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Flavia RUXANDA
Adrian Florin GAL
Viorel MICLĂUȘ
© Copyright 2017
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nici o formă, prin nici un mijloc mecanic sau electronic, sau stocată într-o bază de date, fără
acordul prealabil, în scris, al autorilor.
e-ISBN 978-973-744-631-2
Referenţi ştiinţifici:
Editura AcademicPres
Universitatea de Ştiinţe Agricole şi Medicină Veterinară Cluj-Napoca
Calea Mănăştur, nr. 3, 400372 Cluj-Napoca
Tel. 0264-596384
Fax. 0264-593792
E-mail: eap@usamvcluj.ro
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Table des matières
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°1 ...................................................................................... 5
Description du microscope optique ........................................................................................ 5
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°2 ...................................................................................... 8
Aspects de base concernant la microscopie optique et l'examen d’échantillons ................... 8
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°3 .................................................................................... 11
Technique histologique ........................................................................................................ 11
Préparation permanente .................................................................................................... 11
Interprétation d'une image microscopique ........................................................................... 13
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°4 .................................................................................... 17
Evaluation: microscope et technique histologique ............................................................... 17
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°5 .................................................................................... 18
Formes cellulaires remarquées en histologie ....................................................................... 18
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°6 .................................................................................... 22
Types et formes nucléaires (cytomorphologie) .................................................................... 22
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°7 .................................................................................... 27
Expansions membranaires permanentes (cytomorphologie)................................................ 27
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°8 .................................................................................... 32
Organites cellulaires – réticulum endoplasmique, appareil de Golgi, mitochondries .......... 32
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°9 .................................................................................... 38
Inclusions intracellulaires ..................................................................................................... 38
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°10 .................................................................................. 43
Inclusions intracellulaires (suite), cytosquelette cellulaire et jonctions d'ancrage ............... 43
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°11 .................................................................................. 49
Endocytose et exocytose ...................................................................................................... 49
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°12 .................................................................................. 53
Division cellulaire (mitose) et apoptose ............................................................................... 53
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°13 .................................................................................. 60
Révision des lames histologiques, des artefacts qui apparaissent dans les échantillons
histologiques et des lames supplémentaires ......................................................................... 60
BIBLIOGRAPHIE ............................................................................................................. 65
~3~
BIOLOGIE
CELLULAIRE
- TRAVAUX PRATIQUES -
Nom d'étudiant
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ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°1
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La vis de réglage du condenseur est située sous la platine microscopique permettant
son mouvement vers le haut et vers le bas. En conséquence, la quantité de rayons lumineux
envoyée à l’échantillon peut être changée.
Le tube du microscope est interposé entre les objectifs et les prismes. Son partie
inférieure vient en contact avec le revolver (pièce tournante, tourelle porte-objectif), ce qui
permet d'apporter différents objectifs dans l'axe optique par rotation. La partie supérieure du
tube se fixe au prisme.
La partie optique a la structure suivante: objectifs, oculaires et système de prismes.
En général, le nombre d'objectifs est de 4 et ils sont montés sur le revolver. A
l'intérieur de chaque objectif se trouve un système de lentilles. Il y a des objectifs "secs"
(c'est-à-dire que l'air est interposé entre la lame microscopique et la première lentille de
l'objectif) et des objectifs "humides" (qui utilisent différents liquides pour obtenir l'image).
Les objectifs secs ont les capacités de grossissement suivantes: 4x, 10x et 40x. Le dernier
objectif (100x) est un objectif humide, qui est immergé dans un liquide visqueux pour obtenir
l'image.
Les deux oculaires sont en fait des tubes avec des lentilles à l'intérieur; ceux-ci sont
placés dans la partie supérieure du microscope. Ils ont différentes capacités de grossissement,
mais le plus souvent 10x. La distance inter-pupillaire peut être ajustée en fonction de chaque
personne. De plus, l’oculaire gauche peut être tourné pour correspondre aux anomalies
oculaires, spécifiques pour chaque personne.
Le système des prismes prend l'image de l'objectif et le distribue vers les deux
oculaires, à l'aide de prismes déviants. Ils confèrent également une image microscopique
binoculaire précise.
Le degré de grossissement du microscope peut être obtenu en multipliant les capacités
de grossissement de l'objectif et de l'oculaire: 40 (objectif) x 10 (oculaire) = 400x.
Le système d'illumination se compose de la source de lumière et des composants qui
transmettent le faisceau vers l'avant. La source de lumière est représentée par une ampoule
halogène de 6V et 20W.
Les structures qui transmettent le faisceau lumineux vers l'avant sont représentées par
toutes les composantes que le faisceau rencontre dans son trajectoire. Le collecteur est la
première structure qui réoriente la lumière dispersée qui provient de l'ampoule. Son but est de
disposer la lumière diffusée en rayons parallèles, qui sont dirigés à travers une fenêtre placée
dans la partie supérieure du pied du microscope. Le fascicule des rayons arrive ensuite au
diaphragme d'ouverture (qui peut changer le calibre), puis au condenseur. Le condenseur se
~6~
compose de deux lentilles, qui concentrent la lumière dans un point sur l’échantillon
microscopique. A partir de ce moment, le faisceau passe à travers l’échantillon
microscopique et puis dans l'objectif pour générer l'image microscopique.
Activité de laboratoire
Les étudiants doivent:
identifier et étiqueter toutes les parties du microscope sur la figure ci-dessous (Fig. 1).
