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- BIOLOGIE CELLULAIRE -

GUIDE DES TRAVAUX PRATIQUES

Flavia RUXANDA
Adrian Florin GAL
Viorel MICLĂUȘ
© Copyright 2017

Toate drepturile rezervate. Nici o parte din această lucrare nu poate fi reprodusă sub
nici o formă, prin nici un mijloc mecanic sau electronic, sau stocată într-o bază de date, fără
acordul prealabil, în scris, al autorilor.

e-ISBN 978-973-744-631-2

Director editură – Șef lucr. dr. Dan VODNAR

Referenţi ştiinţifici:

Prof. dr. Cornel Cătoi


Universitatea de Ştiinţe Agricole şi Medicină Veterinară Cluj-Napoca
Prof. dr. Liviu Ioan Oana
Universitatea de Ştiinţe Agricole şi Medicină Veterinară Cluj-Napoca

Materialul didactic a fost prezentat în şedinţa Departamentului Facultăţii de Medicină


Veterinară la data de 13.09.2017 şi aprobat în Consiliul Didactic în noiembrie 2017.

Editura AcademicPres
Universitatea de Ştiinţe Agricole şi Medicină Veterinară Cluj-Napoca
Calea Mănăştur, nr. 3, 400372 Cluj-Napoca
Tel. 0264-596384
Fax. 0264-593792
E-mail: eap@usamvcluj.ro

~2~
Table des matières
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°1 ...................................................................................... 5
Description du microscope optique ........................................................................................ 5
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°2 ...................................................................................... 8
Aspects de base concernant la microscopie optique et l'examen d’échantillons ................... 8
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°3 .................................................................................... 11
Technique histologique ........................................................................................................ 11
Préparation permanente .................................................................................................... 11
Interprétation d'une image microscopique ........................................................................... 13
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°4 .................................................................................... 17
Evaluation: microscope et technique histologique ............................................................... 17
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°5 .................................................................................... 18
Formes cellulaires remarquées en histologie ....................................................................... 18
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°6 .................................................................................... 22
Types et formes nucléaires (cytomorphologie) .................................................................... 22
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°7 .................................................................................... 27
Expansions membranaires permanentes (cytomorphologie)................................................ 27
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°8 .................................................................................... 32
Organites cellulaires – réticulum endoplasmique, appareil de Golgi, mitochondries .......... 32
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°9 .................................................................................... 38
Inclusions intracellulaires ..................................................................................................... 38
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°10 .................................................................................. 43
Inclusions intracellulaires (suite), cytosquelette cellulaire et jonctions d'ancrage ............... 43
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°11 .................................................................................. 49
Endocytose et exocytose ...................................................................................................... 49
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°12 .................................................................................. 53
Division cellulaire (mitose) et apoptose ............................................................................... 53
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°13 .................................................................................. 60
Révision des lames histologiques, des artefacts qui apparaissent dans les échantillons
histologiques et des lames supplémentaires ......................................................................... 60
BIBLIOGRAPHIE ............................................................................................................. 65

~3~
BIOLOGIE
CELLULAIRE
- TRAVAUX PRATIQUES -

Nom d'étudiant

~4~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°1

Description du microscope optique


Le microscope binoculaire permet l'examen avec les deux yeux. Il se compose de 3
parties: la partie mécanique, la partie optique et le système d'illumination.
La partie mécanique du microscope est représentée par le pied, la colonne, la platine
et le tube.
Le pied du microscope (socle) confère stabilité grâce à sa forme et son poids, et il
soutient également les autres composants. Sa forme est approximativement rectangulaire et à
l'intérieur, il contient la source lumineuse et certains des dispositifs qui transmettent le
faisceau vers l'avant. Sur la partie latérale du pied du microscope, il y a un bouton "on/off"et
un autre qui ajuste l'intensité du faisceau sur une échelle de 1 à 6.
La colonne du microscope (potence, statif, poignée) sert de support à la platine du
microscope et au système optique. Elle est ancrée au pied du microscope. Sur les côtés
latéraux de la colonne se trouvent les vis macrométriques et micrométriques, placés tous deux
sur le même axe. La vis macrométrique permet un mouvement vertical rapide (visible
macroscopiquement) de la platine du microscope (haut et bas). En utilisant la vis
macrométrique, l'examinateur obtient une image brute, qui nécessite un réglage
supplémentaire, en utilisant la vis micrométrique. La vis micrométrique améliore
significativement la qualité de l'image en déplaçant lentement la table du microscope (haut et
bas), mouvement qui ne peut être observé grossièrement (non visible macroscopiquement).
La platine du microscope est attachée à la colonne, et elle se compose de deux plaques
métalliques superposées. La plaque inférieure est fixe, tandis que celle supérieure est mobile
(surplatine). La première peut être déplacée vers l'avant et vers l'arrière en utilisant des
boutons spécifiques (vis de guidage). Dans la région centrale de la platine, se trouve
l'ouverture annulaire, qui permet le passage du faisceau lumineux à la lame microscopique
(échantillon histologique). La platine présente un support métallique (valets, chariot) dans la
partie supérieure qui stabilise l’échantillon pour un meilleur examen. Au-dessous de la
platine microscopique (le côté droit) il y a deux boutons placés sur le même axe (qui
permettent le mouvement vers l'avant et latéral de l’échantillon) – commande du chariot.
Celles-ci sont nécessaires pour pouvoir examiner correctement la lame.

~5~
La vis de réglage du condenseur est située sous la platine microscopique permettant
son mouvement vers le haut et vers le bas. En conséquence, la quantité de rayons lumineux
envoyée à l’échantillon peut être changée.
Le tube du microscope est interposé entre les objectifs et les prismes. Son partie
inférieure vient en contact avec le revolver (pièce tournante, tourelle porte-objectif), ce qui
permet d'apporter différents objectifs dans l'axe optique par rotation. La partie supérieure du
tube se fixe au prisme.
La partie optique a la structure suivante: objectifs, oculaires et système de prismes.
En général, le nombre d'objectifs est de 4 et ils sont montés sur le revolver. A
l'intérieur de chaque objectif se trouve un système de lentilles. Il y a des objectifs "secs"
(c'est-à-dire que l'air est interposé entre la lame microscopique et la première lentille de
l'objectif) et des objectifs "humides" (qui utilisent différents liquides pour obtenir l'image).
Les objectifs secs ont les capacités de grossissement suivantes: 4x, 10x et 40x. Le dernier
objectif (100x) est un objectif humide, qui est immergé dans un liquide visqueux pour obtenir
l'image.
Les deux oculaires sont en fait des tubes avec des lentilles à l'intérieur; ceux-ci sont
placés dans la partie supérieure du microscope. Ils ont différentes capacités de grossissement,
mais le plus souvent 10x. La distance inter-pupillaire peut être ajustée en fonction de chaque
personne. De plus, l’oculaire gauche peut être tourné pour correspondre aux anomalies
oculaires, spécifiques pour chaque personne.
Le système des prismes prend l'image de l'objectif et le distribue vers les deux
oculaires, à l'aide de prismes déviants. Ils confèrent également une image microscopique
binoculaire précise.
Le degré de grossissement du microscope peut être obtenu en multipliant les capacités
de grossissement de l'objectif et de l'oculaire: 40 (objectif) x 10 (oculaire) = 400x.
Le système d'illumination se compose de la source de lumière et des composants qui
transmettent le faisceau vers l'avant. La source de lumière est représentée par une ampoule
halogène de 6V et 20W.
Les structures qui transmettent le faisceau lumineux vers l'avant sont représentées par
toutes les composantes que le faisceau rencontre dans son trajectoire. Le collecteur est la
première structure qui réoriente la lumière dispersée qui provient de l'ampoule. Son but est de
disposer la lumière diffusée en rayons parallèles, qui sont dirigés à travers une fenêtre placée
dans la partie supérieure du pied du microscope. Le fascicule des rayons arrive ensuite au
diaphragme d'ouverture (qui peut changer le calibre), puis au condenseur. Le condenseur se

~6~
compose de deux lentilles, qui concentrent la lumière dans un point sur l’échantillon
microscopique. A partir de ce moment, le faisceau passe à travers l’échantillon
microscopique et puis dans l'objectif pour générer l'image microscopique.

Activité de laboratoire
Les étudiants doivent:
 identifier et étiqueter toutes les parties du microscope sur la figure ci-dessous (Fig. 1).

Fig. 1. Le microscope optique (Olympus CX22).


Mots-clés
 microscope optique;
 pied du microscope (socle);
 colonne (potence, statif, poignée, bras);
 vis macrométrique;
 vis micrométrique;
 platine du microscope;
 vis de rélage du condenseur;
 tube optique;
 revolver (pièce tournante, tourelle porte-objectif);
 objectifs;
 oculaires;
 système des prismes;
 diaphragme d'ouverture;
 condenseur.

