Aci zii

nucleici

Obiectivele:
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Tipurile de acizi nucleici, funciile i repartizarea lor

n celul.
Constituienii acizilor nucleici; bazele azotate,
pentozele, acidul fosforic.
Nucleozidele i nucleotidele. 3, 5- cAMP
Structura primar, secundar i teriar a acizilor
dezoxiribonucleici Cromatina. Nucleosomul.
Structura acizilor ribonucleici (tRNA, mRNA, rRNA).
Denaturarea i hibridizarea acizilor nucleici.

Acizi nucleici

1.
2.

Acizi nucleici sunt polinucleotide,

alctuite din mononucleotide, unite
prin legturi 3, 5-fosfodiesterice.
ADN - acidul dezoxiribonucleic;
ARN - acidul ribonucleic.

ADN

a.
b.

Localizarea:
97-99% - concentrat n nucleu
1-3% - situat n mitocondrii.
Rolul: pstreaz i transmite
informaia genetic de la ADN
parental la ADN fiic sau ARN.

ARN

1.
2.
3.

Localizarea:
11% - n nucleu
15% -n mitocondrii
50% - n ribosomi
24% - n hialoplasm
Deosebim:i:
ARN mesager
ARN ribozomal
ARN de transport
ARN cromosomial
ARN nuclear

ARN mesager (mARN) constituie 25% din

totalul ARN-lui.
Localizat -n nucleu i citozol.
Prezint copia sectorului de ADN i conine
informaia despre structura catenei
polipeptidice a proteinei.
Rolul:Transmite informaia de la ADN spre
ribozomi, sediul de sintez a proteinei.
ARN ribozomal (rARN) constituie 60% din
totalul ARN-ului.
Localizat- n ribozomii citoplasmei.
Rolul - formeaz scheletul ribozomilor.
Joac un rol auxiliar n procesul de
asamblare a proteinelor.

ARN de transport (tARN) constituie

15% din totalul ARN-lui.
Localizat: n citoplasm, ribosomi,
mitocondrii.
Rolul: particip la activarea i
transportul AA spre ribozomi i
asamblarea lor n polipeptide.
ARN cromosomial activarea genelor
ADN
ARN nuclear formarea scheletelor
particulei proteice care transport
ARN din nucleu n citoplasm

Structura chimic a AN

La hidroliz AN degradeaz n
mononucleotide, care la rndul lor, la
hidroliza complet degradeaz n BA,
pentoze i acid fosforic.
ADN----A; G; C; T+dR+H2PO3
ARN----A; G; C; U+ R+H2PO3

Bazele azotate
a. BA se clasific n :
1.
majore: purinice: A, G i pirimidinice: C,T,U
2.
minore:purinice (2metil A; 1 metilG) i
pirimidinice (5 metil C;5 hidroximetil C)
b. Sunt slab solubile n H2O
c. Prezint fenomenul de tautomerie (forme lactimlactam)
d. Sunt responsabile de informaia genetic
e. BA purinice- au structur plan; cele pirimidiniceaproape plan, puin plat
j. Max capacitii de absorbie n ultraviolet este
ntre 260-280 nm

Bazele purinice

Bazele pirimidinice

Molecular Biology

C1 Nucleic Acid Structure-1

Bases
Bicyclic
Purines
:

Monocyclic
pyrimidine:

Thymine (T) is a 5-methyluracil (U)

Structura BA minore

Molecular Biology

C1 Nucleic Acid Structure-2

Nucleosides

The structures of pentose sugar

Nucleozidul
const dintr-o BA ( purinic sau
Pirimidinic) +
o pentoz (riboza sau dezoxiriboza)
atomul C-1 al pentozei este unit cu N9 al purinei sau N-1 al pirimidinei - leg.
N glicozidic.

n funcie de pentoz: dezoxi i

ribonucleozide
BA purinice +R(dR) --ozin
(adenozin, guanozin
sau dezoxiadenozin, dezoxiguanozin)
BA pirimidinice +R (dR) --- idin
(citidin, timidin, uridin sau dezoxicitidin)

Unite ntre ele prin

legtura N glucozidic

Nucleozidele

Proprietile:
Mai solubile n H2O dect
BA
Mai stabile n soluii
alcaline
Uor se hidrolizeaz la
nclzire cu acid

NUCLEOTIDE - compui alctuii din nucleozide i rest de

acid fosforic
Nucleozid mono-; di-; trifosfafat

Rest al
acidului

Nucleozid

Nucleotide - Rolul
1.
2.

3.
4.

5.

Element structural al AN
Intermediari energetici
(ATP- purttorul energiei
chimice n organism)
Intr n componena Co
Servesc ca activatori ai
unor molecule (UDP-Gl;
CDP-colina)
Servesc ca mesageri
secunzi intracelulari ai
hormonilor (AMPc; GMPc)

Molecular Biology

C1 Nucleic Acid Structure-3

Nucleotides
A nucleotide is a nucleoside with one or more phosphate groups
bound covalently to the 3-, 5, or ( in ribonucleotides only) the 2position. In the case of 5-position, up to three phosphates may be
attached.
Phosphate ester bonds

Deoxyribonucleotides
(containing deoxyribose)

Ribonucleotides
(containing ribose)

Structura chimic

Structura primar a AN

Reprezint secvena
mononucleotidelor n lanul
polinucleotidic liniar, legate ntre ele
prin legturile 3' - 5' fosfodiesterice
Catenele au dou capete:
5 nucleozid tri fosfatul;
3 gr. OH liber

Structura secundar a ADN

1.

2.

Watson i Crick (1953) au

postulat modelul
structural al moleculei de
DNA - dublul helix
(spiral dubl)
Caracteristicile dublei
spirale:
2 lanuri
polidezoxiribonucleotidice se
rsucesc helicoidal n jurul unui
ax comun, formnd o dubl
helice cu orientare spre
dreapta;

Cilindrul ce ncadreaz
dublul helix are d=2nm

Structura secundar a ADN

3. lanurile sunt antiparalele (unul are direcia

53, altul 35)
4. complimentaritatea (A i corespunde T; iar
G-C).
5. Stabilitatea dublului helix este asigurat
att de interaciunile hidrofobe dintre BA,
ct i de legturile de hidrogen ntre BA
(A=T formeaz 2 legturi de hidrogen, iar G
C trei legturi).
6. BA hidrofobe sunt situate n interiorul
spiralei duble i aranjate sub form de
stive, pe cnd complexul pentozofosfat este
situat la exteriorul spiralei duble, bine
interacioneaz cu apa, de aceia molecula
gigant de DNA se dizolva n ap.
7. Spiral este regulat (fiecare spir cuprinde
10 nucleotide). Distana dintre BA
nvecinate este de 0,34 nm, perioada de
identitate (pasul) 3,4 nm.
8. La pH=7 grupele fosfat sunt ionizate, poarta
sarcini negative, deaceia DNA prezint acid
puternic.
9. Dublul helix este de tip plectonemical, dar
nu paranemical

Legitile lui Chargaff

1.
2.

3.

4.

5.
6.
7.
8.
9.