~7~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°2
Les microscopes sont des outils essentiels dans les disciplines biologiques. Il y a deux
types élémentaires de microscope optique: le microscope composé et le microscope
stéréoscopique. Le microscope composé est utilisé pour inspecter le matériel cellulaire et
offre un degré d'agrandissement jusqu'à 400x. L'échantillon de tissu doit être translucide. Le
microscope stéréoscopique est utilisé pour analyser des structures entières en trois
dimensions. La caractéristique principale de tout ensemble de lentilles est son pouvoir de
résolution. Le pouvoir de résolution d'un système de lentilles est la distance la plus petite
séparant deux éléments qui peuvent être observés par le système de lentilles (c'est-à-dire que
les deux objets peuvent être observés comme deux éléments distincts plutôt qu'un seul). Par
exemple, la plupart des gens sont capables de voir deux lignes parallèles minces s'ils sont
séparés par 0,1 mm. Si les deux lignes sont plus rapprochées nous les voyons comme une
ligne solitaire. Par conséquent, le pouvoir de résolution de l'œil humain est d'environ 0,1 mm.
Cependant, le pouvoir de résolution d'un microscope optique est d'environ 0,0002 mm. En
général, la plupart des microscopes optiques sont munis avec trois objectifs qui magnifient
4x, 10x et 40x. Les oculaires ont généralement un grossissement de 10x.
~8~
Obtention de l'image microscopique
Chaque fois que nous examinons un échantillon, il est nécessaire de commencer par
l'objectif 4x, suivi par les autres objectifs.
Sans modifier l'image obtenue avec l'objectif 4x, tournez le revolver pour amener
l'objectif 10x dans l'axe optique. En utilisant la vis micrométrique, ajustez et améliorez la
qualité de l'image. Si nécessaire, augmentez l'intensité du faisceau à l'aide du bouton qui
ajuste l'intensité de la lumière.
Sans modifier l'image obtenue avec l'objectif 10x, tournez le revolver pour amener
l'objectif 40x dans l'axe optique. En utilisant la vis micrométrique, ajustez et améliorez la
qualité de l'image. Il est interdit d'utiliser la vis macrométrique (il est possible de briser la
lame). Si nécessaire, augmentez l'intensité du faisceau à l'aide du bouton qui ajuste l'intensité
de la lumière.
Chaque fois que vous commencez l'examen d’échantillons, utilisez l'objectif 4x.
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Attention!!!
La lame doit toujours être placée avec la lamelle vers le haut;
Après avoir obtenu l'image avec l'objectif 4x, n'utilisez pas la vis macrometrique;
pour les autres objectifs (10x, 40x), seulement la vis micrométrique doit être utilisé;
Si, au cours de l'examen des échantillons, vous avez perdu l'image, commencez
toute l'opération dès le début (c'est-à-dire en utilisant l'objectif 4x); n'essayez pas de
régler l'image à l'aide de vis macrométrique;
N'utilisez pas la vis macrométrique pour les objectifs suivants: 10x, 40x, 100x (il est
possible de briser la lame).
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
pratiquer toutes les manœuvres décrites, avant d'utiliser le microscope et les
échantillons fournies;
prouver au professeur responsable qu’ils ont obtenu des images microscopiques
avec des objectifs 4x, 10x et 40x;
examiner l’échantillon en ajustant en permanence l'image microscopique; poser
autant de questions que possible sur les structures rencontrées dans le tissu évalué;
retirer la lame examinée et examiner une autre en suivant les étapes de cette leçon;
évaluer un certain nombre d’échantillon pour améliorer la technique d'examen et
acquérir de l'expérience en suivant les étapes.
Mots-clés
microscope optique;
microscope composé;
microscope stéréoscopique;
échantillon de tissu;
agrandissement;
échantillon microscopique;
examen d’échantillons.
~ 10 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°3
Technique histologique
L'examen d'un échantillon biologique (un petit fragment d'un tissu ou d'un organe) à
l'aide du microscope est possible en créant une lame histologique adéquate. Une lame
microscopique doit répondre aux conditions suivantes:
être transparent afin que la lumière puisse le traverser;
être préservé pendant une longue période de temps.
Il y a 2 types de préparations microscopiques: fraîche et permanente.
Préparation permanente
L'examen histologique des cellules, des tissus et des organes est possible sur ce type
de lames. Ils ont divers avantages, tels que: conservent les structures tissulaires, ont un
contraste supérieur et peuvent être conservés pendant une longue période de temps. Pour
obtenir la lame permanente, un processus complexe à plusieurs étapes est nécessaire:
prélèvement d'échantillons, fixation, lavage de l'échantillon (et décalcification si nécessaire),
inclusion, sectionnement, coloration et montage. Les deux premières étapes sont très
importantes et tout le personnel vétérinaire devrait les connaître; seuls les pathologistes
spécialisés doivent connaître les autres étapes.
Prélèvement d'échantillons
C'est le processus par lequel les tissus sont récoltés à partir d'animaux vivants ou de
cadavres. Des blocs tissulaires (c'est-à-dire des échantillons de tissus ayant une dimension
inférieure à 1 cm) peuvent être obtenus par biopsie (échantillonnage diagnostique), excision
chirurgicale ou dissection post-mortem. L'échantillon est coupé dans la taille et la
configuration correctes avant la fixation et la coupe avec le microtome. L'échantillon est
habituellement coupé en plusieurs sections. Afin d'éviter une détérioration structurelle, les
échantillons post-mortem doivent être récoltés dès que possible pour diminuer la distorsion
des tissus.
Afin de parvenir à un prélèvement correct de l'échantillon, il est essentiel de respecter
certaines règles de base:
Utilisation d'outils adéquats et tranchants pour éviter la destruction des tissus.
~ 11 ~
Lorsque les échantillons prélevés sur les cadavres sont recueillis, l'opération doit
être réalisée très rapidement après la mort afin d'éviter les modifications post-mortem.
Les échantillons récoltés doivent être représentés par des coups de tissu de 5 mm,
qui permettent l'entrée de la substance de fixation (par exemple, le formol) dans
l'échantillon.
Lorsque des lésions évidentes sont visibles à la surface du tissu récolté, la procédure
de récolte doit inclure à la fois la lésion et le tissu normal voisin.
Les organes qui subissent des altérations post mortem rapides doivent d'abord être
récoltés (c'est-à-dire les glandes endocrines, la muqueuse gastrique et intestinale, le
système nerveux, les testicules, les reins, etc.).