~7~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°2

Aspects de base concernant la microscopie optique et l'examen d’échantillons

Les microscopes sont des outils essentiels dans les disciplines biologiques. Il y a deux
types élémentaires de microscope optique: le microscope composé et le microscope
stéréoscopique. Le microscope composé est utilisé pour inspecter le matériel cellulaire et
offre un degré d'agrandissement jusqu'à 400x. L'échantillon de tissu doit être translucide. Le
microscope stéréoscopique est utilisé pour analyser des structures entières en trois
dimensions. La caractéristique principale de tout ensemble de lentilles est son pouvoir de
résolution. Le pouvoir de résolution d'un système de lentilles est la distance la plus petite
séparant deux éléments qui peuvent être observés par le système de lentilles (c'est-à-dire que
les deux objets peuvent être observés comme deux éléments distincts plutôt qu'un seul). Par
exemple, la plupart des gens sont capables de voir deux lignes parallèles minces s'ils sont
séparés par 0,1 mm. Si les deux lignes sont plus rapprochées nous les voyons comme une
ligne solitaire. Par conséquent, le pouvoir de résolution de l'œil humain est d'environ 0,1 mm.
Cependant, le pouvoir de résolution d'un microscope optique est d'environ 0,0002 mm. En
général, la plupart des microscopes optiques sont munis avec trois objectifs qui magnifient
4x, 10x et 40x. Les oculaires ont généralement un grossissement de 10x.

Les étapes préparatoires à l'examen d'un échantillon sont les suivantes:

 Ajustez l'intensité du faisceau au niveau 3;


 Mettez le bouton ON/OFF sur la position ON;
 Abaissez la platine de microscope pour un meilleur accès;
 Placez l'échantillon avec la lamelle vers le haut et immobilisez l'échantillon avec les
valets;
 Centrez la section colorée au-dessus du point lumineux en utilisant les deux boutons
situés dans le côté droit du microscope (qui permettent le mouvement vers l'avant et
vers l'arrière de l'échantillon histologique);
 Apporter l'objectif 4x dans l'axe optique en tournant le revolver (pièce tournante,
tourelle porte-objectif) dans le sens des aiguilles d'une montre.
Le microscope est prêt à examiner avec les objectifs suivants: 4x, 10x, 40x. L'objectif
100x est utile dans des situations particulières.

~8~
Obtention de l'image microscopique
Chaque fois que nous examinons un échantillon, il est nécessaire de commencer par
l'objectif 4x, suivi par les autres objectifs.

Obtention de l'image avec objectif 4x

En regardant latéralement la lame (pas dans les oculaires), elevez la platine du


microscope dans la position la plus haute à l'aide de vis macrométrique. Maintenant, en
regardant dans les oculaires, déplacez la table du microscope vers le bas (lentement!!!),
jusqu'à obtenir l'image de base. Ensuite, ajustez l'image avec la vis micrométrique (mise au
point fine). À partir de ce moment, il suffit d'utiliser la vis micrométrique. Lorsque l'image
est claire, examinez l'échantillon à l'aide des boutons qui déplacent (latéralement et avant-
arrière) la platine microscopique, pour une inspection complète de la lame. En permanence
lors de l'examen des échantillons, l'image doit être améliorée à l'aide de vis micrométrique.
Cependant, lors de l'examen, une main doit être maintenue sur la vis micrométrique, tandis
que l'autre sur les boutons qui déplacent la platine (c'est-à-dire latéralement et avant-arrière).

Obtention de l'image avec objectif 10x

Sans modifier l'image obtenue avec l'objectif 4x, tournez le revolver pour amener
l'objectif 10x dans l'axe optique. En utilisant la vis micrométrique, ajustez et améliorez la
qualité de l'image. Si nécessaire, augmentez l'intensité du faisceau à l'aide du bouton qui
ajuste l'intensité de la lumière.

Obtention de l'image avec objectif 40x

Sans modifier l'image obtenue avec l'objectif 10x, tournez le revolver pour amener
l'objectif 40x dans l'axe optique. En utilisant la vis micrométrique, ajustez et améliorez la
qualité de l'image. Il est interdit d'utiliser la vis macrométrique (il est possible de briser la
lame). Si nécessaire, augmentez l'intensité du faisceau à l'aide du bouton qui ajuste l'intensité
de la lumière.

À la fin de l'examen, tournez le revolver au point où aucun objectif ne se trouve pas


dans l'axe optique. En utilisant la vis macrométrique, abaissez la platine et retirez la lame.

Chaque fois que vous commencez l'examen d’échantillons, utilisez l'objectif 4x.

~9~
Attention!!!
 La lame doit toujours être placée avec la lamelle vers le haut;
 Après avoir obtenu l'image avec l'objectif 4x, n'utilisez pas la vis macrometrique;
pour les autres objectifs (10x, 40x), seulement la vis micrométrique doit être utilisé;
 Si, au cours de l'examen des échantillons, vous avez perdu l'image, commencez
toute l'opération dès le début (c'est-à-dire en utilisant l'objectif 4x); n'essayez pas de
régler l'image à l'aide de vis macrométrique;
 N'utilisez pas la vis macrométrique pour les objectifs suivants: 10x, 40x, 100x (il est
possible de briser la lame).

Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
 pratiquer toutes les manœuvres décrites, avant d'utiliser le microscope et les
échantillons fournies;
 prouver au professeur responsable qu’ils ont obtenu des images microscopiques
avec des objectifs 4x, 10x et 40x;
 examiner l’échantillon en ajustant en permanence l'image microscopique; poser
autant de questions que possible sur les structures rencontrées dans le tissu évalué;
 retirer la lame examinée et examiner une autre en suivant les étapes de cette leçon;
évaluer un certain nombre d’échantillon pour améliorer la technique d'examen et
acquérir de l'expérience en suivant les étapes.

Mots-clés
 microscope optique;
 microscope composé;
 microscope stéréoscopique;
 échantillon de tissu;
 agrandissement;
 échantillon microscopique;
 examen d’échantillons.

~ 10 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°3

Technique histologique

L'examen d'un échantillon biologique (un petit fragment d'un tissu ou d'un organe) à
l'aide du microscope est possible en créant une lame histologique adéquate. Une lame
microscopique doit répondre aux conditions suivantes:
 être transparent afin que la lumière puisse le traverser;
 être préservé pendant une longue période de temps.
Il y a 2 types de préparations microscopiques: fraîche et permanente.

Préparation permanente
L'examen histologique des cellules, des tissus et des organes est possible sur ce type
de lames. Ils ont divers avantages, tels que: conservent les structures tissulaires, ont un
contraste supérieur et peuvent être conservés pendant une longue période de temps. Pour
obtenir la lame permanente, un processus complexe à plusieurs étapes est nécessaire:
prélèvement d'échantillons, fixation, lavage de l'échantillon (et décalcification si nécessaire),
inclusion, sectionnement, coloration et montage. Les deux premières étapes sont très
importantes et tout le personnel vétérinaire devrait les connaître; seuls les pathologistes
spécialisés doivent connaître les autres étapes.
Prélèvement d'échantillons
C'est le processus par lequel les tissus sont récoltés à partir d'animaux vivants ou de
cadavres. Des blocs tissulaires (c'est-à-dire des échantillons de tissus ayant une dimension
inférieure à 1 cm) peuvent être obtenus par biopsie (échantillonnage diagnostique), excision
chirurgicale ou dissection post-mortem. L'échantillon est coupé dans la taille et la
configuration correctes avant la fixation et la coupe avec le microtome. L'échantillon est
habituellement coupé en plusieurs sections. Afin d'éviter une détérioration structurelle, les
échantillons post-mortem doivent être récoltés dès que possible pour diminuer la distorsion
des tissus.
Afin de parvenir à un prélèvement correct de l'échantillon, il est essentiel de respecter
certaines règles de base:
 Utilisation d'outils adéquats et tranchants pour éviter la destruction des tissus.

