Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Curs
Genetica uman
Chiinu, 2015
Cuprinsul
CURS 1 ...................................................................................................................................................................... 4
GENETICA UMAN TIIN FUNDAMENTAL I MEDICAL ......................................................... 4
CURS 2 ...................................................................................................................................................................... 8
APARATUL GENETIC AL CELULEI UMANE .............................................................................................. 8
CARACTERISTICA GENOMULUI UMAN .................................................................................................. 13
CURS 3 .................................................................................................................................................................... 17
VARIABILITATEA I FORMELE EI............................................................................................................. 18
(A) VARIABILITATEA NEEREDITAR ...................................................................................................... 19
(B) VARIABILITATEA EREDITAR SAU GENOTIPIC .......................................................................... 20
1. VARIABILITATEA COMBINATIV ........................................................................................................ 20
2. VARIABILITATEA MUTAIONAL ....................................................................................................... 20
CURS 4 .................................................................................................................................................................... 22
CROMOZOMII UMANI .................................................................................................................................. 22
CLASIFICAREA CROMOZOMILOR UMANI .............................................................................................. 27
STUDIUL CROMOZOMILOR UMANI.......................................................................................................... 29
NOMENCLATURA CROMOZOMILOR UMANI ......................................................................................... 33
CURS 5 .................................................................................................................................................................... 37
ANOMALII CROMOZOMICE ........................................................................................................................ 37
ANOMALIILE CROMOZOMICE DE STRUCTUR ................................................................................. 37
ANOMALIILE CROMOZOMICE NUMERICE ............................................................................................. 41
INDICAIILE ANALIZEI CROMOZOMILOR UMANI ............................................................................... 42
CURS 6 .................................................................................................................................................................... 48
TRANSMITEREA MATERIALULUI GENETIC DE LA CELUL LA CELUL ....................................... 48
DUBLAREA MATERIALULUI GENETIC .................................................................................................... 49
ERORILE MITOZEI ......................................................................................................................................... 51
CONSECINELE ERORILOR DIN MITOZ ................................................................................................ 53
CURS 7 .................................................................................................................................................................... 56
TRANSMITEREA INFORMAIEI GENETICE DE LA PRINI LA COPII ............................................ 56
GAMETOGENEZA .......................................................................................................................................... 56
FECUNDAREA ................................................................................................................................................ 58
DINAMICA CROMOZOMILOR N MEIOZ ............................................................................................... 58
ERORILE MEIOZEI I CONSECINELE LOR............................................................................................. 61
CURS 8 .................................................................................................................................................................... 63
GENELE UMANE ............................................................................................................................................ 63
PROPRIETILE GENELOR UMANE ......................................................................................................... 65
FUNCIILE GENELOR UMANE ................................................................................................................... 66
CLASIFICAREA GENELOR UMANE ........................................................................................................... 66
HRILE GENETICE ..................................................................................................................................... 68
MUTAIILE GENICE ...................................................................................................................................... 71
MUTAII DINAMICE ..................................................................................................................................... 75
CURS 9 .................................................................................................................................................................... 76
TEHNICI DE ANALIZ A GENELOR ......................................................................................................... 76
SECVENIEREA ADN .................................................................................................................................... 77
TEHNICA SOUTHERN-BLOT ....................................................................................................................... 77
TEHNICA NORTHERN-BLOT ....................................................................................................................... 79
TEHNICA WESTERN-BLOT .......................................................................................................................... 79
TEHNICA PCR N ANALIZA GENELOR ..................................................................................................... 80
CURS 10 .................................................................................................................................................................. 82
CARACTERE EREDITARE ............................................................................................................................ 82
CARACTERISTICA GENELOR ALELE I NEALELE ................................................................................ 82
CARACTERE MONOGENICE MENDELIENE ............................................................................................ 83
DETERMINISMUL UNOR CARACTERE EREDITARE NORMALE ......................................................... 84
CARACTERE MONOGENICE NON-MENDELIENE ................................................................................... 85
CARACTERE EREDITARE NORMALE POLIGENICE ............................................................................ 87
CURS 11 .................................................................................................................................................................. 89
STUDIUL CARACTERELOR EREDITARE ................................................................................................. 89
CURS 1
GENETICA UMAN TIIN FUNDAMENTAL I MEDICAL
Genetica este o tiin biologic fundamental, cu ritm rapid de dezvoltare, ce studiaz
proprietile universale ale vieii ereditatea, variabilitatea i substratul lor material moleculele de
ADN. n conceptul actual, organismul viu este un sistem deschis, ce se autoregleaz i se
autoreproduce. Activitatea vital este susinut de schimbul permanent de energie, substane i
informaie. Particularitile organizrii i funcionrii sistemelor biologice, cile de transformare a
substanelor i energiei sunt controlate de informaia ce se conine n gene. Descifrarea informaiei
genetice se realizeaz n procesul de biosintez a diverse proteine, care reprezint suportul tuturor
proceselor vitale ale organismului.
Ereditatea este proprietatea organismului de a pstra i a transmite caracterele morfologice,
fiziologice, biochimice i de comportament generaiilor urmtoare. Ereditatea este asigurat de
proprietatea moleculelor de ADN de a se replica cu mare exactitate i a determina transmiterea de-a
lungul miilor i milioanelor de generaii a informaiei i, deci, a caracterelor. Astfel, n realitate, nu
caracterele se pstreaz i se transmit, ci informaia genetic despre ele, codificat n ADN. Ereditatea
face posibil conservarea speciilor n spaiu i timp.
Variabilitatea este proprietatea organismului de a prezenta caractere deosebite de cele ale
prinilor, asigurnd diferene individuale, intrafamiliale i intrapopulaionale. Sursele principale ale
variabilitii sunt diferite modificri ale materialului ereditar (mutaiile) care apar n rezultatul erorilor
de replicaie sau aciunii diferitor factori mutageni fizici, chimici sau biologici. O alt surs de
variabilitate, este capacitatea moleculelor de ADN de a se recombina i, ca rezultat, apar combinaii noi
de gene i, respectiv, de caractere. Totodat, diveri factori ai mediului (intern i extern) pot modula
activitatea genelor, asigurnd rspunsul organismului n condiii concrete. Apariia la descendeni a
caracterelor noi este important din punct de vedere evolutiv, asigurnd adaptarea indivizilor la
condiiile noi ale vieii. Transmiterea caracterelor evaluante la descendeni determin dezvoltarea
speciei n timp.
Substratul ereditii i variabilitii la majoritatea organismelor vii este molecula de ADN (ca
excepie, la unii virui materialul genetic este reprezentat de molecule de ARN). Structura moleculelor
de ADN, proprietile, structura i funcia genelor, mecanismele moleculare ale reglrii activitii
genice reprezint obiectul de studiu al geneticii contemporane. Permanent sunt elaborate metode noi de
cercetare, identificate gene noi, stabilite legiti noi ce permit de a ptrunde mai profund n tainele
vieii.
Genetica ofer o nelegere tiinific a proceselor biologice ce stau la baza activitii vitale
normale a organismului, ct i a dereglrilor n diverse stri patologice. Toate tiinele despre om
integreaz realizrile geneticii, fapt confirmat prin ompartimentele geneticii care s-au transformat n
discipline independente:
Genetica general, clasic;
Genetica dezvoltrii;
Genetica senescenei;
Imunogenetica;
Genetica ecologic;
Neurogenetica;
Farmacogenetica;
Genetica comportrii;
Genetica medical;
Genetica clinic.
4
***
Piatra de temelie pentru progresul Geneticii umane este pus n anul 1956, an n care a fost
stabilit cromosologia uman i an n care a avut loc I-ul Congres n Genetica Uman la Copenhaga.
Principalele evenimente discutate la acest congres au fost:
- numrul de cromozomi la specia uman (46,XX; 46,XY);
- analiza grupelor de nlnuire;
- studiul proteinelor prin electroforeza n gel;
- stabilirea defectului molecular n siclemie.
Din 1956 pn n 1991 (Congresul VIII, Washington) au aprut metode moleculare n studiul
cromozomilor umani; s-a reuit s se studieze variaiile ADN-ului.
Spre 1961 deja s-au evaluat implicaiile clinice ale anomaliilor cromozomiale:
5
n 1966 a fost descifrat n totalitate codul genetic i se descriu erorile nnscute de metabolism;
se pun bazele diagnosticului prenatal prin amniocentez.
n 1971 se pun la punct erorile nnscute de metabolism prin studiul pe culturi celulare.
n 1980 se practic deja clonarea genelor umane. Iar din anul 1981 (Congresul de la Ierusalim)
se discut metodele de genetic molecular implicate n studiul localizrii genelor la nivel de
cromozomi, prin studiul familial a patologiilor cu transmitere mendelian. n 1985 a aprut tehnica
PCR. n 1986 la congresul de la Berlin s-a discutat despre studiul RFLPs n boala Hungtington; s-a
evideniat importana studiului molecular n aa patologii ca Granulomatoza cronic, distrofia
Duchenne, retinoblastom, leucemia mieloid cronic i limfomul Burkitt.
n 1991 s-au clonat i studiat genele implicate n patologia Duchenne, fibroza chistic,
neurofibromatoz, polipoza de colon, retinita pigmentar, cardiomiopatia hipertrofic, sdr. Marfan,
hipertermia malign; au aprut diverse concepte legate de impriting-ul genelor i disomia uniparental.
n 1994 a fost publicat Catalogul Fenotipurilor Autosomal Dominante, Autosomal Recesive i
X-lincate; acest catalog este denumit Catalogul genelor umane i a defectelor genice.
n 1996 a avut loc al XIX-lea Congres n Genetica Uman la Rio-de-Janeiro unde s-au discutat
marcherii ADN-ului; YAC-urile; rolul acidului folic n defectele aprute la nou-nscui i introducerea
acestuia ca supliment obligatoriu n perioada prenatal; diagnosticul preimplantativ al celulelor utilizate
n fertilizarea in vitro i metodele de selecie a produilor de concepie non-mutani.
Din 1996 pn n 2001 s-au descoperit mai mult de 1000 de gene implicate n patologia uman
(cu una sau mai multe mutaii); s-a studiat expresia genic, diagnosticul maladiilor genetice, s-au fcut
studii de omologie pe drojdii i drosofil.
n 2001 a
Geneticii:
-
Complexitatea studiilor din Proiectul Genomul uman, chiar n zilele noastre nc nu sunt
definitive, deoarece, dei marea majoritate a genelor sunt cunoscute, nc nu se tie cu certitudine, cum
6
se comport marea majoritate a acestor gene solo, darmi-te n concert cu celelalte gene din
genotipul uman.
Genetica Nou se bazeaz pe studiul secvenelor specifice de ADN cu funcie necunoscut i
corelaiile genotip fenotip. Aa dar, progresnd n ultimii 40 de ani de la fenotip la ADN, n urmtorii
30 de ani ne vom ntoarce de la ADN la fenotip determinnd funcia anumitor secvene de ADN.
O alt problem ce ine de viitor este studiul corelaiei: secvene ADN funcie variaie a
secvenelor ADN funcie. Se ateapt o nelegere a implicaiei factorilor genetici n afeciunile
multifactoriale (ex: HTA, boli psihice). Se ateapt o viziune nou asupra maladiilor genetice ale
celulelor somatice a patra mare categorie de maladii genetice (cancerul), celelalte trei categorii fiind
bolile monogenice, boli multifactoriale; anomaliile cromozomiale. Conexiunea ntre oncogenez i
teratogenez (oncogene i teratogene) deja a fost fcut pe exemplul tumorii Wilms i sindromul
cefalosindactiliei Greig. Terapia genic va deveni popular nu doar pentru maladiile ereditare, dar i
pentru cele ale celulelor somatice.
***
Trim n veacul celor dou revoluii tiinifice:
n biologie !!!
n informatic !!!
Geneticienii sunt privilegiai s lucreze ntr-un important cmp tiinific un cmp al
provocrilor intelectuale. Genetica uman este un cmp care deine fascinaii particulare, pentru c
implic aspectele fundamentale ale speciei noastre, sunt fascinaii pe care matematica, de exemplu, nu
le poate mprti.
Genetica Uman, combin fascinaiile intelectuale i antropoceutice, oportunitatea de a
contribui la bunstarea umanitii, de a fi n serviciul familiei i individului aparte prin Genetica
Medical. Dar acest privilegiu aduce cu sine i responsabiliti !!!
Proiectul Genomul Uman are semnificai etice, legale i sociale. Abilitatea de analiz a
genomului individului este acompaniat de riscul de a folosi greit informaia i de aceia trebuie de
limitat la maxim acest risc. Exist necesitatea pstrrii confideniale a anumitor studii pe indivizi,
trebuie protejat informaia pentru a nu se ajunge la un complex hazardat genetic comercial.
CURS 2
APARATUL GENETIC AL CELULEI UMANE
Aparatul genetic al celulelor umane este format din structuri celulare ce conin ADN (nucleul
i mitocondriile) i care care intervin n realizarea funciilor ADN-ului (ribozomii i centrul celular).
Nucleul conine ~ 98% din ADN celular, iar numrul de molecule de ADN nuclear este corelat cu
numrul de cromozomi, care constituie o caracteristic de specie:
- n celulele somatice ale omului se conin 46 molecule lungi de ADN n cei 46 de cromozomi
(set diploid = 2n cromozomi);
- n celulele sexuale 23 molecule de ADN n 23 cromozomi (set haploid = n cromozomi).
ADN-ul cromozomial este extrem de heterogen, 25 % din secvenele polinucleotidice corespund
genelor structurale codificatoare de proteine. Totalitatea informaiei genetice (genele) din cei 46
cromozomi ai celulelor somatice formeaz genotipul, fiind n proporie de 50 % / 50% de origine
matern i patern.
Mitocondriile conin ~ 2% din ADN celular. Spre deosebire de nucleu, mitocondriile conin cteva
copii mici de ADN circular. Informaia genetic din mitocondrii constituie plasmotipul. Transmiterea
informaiei ereditare a mitocondriilor se face pe linie matern.
Ribozomii reprezint o component a aparatului de translaie a informaiei genetice, controlnd
biosinteza proteinelor expresia informaiei genetice codificate n ADN.
Centrul celular asigur formarea aparatului de diviziune responsabil de repartizarea materialului
genetic n procesul de transmitere a informaiei genetice de la o generaie de celule la alte celule n timpul
mitozei, de la prini la copii n timpul meiozei.
replicare
2 molecule de ADN
n timpul replicrii sau sub aciunea diferitor factori ai mediului n molecula de ADN pot aprea
modificri n secvena nucleotidic mutaii. Mutaiile pot avea catacter adaptiv sau pot fi patologice.
Pentru a se evita acumularea de mutaii patologice moleculele de ADN au alt proprietate unic
reparaia cu refacerea structurii iniiale a ADN-ului prin nlturarea nucleotidelor eronate sau
modificate i inlocuirea lor cu nucleotide normale.
(C) ADN-ul realizeaz informaia genetic n timpul sintezei moleculelor de ARN i
proteinelor.
ADN-ul poate fi transcris sub form de secvene nucleotidice de ARN: ARNm, ARNr, ARNt i
microARN care particip la translaia I.G. i sinteza lanurilor polipeptidice - viitoare proteine
structurale, enzime, receptori, reglatori, etc..
9
ADN
transcript ie
ARNm
ARNt
ARNr
microARN
translatie
(5)
(6)
(7)
(8)
11
12
Genomul nuclear al celulei somatice umane reprezint 95-98% din cantitatea de ADN celular i
este fragmentat n 24 molecule de ADN distincte:
22 molecule de ADN ce formeaz cromozomii autozomi;
o molecul de ADN ce formeaz cromozomul X;
o molecul de ADN ce formeaz cromozomul Y.
n nucleu sunt aproximativ:
- 7 picograme de ADN cu o lungime de pn la 7 mld. p.n. (7x109),
- circa 30.000 perechi de gene codificatoare de proteine care:
constituie doar 25% din ADN-ul celular;
sunt dispersate neomogen pe toi cromozomii;
- 90% regiuni eucromatice ce asigur transcripia i se caracterizeaz prin alternarea:
secvenelor unice i repetitive,
codificatoare i necodificatoare;
- 10% - regiuni heterocromatice ce constau din secvene nalt repetitive necodificatoare;
Partea necodificatoare a genomului se caracterizeaz printr-un polimorfism nalt, care
nu se manifest n fenotip,
constituie baza molecular a individualitii ADN-lui uman amprent genetic.
Genomul nuclear reprezint o comunitate simbiotic de secvene nucleotidice, care const din
elemente obligatorii i facultative.
Elementele obligatorii determin formarea i transmiterea caracterelor specio-specifice i
individuale, structurale i funcionale ntr-un ir de generaii; controleaz particularitile dezvoltrii
ontogenetice ale fiecrui individ.
Elementele obligatorii ale genomului uman sunt:
genele structurale caracteristice speciei, numrul i localizarea crora sunt constante n genom;
13
genele ARNr i ARNt produii crora asigur expresia genelor structurale, sinteza proteinelor
celulare baza tuturor structurilor i funciilor celulelor organismului uman;
secvenele inversate i palindromii care reprezint situsuri de recunoatere - reglatoare ale expresiei,
replicrii i recombinrii materialului genetic;
secvenele centromerice i telomerice care asigur integritatea materialului genetic cromozomial,
transmiterea exact a IG n timpul mitozei, meiozei.
Elementele facultative ale genomului sunt reprezentate de pseudogene, elemente mobile
(transpozoni), secvene de ADN viral, retrotranscripi (ADNc), care reprezint un substrat n evoluia
genomului.
CLASIFICAREA SECVENELOR GENOMULUI UMAN NUCLEAR
ADN nerepetitiv 60%
Tipuri de
secvene
Numrul de
copii per
genom
Localizare
Funcii
- gene structurale
- pseudogene
- spaiatori ai genelor
- secvene unice
- familii multigenice cu
un numr mic de copii
dispersate neomogen pe
toi cromozomii
- codific proteine
- separ secvenele
codificatoare
- regleaz expresia
genelor
- -sateliii n regiunile de
heterocromatin costitutiv;
- minisateliii au localizare specific
pentru fiecare cromozom
- sateliii au rol structural;
- minisateliii reprezint markeri
specifici ai cromozomilor;
- microsateliii sunt hipervariabili marcheri genetici individuali
permit dactiloscopia genomic
Genomul mitocondrial este reprezentat de 2-10 copii circulare de ADN, localizate n matricea
mitocondrial. Fiecare molecul de ADN const din 16.569 perechi nucleotide. Ambele catene ale moleculei
de ADN conin gene structurale care sunt lipsite de introni i se separ unele de altele prin gene ARNt. n
fiecare molecul de ADN sunt localizate 13 gene ce codific proteine enzime ale aparatului de respiraie
mitocondrial, 2 gene pentru ARNr i 22 gene pentru ARNt.
