Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Curs5. Conducere Bioprocese Curs
Curs5. Conducere Bioprocese Curs
MONITORIZAREA BIOREACTORULUI
Bioreactorul este un bioreactor cu agitare mecanic, de 20L, produs de firma Biolafitte. Pe lng
bioreactor, exist deja o serie de echipamente (marcate cu culoarea distinct n Figura 1), cum sunt:
turbina de agitare cu rezerve pentru diverse tipuri de bioprocese; motorul electric cu cuplajul aferent;
dulapul cu regulatoarele de temperatur, agitare, pH i controlul antispumrii; traductoare i elemente
de execuie aferente buclelor de reglare a elementelor de baz ale bioreactorului.
Analiznd mrimile care caracterizeaz un proces biotehnologic i care trebuie achiziionate de la
un bioreactor, se poate concluziona c acestea se mpart n dou categorii. n prima categorie intr
toate mrimile care pot fi msurate on-line i care, n general, creeaz condiiile de dezvoltare a
populaiei de microorganisme din bioreactor. Dintre aceste mrimi, cele mai importante sunt:
temperatura, agitarea, aerarea, presiunea n bioreactor, pH-ul, concentraia de oxigen dizolvat. n a
doua categorie intr o serie de mrimi specifice unui proces biotehnologic, cum sunt concentraia de
biomas, concentraia substratului, concentraia produsului de biosintez, mrimi specifice
bioprocesului. Din nefericire, n majoritatea cazurilor, aceste mrimi nu pot fi msurate on-line,
datorit inexistenei unor senzori ieftini, fiabili i suficient de robuti. Achiziia de date privind biomasa,
substratul, produsele de metabolism, se face prin analize de laborator, aceast metod fcnd dificil
conducerea bioreactoarelor (n sensul reglrii directe a acestor mrimi). Analiza de laborator necesit
prelevarea unei probe din coninutul bioreactorului, ceea ce presupune un risc mrit n contaminarea
(infectarea) culturii. n cazul acestor mrimi se prefer estimarea acestora, soluie ce va fi descris in
cadrul paragrafului 2.3.
Soluia stabilit pentru achiziia mrimilor incluse n prima categorie se bazeaz pe folosirea plcii
de achiziie PCL-818L. Astfel traductoarele mrimilor specifice bioreactorului au fost conectate la
intrrile analogice ale plcii de achiziie. Placa PCl-818L are pentru intrrile analogice 16 canale
simple sau 8 difereniale, cu o rezoluie de 12 bii, cu multiple nivele de intrare (+/- 0.625V, +/- 1.25, ,
+/- 5V sau +/- 10V), toate programabile software, tipul conversiei este prin aproximaii succesive, rata
de conversie max. 40KHz, precizia +/- 1bit, linearitatea +/- 1bit. Tipul de transfer al datelor, permis de
plac, este prin program, ntreruperi sau DMA.
1/39
2/39
comand
acordare
Mecanism de acordare
+
r
A
e
parametrii de acord
comanda
Regulator PI sau PID
Proces
N
Regulator autoacordabil
Figura 2: Sistem automat cu regulator tipizat i mecanism substitutiv de autoacordare
Prezenta activitate are ca obiectiv elaborarea unor soluii noi, bazate pe tehnici fuzzy i neuronale,
pentru rezolvarea celor dou aspecte menionate anterior. n esen, aceste soluii se refer la:
utilizarea unor proceduri de filtrare obinute pe baza compunerii prin tehnici fuzzy a filtrelor
liniare FIR cu cele neliniare n band adaptiv;
analiza neuronal a rspunsului periodic al buclei n regimul de reglare bipoziional;
utilizarea tehnicilor fuzzy n alegerea cerinei privind rezerva de stabilitate a sistemului.
3/39
Reelele neuronale imit funcia creierului uman de a depinde de informaiile acumulate n neuron.
Exist cteva avantaje ale utilizrii reelelor neuronale n modelarea i controlul proceselor reale.
Reelele neuronale pot lucra cu sisteme neliniare sau multivariabile i pot nva sau adapta datele
procesului n structura lor. Datorit acestor caracteristici, reelele neuronale au fost aplicate n foarte
multe domenii diferite. Potenialul de aplicabilitate al reelelor neuronale provine din structura lor
special i din abilitatea adaptrii datelor. n fapt, o reea neuronal prezerv informaiile procesului
prin conexiunile ntre neuronii artificiali sau noduri printr-un algoritm de nvare sau antrenare
selectat.
Structura feed-forward este folosit foarte des n cazul proceselor biotehnologice, n special pentru
controlul acestor procese, dar, n ultima perioad, i n cazul senzorilor software. De asemenea, sunt
utilizai i ali algoritmi neuronali, cum ar fi: adaptiv, recurent etc.
ES 1 S E (2 3 ) ES
(4)
S& 1 S E 2 ES
(5)
n
M& 3 ES k 2 4 M X k35 M
X
kn
(6)
X& 4 M X
6 X
(7)
X&t 4 M X
(8)
E&1 7 X 8 E1
(9)
P&
P1
1 10 X 11
(10)
E& 8 E1 9 E k1[( 2
3 ) ES 1 S E]
(11)
P& 11 P1 12 P
(12)
4/39
(13)
M X
X& 4
6 X
V
(14)
M X
X&t 4
V
(15)
(16)
Rezultatele simulrii modelului rezultat prin introducerea ecuaiei de vrst medie sunt prezentate
n Figura 21.