Immédiatement après la récolte de l'échantillon, les coupes de tissu doivent être
immergées dans un fixateur (pièce par pièce).
Fixation
Puisque les cellules et les tissus sont chimiquement et physiquement instables (et
aussi parce que les procédures histologiques suivantes peuvent détruire le tissu), les tissus
doivent être stabilisés et conservés pour minimiser les changements structurels et chimiques.
En conséquence, la fixation a le rôle d'interrompre les processus cellulaires et tissulaires et de
maintenir leur structure. La fixation préserve la structure cellulaire et maintient la répartition
des organites. La fixation doit avoir lieu rapidement pour inhiber la libération des enzymes
(présentes dans les cellules mortes) capables de digérer les composants tissulaires. Si la
dégradation des tissus se produit (c'est-à-dire une dégénérescence post-mortem), les détails
microscopiques ne sont pas appropriés pour le diagnostic. Les fixateurs conservent également
un certain nombre de macromolécules (par exemple des glucides, des lipides, etc.) qui
seraient autrement perdues lors de la préparation des tissus. De plus, la fixation de
l'échantillon tue les bactéries et d'autres agents nocifs, et son action antiseptique diminue le
risque de contamination lors de la manipulation de l'échantillon. La fixation peut également
augmenter la coloration des tissus. Les erreurs survenues à ce stade peuvent induire des
changements indésirables et irréversibles dans l'échantillon histologique final.
Dans la plupart des cas, des fixateurs liquides sont utilisées, telles que: alcool
éthylique et méthylique, acétone, chloroforme, acide acétique, acide trichlorureacétate, acide
picrique, formol etc. Les solutions présentées sont généralement combinées, sauf la dernière,
qui est fréquemment utilisée seule. Le plus utilisé est le formol tamponné 10%; il présente
l'avantage que les échantillons histologiques peuvent être conservés pendant une longue
~ 12 ~
période de temps sans changements tissulaires majeurs. C'est la raison pour laquelle le formol
est le principal produit de fixation utilisé.
~ 13 ~
Fig. 2. Différentes sections à travers un oeuf bouilli.
(A – section transversale; B – section longitudinale; C – section oblique).
Mots-clés
préparation permanente;
prélèvement d'échantillons;
biopsie;
modifications post-mortem;
fixation, formol;
lavage de l'échantillon, inclusion, sectionnement, coloration, montage;
image microscopique.
~ 15 ~
Fiche d'exercices.
~ 16 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°4
~ 17 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°5
La cellule est l'unité élémentaire de la vie. Tous les organismes vivants comprennent
des cellules (ou une seule cellule), la plupart invisibles à l'œil nu. Les cellules sont bordées
par une membrane cellulaire et viennent dans d'innombrables formes dissemblables. Les
organismes se composent d'une ou plusieurs cellules, capables de mener les actions vitales
requises par l'organisme. La forme des cellules change en fonction des conditions chimiques,
physiques, de l'environnement et de leur rôle. En conséquence, les cellules situées dans un
environnement aqueux (comme les cellules sanguines) sont généralement de forme sphérique
ou ovale, mais leur forme peut subir certains changements dans certaines circonstances.
D'autre part, les cellules de certains organes ont des formes irrégulières à la suite de la
compression induite par les cellules voisines. Pour cette raison, les organes/tissus sont
constitués de cellules de formes différentes (par exemple polyédriques, cubiques,
cylindriques, étoilé, en forme de fuseau, aplaties, etc.).
Dans certaines circonstances, les cellules sont alignées sur une membrane basale et en
dessous se trouve le tissu conjonctif, les vaisseaux sanguins et les nerfs.
Les cellules cubiques possèdent des diamètres ou axes égaux et ont un noyau
sphérique. Pour être "cubique" les cellules doivent être environ aussi grandes que larges. La
forme, vue du haut, est plus ou moins hexagonale. En microscopie optique, les cellules
sphériques apparaissent comme des cercles de tailles différentes selon la section à travers la
cellule. Les cellules en forme de poir ressemblent à l'aspect du fruit mentionné. Les cellules
cylindriques sont celles qui sont plus hautes que larges, tandis que l'examen supérieur fournit
un aspect similaire avec les cellules cubiques. En coupe longitudinale, les cellules
cylindriques paraissent plus hautes que les cellules cubiques et possèdent des noyaux
ovoïdes.
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
travailler individuellement avec le microscope fourni, afin de pouvoir l'utiliser
facilement et améliorer la technique d'examen;
n'oublier pas de commencer l'examen avec le petit objectif (4x) et seulement après
continuer avec les objectifs plus larges;
~ 18 ~
d'abord, examiner tout l’échantillon puis trouver le sujet d'intérêt;
identifier les cellules des échantillons et tracer des cellules (dans les cases ci-
dessous) de différentes formes trouvée dans les lames fournies;
utiliser des crayons (colorés) pour tous les dessins;
chaque dessin doit avoir une légende.
Mots-clés
formes cellulaires;
cellules cubiques;
cellules cylindriques;
cellules en forme de poir;
cellules sphériques.
Lame n°1 - Cellules cubiques (glande thyroïde)
~ 19 ~
Lame n°2 – Cellules cylindriques (estomac)
Fig. 10. Cellules en forme de poir dans le Fig. 11. Schéma de cellule en forme de poir.
cervelet (ob. 20x).
~ 20 ~
Zone pour le dessin d’observation.
Fig. 12. Cellules sphériques dans le Fig. 13. Schéma de cellule sphérique.
ganglion spinal (ob. 10x).
~ 21 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°6
Le noyau est une structure hautement spécialisée qui traite l'information et est le
centre administratif de la cellule. Habituellement, la forme nucléaire ressemble à la forme de
la cellule. Par exemple, les cellules cubiques, sphériques ou polyédriques ont des noyaux
sphériques; les cellules fusiformes ont des noyaux allongés; les cellules cylindriques ont des
noyaux ovalaires; les cellules squameuses ont des noyaux aplaties. Cependant, certaines
exceptions peuvent être rencontrées, par exemple les leucocytes granulaires (qui sont des
cellules sphériques) présentent un noyau avec plusieurs lobes (2-5 lobes).