Genomul mitocondrial se caracterizeaz
prin:
numr variabil a copiilor per celul, care
depinde de numrul mitocondriilor i /
sau intensitatea metabolismului celular;
localizarea compact a genelor;
lipsa secvenelor necodante;
transcrierea informaiei de pe ambele
catene ale moleculei de ADN;
mutabilitatea nalt a secvenelor
nucleotidice;
mutaiile genelor mitocondriale sunt
cauzele unor boli genetice legate de
metabolismul energetic (de ex., miopatii,
encefalopatii, etc.);
transmitere pe linie matern.
14
G2
Profaz
Metafaz
Anafaz
Telofaz
Grad de condensare
Procese genetice
Nr de cromozomi
Nr de mol de
ADN
46
46
46
4692
46
92
46
92
46
92
92
46+46
92
46+46
15
Eucromatina reprezint regiunea slab condensat a cromatinei care conine gene structurale
i este poriunea funcional activ a ADN-ului de pe care are loc transcripia. Astfel regiunile de
eucromatin sunt responsabile de expresia specific a informaiei genetice, reglarea proceselor vitale
eseniale prin expresia genelor house keeping. Ponderea eucromatinei poate varia de la celul la
celul datorit expresiei difereniate a genelor specifice de esut, specifice unei anumite perioade
ontogenetice sau aciunei factorilor de mediu .
Heterocromatina reprezint segmente de cromatin condensate, inactive genetic, care nu se
supun transcripiei. Se disting dou tipuri de heterocromatin: constitutiv i facultativ.
Heterocromatina constitutiv conine ADN repetitiv (ADN satelit), deci nu conine secvene
codificatoare i nu poate fi transcris. Astfel de secvene sunt implicate n idividualizarea
cromozomilor
(secvenele
telomerice), reglarea mitozei sau
meiozei (centromerii), separarea
secvenelor codificatoare i aranjarea
lor funcional n nucleu. Localizarea
segmentelor de heterocromatin
constitutiv n cromozomii omologi
este identic i, de regul, nu variaz
de la celul la celul.
- Heterocromatina facultativ
conine
secvene
codificatoare
Reprezentarea aceluiai fragment de cromozom n diferite celule (A, B,
neactive, funcia lor fiind dependent
C). E eucromatina, Hc heterocromatina constitutiv, Hf
de momentul ontogenetic, tipul de
heterocromatina facultativ
esut sau de sex. Heterocromatina
facultativ n anumite condiii se poate decondensa i transforma n eucromatin.
Heterocromatina facultativ autozomal regleaz indirect expresia genelor dependente de esut
sau a genelor ce activeaz n diferite perioade de vrst. Heterocromatina facultativ sexual
cromatina sexual X - reprezint un cromozom X heterocromatinizat n nucleele celulelor
somatice cu doi cromozomi X; inactivarea cromozomului X se realizeaz arbitrar, indiferent de
originea lui matern sau patern; astfel, n unele celule (46,XX) un cromozom X este activ
(eucromatinizat) iar cellalt - inactiv (heterocomatinizat).
(B) CANTITATEA MATERIALULUI GENETIC
Cantitatea materialului genetic n
celulele somatice depinde de perioada
ciclului celular. O celul tnr n perioada
G1 a interfazei, pn la replicarea ADN-ului,
conine 46 de cromozomi monocromatidieni
(46 molecule ADN). Pe parcursul perioadei S
are loc replicarea semiconservativ i
asincron a ADN-ului, cromozomii devenind
bicromatidieni (92 molecule de ADN). Cele
dou cromatide ale unui cromozom rmn
unite prin centromer pn n anafaza mitozei,
cnd are loc distribuia materialului genetic la
celulele fiice. n aa mod celulele nouDinamica cromozomilor pe parcursul ciclului celular
formate conin aceeai cantitate de material
genetic ca i celula iniial (transmiterea ereditar a materialului genetic de la celul la celul).
16
Expresie continu
Gene ARNr
Gene ARNt
Gene house keeping
17
Non-expresie:
pseudogene
CURS 3
VARIABILITATEA I FORMELE EI
Variabilitatea este proprietatea organismelor de a obine caractere sau nsuiri noi, diferite
de cele ale prinilor. Variabilitatea este un fenomen biologic complex i universal n lumea vie:
- este determinat de factori ecologici i ereditari;
- se manifest prin modificri genetice, biochimice, fiziologice i morfologice.
Variabilitatea are o importan deosebit n viaa organismului, populaiei i speciei, asigurnd:
- polimorfismul genetic i fenotipic individual;
- supravieuirea organismelor n diversele condiii ale mediului;
- susceptibilitatea diferit a indivizilor la anumii factori ai mediului;
- manifestarea unor stri patologice;
- selecia natural;
- baza material a evoluiei speciei umane.
Factorii ecologici care determin apariia variaiilor pot fi clasificai n factori externi (fizici,
chimici i biologici) i factori interni (produi intermediari ai metabolismului, diferite stri
fiziologice).
CLASIFICAREA VARIABILITII
Transmiterea sau netransmiterea ereditar este criteriul fundamental n clasificarea
variabilitii. Valoarea biologic a variaiilor este judecat n raport cu faptul dac acestea sunt
corelate cu modificri la nivelul materialului genetic. Din acest punct de vedere, variabilitatea este
de dou tipuri:
- variabilitate neereditar, numit i variabilitate fenotipic sau modificaiune;
- variabilitatea ereditar sau variabilitatea genotipic.
18
i.
ii.
iii.
iv.
19
i.
ii.
iii.
iv.
v.
ii.
iii.
O alt clasificare a mutaiilor se bazeaz pe tipul de celul afectat: germinal sau somatic:
- mutaiile germinale produc gamei anormali, care dup fecundare transmit mutaia la generaia
urmtoare, rezultnd un individ n care toate celulele vor fi mutante;
- mutaiile somatice vor forma o clon celular anormal i, secundar, prin modificrile morfofuncionale ale organelor, sunt implicate n geneza cancerului i accelerarea senescenei
organismului.
Mutaiile genice pot fi spontane sau induse. Primul tip este determinat de factori
necunoscui, imposibil de definit sau obiectivat de un observator; al doilea tip de mutaii sunt
produse prin aciunea unor factori cunoscui: fizici (radiaii ionizante), chimici (analogi ai bazelor
azotate, ageni alchilani) sau biologici (virusuri). Mutaiile spontane ar putea fi determinate de
radioactivitatea natural (reprezentat de razele cosmice, radioactivitatea terestr permanent i
iradierea intern) i reprezent circa 1,5% din totalul mutaiilor nregistrate la om.
Modificrile materialului genetic se pot rsfrnge asupra proprietilor vitale ale organismului
mutant i pot fi:
- mutaii evaluante, pozitive, care asigur apariia unor caractere noi care-l fac pe individ mai
rezistent la factorii de mediu;
- mutaii defavorabile, negative, letale sau subletale ce determin apariia unor anomalii
incompatibile cu viaa sau stri patologice;
- mutaii neutre care nu afecteaz vitalitatea producnd polimorfisme genice i fenotipice.
POLIMORFISMUL ADN
Analiza genomurilor umane, alese la ntmplare, indic identitatea lor n proporie 99,9%, iar
0,1% prezint variante diferite ale unei secvene de ADN. Aceste variaii pot fi att n interiorul
genelor, ct i n regiunile intergenice, ultimele fiind mai frecvente deoarece nu sunt eliminate de
selecia natural.
Polimorfismul ADN se refer la variaiile nucleotidice din diferite regiuni ale ADN-ului.
Exist mai multe tipuri de polimorfisme ADN:
- variaii a unui singur nucleotid SNP (single nucleotid polymorphism);
- variaii microsatelitice di-, tri-, tetra- i pentanucleotidice STR (short tandem reapeats);
- variaii minisatelitice cu secvene de 10-15 p.n. repetate n tandem - VNTR (variable number
tandem reapeats).
Secvenele polimorfe n genomul uman sunt ntlnite cu o frecven de un situs polimorf la
300-500 nucleotide.
Polimorfisme ADN nu se manifest n fenotip i constituie baza molecular a individualitii
ADN-lui uman amprent genetic , iar situsurile polimorfe marcheri n studiile populaionale
sau n identificarea persoanelor dactiloscopia genomic.
21
CURS 4
CROMOZOMII UMANI
Termenul de cromozom a fost propus n 1888 de Waldeyer cu referin la corpusculi colorai
ce pot fi vizualizai pe parcursul diviziunii celulare. n interfaz cromozomii sunt decondensai i se
prezint sub form de filamente, fibre sau bucle de cromatin bine organizate n nucleul celulei,
aspectul cruia depinde de tipul celulei sau perioada ontogenetic. Segmentele de cromatin active
transcripional se prezint sub form de eucromatin, iar cele ce nu se transcriu sub form de
heterocromatin. Cromozomii metafazici reprezint nivelul maximal de condensare a materialului
genetic nuclear, iar studiul cromozomilor n metafaz permite identificarea precis a fiecrui
cromozom, evaluarea morfologiei cromozomilor.
23
24
Cromozomii sunt cel mai uor de analizat n metafaz sau prometafaz deoarece:
se afl n acelai plan placa ecuatorial;
sunt compactizai i pot fi uor individualizai;
sunt bicromatidieni, iar cromatidele surori sunt unite prin centromer, ce permite diferenierea
cromozomilor dup form.
Telomerii (t) sunt secvene specifice de ADN asociate cu proteine speciale de la capetele
cromozomilor
(a) secvene scurte (TTAGGG) repetate n tandem de mii de ori i
(b) secvene de ADN specifice fiecrui cromozom.
Telomerii:
- protejeaz capetele cromozomilor de nucleaze;
- mpiedic fuziunea cromozomilor;
- asigur replicarea complet a ADN-ului nuclear i previn scurtarea progresiv a
telomerilor datorit activitii telomerazei;
- controleaz senescena celulelor i organismului pluricelular;
- contribuie la fixarea cromatinei de anvelopa nucleului interfazic, controlnd arhitectura
nucleului interfazic;
- particip la conjugarea cromozomilor omologi n meioz.
Constriciile secundare (h) reprezint regiuni de ADN repetitiv despiralizate, slab colorate,
prezente pe braele distale ale unor cromozomi (1, 9, 16, mai rar pe crs. 4,6,10 i Y) i pe braele
proximale ale cromozomilor acrocentrici 13, 14, 15, 21 i 22, ce conin organizatori nuclelolari.
Lungimea constriciilor secundare poate varia individual.
Sateliii (s) reprezint mici segmnente de heterocromatin constitutiv separate prin
constricia secundar la capetele braelor proximale ale cromozomilor acrocentrici 13, 14, 15, 21 i
22; numrul i dimensiunile sateliilor pot varia de la o persoan la alta.
Situsurile fragile reprezint nite regiuni cromozomiale decondensate, cu rezisten sczut
la aciunea mutagen ce se pot rupe uor determinnd rearanjamente cromozomiale. Situsurile
fragile sunt considerate ca marcheri genetici normali dac afecteaz regiunile de heterocromatin
constitutiv; se pot asocia cu unele stri patologice dac afecteaz regiuni crs codante (ex. FRAXA
i retardul mental familial); pot avea un rol n progresia tumoral (inactivarea unor gene supresoare
de tumori).
26
metacentrici:
Ic = 31
45%
Ic = 17
30%
submetacentrici:
acrocentrici:
27
Ic = 46
49%
28
29
(2) Blocarea diviziunilor n metafaz se face cu substane care inhib formarea fusului de
diviziune (citostatice) colchicin sau colcemida.
(3) Realizarea preparatelor (lamelor) pentru studiul la microscop impune urmtoarele
etape:
hipotonizarea celulelor pentru dilatarea celulelor i dispersarea cromozomilor (centrifugare,
eliminarea supernatantului i resuspendare n soluie hipotonic de KCl);
fixarea celulelor pentru a ntrerupe activitatea vital a celulei, pstrnd morfologia cromozomilor
(alcool + acid acetic);
colorarea cu soluie Giemsa sau un alt colorant specific pentru cromozomi;
examinarea la microscopul optic, ce permite analiza cromozomilor pentru evidenierea eventualelor
anomalii de numr (omogene sau n mozaic) sau anomalii de structur;
fotografierea plcilor metafazice din frotiu i decuparea cromozomilor;
identificarea cromozomilor i efectuarea cariogramei (idiogramei).
30
Metodele de marcaj n benzi au aprut relativ recent, n anii '70, i au determinat o revoluie n
citogenetic, deoarece au o mare valoare practic:
marcajul n benzi reflect structura discontinu a cromozomilor, respectiv alternana de
eucromatin i heterocromatin, de secvene de ADN bogate n AT sau GC, de segmente de
cromatin cu concentraie diferit de proteine histone i proteine nehistone;
modelul benzilor este identic n toate celulele unui organism i la toi indivizii aceleiai specii, de
aceea efectuarea marcajului n benzi permite identificarea precis a unei specii;
metodele de marcaj n benzi permit un diagnostic citogenetic foarte precis n multe anomalii de
structur (deleii, inversii) care nu se evideniaz sau se evideniaz foarte greu n coloraia
obinuit.
31
i.
ii.
iii.
iv.
v.
anticorpii antidigoxigeninici; la aceste substane se pot aduga unul sau mai muli colorani
fluoresceni;
cromozomii colorai se vizualizeaz la microscop pe fondul cromozomilor necolorai.
numrul cromozomului implicat (de ex..: 47, XX, +21 (trisomia 21); 47,XY,+13 (trisomia
13); 45,XX,-8 (monosomia 8); etc.;
o anomalii ale gonosomilor se scrie numrul total de cromozomi, urmat dup virgul de
gonosomii respectivi (de ex.: 45,X (monosomia X); 47,XXY (disomia X); 47,XXX
(trisomia X)).
n rezultatul colorrii difereniate pe fiecare cromozom se pot observa o serie de repere, elemente
importante pentru identificarea unui cromozom:
- benzi net conturate,
- centromerul,
- telomerele.
Dea lungul braelor cromozomilor sunt delimitate regiuni. Fiecare regiune are mai multe benzi, iar
benzile pot avea subbenzi.
Cromozomii metafazici prezint 400 - 500 benzi, n timp ce cromozomii aflai n profaza timpurie
prezint 1800-2000 benzi (metode de nalt rezoluie).
34
Simboluri
A-G
1-22
X, Y
/
p
q
pter
qter
cen
del
der
dup
dic
fra
i
ins
inv
mat
pat
r
t
upd
::
+
-
36
CURS 5
ANOMALII CROMOZOMICE
Anomaliile cromozomice reprezint modificri ale numrului cromozomilor caracteristic
speciei (46 n celulele somatice umane) sau modificri structurale ale acestora. n literatur sunt
ntlnite noiunile de mutaii genomice (ce explic anomaliile cromozomice de numr) i mutaii sau
aberaii cromozomice (ce se refer la anomaliile de structur). Anomalii cromozomice numerice
afecteaz ntregul cromozom i cele structurale implic rearanjamente ale structurii cromozomilor.
Translocaiile sunt anomalii de structur caracterizate prin trecerea unuia sau mai multor
fragmente cromozomice de pe un cromozom pe altul, fr a determina modificri fenotipice.
Translocaiile pot fi de trei tipuri:
- reciproce - produse prin ruperea a doi cromozomi n cte un punct, urmat de schimbul
fragmentelor rupte i realipirea cromozomilor;
cu inserii - produse prin ruperea a doi cromozomi neomologi, unul ntr-un punct i cellalt n
dou puncte de pe acelai bra, urmat de inserarea n punctul de ruptur al primului cromozom al
fragmentului intermediar din al doilea cromozom;
robertsoniene - produse prin ruperea a doi cromozomi acrocentrici la nivelul centromerului urmat
de fuziunea braelor lungi (fuziune centric) i pierderea braelor scurte (conin doar gene pentru
38
ARN ribosomal i, astfel, pierderea lor nu determin modificri fenotipice); acest tip de anomalii
conduce la scderea numrului de cromozomi de la 46 la 45.
Anomaliile cromozomice
echilibrate
nu
modific fenotipul individului,
deoarece reprezint rearanjri cromozomice, care nu determin modificri cantitative ale materialului
genetic. Dar, purttorul unei translocaii echilibrate, dei normal fenotipic, poate produce gamei
anormali datorit erorilor de conjugare i erorilor de segregare (nedisjuncii) ale cromozomilor
implicai n translocaie.
39
40
43
CURS
PARTICULARITILE CROMOZOMILOR X i Y
Gonosomii provin dintr-o pereche de autosomi, care n procesul evoluiei s-au difereniat
genetic i morfologic, formnd cei doi cromozomi X i Y. Acest proces s-a realizat prin
specializarea progresiv a cromozomului Y, care a pstrat genele determinismului sexual i a
pierdut aproape toate genele somatice, devenind mult mai mic ca cromozomul X, care a conservat
forma original pstrnd att genele de sexualizare, ct i cele somatice. Diferenierea celor doi
gonosomi a fost necesar pentru:
- a mpiedica schimbul de gene ntre cromozomul X i Y n meioz i permite conservarea pur a
determinanilor sexuali specifici fiecrui cromozom;
- a asigura ulterior obinerea unor zigoi cu sexe genetic distincte XX sau XY.
Cromozomii de sex (gonozomi, heterozomi) se deosebesc att dup structur (dimensiuni,
poziia centromerului, cantitatea de heterocromatin), ct i dup coninutul de gene.
Cromozomul X - este un cromozom submetacentric mediu (Grupa C). Este prezent n
celulele somatice la indivizii de ambele sexe: n dublu exemplar la femeile cu cariotip 46,XX i ntrun singur exemplar la brbaii cu cariotip 46,XY; este prezent ntr-un singur exemplar n ovule circa
1606 gene:
gene structurale pentru caractere somatice (de ex., grupa sanguin Xg, factorii VIII i
IX de coagulare, enzima glucozo-6-fosfat dehidrogenaza, vederea cromatic etc.);
gene reglatoare feminizante;
gene structurale feminizante;
gene structurale masculinizante.
Cromozomul Y este un cromozom acrocentric mic (Grupa G), 2/3 din braul q este
inactiv genetic, fiind heterocromatinizat. Este prezent ntr-un singur exemplar n celulele somatice
ale indivizilor de sex masculin cu cariotip 46,XY i n 50% din spermatozoizi. Cromozomul Y
conine circa 397 gene:
gene reglatoare masculinizante (SRY = Tdf);
gene care asigur fertilitatea (AZF1, AZF2);
gene structurale somatice (factorul de control al creterii dinilor, receptor
interleukin);
pseudogene (actin, Xg).
Deoarece genomul feminin conine doi cromozomi X, iar cel masculin un singur cromozom
X, produii genelor localizate pe cromozomii X ar trebui s fie ntr-o cantitate dubl la femeie fa
de brbat. Acest lucru ns nu se ntmpl datorit inactivrii unui cromozom X la femeile normale
i a cromozomilor X suplimentari la indivizii ce se abat de la normal, fapt ce determin s rmn n
stare funcional un singur cromozom X la ambele sexe, fenomen denumit compensaie de doz a
genelor X-linkate.
i.
ii.