5/39
6/39
Structura reelei neuronale este prezentat n Figura 22. Ea conine 4 neuroni pe stratul de intrare,
2 straturi ascunse a 10 neuroni i un strat de ieire cu 2 neuroni. Funciile de activare a stratului de
intrare i a straturilor ascunse sunt logsig, iar pentru stratul de ieire purelin. Aa cum se poate
observa n Figura 22, intrrile reelei neuronale sunt turaia (n), substratul asimilabil (M), biomasa
viabila (X) i alfaamilaza (E) la momentul anterior i ca ieire X i E la moment curent. Antrenarea
reelei neuronale a fost facut considernd procesul n bucl deschis, cu algoritmul backpropagation (Figura 23).
n Figura 24 sunt prezentate rezultatele obinute prin folosirea observerului neuronal comparativ cu
datele obinute din modelul procesului. Aa cum se observ din figur, observerul neuronal d
rezultate foarte bune, aproape similare cu cele obinute din modelul procesului.
7/39
din domenii variate, precum microbiologie, biochimie, matematic, automatic, informatic, precum i
o bun colaborare ntre experi, lucru deseori dificil de realizat.
n Figura 25 este prezentat structura pe subsisteme a unui proces biotehnologic (Caraman,
2002a). Primele trei subsisteme evideniaz fenomenele de schimb de mas i energie care au loc n
bioreactor, precum i dinamica proprietilor fizico - chimice ale mediului. Celelalte dou subsisteme
sunt legate nemijlocit de organismele vii care se dezvolt n bioreactor, fiind constituite din toate
reaciile biochimice aferente procesului biotehnologic. n Figura 25 s-a notat: u(t) - vectorul comenzilor,
y(t) - vectorul mrimilor de ieire (msurabile), z(t) - vectorul mrimilor de calitate, v(t) - vectorul
perturbaiilor, (t) - vectorul mrimilor de stare, (0) - starea iniial (inoculul, concentraia iniial de
substrat etc.)
8/39
9/39
parametrii pentru sterilizarea mediului de cultur: pH nainte de sterilizare 6, temperatura 120C, durata 1 ora, agitare 300 rot/min, aerare uoar, numrul maxim de germeni
contaminani admii 106 celule/ml;
condiii de desfurare a procesului: agitare continu 450 rot/min,
Figura 30a
n Figurile 30a, 30b, 30c i 30d este prezentat evoluia (afectat de erorile de msur) a
numrului total de germeni (biomasa total) n 4 experimente. Examinnd datele experimentale, se
poate observa c evoluia biomasei n procesul de biosintez respect cele 4 zone tipice: faz de
inducie, o faz intermediar, o faz exponenial i o faz de declin.
Figura 30b
10/39
Figura 30c
Figura 30d
Pentru verificarea concordanei dintre modelul prezentat i datele reale mai nti s-au considerat
datele experimentale prezentate n Figura 30a. Aceste date experimentale reprezint o mediere a
tuturor experimentelor realizate ntr-un an de ICA Bucureti pentru procesul de biosintez a
alfaamilazei cu microorganismul Bacillus subtilis.
Pornind de la datele experimentale zonarea dinamicii se face astfel:
faza de inducie (lag) pentru t [0, 2)
-
n Figura 31 sunt prezentate datele experimentale (cu *) i datele obinute cu ajutorul modelului
zonal (cu linie continu). Din grafic se observ c abaterile modelului fa de punctele experimentale
sunt mici, modelul aproximnd bine datele provenind de la procesul real.
11/39
Figura 32a
12/39
Figura 32b
Figura 32c
pi
Se face precizarea c pentru fiecare din cele 4 experimente prezentate, parametrii
ce
caracterizeaz fiecare zon difer. Practic putem spune c s-au obinut 4 modele matematice cu
structur identic, dar cu parametri diferii.
De asemenea, se observ c momentele de timp ce delimiteaz cele 4 faze difer de la un
experiment la altul. innd cont de aceste lucruri se impune implementarea unui model a crui timpi
de delimitare a fazelor i coeficieni k, corespunztori fiecrei faze, s se adapteze n funcie de o
serie de informaii provenite din subsistemul proceselor fizico-chimice, caracterizat prin mrimi fizice
ca: nivelul de CO2, temperatur, pH, aerare, agitare etc.
4.2. MODELAREA INTERACIUNII BIOSISTEMELOR ZONALE CU SUBSISTEMUL
PROCESELOR FIZICO-CHIMICE, CARACTERIZAT PRIN MRIMI FIZICE CA: TEMPERATUR,
PH, AERARE, AGITARE ETC, CONSIDERATE CA MRIMI DE COMAND N SISTEM
Evoluia proceselor biotehnologice este puternic influenat de subsistemul proceselor fizicochimice, caracterizat prin mrimi fizice ca: temperatur, aerare, agitare, pH etc (Mencinicopschi,
1987). Astfel din datele experimentale avute la dispoziie pentru procesul de biosintez a alfaamilazei
cu microorganismul Bacillus subtilis, s-au putut stabili o serie de valori optime, pentru fiecare dintre
aceste mrimi, ce conduc la obinerea unei productiviti maxime.