En général, le noyau est situé au centre, mais dans certaines cellules le noyau est
positionné dans d'autres zones intracellulaires. Structurellement, le noyau a un aspect typique,
constitué de l'enveloppe nucléaire, du nucléoplasme et du nucléole.
Cependant, pendant l'interphase, la chromatine peut apparaître sous forme
d'euchromatine et d'hétérochromatine. Les différences entre elles sont données par le degré
d'enroulement de l'ADN, qui est moins enroulé dans l'euchromatine et fortement enroulé dans
l'hétérochromatine. Euchromatine est la forme active de la chromatine, qui est impliqué dans
la transcription de l'ARN, dans le but de produire des protéines nécessaires pour les fonctions
cellulaires et la croissance. L'hétérochromatine ou la partie inactive de l'ADN est représentée
par certaines régions de la chromatine qui sont très condensées, de sorte que leur information
génétique ne peut être utilisée. En conséquence, certaines cellules peuvent présenter un noyau
euchromatique (petites masses granulaires de chromatine disséminées dans le nucléoplasme),
tandis que d'autres cellules peuvent avoir un noyau hétérochromatique (grandes masses
irrégulières de chromatine dans le nucléoplasme).
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
n'oublier pas de commencer l'examen avec le petit objectif (4x) et de poursuivre
avec des objectifs plus larges;
d'abord, examiner tout l’échantillon et trouver le sujet d'intérêt;
identifier les principales caractéristiques histologiques discutées dans ce laboratoire
(par example les noyaux euchromatiques et hétérochromatiques) et les illustrer (sous
forme de dessins) dans les cases ci-dessous;
~ 22 ~
utiliser des crayons (colorés) pour tous dessins;
chaque dessin doit avoir une légende.
Mots-clés
noyau sphérique;
noyau ovale;
noyau lobé;
noyau euchromatique;
noyau hétérochromatique.
Fig. 14. Noyaux sphériques dans les Fig. 15. Schéma du noyau sphérique.
cellules du corps jaune (ovaire) (ob. 40x).
~ 23 ~
Lame n°2 – Cellules à noyaux ovalaires (intestin grêle - jéjunum)
Fig. 16. Noyaux ovalaires dans les cellules Fig. 17. Schéma du noyau ovalaire.
de l'intestin grêle (ob. 40x).
Fig. 18. Noyau lobé dans le neutrophile - Fig. 19. Schéma du noyau lobé.
centre du champ (ob. 40x).
~ 24 ~
Zone pour le dessin d’observation.
Fig. 20. Noyaux euchromatiques dans les Fig. 21. Schéma du noyau euchromatique.
cellules en forme de poir (cervelet; ob.40x).
~ 25 ~
Lame n°5 – noyaux hétérochromatiques (rein)
~ 26 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°7
La surface cellulaire n'est pas lisse car il existe des irrégularités et des prolongements
liés à la motilité cellulaire, à l'absorption et à la phagocytose. Les expansions permanentes
sont des structures stables, soutenues par des faisceaux actifs d'actine dans les microvillosités
et les stéréocils, ou par des microtubules dans les cils et les flagelles.
Les microvillosités sont des prolongements cellulaires cylindriques, en forme de
doigts, gainé de membrane, ayant une taille d'environ 0,51/0,08 μm. Ils sont localisés sur le
pôle apical de certaines cellules épithéliales (par exemple: des entérocytes, des cellules
rénales). Les microvillosités ont le rôle d'augmenter la surface d'absorption cellulaire
(environ 10-20 fois), en facilitant l'entrée des substances absorbées à l'intérieur de la cellule.
Ils sont présents partout où il est nécessaire d'augmenter la surface cellulaire sans
augmenter la taille des cellules, en particulier dans les régions où le processus d'absorption
est présent, comme l'intestin et le rein. Les microvillosités ne sont pas évidents
individuellement en microscopie optique, mais ils deviennent visibles comme un plateau strié
ou une bordure en brosse sur ces cellules absorbantes et peuvent être observés plus en détail
dans le microscope électronique.
Les stéréocils sont des microvillosités immobiles longues (pas des cils), qui peuvent
être observés en microscopie optique. Ils sont rencontrés dans l'épididyme (tractus génital
masculin) et dans l'oreille interne. Fonctionnellement, les stéréocils ont un rôle comparable
avec les microvillosités.
Les cils sont des structures longues et minces qui ont une taille d'environ 5-15 / 0,5
μm. Ils sont situés dans le pôle apical de certaines cellules épithéliales (par exemple: au-
dessus des cellules de l'épithélium nasal, de la trachée, du pharynx, de l'utérus, etc.). Chaque
cellule possède jusqu'à des milliers de cils.
Fonctionnellement, les cils sont présents dans certains épithéliums qui ont des liquides
à la surface. En déplaçant progressivement le fluide superficiel dans une seule direction
(généralement vers l'extérieur), les cils ont le rôle de nettoyer la surface de l'épithélium de
certaines cellules mortes, des substances et diverses particules qui sont arrivées de
l'environnement externe. En conséquence, dans l'épithélium trachéal, le rôle des cils est
d'arrêter les particules de poussière inhalée et de les transférer vers la région du pharynx.
~ 27 ~
Cependant, dans les oviductes, les cils ont le rôle d'aider la progression de l'ovocyte vers
l'utérus. Il y a une synchronisation ondulatoire dans le mouvement des cils.
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
n'oublier pas de commencer l'examen avec les petits objectifs (4x et 10x) et de
poursuivre avec des objectifs plus larges;
d'abord, examiner tout l’échantillon et trouver le sujet d'intérêt;
identifier les principales caractéristiques histologiques discutées dans ce laboratoire
(par example les microvillosités, stéréocils et cils) et les illustrer (sous forme de
dessins dans les cases ci-dessous);
utiliser des crayons (colorés) pour tous les dessins;
chaque dessin doit avoir une légende.