Ipoteza existenei unui asemenea mecanism a fost formulat n 1961 de Mary Lyon i
cuprinde trei postulate:
n celulele somatice este activ un singur cromozom X, restul fiind inactivai i nedisponibili
pentru transcripie. Procesul de inactivare este un proces de heterocromatinizare: cromozomul X
inactivat este puternic condensat i vizibil n interfaz sub forma corpusculului Barr; replicarea
lui se produce la sfritul perioadei S.
Inactivarea se produce la nceputul vieii intrauterine, nainte de implantarea blastocistului (la
ziua a 16-18, la etapa de ~3000-4000 celule). Pn la acest moment ambii cromozomi X sunt
activi (se sintetizeaz ARNm, enzime); embrionii 46,XX i 46,XY sunt biochimic i funcional
44
iii.
diferii; inactivarea unui din cromozomii X, odat aprut, rmne definitiv la toi descendenii
celulei.
Inactivarea cromozomului X-matern sau X-patern are un caracter ntmpltor i independent n
fiecare celul. Deci fiecare femeie normal este un mozaic de celule somatice, unele avnd
activ X-ul matern, altele X-ul patern.
- Xpter;
- Ypter;
II regiunea cu gene specifice numai crs X;
III regiunea crs Y cu gene masculinizante;
IV regiunea crs Y (2/3Yq) cu secvene necodificatoare heterocromatin constitutiv.
45
TESTUL CROMATINEI X
Cromatina X reprezint un cromocentru vizibil, n mod normal, n nucleii interfazici ai celulelor
aparinnd sexului feminin; ea rezult prin heterocromatinizarea unuia dintre cei doi cromozomi X.
Originea i semnificaia cromatinei X a fost explicat de Mary Lyon (1961).
Studiul celulelor interfazice din orice esut provenit de la organismul feminin normal permite
identificarea cromatinei sexuale X. Tehnicile uzuale folosesc frotiul din celulele mucoasei bucale
(testul Barr) i frotiul din snge periferic. Evaluarea acestor teste presupune stabilirea numrului
cromozomilor X n corelaie cu numrul de corpusculi de heterocromatin X.
Corpusculul Barr reprezint un cromozom X heterocromatinizat, puternic condensat i intens
colorat bazofil. Este situat cel mai frecvent periferic, lipit de faa intern a membranei nucleare
(intranuclear) i are o form oval, plan convex, discoidal sau triunghiular. Mrimea medie este de
1 micron ( 0,3). Cnd corpusculul Barr este situat central trebuie difereniat de cromocentri nespecifici
sau de nucleol, care se prezint ca o formaiune rotund, cu dimensiuni mai mari, ce se coloreaz n
brun-crmiziu cu verde de metilpironin.
n mod normal corpusculul Barr este prezent ntr-un singur exemplar la femeie i lipsete la brbat,
deoarece brbatul are un singur cromozom X, iar acesta nu se inactiveaz, n timp ce femeia are doi
cromozomi X, din care unul se inactiveaz.
n frotiurile mucoasei bucale frecvena teoretic a corpusculului Barr este de 100%, iar practic aproximativ de 30-40%. Aceast frecven real se datoreaz:
- excluderii corpusculilor situai central;
46
calitilor improprii ale unor nuclei din celulele superficiale sau profunde;
defectelor de colorare;
existenei reale a celulelor cromatin-negative: cromozomul X inactiv nu se condenseaz din cauza
unor condiii metabolice generale sau celulare;
alte cauze: vrsta, ciclu ovarian, boli, tratamente.
TESTUL CROMATINEI Y
Cromatina Y reprezint aspectul interfazic al celor 2/3 distale ale braului q al cromozomului
Y. Se evideniaz prin colorare cu quinacrin prezentndu-se un corpuscul intens fluorescent (corpuscul
F), vizibil n nucleul interfazic. Mrimea lui este de 0,25 microni i este situat liber sau lipit de
membrana nuclear. Frecvena este diferit n diferite esuturi ale organismului masculin:
70-80% n fibroblati;
45% n spermatozoizi;
Corpusculul F este prezent exclusiv la brbat ntr-un singur exemplar; poate fi prezent n dou
exemplare la persoanele cu cariotip 47,XYY.
VALOAREA PRACTIC A TESTULUI CROMATINEI SEXUALE
Testul cromatinei X este un test rapid, foarte util n multe situaii, care poate fi efectuat n condiii
de dotare minim, cu mijloace modeste:
a) prenatal: n celulele extrase prin puncie amniotic - permite stabilirea sexului genetic al
ftului n anomaliile gonosomale recesive (de exemplu hemofilie sau miopatie Duchenne) n cazul n
care femeia este purttoare a genei anormale (risc 50%).
b) la natere: n cazul ambiguitii sexuale la nou nscuii cu testicul nepalpabil - pentru precizarea
sexului genetic i punerea n concordan cu sexul civil; sexul civil are importan mai ales n
edificarea ulterioar a sexului psiho-comportamental.
c) mai trziu: n diferite anomalii de sexualizare pentru precizarea sexului genetic; diagnosticul
disgeneziilor gonadice orhitice sau ovariene prin anomalii de numr i structur a cromozomilor
sexuali.
d) n medicina legal i criminalistic pentru precizarea provenienei feminine sau masculine a
unor fragmente de esuturi, pete de snge, fire de pr.
DAR, testul cromatinei sexuale este un test subiectiv, nu poate depista toate mozaicurile i nici
anomaliile autozomilor; n multe situaii, pentru precizare necesit efectuarea cariotipului.
47
CURS 6
TRANSMITEREA MATERIALULUI GENETIC DE LA CELUL LA CELUL
Una dintre proprietile fundamentale ale organismelor vii este autoreproducerea, asigurat
de proprietatea unic a moleculelor de ADN de a se replica. n timpul replicrii materialul genetic se
dubleaz, iar n timpul diviziunii celulare are loc distribuia lui descendenilor. Astfel, diviziunea
celular este ansamblul de evenimente genetice, biochimice i
morfologice, ce asigur, prin intermediul cromozomilor, transmiterea
informaiei genetice la generaiile urmtoare de celule sau organisme.
Transmiterea informaiei genetice de la celul la celul se realizeaz
n dou etape majore:
- dublarea ADN cromozomial;
- repartizarea egal i identic a cromozomilor celulelor
fiice.
Acurateea dublrii materialului genetic i distribuiei
cromozomilor n timpul diviziunii celulare sunt
asigurate de
succesiunea evenimentelor ciclului celular (ciclului mitotic) programate
genetic. Fiecare ciclu celular cuprinde dou perioade dinamic i calitativ
distincte: interfaza i mitoza.
Nr de
cromozo
mi
Nr de
mol.
ADN
Dublarea
materialului
genetic
G1
46
46
slab condensat
46
92
Replicare
slab condensat
G2
46
92
slab condensat
Profaza
46
92
puternic condensat
Metafaza
46
92
maximal condensat
Anafaza
92
92
puternic condensat
Disjuncia
cromatidelor
surori
Telofaza
46 + 46
46 + 46
puternic / slab
condensat
Citochineza
MITOZA
INTERFAZA
Perioadele ciclului
celular
Compactizarea
materialului genetic
Segregarea
materialului
genetic
Interfaza reprezint perioada dintre diviziuni pe parcursul creia materialul genetic este
decondensat i se prezint sub form de cromatin; informaia genetic este realizat prin expresia
unor anumite seturi de gene i sinteza diferitor proteine care asigur vitalitatea celulei, creterea,
specializarea celular i integrarea ei ntr-un esut. Pe parcursul interfazei celula primete semnale
mitogene (pentru celulele esuturilor proliferative inducerea mitozei este programat). Recepionnd
semnalele mitogene, celula deruleaz procesele de pregtire ctre mitoz:
- replicarea ADN cromozomial cu dublarea materialului genetic, cromozomii devenind
bicromatidieni;
48
controlul calitii materialului genetic i nlturarea defectelor din moleculele de ADN prin
activarea diferitor sisteme reparative;
dublarea centriolilor, care vor asigura formarea fusului de diviziune n timpul mitozei.
DUBLAREA MATERIALULUI GENETIC
Replicarea este procesul molecular prin care se realizeaz dublarea exact a moleculelor de
ADN (a secvenei nucleotidice), i n consecin dublarea exact a materialului genetic. Dintr-o
molecul de ADN se formeaz dou molecule identice att ntre ele, ct i cu molecula parental.
Acest proces are loc datorit particularitilor unice de organizare a moleculelor de ADN: ADN
este format din dou catene polinucleotidice complementare i antiparalele.
Principalele caracteristici ale replicrii sunt:
- sinteza replicativ a ADN-ului este semiconservativ, deoarece
fiecare din cele dou catene este folosit ca matri pentru sinteza unei
catene noi de ADN, noile molecule conin o caten matri i alta nou;
- replicarea ADN-ului nuclear are loc numai o singur dat pe
parcursul ciclului mitotic, n perioada sintetic a interfazei;
- procesul este asincron - unele secvene de ADN se replic mai
precoce (eucromatina), iar alte secvene mai tardiv (heterocromatina).
n rezultatul sintezei replicative a ADN-ului materialul genetic se
dubleaz i cromozomii devin bicromatidieni. Dac pn la replicare n
celul sunt 46 de cromozomi monocromatidieni (46 de molecule de
ADN) dup replicare cei 46 de cromozomi devin bicromatidieni (92 de
molecule de ADN). Moleculele de ADN obinute prin replicare rmn
unite prin centromer pn n anafaz (dou molecule de ADN identice
ntre ele reprezint cromatidele surori ale unui cromozom) .
Replicarea semiconservativ a
ADN-ului
toi cromozomii sunt bicromatidieni; cromatidele surori sun identice, rezultate prin replicarea
ADN-ului cromozomial, cromatidele sunt unite prin centromer de la sfritul perioadei S pn n
Anafaz;
microtubului fusului de diviziune se unesc cu cromozomii de ambele pri ale centromerului prin
intermediul kinetocorilor;
49
cromozomii maximal condensai, se aranjeaz ntr-un singur plan ecuatorial placa metafazic,
datorit aparatului de diviziune;
procesul de repartizare a materialului genetic se finalizeaz prin formarea a doi nuclei identici
urmat de citochinez.
Astfel, materialul genetic (cei 46 de cromozomi ai celulei somatice replicai), prin mitoz se
transmite de la o celul la dou celule fiice. Celulele rezultate motenesc cte 46 de cromozomi
material genetic identic, set de gene identic. Mitoza, n aa mod, reprezint mecanismul ce asigur
proprietatea celulelor de a transmite n succesiunea generaiilor material genetic identic.
Rolul biologic al mitozei:
asigur transmiterea egal i identic a materialului genetic n succesiunea generaiilor de
celule;
reprezint mecanismul universal de nmulire a celulelor somatice la organismele
pluricelulare;
asigur creterea organismelor pluricelulare la etapele prenatale i postnatal;
reprezint mecanismul prin care se rennoiesc esuturile;
intervine n procesul de regenerare a esuturilor.
50
INTERFAZA
Perioadele
ciclului celular
G1
G2
MITOZA
Profaza
Metafaza
Anafaza
Telofaza
Procese
genetice de
baz
Forma de prezentare a
materialului genetic
Transcripia
Translaia
Reparaia
Cromozomi monocromatidieni,
decondensai sub form de
eucromatin i heterocromatin
Replicarea
Reparaia
Transcripia
Translaia
Reparaia
Transcripia
Translaia
-
Cromozomii devin
bicromatidieni, decondensai
sub form de eucromatin i
heterocromatin
Cromozomi bicromatidieni,
decondensai sub form de
eucromatin i heterocromatin
Cromozomii bicromatidieni
se condenseaz
Cromozomi bicromatidieni
maximal condensai
ERORILE MITOZEI
Erorile mitozei reprezint anomalii de distribuie a materialului genetic n timpul diviziunii
celulare. nsi distribuia materialului ereditar are loc n anafaz prin clivarea longitudinal a
centromerului, segregarea cromatidelor i migrarea lor simultan spre polii celulei, iar prin separarea
citoplasmei cele dou celule-fiice motenesc un numr identic de cromozomi. Din diverse motive
(defecte genetice, defecte metabolice, aciunea factorilor de mediu) aceste procese celulare pot fi
dereglate; se pot produce:
- asamblare anormal a fusului acromatic i interaciune defectuoas cu kinetocorii;
- depolimerizare asincron a microtubulilor, care determin migrarea neconcomitent a
cromozomilor spre polii celulei;
- defecte n structura centromerului ce mpiedic separarea cromatidelor-surori;
- modificarea viscozitii citoplasmei care poate mpiedica procesul normal de deplasare a
cromozomilor spre polii celulelor, etc.
Principalele erori ce conduc la o distribuie anormal a materialului genetic sunt:
51
52
NEDISJUNCIA CROMATIDIAN
Cromatidele surori ale unui cromozom, rezultate prin replicarea premitotic a ADN-ului
cromozomial, se separ una de alta dup clivarea centromerului. Acest proces reprezint momentul
cheie n distribuia materialului genetic n timpul diviziunii. n caz de neseparare nondisjuncie
cromatidele surori ale unui cromozom vor migra la acelai pol, determinnd o repartizare inegal a
materialului genetic. Ca rezultat una dintre celulele fiice va moteni un cromozom n plus (2n+1
47 cromozomi trisomie), iar n cealalt celul va lipsi cromozomul respectiv (2n-1 45
cromozomi monosomie). Ex.:
46, XX NDcrsX
45,X / 47,XXX ;
NDcrsY
46, XY
45,X / 47,XYY;
NDcrs 13
46, XX
45,XX,-13 / 47,XX,+13;
NDcrs 18
46, XY
45,XY, -18 / 47,XY,+18;
NDcrs 21
46, XY
45,XY,-21 / 47,XY,+21;
NDcrs 8
46, XX
45,XX,-8 / 47,XX,+8;
etc.
NTRZIEREA ANAFAZIC
Dup separarea cromatidelor-surori, prin depolimerizarea fusului de diviziune, are loc migrarea
simultan a cromozomilor monocromatidieni spre poli opui. La fiecare pol ajung cte 46 cromozomi,
care vor fi separai n dou nuclee, iar prin citochinez vor rezulta dou celule cu coninut genetic
identic. Ca rezultat al defectelor de dezasambalre a microtubulilor sau a modificrii viscozitii
citoplasmatice migrarea cromozomilor poate fi asincron. n rezultat, unii cromozomi vor nimeri n
nucleul celulei-fiice, iar alii, cei ntrziai, vor forma micronuclei citoplasmatici, care vor degrada. n
consecin, celulele fiice motenesc seturi diferite de cromozomi: una dintre celule poate obine un set
normal, iar cealalt celul va fi monosomic. Ex.:
46, XX IAcrsX 45,X / 46,XX;
46, XY IAcrsY 45,X / 46,XY;
46, XX IAcrs13 45,XX,-13 / 46,XX;
46, XY IAcrs18 45,XY, -18 / 46,XY;
etc.
CONSECINELE ERORILOR DIN MITOZ
Erorile de distribuie a materialului genetic n mitoz determin apariia celulelor cu seturi diferite
de cromozomi n acelai organism - mozaicuri celulare cromozomice ce pot genera dou sau mai
multe linii sau clone celulare, care difer prin numrul de cromozomi.
Evoluia clonelor celulare anormale depinde de viabilitatea celulelor care prezint anomalia
cromozomic:
a. anomaliile grave determin moartea celulelor anormale (clonele anormale se autoelimin);
b. anomaliile mai puin grave permit multiplicarea celulei anormale cu apariia unei clone
anormale.
Trisomiile sunt mai puin grave ca monosomiile, anomaliile gonosomilor sunt mai puin grave ca
anomaliile autosomilor; cromozomii mai mici au mai puine gene i anomaliile lor sunt mai puin grave
ca anomaliile cromozomilor mari.
Anomalii
cromozomiale
Erori mitotice
cauze ale anomaliilor cromozomiale
Nedisjuncia cromatidian
Trisomii
(47,+?)
Monosomii
(45,-?)
Nedisjuncia cromatidian;
ntrzierea anafazic
i (?p)
Clivarea transversal a centromerului
i (?q)
Anomalii
cromosomice viabile
Anomalii
cromosomice letale
47,XXX
47,XXY
47,XYY
47,XX(XY),+21
47,XX(XY),+13
47,XX(XY),+18
47,XX(XY),+8
45,X
Restul
trisomiilor
autozomale
46,X,i (Xp)
46,X,i (Yp)
Restul
anomaliilor crs
46,XX(XY),i (?p)
46,X,i (Xq)
46,X,i (Yg)
46,XX(XY),i (Dq)
46,XX(XY),i (Gq)
Restul
anomaliilor crs
46,XX(XY),i (?q)
Toate
monosomiile
autozomale
Consecinele fenotipice ale clonelor anormale depind de momentul ontogenetic al apariiei lor.
Dac se produc n timpul embriogenezei - este perturbat formarea normal a esuturilor i organelor
producnd anomalii congenitale (fenotip anormal la natere); n caz dac apar postnatal se produce
perturbarea structurii sau funciei anumit esut sau organ i apare o degenerare neoplazic (cancer).
SALVAREA ANEUPLOIDIILOR
Organismul are tendina de a corecta dezechilibrul genetic, ncercnd s elimine cromozomul supranumerar
n cazul trisomiilor sau s ctige un cromozom n plus n cazul monosomiilor.
Corecia unei trisomii n disomie se poate realiza prin urmtoareale mecanisme:
- nedisjuncie mitotic;
- ntrziere anafazic;
- pulverizarea cromosomului supranumerar.
Corecia monosomiei n disomie poate fi realizat prin:
- nondisjuncie mitotic;
- endoreplicare selectiv a cromosomului monosomic;
- clivare transversal a centromerului ce rezult iso q. n cazul acrosomilor.
Consecina unui mecanism de salvare a unei aneuploidii este disomia uniparental. Trisomiile ce sunt
corectate prin pierderea unuia din cei trei cromosomi, 1/3 cazuri - rezult o disomie uniparent (DUP).
Monosomiile sunt corectate prin duplicarea cromosomului monosomic, rezultnd ntotdeauna DUP.
54
n cazul n care corecia se produce doar n anumite celule, rezult mozaicuri cromosomice:
- corecia unei trisomii prin pierderea cromosomului suplimentar determin producerea unui mozaic
47/46;
- corecia unei monosomii prin duplicarea cromosomului fr omolog determin producerea unui
mozaic 46/45.