13/39
Reglarea mrimilor fizice, precum temperatura, aerae i agitare, a fost prezentat n cadrul
paragrafului 2.2. n acelai timp au fost identificate dou mrimi nivelul de CO 2 i cel de O2 a cror
evoluie poate fi legat direct de procesul de dezvoltare a microorganismelor.
n continuare este prezentat interaciunea dintre procesul de biosintez i fiecare din mrimile
prezentate anterior.
Influena pH-ului mediului de cultur asupra biosintezei alfa-amilazei
Deoarece enzimele sunt proteine funcionale, proprietile i biosinteza lor sunt puternic influenate
de valorile pH-ului mediului de cultur. Pe mediile naturale care au pH 6.2-6.5 acumularea enzimei
este maxim deoarece aceste valori au ca efect limitarea fenomenului de disociere. n timpul
biosintezei alfa-amilazei pe medii de cultur n formula crora se folosesc subproduse i produse ca
rot de floarea-soarelui, tre de gru, fin de porumb, pH-ul natural al acestor medii are n primele
faze de dezvoltare a productorului o uoar tendin de scdere, dup care se nregistreaz o
cretere progresiv pn la valori cuprinse ntre 7.5 i 8.0. Valorile pH-ului mediului de cultur, nainte
i dup procesul de biosintez, condiioneaz acumularea alfa-amilazei (Tabelul 1).
Tabelul 1: Influena valorilor pH-ului asupra acumulrii alfa-amilazei n culturile submerse ale
productorului Bacillus subtilis pe mediu natural
pH-ul mediului de cultur
la nceputul procesului
5.0
5.5
6.0
6.2
6.5
7.0
7.5
Activitatea alfa-amilazei
(UN/ml)
2000
3500
6000
7000
7200
7000
100
14/39
mediile naturale durata optim de dezvoltare este cuprins ntre 20 i 25 ore, iar temperatura optim
pentru acumularea maxim a enzimei este de 30-35 oC. n Figura 33 se prezint influena temperaturii
asupra acumulrii alfa-amilazei n culturile submerse ale productorului Bacillus subtilis.
Procesul de dezvoltare a microorganismului productor Bacillus subtilis este puternic exergonic.
Temperatura se menine n limitele optime prin termostatarea bioreactorului (prin intermediul unui
schimbtor de cldur). Durata procesului se stabilete n intervalul 20-30 ore, n aa fel, nct s fie
ntrerupt n momentul atingerii palierului sau a unei activiti enzimatice rezonabile pentru evitarea
consumului nejustificat de energie i timp.
Influena aerrii i vitezei de agitare asupra biosintezei alfa-amilazei
Biosinteza alfa-amilazei necesit condiii de intens aerobie, productorul Bacillus subtilis avnd
cerine deosebite pentru oxigen (>17 milimoli O 2/l i h). Necesarul de oxigen dizolvat n mediul de
biosintez depinde de microorganism i, mai ales, de faza de dezvoltare n care se afl, intensitatea
maxim de respiraie situndu-se n timpul fazei exponeniale.
Pentru productorul Bacillus subtilis acumularea maxim de alfa-amilaz are loc la o turaie de
400-500 rot/min i o rat de aerare de 0.8-1 v. aer/v. mediu i minut, atunci cnd este dezvoltat
submers 25 ore la 33oC pe mediu natural. n Figurile 34 i 35 se prezint influena aerrii, respectiv a
vitezei de agitare asupra acumulrii alfa-amilazei n culturile submerse ale productorului Bacillus
subtilis .
15/39
16/39
37 sunt prezentate evoluia concentraiei de CO 2 i derivata acestuia pentru cazul prezentat n Figura
30a (se reamintete c datele experimentale n acest caz reprezint o mediere a tuturor
experimentelor realizate ntr-un an de ICA Bucureti pentru acest proces).
x(t ) x(t , )d
(58)
1 (t ) x (t , )d
(59)
n (t ) n x (t , )d n
(60)
Vrsta medie, abaterea medie patratic i deviaia standard sunt definite astfel:
17/39
m(t )
1 (t )
1
x(t )
x(t , )d
0
x(t , )d
(61)
S (t )
(62)
n(t )
x (t )
(63)
Variaia biomasei n intervalul de vrst [,+d] poate fi descris n ase moduri principale
(Caraman, 2002a):
prin fenomenul de cretere (ngrare), ceea ce nseamn c celulele din intervalul de vrst
[,+d] cresc n volum i mas, astfel nct biomasa total din intervalul considerat crete;
prin fisiune, ceea ce nseamn c o celul din intervalul [ ,+d] se divide, avnd drept
consecin descreterea biomasei de vrst din intervalul menionat i creterea cantitii de
biomas de vrst zero;
prin nmugurire, adic o celul din intervalul [ ,+d] creeaz una nou. Cantitatea de biomas
din intervalul [,+d] nu se modific, dar cantitatea de biomas de vrst zero crete;
prin fenomenul de autoliz (trecerea n stare neviabil), ceea ce nseamn o descretere a
cantitii de biomas din intervalul [,+d];
evacuare din bioreactor (descretere a cantitii de biomas din intervalul [ ,+d]);
prin fenomenul de mbtrnire. Pe msur ce mbtrnesc, celulele din intervalul [ ,-d] trec
n intervalul [,+d], cele din intervalul [,+d] trec n intervalul [+d,+2d], etc.
Primele trei cazuri reprezint mecanisme de modificare a biomasei, de natur biologica. Cazurile 2
i 3 arat modul cum se pot crea noi celule.
