 i 8 ale ATP-sintetazei (A6 i A8) (fig.8.14).
Genele pentru ARNr controleaz sinteza a dou tipuri de
molecule: ARNr 12S i 16S se asociaz cu proteinele importate
din citoplasm la formarea ribosomilor.
ADN mitocondrial codific doar 22 molecule de ARNt.
De regul, ARNt mitocondrial recunoate specific doar primele
dou baze ale codonului din molecula de ARNm. A treia poziie
a codonului poate fi ocupat de o alt baz din aceeai clas
(purinic sau pirimidinic).
Replicarea ADN mitocondrial nu este limitat la faza de
sintez a ciclului celular. Moleculele de ADN se replic
aleatoriu, unele de dou ori, iar altele - nici odat. Totui, n
fiecare ciclu celular, numrul moleculelor de ADN mitocondrial
se dubleaz, meninndu-se constant cantitatea de ADNmt per
celul. Genele mitocondriale se transmit pe linie matern.
141
Transpozonii
Secvenele de ADN capabile s migreze de sine stttor
i ocupa o nou poziie n genom poart denumirea de elemente
genetice migratoare sau transpozoni.
Cei mai simpli
transpozoni au fost depistai la E.coli i constau din gena
transpozaza flancat de elemente repetitive invertate. Ele
formeaz o familie cu denumirea de IS (insertion sequences).
De obicei ele se insereaz n locuri int cu o secven specific
pentru fiecare transpozon (des. 8.15).
143
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: gen, gen structural, cistron, promotor,
exon, intron, operon, transpozon.
2. Care este structura general a genelor?
3. Care sunt funciile secvenelor promotorilor la eucariote?
4. n ce const structura mozaic a genelor?
5. Ce reprezint operonul?
6. Care sunt particularitile genomului mitocondrial?
7. Prin ce se deosebesc transpozonii IS, Tn i
retrotranspozonii?
146
Transcripia este realizat de enzimele numite - ARNpolimeraze. Sinteza ARN pe baza matriei ADN se desfoar
n direcia 5'3' dup principiul complementaritii (A=U;
T=A; GC; CG). Procesul decurge n mai multe etape
(iniierea, elongarea, terminarea) cu participarea mai multor
componente. Transcripia este reglat de secvene de ADN
specifice ale promotorului, terminatorului i alte secvene
modulatoare (enhancer, silencer, operator). Secvenele consens
sunt recunoscute de proteine specifice reglatoare, ce
interacioneaz cu ARN-polimeraza, direcionnd, accelernd
sau ncetinind procesul.
Transcripia la eucariote
n funcie de ARN-polimeraza care realizeaz transcrierea, la
eucariote genele se mpart n trei clase:
Gene de clasa I gene ce codific ARNr 5,8S, 18S, 28S i
sunt transcrise de ARN-polimeraza I. ARN-polimeraza I
reprezint activitatea sintetic cea mai mare - aproximativ
50-70%.
Gene de clasa II gene ce codific sinteza lanurilor
polipeptidice, transcrise de ARN-polimeraza II (gene
structurale). Se apreciaz c 10% din ADN uman este
transcris n ARNm. Enzima mai transcrie cteva gene care
codific molecule mici de ARN nuclear (snRNA= smal
nuclear RNA). Activitatea relativ a ARN-polimerazei II
este egal cu 20-40%.
Gene de clasa III gene ce codific ARNr 5S i ARNt,
transcrise de ARN-polimeraza III. Activitatea relativ a
enzimei respective este egal cu aproximativ 10% din total.
148
153
Processingul ARN
Produsul primar al transcripiei nu poate fi imediat
transportat n citoplasm. n primul rnd, ARNm precursor
conine secvene necodificatoare (introni), n al doilea rnd
poate fi uor scindat de ARN-aze. Pentru a preveni degradarea,
are loc prelucrarea capetelor moleculei, iar intronii sunt
nlturai. Totalitatea reaciilor de modificare a ARNm precursor
poart denumirea de maturizarea ARNm sau processing.