Coninutul adeninei este egal cu al timinei, iar al guaninei

cu al citozinei (A=T, iar G=C)
n orice preparat de DNA independent de specie suma
bazelor purinice este egal cu cea a bazelor pirimidinice
(A+G=T+C)
Preparatele de DNA separate din diferite esuturi a uneia
i aceeia specie de organisme sunt absolut identice
privind componena nucleotidic.
Componena nucleotidic a DNA la aceeai specie nu se
modific odat cu vrst, nu depinde de regimul
alimentar i modificrile mediului.
dac A+T este mai mare dect G+T avem DNA de tip AT
dac G+T este mai mare dect A+T avem DNA de tip GT
t de topire este mai mica cnd predomin perechile A-T
t de topire este mai mare cnd predomin perechile G-C
la eucariote DNA mitocondrial este circular

Exist diferite forme de DNA

care sunt determinate de gradul de
dehidratare a acizilor nucleici: A,B i Z.
Modificrile n dublul helix sunt
dependente de anturajul extern ai
moleculei de DNA.
Dublul helix posed dinamism.

forma A:
conine 11 resturi la o spir,
este rsucit spre dreapta.

forma clasica B:
conine 10 mononucleotide la o spir.
este rsucit spre dreapta.
- 10 nucleotide ocup 34 A (3,4 nm).
- o nucleotid cuprinde 3,4A (0,34 nm).

conformatia Z spre deosebire de A

i B este rsucit spre stnga.
-

Structura teriar

Reprezint superspiralizarea dublului helix la care

particip proteinele histonice i formeaz cromatina
Unitatea structural a cromatinei este nucleosomul
Nucleosomul este un octamer histonic (2H2A;
2H2b; 2H3; 2H4) nfurat de aproximativ de 2 ori
de dublul helix cu o lungime de 146 perechi de
nucleotide.
ntre 2 nucleosmi se conin poriuni de ADN alctuit
din 20-60 perechi de nucleotide asociate cu H1
Lanul polinucleosomic formeaz un superhelix
(solenoid), fiecare spir are 10 nucleosomi,
d=30nm i pasul de 10nm

Compactizarea
cromatinei

DNA

Firul de
cromatin?
~ 1,000

30 nm Solenoid ~40 / 50

Nucleosoma
= ctamer de
histone
H2a, H2b, H3, H4
146 / 200 bp DNA
Compactizare
~10 ori

Cromosoma metafazic/
cromatina interfazic
~ 10,000

Structura secundar i teriar a

ARNm

ARNm fiecrei gene i corespunde

molecula sa de ARNm, de aceea el este
foarte heterogen
Elementul de codificare al ARNm este
tripletul nucleotidic numit codon. Fiecare
codon corespunde unui anumit AA
Structura secundar a ARNm o caten
curbat
Structura teriar se aseamn cu un fir
nfurat pe bobin, rolul creia l
ndeplinete o protein de transport
numit informer

Structura secundar a t-RNA

1.

2.

3.

4.

are infiarea unei "frunze de trifoi" - se formeaz n

urma imperecherii complementare intracatenare a
nucleotidelor anumitor sectoare.
Sectoarele, care nu sunt ncadrate n formarea legturilor
de H formeaz lanuri sau bucle
Sectorul de acceptare (4 nucleotide, 3 din care au
aceeai succesiune- CCA cu hidroxilul 3OH liber la care se
fixeaz grupa COOH al AA.
Bucla anticodonic - format din 7 nucleotide. Conine
un triplet nucleotidic specific pentru fiecare t-RNA numit
anticodon. Anticodonul t-RNA dup principiul
complementarittii se mperecheaz cu codonul respectiv
din RNAm. Interaciunea codon-anticodon determin
ordinea aranjrii aminoacizilor n catena polipeptidic.
Bucla pseudouridilic - const din 7 nucleotide (restul
acidului pseudouridilic este obligatoriu ), particip la
interaciunea cu ribozomii.
Bucla dihidrouridinic - const din 8-12 resturi
nucleotidice ( resturi de dihidrouridin ), interactiuneaz
cu E- aminoacil-RNAt-sintetaza, care contribuie la
recunoaterea de ctre aminoacid a ARN-t specific.

Structura teriar a tRNA

Are forma L
Include 2 segmente de dublu helix
situate perpendicular (fiecare helix10 perechi de baze)
n afara spiralei bazele formeaz
legturi de hidrogen. Interaciuni
apar ntre bazele necomplementare
(A-A; A-C).Multe baze sunt aranjate
n stive (hidrofobe)

Structura teriar a tRNA

Are forma L
Include 2 segmente de dublu helix
situate perpendicular (fiecare helix10 perechi de baze)
n afara spiralei bazele formeaz
legturi de hidrogen. Interaciuni
apar ntre bazele necomplementare
(A-A; A-C).Multe baze sunt aranjate
n stive (hidrofobe)

ARNr

Structura secundar e prezentat

prin sectoare spiralate unite ntre ele
cu ajutorul unei catene curbate
Structura teriar prezint
scheletul ribosomului. Are forma unui
bastona sau ghem pe suprafaa
cruia sunt nfurate proteinele
ribosomului.

Proprietile fizico-chimice ale

acizilor nucleici
- masa molecular mare.
- proprietatile coloidale si osmotice, tipice
pentru toi compuii macromoleculari.
- Proprietile lor hidrofile depind de fosfai.
- viscozitatea i densitatea nalt a soluiilor,
capacitatea de denaturare.
- la pH fiziologic toti AN sunt polianioni (-)

Denaturarea i renaturarea

Denaturarea sub aciunea temperaturii, mediului

PH, substanelor chimice are loc ruperea legturilor
de hidrogen i forelor hidrofobe ce stabilizeaz
structura secundar i teriar a DNA.
La denaturare DNA i pierde proprietile biologice.
Ex. nclzirea DNA-duce la desfacerea spiralei duble
n dou catene ( are loc transformarea spiral ghem).
Degradarea unei jumti de structur de ADN are
loc la temperatura de topire. ADN bogat n C i G au
o t mai nalt dect cele bogate n A i T.
La rcirea treptat catenele din nou se reunesc
dup principiul complementarittii, formnd spirala
dubl nativ. Acest fenomen se numete renaturare
(atunci cnd t e mai mic dect cea de topire) .
La racirea brusc renaturarea nu are loc.
Denaturarea i renaturarea acizilor nucieici este
nsoit de schimbarea activittii lor optice.

Hibridizarea AN

1.
2.
3.

Pe capacitatea de renaturare a AN este bazat

metoda de determinare a gradului de nrudire a
AN, care poart denumirea de hibridizare
molecular.
La baza ei st mperecherea complementar a
sectoarelor unicatenare ale AN cu formarea unui
heteroduplex
Hibridizarea se efectueaz n felul urmtor:
AN se denatureaz separat;
se incubeaz mpreun ambele tipuri de DNA (ori
DNA i RNA).
n condiiile unui grad relativ crescut de
complementaritate a acestora se formeaz
moleculele hibride (DNA-DNA sau DNA-RNA).
Aceste molecule constau din sectoare spiralate i
nespiralate. Cu ct gradul de nrudire este mai
nalt, cu att hibridizarea este mai complect.