Modelul matematic al distribuiei de vrst a populaiei de microorganisme poate fi obinut prin mai
multe metode, cum ar fi: ecuaii de bilan, metode statistice, metode probabilistice, etc. n continuare,
se va determina modelul distribuiei de vrst a celulelor printr-o metod probabilistic.
Se noteaz prin x(t,-d)d concentraia de biomas cu vrsta cuprins n intervalul [ -d,] la
momentul t, iar prin E, condiia ca o celul s aparin intervalului [ -d,]. Urmtoarele evenimente,
care se exclud reciproc, pot avea loc n intervalul [t,t+d]:
A: celula se divide sau trece n stare neviabil prin autoliz;
B: celula poate fi evacuat din bioreactor;
C: celula mbtrnete cu dt.
Rezult urmtoarele probabiliti ale evenimentelor:
P ( A | E ) ( d ) d
(64)
( ) F ( ) D ( )
(65)
unde
este o funcie cunoscut, care arat c vitezele de fisiune i autoliz depind de vrsta .
Q(t ) x(t , d )dtd
D (t )dt
V x(t , d ) d
(66)
P (C | E ) 1 [ P( A | E ) P( B | E )] 1 ( d )dt
(67)
P( B | E )
innd cont de cele trei probabiliti, date de relaiile (64) i (66) (67), rezult cantitatea de
biomas din intervalul [-d,] sub forma
18/39
(68)
Se poate scrie urmtoarea ecuaie de bilan, pentru concentraia de biomas din intervalul [ -d,]:
x(t , d )d 1 [ D (t ) ( d )]dt x (t , )d D(t ) x0 (t , )d dt
x(t , )
dtd
t
(69)
Dac dt=d i dt , d 0 , atunci, din relaia (69), rezult urmtoarea ecuaie diferenial a
distribuiei de vrst a microorganismelor:
x(t , ) x(t , )
( ) x(t , ) D (t ) x (t , ) D (t ) x0 (t , )
t
(70)
(71)
(72)
i condiia iniial
~
x(0, ) x ( )
(73)
(74)
unde x(t) este biomasa total din bioreactor la momentul t. nmulind ecuaia (74) cu i integrnd pe
ntregul domeniu de vrst, se obine
x(t , )
x ( t , )
d
d D(t ) x(t , )d ( ) x(t , ) d D(t ) x0 (t , ) dt
t
0
0
0
c
(75)
(76)
(77)
19/39
(78)
Ecuaiile (76) (78) reprezint o form recursiv pentru determinarea momentelor distribuiei de
vrst a microorganismelor. n forma final, () trebuie particularizat n funcie de modul cum se face
nmulirea i autoliza microorganismelor.
Pentru vrsta medie se poate scrie urmtoarea ecuaie:
dm(t )
1 d 1 (t ) 1 (t ) dx(t )
2
dt
x(t ) dt
x (t ) dt
(79)
dm(t )
1
m(t )
1 (t ) D(t ) o m(t )
( )
D ( ) D(t ) o mo (t )
dt
x
(
t
)
x
(
t
)
x
(
t
)
x (t )
(80)
Introducnd ecuaiile (62), (77) i (79) n (80) se obine abaterea medie patratic
dn(t ) d 2 (t )
dm(t )
dx(t )
2 m(t ) x(t )
m 2 (t )
dt
dt
dt
dt
(81)
Considernd
( ) K D K F
(82)
d x(t )
(t ) x(t ) D(t ) x(t ) K D x(t ) D (t ) xo (t )
dt
(83)
x (t )
x (t )
dm(t )
1 (t ) D(t ) o m(t ) K F m(t ) D(t ) o mo (t )
dt
x
(
t
)
x (t )
(84)
dn(t )
D (t ) ( K D K F ) n(t ) K F x (t ) m 2 (t ) 2 D (t ) xo (t ) mo (t ) m(t )
dt
(t ) x (t ) m 2 (t ) D (t ) no (t ) D (t ) xo (t ) mo2 (t ) D (t ) xo (t ) m 2 (t )
(85)
Presupunnd, n continuare, c viteza de autoliz i cea de fisiune depind de vrsta medie, ipotez
mai realist dect n (82),
( ) ( K D K F ) m(t )
(86)
rezult
dx(t )
(t ) x (t ) D (t ) x(t ) K D m(t ) x (t ) D(t ) xo (t )
dt
(87)
x (t )
x (t )
dm(t )
1 (t ) D(t ) o m(t ) K F m 2 (t ) D(t ) o mo (t )
dt
x(t )
x( t )
(88)
dn(t )
D(t ) ( K D K F ) m(t ) n(t ) K F x(t ) m 3 (t ) [ (t ) x(t ) D(t ) xo (t )] m 2 (t )
dt
20/39
(89)
k2
S E S EM E
k1
(90)
unde S este substratul, E este enzima, S-E reprezint complexul enzim-substrat, M este un metabolit
iar ki , i {1, 1, 2} ratele cinetice constante.
