CITOLOGIE

Lucrarea prac)c 1 Microscopia op)c

Exclusiv pentru uz didac2c

CITOLOGIE

Semestrul 1 16 sptmni (! max. 3 absene, refcute)

LP 1-6 Studiul celulei

LP 7 Lucrare de control
15% din nota nal
- 2 subiecte curs
- 1 subiect LP

Exclusiv pentru uz didac2c

LP 8-14 Studiul esuturilor

LP 15 Recapitulare
LP 16 Examen prac)c
25% din nota nal



Examenul nal

60% din nota nal

CITOLOGIE

Obiect de studiu

Prin microscopie se examineaz obiectele mici,

cu instrumente care s depeasc,
prin sensibilitate, posibilitile ochiului.
Microscopia op)c se bazeaz pe interaciunea
luminii
cu
componentele obiectului de examinat
Exclusiv pentru uz didac2c

Microscopul cu cmp luminos

- Denumit uzual microscop op2c (M.O.)

- Lumina trece prin preparat
- Include: - un sistem opGc

i
- sisteme pentru - a mica i


- a focaliza preparatul

Exclusiv pentru uz didac2c

Exclusiv pentru uz didac2c

Microscopul optic (cu cmp luminos)

Ocular
Revolver
Obiectiv
Dispozitiv de deplasare a lamei
Masa microscopului
Condensor
Macroviza i microviza
Sursa de lumin

Exclusiv pentru uz didac2c

Sistemul optic al microscopului

3 sisteme de len)le:
- Condensorul focalizeaz razele de lumin
- Obiec)vul ofer imagine mrit, real i
rsturnat a obiectului
- Ocularul - imagine nal mult mrit,
rsturnat i virtual, la innit (nu necesit
efort de acomodare)

condensor

Exclusiv pentru uz didac2c

Caracteristicile microscopului optic

Puterea de mrire

Puterea de rezoluie

Exclusiv pentru uz didac2c

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

Exclusiv pentru uz didac2c

Puterea de mrire

Cine mrete imaginea obiectului ?

Puterea de mrire = produsul dintre puterea
de mrire a obiectivului
i puterea de mrire a ocularului

condensor

Puterea de mrire maxim - 1500

Puterea de mrire i denumirea obiectivelor:
- 4 lup
- 10 ob. de orientare
- 20, 40 ob. de diagnostic histologic
- 60, 100 ob. de diagnostic citologic

La obiec)vele cu imersie, ntre obiec)v i preparat se interpune o pictur de ulei de

imersie, de obicei ulei de cedru.

Puterea de rezoluie
Ct de clar este imaginea ?
= cea mai mic distan dintre dou par)cule la care
acestea pot vzute ca elemente separate
- depinde doar de lentila obiectivului.
Puterea maxim de rezoluie a MO este de 0,2 m
FORMULA LUI ABB:

d=/ n sin
condensor

= lungimea de und a radiaiei electromagnetice

n= indicele de refracie al mediului dintre preparat i
obiectiv
= din apertura unghiular a obiectivului

La obiec)vele cu imersie - uleiul de cedru are n=1,51 spre deosebire de aer, care are n=1.
Exclusiv pentru uz didac2c

Principiul de funcionare al MO
Preparatul colorat este strbatut de lumin alb
lsnd s treac doar o anumit lungime de und.
n funcie de legarea colorantului de diferite structuri
sau organite celulare se obine o imagine policrom.
Imaginea nal este aadar colorat.
Se pot observa att preparate xate i colorate, ct i
nexate i necolorate (ex: culturi de celule).

Exclusiv pentru uz didac2c

Exclusiv pentru uz didac2c

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

Utilizarea microscopului optic

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

Pornirea aparatului.
Aducerea n poziie iniial (obiec)ve, msu, condensor).
Poziionarea lamei histologice.
Reglarea distanei interpupilare a ocularelor.
Observarea cu obiec)vul de 4x (reglarea cu macroviza).
Observarea cu obiec)vele de 10x, 40x (reglarea cu microviza).
Aducerea n poziia iniial
Scoaterea lamei.
nchiderea microscopului.

Exclusiv pentru uz didac2c

Alte tipuri de microscoape optice

1.
2.
3.
4.

Microscopul cu uorescen
Microscopul cu contrast de faz
Microscopul confocal
Microscopul cu lumin polarizat

Exclusiv pentru uz didac2c

Microscopul cu fluorescen
LUMINISCENA = proprietatea unor substane de a emite
lumin atunci cand sunt stimulate
Dac stimularea este luminoas -- FOTOLUMINISCEN
FLUORESCENA proprietatea unei substane de a emite
radiaii luminoase doar n timpul stimulrii
FOSFORESCENA proprietatea unei substane de a emite
radiaii luminoase i dup ncetarea stimulrii

Exclusiv pentru uz didac2c

Microscopul cu fluorescen
Imunofluorescena indirect
=Ag + Ac specific (primar) + Ac marcat (secundar)

Imunofluorescena direct
=Ag+ Ac specific marcat
Izolarea antigenului de cercetat

Exclusiv pentru uz didac2c

Microscopul cu fluorescen

ADN (nucleu)

ARN (citoplasm)

(acridin-orange)

Exclusiv pentru uz didac2c

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

Exclusiv pentru uz didac2c

Microscopul cu fluorescen

Filamente de acGn
(uorescein-faloidin)

Nucleu
(DAPI)

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

Exclusiv pentru uz didac2c

Microscopul cu contrast de faz

PRINCIPIU
- lumina care trece prin medii cu indici de refracie
diferii i modific direcia i viteza
-microscopul transform aceste diferene n diferene
de intensitate luminoas
U)l n studiul celulelor vii, necolorate
a) M. cu cmp luminos

Celule pigmentare

b) M. cu contrast de faz

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

Microscopul confocal
Preparatul este scanat n planuri
focale succesive cu un fascicul
luminos focalizat, apoi se
reconstruiete 3D structura
pornindu-se de la imaginile
obinute.

Exclusiv pentru uz didac2c

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

Microscopul cu lumin polarizat

Microscopia cu lumin polarizat permite recunoaterea elementelor colorate sau

necolorate alctuite din subuniti foarte bine organizate.
(a) M. cu cmp luminos bre de colagen (rou), bre elas)ce subiri i nuclei (40)
(b) M. cu lumin polarizat sunt vizibile doar bre de colagen (100).

Exclusiv pentru uz didac2c

McGraw-Hill Companies / Junqueira Histology

www.histology.ro