Aceast metod a permis

descoperirea particularitilor
structurii primare a DNA. S-a stabilit,
c n componena DNA a animalelor
se afl sectoare cu o succesiune
nucleotidic identic, care de multe
ori se repet. Hibridizarea decurge
foarte repede. Restul DNA este
prezentat printr-o succesiune unical
a nucleotidelor, care nu se dubleaz.

Obiectivele:

Dogma central a geneticii moleculare. Concepia: o

gen - un polipeptid.
Replicarea ADN- mecanismul, substratele, matricea,
enzimele i factori proteici, etapele biosintezei ADN.
Telomeraza. Rolul i structura..
Reparaia ADN.
Transcripia sau biosinteza ARN: matricea, substratele,
enzimele, mecanismul
Trsanscripia invers.
Biosinteza ARN pe matrice de ARN
Modificrile posttranscripionale (processing)
Inhibitorii sintezei acizilor nucleici.
Ingeneria genetic i semnificaia ei practic. Sinteza
anticorpilor

Dogma central a geneticei

moleculare

Postulatul de baz a geneticei moleculare a fost

formulat de Watson i Crick (Meselson, Stahl):
este transmiterea informaiei genetice de la ADN la
protein. Snt ncluse trei procese:
replicarea;
transcripia;
translaia.
Primele dou procese au loc n nucleu, iar al treilea n
citozol.
Procesul de transcripie este reversibil. Enzima care
catalizeaz transcripia invers se numete revertaza
(reverstranscriptaza) i a fost descoperit la oncovirui.
Sinteza ARN-ului pe baza ARN se numete replicarea ARN,
ea are loc la virui, care nu au ADN. Procesul de translaie
este ireversibil i se numete biosinteza proteinei.

Dogma central a geneticii moleculare

DNA

RNA

Protein

Structura genelor- dimensiuni, GS; GR

1.
2.

Gene- poriunile ADN ce conin informaia genetic cu

privire la sinteza unei proteine
Fiecrei gene i corespunde un lan polipeptidic- de aici i
conceptul: o gen un lan polipeptidic
GS- genele ce codeaz polipeptide i ARN. Poriunile GS
ce conin informaie (transductibile) exoni; iar
secvenele ce nu sunt traduse n ARNm introni
GR segmente de ADN, repetabile, relativ mici ce au un
rol reglator.
Rolul lor:
Pot fi semnale ce ne arat nceputul i sfritul GS
Particip n iniierea i terminarea transcripiei GS
Dimensiunile genelor f. variabile. Ex. Proteina ce
conine 350 AA--- 350X3=1050 nucleotide. tiind c BA
sunt localizate la 0,34 nm_---0,34 nm X 1050=357 nm =0,36m

Replicarea
Replicarea transmiterea informaiei genetice de la ADN parental
la ADN fiic.
Caracteristicile:
1.
Se petrece n nucleu
2.
Proces semiconservativ
3.
se desfoar n trei etape : iniiere, elongare, terminare
4.
prezena praimerului este obligatorie
5.
replicarea este cuplat cu desfurarea DNA parental (necesit
energie)
6.
replicarea decurge n ambele direcii cu aceeai vitez.
7.
Pe catena ntrziat se sintetizeaz fragmentele Okazaki.
8.
Este bazat pe mpachetarea complementar a BA
9.
Catena-fiic este antiparalel cu catena parental dar nu
identic dup secvena nucleotidic
10.
Fora motrice a procesului este hidroliza pirofosfatului
11.
angajeaza simultan intregul cromozom .

1.

2.
3.
4.
a.

b.

c.

Matri -Componentele
ADN bicatenar

necesare replicrii:

Substrat: dATP, dTTP, dGTP, dCTP; ATP, GTP, CTP,

UTP
prezena ionilor de Mg, Mn; Zn
Sistemul multienzimatic complex:
Helicaza-desfacerea dublului helix, treptat, pe
poriuni mici. Cele 2 catene rmn separate ca
urmare a interveniei proteinelor de stabilizare
(SSB).
Topoizomerazele I i II nltur supertorsiunile
ADN, rezolv problemele topologice aprute n
cursul desfacerii lui. (I introduce supertorsiuni
negative; II scindeaz o leg. fosfodiesteric pe
una din catene i permite celor 2 catene s se
roteasc una fa de alta)
ARN primaz - sintetizeaz primerul n direcia 5'3 .

d. ADN polimeraza ( ADNp I, II, III)sinteza catenei fiice n direcia 5'3' .

ADN p III:
aciune polimerazic (5'- 3) sintetizeaz n direcia 5- 3' lanul
polidezoxiribonucleotidic, prelund instrucii
de la ADN-matri,
- aciune exonucleazic (3'- 5)
- ADN pII - rol neclar.
ADN pI - posed activitate 5'- 3
exonucleazic, nltur primerul i-l
nlocuiete cu fragmente de ADN
e. ADN ligaza- unete fragmentele Okazaki
de pe catena ntrziat. Catalizeaz
formarea unei legturi fosfat diesterice
ntre 3'-OH a unui fragment de ADN i
extremitatea 5' monofosfat al altuia.

Mecanismul replicrii

a.

3 etape: iniierea, elongarea, terminarea

Originea replicrii este reprezentat de o secven specific
de nucleotide secvena ori.
Replisoma (complex proteic) recunoate punctul de
origine.
Iniierea parcurge dou etape:
Formarea furcii de replicaie- ataarea replisomului la
punctul de origine al replicrii i sub aciunea helicazelor are
loc desfacerea duplexului parental pe anumite poriuni
replicatori (la scindarea leg. de H dintre BA - se utilizeaz
min 2 mol. de ATP). La desfacerea duplexului parental apar
regiuni superhelicoidale, care se regleaz cu ajutorul girazei
(topoizomerazei).
Topoizomeraza efectueaz rupturi monocatenare apoi
sudeaz legtura fosfodiesteric i favorizeaz relaxarea
structurii DNA

b. Sinteza primerului sub aciunea primazei

se sintetizeaz o
poriune mic de ARN
n direcia 5'- 3'.
Primerul este format
din 5-10
ribonucleotide.
Cruparea 3OH e un
iniiator al sintezei de
ADN.

Elongarea

ADN polimeraza III unindu-se la

captul 3' OH al primerului ncepe
sinteza ADN fiic. Reacia decurge
prin atacul nucleofil al grupei 3' OH al
primerului asupra unui dRNTP
complementar catenei de ADN
matri. Se formeaz legtura
fosfodiesteric i se elibereaz PP;
hidroliza PP determin polimerizarea
propriu zis.
Elongarea decurge n direcia 5' 3,
i parcurge cu aceeai vitez pe
ambele catene
Catena de baz se va sintetiza
continuu, iar cea ntrziat discontinuu: va fi format din
fragmente Okazaki (dimensiuni de
1000 2000 nucleotide la procariote
i 150-200 la eucariote).
ADN polimeraza I exclude primerii i
sintetizeaz complementar ADN.
Fragmentele snt unite cu enzima ADN
ligaza (necesit ATP la eucariote i
NAD la procariote).