Dou presupuneri se fac asupra variabilelor procesului:
1) Concentraia total de enzim E0(t), care este suma complexului enzim-substrat Cp(t) i enzima
E(t), este proporional cu concentraia de biomas X(t):
E0 (t ) X (t )
(91)
&
2) Rata de cretere a populaiei de microorganisme X (t ) este proporional cu rata de formare a
&
metabolitului M (t ) :
X&(t ) M&(t )
(92)
(93)
S&(t ) {S (t )( X (t ) C p (t )) K S C p (t )} D (S f S )
(94)
C&p (t ) {S (t )( X (t ) C p (t )) K mC p (t )} D C p
(95)
unde
k2 , k1 , K S k1 / k 1 , K m ( k1 k2 ) / k1 , K m K S
(96)
constante de saturaie, D este reta de diluie i Sf este concentraia de substrat din hran. Acest model
este completat prin adugarea ecuaiei de vrst medie:
S (t )
dm(t )
1 m
m(t )
dt
K m S (t )
(97)
21/39
s XkS
reprezentarea a fost mrit i, ca o consecin, att perioada de antrenare ct i eroarea de antrenare
Figura 40: Schema general a procesului de identificare
se mbuntesc.
Schema folosit n identificare este prezentat n Figura 40. Ea conine urmtoarele elemente:
sX
neuroni liniari, elemente cu dinamic intern (integratoare)
, legturi funcionale de tip multiplicative.
Aceast schem este utilizat la identificarea procesului descries de ecuaiile (93) (95).
p [ k S k M ]T
Figure 41: Blocul de calcul al senzitivitii biomasei n raport cu parametrul
Pentru ajustarea parametrilor se folosete un criteriu de tip eroare ptratic dintre datele
experimentale i ieirile modelului:
t
I e 2 ( )d
0
(98)
unde
pI
(99)
t
I
e( )
2e( )
d
0
pi
pi
(100)
s Xpi
e( ) X m ( ) X ( )
X ( )
s Xpi
pi
pi
pi
(101)
p (k ) p (k 1) h e( ) s Xp d
0
(102
z-
1
22/39
Sf
kS
kM
z-1
z-1
Structura reelei neuronale utilizat n identificarea bioprocesului este de tip Elman i este
prezentat n Figura 42. Ea conine 4 neuroni liniari din care, prin ajustarea ponderilor, se obin
parametrii procesului. Ajustarea ponderilor Biomasa
ce determin
parametrul (ai neuronilor 3 i 4) se
[Kg/m3]
realizeaz sincron.
15
10
5
0
Time [h]
5
10
15
20
25
30
Substrat [Kg/m3]
35
40
45
50
2
1
0
Time [h]
5
10
1.5
15
20
25
30
35
Complex enzima-substrat [Kg/m3]
40
45
50
1
0.5
0
Time [h]
5
10
15
60
20
25
30
Varsta medie [h]
40
35
40
45
50
23/39
20
Time [h]
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Time [h]
5
10
15
20
25
30
Substrat [Kg/m3]
35
40
45
50
2
1
0
Time [h]
5
10
1.5
15
20
25
30
35
Complex enzima-substrat [Kg/m3]
40
45
50
1
0.5
Time [h]
5
10
15
60
20
25
30
Varsta medie [h]
35
40
45
50
40
20
0
Time [h]
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
Figura 44: Evoluia variabilelor procesului i modelului lund n considerare zgomotul de msur
(variabilele procesului cu linie continu i variabilele modelului cu linie ntrerupt)
Simularea ncepe cu un set de parametri alei aleator. Dup 10 ore de funcionare ncepe
procedura de ajustare a parametrilor, ajustarea fcndu-se la fiecare or. A fost aleas perioada de o
or din dou motive: procesele biotehnologice sunt foarte lente (perioada de eantionare pentru
procesul considerat n cadrul acestei activiti fiind de 0.1 ore) i datele experimentale sunt dificil de
obinut (se obin prin prelevarea de mostre ce sunt apoi analizate in laborator). La fiecare or un nou
set de parametri este determinat (prin antrenarea reelei), pe baza parametrilor anteriori.
Informaia de vrst medie este obinut n cadrul unui observer de vrst medie, descris de
ecuaia (97). Parametrii ecuaiei observerului de vrst medie sunt furnizai on-line de ctre modelul
neuronal. Validarea evoluiei vrstei medii poate fi considerat corect deoarece n ecuaia de vrst
medie sunt parametrii din celelalte ecuaii ale modelului (biomas, substrat i complex enzimsubstrat), ce au fost ajustai la valorile reale.
n Figura 43 este dat evoluia biomasei, substratului, complexului enzim-substrat i vrsta medie
obinute utiliznd procedura de identificare descris mai sus. Cea mai.mic eroare se obine n cazul
-1
biomasei, deoarece aceasta este mrimea n funcie de care se face ajustarea parametrilor. Se
observ o bun convergen a evoluiei variabilelor modelului n raport cu cele reale.
Urmtoarea simulare consider msurrile de biomas ca fiind afectate de zgomot de msur alb.
Influena zgomotului de msur este practic imperceptibil, rezultatele, prezentate n Figura 44, fiind
foarte apropiate de cele din Figura 43.
24/39
(103)
n care:
VPB - valoarea total a produselor de biosintez obinute ntr-o singur arj;
CMP - costul total al materialelor consumate la o singur arj;
COA - costul total al operaiilor auxiliare pentru o arj;
qER - costul n unitatea de timp al energiei consumate pentru funcionarea bioreactorului;
qFM - costul pe unitatea de timp al forei de munc utilizat pentru exploatarea bioreactorului;
qA - amortismentul bioreactorului n unitatea de timp;
tf - timpul final de desfurare a reaciilor de biosintez;
TA - timpul necesar pentru operaiile auxiliare.