Mots-clés
expansions membranaires;
motilité cellulaire;
absorption cellulaire;
microvillosités;
stéréocils;
cils;
flagelles.
Fig. 24. Plateau strié (microvillosités) sur Fig. 25. Schéma des cellules présentant le
les pôles apicaux de cellules intestinales plateau strié.
(ob. 40x). .
~ 28 ~
Zone pour le dessin d’observation.
Fig. 26. Stéréocils sur les pôles apicaux des Fig. 27. Schéma des cellules présentant des
cellules d'épididyme (ob. 40x). projections en forme de doigt, appelées
stéréocils.
Fig. 28. Stéréocils sur les pôles apicaux des Fig. 29. Schéma des cellules présentant des
cellules du canal déférent (ob. 40x). projections en forme de doigt, appelées
stéréocils.
~ 29 ~
Zone pour le dessin d’observation – Lame n°2 Zone pour le dessin d’observation - Lame n°3 (canal
(épididyme) déférent)
Fig. 30. Cils dans les pôles apicaux des Fig. 31. Schéma des cellules avec des cils
cellules de la trachée (ob. 40x). dans la trachée.
Fig. 32. Cils discontinus dans les pôles Fig. 33. Schéma des cellules avec des cils
apicaux des cellules d'oviduct (ob. 40x). dans l'oviduct.
~ 30 ~
Zone pour le dessin d’observation - Lame n°4 Zone pour le dessin d’observation - Lame n°5
(trachée) (oviduct)
~ 31 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°8
~ 32 ~
RER est impliqué principalement dans la production de protéines qui seront exportées
ou sécrétées par la cellule, ou conservées comme éléments structurels. En ce qui concerne le
REL, il est impliqué dans la production de lipides, dans le métabolisme des hydrates de
carbone, dans la biosynthèse du cholestérol et dans la désintoxication.
L'appareil de Golgi est le lieu où certaines protéines synthétisées dans le RER sont
modifiées (en général en ajoutant des glucides) et "emballées" en vésicules entourées de
membrane pour le transport à la surface de la cellule. L'appareil de Golgi est très actif et
visible dans les cellules qui ont une sécrétion intense. La position de l'appareil de Golgi dans
le cytosol dépend du type de cellule et de son activité. Dans les neurones, il est situé autour
du noyau tandis que dans les cellules exocrines (c'est-à-dire, les cellules sécrétoires), il a une
localisation supra-nucléaire. L'appareil de Golgi a des rôles différents, tels que le rôle
sécréteur, la biogenèse des lysosomes, le contrôle du système endomembranaire et la
formation de l'acrosome des spermatozoïdes.
Les mitochondries (du mot grec mitos - fil, chondros - granule) sont des organites
allongées qui se trouvent dans le cytoplasme de chaque cellule eucaryote (sauf les globules
rouges adultes). Leur nombre varie considérablement selon la cellule et sa fonction. Ces
organites sont les générateurs d'énergie de la cellule, transformant l'oxygène et les nutriments
en ATP (adénosine triphosphate). L'ATP est l'énergie chimique qui alimente les activités
métaboliques de la cellule. Ce processus s'appelle la respiration aérobie et est la raison pour
laquelle les animaux inhalent de l'oxygène.
Le nombre de mitochondries présentes dans une cellule dépend des exigences
métaboliques de cette cellule et peut varier d'une seule mitochondrie à des milliers de
mitochondries (le spermatozoïde a environ 25 mitochondries, cellule rénale – 300, cellule
hépatique - 2500). La taille d'une mitochondrie est d'environ 1 à 3 μm. Les mitochondries
peuvent adopter plusieurs formes (sphériques, hélicoïdales, ramifiées ou d'autres formes).
Habituellement, ils sont situés dans tout le cytosol, mais ils peuvent se regrouper dans
certaines régions cellulaires, telles que: le pôle apical de la cellule (par exemple, dans les
cellules intestinales), le pôle basal (dans les cellules rénales) ou autour du noyau (dans les
hépatocytes). En général, les mitochondries occupent environ 5 à 6% du volume cellulaire,
mais dans certaines cellules elles peuvent représenter environ 20% (dans les cellules
musculaires des muscles squelettiques, les cellules hépatiques) ou même 35% (dans les
cellules musculaires cardiaques), ce qu’indique leur importance pour les activités cellulaires.
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
~ 33 ~
identifier les organites intracellulaires présentés dans ce laboratoire (le RER,
l'appareil de Golgi et les mitochondries) et les illustrer dans les cases ci-dessous;
pouvoir examiner les lames colorées avec différentes méthodes et reconnaître les
structures;
commencer l'examen avec de petits objectifs (4x et 10x) puis observer les organites
cellulaires avec les objectifs plus larges.
Mots-clés
organites cellulaires;
microscopie électronique;
ribosomes;
réticulum endoplasmique, corps de Nissl;
appareil de Golgi;
mitochondries;
ATP (adénosine triphosphate).
Fig. 34. Réticulum endoplasmique – masses Fig. 35. Schéma de cellule avec réticulum
basophiles granulaires dans le cytoplasme endoplasmique (corps de Nissl).
des neurones multipolaires (moelle épinière,
ob. 40x).
~ 34 ~
Zone pour le dessin d’observation.
Fig. 36. Appareil de Golgi – structures Fig. 37. Schéma de cellule avec des
granulaires dans le cytoplasme des neurones appareils de Golgi.
du ganglion spinal (ganglion spinal, ob.
40x).
Fig. 38. Appareil de Golgi dans le Fig. 39. Schéma d'acinus avec des cellules
cytoplasme des cellules acinaires (pancréas, contenant des appareils de Golgi.
ob. 40x).
~ 35 ~
Zone pour le dessin d’observation (gangion spinal) Zone pour le dessin d’observation (pancréas)
Fig. 40. Mitochondries – structures en Fig. 41. Schéma des cellules avec des
forme de tige dans le cytoplasme des mitochondries.
cellules des tubes urinaires (rein, ob. 60x).