Aceste procese se desfoar n nucleu i sunt catalizate de
154
Splicing-ul
nlturarea intronilor din ARNm precursor i unirea
exonilor are loc n nucleu, cu participarea unui complex
enzimatic denumit splicesom. Componentele acestui complex
sunt reprezentate de moleculele mici de ribonucleoproteide
nucleare (snRNP), notate U1 U6. Intronii sunt recunoscui dup
156
157
158
Editarea ARN
n urma processing-ului n ARNm pot fi adugate,
nlocuite sau nlturate unele nucleotide. Acest fenomen decurge
n nucleu cu participarea unor enzime specifice. Ca rezultat
informaia din molecula de ARNm nu coincide cu cea
corespunztoare din ADN. Procesul de modificare a secvenei
codificatoare din ARNm poart denumirea de editarea ARN.
162
Transcripia la procariote
n capitolul 8 este descris structura i organizarea
molecular a genelor la procariote. Unitatea transcripional este
reprezentat de operon care este format din secvene reglatoare
(promotor/operator, terminator) i secvene codificatoare (gene
structurale) lipsite de introni (fig. 8.9).
La procariote exist o singur ARN-polimeraz care are
aceleai proprieti ca i ARN-polimerazele de la eucariote.
Structural, ARN-polimeraza procariotelor reprezint o
holoenzim format din mai multe subuniti funcionale. Astfel,
ea recunoate promotorul, este responsabil de denaturarea i
renaturarea ADN, catalizeaz polimerizarea ribonucleotidelor.
Moleculele de ARNm sunt policistronice i utilizate imediat ca
matri pentru sinteza proteinelor. Deoarece nu sunt protejate de
CAP, moleculele ARNm degradeaz rapid.
163
Verificarea cunotinelor
1. Definii noiunile: expresia genei, transcripie, promotor,
exon, intron, factor de transcripie, boxa TATA, ARN
polimeraza II, transcript primar, ARN precursor, ARN
mesager, splicing, splicesom, enhancer, silencer, control
pozitiv, control negativ.
2. Care sunt etapele transcripiei genelor structurale?
3. Cum se formeaz complexul de iniiere a transcripiei?
4. Care sunt particularitile activitii ARN polimerazei II?
5. n ce const processingul ARNm-precursor?
6. Care sunt nivelele de control al transcripiei la eucariote?
164
TRANSLAIA
Dup transcripia i transmiterea mesajului genetic din
ADN nuclear n citoplasm, secvena nucleotidelor din ARNm
este convertit ntr-o secven specific de aminoacizi n
protein. Procesul se numete translaie, ntruct limbajul
nucleotidelor este tradus n limbajul celor 20 de aminoacizi ce
alctuiesc proteinele. Catenele polipeptidice sunt sintetizate prin
aranjarea riguroas a aminoacizilor ntr-o anumit ordine,
asigurat de ctre codul genetic un sistem de corespondene
dintr-o anumit secven de trei nucleotide (codon) din ARNm
i fiecare din cei 20 de aminoacizi.
n procesul transcrierii ARNm a preluat mesajul genetic
din molecula de ADN despre succesiunea aminoacizilor din
lanul polipeptidic. Sistemul prin care succesiunea nucleotidelor
din molecula de ADN (sau ARN) determin
ordinea
aminoacizilor n protein poart denumirea de cod genetic.
U
(Phe)
(Phe)
(Leu)
(Leu)
(Leu)
(Leu)
(Leu)
(Leu)
(Ile)
(Ile)
(Ile)
(Met)
(Val)
(Val)
(Val)
(Val)
C
(Ser)
(Ser)
(Ser)
(Ser)
(Pro)
(Pro)
(Pro)
(Pro)
(Thr)
(Thr)
(Thr)
(Thr)
(Ala)
(Ala)
(Ala)
(Ala)
A
(Tyr)
(Tyr)
STOP
STOP
(His)
(His)
(Gln)
(Gln)
(Asn)
(Asn)
(Lys)
(Lys)
(Asp)
(Asp)
(Glu)
(Glu)
G
(Cys)
(Cys)
STOP
(Trp)
(Arg)
(Arg)
(Arg)
(Arg)
(Ser)
(Ser)
(Arg)
(Arg)
(Gly)
(Gly)
(Gly)
(Gly)
U
C
A
G
U
C
A
G
U
C
A
G
U
C
A
G
Aparatul de translaie
Aparatul de sintez a proteinelor este constituit din urmtoarele
componente:
ARNm matri pentru sinteza proteinei;
ribozomi sediu pentru asamblarea polipeptidului;
ARNt translator al codului genetic de pe ARNm;
aminoacilARNt sintetaze adaproti penru aminoacizi
la ARNt corespunztor;
aminoacizi monomerii proteinei;
ATP i GTP surse de energie;
Mg2+, Ca2+ - cofactori ai enzimelor;
factori proteici, catalizatori ai translaiei reglatori
specifici ai procesului de decodificare a codului genetic
i sintezei proteinei.