Se poate constata c, pentru un anumit produs de biosintez, CMP, COA, qFM, qA i TA sunt
constante, qER depinde de intensitatea agitrii i intensitatea aerrii, n schimb VPB i tf depind n mod
esenial de condiiile de desfurare a procesului de biosintez, deci de vectorul de comand, u.
Valoarea total a produselor de biosintez este:
VPB x (t f ) Pu
(104)
unde x(tf) este cantitatea de alfa-amilaz, produs la momentul tf, iar Pu este preul unitar al
produsului de biosintez. n sensul celor prezentate, s-a adoptat ca funcie criteriu, costul specific al
produselor de biosintez, acesta avnd urmtoarea expresie:
(105)
unde cut este costul n unitatea de timp al utilitilor. innd cont de valorile numerice ale costurilor
care intervin n expresia (105), rezult urmtoarea form a criteriului de performan:
I (u )
0 1t f
x (u )
x
Comanda n cazul bioreactorului cu funcionare discontinu este timpul de oprire a arjei:
25/39
(106)
x
u tf
(107)
Cantitate de alfa-amilaz
8233x
14619
9286
5296
4943
4634
3900
dup momentul atingerii maximului de biomas, obinerea optimului din punct de vedere
al productivitii (minimizarea criteriului (106)) are loc ntr-un interval de timp variabil, dependent
de condiiile de mediu. Acest lucru poate fi observat n Figurile 45a, 45b, 45c i 45d, n care sunt
prezentate simultan evoluia numrului total de germeni i a criteriului (106). Una din mrimile
fizice ce poate fi corelat cu intervalul de timp scurs ntre maximul de biomas i minimul
criteriului este pH-ul. Astfel, dac la momentul atingerii maximului biomasei n bioreactor pH-ul
are o valoare mare (mediul este bazic) nu sunt condiii pentru ca microorganismele s continue
s produc enzim, deci funcionarea bioreactorului trebuie oprit imediat (Figurile 45c i 45d).
n schimb, dac la momentul atingerii maximului de biomas n bioreactor avem un pH mic
(mediul este acid) microorganismele, dei intr n zona de declin, produc n continuare alfaamilaz. n acest caz decizia de oprire a bioreactorului se va lua dup un numr important de
ore (Figurile 45a i 45b). Pentru o exemplificare mai concret n Tabelul 3 sunt dai timpii de
funcionare ai bioreactorului dup momentul atingerii maximului de biomas n vederea obinerii
unui maxim de productivitate.
Figura 45a
Figura 45b
26/39
-1
Figura 45c
Figura 45d
Tabelul 3: Influena pH din bioreactor asupra duratei de funcionare a bioreactorului dup atingerea
maximului de biomas folosind datele experimentale
Nivelul de pH n bioreactor n momentul
atingerii maximului de biomas
7.8
6.5
8.3
8
innd cont de concluziile formulate mai sus pentru procesul de biosintez a alfaamilazei cu
microorganismul Bacillus subtilis s-a realizat urmtoarea structur de conducere: sistemul evolueaz
conform modelului zonal pn la momentul intrrii n zona exponenial. Aici are loc o analiz a
posibilitii obinerii unei arje satisfctoare din punct de vedere al productivitii. Analiza are n
vedere numrul de microorganisme existente n bioreactor la acel moment. n cazul n care numrul
de microorganisme este foarte mare se va obine o productivitate mic i se ia decizia opririi arjei,
decizie luat din considerente de rentabilitate economic.
n cazul n care se decide continuarea arjei, se trece din nou pe modelul zonal pn n momentul
atingerii maximului de biomas. n acel moment, innd cont de a doua concluzie, pe baza nivelului de
pH existent la acel moment n bioreactor se stabilete momentul de oprire a arjei. Decizia se ia n
cadrul unui bloc fuzzy de tip Mamdani avnd ca intrare nivelul de pH din bioreactor, iar ca ieire timpul
ct bioreactorul va mai funciona dup momentul atingerii maximului de biomas.
Funciile de apartenen utilizate de tip trapezoidal pentru intrare i singelton pentru ieire sunt
prezentate n Figurile 46a i 46b. innd cont c baza de reguli este urmtoarea:
DAC (pH = Mic) ATUNCI (Timp = Pozitiv)
DAC (pH = Mare) ATUNCI (Timp = Zero)
se obine caracteristica blocului fuzzy prezentat n Figura 47.
Figura 46a
Figura 46b
27/39
Figura 47
Folosind blocul fuzzy prezentat anterior se obin duratele de funcionare a bioreactorului dup
momentul atingerii maximului de biomas prezentate n Tabelul 4. Se observ c rezultatele obinute
cu structura de conducere realizat (prezentate n Tabelul 4) sunt foarte apropiate de cele obinute din
datele experimentale (Tabelul 3).
Tabelul 4: Influena pH din bioreactor asupra duratei de funcionare a bioreactorului dup
atingerea maximului de biomas folosind structura de conducere
Nivelul de pH n bioreactor n momentul
atingerii maximului de biomas
7.8
6.5
8.3
8
Se consider cazul proceselor de biosintez continue, unde principala intrare de comand este rata
de diluie D. Aa cum s-a artat n paragraful 5.1, o variabil important, care caracterizeaz starea
fiziologic a populaiei de microorganisme, este vrsta medie. De ea depinde, n mare msur,
capacitatea de biosintez a microorganismului productor. Se pune, deci, problema aducerii populaiei
de microorganisme la o vrst optim din punct de vedere al capacitii de biosintez a celulelor. n
aceast idee, controlul vrstei medii n bioreactor poate fi o soluie pentru obinerea unei productiviti
mrite a procesului. Structura de control a vrstei medii ntr-un bioreactor de biosintez continuu este
prezentat n Figura 48, regulatorul utilizat fiind de tip PI. Regulatorul proiectat are ca intrare eroarea
de vrst medie, definit ca diferena dintre referina de vrst medie i informaia de vrst medie
furnizat de observerul de vrst medie, iar ca ieire rata de diluie D. Parametrii ecuaiei observerului
de vrst medie sunt furnizai on-line de ctre reeaua neuronal.