~ 36 ~
Zone pour le dessin d’observation (rein) Zone pour le dessin d’observation (foie)
~ 37 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°9
Inclusions intracellulaires
Les inclusions cellulaires sont en fait des constituants qui ne sont pas constamment
présents dans le cytoplasme, mais qui sont considérés comme une partie commune de la
cellule. Les métabolites produits en excès peuvent être stockés temporairement ou
indéfiniment dans le cytoplasme. Les sources d'énergie (par exemple les glucides et les
lipides) ne sont pas stockées en permanence par chaque cellule. En dehors des hydrates de
carbone et des inclusions lipidiques, différents pigments, cristaux et cristalloïdes peuvent être
observés dans le cytosol.
Les glucides sont déposés dans le cytosol sous la forme de masses du glycogène,
fréquemment dans les hépatocytes et les cellules musculaires.
Les lipides s'accumulent principalement dans les cellules graisseuses du tissu adipeux,
mais dans certaines conditions, elles s'accumulent également dans d'autres cellules. Les
lipides sont stockés dans le cytosol comme des gouttes libres qui ne sont pas délimitées par
une membrane (par exemple, dans les hépatocytes, les cellules rénales, dans les cellules du
corps jaune dans l'ovaire).
Les protéines sont stockées exclusivement sous forme de granules sécrétoires. Des
grandes vésicules de sécrétion peuvent être identifiées par immersion dans les sections
microscopiques. Après la fixation, le contenu coagulé de ces vésicules a un aspect granuleux.
Les cellules des glandes acineuses (par exemple, le pancréas) accumulent leurs produits de
sécrétion en grandes quantités, préparées pour être évacuées si nécessaire. De telles structures
sont également connues sous le nom de granules de zymogène car elles comprennent des
enzymes ou des précurseurs d'enzymes. La coloration acidophile de leur substance protéique
est visible dans les coupes colorées au H & E.
Pigments cellulaires - un certain nombre de tissus sont intrinsèquement colorés avec
des composés naturels appelés pigments cellulaires. Les pigments exogènes proviennent de
l'extérieur du corps, alors que les pigments endogènes sont créés par la cellule elle-même.
Des exemples de pigments exogènes sont le pigment de carbone et les pigments carténoïdes
ou lipochromes.
~ 38 ~
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
identifier les inclusions de lipides, de glycogène et de protéines au niveau
intracellulaire et les illustrer dans les cases ci-dessous;
être capable de travailler avec les lames colorées par différentes méthodes afin de
mettre en évidence certains constituants cytoplasmiques.
Mots-clés
- inclusions cellulaires;
- inclusions de glucides;
- inclusions lipidiques;
- inclusions protéiques;
- cristalloïdes;
- pigments exogènes;
- pigments endogènes;
- pigment de carbone.
Fig. 44. Inclusions de glycogène - Masse Fig. 45. Schéma des inclusions
cytoplasmique diffuse acidophile (plus intracytoplasmiques de glycogène.
sombre) dans les cellules hépatiques
(coloration PAS, ob. 100x).
~ 39 ~
Zone pour le dessin d’observation.
Fig. 46. Inclusions lipidiques –vacuoles Fig. 47. Schéma des inclusions lipidiques
inégales de lipides dans les cellules intracytoplasmiques.
hépatiques (ob. 40x).
Zone pour le dessin d’observation.
~ 40 ~
Lame n°3 - Inclusions protéiques (glande sous-maxillaire)
Fig. 48. Inclusions protéiques - granules Fig. 49. Schéma des inclusions protéiques
sécrétoires protéiques dans les cellules de intracytoplasmiques.
glande sous-maxillaire (ob 40x).
Zone pour le dessin d’observation.
Fig. 50. Inclusions de pigments (mélanine) Fig. 51. Schéma des inclusions pigmentaires
- corps ciliaire (ob. 40x). intracytoplasmiques (mélanine).
~ 41 ~
Fig. 52. Inclusions de pigment - Fig. 53. Schéma des inclusions de pigment
macrophages avec pigment de carbone, de carbone intracytoplasmiques.
poumon (ob. 40x).
Zone pour le dessin d’observation (mélanine) Zone pour le dessin d’observation (pigment de
carbone)
~ 42 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°10
~ 43 ~
qui préserve leur forme discoïde. Dans les flagelles et les cils, les forces mécaniques créées
entre les microtubules de doublet entraînent une motilité.
Les filaments intermédiaires ont un diamètre intermédiaire (environ 10 nm
d'épaisseur) entre les microfilaments (5 nm) et les microtubules (25 nm). Ils ont une
construction protéique et sont représentés par des éléments spécifiques comme dans les cas
suivants (qui sont tous FI): la cytokératine qui est présente uniquement dans les cellules
épithéliales, les neurofilaments (les longs, fins fils qui créent une neurofibrille) qui se
trouvent seulement dans les cellules nerveuses, les gliofilaments existant dans les cellules
gliales, ou la desmine présente dans les cellules musculaires, etc.
Les filaments intermédiaires sont visibles comme un réseau dans le cytoplasme. La
capacité contractile des filaments intermédiaires est attribuable à l'interaction entre l’actine
(microfilament) et une protéine contractile supplémentaire appelée myosine. Les filaments
intermédiaires ne peuvent pas se contracter. Ils ne sont pas impliqués dans le mouvement
cellulaire mais confèrent un soutien mécanique aux cellules.
