1

Difteria. Clasificarea agentului patogen (familie, gen, sp.). Factorii de patogenitate.

Patogeneza difteriei si formele clinice. Diagnosticul microbiologic. Prelevate patologice.
Microscopia directa, izolarea si identificarea culturii pure (proba Pizu, Zacs, determinarea
toxigenezei, diferentierea biovariantelor). Profilaxia si tratamentul specific al difteriei.
DIFTERIA toxiinfecie acut, caracterizat printr-o angin pseudo-membranoas cu efecte toxice la
distan (miocardul, SNC i rinichii).
Este provocat de mi/o din genul Corynebacterium.
Genul Corynebacterium se caracterizeaz prin prezena in componena peretelui celular:
o
Acidului mezo-diaminopimelic
o
Acizilor micolici cu caten scurt (22-38 atomi de C)
o
Coninutul GC ntre 46-74 %.
Prezint asemnri cu mi/o din genurile Mycobacterium i Nocardia.
Clasificarea genului Corynebacterium

Corinebacterii fitopatogene

Corinebacterii patogene pentru animale, care afecteaz accidental omul:

C.pseudotuberculosis, C.ulcerans

Corinebacterii cu tropism uman:

Specie patogen: C.diphtheriae (biovaruri gravis, mitis, intermedius)
intermedius)
Specii comensale (specii pseudodifterice, difteroizi): C.xerosis, C.pseudodiphthericum, C.jeikeium,
C.jeikeium, etc
Caractere morfotinctoriale ale C.diphtheriae
Bacterii (bastonae) drepte sau puin ncurbate, cu extremitile rotunjite sau ngroate (aspect de
halter sau de mciuc). n frotiuri se aranjeaz ungiular, n palisade sau sub forma caracterelor
chinezeti, cifre romane sau litere majuscule: Y, M, N, V... Imobile, asporogene, necapsulate.
necapsulate.
Se coloreaz G+,
G+, pentru evidenierea granulaiilor de volutin - Loeffler, Neisser.
Caractere de cultur i biochimice
C.diphtheriae este o specie facultativ anaerob, posed catalaz, citocromi a,b,c, oxidazo-.
Temperatura optim de cultivare 37
37C, pH 7,4.
Medii de cultur elective: Mediul Loeffler (ser bovin coagulat): colonii S, mici, netede, opace, albecenuii, apar peste 16-24 ore de cultivare; Geloz-snge
Medii de cultur selective difereniale: Mediul Clauberg (geloz-snge cu telurit de potasiu).
C.diphtheriae gravis: colonii R, mari, negre, crenelate, aspect de floare de margaret, nehemolitice;
mitis:
mitis: colonii S, mijlocii, negre, bombate, cu zon de hemoliz; Mediul Tinsdale (geloz-ser-cistintelurit de potasiu-tiosulfat) - colonii negre cu halou brun ; Mediul Bucin (geloz-snge cu hinozol)
colonii albastre
Medii de transport: geloz-ser semilichid cu telurit de K; Mediul OCST (ou-cistin-ser-telurit)
Activitatea biochimic a C.diphtheriae:
Proteolitic: Ureaza- (testul Zaks), cistinaza+ (testul Pizu), indol-. Zaharolitic: Gravis:
Gravis: glucoza+,
amidon+, zaharoza-; Mitis:
Mitis: glucoza+, amidon-, zaharoza-. Se disting 22 lizotipuri de C.diphtheriae i
multiple serogrupuri (antigen O polizaharidic) i serovaruri (antigen K proteic).
Factori de patogenitate
1
Toxina difteric - origine proteic, secretat de tulpinile lizogene (profagi Tox+), n prezena
unor cantiti reduse de Fe. Exotoxin tipic (fragmente polipeptidice A i B). Mecanismul de
aciune - stoparea sintezei proteice prin inactivarea factorului de elongare EF-2 (activitate de
ADP-riboziltransferaz). Conduce la moartea celulei afectate. Toxina difuzeaz n organism
perturbnd funcionarea diferitor organe (SNC, cord, rinichi). Poate fi transformat n
anatoxin, utilizat n vaccinare.
2
Enzime de patogenitate: hialuronidaza, neuraminidaza
Sursa de infecie:
infecie: bolnavul cu difterie i purttorii sntoi de germeni (colonizeaz rinofaringele,
rareori tegumentul sau conjunctiva).
Mecanismele i cile de transmitere:
transmitere: Direct pe cale aerogen (picturi) sau contact cu plgi
contaminate. Indirect prin obiecte (jucrii, cri), praf sau alimente contaminate (lactate).
La poarta de intrare bacteriile se multiplic i provoac un focar inflamator local, determinat de
aciunea toxinei, care fiind ulterior difuzat pe cale limfo- i hematogen provoac starea de
intoxicaie general. Focarul inflamator se localizeaz n faringe (angina difteric), mai rar n laringe
(crupul difteric), nas, urechi, conjunctiv, mucoasa organelor genitale, plgi cutanate. Leziunile locale
se caracterizeaz prin inflamaie fibrinoas. Exotoxina cauzeaz necroz, dilatarea vaselor i creterea
permeabilitii, eliminarea fibrinogenului, care coaguleaz cu formarea unei pseudomembrane
fibrinoase. Ea conine bacterii, hematii, PMN i celule necrozate. Se detaeaz dificil, nu se dizolv n
ap, este reproductibil in situ n cteva ore. Membrana are tendin s se extind. n forma malign
difteria este nsoit de edem al gtului, semne toxice i paralizia vlului palatin. Intoxicaia general
afecteaz SN (disfagie, paralizii), sistemul cardio-vascular (miocardite), suprarenalele (insuficien a
suprarenalelor), rinichii (nefroz). Tulpini de C.ulcerans pot produce toxin identic cu cea difteric.
Metode de diagnostic
1
Examenul microscopic (Gram, Loeffler, Neisser),
Neisser), microscopia
microscopia imunofluorescent