ARNm la eucariote conine mesajul genetic pentru
sinteza unei molecule proteice, este monocistronic. Se
sintetizeaz i proceseaz n nucleu, apoi se transport n
citoplasm (ARNm este asociat cu proteine specifice,
recunoscute de complexul porului nuclear). Captul 5 este
protejat de CAP, care servete ca semnal de recunoatere pentru
ribozom n iniierea translaiei. CAP-ul este urmat de cteva
zeci de nucleotide netranslate secvena lider care reprezint
situs de legare a ARNm de ribozom (fig. 10.2).
168
170
172
Mecanismul translaiei
Sinteza proteinelor se face prin aezarea secvenial a
aminoacizilor n ordinea impus de mesajul genetic preluat de
ARNm, n procesul sintezei sale pe matri de ADN. Descifrarea
mesajului se face n sensul 5'3' al moleculei de ARNm, deci n
aceeai ordine n care a fost copiat de ARNm n procesul de
transcripie.
Procesul de biosintez a proteinelor decurge n trei etape:
iniierea, elongarea i terminarea. Fiecare etap este controlat
de factori proteici specifici, care difer la procariote i eucariote.
Iniierea include reaciile care preced formarea legturii
peptidice ntre primii doi aminoacizi din protein. Ea necesit
legarea ribozomului la ARNm i formarea complexului de
173
174
177
Reglarea translaiei
Biosinteza proteinelor poate fi activat/inactivat de
diveri factori de natur proteic sau neproteic care
interacioneaz cu componeni aparatului de translaie.
n tab. 10.1 sunt enumerai principalii factori de
translaie la procariote i eucariote, mecanismul lor de aciune la
diferite etape ale iniierii, elongrii i terminrii biosintezei
proteinei.
La procariote este bine studiat mecanismul de aciune i
al altor factori ce pot modula translaia. Spre exemplu sunt
prezentate unele antibiotice i modul lor de blocare a sintezei
proteice la bacterii.
IF-1
IF-2
Initierea
IF-3
eIF-2
eIF-3
eIF-4A
eIF-4B
eIF-5
Elongarea
eIF-6
EF-Tu
EF-Ts
EF-G
eEF-1
Terminarea
eEF-1
eEF-2
RF-1
RF-2
RF-3
???
Procariote
Se unete la subunitatea 30S i stabilizeaz complexul de
iniiere pn la interaciunea cu ali factori proteici
Se unete la ARNt de iniiere i controleaz ptrunderea lui
pe ribozom
Controleaz unirea corect a subunitii 30S la ARNm
Eucariote
Activeaz complexul Met-ARNtmet
Asigur unirea subunitii 40S la CAP-ul ARNm
Recunoate CAP-ul i asigur denaturarea palindroamelor
din secvena lider a ARNm
Asigur stabilitatea moleculei ARNm i previne formarea
buclelor
Este o GTP-az ce asigur unirea subunitii 60S la
complexul de iniiere
Previne legarea prematur a subunitii 60S la subunitatea
40S
Procariote
Mediaz ptrunderea aminoacil-ARNt n situsul A
Asigur hidroliza GTP; regenereaz EF-Tu
Asigur translocarea ribozomului
Eucariote
Asigur unirea aminoacil-ARNt la ribozom; este omologul
EF-Tu
Asigur hidroliza GTP; este omologul EF-Ts
Asigur translocarea ribozomului; este omologul EF-G
Procariote
Recunoate codonii STOP UAA i UAG
Recunoate codonii STOP UGA i UAA
Asigur specificitatea RF-1 i RF-2.
Eucariote
Mecanism asemntor ca la procariote; factorii de terminare
sunt nc puin studiai
179
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: translaie, cod genetic, codon, anticodon,
faz de lectur, situs A, situs P, aminoacil-ARNt-sintetaza.
2. Care sunt proprietile codului genetic?
3. Care sunt componentele aparatului translaional?
4. Prin ce se deosebete procesul de translaie la pro- i
eucariote?