Les filaments intermédiaires représentent un groupe hétérogène de filaments avec une
composition protéique variée. Les principaux sous-types acceptés sont présentés dans le
Tableau 1 (avec certains types de cellules dans lesquels ils sont présents). La localisation
intracellulaire des filaments intermédiaires suggère qu'ils ont des fonctions supplémentaires
de soutenir des cellules et maintenir des formes irrégulières. Dans un certain nombre de
situations, ces filaments transmettent et répartissent les forces de traction dans toute la cellule
(cellules musculaires lisses: les faisceaux de filaments intermédiaires étendent la contraction
aux zones d'ancrage sur la membrane cellulaire). Des paquets de filaments de kératine
(tonofilaments, kératofilaments) attachés à la membrane cellulaire des kératinocytes
transmettent les forces de stress, permettant à l'épiderme de résister à un traitement brutal.
~ 44 ~
Jonctions cellulaires
Les tissus sont constitués d'un grand nombre de cellules qui sont maintenues
ensemble par certaines structures qui les attachent et les ancrent. Ces structures
spécialisées de la membrane plasmique s'appellent: jonctions intercellulaires.
Les desmosomes (macula adherens) sont de connexions intercellulaires focales qui
fixent les cellules entre elles en utilisant de petites zones de 25 à 30 nm. Ils sont
nombreux dans les épithéliums qui doivent résister à l'abrasion. En conséquence, les
desmosomes sont fréquemment rencontrés sur la surface de certains épithéliums de
revêtement (par exemple, l'épiderme, la cavité buccale et la muqueuse épithéliale
œsophagienne).
.
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
identifier les structures appartenant au cytosquelette cytoplasmique et les jonctions
cellulaires et les illustrer dans les cases ci-dessous;
commencer l'examen avec de petits objectifs (4x) et ensuite observer le
cytosquelette cytoplasmique en utilisant des objectifs plus grands.
Mots-clés
cytosquelette;
filaments;
microtubules;
filaments intermédiaires;
neurofilaments;
jonctions intercellulaires;
tonofilaments / kératofilaments;
desmosomes.
~ 45 ~
Lame n°1- Inclusions vitellines (ovocyte, poisson)
Fig. 54. Inclusions vitellines - inclusions Fig. 55. Schéma des inclusions
granulaires irrégulières dans le cytoplasme intracytoplasmiques.
(ovaire de poisson, ob 100x).
Zone pour le dessin d’observation.
~ 46 ~
Fig. 58. Neurofilaments dans le cytoplasme Fig. 59. Schéma des neurofilaments
des neurones (moelle épinière, ob. 40x). cytoplasmiques.
Zone pour le dessin d’observation (kératofilaments Zone pour le dessin d’observation (neurofilament –
– peau) moelle épinière)
Fig. 60. Desmosomes - structures Fig. 61. Schéma des cellules avec
semblables à des bâtonnets entre les desmosomes.
cellules de la peau (ob. 100x).
~ 47 ~
Zone pour le dessin d’observation.
~ 48 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°11
Endocytose et exocytose
~ 49 ~
Brièvement, la phagocytose comprend trois phases: la reconnaissance des particules et son
adhésion au phagocyte, l'absorption des particules et la formation du phagosome, et la
dégradation ultérieure du phagosome.
La pinocytose est un type d'endocytose qui suppose l'ingestion de liquides interstitiels
avec quelques particules locales (Fig. 66). De cette façon, les cellules ingèrent les produits
requis pour les processus intracellulaires. Il y a deux types de pinocytose: la pinocytose
indépendante du récepteurs et la pinocytose dépendante du récepteurs (ou pinocytose
sélective).
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
identifier les cellules impliquées dans la phagocytose et les processus de sécrétion
dans les lames fournies et les illustrer dans les cases ci-dessous;
commencer l'examen avec le petit objectif (4x) et observer les particules englouties
ou les liquides avec les objectifs plus grands.
Mots-clés
endocytose;
phagocytose;
pinocytose;
microphages, macrophages;
exocytose;
transcytose.
Lames n°1 et n°2 - Phagocytose (ganglion lymphatique et frottis sanguin)
Fig. 62. Phagocytose - globules rouges Fig. 63. Schéma de macrophage avec des
ingérés par les macrophages (ganglion particules solides ingérées.
lymphatique, ob 40x).
~ 50 ~
Fig. 64. Phagocytose - microphages Fig. 65. Schéma de microphages sanguins
sanguins ingérant des bactéries (ob. 40x). avec des bactéries ingérées.
Zone pour le dessin d’observation - Lame 1 Zone pour le dessin d’observation - Lame 2 (frottis
(ganglion lymphatique) sanguin)
Fig. 66. Pinocytose - encre noire ingérée par Fig. 67. Schéma de la pinocytose.
des cellules de Kupffer du foie (ob. 40x).
~ 51 ~
Zone pour le dessin d’observation.
Fig. 68. Sécrétion apocrine - granules de Fig. 69. Schéma de sécrétion apocrine.
sécrétion dans les pôles apicaux des cellules
des glandes sudoripares (ob 40x).
Zone pour le dessin d’observation.
~ 52 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°12
~ 53 ~
mourantes ou mortes a une signification diagnostique considérable en histopathologie. En
conséquence, les cellules peuvent mourir dans des conditions physiologiques (cellules
sénescentes). Dans de telles circonstances, la mort cellulaire résulte en déclenchant un
programme intrinsèque d'auto-destruction, appelé apoptose (du grec apo - loin de, et ptõsis -
chute) ou mort cellulaire programmée.
Morphologiquement, il est essentiel de réaliser que la forme du noyau est l'un des
marqueurs les plus cohérents de la santé des cellules. Les principales caractéristiques
nucléaires de la mort cellulaire sont (1) la pycnose, (2) la caryorrhexie et (3) la caryolyse.
Pendant la pycnose, le noyau d'une cellule mourante se rétrécit dans une masse homogène
profondément basophile, une altération appelée pycnose. Karyorrhexis (du grec rhexis,
rupture) - le noyau d'une cellule mourante se décompose en fragments minuscules. La
caryolyse (de la lyse grecque, la dissolution) - est la continuation de la perte histologique du
noyau, qui devient plus pâle, jusqu'à ce qu'aucun reste ne puisse être remarqué.