Terminarea

Terminarea replicrii are loc atunci,

cnd cele dou bifurcaii de replicare
se ntlnesc ntr-o regiune opus
regiunii "ori". Proteinele speciale
semnalizeaz oprirea repilcrii
prevenind aciunea helicazelor.

Replicarea la eucariote
Particulariti:
ADN polimerazele:

- implicat n replicarea ADN nuclear- responsabil de

sinteza catenei ntrziat sinteza primerilor

rspunde de sinteza catenei lider. Ea manifest

aciune exonucleazic

implicat n reparaia ADN

- implicat n replicarea ADN mitocondrial, aciune

exonucleazic

Bifurcaia replicii este de 3000 baze pe minut comparativ

cu 16.000 la procariote

Pe o molecul de ADN exist mai multe origini de

replicare (3X104 - 3X105 separate prin perechi de

baze). n aceste origini multiple de replicare se
organizeaz bifurcaii- ce se deplaseaz biderecional pe
cromosomul eucariot n curs de replicare.
Fragmentele Okazaki 150-200 nucleotide

Telomer Telomeraza

Replicarea capetelor 5 ale

catenelor este incomplet (teoria
lui Olovnicov, 1971), deoarece
dup nlturarea primerului
ultimului fragment Okazaki, ADN p
I nu e e capabil s completeze
aceste goluri. Astfel la fiecare
replicare, capetele ADN se
scurteaz.
Aceasta nu afecteaz informaia
genetic deoarece catenele conin
fragmente repetitive neinformative
telomere.
Telomerele sunt replicate de o E
specific telomeraza
Telomeraza - reprezint o
ribonucleoproteid: ARN i protein
Subunitatea proteic TRT
(telomeraze revers transcriptase)
posed activitate catalitic

Telomeraza fiind o revertaz (ADN

polimeraza ARN dependent)
folosete ca matri propria coenzim
un fragment de ARN.
I etap are loc asocierea
telomerazei la captul 3 al catenei
lider din regiunea telomeric- TTAGGG
II E extinde catena, utiliznd ca
matri ARN telomeric (se repet)
III Catena complementar a ADN
telomeric e sintetizat dup principiul
catenei ntrziate de ADNp

Mecanismul elongrii capetelor

cromozomului la eucariote

Mecanismul elongrii capetelor

cromozomului la eucariote

cromozoma

GGGTTAG 3
AUCCCAAUC 5
Fixarea telomerei TTAGGG
elongarea
GGGTTAGGGTTAG
5
AUCCCAAUC
translocarea

GGGTTAGGGTTAG
5
AUCCCAAUC

Structura i funcia RNA

telomerazice.
Structura primar: la majoritatea
RNA telomerice, regiunea matricial
se afl la deprtarea de 50
nucleotide de la captul 5, i are
urmtoarea succesiune de nucleotide
5-CUAACCCUA-3.
Structura secundar e compus
din 4 bucle i un fragment
unicatenar, ce conine matria pentru
sinteza DNA telomerice.

Inhibitorii telomerazei

oligonucleotidele modificate,
complementare regiunii matrice a RNA
telomerazice. Aa nucleotide specific se
fixeaz de matria RNA telo a omului,
inhibnd activitatea telomerazic in vitro.
In vivo apare problema transportului
inhibitorilor prin membrana celular i
micarea dirijat n nucleul celular.
Ca inhibitori au fost testai i inhibitorii
reverstranscriptazelor azidotimidina,
didezoxiguanozina.

La om telomeraza e activ numai n

celulele embrionale, n epiteliul
intestinului, spermatozoizi i celule
canceroase.

Numrul telomerilor determin

durata vieii fiecrei celule i
condiioneaz reducerea critic a
numrului lor, induce moartea
programat a celulei deci pierderea
motivelor telomerice este cauza
imbtrnirii (telomera conine mii de
motive TTAGGG).
lungimea telomerei este marcherul
biologic al mbtrnirii.

Reparaia ADN

1.
2.
3.
4.

Erorile n timpul replicrii sunt reduse la

minimum datorit DNA polimerazei ce
posed funcie endonucleazic
Tipuri de deteriorri:
Formarea de bree
Modificarea BA
Pierderea de BA
Formarea dimerilor de pirimidin sub
aciunea razelor ultraviolete

Reparaia ADN

Incizia dimerului
sub aciunea
endonucleazelor
Peticirea sub
aciunea ADN
polimerazei I
Excizia
fragmentului lezat
sub aciunea
exonucleazei
Sudarea sub
aciunea ADN ligazei

Reparaia prin
excizia dimerului

Reparaie prin fotoreactivare

Reparaie prin recombinare

Transcripia

biosinteza ARN pe matri de ADN

Particulariti:
Matri - DNA dublu helicoidal (prezena
catenei anticodogene de ADN) (catena+),
Substrat - ribonucleozidtrifosfai (ATP, GTP,
CTP, UTP)
Sinteza are loc n direcia 53
Este asimetric copierea catenei
necodifictoare
Este incomplet are loc copierea doar a
unei poriuni de ADN (transcripton:
promotor, operator, GS, terminator)
Fora motrice a procesului e hidroliza PP
Enzima - ARN polimeraza

ARN polimeraza
este o holoenzim
2.
la procariote - este oligomer din 5 protomeri
(2, , 1 i sigma ).

subunitile centre catalitice;

- fixeaz substratul;

1 se leag de ADN,

- are rol n recunoaterea secvenelor

matriei numit promotor, unde ader enzima
la eucariote:
1.
RNApI sintetizeaza RNA ribozomal (28S si 18S)
2.
RNApII sintetizeaza RNAm
3.
RNApIII sintetizeaza RNAt, RNAr 5S i molecule mai mici
1.

3.
4.
5.

Nu necesit prezena primerului

Nu posed funcie nucleazic, doar polimerazic
ADN polimeraza conine Zn2+ i necesit
prezena n mediu a ionilir de Mg2+, Mn2+

Etapele transcripiei
Sinteza decurge n 3 etape: iniierea, elongarea, terminarea.
Iniierea ncepe n anumite secvene de ADN numite
promotor (P 40 nucleotide).
Pe P deosebim 2 locusuri: de recunoatere (depistat cu
ajutorul sigmei) i locusul de legare lax a ARN
polimerazei. Locusul de recunoatere e situat la o distan
de 25 nucleotide de locusul de legare i 10 nucleotide de la
punctul de iniiere (+1)
Toi P bacterieni au 2 secvene consens situate pe catena
codifictoare:
Caseta Pribnow (-10) 5 TATAAT 3 responsabil de iniierea
denaturrii locale a ADN
Caseta -35
5 TTGACA 3 - la care are loc asocierea
primar a ARN polimerazei
subunitatea recunoate caseta -35 i se leag la ea. E.
alunec de-a lungul ADN i n jurul casetei -10 (Pribnow)
deschide dublul helix formnd complexul deschis de iniiere
ARN p catalizeaz formarea primei leg. fosfodiesterice ntre
nucleotidul +1 i +2 - disociaz, iar E-cor continu sinteza.

Fig. 5.4

Etapele transcripiei

Sinteza decurge n 3 etape: iniierea, elongarea, terminarea.