Mozaicurile cromosomice pot fi mprite n trei categorii:
I. mozaicuri generalizate, prezente n toate esuturile organismului;
II. mozaicuri limitate la anumite esuturi embrionare;
III. mozaicuri limitate la placent.
55
CURS 7
TRANSMITEREA INFORMAIEI GENETICE DE LA PRINI LA COPII
Perpetuarea speciei i pstrarea caracterelor distinctive sunt determinare pe proprietatea
fundamental a organismelor vii de a se autoreproduce. Pe parcursul evoluiei lumii vii a aprut
necesitatea nmulirii sexuate care asigur diversitatea intraspecific fenomen important pentru
supravieuire: asigur recombinarea materialului genetic, determin apariia indivizilor cu
combinaii noi de caractere cu o susceptibilitate diferit la agresiunile din mediul ambiant i, n
consecin, reprezint un mecanism important n selecia natural.
La organismele cu reproducere sexuat legtura material dintre generaii, transmiterea i
conservarea informaiei genetice de la o generaie la alta este asigurat de dou procese genetice
distincte:
- gametogeneza - producerea celulelor sexuale mature cu set haploid de cromozomi (n=23),
- fecundarea gameilor i formarea zigotului cu set diploid de cromozomi (2n=46) cu o
configuraie genetic nou, unic i constant.
GAMETOGENEZA
Gametogeneza este ansamblul proceselor genetice, biochimice i morfologice, care
determin formarea i maturaia gameilor n gonade (testicule sau ovare).
Ovogeneza este mecanismul de difereniere a ovulelor haploide din celule sexuale primare
diploide (ovogonii); se desfoar n ovare; unele procese se realizeaz n perioada embrio-fetal, iar
alte numai dup pubertate pn la menopauz; populaia de ovocite nu se rennoiete, iar nsi
procesul este discontinuu, cu dou faze de ateptare (dictiotenul profazei I i metafaza II ale
meiozei).
Spermatogeneza reprezint procesul de difereniere a spermatozoizilor haploizi din celule
sexuale primare diploide (spermatogonii); are loc n testicule; se desfoar n mai multe etape, cu
rennoirea permanent a populaiilor de celule sexuale dup pubertate.
perioada de cretere cu formarea gametociilor de ordinul I (2n=46 crs) prin replicarea ADNului cromozomial, sinteza componentelor necesare pentru meioz i acumularea factorilor ce
asigur formarea i dezvoltarea zigotului;
perioada de maturaie cu formarea gameilor haploizi, realizat prin meioz proces decisiv n
gametogenez:
- pe parcursul ovogenezei dintr-o ovogonie se maturizeaz doar un ovul capabil de fecundaie
i doi/ trei globuli polari;
- pe parcursul spermatogenezei dintr-o spermatogonie se maturizeaz patru spermatide;
56
Ovogeneza
Spermatogeneza
Locul desfurrii
57
FECUNDAREA
Contopirea gameilor haploizi de origine parental diferit poart denumirea de fecundare,
iar celula rezultat ce conine materialul genetic al ambilor gamei - zigot. Gameii formai n timpul
ovogenezei i spermatogenezei sunt foarte variai, pentru c rezult n urma unor procese de
recombinare intra- i intercromozomial. Participarea ovulelor i spermatozoizilor la fecundaie este
aleatorie, asigurnd formarea diferitor variante genetice de zigoi, ceea ce reprezint recombinarea
genomic.
Fuziunea celor doi gamei haploizi reface setul diploid de cromozomi, caracteristic speciei.
Mitozele succesive ale zigotului duc la creterea i dezvoltarea organismului pluricelular. ncepnd
cu zigotul, toate celulele somatice vor avea cromozomii n perechi. Cromozomii pereche sau
omologii sunt asemntori ca morfologie i structur genic, dar diferii ca origine.
n concluzie, organismul uman matur posed dou linii celulare:
(i) celule somatice ce alctuiesc diferite esuturi i organe:
- au set diploid de cromozomi (2n=46crs);
- provin de la celula zigot prin mitoze repetate;
- 51% din materialul genetic este de origine matern i 49% de origine patern (deoarece
ADNmt este de origine matern);
- se nmulesc prin mitoz pentru a asigura creterea organismului, rennoire i regenerarea
esuturilor;
(ii) celule sexuale care asigur transmiterea materialului genetic de la prini la descendeni la
formarea zigotului;
- au set haploid de cromozomi (n=23crs);
- provin din gametogonii (celule diploide), care reprezint celule somatice specializate pentru
gametogenez;
- se maturizeaz n gonade prin meioz;
- determin stabilitatea numrului de cromozomi la specia dat.
DINAMICA CROMOZOMILOR N MEIOZ
Meioza (meiosis micorare) este un mecanism complex ce implic desfurarea
succesiv a dou diviziuni, care se termin cu njumtirea setului de cromozomi. Din fiecare
celul cu 46 cromozomi (set diploid) se formeaz 4 gamei cu cte 23 cromozomi (set haploid).
Gameii sunt extrem de variai pentru c, rezultai din meioz, sunt produi ai recombinrii intra- i
intercromozomice.
58
Meioza este precedat de o interfaz premeiotic n care are lor replicarea ADN-ului. ntre
cele dou diviziuni exist o perioad scurt interkineza n care ADN-ul nu se replic.
Prima diviziune a meiozei diviziunea reducional asigur njumtirea numrului de
cromozomi n celulele: transform gametocitele de ordin I cu 46 cromozomi bicromatidieni n
gametocite de ordin II cu 23 cromozomi bicromatidieni.
Reducerea numrului de cromozomi este determinat de:
- conjugarea cromozomilor omologi cu formarea a 23 de bivaleni (tetrade) n profaza I;
- aranjarea bivalenilor n plan ecuatorial n metafaza I;
- disjuncia cromozomilor omologi i migrarea spre polii celulei a cromozomilor bicromatidieni,
cte un cromozom din fiecare pereche n anafaza I;
- citokineza asigur separarea masei citoplasmatice cu formarea a dou celule cu numr haploid de
cromozomi dar bicromatidieni (cu cantitate dubl de ADN 1n=2c) gametocite de ordinul II.
59
Nr. de cromozomi
Nr. de cromatide
Dublarea
mat.
genetic
Recombin
area
Segregarea
mat. genetic
Interfapa
premeiotic
46
(gametocit I)
92
PI
46
92
MI
46
92
AI
46
92
46 + 46
Citokineza
MEIOZA I
reducional
Perioadele ciclului
celular
TI
MEIOZA II
ecvaional
Inerchineza
23 + 23
(gametocii II)
23
23
46
46
P II
23
23
46
46
M II
23
23
46
46
A II
46
46
46
46
T II
23+23
23+23
23+23
23+23
Citokineza
(gamei)
braului p a cromozomului respectiv), iar dup fecundare se vor forma zigoi cu monosomie parial
i trisomie parial.
Astfel toate erorile de distribuie a materialului genetic n cursul meiozei duc la formarea
gameilor aneuploizi, iar dup fecundare formeaz zigoi aneuploizi (monosomici, trisomici), care n
consecin sunt cauza tulburrilor de reproducere: sterilitate, avorturi spontane, nou nscui mori
sau malformaii, copii cu tulburri de cretere pre i postnatal, ntrziere n dezvoltarea
psihomotorie.
ERORI LA FECUNDARE
Fecundarea dubl este posibil cnd ovarul elibereaz n momentul ovulaiei dou ovule i
prin fecundare, ele vor forma doi zigoi, care pot evolua independent; sau se pot uni, formnd o
singur structur embrionar denumit himer; n ultimul caz, dac zigoii vor avea acelai sex
genetic, se realizeaz o sexualizare normal i numai unele studii a caracterelor vor evidenia o
populaie celular dubl; dac zigoii care s-au unit au sexe genetice diferite, se realizeaz o
constituie XX/XY cu tulburri de sexualizare hermafroditism adevrat.
Dispermia este posibil cnd un ovul este fecundat de doi spermatozoizi, rezultnd zigoi
triploizi (69,XXX sau 69,XXY sau 69,XYY).
Diginia sau diandria reprezint fenomenul cnd unul din gamei este diploid i cellalt este
haploid, rezultnd zigoi triploizi; zigoii triploizi evolueaz cu dereglri severe n dezvoltarea
embrionar.
Consecine
Fecundarea dubl
Gemeni
dizigoi
Himer
Dispermie
Triploidie
Diginie
Triploidie
Diandrie
Triploidie
Constituia
genetic
46,XX
i
46,XX
46,XX
i
46,XY
46,XX/46,XX
46,XX/ 46,XY
69,XXX sau
69,XXY sau
69,XYY
69,XXX sau
69,XXY
69,XXY sau
69,XYY
62
Evoluie
Evoluie normal
Evoluie normal
Hermafroditism adevrat
Dereglri
severe
n
embrionar
dezvoltarea
Dereglri
severe
n
dezvoltarea
embrionar, placent mic de form
anormal, avort precoce
Mol hidatiform parial, placent mare,
polichistic, embrion malformat.
CURS 8
GENELE UMANE
n conceptul clasic gena este un segment cromozomial ce controleaz expresia fenotipic a
unui caracter, iar n conceptul contemporan gena reprezint un segment polinucleotidic al moleculei
de ADN ce codific sinteza unei molecule specifice polipeptid sau ARN.
Astfel substratul molecular al informaiei genetice este molecula de ADN, iar substratul
molecular al caracterului morfologic, biochimic sau fiziologic este proteina.
Genele umane se clasific n dou categorii majore: gene structurale care codific
polipeptide i gene codificatoare de molecule de ARNr i ARNt.
63
Categoria
Gene mici
Gene medii
Gene mari
Gene gigante
Gene
supergigante
Lungimea, kb
pn la 10
10-25
25-50
51-100
101-500
peste 500
~2000,0
Dimensiunile
ARNm, kb
0,5
0,6
0,4
2,8
1,6
2,4
9
8,7
Numrul
intronilor
2
2
2
7
12
12
26
36
16,0
60
Tipuri
Dimensiuni
complete
Forme
scurte
Muscular
Cerebral
Cerebral
1-Dp71
4,5-4,8
Intronul 63
2-Dp116
5,5
Intronul 56
3-Dp40
2,2
Dp140
Dp260
7,5
Intronul 44
Expresie
Inim, muchi scheletici
Scoara Hipocamp
Celulele Purkinje
Oriunde, n afar de
muchi
Nervii periferici
Oriunde, n afar de
muchi
Neuroni embrionali
Retin
repetate sau prin meioz se transmit la alte generaii de celule sau de organisme, asigurnd
continuitatea materialului genetic n irul generaiilor i transmitea genealogic a caracterelor ereditatea;
2. Gena este specific - codific o molecul polipeptidic, determin expresia unui caracter;
3. Gena are o aciune dozat asupra fenotipului prin posibilitatea sintezei unei anumite cantiti de
genei de a contribui la formarea mai multor caractere; poate fi primar - determinat de aciunea
multipl a produsului genei sau poate fi secundar determinat de consecinele secundare ale
aciunii proteinei la nivelul diferitor celule, esuturi i organe;
7. Genele pot exista n mai multe forme moleculare (diferite secvene nucleotidice), determinnd o
surs de variabilitate genetic. Prin modificarea secvenei nucleotidice ale unei gene (mutaii)
apar variante noi ale genei alele; alelele multiple controleaz diferite stri sau forme
alternative ale unui caracter; caracterul controlat de o serie de alele multiple se numete caracter
polimorf (25% din genele umane au variante alelice multiple).
65
transcripia copierea informaiei genetice din ADN i sinteza moleculelor precursoare ale
ARNm;
translaia procesul prin care secvena nucleotidelor din ARN este tradus ntr-o secven
de aminoacizi ai lanului polipeptidic.
(II) La nivel celular expresia genei reprezint rezultatul integrrii proteinei sintetizate ntr-o
structur celular, ntr-un lan metabolic sau ntr-o reea de semnalizare celular. Fenotipul celular
morfologia i funcia este controlat de genomul celulei, dar realizat de setul specific de
proteine sintetizate proteinomul.
(III) La nivel organismic expresia genelor se manifest prin caractere morfologice i nsuiri
complexe, datorit cooperrii tuturor componentelor moleculare i supramoleculare n morfogeneza
i fiziogeneza organismului uman.
Astfel, n concept actual, expresia genic este studiat la diferite nivele:
i. molecular polipeptidul sintetizat, care constituie efectul primar al expresiei genice;
ii. celular molecula proteic i funcia ei n celul efectul secundar;
iii. organismic manifestarea fenotipic a genei efectul teriar.
50%
LOCALIZAREA GENELOR
Conform teoriei cromozomiale ale ereditii propus de Th. H. Morgan (1911):
genele sunt localizate pe cromozom, fiecare gen ocup un anumit locus;
genele unui cromozom sunt dispuse liniar i formeaz grupuri de nlnuire;
numrul grupurilor de nlnuire este egal cu numrul haploid de cromozomi;
ntre cromozomii omologi poate avea loc schimb de gene alele (crossing-overul);
frecvena crossing-overului este direct proporional cu distana dintre gene i este invers
proporional puterii de nlnuire;
67
Unele gene au o singur copie, altele gene au mai multe copii i formeaz familii repetitive (n
tandem sau pe diveri cromozomi) sau nerepetitive de gene.
Genele de pe un cromozom, ce sunt localizate foarte aproape una de alta formeaz haplotipuri,
care deseori au elemente reglatoare comune.
Genele localizate pe autosomi determin caractere autozomale ce se transmit de la prini
indiferent de sex, iar genele localizate pe gonosomi determin caractere sex-lincate ce se transmit
dependent de sex:
- genele i caracterele X-lincate se transmit de la mam i fiicelor i fiilor, iar de la tat numai
fiicelor;
- genele i caracterele Y-lincate (holandrice) se transmit exclusiv din tat n fiu.
HRILE GENETICE
Genomul celulei include dou sisteme de gene cu mod de organizare i motenire diferite:
genomul nuclear i genomul mitocondrial.
n nucleul celulelor umane se conin circa 30000 perechi de gene, care sunt repartizate de-a
lungul a 46 molecule de ADN, care corespund celor 46 cromozomi din setul diploid.
Fiecare cromozom conine n medie 1-2000 de gene. Genele sunt dispuse liniar n cromozom,
una dup alta, fiind separate prin secvene necodificatoare (ADN-satelit, spaceri). Genele unui
cromozom se transmit de la o generaie la alta, n bloc, fenomen numit nlnuire genic sau linkage.
Fiecare cromozom reprezint un grup de nlnuire.
Genomul mitocondrial este organizat sub form ADN inelar, conine 37 gene aranjate compact i se
transmite pe linie matern.
Astfel, la om sunt 25 de grupuri de nlnuire:
22 grupuri ale autosomilor;
un grup al cromozomului X;
un grup al cromozomului Y;
un grup genele ADN-ului mitocondrial.
68
Cromozom
Nr. gene
Lungimea, Mb
1
3511
250
2
2368
243
3
1926
198
4
1444
191
5
1633
181
6
2057
171
7
1882
159
8
1315
146
Cromozom
Nr. gene
Lungimea, Mb
9
1534
141
10
1391
136
11
2168
135
12
1714
134
13
720
115
14
1532
107
15
1249
103
16
1326
90
Cromozom
Nr. gene
Lungimea, Mb
17
1773
81
18
557
78
19
2066
59
20
857
63
21
450
48
22
855
51
X
1672
155
Y
429
59
Fenomenul de linkage se manifest numai n cazul genelor plasate pe acelai cromozom, n timp ce
pentru genele plasate pe cromozomi diferii transmiterea ereditar a genelor se face independent,
mendelian.
Studiul mecanismului de transmitere ereditar a artat c nu ntotdeauna genele ce fac parte din
acelai grup linkage se transmit nlnuit. Excepiile sunt explicate prin posibilitatea recombinrii ntre
cromozomii omologi crossing-over, care are loc n meioz. n timpul crossing-overului are loc
schimbul reciproc de gene alele ntre cromozomii pereche - cromozomii omologi.
Frecvena crossing-overului este diferit pentru diveri loci, variaz de la 0% la 50% i este
corelat cu distana dintre gene. La valori de peste 50% nu se mai consider o recombinare, ci o
segregare independent.
Pe baza observaiei c ntre genele foarte apropiate probabilitatea apariiei chiasmelor i
respectiv a fenomenului de crossing-over este mic, iar ntre genele mai ndeprtate crete spre limita
superioar de 50%, determinarea frecvenei recombinrilor genice n procente constituie modalitatea de
stabilire a localizrii genelor pe cromozom i, respectiv, a alctuirii hrilor genetice.
69
n prezent, datorit tehnicilor de genetic molecular, s-au elaborat hrile fizice ale
cromozomilor cu distribuia exact a genelor pe cromozom, iar mrimea genelor i distana dintre ele se
prezint n perechi de nucleotide (pn).
Stabilirea unor relaii (grupe) de nlnuire ntre
gene i, deci, caractere este foarte important n
genetica medical. Se urmrete transmiterea
unor caractere patologice n comun cu un
caracter normal.
Caracterul normal servete ca marcher
(indicator) a unei patologii i este important n
special pentru bolile ce apar pe parcursul vieii.
Exemple de grupe de nlnuire:
- Rh i eliptocitoz (eritrocite cu form oval);
-
70
MUTAIILE GENICE
Mutaiile genice pot interesa genele de structur sau secvenele implicate n reglare: n primul
caz se modific structura (calitatea polipeptidului sintetizat dup informaia genei), n al doilea caz se
schimb ritmul (cantitatea) sau tipul de protein sintetizat. Ca rezultat al mutaiilor genice, se produc
forme alternative ale genei, numite alele.
Clasificarea mutaiilor genice:
A. Dup cauza produceii:
a. Spontane
b. Induse de factori mutageni
B. Dupa tipul de celule afectate:
a. Generative
b. Somatice
C. Dupa numarul de celule mutante:
a. Omogene
b. In mozaic
D. Dupa origine:
a. Motenite
b. De novo
E. Dupa mecanismul de producere:
a. Punctiforme
b. Deleii nucleotidice
c. Inserii nucleotidice
d. Dinamice
F. Dupa genomul implicat:
a. Nucleare
b. Mitocondriale
G. Dupa regiunea genica afectat:
a. Codante
b. Reglatoare
c. Modulatoare
H. Dupa consecine n sinteza proteinelor:
a. Amorfe
b. Hipomorfe
c. Himermorfe
d. Neomorfe
e. Izomorfe
I. Dupa consecinele fenotipice:
a. Neutre
b. Adaptive, evolutive
c. Semiletale, patologice
d. Letale
J. Dupa tipul de transmitere genealogica:
a. Dominante
b. Recesive
c. Codominante
71
Substituia duce la modificarea unui singur codon (sens sau nonsens). Schimbarea unui codon sens
va determina unul din urmtoarele efecte:
- schimbarea aminoacidului ca rezultat al modificrii codonului mutaii misens;
- oprirea sintezei proteinei, n cazul n care codonul format prin substituie este un codon STOP
(UAA, UAG i UGA) mutaii nonsens;
- pstrarea structurii iniiale (normale) a proteinei deoarece codonul rezultat prin substituie este
sinonim cu cel modificat samesens mutaii.