5. Care sunt etapele procesului de biosintez a proteinelor?
6. Care sunt mecanismele de reglare ale sintezei proteice la
eucariote?
181
respective (de ex., ARNm pentru insulin poate fi izolat doar din
celulele ale pancreasului; ARNm pentru globine din celulele
eritroblatilor etc.).
184
Clonarea ADN
Procesul de obinere a unui numr mare de copii a
secvenei ADN de interes cu utilizarea tehnicilor ADN
recombinant poart denumirea de clonare. Procesul poate fi
realizat att in vivo , ct i in vitro (PCR).
186
Fig.
11.3. Clonarea
fragmentelor
de ADN n
n vectori
Moleculele
recombinate
se introduc
gazda plasmidici
de clonare.
Dup un anumit timp, datorit replicrii independente a
vectorului se obin copii numeroase ale genei de interes.
Moleculele recombinate sunt izolate din celula-gazd
purificate, dup care fragmentul de interes se extrage cu
ajutorul aceleai ER.
Clonele ADN obinute pot fi utilizate pentru
determinarea structurii primare, cartarea restrictiv, producerea
sondelor moleculare, analiza funciei genelor corespunztoare,
sinteza proteinelor solicitate (de ex., insulina, somatotropina,
interferonul etc.).
188
Biblioteci de ADN
Coleciile fragmentelor de ADN clonate dintr-o celul,
esut sau organism formeaz biblioteci de ADN. Acestea sunt
utile pentru identificarea genelor solicitate.
Biblioteca genomic
Colecia de clone ce conine cel puin o copie a fiecrei
secvene
de ADN al genomului se numete bibliotec
189
190
Fig. 11.4. Principiul PCR
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: ADN recombinant, clonare, vector de
clonare, enzim de restricie, situs de restricie, ADNc,
bibliotec ADN, fragmente de restricie, sond molecular,
hibridare.
2. Care sunt etapele obinerii genei de interes dintr-o celul?
3. Ce proprieti au enzimele de restricie?
4. Ce vectori de clonare cunoatei? Prin ce se deosebesc?
5. Care sunt etapele obinerii ADNc?
6. Ce importan are clonarea ADN?
7. Care este destinaia bibliotecilor ADN?
8. n ce const hibridarea ADN?
9. n ce scopuri se utilizeaz sondele moleculare?
193
Secvenierea ADN
Analiza secvenei bazelor azotate din structura primar a
ADN poate fi realizat prin dou ci: 1) calea chimic (MaxamGilbert), n care se folosesc reaciile chimice de clivare a ADNului n baze individuale (fig. 12.1), dar fiind o metod
complicat i laborioas, n ultimii ani nu se mai utilizeaz; 2)
calea enzimatic (Sanger) n care ADN-ul este sintetizat in
vitro pe baza matriei ADN studiat, n aa fel nct reacia se
195
Tehnica Southern-blot
Pentru analiza unor gene e necesar s se
determine localizarea specific a situsurilor de
restricie. Aceast informaie e utila pentru compararea
genelor omoloage ale diferitelor specii, analiza
organizrii intronilor, clonarea ntr-un vector a prilor
unei gene. Succesiunea situsurilor de restricie ntr-o
gena poate fi determinat fr a fi necesar clonarea
genei, folosind sonde moleculare (secvene scurte de
ADN monocatenar, marcate radioactiv sau cu ageni
fluoresceni i care sunt complementare secvenei de
interes).
Analiza const din urmtoarele etape:
(1) extragerea ADN genomic cu greutate molecular
mare din celule;
(2) digestia enzimatic a ADN-ului cu diferite ER,
fiecare producnd fragmente de lungime diferit;
(3) separarea fragmentelor de restricie prin
electroforez n gel de agaroz;
(4) denaturarea fragmentelor bicatenare cu o soluie
alcalin;
(5) neutralizarea gelului cu o soluie tampon;
(6) transferul capilar al fragmentelor de ADN pe filtre
de nailon sau nitroceluloz;
(7) hibridarea cu sondele monocatenare radioactive;
(8) autoradiografia pentru vizualizarea hibrizilor
ADN cercetat / ADN sond.
Transferul pe filtru de nitroceluloz se realizeaz prin
tehnica Southern-blot (de la numele inventatorului Edward
Southern) (fig. 12.3).