Examenul bacteriologic (izolarea, identificarea culturii pure). Studierea toxigenezei obligator.

Se efectueaz prin RN cu ser antitoxic in vivo (cobai), in vitro (RP Elek), sau depistarea genei
Tox n prelevat sau n cultura pur prin PCR.
3
Examenul serologic retrospectiv,
RA cu seruri perechi (I sptmn i a IIIa) i cultur de C.diphtheriae.
C.diphtheriae. Titru semnificativ
semnificativ 1:100 sau
creterea titrului de Ac.
Evaluarea titrului de antitoxine n serul bolnavului. La debutul bolii el este absent sau nu depete 0,5
UI/ml
Receptivitatea la difterie poate fi determinat prin: Testul Schick (in
(in vivo);
vivo); RN in vitro; RHAI; ELISA;
Titru antitoxinelor > 0,1 UI/ml protector
Titru inferior 0,01 UI/ml
UI/ml lipsa proteciei
Tratamentul difteriei: Seroterapie precoce (ser antitoxic antidifteric, Ig). Neutralizeaz activitatea
toxinei, blocnd fixarea ei pe receptorii celulari. Antibioticoterapie (macrolide, tetracicline,
cloramfenicol, aminozide, beta-lactamine). Asigur eradicarea germenilor. Tratament simptomatic
Profilaxia specific a difteriei: Vaccinarea obligatorie a copiilor conform calendarului de vaccinri
cu anatoxin difteric. Exist vaccinuri asociate: ADT, ADTP. Vaccinarea primara cu ADTP la 4-5-6 luni,
revaccinarea la 22-24 luni cu ADTP, la 6-7, apoi la 14-15 ani cu ADT. Recent a fost obinut un vaccin
sintetic antidifteric. Reprezint un polipeptid situat la jonciunea fragmentelor A i B a toxinei difterice,
o molecul peptidic purttoare i un adjuvant sintetic.