.
Substituia poate implica uneori i un codon non-sens sau stop: UAA sau UAG pot deveni CAA sau
CAG, codoni care semnific glutamina. n acest caz sinteza polipeptidului continu pn la un nou
codon stop. Un exemplu de elongaie a catenei l constituie o alt Hb anormal Hb CS (Hb Constant
Spring) a crei caten alfa are 172 aminoacizi n loc de 141; secvena adiional de 31 aminoacizi
ncepe ntr-adevr cu Glutamina.
Substituia poate interesa doi sau chiar mai muli aminoacizi distinci, separai, din catena unui
lan polipeptidic . De ex: Hb C-Harlem = 2 alfa 2 beta 6 GluVal; 73 AspAsn.
Inversia va duce la modificarea unui codon i lectura sa n sens invers. Consecinele inversiei
sunt aceleai ca i ale substituiei.
Prin deleie se nelege lipsa a una sau a mai multe perechi de nucleotide din molecula de ADN.
Natura anomaliei produse va depinde de numrul de perechi de nucleotide implicat n deleie. Dac
lipsete o singur pereche de nucleotide se produce o decalare a fazei (cadrului) de lectur a codului
72
genetic (mutaii frame shift); lectura este incorect i se sintetizeaz o protein n care toi
aminoacizii, situai dincolo de locul deleiei, vor fi modificai (ex: Hb Wayne).
Dac numrul de nucleotide deletate este multiplu de trei, atunci n catena polipeptidic
determinat de gena mutant vor lipsi unul sau mai muli aminoacizi (n Hb Gun-Hill sunt abseni cinci
aminoacizi din catena beta: 91-95) Uneori se poate realiza deleia complet a unei gene. n alfatalasemii nu se produc catenele alfa ale hemoglobinei pentru c gena corespunztoare lipsete din
genom, n locul lor se sintetizeaz alte tipuri de lanuri: de ex: Hb H=4 beta sau Hb Bart=4 gama.
Inseria sau adiia nseamn introducerea unui nucleotid n secvena unei gene; din punctul de
inserie lectura codonilor se va face decalat, realizndu-se o protein cu secven anormal.
Crossing-overul inegal se poate produce dac nu are loc o mperechere perfect a omologilor. n
rezultatul CO inegal se produce o rearanjare a secvenelor ADN i deci o modificate a structurii
polipeptidelor codificate de aceste secvene (ex. Hb Lepore).
Reversia (mutaia supresiv) este o mutaie care intereseaz o alt mutant, determinnd
revenirea la fenotipul normal (slbatic). Reversia adevrat transform codonul mutant n normal, iar
reversia numit supresiv produce o a doua mutaie, diferit ca poziie ca prima dar care corijeaz
efectul ei.
Ex. Hb. Harlem prezint prima mutaie n catena beta 6 Glu-Val ca i Hb S dar efectul ei de
transformare a hematiilor n secer este anulat de o a doua mutaie: beta 73 AspAsn. Situaia se repet i
n cazul Hb Memphis/S: alfa 23 GluGln; beta 6 GluVal.
73
Mutaiile pot afecta partea reglatoare sau partea codificatoare a genei. Modificarea secvenei
nucleotidice a promotorului poate duce la schimbri cantitative n sinteza ARN i proteinei:
- blocarea transcripiei lipsa produsului proteic modificri fenotipice prin deficien (de ex.,
fenilcetonuria, intolerana la zaharoz);
- activarea continu a transcripiei sinteza unei cantiti mari de produs proteic modificri
fenotipice prin exces (de ex., sinteza n cantiti mari a HbF i HbA2 duce la hemoliz i
anemie).
Modificarea secvenei nucleotidice a regiunii codificatoare, n special a exonilor, poate duce la
schimbarea mesajului genetic i secvena de aminoacizi din protein, producnd schimbri calitative n
sinteza produsului final:
- sinteza unei proteine cu o activitate sczut (mutaie hipomorf);
- sinteza unei proteine cu o activitate exagerat (mutaie hipermorf);
- sinteza unei proteine inactive (mutaie amorf).
Dup valoarea adaptiv i consecinele mutaiilor genice asupra structurii i funciei
organismelor ele se pot mpri n mai multe grupe:
- mutaii neutre care produc polimorfismul biologic intraspecific, variantele normale (de ex.,
grupele sanguine, serice sau tisulare);
- mutaii deviante (defavorabile) care antreneaz un handicap mai mult sau mai puin sever i
creeaz fie o stare de boal, fie o predispoziie la boal; unele dintre ele sunt mutaii letale sau
subletale, afectnd decisiv viabilitatea i reproducerea individului;
- mutaii evoluante cu valoare adaptiv mai mare ca normalul; ele produc indivizi mai bine
adaptai, mai rezisteni la mediu.
74
MUTAII DINAMICE
n 1991 s-a descoperit o nou clas de alterri ale ADN, diferite de mutaiile clasice, mutaiile
dinamice. Ele sunt reprezentate de creteri ale numrului unor repetri trinucleotidice situate n
proximitatea sau chiar n interiorul genelor structurale. Mutaiile dinamice sunt caracterizate de
instabilitate, exprimat prin creterea numrului de copii ale unitilor trinucleotidice, cu ocazia
diviziunilor pe care le realizeaz celula purttoare.
Mutai
e
75
povar
genetic
CURS 9
TEHNICI DE ANALIZ A GENELOR
Tehnologia ADN recombinant a creat premisele dezvoltrii unor metode de diagnostic
molecular dotate cu capacitate de rezoluie, grad de precizie i nivel informativ net mai superioare celor
ale metodelor convenionale. Superioritatea absolut a abordrii moleculare rezult ns din faptul c
spre deosebire de toate celelalte metode de diagnostic, limitate la determinarea exclusiv a trsturilor
fenotipice, - analiza ADN, destinat nemijlocit studiului genotipului este singura n msur s
obiectiveze alterrile primare (mutaiile) care se fac direct responsabile pentru starea de boal.
Tehnicile ADN recombinant permit identificarea genelor normale i/sau a variantelor lor
mutante, stabilirea purttorilor de gene mutante, diagnosticul prenatal sau presimptomatic al
patologiilor genetice, iar n viitorul apropiat apare posibilitatea dezvoltrii terapiei genice.
Studiul molecular al genelor poate fi realizat pe mai multe ci n dependen de scopul propus:
- secvenierea ADN pentru determinarea structurii primare a genei;
- tehnica Southern-blot pentru identificarea RFLPs;
- tehnica Northen-blot pentru determinarea expresiei genelor (analiza ARNm);
- tehnica Western-blot pentru determinarea produsului proteic al genei;
- tehnica PCR pentru identificarea genei normale sau mutante, prin amplificarea specific a
secvenelor de ADN, etc.
n laboratoarele de biologie molecular se utilizeaz diverse variante ale metodelor menionate. Toate
aceste metode se bazeaz pe diferite principii de manipulare a acizilor nucleici:
- clivarea specific a ADN-ului genomic pentru obinerea fragmentelor de cercetat;
- identificarea fragmentelor de ADN sau ARN de cercetat prin hibridare cu sonde specifice
complementare secvenei int;
- identificarea genelor normale sau mutante prin procesul de amplificare specific a ADN (PCR)
reacie specificat de alegerea primerilor complementari genei / secvenei de interes;
- vizualizarea fragmentelor de interes dup rezultatele electroforezei i marcarea specific al ADN
sau ARN de cercetat, sau utilizndu-se programe computerizate de citire i interpretare a
rezultatelor;
- interpretarea rezultatelor este un proces complex, legat de fiecare tehnic i procedur n parte n
concordan cu particularitile metodei utilizate.
Pentru separarea fragmentelor de acizi nucleici se utilizeaz electroforeza n gel de agaroz sau de poliacrilamid.
Purtnd sarcin negativ, moleculele acizilor nucleici migreaz n cmpul electric, iar viteza de migrare depinde
de greutatea molecular a fragmentelor cercetate - fragmentele mai scurte migreaz mai rapid, n timp ce
fragmentele lungi migreaz mai lent. Pentru determinarea dimensiunilor fragmentelor de acizi nucleici,
concomitent cu fragmentele de interes sunt supuse electroforezei n trecuri vecine i fragmente-marker ai
lungimii. Moleculele acizilor nucleici pot fi vizualizate n gel prin colorare cu ageni chimici, marcare radioactiv
sau fluorescent. n cazul marcrii radioactive fragmentele se identific cu ajutorul autoradiografiei care const
n suprapunerea gelului cu un film fotosensibil.
76
SECVENIEREA ADN
Secvenierea const n determinarea succesiunii nucleotidelor (bazelor azotate) dintr-un anumit
segment al moleculei de ADN. Analiza secvenei bazelor azotate din structura ADN poate fi realizat
prin dou ci: 1) calea chimic (Maxam-Gilbert), n care se folosesc reaciile chimice de clivare a
ADN-ului n baze individuale, dar fiind o metod complicat i laborioas, n ultimii ani nu se mai
utilizeaz; 2) calea enzimatic (Sanger) n care ADN-ul este sintetizat in vitro pe baza matriei ADN
studiat, n aa fel nct reacia se termin specific n poziia care corespunde unei baze anumite. Pentru a
determina o secven de nucleotide pe una din cile menionate, ADN-ul este supus seriei de patru
reacii separate, fiecare reacie fiind specific pentru una din baze. Prin electroforez produii de reacie
vor migra n patru curse paralele, pe acelai gel. Urmrind band cu band, poate fi identificat ordinea
nucleotidelor n ADN.
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
78
Extragerea ADN
din celule nucleate
Denaturarea ADN i
transferul FR
pe membrane
Electroforeza FR
Hibridare cu sonda
Autoradiografia
Vizualizarea i interpretarea
rezultatelor
Datorit tehnicii Southern-blot se poate determina prezena sau lipsa unor situsuri de restricie
caracteristice genei analizate care se asociaz cu anumite mutaii:
- detectarea mutaiilor punctiforme ce implic situsurile de restricie (dispar sau apar noi situsuri de
restricie), care se evideniaz prin modificarea numrului i lungimii fragmentelor de restricie;
- detectarea mutaiilor prin deleii, duplicaii sau inserii ale unor fragmente polinucleotidice mai mari de
50-100p.b., care se evideniaz prin modificarea lungimii fragmentelor de restricie;
- acestea permit diagnosticul prenatal sau presimptomatic al mutaiilor patologice i depistarea
purttorilor heterozigoi de gene mutante.
Metoda Southern blot are i limite: (1) nu permite detectarea mutaiilor punctiforme sau
microdeleiilor la nivelul secvenelor de ADN dintre situsurile de restricie; (2) este laborioas,
complex i scump.
TEHNICA NORTHERN-BLOT
Metoda Northern-blot const n transferul moleculelor denaturate de ARN pe filtre de nailon sau
nitroceluloz, urmat de hibridarea cu sonde marcate. Aceast metod este similar tehnicii Southernblot cu deosebirea c ARNm extras i purificat nu este supus scindrii cu enzime, iar electroforeza
decurge n condiii de denaturare. Tehnica Northern-blot permite identificarea transcripilor genelor
analizate, cantitii de ARNm, stabilirea lungimii lor.
TEHNICA WESTERN-BLOT
Aceast metod const n identificarea unei proteine specifice din amestecul de proteine celulare.
Pentru aceasta, proteinele sunt separate prin electroforez n condiii de denaturare. Proteinele separate dup
greutatea molecular sunt transferate pe filtre de nailon sau nitroceluloz i supuse tratrii cu anticorpi specifici
marcai radioactiv sau fluorescent. Prin aceast metod se poate identifica prezena/lipsa proteinei,
dimensiunile ei, rata de expresie a genei.
79
Extragerea ADN
Electroforeza
produilor PCR
Pregtirea componentelor
pentru PCR
Vizualizarea
produilor PCR
Amplificarea ADN-int
Autoradiografia i interpretarea
rezultatelor
Pentru a realiza amplificarea unei secvene este necesar cunoaterea structurii genei normale
sau mutante i sinteza primerilor specifici complementari capetelor fragmentului de interes. Primerii
reprezint secvene oligonucleotidice monocatenare de 20-30 baze care sunt obinute prin sintez
artificial. PCR se bazeaz pe hibridarea ADN int - primer i replicarea semiconservativ a ADN.
Avantajele tehnicii PCR sunt urmtoarele: necesitatea cantitilor mici de ADN, rapiditatea ei
(n cteva ore se obin milioane copii de ADN), iar specificitatea primerilor permite amplificarea
selectiv a ADN i, de menionat c, produsele de amplificare pot fi utilizate n calitate de sonde pentru
hibridri n alte tehnici.
Aplicaiile practice ale tehnicii PCR:
- detectarea mutaiilor cunoscute la bolnavi i purttori, n diagnosticul prenatal i presimptomatic al
bolilor ereditare;
- determinarea genelor de predispoziie la bolile comune (coronaropatii, boala hipertonic, tulburri
psihice etc.);
- diagnosticul precoce i evaluarea pronosticului bolilor canceroase;
- determinarea prenatal a sexului;
- identificarea agenilor patogeni (virui, bacterii);
- dactiloscopia genomic n identificarea persoanelor, analiza filiaiei (paternitate, maternitate);
- tipizarea HLA.
80
Hibridarea in situ
Hibridarea in situ reprezint o tehnic molecular, n care o sond specific marcat poate
identifica direct pe preparatele celulare:
(1) o gen pe un anumit cromozom sau fragment de cromozom;
(2) un ARNm ntr-o celul particular sau esut;
(3) numrul moleculelor de ARNm n dependen de perioada ontogenetic sau tip tisular;
(4) ADN viral;
(5) deleiile cromozomiale submicroscopice;
(6) genele responsabile de producerea cancerului, localizarea i nivelul lor de expresie.
n ultimii ani se utilizeaz metoda FISH (Fluorescence In Situ Hibridization) care utilizeaz
sonde fluorescent marcate. Metoda FISH este simpl, poate fi aplicat pe preparate celulare arhivate,
este rapid, nu modific morfologia celulelor.
Tehnica FISH
81
CURS 10
CARACTERE EREDITARE
RELAIA GENOTIP - FENOTIP
Definirea biologic a unui individ este determinat de ansamblul unor caractere morfologice,
fiziologice, biochimice, psihice i comportamentale fenotipul, controlate de aciunea, n diferite proporii,
a factorilor ereditari i a celor de mediu. Sistemul de gene din setul diploid de cromozomi al unui individ,
care determin formarea unui anumit fenotip se numete genotip. Caracterele, la formarea crora genotipul
particip ntr-o proporie mai mare de 50% poart denumirea de caractere ereditare. Caracterele ereditare
pot avea determinism monogenic sau poligenic (multifactorial).
CARACTERISTICA GENELOR ALELE I NEALELE
Genele alele sunt localizare n loci identici pe cromozomi omologi i controleaz acelai
caracter sau forme alternative ale aceluiai caracter. Genele alele se pot prezenta n mai multe forme
moleculare diferite polialelism, dar n genotip, la o persoan, sunt prezente numai dou alele o
pereche (excepie - pe cromozomii X i Y la brbai este prezent doar o alel pentru fiecare gen).
Fiecare individ poart circa 30 mii perechi de
gene alele, dup unele este homozigot - purttor de
gene alele identice, dup altele este heterozigot purttor de gene alele diferite i hemizigot dup
genele nlnuite cu cromozomul X la brbai. n cazul
heterozigoiei se manifest alela cu o activitate mai
mare (gena dominant) fa de a doua (gena
recesiv). Astfel sunt alele:
- cu activitate moderat normomorfe;
- cu activitate mrit hipermorfe;
- cu activitate mic hipomorfe;
- neactive amorfe;
- cu funcie nou neomorfe.
Manifestarea fenotipic a unei alele depinde i
de alte gene nealele i de factorii de mediu.
n timpul transmiterii: n meioz, genele alele
se separ n gamei diferii segreg, iar la fecundare se combin ntmpltor formnd diferite
genotipuri, determinnd segregarea caracterelor ce reprezint baza legilor ereditii mendeliene. Alelele
unui individ una este de origine matern i alta de origine patern. Individul homozigot produce
gamei identici dup alela dat, iar individul heterozigot produce gamei diferii 50% vor conine o
alel i 50% vor conine cealalt alel.
Gene nealele sunt localizate n loci diferii ai cromozomilor i, de regul, controleaz caractere
diferite sau coopereaz pentru formarea unui caracter complex. Se manifest fenotipic independent una
fa de alta sau interacioneaz determinate de:
o efectul poziiei genelor dintr-un haplotip;
o epistazie;
o aciunea complimentar;
o poligenia aditiv.
Genele nealele se transmit:
- n bloc nlnuit, dac se afl pe acelai cromozom i formeaz grup de nlnuire, haplotipuri;
- independent, dac se afl pe cromozomi diferii.
82
Exprimarea fenotipic n populaie a caracterelor monogenice este de regul bimodal (de ex., 75%
din populaie are Rh+, iar 25% - Rh-). Unele caractere monogenice prezint mai multe forme alternative
polimorfisme determinate de existena alelelor multiple i/sau interaciunea cu ali factori ereditari sau
neereditari (de ex., mai multe variante de grupe sangvine dup sistemul AB0 I [0], II [A1 sau A2], III [B],
IV [A1B sau A2B]).
Caracterele monogenice pot fi att normale (de ex., grupele sangune, grupele serice, antigenii
tisulari, etc.), ct i patologice (de ex., polidactilia, albinismul, fenilcetonuria, hemofilia, daltonismul, unele
forme ale displaziei smalului dentar, etc.).
83
Caracterul
Alele
Localizare pe
cromozom
Factorul Rhesus
D, d
Gusttor
G, g
Secretor
Se, se
19
Grupe sangvine
AB0
0, A1, A2, B
Relaiile dintre
alele
Dominan /
recesivitate
Dominan /
recesivitate
Dominan /
recesivitate
Genotipuri
Fenotipuri
DD, Dd
dd
GG, Gg
gg
SeSe, Sese
sese
Rh+
RhGusttor
Negusttor
Secretor
Nesecretor
Dominan /
recesivitate
00
A1A1, A1A2, A10
A2A2, A20
BB, B0
0 (I)
A1 (II)
A2 (II)
B (III)
Codominan
A1B
A2B
MM
MN
NN
Hp1Hp1
Hp1Hp2
Hp2Hp2
Xg(a+)Xg(a+),
Xg(a+)Xg(a-), Xg(a+)Y
Xg(a-)Xg(a-), Xg(a-)Y
A1B (IV)
A2B (IV)
M
MN
N
Hp1-1
Hp1-2
Hp2-2
Grupe sangvine
MN
M, N
Codominan
Haptoglobine
Hp1, Hp2
16
Codominan
Grupe sangvine
Xg
Xg(a+),
Xg(a-)
Dominan /
recesivitate
Xg+
Xg-
Unele gene au aciune unic (o gen un caracter), altele au aciune multipl, pleiotrop (o
gen controleaz formarea mai multor caractere).