198
Fig. 12.3. Principiile transferului acizilor nucleici pe filtru i hibridarea cu sonde radioactive
(Southern-blot i Northern-blot)
Tehnica Northern-blot
Metoda Northern-blot const n transferul moleculelor
denaturate de ARN pe filtre de nailon sau nitroceluloz, urmat
de hibridarea cu sonde marcate. Aceast metod este similar
199
Tehnica Western-blot
Aceast metod const n identificarea unei proteine specifice din
amestecul de proteine celulare. Pentru aceasta, proteinele sunt separate prin
electroforez n condiii de denaturare n prezena SDS (Dodecil Sulfat de
Sodiu). Proteinele fracionate dup greutatea molecular sunt transferate pe
filtre de nailon sau nitroceluloz i supuse tratrii cu anticorpi specifici
marcai radioactiv sau fluorescent. Prin aceast metod se poate identifica
prezena/lipsa proteinei, dimensiunile ei, rata de expresie a genei.
Fig. 12.5.
deleiilor
Utilizarea
tehnicii
PCR
pentru
identificarea
201
Hibridarea in situ
Hibridarea in situ reprezint o tehnic molecular , n
care o sond specific marcat poate identifica direct pe
preparatele celulare:
(1) un ARNm ntr-o celul particular sau esut;
(2) o gen pe un anumit cromozom sau fragment de cromozom;
(3) numrul moleculelor de ARNm n dependen de perioada
ontogenetic sau tip tisular;
(4) ADN viral;
(5) deleiile cromozomiale submicroscopice;
(6) genele responsabile de producerea cancerului, localizarea i
nivelul lor de expresie.
Din motiv c sondele marcate radioactiv au unele
dezavantaje (tehnic laborioas, pericol pentru sntate) n
ultimii ani se utilizeaz metoda FISH (Fluorescence In Situ
Hibridization) care utilizeaz sonde fluorescent marcate (fig.
12.6). Metoda FISH este simpl, poate fi aplicat pe preparate
celulare arhivate, este rapid, nu modific morfologia celulelor.
202
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: secvenierea ADN, hibridarea acizilor
nucleici, Southern-blot, Northern-blot, hibridarea in situ,
autoradiografie, primeri, sonde moleculare.
2. Ce tehnici moleculare se utilizeaz pentru studiul acizilor
nucleici?
3. Care sunt aplicaiile practice ale acestor tehnici?
4. Care sunt principiile secvenierii ADN?
5. Care sunt etapele tehnicii Southern-blot?
6. Care sunt avantajele i dezavantajele tehnicii Southern-blot?
7. n ce constau aplicaiile practice ale tehnicii PCR?
203
CICLUL CELULAR
Organismele vii sunt compuse din celule, a cror cretere
i diviziune necesit succesiunea programat a unor evenimente
i procese care formeaz ciclul celular. Unele din aceste procese
sunt continue, ca de exemplu sinteza proteinelor sau a lipidelor.
Altele, de exemplu sinteza ADN, din contra, sunt procese
discontinui i depind de procesul de diviziune celular. Fiecare
ciclu celular cuprinde dou perioade dinamic i calitativ
distincte: interfaza i mitoza (fig.13.1). Se accentueaz c
procesul multiplicrii celulare are la origine replicarea ADNului cromozomial, replicare care are loc n perioada interfazic
S.
204
Interfaza
Interfaza ocup cea mai mare parte din durata ciclului
celular (90%), constituie perioada n care celula desfoar o
susinut activitate biosintetic (sinteza de ADN, ARN,
proteine), asigurnd condiiile necesare realizrii diviziunii
celulare. In cadrul acestei etape au fost descrise trei perioade
distincte:
205
Mitoza i citochineza
Diviziunea celular debuteaz prin diviziunea nuclear
sau mitoza, se ncheie cu diviziunea citoplasmei sau
citochineza.
Mitoza i citochineza ocup o scurt perioad de timp
(10%) din durata desfurrii ciclului celular, numit perioada
mitotic (M). Mitoza, odat declanat, este un proces continuu.
Dar pentru studiu i descriere, a fost mprit n patru etape:
profaza, metafaza, anafaza i telofaza.