Iniierea ncepe n anumite secvene de ADN numite promotor (P 40

nucleotide). ARN polimeraza recunoate cu ajutorul sigma
Toi P bacterieni au 2 secvene consens situate pe catena codifictoare:
1. Caseta Pribnow 5 TATAAT 3
2. Caseta 35
5 TTGACA 3
P la eucariote:
1. GC casete GGGCG
2. CAAT casete CCAAT
3. Caseta Hogness TATAT/AT
Primele 2 sunt responsabile de frecvena transcripiei (cnd ncepe), a 3 - implicat n iniiere semnal (unde). Toate sunt responsabile de exacitatea
iniierii
Pe P deosebim 2 locusuri: de recunoatere (depistat cu ajutorul sigmei) i
locusul de legare lax a ARN polimerazei. Locusul de recunoatere e
situat la o distan de 25 nucleotide de locusul de legare i 10 nucleotide de
la punctul de iniiere (+1)

Sigma subunitatea gsete punctul de iniiere i:

1.
Activeaz identificarea secvenelor de RNA
polimeraz
2.
Ia parte la desfacerea dublului helix de ADN
3.
Ia parte la formarea primei legturi
fosfosiesterice
Astfel complexul de iniiere este format, sigma
subunitatea e disociat de la holoenzim i ia
parte la iniierea unui alt ciclu de transcriere.

Elongarea i Terminarea

Elongarea - alunecarea ARN polimerazei pe

matra de ADN sinteza transcriptului (50
nucleotide pe secund) . RNAp nu controleaz
catena sintetizat erorile sunt mai multe fa de
replicare. Pe msur naintrii ARNp are loc
desprinderea ARN de la ADN i refacerea dublului
helix
Terminarea RNAp recunoate secvenele
nucleotidice specifice de pe ADN, ce conin un
numr mare de G, C . Proteina - se asociaz la
E i se mic mpreun cu ea, ns la identificarea
semnalelor de terminare coboar de pe matri i
ncetinete aciunea E,producnd transcriptul cu
folosirea energiei ATP

Transcripia la eucariote
RNA p alctuit din 9-11 subuniti
2.
Folosesc mai multe tipuri de ARN p:
a.
ARN polimeraza I ARNr (18S, 28S, 5,8S; 45S) n nucleoli;
b.
ARN polimeraza II ARNm;
c.
ARN polimeraza III ARNt i ARNr (5S)
d.
ARN polimeraza IV (mitocondrial)- toate tipurile de ARN
mitocondrial
P la eucariote:

GC casete GGGCG (-90)

CAAT casete 5-GGCCAATCT -3 (-75)

Caseta Hogness TATAT/AT (-35)

Primele 2 sunt responsabile de frecvena transcripiei (cnd ncepe),
a 3 - - implicat n iniiere semnal (unde). Toate sunt
responsabile de exacitatea iniierii
Secvenele alctuite din 10-20 nucleotide enhancers i silencers
cresc i scad respectiv V transcrierii; pot fi situate la distane
mari de gena transcris.
1.

Procesingul
Toi precursorii de ARN n nucleu trec etapa de
maturizare posttranscripional. Pe parcursul
procesingului - pre-ARN se transform n ARN
matur.

Procesingul nclude:
1. Modificarea fragmentelor terminale 5 i 3
ale ARN:
a. Cap-area: la captul 5 -este adiionat
guanozina metilat (5- 5 trifosfat - protejarea
mARN de atacul 5-exonucleazelor i pentru
recunoaterea de ctre ribosomi ca semnal de
iniiere);
b. la captul 3 se adaug o secven mare de
poli A (200 A -coad). Ea servete la exportul
moleculelor de ARN din nucleu n citoplasm.

Fig. 5.11

2.Splisingul - excizia intronilor i

sudarea exonilor. Aa numitul splising
are loc n nucleul celulei.
a.ARN nuclear (ARN U) identific secvenele
de baze la jonciunea intron exon,
b. se fixeaz complementar la ele, bucleaz
intronul, astfel apropiind capetele exonilor.
c. Are loc scindarea legturilor
fosfodiesterice dintre exoni i introni,
capetele exonilor sunt juxtapuse, apoi
sudate de RNA ligazele

Fig. 5.13

e.g., Fig. 5.13

Transcripia invers
sinteza ADN pe catena de ARN
Matria ARN
Substrat dRNTP:dATP, dGTP, dCTP, TTP
Enzima revers transcriptaza
Caracteristic viruilor oncogeni
Mecanismul:
a. Revers transcriptaza sintetizeaz pe ARN viral
catena de ADN- hibrid: ADN_ARN
b. Scindarea ARN viral de o nucleaz
c. Autoreplicarea ADN cu formarea unui duplex de
ADN

Codul genetic
Translaia
Reglarea sintezei
proteinei

Obiectivele:

Codul genetic. Proprietile.

Ribozomii - sediul sintezei proteinelor, structura lor.
Procesul de translare (sinteza proteinelor). Modificrile
posttranslaionare ale proteinelor.
Reglarea biosintezei proteinelor. Inducia i represia
enzimelor.
Inhibitorii sintezei proteice.
Polimorfismul proteinelor (variantele hemoglobinei,
enzimelor, grupelor sanguine).
Bolile ereditare i diagnosticul lor biochimic.

Codul genetic

Informaia genetic referitor la

biosinteza proteinelor se transmite cu
ajutorul codului genetic - dicionar
ce traduce secvena nucleotidelor din
ADN n succesiunea AA din lanul
polipeptidic.

Proprietile codului genetic

Este triplet -64 codoni: 3 nonsens:UAG; UGA;
UAA; 61 codific AA corespunztori
este degenerat - unui AA poate s-i corespunda
mai muli codoni (Ex. Arg, Leu, Ser - codificate de
6 codoni; Met- i Trp - un codon). Codonii unui
aminoacid sint sinonime. Specificitatea codonului
e determinat de primele dou litere.
Degenerarea se refer la nivelul nucleotidului 3
din codon sau 1 din anticodon care oscileaza .
nu este ambiguu- acelai triplet nu semnific 2
AA diferii
Are o structur liniar (colinear) o
concordan liniar ntre gen i proteina
codifictoare
Nu se suprapune (excepie- viruii)

1.
2.
3.
4.
5.
6.

Este universal toate veuitoarele utilizeaz acelai

mecanism de traducere (abatere prezint codul
genetic al mitocondriilor);
nu are virgule, semne de punctuatie - ce ar indica
nceputul i sfritul fiecarui codon.
AUG - este codonul de initiere
UAG, UAA,UGA - codoni stop (non sens)
Toi codonii cu U (n pozitia 2) codifica AA hidrofobi
codonii cu A n pozitia -2 codific AA polari
Uracilul n poziia 1 prezint codonul nonsens
dac n anticodon n directia (5'->3') prima baz
nucleotidic e:
a) Citozina sau Adenina, el va citi un singur
codon;
b) Uracilul sau Guanina el va citi 2 codoni;
c) inozina respectiv va citi 3 codoni

Ribozomii
Reprezint sediul de traducere a ARNm i sinteza
proteinelor.
Structura- complexe ribonucleoproteice i sunt formai din
dou subuniti de mrime inegal (mare i mic)
Structura ribozomilor procariotici:
subunitatea 30 S conine ARNr 16S i 21 proteine.
subunitatea 50S ARN r 5S, 23S i 31 proteine.
Sinteza ARNr i formarea subunitilor are loc n citoplasm.
Structura ribosomilor eucariotici:
subunitatea 40S ARNr 18S i 33 proteine.
subunitatea 60S ARN r 5S, 5,8S, 28S i 49 proteine. ARNr
se formeaz n nucleol.
Ribozomul va avea constanta de sedimentare 70S la
procariote si 80S la eucariote.
S este coeficientul de sedimentare Svedberg, care
depinde de forma, densitatea i dimensiunea particulelor.