Expresivitatea reprezint gradul sau severitatea de manifestare fenotipic a unei gene la diferii
indivizi cu acelai genotip. Cauzele expresivitii variabile pot fi interaciunile genice sau factorii de
mediu i se manifest prin forme complete sau incomplete ale unei patologii, forme uoare sau forme
grave ale unei patologii, etc..
85
Instabilitatea genelor n irul generaiilor este determinat de mutaii dinamice. Ele sunt
reprezentate de creterea numrului de copii ale unor repetri trinucleotidice situate n proximitatea sau
chiar n interiorul genelor structurale, cu ocazia diviziunilor pe care le realizeaz celula purttoare.
Exist variaii ale numrului de repetri trinucleotidice:
- polimorfisme ADN benigne;
- premutaia secvena de ADN devine instabil, dar nu determin un fenotip patologic;
- mutaia complet - prin expansiunea repetrilor determinnd fenotip patologic.
Purttorii premutaiilor sunt fenotipic normali. Expansiunea repetrilor are loc n gametogenez.
Astfel unii din gameii purttorilor sntoi vor conine mutaia complet, care la descendeni va
produce un fenotip patologic.
n gametogeneza ultimilor, din cauza instabilitii acestor repetri, vor aprea expansiuni adiionale,
care la urmtoarea generaie va produce un fenotip patologic mai grav (=fenomenul de anticipaie).
Mutaie
complet
Amprentarea genomic este un proces genetic implicat n reglarea activitii genelor, n special
prenatal, controlnd dozajul genetic prin inactivarea selectiv a genelor de origine matern sau patern.
86
Mecanismele amprentrii gnelor nu sunt pe deplin elucidate. Unul din acestea ar putea fi determinat de
metilarea ADN proces asociat cu inactivarea genei.
De exemplu, gena Igf-2 ce controleaz sinteza
unuia dintre factorii de cretere poate fi implicat n
procesul de cretere (talia). Mutaia acestei gene este
implicat n apariia nanismului, n cazul dac este
motenit pe linie patern. Astfel indivizii heterozigoi
(Na) pot avea fenotip normal dac gena mutant (a)
este de origine matern sau sunt cu hipostatur (pitici)
dac gena (a) are origine patern. Duplicaia genei
normale (N NNa) poate cauza supracreterea dac
este motenit pe linie patern sau prezint fenotip
normal dac motenete pe linie matern.
Disomia uniparental este fenomenul, cnd
zigotul conine doi cromozomi omologi motenii de la
acelai printe. Ea apare ca rezultat al nedisjunciilor cromozomilor n meioza matern sau patern,
urmat de eliminarea postzigotic a cromozomului supranumerar de cealalt origine. O alt cauz a
apariiei disomiei uniparenatale ar putea fi translocaia robertsonian. Astfel, persoanele cu disomie
uniparental motenesc de la un singur printe alelele pentru anumite caractere, nlnuite cu
cromozomul disomic. Dar, n dezvoltare exist o contribuie difereniat a informaiei din cromozomii
materni i paterni (dozaj genetic). Totodat prezena ambelor genomuri parentale este esenial pentru
dezvoltarea feilor viabili. Necesitatea existenei materialului genetic a ambilor prini a fost
demonstrat prin consecinele disomiei uniparentale. Sindromul Prader Willi i sindromul Angelman
sunt determinate de amprenarea genei Snrpn cu localizare n cromozomul 15q11-13. n cazul
sindromului Prader Willi s-a identificat disomia uniparental matern a cromozomului 15, care se
manifest fenotipic prin retard mintal moderat, obezitate i hipostatur. Sindromul Angelman rezult
prin disomie uniparental patern, manifestndu-se fenotipic prin retard mintal sever i ataxie. n
disomia uniparental matern a cromozomului 7 au fost depistat retard de cretere.
87
88
CURS 11
STUDIUL CARACTERELOR EREDITARE
Caracterele ereditare normale sau anormale (bolile genetice) se caracterizeaz prin determinism
monogenic, poligenic sau multifactorial. De regul, determinismul genetic al caracterelor se stabilete
odat cu formarea genotipului individului la fecundare. Astfel, caracterele ereditare au un ir de
particulariti prin care se deosebesc de cele neereditare:
- sunt produse prenatal;
- au manifestare congenital;
- se transmit genealogic;
- sunt familiale;
- sunt concordante la gemenii monozigoi;
- se asociaz cu marcheri genetici;
- au o distribuie populaional specific.
De fapt aceste particulariti luate fiecare n parte, nu au o valoare absolut deoarece unele dintre ele se pot
ntlni i la caracterele i bolile neereditare dar, atunci cnd ele se asociaz mai multe deodat la un
caracter, semnific, de obicei, natura ereditar.
PARTICULARITILE CARACTERELOR EREDITARE
1. Determinismul genetic
Fiecare caracter ereditar este determinat de interaciunea genotip factorii de mediu. Gena sau
genele motenite determin un caracter fenotipic prin:
- sinteza unor proteine specifice (caracter elementar);
- realizarea funciei specifice a proteinei la nivel de celul i/sau esut;
- manifestarea unui anumit caracter (normal sau patologic) la nivel de organism caracter
fenotipic.
2. Determinismul prenatal
Constituia genetic a fiecrui individ se stabilete n momentul formrii zigotului, iar fenotipul se
formeaz prin expresia difereniat a genelor motenite (caractere de specie, caractere normale individuale,
anomalii). Caracterele ereditare sunt determinate pn la natere, dei se pot manifesta la diferite etape ale
ontogenezei. Dar, n perioada prenatal, organogeneza poate fi influenat i de factorii mediului,
producnd anomalii de dezvoltare neereditare (de ex., fenocopiile).
3. Manifestarea congenital
Manifestarea congenital reprezint prezena caracterului sau a bolii nc de la natere. Majoritatea
caracterelor i bolilor ereditare sunt prezente la natere, dar exist i excepii, cnd ele se manifest mai
trziu la o anumit vrst, mai precoce sau mai tardiv (de ex., hipodonia, miopatia, coreea Huntington
etc.). Dar, exist i afeciuni neereditare cu manifestare congenital (de ex., fetopatia rubeolic, fetopatia
alcoolic, boala constriciilor amniotice).
4. Transmiterea genealogic
Transmiterea genealogic reprezint motenirea unui caracter de la prini i transmiterea lui la
descendeni. Este cunoscut c caracterele i bolile ereditare se transmit din generaie n generaie. Dar
exist i unele care nu se transmit:
- datorit decesului precoce a persoanelor afectate (bolnavii cu hemoglobinopatii severe);
- datorit sterilitii persoanelor afectate (de ex., sindromul Morris - testicul feminizant);
- apariia unor mutaii noi care ar putea s se transmit generaiilor urmtoare;
- boli recesive rare.
Exist i boli neereditare care se pot transmite de la o generaie la alta (de ex., transmiterea mam - ft a
sifilisului, SIDA etc.).
Analiza transmiterii genealogice este un lucru esenial n stabilirea naturii ereditare a unui caracter
sau a unei boli deoarece transmiterea ereditar se face dup nite reguli stricte, matematice (ex: legile lui
89
Mendel), n timp ce transmiterea neereditar are un caracter aleator, n funcie de condiiile momentane de
mediu.
5. Distribuia familial
Distribuia familial reprezint frecvena crescut a anomaliei / caracterului la membrii nrudii ai
aceleiai familii, comparativ cu frecvena din populaia general (concentrare familial a caracterului).
Majoritatea bolilor ereditare prezint o net distribuie familial, dei exist i boli ereditare cu apariie
sporadic (de ex., anomaliile cromozomice care apar sporadic deoarece de obicei determin anomalii de
reproducere). Exist i boli neereditare care pot prezenta distribuie familial atunci cnd membrii familiei
sufer influena unor condiii similare de mediu (de ex., gua endemic, tuberculoza, intoxicaiile, unele
infecii etc.).
6. Concordana caracterului la gemenii monozigoi
Caracterele monogenice, pur ereditare sunt totdeauna identice la gemenii monozigoi (100 %
concordan), iar cele neereditare sau multifactoriale pot fi discordante. Cnd concordana unui caracter
este regula, iar discordana excepie, se vorbete despre caractere determinate parial ereditar (caractere
multifactoriale). In cazul caracterelor ecologice, concordana este egal cu discordana la gemenii
monozigoi.
7. Frecvena diferit n populaii diferite
Anumite caractere ereditare prezint frecvene diferite n populaii genetic diferite. Aceasta se
explic prin concentrarea anumitor gene ntr-o anumit regiune. De exemplu:
- deficiena n G6PD (glucozo-6-fosfat-dehidrogenaza) sau unele hemoglobinopatii (de ex.,
sicklemia) sunt mai frecvente n zonele cu malarie, deoarece heterozigoii pentru aceste afeciuni
sunt rezisteni la plasmodiul malariei;
- n izolatele umane (geografice, etnice sau religioase), prin cstorii consangvine se creeaz un
fond crescut de alele comune (de ex., n majoritatea populaiilor din Europa frecvena albinismului
este 1:20000, iar ntr-un izolat din regiunea Bihorului, Romnia este de 1:100).
8. Prezena anomaliilor cromozomice
Toate afeciunile care se nsoesc de anomalii cromozomice de numr sau de structur (vizibile la
analiza cariotipului) sunt anomalii genetice (ereditare). Dar nu toate bolile ereditare se nsoesc de anomalii
cromozomice (de ex., bolile ereditare produse prin mutaii genice sau poligenice se nsoesc de un cariotip
normal). Cariotipul normal nu exclude deci existena unui caracter ereditar anormal la subiectul cercetat.
9. Asocierea cu marcheri genetici
Unele caractere fenotipice anormale se pot asocia cu marcheri genetici specifici uor detectabili, de
obicei caracteristici pentru o familie, la care se refer:
- o anumit secven ADN, reprezentnd o gen normal, localizat n vecintatea genei patologice;
- un microsatelit aflat n vecintatea sau interiorul unei gene patologice;
- un situs de restricie.
Asocierea se poate explica prin urmtoarele fenomene:
- transmiterea nlnuit a genelor ce formeaz haplotip (de ex., asocierea Rh - eliptocitoz);
- o gen favorizeaz apariia unei anumite tulburri (ex. asocierea HLA-B27 - spondilit
anchilozant).
Numai asocierea criteriilor prezentate permite stabilirea naturii ereditare a unui caracter. Criteriile
luate separat, nu au valoare practic.
90
91
METODE CITOGENETICE
Metodele citogenetice includ diverse tehnici de analiz microscopic a materialului geneic la
nivel de celul:
- analiza cromozomilor metafazici i prometafazici (cariotiparea);
- teste de citogenetic molecular pe cromozomi interfazci (FISH, mFISH, SKY);
- testul Barr pentru analiza cromatinei sexuale X;
- testul F pentru analiza cromatinei sexuale Y.
Cariotiparea reprezint analiza setului de cromozomi din celulele somatice n diviziune pentru
aprecierea numrului, formei i mrimii cromozomilor, utiliznd diferite tehnici de colorare /
vizualizare. Astfel, analiza plcilor metafazice sau prometafazice permite depistarea diferitor anomalii
cromozomice de numr sau de structur implicate n sindroame plurimalformative, neoplazii, stri
intersexuale.
Analiza cromozomilor interfazici, bazat pe hibridizarea in situ permite stabilirea unor
anomalii cromozomice submicroscopice (microdeleii sau microduplicaii) sau stabilirea poziiei unor
gene n cromozomi.
Testul cromatinei sexuale permite diagnosticul sindroamelor cromozomiale cu implicarea
heterozomilor X sau Y i stabilirea sexului genetic. Cromatina sexual X (corpusculul Barr) poate fi
uor vizualizat pe preparate citologice n interfaz (numrul corpusculilor Barr + un cromozom X =
numrul cromozomilor X n celula analizat).
METODE BIOCHIMICE
Spectrul de metode biochimice presupune analiza produsului primar al expresiei genice
proteina, precum i a metaboliilor controlai de aceast protein. Sunt utilizate metode calitative i
cantitative specifice unui anumit tip de metabolii. Aceste tehnici sunt indicate n:
- diagnosticul unor boli monogenice enzimopatii;
- diagnosticul unor boli multifactoriale;
- stabilirea unei predispoziii la boal.
De exemplu, prin analiza electroforetic a proteinelor serice se poate stabili polimorfismul individual i,
indirect, constituia genetic a individului (genotip homozigot sau heterozigot).
METODA GENEALOGIC
Una dintre particularitile caracterelor ereditare este concentrarea lor familial i transmiterea
de la o generaie la alta. Metoda genealogic presupune analiza familial, identificarea persoanelor cu
un anumit caracter i urmrirea acestuia pe parcursul mai multor generaii. Aceasta este important
pentru stabilirea tipului de transmitere a caracterului i calcularea probabilitii de reapariie a
caracterului ereditar la descendenii unui cuplu.
Studiul genealogic se realizeaz n mai multe etape:
- anamneza familial;
- analiza clinic i paraclinic a membrilor familiei;
- ntocmirea arborelui genealogic;
- analiza tipului de transmitere a caracterului;
- stabilirea genotipurilor persoanelor din familia studiat i calcularea probabilitii de
manifestare a unui fenotip normal sau patologic;
- sfat genetic.
Anamneza familial este primul pas n obinerea informaiilor despre prezena unui anumit
caracter ntr-o familie. De regul, informaia este obinut de la proband (cazul princeps persoana ce
se adreseaz dup sfat genetic). Datele despre structura familiei sunt nregistrate n fie speciale de
consult genetic i sunt completate pe baza informaiilor obinute din analiza familial.
Analiza familial include chestionarea rudelor probandului (cel puin 2-3 generaii), analiza
clinic i paraclinic a probandului i a rudelor afectate i sntoase, analiza fielor medicale personale,
efectuarea testelor genetice (n dependen de caz cariotip, cromatin sexual, analiza ADN, studiul
92
nlnuirii cu marcheri genetici). Toate aceste informaii pe de o parte completeaz istoricul familiei, pe
de alt parte concretizeaz tipul anomaliei sau afeciunii (diagnostic clinic precis). Fiele de consult
genetic includ urmtoarele date:
(a) dac probandul este copil evoluia sarcinii, boli acute sau cronice ale mamei i medicamente
administrate n timpul sarcinii, expunerea la ageni teratogeni sau mutageni; vrsta prinilor; prezena
consangvinitii; naterea la termen sau prematur, durata travaliului, natere natural sau prin manevre
obstetricale; date despre nou-nscut greutatea i talia la natere, scor Apgar; evoluia postnatal.
(b) dac probandul este adult evoluia pubertii, funcia reproductiv (normal sau perturbat:
sterilitate, avorturi spontane, nou-nscui mori sau nou-nscui vii malformai); locul de munc,
expunere la noxe.
Analiza familial este util pentru diferenierea unei anomalii congenitale neereditare de o boal
ereditar propriu-zis.
ntocmirea arborelui genealogic. Arborele genealogic este reprezentarea grafic, cu ajutorul
unor semne convenionale, a rezultatelor anchetei familiale i servete la stabilirea tipului de
transmitere n cazul n care acesta este ereditar.
Stabilirea tipului de transmitere a caracterului n cazul cnd acesta este ereditar, se
efectueaz n conformitate cu criteriile de recunoatere (prezena caracterului n fiecare generaie sau
discontinuitate n transmitere; raportul prezenei caracterului la cele dou sexe). Transmiterea poate fi
monogenic sau poligenic, autozomal, sau lincat cu cromozomii sexuali, determinat de alele
dominante sau recesive. n dependen de tipul de transmitere, se stabilete genotipul persoanelor
sntoase i afectate, se calculeaz riscul de recuren (probabilitatea apariiei anomaliei analizate la
descendeni).
Rezultatele analizei genealogice a familiei stau la baza unui consult genetic adecvat pentru:
- informarea obiectiv a familiei;
- planificarea familiei;
- opiuni pentru diagnosticul prenatal n scop de prevenire a naterii copiilor cu anomalii;
- prevenirea manifestrii unor complicaii n cazul bolilor genetice cu manifestare la adult.
METODA GEMENILOR
Prin analiza comparativ a unui caracter la gemenii monozigoi i gemenii dizigoi se poate
urmri o concordan sau discordan care poate fi asociat cu ponderea factorilor genetici i de mediu
n manifestarea unui fenotip.
Gemenii monozigoi (GMZ) provin din acelai zigot i ca urmare sunt genetic identici. De
regul GMZ, avnd genotip identic, au caractere ereditare asemntoare (concordan) i difer doar
dup caracterele influenate de mediu (discordan).
Gemenii dizigoi (GDZ) sunt gemeni provenii din fecundarea a dou ovule diferite de ctre doi
spermatozoizi, ei difer genetic ca oricare membru al unei fratrii fa de ceilali.
Pentru stabilirea cotei factorilor genetici i celor de mediu n formarea unui caracter, se
calculeaz coeficientul de ereditate (H):
Concordan aGMZ Concordan aGDZ
H
x100%
100% Concordan aGDZ
Concordana GMZ sau GDZ reprezint procentul de asemnare dup un anumit caracter la mai
multe perechi de gemeni (valori statistice veridice). Cu ct raportul este mai apropiat valoric de 100%,
participarea factorilor genetici n determinismul caracterului este mai mare. Coeficientul are valoarea 100%
pentru caracterele pur ereditare (concordana la gemenii monozigoi este de 100%).
La valorile H cuprinse ntre 100-70% factorul ereditar are rol major, preponderent; ntre 70-40%
caracterul este format sub influena mediului dar cu predispoziie genetic; mai puin de 40% - caracterul este
ecologic.
93
n prezent metoda gemenilor se utilizeaz pentru stabilirea rolului factorilor genetici i de mediu n
longevitate, manifestarea talentului, sensibilitatea la medicamente, etc.
Caracterul
analizat
Sexul
ABO
Dermatoglife
Concordana la
GMZ (%)
100
100
95
Concordana la
GDZ (%)
58
65
60
Reumatism
60
34
40
Diabet zaharat
30
16
17
H (%)
100
100
88
Tipul
caracterului
Genetic
Genetic
Genetic
Cu predispoziie
genetic
Ecologic
METODA POPULAIONAL-STATISTIC
Populaia uman reprezint totalitatea indivizilor ce locuiesc pe un anumit teritoriu, ntre care are
loc schimb permanent de informaie ereditar. Structura genetic a unei populaii se poate deosebi de alta
datorit existenei unui genofond particular determinat de suma genotipurilor indivizilor din aceast
populaie. S-a stabilit c genofondul unei populaii este relativ constant de-a lungul mai multor generaii.
Stabilitatea genetic este valabil pentru populaia ideal care se caracterizeaz prin urmtoarele
particulariti:
- este numeroas (peste 1,5 mii indivizi);
- este panmictic (cstorii la ntmplare);
- lipsa fluxului interpopulaional de gene (lipsa migraiilor);
- rata mutaiilor rmne constant;
- lipsa seleciei n favoarea sau defavoarea unui genotip;
- lipsa undelor populaionale.