~ 11 ~
 Lorsque les échantillons prélevés sur les cadavres sont recueillis, l'opération doit
être réalisée très rapidement après la mort afin d'éviter les modifications post-mortem.
 Les échantillons récoltés doivent être représentés par des coups de tissu de 5 mm,
qui permettent l'entrée de la substance de fixation (par exemple, le formol) dans
l'échantillon.
 Lorsque des lésions évidentes sont visibles à la surface du tissu récolté, la procédure
de récolte doit inclure à la fois la lésion et le tissu normal voisin.
 Les organes qui subissent des altérations post mortem rapides doivent d'abord être
récoltés (c'est-à-dire les glandes endocrines, la muqueuse gastrique et intestinale, le
système nerveux, les testicules, les reins, etc.).
 Immédiatement après la récolte de l'échantillon, les coupes de tissu doivent être
immergées dans un fixateur (pièce par pièce).
Fixation
Puisque les cellules et les tissus sont chimiquement et physiquement instables (et
aussi parce que les procédures histologiques suivantes peuvent détruire le tissu), les tissus
doivent être stabilisés et conservés pour minimiser les changements structurels et chimiques.
En conséquence, la fixation a le rôle d'interrompre les processus cellulaires et tissulaires et de
maintenir leur structure. La fixation préserve la structure cellulaire et maintient la répartition
des organites. La fixation doit avoir lieu rapidement pour inhiber la libération des enzymes
(présentes dans les cellules mortes) capables de digérer les composants tissulaires. Si la
dégradation des tissus se produit (c'est-à-dire une dégénérescence post-mortem), les détails
microscopiques ne sont pas appropriés pour le diagnostic. Les fixateurs conservent également
un certain nombre de macromolécules (par exemple des glucides, des lipides, etc.) qui
seraient autrement perdues lors de la préparation des tissus. De plus, la fixation de
l'échantillon tue les bactéries et d'autres agents nocifs, et son action antiseptique diminue le
risque de contamination lors de la manipulation de l'échantillon. La fixation peut également
augmenter la coloration des tissus. Les erreurs survenues à ce stade peuvent induire des
changements indésirables et irréversibles dans l'échantillon histologique final.
Dans la plupart des cas, des fixateurs liquides sont utilisées, telles que: alcool
éthylique et méthylique, acétone, chloroforme, acide acétique, acide trichlorureacétate, acide
picrique, formol etc. Les solutions présentées sont généralement combinées, sauf la dernière,
qui est fréquemment utilisée seule. Le plus utilisé est le formol tamponné 10%; il présente
l'avantage que les échantillons histologiques peuvent être conservés pendant une longue

~ 12 ~
période de temps sans changements tissulaires majeurs. C'est la raison pour laquelle le formol
est le principal produit de fixation utilisé.

Interprétation d'une image microscopique


En histologie, les tissus tridimensionnels sont visualisés en deux dimensions. Par
conséquent, il est vraiment important d'apprendre à voir avec l'œil de votre esprit et de
reconstruire la structure tridimensionnelle en analysant une image bidimensionnelle. Par
exemple, une section transversale à travers une structure tubulaire apparaît sous la forme d'un
anneau, alors qu'une section longitudinale apparaît sous la forme de deux bandes parallèles.
Comme défi supplémentaire, la plupart des sections passent obliquement à ces axes
perpendiculaires et, par conséquent, nécessitent une «reconstruction mentale» supplémentaire
de la structure tridimensionnelle à partir d'une bi-dimensionnelle.
De toutes les trois structures d'une cellule (c'est-à-dire la membrane, le cytoplasme et
le noyau), le noyau peut être remarqué sans difficulté, le cytoplasme est plus ou moins
évident, alors qu'en microscopie optique la membrane ne peut pas être détectée. Il est très
important de savoir que sur les lames histologiques régulières (utilisées pour l'examen de
microscopie optique), seule une coupe mince d'une cellule est observable, pas toute la cellule.
C'est pourquoi une lame histologique offre une image bidimensionnelle d'une structure
tridimensionnelle. Par exemple, au microscope, vous voyez une cellule ronde, pas sphérique,
et un noyau rond, pas sphérique.
Dans la Fig. 2 une grande cellule (l'œuf des oiseaux, qui est en fait une cellule) est
illustrée, qui peut également être examiné grossièrement. Les meilleures sections qui donnent
les meilleures informations sur les dimensions de l'œuf sont: la section longitudinale (à
travers l'axe central) et transversale (dans la région la plus large). Ces sections fournissent les
meilleures informations sur la taille et la forme de l'œuf. Des données significatives
pourraient être obtenues par certaines sections obliques et transversales, mais l'information
n'est pas complète, par rapport aux autres sections mentionnées. Les sections transversales ou
obliques peuvent créer des erreurs chez les individus inexpérimentés concernant la forme et
la taille réelles d'une cellule spécifique (l'œuf est rond en section transversale, pas ovale). Si
la section ne passe pas par le jaune de l'œuf (le noyau), une cellule sans noyau sera suggérée
(information incomplète). En conclusion, les lames histologiques affichent une coupe à
travers une cellule, pas toute la cellule.

~ 13 ~
Fig. 2. Différentes sections à travers un oeuf bouilli.
(A – section transversale; B – section longitudinale; C – section oblique).

Fig. 3. Coupe transversale et longitudinale dans les cellules musculaires lisses.

La Fig. 3 représente les formes qui peuvent apparaître en microscopie, qui


ressemblent à des cellules en forme de fuseau. Dans le corps de l'animal, on rencontre des
structures tubulaires (Fig. 4) et, lorsqu'elles sont vues au microscope optique, elles peuvent
avoir des tailles et des formes différentes (selon la section - longitudinale, transversale ou
oblique).

Fig. 4. Section du tube urinaire (I – section longitudinale;


II – section transversale; III – section oblique).
~ 14 ~
Des problèmes d'interprétation semblables peuvent apparaître lors de l'examen de
certains organes qui ont une capsule dont les septa se détachent, divisant l'organe en lobes et
lobules. Bien que les lobes aient plus ou moins la même taille et la même forme, il existe une
grande variabilité concernant la forme et la taille des lobules dans les images microscopiques
(selon la section). Le meilleur exemple est la coupe d'une orange dans différents angles (Fig.
5). Après l'examen des coupes obtenues, une grande variation de formes se rencontre. En
examinant plusieures coupes (à travers l'orange) il ya la possibilité de refaire (dans notre
esprit) la vraie forme et la taille de ses compartiments.

Fig. 5. Sections à travers une orange


(I – section transversale; II – section oblique; III – section longitudinale).
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
 pratiquer en laboratoire (à l'aide d'un tissu frais et des gants appropriés), la
procédure de prélèvement et de fixation des échantillons;
 de la même manière que les informations présentées dans les Figs. 2-5, effectuer un
certain nombre d'exercices dans le case ci-dessous; imaginer un certain nombre de
formes (cylindriques, cubiques, étoiles etc.) et essayer de comprendre les formes qui
pourraient apparaître en microscopie optique;
 discuter et présenter leur activité avec l'enseignant responsable.

Mots-clés
 préparation permanente;
 prélèvement d'échantillons;
 biopsie;
 modifications post-mortem;
 fixation, formol;
 lavage de l'échantillon, inclusion, sectionnement, coloration, montage;
 image microscopique.

~ 15 ~
Fiche d'exercices.

~ 16 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°4

Evaluation: microscope et technique histologique

En ce moment, les étudiants doivent connaître toutes les informations concernant la


technique histologique et les détails de base concernant les composants du microscope, y
compris comment travailler avec des échantillons histologiques. Afin de s'assurer que les
étudiants ont reçu l'information de manière appropriée et sont capables de travailler avec le
microscope, les sujets suivants doivent être préparés pour le test:

1. La platine du microscope. Description et rôles.


2. La colonne (potence, statif, poignée, bras) du microscope. Description et rôles.
3. Pied (socle) du microscope et du tube. Description et rôles.
4. Le système d'illumination du microscope. Description et rôles.
5. Les objectifs du microscope. Description et rôles.
6. Les oculaires et le système des prismes. Description et rôles.
7. Obtenir l'image microscopique à l'aide de l'objectif 4x.
8. Obtenir l'image microscopique à l'aide de l'objectif 10x.
9. Obtenir l'image microscopique à l'aide de l'objectif 40x.
10. Calculez le degré d'agrandissement pour les images obtenues avec les objectifs
rouge, jaune, bleu.
11. Prélèvement d'échantillons. Description et procédure.
12. Fixation de l'échantillon - définition et rôle.
13. Fixation de l'échantillon - exemples d'agents de fixation.
14. Comment ajuster les oculaires pour un examen microscopique parfait?
15. Vous avez perdu l'image que vous avez obtenue avec 40x. Que faites-vous
(montrer à l'aide de votre microscope)?

~ 17 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°5

Formes cellulaires remarquées en histologie

La cellule est l'unité élémentaire de la vie. Tous les organismes vivants comprennent
des cellules (ou une seule cellule), la plupart invisibles à l'œil nu. Les cellules sont bordées
par une membrane cellulaire et viennent dans d'innombrables formes dissemblables. Les
organismes se composent d'une ou plusieurs cellules, capables de mener les actions vitales
requises par l'organisme. La forme des cellules change en fonction des conditions chimiques,
physiques, de l'environnement et de leur rôle. En conséquence, les cellules situées dans un
environnement aqueux (comme les cellules sanguines) sont généralement de forme sphérique
ou ovale, mais leur forme peut subir certains changements dans certaines circonstances.
D'autre part, les cellules de certains organes ont des formes irrégulières à la suite de la
compression induite par les cellules voisines. Pour cette raison, les organes/tissus sont
constitués de cellules de formes différentes (par exemple polyédriques, cubiques,
cylindriques, étoilé, en forme de fuseau, aplaties, etc.).
Dans certaines circonstances, les cellules sont alignées sur une membrane basale et en
dessous se trouve le tissu conjonctif, les vaisseaux sanguins et les nerfs.
Les cellules cubiques possèdent des diamètres ou axes égaux et ont un noyau
sphérique. Pour être "cubique" les cellules doivent être environ aussi grandes que larges. La
forme, vue du haut, est plus ou moins hexagonale. En microscopie optique, les cellules
sphériques apparaissent comme des cercles de tailles différentes selon la section à travers la
cellule. Les cellules en forme de poir ressemblent à l'aspect du fruit mentionné. Les cellules
cylindriques sont celles qui sont plus hautes que larges, tandis que l'examen supérieur fournit
un aspect similaire avec les cellules cubiques. En coupe longitudinale, les cellules
cylindriques paraissent plus hautes que les cellules cubiques et possèdent des noyaux
ovoïdes.

Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
 travailler individuellement avec le microscope fourni, afin de pouvoir l'utiliser
facilement et améliorer la technique d'examen;
 n'oublier pas de commencer l'examen avec le petit objectif (4x) et seulement après
continuer avec les objectifs plus larges;

~ 18 ~
 d'abord, examiner tout l’échantillon puis trouver le sujet d'intérêt;
 identifier les cellules des échantillons et tracer des cellules (dans les cases ci-
dessous) de différentes formes trouvée dans les lames fournies;
 utiliser des crayons (colorés) pour tous les dessins;
 chaque dessin doit avoir une légende.

Mots-clés
 formes cellulaires;
 cellules cubiques;
 cellules cylindriques;
 cellules en forme de poir;
 cellules sphériques.
Lame n°1 - Cellules cubiques (glande thyroïde)

Fig. 6. Cellules cubiques dans la glande Fig. 7. Schéma de cellule cubique.


thyroïde (ob. 40x).
Zone pour le dessin d’observation.

~ 19 ~
Lame n°2 – Cellules cylindriques (estomac)

Fig. 8. Cellules cylindriques dans l'estomac Fig. 9. Schéma de cellule cylindrique.


(ob. 40x).

Zone pour le dessin d’observation.

Lame n°3 – Cellules en forme de poir (cervelet)

Fig. 10. Cellules en forme de poir dans le Fig. 11. Schéma de cellule en forme de poir.
cervelet (ob. 20x).

~ 20 ~
Zone pour le dessin d’observation.

Lame n°4 – Cellules sphériques (ganglion spinal)

Fig. 12. Cellules sphériques dans le Fig. 13. Schéma de cellule sphérique.
ganglion spinal (ob. 10x).

Zone pour le dessin d’observation.

~ 21 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°6

Types et formes nucléaires (cytomorphologie)

Le noyau est une structure hautement spécialisée qui traite l'information et est le
centre administratif de la cellule. Habituellement, la forme nucléaire ressemble à la forme de
la cellule. Par exemple, les cellules cubiques, sphériques ou polyédriques ont des noyaux
sphériques; les cellules fusiformes ont des noyaux allongés; les cellules cylindriques ont des
noyaux ovalaires; les cellules squameuses ont des noyaux aplaties. Cependant, certaines
exceptions peuvent être rencontrées, par exemple les leucocytes granulaires (qui sont des
cellules sphériques) présentent un noyau avec plusieurs lobes (2-5 lobes).
En général, le noyau est situé au centre, mais dans certaines cellules le noyau est
positionné dans d'autres zones intracellulaires. Structurellement, le noyau a un aspect typique,
constitué de l'enveloppe nucléaire, du nucléoplasme et du nucléole.
Cependant, pendant l'interphase, la chromatine peut apparaître sous forme
d'euchromatine et d'hétérochromatine. Les différences entre elles sont données par le degré
d'enroulement de l'ADN, qui est moins enroulé dans l'euchromatine et fortement enroulé dans
l'hétérochromatine. Euchromatine est la forme active de la chromatine, qui est impliqué dans
la transcription de l'ARN, dans le but de produire des protéines nécessaires pour les fonctions
cellulaires et la croissance. L'hétérochromatine ou la partie inactive de l'ADN est représentée
par certaines régions de la chromatine qui sont très condensées, de sorte que leur information
génétique ne peut être utilisée. En conséquence, certaines cellules peuvent présenter un noyau
euchromatique (petites masses granulaires de chromatine disséminées dans le nucléoplasme),
tandis que d'autres cellules peuvent avoir un noyau hétérochromatique (grandes masses
irrégulières de chromatine dans le nucléoplasme).

Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
 n'oublier pas de commencer l'examen avec le petit objectif (4x) et de poursuivre
avec des objectifs plus larges;
 d'abord, examiner tout l’échantillon et trouver le sujet d'intérêt;
 identifier les principales caractéristiques histologiques discutées dans ce laboratoire
(par example les noyaux euchromatiques et hétérochromatiques) et les illustrer (sous
forme de dessins) dans les cases ci-dessous;

~ 22 ~
 utiliser des crayons (colorés) pour tous dessins;
 chaque dessin doit avoir une légende.

Mots-clés
 noyau sphérique;
 noyau ovale;
 noyau lobé;
 noyau euchromatique;
 noyau hétérochromatique.

Lame n°1 – Cellules à noyaux sphériques (corps jaune - ovaire)

Fig. 14. Noyaux sphériques dans les Fig. 15. Schéma du noyau sphérique.
cellules du corps jaune (ovaire) (ob. 40x).

Zone pour le dessin d’observation.

~ 23 ~
Lame n°2 – Cellules à noyaux ovalaires (intestin grêle - jéjunum)

Fig. 16. Noyaux ovalaires dans les cellules Fig. 17. Schéma du noyau ovalaire.
de l'intestin grêle (ob. 40x).

Zone pour le dessin d’observation.

Lame n°3 – Cellules à noyaux lobés (frottis sanguin)

Fig. 18. Noyau lobé dans le neutrophile - Fig. 19. Schéma du noyau lobé.
centre du champ (ob. 40x).

~ 24 ~
Zone pour le dessin d’observation.

Lame n°4 – Noyaux euchromatiques (cervelet)

Fig. 20. Noyaux euchromatiques dans les Fig. 21. Schéma du noyau euchromatique.
cellules en forme de poir (cervelet; ob.40x).

Zone pour le dessin d’observation.

~ 25 ~
Lame n°5 – noyaux hétérochromatiques (rein)

Fig. 22. Noyaux hétérochromatiques Fig. 23. Schéma du noyau


(karyoplasme plus foncé) dans les tubes hétérochromatique.
collecteurs (ob. 40x).

Zone pour le dessin d’observation.

~ 26 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°7

Expansions membranaires permanentes (cytomorphologie)

La surface cellulaire n'est pas lisse car il existe des irrégularités et des prolongements
liés à la motilité cellulaire, à l'absorption et à la phagocytose. Les expansions permanentes
sont des structures stables, soutenues par des faisceaux actifs d'actine dans les microvillosités
et les stéréocils, ou par des microtubules dans les cils et les flagelles.
Les microvillosités sont des prolongements cellulaires cylindriques, en forme de
doigts, gainé de membrane, ayant une taille d'environ 0,51/0,08 μm. Ils sont localisés sur le
pôle apical de certaines cellules épithéliales (par exemple: des entérocytes, des cellules
rénales). Les microvillosités ont le rôle d'augmenter la surface d'absorption cellulaire
(environ 10-20 fois), en facilitant l'entrée des substances absorbées à l'intérieur de la cellule.
Ils sont présents partout où il est nécessaire d'augmenter la surface cellulaire sans
augmenter la taille des cellules, en particulier dans les régions où le processus d'absorption
est présent, comme l'intestin et le rein. Les microvillosités ne sont pas évidents
individuellement en microscopie optique, mais ils deviennent visibles comme un plateau strié
ou une bordure en brosse sur ces cellules absorbantes et peuvent être observés plus en détail
dans le microscope électronique.
Les stéréocils sont des microvillosités immobiles longues (pas des cils), qui peuvent
être observés en microscopie optique. Ils sont rencontrés dans l'épididyme (tractus génital
masculin) et dans l'oreille interne. Fonctionnellement, les stéréocils ont un rôle comparable
avec les microvillosités.
Les cils sont des structures longues et minces qui ont une taille d'environ 5-15 / 0,5
μm. Ils sont situés dans le pôle apical de certaines cellules épithéliales (par exemple: au-
dessus des cellules de l'épithélium nasal, de la trachée, du pharynx, de l'utérus, etc.). Chaque
cellule possède jusqu'à des milliers de cils.
Fonctionnellement, les cils sont présents dans certains épithéliums qui ont des liquides
à la surface. En déplaçant progressivement le fluide superficiel dans une seule direction
(généralement vers l'extérieur), les cils ont le rôle de nettoyer la surface de l'épithélium de
certaines cellules mortes, des substances et diverses particules qui sont arrivées de
l'environnement externe. En conséquence, dans l'épithélium trachéal, le rôle des cils est
d'arrêter les particules de poussière inhalée et de les transférer vers la région du pharynx.

~ 27 ~
Cependant, dans les oviductes, les cils ont le rôle d'aider la progression de l'ovocyte vers
l'utérus. Il y a une synchronisation ondulatoire dans le mouvement des cils.

Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
 n'oublier pas de commencer l'examen avec les petits objectifs (4x et 10x) et de
poursuivre avec des objectifs plus larges;
 d'abord, examiner tout l’échantillon et trouver le sujet d'intérêt;
 identifier les principales caractéristiques histologiques discutées dans ce laboratoire
(par example les microvillosités, stéréocils et cils) et les illustrer (sous forme de
dessins dans les cases ci-dessous);
 utiliser des crayons (colorés) pour tous les dessins;
 chaque dessin doit avoir une légende.

Mots-clés
 expansions membranaires;
 motilité cellulaire;
 absorption cellulaire;
 microvillosités;
 stéréocils;
 cils;
 flagelles.

Lame n°1 – Microvillosités (intestin grêle)

Fig. 24. Plateau strié (microvillosités) sur Fig. 25. Schéma des cellules présentant le
les pôles apicaux de cellules intestinales plateau strié.
(ob. 40x). .

~ 28 ~
Zone pour le dessin d’observation.

Lames n°2 et n°3 – Stéréocils dans l'épididyme et le canal déférent

Fig. 26. Stéréocils sur les pôles apicaux des Fig. 27. Schéma des cellules présentant des
cellules d'épididyme (ob. 40x). projections en forme de doigt, appelées
stéréocils.

Fig. 28. Stéréocils sur les pôles apicaux des Fig. 29. Schéma des cellules présentant des
cellules du canal déférent (ob. 40x). projections en forme de doigt, appelées
stéréocils.

~ 29 ~
Zone pour le dessin d’observation – Lame n°2 Zone pour le dessin d’observation - Lame n°3 (canal
(épididyme) déférent)

Lames n°4 et 5 – Cils dans la trachée et l'oviduct

Fig. 30. Cils dans les pôles apicaux des Fig. 31. Schéma des cellules avec des cils
cellules de la trachée (ob. 40x). dans la trachée.

Fig. 32. Cils discontinus dans les pôles Fig. 33. Schéma des cellules avec des cils
apicaux des cellules d'oviduct (ob. 40x). dans l'oviduct.
~ 30 ~
Zone pour le dessin d’observation - Lame n°4 Zone pour le dessin d’observation - Lame n°5
(trachée) (oviduct)

~ 31 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°8

Organites cellulaires – réticulum endoplasmique, appareil de Golgi, mitochondries

Les organites cellulaires sont des structures intracytoplasmiques de tailles différentes.


Certaines d'entre elles sont évidentes en microscopie optique, mais la plupart d'entre elles ne
sont détectables que par microscopie électronique. Les organites cellulaires sont représentés
par les mitochondries, les ribosomes, l'appareil de Golgi, le réticulum endoplasmique, les
peroxisomes, les lysosomes, etc.
Les ribosomes sont présents dans toutes les cellules procaryotes et eucaryotes, à
l'exception des globules rouges. Les ribosomes sont des structures granulaires d'environ 30
nm d'épaisseur. Certains ribosomes restent en suspension dans le cytoplasme, synthétisant des
protéines à utiliser dans la cellule. D'autres ribosomes adhèrent au réticulum endoplasmique
et produisent des protéines qui seront "exportées" à l'extérieur de la cellule. Les ribosomes
libres peuvent exister en tant que structures isolées ou plus souvent dans des groupes appelés
polyribosome ou polysome, qui peut être petit ou grand selon la molécule qui doit être
produite (les polyribosomes qui forment le collagène comprennent environ 100 ribosomes).
Au microscope optique, le cytoplasme d'une cellule qui élabore des protéines peut apparaître
bleu ou violet, aspect appelé basophilie cytoplasmique. La coloration bleue suggère une forte
affinité entre l'hématoxyline et les ribosomes. Dans la plupart des cas, la basophilie
cytoplasmique étendue suggère beaucoup de ribosomes libres, alors que la basophilie
cytoplasmique inconstante indique des zones de réticulum endoplasmique rugueux.
Le réticulum endoplasmique est un organite cytoplasmique qui a des noms différents
selon les cellules dans lesquelles il se trouve (par exemple, les corps de Nissl dans les
neurones, les corps de Berg dans les hépatocytes ou l'ergastoplasme dans le pancréas
exocrine). Il est présent dans toutes les cellules eucaryotes, à l'exception des globules rouges.
Le réticulum endoplasmique fabrique, traite et transmet une grande variété de composés
biochimiques utilisés à l'intérieur et à l'extérieur de la cellule. Il existe deux types de
réticulum endoplasmique: le réticulum endoplasmique rugueux (RER) et le réticulum
endoplasmique lisse (REL). Le réticulum endoplasmique rugueux (RER) est un ensemble de
sacs aplatis communiquant entre eux. Sa membrane présente des ribosomes attachés à la
surface. Le réticulum endoplasmique lisse (REL) se compose de tubes, de canaux et de
vésicules et ses membranes ne portent pas de ribosomes.

~ 32 ~
RER est impliqué principalement dans la production de protéines qui seront exportées
ou sécrétées par la cellule, ou conservées comme éléments structurels. En ce qui concerne le
REL, il est impliqué dans la production de lipides, dans le métabolisme des hydrates de
carbone, dans la biosynthèse du cholestérol et dans la désintoxication.
L'appareil de Golgi est le lieu où certaines protéines synthétisées dans le RER sont
modifiées (en général en ajoutant des glucides) et "emballées" en vésicules entourées de
membrane pour le transport à la surface de la cellule. L'appareil de Golgi est très actif et
visible dans les cellules qui ont une sécrétion intense. La position de l'appareil de Golgi dans
le cytosol dépend du type de cellule et de son activité. Dans les neurones, il est situé autour
du noyau tandis que dans les cellules exocrines (c'est-à-dire, les cellules sécrétoires), il a une
localisation supra-nucléaire. L'appareil de Golgi a des rôles différents, tels que le rôle
sécréteur, la biogenèse des lysosomes, le contrôle du système endomembranaire et la
formation de l'acrosome des spermatozoïdes.
Les mitochondries (du mot grec mitos - fil, chondros - granule) sont des organites
allongées qui se trouvent dans le cytoplasme de chaque cellule eucaryote (sauf les globules
rouges adultes). Leur nombre varie considérablement selon la cellule et sa fonction. Ces
organites sont les générateurs d'énergie de la cellule, transformant l'oxygène et les nutriments
en ATP (adénosine triphosphate). L'ATP est l'énergie chimique qui alimente les activités
métaboliques de la cellule. Ce processus s'appelle la respiration aérobie et est la raison pour
laquelle les animaux inhalent de l'oxygène.
Le nombre de mitochondries présentes dans une cellule dépend des exigences
métaboliques de cette cellule et peut varier d'une seule mitochondrie à des milliers de
mitochondries (le spermatozoïde a environ 25 mitochondries, cellule rénale – 300, cellule
hépatique - 2500). La taille d'une mitochondrie est d'environ 1 à 3 μm. Les mitochondries
peuvent adopter plusieurs formes (sphériques, hélicoïdales, ramifiées ou d'autres formes).
Habituellement, ils sont situés dans tout le cytosol, mais ils peuvent se regrouper dans
certaines régions cellulaires, telles que: le pôle apical de la cellule (par exemple, dans les
cellules intestinales), le pôle basal (dans les cellules rénales) ou autour du noyau (dans les
hépatocytes). En général, les mitochondries occupent environ 5 à 6% du volume cellulaire,
mais dans certaines cellules elles peuvent représenter environ 20% (dans les cellules
musculaires des muscles squelettiques, les cellules hépatiques) ou même 35% (dans les
cellules musculaires cardiaques), ce qu’indique leur importance pour les activités cellulaires.
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:

~ 33 ~
 identifier les organites intracellulaires présentés dans ce laboratoire (le RER,
l'appareil de Golgi et les mitochondries) et les illustrer dans les cases ci-dessous;
 pouvoir examiner les lames colorées avec différentes méthodes et reconnaître les
structures;
 commencer l'examen avec de petits objectifs (4x et 10x) puis observer les organites
cellulaires avec les objectifs plus larges.

Mots-clés
 organites cellulaires;
 microscopie électronique;
 ribosomes;
 réticulum endoplasmique, corps de Nissl;
 appareil de Golgi;
 mitochondries;
 ATP (adénosine triphosphate).

Lame n°1 – Réticulum endoplasmique (moelle épinière)

Fig. 34. Réticulum endoplasmique – masses Fig. 35. Schéma de cellule avec réticulum
basophiles granulaires dans le cytoplasme endoplasmique (corps de Nissl).
des neurones multipolaires (moelle épinière,
ob. 40x).

~ 34 ~
Zone pour le dessin d’observation.

Lames n°2 et 3 – Appareil de Golgi (ganglion spinal et pancréas)

Fig. 36. Appareil de Golgi – structures Fig. 37. Schéma de cellule avec des
granulaires dans le cytoplasme des neurones appareils de Golgi.
du ganglion spinal (ganglion spinal, ob.
40x).

Fig. 38. Appareil de Golgi dans le Fig. 39. Schéma d'acinus avec des cellules
cytoplasme des cellules acinaires (pancréas, contenant des appareils de Golgi.
ob. 40x).