Centrele catalitice ale ribosomilor

Situsul A - aminoacil responsabil de unirea

complexului aminoacil- ARNt
Situsul P peptidil gzduiete ARNt legat de
un lan polipeptidic deja sintetizat
Situsul E e responsabil de eliminarea ARNt
Procesul de sintez proteic poate fi schiat sumar
prin interaciunea celor 3 tipuri de ARN informaia din ARNm este citit in ribozom si
transpus n proteine, AA necesari fiind adu i de
ARNt.
n starea complet nedisociat ribozomii sunt
activi.
Deplasarea lber a ribozomilor n diferite sectoare
ale celulei, sau combinarea lor n diferite locuri cu
membranele reticulului endoplasmatic ofer
posibilitatea de asamblare a proteinei n celul.

Mai muli ribozomi

pot citi simultan
acela ARN mesager
pe care il parcurg in
acela sens. Se
constituie astfel un
poliribozom,
structur ce permite
accelerarea sintezei
proteice.

Translaia

1.
2.
3.

4.
5.
6.

Translaia sau biosinteza proteinelor propriu

zis.
Bazele moleculare ale translaiei:
m-RNA ca matri genetic, programul creia
determin succesiunea AA n protein;
aminoacil tRNA;
ribozomii ca maini moleculare pentru unirea
succesiv a AA n catena polipeptidic conform
programului mRNA;
GTP ca surs de energie;
factorii proteici care vin n ajutor n diferite
etape ale asamblrii proteinei n ribozomi;
unii ioni ca cofactori (Mg 2+, K+).

Etapele
se realizeaza in 5 etape:
Activarea AA.
Iniierea lanului polipeptidic.
Elongarea lanului polipeptidic.
Terminarea lanului polipeptidic si
eliberarea acestuia.
Prelucrri post traducere ale
proteinei sintetizate.

Activarea AA

1.
2.
3.
4.
a.
b.
c.
d.

e.

are loc n citozol

Sunt necesare:
AA (procariote Nformil-Met; la eucariote Met)
ARNt
ATP, Mg, K
E aminoacil ARNt sintetaza (exist nu mai puin de 20
indentificate 32 de tipuri de ARNt):
Posed 4 centre: pentru AA, ATP, ARNt, H 2O
Specificitatea E e determinat de structura ARNt
Fidelitatea e asigurat de capacitatea de autocontrol
Conine grupri libere sulfhidrilice

sunt ligazele, care au o specificitate absolut.

Activarea AA

Se desfoar n dou etape:

1. NH2-CH-COOH

ATP

PPi

NH2-CH-CO O-AMP
I

R
2. NH2-CH-CO O-AMP+ARNt
I

R
Aminoiacil ARNt
sintetaza

Aminoacil Adenilat

NH2-CH-CO O-RNAt +AMP

I

R
Aminoacil RNAt

I etap - AA reacioneaz cu ATP rezultnd aminoacil-AMP. PP

eliberat este hidrolizat i in acest fel reacia ireversibil.
II etap - complexul cedeaz AA moleculei de ARNt, specific acelui
AA

Activarea AA

Parcurge n 2 etape:

Activarea AA

Esena procesului de activare este

fixarea AA la ARNt propriu acestui AA, n
zona acceptorie la 3' CCA OH (sau 2'
OH) al ribozei restului adenilic

Enzima poate recunoaste daca un AA

gresit s-a fixat pe ARNt, situatie in
care il elimina si il inlocuieste cu AA
corespunzator deoarece prezinta si
un locus hidrolitic.

Activarea AA

Activarea AA consum 2 legturi

macroergice
ARNt pe calea difuziunii simple
transfer AA adiionat la el - la
ribozomi, unde are loc asamblarea
proteinei din AA.

Translaia propriu zis

Citirea ARNm se face n direcia 5- 3'

iar proteina se sintetizeaz de la
captul Nterminal la C terminal
se desting trei etape:
Iniierea
Elongarea
terminarea.

Iniierea

1.
2.
3.
4.
5.

Necesar:
ARNm (AUG)
Ribosomul cu subunitile
disociate
ARNt f-met (Met)
GTP, Mg
IF1, IF2, IF3
Scopul: formarea
complexului de iniiere

Formarea complexului de iniiere:

Subunitatea mic leag IF3 i

previne reasocierea ribosomilor
La subunitate adiioneaz ARNm
(AUG) fixarea codonului e
determinat de un fragment de
pe ARNm compus din 6-8 resturi
de A-G i este complementar cu
succesiunea OH al ARNr
La complex adiioneaz IF1, mai
apoi IF2 legat de GTP i formil
Met-ARNt
ndat cum are loc fixarea
anticodonului fMet-ARNt cu
codonul AUG (ARNm), are loc
hidroliza GTP, eliberarea FI i
unirea subunitilor
Formil Met-ARNt e fixat n
centrul P

FI2
FI3

30S

P
FI1

50S

Elongarea

1.
2.
3.
4.

1.
2.
3.

Necesar:
ARNm cu urmtorul codon
ARNt cu urmtorul AA
GTP
FE: Tu, Ts, G
Elongarea translaiei include trei etape:
Legarea aminoacil ARNt;
Transpeptidarea- formarea legturii peptidice,
Translocarea (deplasarea ARNm cu un codon).

1. Adaptarea (legarea)AA

are loc dup principiul codonanticodon n centrul A

a. Aminoacil-ARNt se fixeaz
cu Tu+GTP adiioneaz la
complexul de iniiere.
b. AA se fixeaz n centrul A.
Simultan are loc hidroliza GTP
n GDP i P
Tu-GDP+GTP-Ts------Tu-GTP

2. Transpeptidarea

este formarea legturii peptidice

ntre doi aminoacizi.
AA din centrul P sub aciunea
peptidiltransferazei trece n centrul A.
Se formeaz dipeptida
n centrul P rmne ARNt liber

3. Translocarea

deplasarea ARNm cu un triplet n

direcia 5- 3' .
Dipeptida din centrul A trece n
centrul P sub aciunea factorului G
(translocazei) i GTP
ARNt din P prsete ribosomul

Elongarea

Decurge n 3 etape :1 fixarea

noului Aminoacil ARNt
complexul: aminoacil-ARNt,
factorul de elongare T (FE-T) i
GTP.

se fixeaz pe situsul A, dup ce

are loc hidroliza GTP la GDP
care se elibereaz mpreun cu
FE-T.