Profaza. Se caracterizeaz prin prezena n nucleu a
cromozomilor bicromatidieni (2n=4c). Aceste cromatide, unite
la nivelul centromerului, reprezint imaginea citologic a
procesului chimic de replicare a ADN-ului. Cromozomii se
condenseaz puternic, se ngroa i devin vizibili. Pe ambele
pri ale centromerilor se maturizeaz cte un kinetocor. La
sfritul profazei nucleolul dispare iar membrana nuclear
disociaz. Concomitent se organizeaz aparatul de diviziune:
centriolii se deplaseaz spre polii opui ai celulei, se formeaz
fusul de diviziune prin asamblarea microtubulilor.
206
209
Factorul
de
cretere
epidermal EGF
Factori de cretere de tip
insulinic IGF1, IGF2
Factorul de cretere a
fibroblatilor FGF
Factorul de cretere neuronal
NGF
INTERLEUKINA 2 IL2
INTERLEUKINA 3 IL3
ERITROPOIETINA
Factori de stimulare a
coloniilor granulocitare GCSF
Factori de stimulare a
coloniilor de macrofage
M-CSF
210
212
Apoptoza i senescena
n timpul mbtrnirii (senescenei), s-a observat n
majoritatea organelor o scdere a numrului de celule, ca
rezultat al ncetinirii ritmului de cretere a celulelor i al
eliminrii lor prin apoptoz. Acestea ar putea fi consecine ale
unei deficiene de factori de cretere, a unor anomalii de
218
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: ciclu celular, mitoz, interfaz, kinetocor,
punct de restricie, cicline, factor de cretere, apoptoz.
2. Care sunt perioadele ciclului celular?
3. Ce procese au loc n interfaz?
4. Care este durata ciclului celular?
5. Ce factori controleaz evenimentele din interfaz?
6. Ce factori induc mitoza?
7. Care este rolul biologic al mitozei?
8. Care este soarta celulelor dup diviziune?
9. n ce const rolul biologic al apoptozei?
219
RECOMBINAREA GENETIC
Prin recombinare genetic se definete fenomenul
producerii unor combinaii genetice noi prin rearanjarea,
reasortarea sau redistribuia materialului genetic cuprins n dou
uniti genetice diferite.
Recombinarea genetic este un proces general n natur
i reprezint una din cheile mecanismelor prin care se formeaz
noi indivizi, proces important n selecia natural. Mecanismele
de recombinare genetic sunt diferite la procariote i eucariote.
Recombinarea genomic
Eucariotele superioare se caracterizeaz printr-un
mecanism particular de nmulire nmulire sexuat, la care
particip dou celule specializate - gameii. De regul, gameii
sunt de origine diferit (matern i patern). Contopirea
gameilor haploizi poart denumirea de fecundare, iar celula
rezultat ce conine materialul genetic al ambilor gamei - zigot.
Participarea gameilor (unui organism) la fecundaie este
aleatorie, asigurnd formarea diferitor tipuri de zigoi, ceea ce
reprezint recombinarea genomic.
Fuziunea celor doi gamei haploizi reface setul diploid
de cromozomi, caracteristic speciei. Mitozele succesive ale
zigotului duc la creterea i dezvoltarea organismului
pluricelular. ncepnd cu zigotul toate celulele somatice vor
avea cromozomii n perechi de omologi identici ca morfologie i
structur genic, dar diferii ca origine.
Recombinarea intra- i intercromozomic
La animale formarea gameilor are lor n gonade. Din
celule precursoare (gametogonii), care sunt celule cu set diploid
de cromozomi i sunt identice genetic cu zigotul, se formeaz
gamei haploizi. Procesul de maturizare a gameilor este
reprezentat de meioz. Meioza este un mecanism complex ce
implic desfurarea succesiv a dou diviziuni, care se termin
cu njumtirea setului de cromozomi n celulele fiice. Din
fiecare celul cu un set de 2n (set diploid) cromozomi se
formeaz 4 gamei cu cte 1n (set haploid) de cromozomi
proces invers fecundaiei. Gameii rezultai din meioz sunt
produi ai recombinrii inter- i intracromozomice. Aceste tipuri
de recombinare au loc n diferite etape ale meiozei.
Meioza este precedat de o interfaz premeiotic n care are
lor replicarea ADN. ntre cele dou diviziuni exist o perioad scurt
interkineza n care nu are loc replicarea ADN.