~ 35 ~
Zone pour le dessin d’observation (gangion spinal) Zone pour le dessin d’observation (pancréas)

Lames n°4 et 5 – Mitochondries (rein et foie)

Fig. 40. Mitochondries – structures en Fig. 41. Schéma des cellules avec des
forme de tige dans le cytoplasme des mitochondries.
cellules des tubes urinaires (rein, ob. 60x).

Fig. 42. Mitochondries – structures Fig. 43. Schéma d'hépatocytes avec


granulaires et en forme de tige dans le mitochondries.
cytoplasme des hépatocytes (foie, ob. 40x).

~ 36 ~
Zone pour le dessin d’observation (rein) Zone pour le dessin d’observation (foie)

~ 37 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°9

Inclusions intracellulaires

Les inclusions cellulaires sont en fait des constituants qui ne sont pas constamment
présents dans le cytoplasme, mais qui sont considérés comme une partie commune de la
cellule. Les métabolites produits en excès peuvent être stockés temporairement ou
indéfiniment dans le cytoplasme. Les sources d'énergie (par exemple les glucides et les
lipides) ne sont pas stockées en permanence par chaque cellule. En dehors des hydrates de
carbone et des inclusions lipidiques, différents pigments, cristaux et cristalloïdes peuvent être
observés dans le cytosol.
Les glucides sont déposés dans le cytosol sous la forme de masses du glycogène,
fréquemment dans les hépatocytes et les cellules musculaires.
Les lipides s'accumulent principalement dans les cellules graisseuses du tissu adipeux,
mais dans certaines conditions, elles s'accumulent également dans d'autres cellules. Les
lipides sont stockés dans le cytosol comme des gouttes libres qui ne sont pas délimitées par
une membrane (par exemple, dans les hépatocytes, les cellules rénales, dans les cellules du
corps jaune dans l'ovaire).
Les protéines sont stockées exclusivement sous forme de granules sécrétoires. Des
grandes vésicules de sécrétion peuvent être identifiées par immersion dans les sections
microscopiques. Après la fixation, le contenu coagulé de ces vésicules a un aspect granuleux.
Les cellules des glandes acineuses (par exemple, le pancréas) accumulent leurs produits de
sécrétion en grandes quantités, préparées pour être évacuées si nécessaire. De telles structures
sont également connues sous le nom de granules de zymogène car elles comprennent des
enzymes ou des précurseurs d'enzymes. La coloration acidophile de leur substance protéique
est visible dans les coupes colorées au H & E.
Pigments cellulaires - un certain nombre de tissus sont intrinsèquement colorés avec
des composés naturels appelés pigments cellulaires. Les pigments exogènes proviennent de
l'extérieur du corps, alors que les pigments endogènes sont créés par la cellule elle-même.
Des exemples de pigments exogènes sont le pigment de carbone et les pigments carténoïdes
ou lipochromes.

~ 38 ~
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
 identifier les inclusions de lipides, de glycogène et de protéines au niveau
intracellulaire et les illustrer dans les cases ci-dessous;
 être capable de travailler avec les lames colorées par différentes méthodes afin de
mettre en évidence certains constituants cytoplasmiques.

Mots-clés
- inclusions cellulaires;
- inclusions de glucides;
- inclusions lipidiques;
- inclusions protéiques;
- cristalloïdes;
- pigments exogènes;
- pigments endogènes;
- pigment de carbone.

Lame n°1 - Inclusions de glycogène (foie)

Fig. 44. Inclusions de glycogène - Masse Fig. 45. Schéma des inclusions
cytoplasmique diffuse acidophile (plus intracytoplasmiques de glycogène.
sombre) dans les cellules hépatiques
(coloration PAS, ob. 100x).

~ 39 ~
Zone pour le dessin d’observation.

Lame n°2 - Inclusions lipidiques (foie)

Fig. 46. Inclusions lipidiques –vacuoles Fig. 47. Schéma des inclusions lipidiques
inégales de lipides dans les cellules intracytoplasmiques.
hépatiques (ob. 40x).
Zone pour le dessin d’observation.

~ 40 ~
Lame n°3 - Inclusions protéiques (glande sous-maxillaire)

Fig. 48. Inclusions protéiques - granules Fig. 49. Schéma des inclusions protéiques
sécrétoires protéiques dans les cellules de intracytoplasmiques.
glande sous-maxillaire (ob 40x).
Zone pour le dessin d’observation.

Lames n°4 et n°5 – Inclusions de pigments (corps ciliaire et macrophages)

Fig. 50. Inclusions de pigments (mélanine) Fig. 51. Schéma des inclusions pigmentaires
- corps ciliaire (ob. 40x). intracytoplasmiques (mélanine).

~ 41 ~
Fig. 52. Inclusions de pigment - Fig. 53. Schéma des inclusions de pigment
macrophages avec pigment de carbone, de carbone intracytoplasmiques.
poumon (ob. 40x).
Zone pour le dessin d’observation (mélanine) Zone pour le dessin d’observation (pigment de
carbone)

~ 42 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°10

Inclusions intracellulaires (suite), cytosquelette cellulaire et jonctions d'ancrage

Le cytosquelette est une structure dynamique qui maintient le contour de la cellule et


permet le mouvement cellulaire. Il est également impliqué dans d'autres processus comme la
phagocytose, la division cellulaire, et participe à l'ancrage des cellules les unes aux autres. Le
cytosquelette contient des fibres protéiques complexes et il apparaît comme un réseau dans
tout le cytoplasme. Les fibres protéiques qui forment le cytosquelette sont: les filaments, les
microtubules et les filaments intermédiaires.
Les filaments sont présents dans le cytoplasme de toutes les cellules eucaryotes, et
plus abondants dans les cellules qui sont mobiles et se déplacent à travers les tissus.
Structurellement, ce sont des protéines fibrillaires contractiles, présentes dans tous les types
cellulaires. Il y a deux types de fibres: les microfilaments (qui sont similaires aux filaments
fins des cellules musculaires) et les filaments épais (qui sont présents dans les cellules
musculaires et peuvent être présents dans une variété plus transitoire et beaucoup plus courte
dans d'autres types cellulaires).
Les filaments minces et épais du muscle cardiaque et squelettique sont disposés de
manière à faciliter leur interaction afin de produire des contractions.
Les microtubules sont de cylindres droits et longs qui peuvent être rencontrés dans
tout le cytoplasme et effectuent un certain nombre de fonctions. Ces microtubules sont
composés de polymères linéaires de tubuline, qui sont des protéines globulaires, et peuvent
augmenter ou diminuer en longueur en ajoutant ou en retirant des protéines de tubuline.
Les fonctions principales des microtubules sont présentées ci-dessous:
- fournissent la forme cellulaire, en particulier dans les cellules polymorphes qui
possèdent des prolongements cytoplasmiques (les dendrites et l'axone neuronales);
- éléments structuraux les plus importants des cils et des flagelles;
- participent à la formation de fibres du fuseau, dans la division cellulaire (mitose);
- permettent le mouvement de certaines structures cellulaires, telles que les organites.
Les microtubules soutiennent et fournissent la motilité et le transport intracellulaire.
Les microtubules inflexibles confèrent le support interne essentiel aux cellules. Le rôle des
microtubules dans la stabilisation de forme cellulaire est le plus évident dans les cellules avec
un contour irrégulier (les fibres nerveuses qui ont des microtubules à l'intérieur). Les
plaquettes sanguines contiennent une collection marginale de microtubules à leur périphérie

~ 43 ~
qui préserve leur forme discoïde. Dans les flagelles et les cils, les forces mécaniques créées
entre les microtubules de doublet entraînent une motilité.
Les filaments intermédiaires ont un diamètre intermédiaire (environ 10 nm
d'épaisseur) entre les microfilaments (5 nm) et les microtubules (25 nm). Ils ont une
construction protéique et sont représentés par des éléments spécifiques comme dans les cas
suivants (qui sont tous FI): la cytokératine qui est présente uniquement dans les cellules
épithéliales, les neurofilaments (les longs, fins fils qui créent une neurofibrille) qui se
trouvent seulement dans les cellules nerveuses, les gliofilaments existant dans les cellules
gliales, ou la desmine présente dans les cellules musculaires, etc.
Les filaments intermédiaires sont visibles comme un réseau dans le cytoplasme. La
capacité contractile des filaments intermédiaires est attribuable à l'interaction entre l’actine
(microfilament) et une protéine contractile supplémentaire appelée myosine. Les filaments
intermédiaires ne peuvent pas se contracter. Ils ne sont pas impliqués dans le mouvement
cellulaire mais confèrent un soutien mécanique aux cellules.
Les filaments intermédiaires représentent un groupe hétérogène de filaments avec une
composition protéique variée. Les principaux sous-types acceptés sont présentés dans le
Tableau 1 (avec certains types de cellules dans lesquels ils sont présents). La localisation
intracellulaire des filaments intermédiaires suggère qu'ils ont des fonctions supplémentaires
de soutenir des cellules et maintenir des formes irrégulières. Dans un certain nombre de
situations, ces filaments transmettent et répartissent les forces de traction dans toute la cellule
(cellules musculaires lisses: les faisceaux de filaments intermédiaires étendent la contraction
aux zones d'ancrage sur la membrane cellulaire). Des paquets de filaments de kératine
(tonofilaments, kératofilaments) attachés à la membrane cellulaire des kératinocytes
transmettent les forces de stress, permettant à l'épiderme de résister à un traitement brutal.