2. formarea legturii peptidice.

Enzima peptidil-transferaza
catalizeaz formarea legturii
peptidice ntre doi AA din situsul
A i P.Peptida rmne ataat
de RNAt de pe situsul A.

translocaia

ribozomul se deplaseaz la
urmtorul codon de pe ARNm i
peptidilARNt trece de pe situsul
A pe P

aceast etap necesit factorul

de elongare G (FE-G) i GTP
(necesar pentru realizarea
modificrilor conformaionale
care deplaseaz ribozomul).

FE-G
30S
P

50S

A
FE-T

E-PT
FE-T

Terminarea

are loc cnd sunt ntlnii codonii UAA, UGA,

UAG i factorii proteici de terminare: R1,
R2, S.
Nici un tRNA nu se poate lega cu codonii
de terminare.
Factorii de terminare:
elibereaz lanul polipeptidic
Elimin ARNt din centrul P
Disocierea ribosomului n subunitile
respective

La formarea unei legturi peptidice

se consum patru legturi
macroergice:
2 n etapa de activare a AA (ATP) i
2 n elongare: legare i translocare GTP.

Prelucrrile posttraducere

1.
2.
3.
4.
5.

Modificarea captului N- i C-terminal; captul N se

acetileaz;
ndeprtarea secvenei semnalizante cu ajutorul unei
peptidaze;
modificarea unor AA:
hidroxilarea enzimatic a Pro, Lyz obinerea
hidroxiprolinei, hidroxilizinei .
Metilarea (Lyz n muchi)
Carboxilarea Glu - -carboxil-glutamatului (protrombin)
oxidarea reziduuriilor de Cis - cistinei;
iodurarea reziduurilor de Tir ale tireoglobulinei.
ataarea unor gr. funcionale: fosfat, glicozil, metalelor
pentru formarea fosfoproteinelor,glicoproteinelor,
metaloproteinelor .a.
Formarea punilor disulfurice
Proteina se autoasambleaz formnd conformaia nativ
structura tridimensional

Inhibitori ai sintezei proteinei

1.

2.

la nivelul replicrii:
Mitomicina mpiedica separarea
catenelor de ADN
Acid nalidixic inhiba ADN giraza

la nivelul transcriptiei:

- Actinomicina D - se fixeaza pe ADN

Rifampicina - inhiba ARN polimeraza

Inhibitorii sintezei proteinei

la nivelul translatiei:
Streptomicina inhiba legarea ARNt initiator la
subunitatea 30S
Cloramfenicol -inhiba peptidil transferaza
Tetraciclina - inhiba legarea ARNt la ribozomi
Eritromicina,Azitromicina blocheaza subunitatea
50S
Puromicina blocheaza elongarea inhibnd
competitiv ARNt
Streptomicina - interfer cu legarea formil-MetARNt la locul de iniiere.
Neomicina, Kanamicin - erori n reproducerea
codului genetic
Toxina difteric - inhib translocaza

Reglarea sintezei proteinelor

1.
2.

3.

Sinteza proteinelor nu e constant ea trebuie

s se adapteze cerinelor vitale
Celulel dispun de 3 tipuri de enzime :
Constitutive - se sintetizeaz n celul cu o vitez
constant.
Inductible - sunt E a cror concentraie depinde
de prezena sau absena din mediu a unui
compus denumit inductor. Sunt implicate n cile
catabolice,
Represible - sunt E a cror concentraie depinde
de prezena sau absena din mediu a unui
compus denumit corepresor. Sunt implicate n
cile anabolice.
n mod normal cantitatea de E inductibile n
celule este foarte mic,dar ea poate crete atunci
cnd apare necesitatea utilizrii substratului E
respective ( S care se comport ca inductor).

Teoria lac-operonului

Schema reglrii biosintezei proteinei la procariote a fost descris n 1961

de ctre Jacob i Monod - poart denumirea de teoria lac-operonului .
Modelul e bazat pe studiul reglrii mtabolismului lactozei n Escheria coli.
Exprimarea GS (conin informaia cu privire la biosinteza E impicate n
utilizarea lactozei:-galactozidaza, permeaza i transacetilaza 1,2,3) e
controlat de un fragment de ADN denumit gen reglatoare (GR) codific represorul (R). R se leag de un fragment de ADN denumit
operator (O).
Legarea R la O blocheaz accesul ARN polimerazei la promotor avnd ca
rezultat suprimarea transcrierii GS.

Ce se ntmpl dac bacteria dispune

simultan de glucoz i lactoz?
Bacteria nu consum energie pentru
sinteza lac-operonului, atta timp ct
dispune de glucoz.
Bacteria crete pe seama glucozei - i
numai atunci cnd c% acesteea devine
minim ncepe s utilizeze lactoza.
Metabolizarea simultan a glucozei i
lactozei sunt excluse.
Cum se comut activitatea bacteriei pe
utilizarea lactozei cnd c% glucozei
scade?

Bacteria are ca surs glucoza

Reglarea sintezei proteinei prin inducie

n prezena lactozei:
Inductorul (n acest caz lactoza) se leag specific la R, ca
urmare are loc desprinderea acestuia de la operator. n
aceast situaie, ARN p se leag la promotor, iniiind
transcrierea GS, adc a ARNm care codific E implicate n
catabolismul lactozei.

Bacteria are ca surs lactoza

n lipsa glucozei se mrete c% AMPc ce reprezint semnalul

foamei la bacterii.
Ca urmare, AMPc se leag de o protein receptoare specific
(proteina activatoare a genei catabolice CAP) - formeaz
complex (CAP- AMPc), apt s se lege de promotor (p-locus)
Acest proces favorizeaz ptrunderea ARNp n locusul de
reglare. Dac lactoza este prezent n mediu, operatorul este
liber i ARNp efectueaz transcrierea genelor lac.
CAP dispune de 2 centre: pentru AMPc i pentru ADN

Reglarea lac-operonului ntr-un mediu

ce conine glucoz

Cu ct c% glucozei e mai mare, c%AMPc

e mai mic. Lipsete i complexul CAPAMPc. n final ARNp nu se leag de P i GS
nu sunt transcrise, indiferent dac exist
sau nu lactoz, indiferent de faptul dac
operatorul este sau nu ocupat de R.

Ilustrarea mecanismului de reglare a

sintezei proteinei prin represie
Teoria operonului explic i represia
prin produs final al biosintezei E
Ex: sinteza His: la c% mari de His
(corepresor) se leag de R,
modificndu-i conformaia
activndu-l n rezultat favorizeaz
legarea R la O.
His produs final, CoR- sisteaz
transcrierea genelor ce codific E
implicate n propria sa sintez

Ilustrarea mecanismului de reglare

a sintezei proteinei prin represie

REZUMM:

GR controleaz exprimarea anumitor GS prin

intermediul unei proteine R
Ra suprim sinteza de ARNm, deci de proteine;
R inactivat permite transcrierea GS i sinteza
proteinei
E inductibile Ra nu are loc transcrierea. Cnd
n mediul apare I R se inactiveaz are loc
sinteza ARNm- proteinei
E represibile R este inactiv are loc transcripia
i translaia. Cnd n mediu se acumuleaz
produsul final al cii anabolice (CoR)- R se
activeaz, formarea complexului R-CoR i
sistarea transcripiei i translaiei.