Quelques autres caractéristiques morphologiques de l'apoptose sont:
- rétrécissement cellulaire: la cellule est plus petite et le cytoplasme est dense;
- condensation de la chromatine: la chromatine s'agglomère périphériquement (sous la
membrane nucléaire) en masses denses de formes et de tailles diverses, et le noyau
peut se fragmenter en produisant deux ou plusieurs fragments;
- formation de corps apoptotiques: la cellule apoptotique montre d'abord un
bourgeonnement étendu de la surface, puis se désintègre en corps apoptotiques
entourés d'une membrane, composés de cytoplasme et d'organites emballés, avec ou
sans fragments nucléaires;
- la phagocytose des cellules apoptotiques par les cellules de la ligne macrophage.
À l'examen histologique, dans les tissus colorés à l'hématoxyline et à l'éosine,
l'apoptose implique des cellules individuelles ou de petites groupes de cellules. La cellule
apoptotique apparaît comme une masse ronde ou ovale de cytoplasme intensément
éosinophile avec des fragments de chromatine nucléaire dense.
Activités de laboratoire
Les étudiants doivent:
commencer l'examen avec le petit objectif (4x) et ensuite observer des cellules
mitotiques / apoptotiques avec des objectifs plus larges;
identifier les cellules impliquées dans la mitose et l'apoptose;
détecter et catégoriser les phases mitotiques dans les images microscopiques;
~ 54 ~
réaliser des dessins pour chaque phase de la mitose dans les cellules végétales
initialement (racines d'oignon), et puis dans les cellules animales;
reproduisent fidèlement dans les dessins les principales caractéristiques
cytoplasmiques et nucléaires observées dans les échantillons histologiques.
Mots-clés
- interphase;
- division cellulaire;
- mitose;
- prophase, métaphase, anaphase, télophase;
- apoptose;
- mort cellulaire programmée;
- corps apoptotiques.
Lame n°1 - Mitose dans les cellules végétales (racines d'oignon)
Fig. 70. Division dans les cellules végétales Fig. 71. Division dans les cellules végétales
(oignon) - l'interphase (flèche noire) et la (oignon) - la métaphase (flèche noire) et
prophase (flèche blanche); ob. 40x. l'anaphase (flèche blanche); ob. 40x.
Fig. 72. Division dans les cellules végétales Fig. 73. Schéma de l'interphase (aspect d'une
(oignon) - la télophase (flèche blanche); ob. cellule amitotique).
40x.
~ 55 ~
Fig. 74. Schéma de la prophase. Fig. 75. Schéma de la métaphase.
Zone pour le dessin d’observation - Lame 1 Zone pour le dessin d’observation - Lame1
(prophase) (métaphase)
~ 56 ~
Zone pour le dessin d’observation - Lame 1 Zone pour le dessin d’observation – Lame
(anaphase) 1(télophase)
Fig. 78. Division dans les cellules animales Fig. 79. Division dans les cellules animales
- la prophase (flèche); ob. 40x. - la métaphase (flèche); ob. 40x.
Fig. 80. Division dans les cellules animales Fig. 81. Schéma de l'interphase (aspect
- l'anaphase (flèche blanche) et la télophase d'une cellule amitotique).
(flèche noire); ob. 40x.
~ 57 ~
Fig. 82. Schéma de la prophase. Fig. 83. Schéma de la métaphase.
~ 58 ~
Zone pour le dessin d’observation - Lame 2 Zone pour le dessin d’observation - Lame
(anaphase) 2(télophase)
~ 59 ~
ACTIVITÉ DE LABORATOIRE N°13
Révision des lames histologiques, des artefacts qui apparaissent dans les échantillons
histologiques et des lames supplémentaires
Artefacts histologiques
Le terme artefact est utilisé pour désigner toutes les caractéristiques d'une section de
tissu qui sont présentes à la suite du traitement des tissus. Ceux-ci comprennent des
déchirures et des plis, artefacts de rétrécissement, des espaces résultant de contenus
cellulaires extraits (par exemple des lipides, des précipités) et des organelles redistribués.
Dégénérescence post-mortem
La dégénérescence post-mortem résulte en retardant la fixation tissulaire. Une fixation
rapide et complète est nécessaire. Si la fixation n'a pas lieu, la privation d'oxygène libère des
enzymes destructrices des lysosomes. Les enzymes libérées digèrent les cellules de l'intérieur
(dégénérescence post-mortem).
Artefact de rétrécissement
La plupart des réactifs utilisés pour préparer les échantillons de paraffine provoquent
un rétrécissement marqué des tissus. Le rétrécissement crée la fausse impression que les
composants histologiques sont séparés par des espaces clairs. Les espaces vides sont toujours
suspects.
Des précipités
Toute particule dans les sections devrait être mise en doute. Par exemple, dans des
tissus qui sont fixés avec une formaline tamponnée inadéquate (solution de formaldehyde),
qui est acide, l'hémoglobine peut précipiter sous la forme d'un pigment brun granuleux
artificiel.
Plis de tissus
Les sections peuvent se replier lorsqu'elles sont attachées à des lames.
Coups de couteau (microtome)
Lors de la section des échantillons, les imperfections de partie coupante de couteau
peuvent produire des lignes droites à travers les sections (rayures). Les lignes résultantes
peuvent déformer le tissu sectionné.
Manipulation brutale
Une manipulation brutale inappropriée peut altérer l'aspect microscopique des tissus.
~ 60 ~
Lames supplémentaires
Dans les cases ci-dessous, les étudiants peut réaliser des dessins de lames
supplémentaires. Toutefois, certains dessins inappropriés, effectués pendant le semestre
peuvent être améliorés ou refaits ici.
Mots-clés
artéfact histologique;
dégénérescence post-mortem;
artefact de rétrécissement;
précipitation/sédiment;
plis histologiques;
coups de couteau;
manipulation brutale.
Activité supplémentaire.
~ 61 ~
Activité supplémentaire.
~ 62 ~
Activité supplémentaire.
~ 63 ~
Activité supplémentaire.
~ 64 ~
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