Echilibrul genetic al unei populaii ideale este caracterizat de legea Hardy-Weinberg, valabil
pentru caracterele monogenice:
1. ntr-o populaie ideal frecvena alelelor rmne constant de-a lungul generaiilor:
p+q=1, unde
p frecvena alelei dominante (A)
q frecvena alelei recesive (a)
2. ntr-o populaie ideal frecvena genotipurilor rmne constant de-a lungul generaiilor:
p2+2pq+q2=1, unde
2
p frecvena homozigoilor dominani (AA)
2pq frecvena heterozigoilor (Aa)
q2 frecvena homozigoilor recesivi (aa).
Factorii care ar putea modifica genofondul populaiei sunt: izolatele, cstoriile consanguine sau
asortative, migraiile, mutageneza, selecia, deriva genic etc.
Valoarea practic a metodei populaional statistice const n cunoaterea genofondului
populaiei, estimarea frecvenei unor alelele mutante, calcularea numrului aproximativ al persoanelor
afectate i purttoare de mutaii patologice etc. Datele statistice pot fi utile n planificarea activitii
instituiilor medicale, iniierea unor programe de profilaxie a patologiilor genetice.
94
CURS 12
INTRODUCERE N PATOLOGIA GENETIC UMAN
Bolile genetice reprezint stri patologice determinate sau condiionate de modificri specifice
ale materialului genetic (mutaii). Bolile genetice sunt numeroase i variate att dup cauza apariiei,
momentul manifestrii, ct i tabloul clinic.
ETIOLOGIA BOLILOR GENETICE
Mutaiile pot afecta att materialul genetic nuclear, ct i ADN-ul mitocondrial; pot afecta
materialul genetic al celulelor generative i se pot transmite genealogic, sau pot afecta materialul
genetic al celulelor somatice realizndu-se o clon celular mutant cu consecine patologice doar
asupra fenotipului purttorului, fr transmitere genealogic.
Mutaiile pot fi ereditare (motenite), manifeste sau nu la alte generaii, sau pot fi de novo spontane sau produse sub aciunea unor factori de mediu mutageni (radiaii, virusuri, noxe profesionale,
diverse substane chimice toxice).
CLASIFICAREA BOLILOR GENETICE
Bolile genetice sunt determinate sau condiionate de mutaii la nivelul moleculelor de ADN
(modificri calitative sau cantitative ale materialului genetic). n dependen de cota de participare a
factorilor genetici bolile genetice se clasific n:
- boli cromozomiale determinate de anomalii de numr sau structur a cromozomilor;
- boli monogenice sau monofactoriale, determinate de mutaii dominante sau recesive, manifestarea
crora nu depinde de anumite condiii de mediu;
- boli poligenice sau multifactoriale care sunt condiionate de mutaii mai multe gene cu efect minor
sau aditiv i determinate de aciunea patologic a factorilor de mediu.
Specialitii din domeniul geneticii medicale insist asupra clasificrii etio-patogenetice a bolilor
genetice:
boli cromozomiale sau sindroame cromozomiale plurimalformative;
boli monogenice sau moleculare;
boli poligenice sau multifactoriale, boli cu predispoziie genetic;
boli mitocondriale;
boli genetice ale celulelor somatice (boala canceroas);
boli de incompatibilitate materno-fetal.
n prezent sunt cunoscute peste 1000 sindroame cromozomiale. Dup datele Dr. Mc.Kusick au
fost descrise i nregistrate peste 9000 de boli i sindroame monogenice. Luate fiecare n parte, au o
frecven populaional mic, dar n ansamblu reprezint o categorie de patologie uman important, n
special lund n consideraie impactul lor medico-social:
- 50% din toate avorturile spontane cunoscute n primul trimestru de sarcin prezint o anomalie
cromozomial;
-
50% din toi copii cu retard mintal sever, cecitate sau surditate prezint o cauz genetic;
10% din cazurile comune de cancer (CR de sn, CR de colon sau CR ovarian) au o component
important genetic;
10% din aduli prezint fie o maladie pur genetic, fie o maladie cu predispoziie genetic.
96
Simptoame
Patogeneza multor boli ereditare i neereditare poate fi influenat de ali factori interni: starea
sistemului imun i endocrin, vrsta i sexul pacientului, particularitile metabolismului.
Tabloul clinic al bolilor genetice este foarte polimorf. Polimorfismul clinic este definit prin
varietatea manifestrilor clinice i de laborator a unei boli, determinat de:
- heterogenitatea genetic;
- penetrana incomplet a unor gene dominante;
- expresivitatea variabil a genelor patologice, pleiotropie, interaciunea factorilor genetici cu
factorii de mediu.
Cauzele genetice ale polimorfismului clinic sunt determinate de unicitatea biologic a fiecrui
individ. Un rol important n expresivitatea bolii genetice l au factorii de mediu ce pot interaciona cu
cei ereditari la orice etap de dezvoltare prenatal i postnatal.
Bolile cu predispoziie genetic se caracterizeaz printr-un polimorfism mai accentuat, manifestndu-se
prin continuitatea distribuirii de la formele uoare, pn la formele grave.
EREDITATEA I CONSECINELE BOLII
1. Unele mutaii (genice sau cromozomiale) sunt letale, fiind responsabile de moartea prenatal,
perinatal i infantil. Se cunosc peste 150 gene ce provoac moartea prenatal, printre nounscuii mori 1:5 are un defect genetic. Factorii externi cu aciune distructiv (hipoxia, trauma
la natere, intoxicarea, hipotrofia, infeciile) produc mai frecvent moartea copiilor cu genotip
anormal, dect la cei cu genotip normal. Cele mai frecvente cauze ale mortalitii infantile sunt
bolile cromozomice, fibroza chistic, fenilcetonuria, sindromul adreno-genital, hipotireoza.
97
2. Mutaiile patologice, ca factori etiologici, pot fi cauza bolilor cronice. Evoluia cronic i
progresiv n bolile genetice este o caracteristic, cu excepia celor letale.
3. Mutaiile genice se manifest nu numai cu semne specifice, dar i cu diminuarea rezistenei
nespecifice a organismului la bolile asociate, determinnd cronizarea ultimelor.
4. Constituia genetic a pacientului:
- poate modifica eficacitatea msurilor terapeutice,
- poate determina reacie patologic a unor indivizi la anumite medicamente,
- determin un polimorfism n viteza de eliminare sau oxidare a unor preparate
medicamentoase, sau a metaboliilor care pot modifica farmacocinetica unor
medicamente.
5. Unele mutaii sau asocierea lor duc la scderea capacitii organismului de a rezista la
aciunea distrugtoare a factorilor de mediu, astfel i nsntoirea bolnavului va fi
problematic. Aciunea genelor asupra cronizrii proceselor patologie poate fi explicat prin
modificarea direcionrii unor procese biochimice, modificarea statusului hormonal, deficiene
ale rspunsului imun.
PARTICULARITILE BOLILOR GENETICE
Fiecare caracter ereditar este determinat de interaciunea genotip factorii de mediu. Gena sau
genele mutante determin un fenotip patologic prin:
- sinteza anormal a unor proteine specifice (efectul patologic primar al mutaiei);
- dereglarea structurii sau funciei specifice la nivel de celul i/sau esut (efectul patologic
secundar al mutaiei);
- manifestarea unui anumit caracter patologic sau sindrom la nivel de organism simptoamele bolii
(efectul patologic teriar al mutaiei).
Bolile i sindroamele genetice se caracterizeaz prin determinism monogenic, poligenic, multifactorial
sau apar n rezultatul anomaliilor cromozomiale. De regul, determinismul genetic al bolii se stabilete
odat cu formarea genotipului individului la fecundare. Astfel, afeciunile ereditare au un ir de
particulariti prin care se deosebesc de cele neereditare:
- sunt produse prenatal i se pot manifesta congenital sau n orice perioad de via;
- se transmit genealogic i au o agregare familial; dar pot aprea spontan prin mutaii de novo;
- se asociaz cu marcheri genetici (anomalii cromozomice sau secvene nucleotidice specifice);
- sunt concordante la gemenii monozigoi i au o distribuie populaional specific;
- au evoluie cronic, progresiv i recidivant determinate de aciunea permanent a genei
mutante, cu manifestare variabil de la pacient la pacient, chiar i n cadrul aceleai familii;
- se manifest cu modificri patologice a mai multor organe i sisteme, datorit efectului
pleiotrop al genei mutante;
- sunt rezistente la metodele de tratament tradiionale.
METODELE STABILIRII NATURII GENETICE A UNEI BOLI
Pentru a stabili implicarea factorilor genetici n bolile umane i ponderea lor n producerea unei
patologii se urmrete:
- studiul transmiterii genealogice a bolii sau anomaliei i determinarea tipului de motenire,
calcularea riscului de manifestare sau de recuren;
-
determinarea defectului biochimic primar la nivel de sintez proteic sau efectele acestuia asupra
unui proces biochimic controlat de gena/proteina modificat.
Bolile cromozomiale sunt rezultatul unor modificri specifice ale numrului cromozomilor
caracteristic speciei (46 n celulele somatice umane) sau modificri structurale ale acestora. Efectele i
gravitatea anomaliilor cromozomice depind de tipul de anomalie i mrimea dezechilibrului genetic - cu
ct defectul cantitativ este mai mare, cu att consecinele sunt mai grave.
Sindroamele cromozomice prezint modificri fenotipice comune (tulburri de cretere pre- i
postnatal; ntrziere n dezvoltarea psiho-motorie i debilitate mintal; multiple anomalii viscerale,
disgenezii gonadice) i modificri specifice ale cromozomului sau cromozomilor implicai.
SINDROMUL DOWN (TRISOMIA 21)
Sindromul Down este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena medie de 1:700
nou-nscui, dar dependent de vrsta matern:
- la 20 ani 1:1500;
- la 30 ani 1: 900;
- la 35 ani 1: 400;
- la 40 ani 1:100;
- la 45 ani 1:30.
Cauza sindromului Down este trisomia 21:
95% - trisomia 21 omogen liber, avnd ca origine nondisjuncia meiotic;
5% - trisomia 21 mozaic sau translocaional.
Cariotipuri asociate n sindromul Down:
47, XX (XY), +21;
47, XX(XY), +21/ 46,XX(XY);
46, XX(XY), rob (21;13);
46, XX(XY), rob (21;14);
46, XX(XY), rob (21;15);
46, XX(XY), rob (21;21);
46 ,XX(XY), rob (21;22);
46, XX(XY), i(21q).
Manifestrile clinice majore sunt determinate de anomalii multiple de dezvoltare:
- hipotonie generalizat;
- dismorfism cranio-facial;
- malformaii cardiace;
- retard mintal i fizic;
- imunitate sczut;
- risc crescut pentru leucemii.
Evoluie:
- n cazul de malformaii severe decesul n perioada de sugar;
99
100
Evoluie: 30% din cazuri deces n prima lun de via; 10% - supravieuiesc vrstei de 1 an cu
retard sever mental i somatic. Riscul de recuren 1%. Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor
(cariotip, FISH).
SINDROMUL TRISOMIEI 8
Sindromul trisomiei 8 Warkany este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena
medie de 1:30000 nou-nscui vii. Cauza trisomia 8: 90% din cazuri sunt rezultatul unei
nedisjuncii postzigotice, determinnd forme mozaice ale trisomiei 8; 10% - sunt trisomii pariale
determinate de rearanjamente strucrurale ale cromozomului 8 (duplicaii). Cariotipuri asociate n
sindromul Warkany:
47, XX(XY), +8/ 46,XX.
Manifestrile clinice majore sunt deteminate de asocierea anomaliilor multiple de dezvoltare:
- dismorfism cranio-facial: frunte proieminent, strabism, epicant, hipertelorism, palatin arcuit,
despictur palatin, buze ngroate, urechi mari malformate;
- contracturi articulare, camptodactilia, aplazia rotulei, pliu palmar transvers unic;
- malformaii cardiace i renale;
- retard mintal i fizic;
- imunitate sczut.
Evoluie: Trisomia 8 total este letal, iar n formele pariale sau mozaice pacienii au
longevitate sczut. Riscul de recuren 1 %. Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor
(cariotip, FISH).
SINDROMUL TURNER
Sindromul Turner este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena medie de 1:2000
1 : 5000 nou-nscuii de sex feminin. Cauza : 50% - 69% - monosomia X total i omogen, 30-40% forme mozaice i restul cazurilor, mult mai rare, sunt rezultatul unor monosomii X pariale (deleii,
izocromozomi, cromozom X inelar). Cariotipuri asociate n sindromul Turner:
45,X;
45,X / 46,XX;
46, X, Xq-;
46, X, i(X q);
46, X, del(Xp);
46, X, r(X);
Manifestrile clinice majore sunt determinate de anomalii multiple de dezvoltare:
o la nou-nscut piele abundent n exces la nivelul gtului, pterigium coli, limfedem
periferic localizat mai ales pe faa dorsal a piciorului;
o malformaii cardiace (DSA);
o hipostatur disproporionat;
o impubertizm, amenoree primar.
Evoluie: statura final a adultelor este ntre 125-145 cm; intelegena i sperana de via
sunt, n general, normale; tratamentul de substituie cu hormaoni estrogeni de la adolescen induce
dezvoltarea caracterelor sexuale secundare i previne osteoporoza, dar nu influieneaz statura i
infertilitatea. Riscul de recuren 1 %. Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor (cariotip,
FISH); testul Barr, de regul, este negativ.
SINDROMUL KLINEFELTER
Sindromul Klinefelter este un sindrom cu infertilitate masculin, cu incidena medie de
1:1000 nou-nscuii de sex masculin; 1 : 10 din brbaii infertili; 1 : 100 din bieii din instituiile
pentru retard mintal. Cauza: 85% - disomie X total i omogene (47,XXY), 15% - forme mozaice sau
polisomii X totale sau pariale.
101
Sindromul
Cri-du-chat
Wolf-Hirschhorn
Prader - Willi
Angelman
Williams
Velo-cardio-facial
DiGeorge
102
BOLI MONOGENICE
Bolile i sindroamele monogenice sunt strile patologice determinate de mutaii dominante sau
recesive ntr-o singur gen cu efect major, ce determin o sintez anormal a lanului polipeptidic
codificat i, prin efect pleiotrop, anomalii de structur sau funcie celular. Acestea la rndul lor vor
determina manifestarea fenotipic cu o simptomatologie specific genei date i diverse simptome
secundare. Patologia monogenic mai este numit monofactorial datorit independenei manifestrii
genelor mutante de factorii de mediu. Dar, factorii de mediu pot modula expresia genic i determina o
expresivitate variabil a bolii la diferii pacieni. O caracteristic a bolilor monogenice este transmiterea
lor genealogic mendelian cu posibilitatea calculrii riscului de recuren. Dup tipul transmiterii
bolile monogenice se clasific n 5 categorii:
- dominante-autozomale
- dominante X-lincate;
- recesive-autozomale;
- recesive X-lincate;
- mitocondriale.
n general bolile monogenice sunt rare i pot aprea att prin mutaii motenite ct i mutaii de
novo. n ansamblu bolile monogenice sunt numeroase (peste 9000 entiti nozologice) i au implicaii
deosebite pe plan medical i social. Majoritatea din ele nu sunt posibil de tratat iar prevenirea lor
necesit teste genetice specifice pentru diagnosticul prenatal.
Boli
Autozomal
dominante
Autozomal
recesive
X-lincate
Y-lincate
Mitocondriale
Total
1218
2201
4458
531
947
1420
1730
119
1487
171
2336
286
3907
412
19
59
6678
103
a. 2012
8005
19769
495
27
60
8587
1172
59
64
21064
HIPERCOLESTEROLEMIA FAMILIAL
Este cea mai frecvent afeciune cu transmitere autozomal-dominant;
are o inciden de 1 : 500;
etiologia: apare ca urmare a unui defect al
receptorului lipoproteinelor cu densitate
joas (LDL), determinat de mutaia genei
LDLR situat n locusul 19p13;
- vrsta de debut dup 30-40 ani;
- se caracterizeaz prin urmtoarele particulariti clinice:
- xantelasme la nivelul feei, palpebral, xantoame pe tendoanele extensorilor) tendonul lui Achile);
- cardiopatie ischemic precoce (crize anginoase, infarct de miocard);
- deces prematur prin cardiopatie ischemic (50% din brbai decedeaz fr tratament pn la
vrsta de 60 ani);
- valori mari ale colesterolemiei 300-600mg/dl; LDL peste 200mg/dl;
- anamnez familial pozitiv (ali cardiaci n familie);
- diagnostic prenatal prin analiza ADN.
-
SINDROMUL MARFAN
Sindrom autozomal-dominant ce afecteaz esutul conjunctiv cu expresivitate variabil, dependent
de factorii de mediu;
are o inciden de 1 : 10000 1 : 15000;
etiologia: apare ca urmare a unei mutaii n gena FBN1 care este situat n locusul 15q21;
debuteaz n primii ani de via prin:
- creterea rapid a membrelor cu aspect de arahnodactilie;
- subluxaia de cristalin, cataract, strabism,
- articulaii laxe cu scolioz i cifoz;
- pectus excavatum sau carinatum;
- afeciuni cardiace (anevrism de aort);
sperana medie de via 40-50 ani;
diagnosticul presiptomatic se bazeaz pe analiza ADN.
COREEA HUNTINGTON
Afeciune neurovegetativ cu transmitere atozomal-dominant ce se manifest la indivizii de peste
30-40 ani;
are o inciden de 1 : 18000;
etiologia: apare ca urmare a unei mutaii dinamice n gena HD ce codific proteina huntingtina,
situat n locusul 4p16.3;
mutaia produce atrofia de nucleu caudat, putamen i globus palidus;
manifestri clinice majore:
- tulburri neurologice motorii progresive (coree, distonie);
- n timp apar tulburri de personalitate i demen;
decesul se produce la 15-20 ani de la debutul clinic;
agregare familial, afecteaz mai frecvent brbaii;
diagnosticul presiptomatic se bazeaz pe analiza ADN.
ADPKD
Boala Polichistic Renal de tip Autozomal Dominant este o afeciune multisistemic, caracterizat
prin scderea rezistenei esutului conjunctiv i astfel apar modificri structurale ale organelor
supuse stres-ului presional: tubii nefronali, conducte biliare, perete vascular, ducte pancreatice,
aparat valvular cardiac;
104
SINDROMUL EHLERS-DANLOS
Reprezint un grup de boli genetice ale esutului conjunctiv cu transmitere autozomal-dominant;
are o inciden de 1 : 5000 1 : 50000;
etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena COL5A1 ce codific colagenul tip V (2q31);
manifestri clinice majore:
- manifestri cutanate aspectul hiperextensibil (cutix laxa); textur moale, catifelat; apariia
unor escare atrofice i a echimozelor;
- manifestri articulare hipermobilitate articular;
- cifoscolioz;
- anomalii oculare keratoconus; sclere albastre; subluxaie de cristalin; dezlipirea retinei;
- complicaii ruptura prematur a membranelor i hemoragiile pre- sau postpartum;
- ruperea vaselor ce reprezint o cauz frecvent de deces;
diagnostic prenatal pe baza testelor ADN.