Tableau 1. Principaux sous-types des filaments intermédiaires.


Protéines constitutives Types de cellules

Kératines (en tonofilaments) - type I ou acide et type II Cellules épithéliales


ou basique
Vimentine Cellules dérivées de mésenchyme
Cellules dérivées de neuroectoderme
Desmine Cellules musculaires
Filaments gliaux (protéine fibrillaire acide gliale, de Astrocytes et autres cellules gliales
l'anglais, glial fibrillary acidic protein ou GFAP)
Neurofilaments (e.g., NF-L, NF-M, NF-H, α Neurones
Internexine)
Périphérine Neurones périphériques
Lamines A, B, and C Lamina nucléaire de toutes les cellules nucléée

~ 44 ~
Jonctions cellulaires
Les tissus sont constitués d'un grand nombre de cellules qui sont maintenues
ensemble par certaines structures qui les attachent et les ancrent. Ces structures
spécialisées de la membrane plasmique s'appellent: jonctions intercellulaires.
Les desmosomes (macula adherens) sont de connexions intercellulaires focales qui
fixent les cellules entre elles en utilisant de petites zones de 25 à 30 nm. Ils sont
nombreux dans les épithéliums qui doivent résister à l'abrasion. En conséquence, les
desmosomes sont fréquemment rencontrés sur la surface de certains épithéliums de
revêtement (par exemple, l'épiderme, la cavité buccale et la muqueuse épithéliale
œsophagienne).
.

Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
 identifier les structures appartenant au cytosquelette cytoplasmique et les jonctions
cellulaires et les illustrer dans les cases ci-dessous;
 commencer l'examen avec de petits objectifs (4x) et ensuite observer le
cytosquelette cytoplasmique en utilisant des objectifs plus grands.

Mots-clés
 cytosquelette;
 filaments;
 microtubules;
 filaments intermédiaires;
 neurofilaments;
 jonctions intercellulaires;
 tonofilaments / kératofilaments;
 desmosomes.

~ 45 ~
Lame n°1- Inclusions vitellines (ovocyte, poisson)

Fig. 54. Inclusions vitellines - inclusions Fig. 55. Schéma des inclusions
granulaires irrégulières dans le cytoplasme intracytoplasmiques.
(ovaire de poisson, ob 100x).
Zone pour le dessin d’observation.

Lames n°2 et n°3 - Filaments intermédiaires: kératofilaments (peau),


neurofilaments (neurones)

Fig. 56. Tonofilaments - filaments Fig. 57. Schéma des kératofilaments


intermédiaires de kératine dans l'épithélium cytoplasmiques.
(peau, ob 40x).

~ 46 ~
Fig. 58. Neurofilaments dans le cytoplasme Fig. 59. Schéma des neurofilaments
des neurones (moelle épinière, ob. 40x). cytoplasmiques.
Zone pour le dessin d’observation (kératofilaments Zone pour le dessin d’observation (neurofilament –
– peau) moelle épinière)

Lame n°4 - Desmosomes (peau)

Fig. 60. Desmosomes - structures Fig. 61. Schéma des cellules avec
semblables à des bâtonnets entre les desmosomes.
cellules de la peau (ob. 100x).

~ 47 ~
Zone pour le dessin d’observation.

~ 48 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°11

Endocytose et exocytose

Le transport à l'aide de membranes est une forme particulière de transport caractérisée


par un apport cellulaire ou une expulsion de la matrice extracellulaire de certaines particules
ou liquides. Il existe trois formes de transport utilisant des membranes: l'exocytose, la
transcytose et l'endocytose.
Par l'exocytose, les cellules éliminent dans la matrice extracellulaire divers produits
ou substances de sécrétion entraînant l'évolution du métabolisme cellulaire.
Dans certaines circonstances, les substances doivent traverser la cellule pour être
libérées de l'autre côté de la cellule sans changement, un processus appelé transcytose.
Grâce à l'endocytose, les cellules absorbent certaines particules de l'environnement
extracellulaire et fabriquent des vésicules intracytoplasmiques bordées par des membranes
(qui proviennent régulièrement de la membrane plasmique de la cellule). Les types suivants
d'endocytose ont été décrits: la phagocytose et la pinocytose.
La phagocytose est une modalité d'endocytose qui implique des particules, avec une
quantité limitée de liquide intercellulaire. Chez les mammifères, certaines cellules peuvent
ingérer des bactéries, des parasites, des résidus cellulaires ou des cellules dégénérées/vieillies
par le processus de phagocytose (comme un mécanisme d'autodéfense du corps), qui sont
ensuite neutralisés. La phagocytose est réalisée par les phagocytes, qui sont représentés par
les microphages et les macrophages.
Les microphages sont capables de phagocyter de petites particules. Les microphages
les plus actifs comprennent les neutrophiles et dans une moindre mesure les éosinophiles.
Les macrophages sont capables de phagocyter des particules plus grosses (Fig. 62) et
ils sont localisés dans tous les types de tissus conjonctifs, avec un nombre élevé dans les
tissus périphériques (par exemple, dans le tissu conjonctif des muqueuses, de la peau ou
autour des vaisseaux).
Tous les phagocytes possèdent des récepteurs superficiels qui sont capables
d'identifier et de distinguer ses propres structures des structures étrangères. En outre, ces
cellules ont également la capacité de distinguer les structures propres qui sont modifiées
(c'est-à-dire les cellules dégénérées ou âgées, les cellules cancéreuses, etc.).
Après la diapédèse, les leucocytes migrent vers l'endroit affecté en raison de
l'existence de certains facteurs de chimiotaxie (c'est-à-dire, attirant des stimuli chimiques).

~ 49 ~
Brièvement, la phagocytose comprend trois phases: la reconnaissance des particules et son
adhésion au phagocyte, l'absorption des particules et la formation du phagosome, et la
dégradation ultérieure du phagosome.
La pinocytose est un type d'endocytose qui suppose l'ingestion de liquides interstitiels
avec quelques particules locales (Fig. 66). De cette façon, les cellules ingèrent les produits
requis pour les processus intracellulaires. Il y a deux types de pinocytose: la pinocytose
indépendante du récepteurs et la pinocytose dépendante du récepteurs (ou pinocytose
sélective).
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
 identifier les cellules impliquées dans la phagocytose et les processus de sécrétion
dans les lames fournies et les illustrer dans les cases ci-dessous;
 commencer l'examen avec le petit objectif (4x) et observer les particules englouties
ou les liquides avec les objectifs plus grands.
Mots-clés
 endocytose;
 phagocytose;
 pinocytose;
 microphages, macrophages;
 exocytose;
 transcytose.
Lames n°1 et n°2 - Phagocytose (ganglion lymphatique et frottis sanguin)

Fig. 62. Phagocytose - globules rouges Fig. 63. Schéma de macrophage avec des
ingérés par les macrophages (ganglion particules solides ingérées.
lymphatique, ob 40x).

~ 50 ~
Fig. 64. Phagocytose - microphages Fig. 65. Schéma de microphages sanguins
sanguins ingérant des bactéries (ob. 40x). avec des bactéries ingérées.
Zone pour le dessin d’observation - Lame 1 Zone pour le dessin d’observation - Lame 2 (frottis
(ganglion lymphatique) sanguin)

Lame n°3 - Pinocytose (foie)

Fig. 66. Pinocytose - encre noire ingérée par Fig. 67. Schéma de la pinocytose.
des cellules de Kupffer du foie (ob. 40x).

~ 51 ~
Zone pour le dessin d’observation.

Lames n°4 - Sécrétion apocrine (glandes sudoripares dans la peau)

Fig. 68. Sécrétion apocrine - granules de Fig. 69. Schéma de sécrétion apocrine.
sécrétion dans les pôles apicaux des cellules
des glandes sudoripares (ob 40x).
Zone pour le dessin d’observation.