Rezultatele simulrii sunt prezentate n Figura 49, n care referina de vrst medie a fost variat
ntre valorile 10 i 5 ore. Figura 49 prezint evoluia vrstei medii, comenzii (rata de diluie),
substratului i biomasei. Rezultate similare se obin n cazul n care se consider c msurtorile de
biomas sunt afectate de un zgomot alb (Figura 51).
28/39
- k M
kS
Regulator
PI
-1
Figura 48: Sistem de reglare a vrstei medii ntr-un bioreactor
De asemenea, a fost definit un indice de productivitate prin relaia (Caraman, 2002b):
tf
I D (t ) P (t )dt
(108)
Prin studierea evoluiei acestui indice de productivitate n raport cu vrsta medie (Figura 51), s-a
evideniat existena unei vrste optime (la care indicele de productivitate definit de relaia (108) este
maxim), confirmnd n acest fel ipoteza, c fiecare
Vrstspecie
medie [h]de microorganisme este caracterizat de o
15
vrst optim la care productivitatea
este maxim.
10
5
0
Time [h]
20
40
60
80
100 120 140
Rata de diluie [1/h]
160
180 200
0.2
0.1
Time [h]
0
20
40
60
80
100 120
Substrat [Kg/m3]
140
160
180 200
20
40
60
80
100 120
Biomasa [Kg/m3]
140
160
180 200
3
2
1
0
10
29/39
5
Time [h]
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180x 200
15
10
5
0
Time [h]
20
40
60
80
100 120 140
Rata de diluie [1/h]
160
180 200
0.2
0.1
Time [h]
0
20
40
60
80
100 120
Substrat [Kg/m3]
140
160
180 200
20
40
60
80
100 120
Biomasa [Kg/m3]
140
160
180 200
3
2
1
0
10
5
Time [h]
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180 200
Figura 50: Rezultatele simulrii controlului vrstei medii lund n considerare zgomotul de msur
(variabilele procesului linie continu i variabilele modelului linie ntrerupt)
30/39
Procesul considerat
Procesul considerat are loc ntr-un bioreactor cu agitare continu i este descris de urmtoarele
ecuaii (Aoyama, 1995):
dX
( D) X
dt
(123)
dS
1
D( S f S )
X
dt
YX / S
(124)
dP
DP ( ) X
dt
(125)
cu
max 1 P / Pm S
K m S S 2 / Ki
(126)
X = concentraia biomasei;
P = concentraia produsului de reacie;
S = concentraia substratului n cultur;
Sf = concentraia substratului de alimentare;
D = rata de diluie;
= rata specific de cretere a microorganismelor [l/h] dat de relaia (126), care ia n consideraie
fenomenul de inhibiie datorat substratului i produsului de reacie;
YX/S = coeficientul de productivitate biomas (0.4 g/g);
= parametru cinetic (2.2 g/g);
= parametru cinetic (0.2 l/h);
max = rata specific maxim de cretere a microorganismelor (0.48 l/h);
Pm = constanta de saturaie a produsului (50 g/l);
Km = constanta de saturaie a substratului (1.2 g/l);
KI = constanta de inhibiie a substratului (22 g/l).
Obiectivul conducerii este de a maximiza concentraia de biomas de la ieire pe unitatea de
volum de cultur. Caracterul puternic neliniar al procesului rezult foarte clar din caracteristica static
a acestuia (Figura 53) i din acest motiv, s-a folosit ca model intern al procesului o reea neuronal.
Reeaua neuronal are ca ieire incrementul biomasei, iar structura ei este constituit din trei straturi
(strat de intrare - 4 neuroni, strat ascuns - 7 neuroni, strat de ieire 1 - neuron).
Testarea procesului descris de ecuaiile (123) (125) i a modelului neuronal la o secven de
trepte arat c reeaua neuronal aproximeaz bine ieirea procesului n intervalul [3.5-8] g/l (Figura
54).
31/39
32/39
(a)
(b)
Figura 55 a,b: Influena parametrului N2 asupra procesului (a - ieire, b - comanda)
(a)
33/39
(b)
Figura 56 a,b: Influena parametrului Nu asupra procesului (a - ieire, b - comanda)
(a)
(b)
Figura 57 a,b: Influena parametrului asupra procesului (a - ieire, b - comanda)
34/39
(a)
(b)
Figura 58 a,b: Influena parametrului asupra procesului (a - ieire, b - comanda)
(a)
35/39
(b)
Figura 59 a,b: Ilustrarea proprietilor de urmrire ale structurii GPC
36/39
(127)
n care na , nb i nc sunt numere ntregi, finite, iar k - timpul mort (n perioade de eantionare).