221
225
226
Verificarea cunotinelor:
Definii noiunile: recombinare genetic, complex
sinaptonemal, nodul de recombinare, bivalent, cromozomi
omologi, structura Holliday, heteroduplex.
2. Care este importana biologic a recombinrii genetice?
3. Care sunt tipurile de recombinare genetic la procariote i la
eucariote?
4. Cnd i cum are loc crossing-overul?
5. Care este importana biologic a anafazei I?
6. Care sunt condiiile pentru recombinarea genetic la
bacterii?
1.
229
BIBLIOGARFIE
1. Adams, R.L.P. et al. (Eds) (1986) The Biochemistry of the
Nucleic Acids, 10th revised edn (Chapman & Hall, London).
2. Bayer, M.E. (1968) Areas of adhesion between wall and
membrane in Escherichia coli. J. Gen. Microbiol. 53, 395.
3. Benga G. (1985) Biologia celular i molecular. Dacia,
Cluj-Napoca.
4. Bickmore, W.A. & Sumner, A.T. (1989) Mammalian
chromosome banding. Trends Genet. 5, 144178.
5. Blackburn, E.H. & Szostak, J.W. (1984) The molecular
structure of centromeres and telomeres. A. Rev. Biochem.
53, 163194.
6. Bloom, K & Green, M. (Eds) (1992) Nucleus and gene
expression. Curr. Opinion Cell Biol. 4, 377-567.
7. Brown, T.A. (1990) Gene Cloning, 2nd edn (Chapman &
Hall, London).
8. Burke, D.T. et al. (1987) Cloning of large segments of
exogenous DNA into yeast by means of artificial
chromosome vectors. Science 236, 806812.
9. Clarke, L. (1990) Centromeres of budding and fission yeasts.
Trends Genet. 6, 150-154.
10. Cormack, B.P. & Struhl, K. (1992) The TATA-binding
protein is required for transcription by all three nuclear RNA
polymerases in yeast cells. Cell 69, 685-696.
11. Covic M. (1981) Biologie i genetic medical. Ed.
Didactic i Pedagogic, Bucureti.
12. Darnell, J. et al. (1990) Molecular Cell Biology 2nd edn
(Scientific American Books, San Francisco, CA).
13. Dunderdale, H.J. (1991) Formation and resolution of
recombination intermediates by E. coli RecA and RuvC
proteins. Nature 354, 506-510.
230
28. Laskey, R. & Scott, M.P. (Eds) (1993) Gene expression and
differentiation. Curr. Opinion Genet, Dev. 3.
29. Lewin, B. (1997) Genes VI, Chs 1N7 (Oxford University
Press, Oxford).
30. Marsh, D. (1992) Lipids in membrane structure. Curr.Topics
Struct. Biol. 2, 497-502.
31. Matsumoto H. et al. (1989) A human centromere antigen
(CENP B)interacts with a short specific sequence in alphoid
DNA. J. Cell Biol. 109, 19631973.
32. McGhee, J.D. (1983) Higher order structure of chromatin:
orientation of nucleosomes within the 30tnm chromatin
solenoid is independent of species and spacer length. Cell
33, 831841.
33. Moyzis, R.K. et al. (1988). A highly conserved repetitive
DNA sequence (TTAGGG) present on the telomeres of
human chromosomes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85,
66226626.
34. Murray, A.W. & Hunt, T. (1993) The Cell Cycle: An
Introduction (W.H. Freeman, New York).
35. Murray, A.W. & Kirschner, M.W. (1989) Dominoes and
clocks: the union of two views of cell cycle regulation.
Science 246, 614-621.
36. Nasmyth, K. (1993) Control of the yeast cell cycle by the
Cdc28 protein kinase. Curr. Opinion Cell Biol. 5, 166-179.
37. Neidhardt, F.C. et al. (Eds) (1987) Escherichia coli and
Salmonella typhimurium, Cellular and Molecular Biology
(American Society for Microbiology, Washington, DC).
38. Nikaido, H. & Vaara, M. (1987) In Escherichia coli and
Salmonella typhimurium, Cellular and Molecular Biology,
7-22 (American Society for Microbiology, Washington,
DC).
39. Norbury, C. & Nurse, P. (1992) Animal cell cycles and their
control. Annu. Rev. Biochem. 61, 441-470.
232
234