106
HEMOGLOBINOPATIILE
- Reprezint un grup heterogen de patologii, cu transmitere autozomal - recesiv, determinate de
diverse variante ale Hb, care induc tulburri prin afectarea structurii i funciei hematiilor;
- etiologia: apar ca urmare a unor mutaii n dou familii de gene:
- familia alfa-globinelor localizat pe crs. 16 p, format din 4 gene funcionale ( 2, 2, 1, 1);
- familia beta globinelor pe crs. 11 p, cuprinde 5 gene funcionale
- se disting diferite forme de hemoglobinopatii - hemoglobinoza S, hemoglobina C, talasemiile.
Hemoglobinoza S apare ca urmare a nlocuirii acidului glutamic din poziia 6 a lanului cu
valina. Boala se poate manifesta la homozigoi i heterozigoi prin anemie drepanocitar. Clinic
copiii aa sunt icterici, cu ntrziere de cretere, dureri osoase, peste 50% au splenomegalie. Pacienii
prezint eritrocitele n form de secer, viscozitate sanguin, staz i risc de tromboze vasculare.
Diagnosticul pe baza datelor clinice, hematologice, electroforezei Hb, diagnosticul prenatal analiza
ADN.
Hemoglobina C apare prin nlocuirea acidului glutamic (6, lan ) cu lizina, se caracterizeaz
printr-o solubilitate sczut, clinic anemie hemolitic grav, splenomegalie i icter cutaneo-mucos,
hematologic-eritrocite n int.
Talasemiile detrminate de afectarea sintezei lanului sau a Hb, ce reprezint modificri
cantitative. n dependen de defectul molecular se manifest de la forme uoare pn la forme grave,
letale de anemie. Beta talasemia major Cooley - se manifest precoce, n primul an de via cu retard
de cretere, paloare a tegumentelor, hepatosplenomegalie compensatorie, hiperplazia medular, n
special la nivelul oaselor feei i craniului - aspect caracteristic de craniu n perie, la nivelul oaselor
lungi - subiere a corticalei cu risc crescut de fractur, pacienii fac uor infecii intercurente.
Diagnosticul clinic, hematologic, anamneza familial (prini heterozigoi cu semne uoare de anemie),
diagnostic prenatal teste ADN.
ATROFIA MUSCULAR SPINAL ACUT INFANTIL
- Afeciune grav, ce se manifest precoce prin hipotonie muscular, retracia spaiului intercostal n
timpul inspiraiei, tuse ineficiente, areflectivitate, cu transmitere autozomal-recesiv;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena localizat pe crs. 5q13.2;
- moartea survine n primii doi ani de via;
- diagnosticul pe baza biopsiei musculare i electromiogramei;
- diagnosticul prenatal pe baza testelor ADN.
AFECIUNI CU TRANSMITERE RECESIV X LINCAT
DISTROFIA MUSCULAR DUCHENNE (DMD) afeciune cu debut n prima copilrie, de obicei
sub vrsta de 5 ani, cu afectarea muchilor centurilor, se asociaz cu retard mental. Criteriile de
diagnostic sunt dozarea creatinkinazei (crescut), electrocardiograma i biopsia muscular.
DISTROFIA MUSCULAR BECKER (DMB) afeciune cu debut n a doua copilrie, fiind
asemntoare simptomatic cu DMD, dar cu o supravieuire mai mare i fr retard mental.
DMD i DMB se transmit XR, gena DMD afectat fiind localizat pe braul p (Xp21). Proteina
codificat de aceast gen se numete distrofina: face parte din clasa spectrinei (din citoscheletul
celular).
Studiile electroforetice in vitro pe biopsiile musculare de la pacienii cu DMB au artat o
diminuare a conductanei clorului sarcolemal. Repausul n conductana clorului pentru fibra muscular
sintetic contribuie la repolarizarea potenialelor de aciune n esutul dat, iar reproducerea lor conduce
la instabilitate electric.
108
Astfel, genele canalelor de clor din fibra muscular par a fi cele mai indicate n explicarea
acestor modificri.
Fiind o maladie XR, se manifest n special la biei, mama fiind purttoare de gen patogen. n
astfel de cazuri diagnosticul prenatal se poate face prin detectarea genei mutante n vilozitile coriale,
folosind RFLP intra- i extragenic.
HEMOFILIILE A I B
Hemofiliile A i B sunt afeciuni XR; genele
mutante responsabile sunt localizate pe braul lung
(Xq28), avnd ca urmare deficitul factorilor VIII i
respectiv IX, componente ale cii intrinseci a
coagulrii.
Boala afecteaz 1 din 5000 de biei.
Hemofilia A este de 10 ori mai frecvent ca
hemofilia B.
Aspectul clinic al hemofiliei A depinde de gradul de activitate a factorului VIII i se exprim n
4 forme:
Forma
Concentraia
Manifestri clinice
factorului VIII
Sever
Sngerare spontan i dup circumcizie. Hemartroze
1%
repetate. Deformri articulare.
Moderat
1-5%
Hemartroze ocazionale. Deformri articulare rare.
Uoar
5-20%
Sngerare rar: dup intervenii chirurgicale,
stomatologice, dup traumatisme.
Ascuns
Se includ i purttoarele genei patologice.
25%
Diagnosticul prenatal al hemofiliilor se bazeaz pe stabilirea sexului, analiza ADN n vilozitile
coriale i dozarea factorului VIII sau IX n sngele fetal.
PROFILAXIA BOLILOR EREDITARE
Profilaxia primar const n evitarea concepiei sau naterii copilului cu anomalie grav,
incurabil prin diverse msuri ce intesc:
micorarea procesului mutaional;
limitarea concepiei n cazurile cu risc 100% sau ntreruperea sarcinii dup diagnosticul
prenatal;
diagnosticul preimplantiv cu selecia produilor de concepie mutani n cazurile de
fertilizare in vitro;
terapie genic germinal sau somatic cu revenirea la genotip normal.
Profilaxia secundar cuprinde o serie de inrervenii pentru prevenirea / atenuarea maniferstrii
complicaiilor la indivizii cu mutaii patologice:
msuri terapeutice perinatale i n timpul sarcinii;
diagnosticul preclinic cu aplicarea terapiei de prevenire a complicaiilor;
excluderea factorilor ce pot provoca apariia bolilor cu predispoziie genetic;
terapie de substituie / dietoterapie / transplant de esut .... pentru fiecare caz n
particular.
Profilaxia eficient poate fi relizat n cadrul unui centru specializat de consult genetic.
Diagnosticul prenatal cu scop de prevenire a bolilor genetice sau AC grave are ca scop
depistarea anomaliilor congenitale sau a bolilor genetice la embrion sau ft. Se realizeaz n cazurile de
sarcini cu risc teratogen sau genetic (anamnez familial sugestiv) i poate fi ca metod de screening
populaional.
109
SFATUL GENETIC
Sfatul genetic este actul medical specializat i complex prin care se determin probabilitatea
(riscul) ca o boal ereditar sau parial ereditar s se manifeste sau s reapar ntr-o familie. Sfatul genetic
este atribuia medicului genetician i se acord la solicitarea persoanelor interesate, deoarece prin
calcularea riscului i stabilirea conduitei ulterioare, sfatul genetic are rol important n profilaxia bolilor
genetice. Dup calcularea riscului de recuren i comunicarea acestuia, trebuie avut n vedere
posibilitatea efecturii diagnosticului prenatal, precum i ntreruperea sarcinii cnd se consider c riscul
este prea mare.
Necesitatea actual a sfatului genetic este determinat de 2 condiii:
1. Diferitele substane poluante din mediul urban, precum i iradierea accidental, profesional sau
diagnostic n timpul sarcinii pot duce la apariia de mutaii i deci a bolilor genetice. Datorit creterii
frecvenei bolilor genetice, cresc i morbiditatea, mortinatalitatea i mortalitatea infantil prin boli
genetice.
2. Datorit interveniei medicinii moderne persoanele cu boli genetice pot supravieui pn la vrsta de
adult i deci pot transmite boala genetic la descendeni.
Ideal, sfatul genetic ar trebui solicitat n urmtoarele situaii:
* Premarital:
1. Unul sau ambii parteneri au anomalii congenitale sau boli genetice;
2. Parteneri sntoi, dar unul sau ambii au rude apropiate cu boli genetice (frai, prini, bunici,
unchi-mtu, verior);
3. Parteneri sntoi, dar doresc o cstorie consangvin;
4. Persoane expuse accidental, profesional sau terapeutic la ageni teratogeni sau mutageni;
5. Cupluri care se cstoresc trziu sau planific s aib copii la mai mult de 35 ani;
* Postmarital (cele mai frecvente solicitri):
1. Naterea unui copil malformat sau cu o boal genetic;
2. Cupluri cu copii nscui mori sau avorturi spontane repetate;
3. Femei care necesit:
a. doze mari de medicamente care pot afecta dezvoltarea ftului;
b. femei care au avut boli infecioase virale (rubeol);
c. radiografii pe micul bazin, vaccinri.
110
Sfatul genetic se acord n centre specializate de genetic medical, de ctre o echip complex de
specialiti (genetician, obstetrician, pediatru, chirurg pediatru, endocrinolog etc). Centrul trebuie s fie
dotat cu un laborator bine utilat pentru a efectua investigaiile necesare unui diagnostic corect i complet.
Metodologia sfatului genetic
Stabilirea diagnosticului precis clinic i paraclinic (date biochimice, radiografii, echografie, ECG,
EEG etc) ;
Stabilirea autenticitii filiaiei i a caracterului genetic al bolii prin:
Ancheta familial, care va ncerca att depistarea bolnavilor, ct i a purttorilor de gen
anormal pe baza analizei arborelui genealogic;
Explorri genetice (msurtori antropometrice, cromatin sexual, cariotip, Southern blot, PCR
etc).
Cunoaterea datelor din literatura de specialitate, mai ales frecvena de apariie a bolii n populaia
respectiv.
Calcularea riscului de recuren presupune folosirea unor noiuni de calcul al probabilitilor.
Tipuri de risc:
a. Total 100% n:
Boli monogenice:
Boli cromozomice:
r = coeficient de nrudire;
n1 = numrul de generaii situate ntre unul dintre cei doi indivizi i strmoul comun;
n2 = numrul de generaii situate ntre al doilea individ i strmoul comun.
exemple de coeficieni de nrudire:
112
,
F = coeficient de consangvinitate;
n = numrul de indivizi prezeni ntr-o bucl care ncepe la nivelul unui
strmo comun, merge pe linie descendent pn la copilul rezultat n urma
unei cstorii consanguine, trecnd pe la unul dintre membrii acestui cuplu
consanguin i se ntoarce pe linie ascendent pn la acelai strmo comun,
trecnd pe la al doilea membru al cuplului consanguin.
NOT:
n se calculeaz pentru toi strmoii comuni
De obicei cu ct o boal recesiv este mai rar cu att consangvinitatea la prini este mai
frecvent.
TESTAREA GENETIC
Testarea genetic este o metod de studiu ce identific genotipurile asociate cu o anumit
afeciune sau predispoziie la boal sau care pot duce la apariia unor boli la descendeni. Scopul testrii
genetice const n identificarea urmtoarelor categorii:
- Persoane afectate (ct mai precoce pentru o ct mai prompt intervenie terapeutic);
- Purttori sntoi heterozigoi (pentru afeciuni recesive);
- Purttori sntoi de gen mutant dominant (pentru afeciuni dominante cu debut tardiv);
- Persoane cu predispoziie genetic pentru boli cu determinism multifactotial.
n dependen de caz, scopul final al acestei identificri este alegerea unei opiuni reproductive
optime sau acolo unde este posibil un tratament precoce. Testarea genetic este parte component a
screeningului neonatal, populaional sau familial.
113
Screening-ul neonatal
Reprezint programul de depistare presimptomatic i de prevenire a unor boli genetice. Are
drept scop depistarea nou-nscuilor cu anumite boli genetice nemanifestate la natere, boli a cror
evoluie poate fi controlat i eventual oprit prin terapie adecvat i iniiat precoce. Constituie o
strategie eficient de sntate public, aplicabil pentru unele afeciuni tratabile precum fenilcetonuria,
hipotiroidismul congenital i galactozemia.
Pentru alte tipuri de afeciuni, programele de screening variaz de la o ar la alta, n funcie de
prevalena afeciunilor ce pot beneficia de ameliorri terapeutice prin depistare precoce: mucoviscidoza
(frecvent n Europa), anemia falciform (frecvent la afro - americani), maladia Ta Sacks (frecvent
la evreii ashkenazi); thalasemia (frecvent la populaia circum - mediteranian); depistate neonatal,
acestor afeciuni li se poate influiena evoluia, depistarea lor putnd constitui factor de decizie pentru
sarcinile ulterioare.
Exist deja protocoale specifice pentru o serie de afeciuni:
Screening-ul pentru fenilcetonurie, aplicabil nou-nscuilor, se realizeaz prin testarea nivelului
fenilalaninei n ser n primele 4-5 zile dup natere, sensibilitatea testului fiind de 98%, iar specificitatea
practic de 100%.
Screening-ul neonatal n hipotiroidia congenital se bazeaz pe: detectarea imunologic a
hormonilor tiroideni sanguini care prezint valori sczute; testele moleculare de screening neonatal i de
depistare a heterozigoilor sunt cel mai frecvent aplicate.
Efectuarea screening-ului neonatal la anemia falciform n zonele afectate cu predilecie se
realizaeaz pe baza tabloului hematologic i prin diagnostic ADN.
DIAGNOSTICUL PRENATAL
Este necesar n cazul sarcinilor cu risc crescut, identificate prin screening sau n urma consilierii
genetice a cuplurilor parentale cu risc. Un diagnostic prenatal complet va impune consultri
interdisciplinare (obstetrician, pediatru, genetician, neonatolog etc.).
Dei diagnosticul prenatal constituie o surs de disconfort pentru mam i chiar o surs de risc
vital pentru ft, acesta rmne un instrument predictiv extrem de eficient n epidemiologia bolilor
genetice, permind n unele situaii evitarea naterii unui copil malformat.
Existnd riscurile citate mai sus, efectuarea diagnosticului prenatal impune ndeplinirea unor
criterii clar definite:
114
Diagnosticul prenatal cuprinde att metode noninvazive, ct i metode invazive, acestea din urm
avnd ns risc abortiv.
METODE NONINVAZIVE
Echografia are ca scop identificarea unor anomalii fetale structurale: defecte de tub neural,
malformaii congenital de cord, anomalii scheletice, renale etc.
Detecia celulelor fetale n circulaia matern, metod la limita dintre cercetare i practica
medical, se bazeaz pe apariia n sngele matern a anticorpilor fa de celulele trofoblastice sau
sanguine (trombocite, leucocite) nc din primul trimestru de sarcin. Metologia poate fi util att n
determinarea sexului produsului de concepie (important n transmiterea bolilor legate de cromozomul
X), dar i n boli monogenice cu transmitere autozomal precum i n anomalii cromozomice de tip
aneuploidie. Poate fi utilizat ca test screening n grupuri int speciale cu risc crescut .
Detecia ADN-ului fetal n plasma matern acest ADN, provenind din apoptoza celulelor
fetale, ar fi n cantitate mai mare dect cel izolat din celulele fetale i n consecin, mai uor de detectat.
hemofilie), fie combinarea ambelor metode (neurofibromatoza, coreea Huntingron, distrofia muscular
Duchenne, cancerul mamar familial, hemocromatoza).
Avantajele metodei:
- diagnostic precoce (trimestrul I de sarcin);
- decelarea (n 1-3% din cazuri) de mozaicuri cromozomice adevrate (dar celulele fetale pot fi
contaminate cu celulele materne ceea ce preteaz la confuzii; n plus, pot exista alte facte derutante);
se impune monitorizarea sarcinii i efectuarea cariotipului din celulele fetale obinute prin
amniocentez i cordono-centez.
Riscurile constau n:
- avort (risc superior amniocentezei);
- anomalii ale membrelor (de aceea metoda este interzis nainte de sptmna a 9-a de gestaie);
- pierderi de lichid amniotic,
- sngerri vaginale.
Placentocenteza transabdominal - este un echivalent al punciei vilozitilor coriale, util n
trimestrele II i III de sarcin n caz de oligohidraminos, cnd celelalte metode (amniocenteza,
cordiocenteza, PUBS) sunt practic contraindicate. Puncia vilozitilor choriale avnd indicaii
asemntoare amniocentezei (dar un termen diferit), s-ar impune o contrapunere amniocentez versus
CVS.
PROBLEME ETICE N TESTAREA GENETIC
Testarea genetic este una din cele mai importante aplicaii ale cunotinelor obinute din
Proiectul Genomului Uman i reprezint analiza ADN-ului, cromozomilor, proteinelor i a unor
metabolii umani pentru detectarea bolilor transmise ereditar, mutaiilor, identificarea purttorilor,
stabilirea diagnosticului sau prognosticului prenatal i clinic, monitorizarea i screeningul prenatal i al
nou-nscuilor.
Principiile eticii identificate de Comitetul de Apreciere a Riscului Genetic din USA. (CommiTTee
on Assessing Genetic Risks) se refer la dreptul la autonomie, intimitate, confidenialitate i echitate.
Pe baza acestor principii, Comitetul a emis urmtoarele recomandri:
- Screeningul nou-nscuilor nu poate fi avizat fr dovada necesitii lui pentru detecia i
tratamentul efectiv al bolilor specifice.
- Testarea copiilor se face numai n cazul bolilor pentru care exist i este necesar tratament curativ
sau preventiv.
- Confidenialitatea poate fi elucidat, prin dezvluirea diagnosticului la rude, numai cnd ne
ateptm la lipsa unei dezvluiri voluntare i numai n situaiile cnd exist o nalt probabilitate de
afectare ireversibil sau/i fatal a rudelor n lipsa acestei dezvluiri
- Falsa paternitate poate fi relevat exclusiv mamei (nu i partenerului acesteia).
- Informaia genetic, privitoare la statusul de purttor al solicitantului / consultantului nu poate fi
dezvluit partenerului fr consimmntul consultantului.
- Legislaia ar trebui astfel adoptat nct riscurile genetice s nu fie luate n considerare la luarea
deciziei de asigurare medical sau privind costul acesteia.
- Legislaia ar trebui astfel adoptat nct informaia genetic s nu poat fi accesat de ctre
angajatorul prospectiv sau existent, dect n cazul n care poate influena exercitarea atribuiilor
profesionale.
117