~ 52 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°12

Division cellulaire (mitose) et apoptose


Division cellulaire
L'interphase est la période de temps entre deux divisions, lorsque la cellule manifeste
ses propres fonctions spécifiques. À la fin de l'interphase, la cellule est préparée pour la
division (mitose ou méiose).
La mitose est la division des cellules somatiques chez les mammifères, et elle consiste
dans la division nucléaire (caryokinèse) et la division cytoplasmique (cytokinèse). La mitose
est caractérisée par une distribution égale du matériel génétique dans les deux cellules filles.
La mitose est commune dans toutes les cellules somatiques et elle est impliquée dans le
développement cellulaire et la différenciation, le renouvellement cellulaire (ou la
régénération physiologique) et la réparation tissulaire.
La mitose comporte quatre phases: la prophase, la métaphase, l'anaphase et la
télophase.
Prophase (vient du grec πρό, signifiant "avant" et φάσις, signifiant "stade"). Dans
cette phase, le nucléole et l'enveloppe nucléaire disparaissent, ce qui détermine le mélange du
nucléoplasme avec le cytosol.
En métaphase (vient du grec μετα, signifiant "après"), les chromosomes sont disposés
le long de la plaque métaphasique ou dans le plan équatorial de la cellule.
Dans l'anaphase (vient du grec ανα, signifiant «en haut», «contre», «en arrière»), les
chromosomes se séparent en deux groupes distincts, qui commencent la migration vers les
pôles opposés de la cellule.
Télophase (vient du grec τελος signifiant "fin"). La phase commence lorsque les deux
groupes de chromosomes arrivent aux pôles opposés de la cellule. En télophase tardive, les
fibres du fuseau mitotique se désintègrent et les chromosomes sont disposés en deux groupes
dans les pôles opposés de la cellule. Les deux groupes de chromosomes reviennent à l'état de
chromatine et les nucléoles réapparaissent. Dans la zone centrale de la cellule en division, le
cytoplasme est étranglé jusqu'à la réalisation de la séparation totale des cellules filles,
processus appelé cytodiérèse.

Informations générales – apoptose


Un certain nombre de cellules présentes sur une coupe histologique étaient déjà
mortes au moment où le tissu a été récolté. Pour cette raison, l'identification de cellules déjà

~ 53 ~
mourantes ou mortes a une signification diagnostique considérable en histopathologie. En
conséquence, les cellules peuvent mourir dans des conditions physiologiques (cellules
sénescentes). Dans de telles circonstances, la mort cellulaire résulte en déclenchant un
programme intrinsèque d'auto-destruction, appelé apoptose (du grec apo - loin de, et ptõsis -
chute) ou mort cellulaire programmée.
Morphologiquement, il est essentiel de réaliser que la forme du noyau est l'un des
marqueurs les plus cohérents de la santé des cellules. Les principales caractéristiques
nucléaires de la mort cellulaire sont (1) la pycnose, (2) la caryorrhexie et (3) la caryolyse.
Pendant la pycnose, le noyau d'une cellule mourante se rétrécit dans une masse homogène
profondément basophile, une altération appelée pycnose. Karyorrhexis (du grec rhexis,
rupture) - le noyau d'une cellule mourante se décompose en fragments minuscules. La
caryolyse (de la lyse grecque, la dissolution) - est la continuation de la perte histologique du
noyau, qui devient plus pâle, jusqu'à ce qu'aucun reste ne puisse être remarqué.
Quelques autres caractéristiques morphologiques de l'apoptose sont:
- rétrécissement cellulaire: la cellule est plus petite et le cytoplasme est dense;
- condensation de la chromatine: la chromatine s'agglomère périphériquement (sous la
membrane nucléaire) en masses denses de formes et de tailles diverses, et le noyau
peut se fragmenter en produisant deux ou plusieurs fragments;
- formation de corps apoptotiques: la cellule apoptotique montre d'abord un
bourgeonnement étendu de la surface, puis se désintègre en corps apoptotiques
entourés d'une membrane, composés de cytoplasme et d'organites emballés, avec ou
sans fragments nucléaires;
- la phagocytose des cellules apoptotiques par les cellules de la ligne macrophage.
À l'examen histologique, dans les tissus colorés à l'hématoxyline et à l'éosine,
l'apoptose implique des cellules individuelles ou de petites groupes de cellules. La cellule
apoptotique apparaît comme une masse ronde ou ovale de cytoplasme intensément
éosinophile avec des fragments de chromatine nucléaire dense.

Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
 commencer l'examen avec le petit objectif (4x) et ensuite observer des cellules
mitotiques / apoptotiques avec des objectifs plus larges;
 identifier les cellules impliquées dans la mitose et l'apoptose;
 détecter et catégoriser les phases mitotiques dans les images microscopiques;

~ 54 ~
 réaliser des dessins pour chaque phase de la mitose dans les cellules végétales
initialement (racines d'oignon), et puis dans les cellules animales;
 reproduisent fidèlement dans les dessins les principales caractéristiques
cytoplasmiques et nucléaires observées dans les échantillons histologiques.

Mots-clés
- interphase;
- division cellulaire;
- mitose;
- prophase, métaphase, anaphase, télophase;
- apoptose;
- mort cellulaire programmée;
- corps apoptotiques.
Lame n°1 - Mitose dans les cellules végétales (racines d'oignon)

Fig. 70. Division dans les cellules végétales Fig. 71. Division dans les cellules végétales
(oignon) - l'interphase (flèche noire) et la (oignon) - la métaphase (flèche noire) et
prophase (flèche blanche); ob. 40x. l'anaphase (flèche blanche); ob. 40x.

Fig. 72. Division dans les cellules végétales Fig. 73. Schéma de l'interphase (aspect d'une
(oignon) - la télophase (flèche blanche); ob. cellule amitotique).
40x.

~ 55 ~
Fig. 74. Schéma de la prophase. Fig. 75. Schéma de la métaphase.

Fig. 76. Schéma de l'anaphase. Fig. 77. Schéma de la télophase

Zone pour le dessin d’observation - Lame 1 Zone pour le dessin d’observation - Lame1
(prophase) (métaphase)

~ 56 ~
Zone pour le dessin d’observation - Lame 1 Zone pour le dessin d’observation – Lame
(anaphase) 1(télophase)

Lame n°2 - Mitose dans les cellules animales (intestin grêle)

Fig. 78. Division dans les cellules animales Fig. 79. Division dans les cellules animales
- la prophase (flèche); ob. 40x. - la métaphase (flèche); ob. 40x.

Fig. 80. Division dans les cellules animales Fig. 81. Schéma de l'interphase (aspect
- l'anaphase (flèche blanche) et la télophase d'une cellule amitotique).
(flèche noire); ob. 40x.

~ 57 ~
Fig. 82. Schéma de la prophase. Fig. 83. Schéma de la métaphase.

Fig. 84. Schéma de l'anaphase. Fig. 85. Schéma de la télophase


Zone pour le dessin d’observation - Lame 2 Zone pour le dessin d’observation - Lame 2
(prophase) (métaphase)

~ 58 ~
Zone pour le dessin d’observation - Lame 2 Zone pour le dessin d’observation - Lame
(anaphase) 2(télophase)

Lame n°3 - Apoptose (cornée de l'oeil)

Fig. 86. Apoptose - cellules individuelles Fig. 87. Schéma de l'apoptose.


dans l'apoptose (cornée, ob. 40x).

Zone pour le dessin d’observation.

~ 59 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°13

Révision des lames histologiques, des artefacts qui apparaissent dans les échantillons
histologiques et des lames supplémentaires

Artefacts histologiques
Le terme artefact est utilisé pour désigner toutes les caractéristiques d'une section de
tissu qui sont présentes à la suite du traitement des tissus. Ceux-ci comprennent des
déchirures et des plis, artefacts de rétrécissement, des espaces résultant de contenus
cellulaires extraits (par exemple des lipides, des précipités) et des organelles redistribués.
Dégénérescence post-mortem
La dégénérescence post-mortem résulte en retardant la fixation tissulaire. Une fixation
rapide et complète est nécessaire. Si la fixation n'a pas lieu, la privation d'oxygène libère des
enzymes destructrices des lysosomes. Les enzymes libérées digèrent les cellules de l'intérieur
(dégénérescence post-mortem).
Artefact de rétrécissement
La plupart des réactifs utilisés pour préparer les échantillons de paraffine provoquent
un rétrécissement marqué des tissus. Le rétrécissement crée la fausse impression que les
composants histologiques sont séparés par des espaces clairs. Les espaces vides sont toujours
suspects.
Des précipités
Toute particule dans les sections devrait être mise en doute. Par exemple, dans des
tissus qui sont fixés avec une formaline tamponnée inadéquate (solution de formaldehyde),
qui est acide, l'hémoglobine peut précipiter sous la forme d'un pigment brun granuleux
artificiel.
Plis de tissus
Les sections peuvent se replier lorsqu'elles sont attachées à des lames.
Coups de couteau (microtome)
Lors de la section des échantillons, les imperfections de partie coupante de couteau
peuvent produire des lignes droites à travers les sections (rayures). Les lignes résultantes
peuvent déformer le tissu sectionné.
Manipulation brutale
Une manipulation brutale inappropriée peut altérer l'aspect microscopique des tissus.

~ 60 ~
Lames supplémentaires
Dans les cases ci-dessous, les étudiants peut réaliser des dessins de lames
supplémentaires. Toutefois, certains dessins inappropriés, effectués pendant le semestre
peuvent être améliorés ou refaits ici.
Mots-clés
 artéfact histologique;
 dégénérescence post-mortem;
 artefact de rétrécissement;
 précipitation/sédiment;
 plis histologiques;
 coups de couteau;
 manipulation brutale.

Activité supplémentaire.

~ 61 ~
Activité supplémentaire.

~ 62 ~
Activité supplémentaire.

~ 63 ~
Activité supplémentaire.

~ 64 ~
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