Sistemul instruibil trebuie s utilizeze "experiena" acumulat pn n momentul respectiv, astfel
nct, pentru orice vector z(t) al observaiilor din mediu, s determine comanda discret ui(t), i=1,...,p,
care s extremizeze indicatorul .
37/39
Si {z : Max (u j , z ) (ui , z ), u j U d }
j
(128)
Stabilirea legii de comand nseamn, n acest caz, deducerea prin instruire a funciilor discriminante
ale situaiilor de comand Si.
Dup natura procesului biotehnologic condus, sistemele de conducere automat, care utilizeaz
recunoaterea situaiilor de comand, se pot ncadra n mai multe categorii. Varianta cea mai general
este aceea n care sistemul instruibil folosete informaia acumulat anterior pentru a determina
funciile discriminante ale situaiilor de comand. Exist ns i cazuri particulare, cum ar fi cel al
proceselor cu desfurare ciclic, n care msura ndeplinirii scopului se poate evalua la sfritul
fiecrui ciclu. Fie
y (u , v)
(129)
caracteristica static a unui proces ciclic, n care y este mrimea de ieire la sfritul ciclului.
Comenzile discrete ui , i=1,...,p, trebuie astfel stabilite, nct s se obin - la sfritul ciclului mrimea de ieire ct mai apropiat de o valoare prescris yp . Situaia de comand Si se definete
astfel :
Si {z : z ( y p , vT )T ; Min E ( y (u j , v, ) y p ) (ui , v, y p ); ui , u j U d }
j
(130)
n cazul proceselor menionate, instruirea se poate realiza n cadrul unei proceduri de conducere
dual, implicnd - la ciclul j de funcionare - efectuarea a doi pai:
a - clasificarea vectorului curent
z pj ( y pj , v j )
(131)
la una din situaiile Si, i=1,...,p i adoptarea comenzii corespunztoare; fie ui comanda discret
adoptat i aplicat efectiv n proces, pentru care s-a obinut, la sfritul ciclului, valoarea y a mrimii
de ieire ;
b - instruirea regulatorului, dup terminarea ciclului j, cunoscnd c vectorul
z j (y j ,v j )
(132)
38/39
aparine situaiei Sk, corespunztoare comenzii aplicate ukj i efectului yj obinut la ieire. Sistemele
instruibile din aceast categorie pot fi asimilate cu procesele de tip batch, n care natura procesului
(cutura de celule, substratul etc.) i criteriul de ndeplinire a scopului nu se schimb de la arj la
arj. n acest caz, reinstruirea ciclic a sistemului are drept rezultat ameliorarea legii de comand,
chiar n absena unei expresii analitice a acestei legi.
Problema cardinal a reglrii prin sisteme instruibile de recunoatere a situaiilor de comand o
constituie realizarea "instructorului", care instruiete regulatorul automat. De regul, n compunerea
acestui instructor trebuie inclus att experiena acumulat n desfurarea anterioar a procesului,
ct i expresia indicatorului de ndeplinire a scopului, care poate fi formulat analitic, vag, etc. O
variant posibil este utilizarea ca instructor a unui predictor de unul sau mai muli pai, mpreun cu
indicatorul de ndeplinire a scopului.
Situaia de ieire: Recunoaterea situaiilor de ieire poate fi utilizat pentru evaluarea predictiv a
efectelor comenzii rezultate prin utilizarea regulatorului instruibil, bazat pe recunoaterea situaiilor de
comand. Ca i n cazul situaiilor de comand, aplicaiile sistemelor de recunoatere a situaiilor de
ieire se pot ncadra n mai multe categorii, n funcie de natura "mediului" i a instructorului. n cele ce
urmeaz, se vor considera numai sistemele instruibile de predicie a mrimii de ieire n procese
dinamice, categorie creia i aparin procesele biotehnologice.
Situaii strategice, de adaptare i de diagnoz
A. Situaia strategic: se folosete n cazul sistemelor de conducere automat, care pot lucra - n
funcie de caracteristicile "mediului" - cu mai multe strategii de comand. Situaiile strategice se pot
defini ndeosebi pentru sisteme complexe, cu interaciuni, legturi i restricii variate, aa cum sunt
sistemele biotehnologice, dar i cele economice i de producie.
B. Situaia de adaptare: Fie cazul cnd "mediul" i schimb lent proprietile. Comanda este
stabilit pentru anumite proprieti ale procesului condus, astfel nct, la schimbarea caracteristicilor
"mediului", este necesar adaptarea algoritmului de comand, printr-un numr limitat de tipuri de
ajustri ale acestuia. Recunoaterea situaiilor de adaptare reprezint o alternativ la soluiile
cunoscute de conducere adaptiv, care necesit - de regul - efectuarea unor calcule recursive relativ
complicate i, uneori, riscante sub aspectul incidentelor numerice care se pot produce.
C. Situaia de diagnoz
Aprecierea comportrii sistemelor dinamice complexe se poate face printr-un ansamblu de
indicatori, care vor fi numii criterii locale, la care se poate aduga un criteriu global de evaluare a
sistemului. Fie r vectorul criteriilor locale. Se numete situaie de diagnoz mulimea punctelor din
spaiul criteriilor locale, creia i corespunde un anumit tip de apreciere pentru comportarea de
ansamblu a procesului condus. Aprecierile n raport cu care se definesc situaiile de control sunt de
tipul: "admisibil", "situaie de avertizare i", "situaie de urgen j", "regim de avarie", etc., unde i i j au
semnificaii specifice procesului supervizat.
39/39