Reglarea sintezei la eucariote

Att la nivelul transcripiei ct i la nivelul

translaiei
Reglarea hormonal (cortizol- sinteza E
gluconeogenezei; estrogenii, androgenii, vitamina
D sintez de proteine specifice)
Reglarea exspresiei genetice prin moleculele
proteice legate de ADN (histonele) sinteza ARN
pe ADN e inhibat prin adaosul de histone
Reglarea proteinei la nivelul translaiei e
posibil prin aciunea factorilor proteici, care
contribuie iniierea, elongarea, terminarea.

Ingineria genetic

tiinta, preocupat de crearea noilor fenotipuri

prin transplantarea genei unui organism n
genomul altuia n scop de a lichida defectele
ereditare ale genomului, adic tratarea
afectiunilor ereditare (gena ntrodus nu gureaz
n patrimoniul ereditar al genomului -gazd)
Se obtin molecule hibride (himerice)
n linii marl procedura include etapele:
1. Cptarea genei
2. Cptarea ADN-ului recombinat
3.Clonarea ADN-ului recombinat
Cptarea genei:Stiind structura primar a proteinei n
laborator se poate obline gena respectiv (se oblin gen e
pn la 250 codoane)- mai greu e obtinerea genei din
genomul celulei (genele se despart prin introni)- mai
uor e cptarea genelor din virusuri cu enzima
revertaza.

Cptarea ADN-ului recombinat

gena necesar se ntroduce n celul pentru a se integra cu

genomul acestuia. Pentru aceastan vitro gena se unete cu ADNvector(plasmide ce conin ADN inelar (cteva gene).
De regul se folosete E Coli, ce contine un cromozom i plasmide,
ce plutesc n citozol (plasmida este de 1000 ori mai mica dect
cromozomul).
Plasmidele
se replica independent de
replicarea materialului genetic. Unele plasmide se pot include n
cromozom i apoi din nou s-l prseasc. Plasmidele pot trece
dintr-o celul n alta n procesul deconjugare. Plasmidele se separ
din E.Coli i li se nltur o parte de ADN inelar cu
ajutorulenzimelor restrictaze, care recunosc i taiediferite sectoare.
Folosind restrictaze diferite se poate de tiat ADN n locusurile
necesare. Inrezultat se formeaz capete lipicioase
(sectoaremonocatenare, capabile de a uni nucleotide
complimentare. La fel se procedeaz i cu gena,care trebuie
ntrodus (se formeaz capete lipicioase complimentare capetelor
plasmidei). Dac se amestec gena i plasmida ele se vor uni cu
capetele lipicioase. Enzima ligaza va uni capetele i se va cpta
molecula ADN inelara, care contine gena menit pentru
transplantare.

3.Clonarea

ADN-ului recombinat- obtinerea cantitilor dorite

de protein codificat de gena eucariot ntrodus
n plasmid. Dac n cultura E.Coli se ntroduc
plasmide recombinate, se formeaz bacterii
recombinate. In celul plasmidele se replic.
Bacteriile nmulindu-se formeaz celule, care
conin aceste plasmide. Acum din masa
bacterian se poate de capatat cantitti
sufuciente de ADN recombine

Ranadamentul sintezei bacteriene este

impresionabil: Ex- 100 celule E.Coli produc
prin clonare 5 mg somatostatin (cantitate, ce
se obine prin prelucrarea a 100 tone de creier
de bovine). Prin tehnica ingineriei genetice sau obtinut cantiti mari de insulin
(Humulun), Interferon, vaccine.
Diversitatea formelor n Iimita uneia i
aceai specie se datorete mutaiilor i
ntr-o msura mai mare recombinrii
genetice.

Mutaiile.

Modificrile genomului organismului, care se

pstreaz i se transmit prin ereditate
se transmit apoi de la o generaie la alta.
Modificrile pot interesa o pereche de baze
(mutatii punctiforme) sau un grup de baze pe una
sau pe ambele catene ale unei molecule de DNA.

Mutatiile punctiforme: pot decurge prin:

l. substitutie (misens mutatii, unde deosebim 2 tipuri):
a. Tranzitie - o BA purinic este nlocuit
tot cu una purinc, una pirimidinic -tot cu una pirimidinic.
b.Transversie - o pereche de baze purinice
este nlocuit cu una pirimidinic sau invers.
2. Inserie - acest
mecanism
const n ntroducerea unei
perechi de baze suplimentare n catena de DNA.
3. Deleia const n excluderea unei perechi de baze n aa mod ca
ea nu mai poate f complementar i la replicare apare "golul" n
ambele catene. Unele modificri n secventa nucleotidic pot duce
la formarea codonului sinonim i succesiunea aminoacizilor nu se
va schimba (mutatii benigne).
La afectarea segmentelor mari de gen apar mutatii ntinse. In
dependent de consecinele modificrilor deosebim mutaie
benign, neutr, nociv.
Agenii mutageni pot provoca mutaiile spontane ct i mutaiile
induse.

constituiti din:- 2 lanturi polipeptidice

grele identice (H446 AA)

Anticorpii sunt
i dou uoare (L-214AA),

fiecare dintre ele

contin cite o poriune:

varabil V".

i una

constant C"

Secvena de AA n poriunea variabil este diferit

pentru fiecare anticorp. Lanurile sunt unite ntre
ele prin legturi disulfidice.
Genele ce corespund poriunilor V" i C ale unui
anumit tip de lan uor sunt foarte apropiate n
ADN al imunocitelor care produc acest tip de lan
uor, dar se gsesc departe una de alta n ADN al
celulelor ce produc alte tipuride anticorpi.
De aici reiese, c n imunocit se selecteaz un
anumit segment de ADN, ce codific poriunea
variabil a unui anumit lant uor, care se transfer
prin transpoziie n vecintatea secvenei
codificatoare a poriunii constante a lantului uor.
Deci ADN ce codific sectoarele V" ale lanurilor
H" i "L" const din cteva gene de tip diferit
care-i pot schimba locurile proprii i asocia cu
formarea imenselor combinaii.

Sinteza Anticorpilor

Fiecare dintre milioanele de anticorpi

produi leag unul dintre milioanele de
antigene posibile. Este greu de crezut c
organismul are n patrimoniul su
genetic cte o gen pentru fiecare
anticorp pe care-l produce ntruct
aceasta ar presupune o
supradimensionare a genomului
eucariot.

Gradul de diversificare n obinerea lanurilor H"

i L" este crescut prin faptul c o poriune
variabil este rezultatul asamblrii a 3 regiuni.
Deci ADN ce determin poriunea variabil a
anticorpului este constituit din:
1.
Poriunea variabil (V) constituit din - 400 de
gene.
2.
Poriunea de diversitate (D) ce cuprinde -12 gene
3.
Portiunea de articulare sau jonciune (J) - 4 gene
Asamblarea acestor gene n diferite combinaii
permite construirea a 20000 de sectoare V - fapt
ce asigur extrema varietate a anticorpilor.