Sunteți pe pagina 1din 221

Departamentul de Studii pentru nvmnt cu Frecven Redus

(DIFRED-FA)

SPECIALIZAREA: AGRICULTUR

Conf. dr. Hellene CASIAN

GENETIC

Bucureti
- 2012 -
1
CUPRINS
Tema nr.1. Noiuni introductive ........................................................................................................5
1.1. Obiectul, coninutul i importana geneticii; terminologie ........................................................5
1.2. Teorii care stau la baza dezvoltrii geneticii ...............................................................................6
1.3. Metode de studiu n genetic .......................................................................................................8
Tema nr. 2. Ciclul de via la organisme ............................................................................................11
2.1. Ciclul de via la organismele superioare ....................................................................................11
2.2. Ciclul de via la bacterii i recombinarea genetic ...................................................................12
Tema nr. 3. Ereditatea caracterelor calitative (mendeliene) ...............................................................17
3.1. Gregor Mendel fondatorul geneticii i caracterele calitative ....................................................17
3.2. Monohibridarea i legea segregrii genelor .................................................................................20
Tema nr. 4. Polihibridarea i legea segregrii independente a perechilor de caractere ......................28
4.1. Dihibridarea de tip Pisum ............................................................................................................28
4.2. Test-cross-ul la dihibridare ..........................................................................................................32
4.3.Trihibridarea de tip Pisum ............................................................................................................33
4.4. Verificarea raporturilor de segregare ..........................................................................................38
Tema nr. 5. Intraciuni genice ............................................................................................................42
5.1. Interaciuni ale genelor alele .......................................................................................................42
5.2. Sisteme plurialele ........................................................................................................................45
5.3. Interaciuni ntre gene nealele .....................................................................................................47
Tema nr. 6. Teoria cromozomial a ereditii ....................................................................................54
6.1. Aezarea liniar a genelor pe cromozomi ...................................................................................54
6.2. Transmiterea nlanuit a genelor plasate pe acelai cromozom. Linkage ..................................56
6.3. Schimbul reciproc de gene. Crossing-over ..................................................................................59
Tema nr. 7. Variaii ale numrului de cromozomi. Euploidia ............................................................67
7.1. Ploidia ..........................................................................................................................................67
7.2. Monoploidia i haploidia .............................................................................................................68
7.3. Poliploidia ....................................................................................................................................70
Tema nr. 8. Variaii ale numrului de cromozomi. Aneuploidia .......................................................77
8.1 Aneuploidia ..................................................................................................................................77
8.2. Tipuri de aneuploidie ...................................................................................................................78
8.3. Importana aneuploizilor ..............................................................................................................79
Tema nr. 9. Restructurri cromozomiale .............................................................................................82
2
9.1. Caracteristici i clasificare .........................................................................................................82
9.2. Deleii i duplicaii .....................................................................................................................83
9.3. Inversii i translocaii .................................................................................................................86
Tema nr. 10. Determinismul genetic al sexelor..................................................................................93
10.1. Determinsmul cromozomial .....................................................................................................93
10.2 Determinismul genomial ...........................................................................................................95
10.3. Determinismul genic ................................................................................................................96
10.4. Reglajul genetic al diferenierii sexelor la plante .....................................................................97
Tema nr. 11 . Ereditatea caracterelor sex-linkage ............................................................................102
11.1. Factorii ce influeneaz determinismul genetic al sexelor ......................................................102
11.2. Caractere sex-influenate .........................................................................................................107
11.3. Caractere sex-limitate ..............................................................................................................107
11.4. Ereditatea caracterelor legate de sex ...................................................................................... 108
Tema nr. 12. Ereditatea caracterelor cantitative ...............................................................................113
12.1. Determinsmul geentic al caracterelor cantitative ....................................................................113
12.2. Sisteme de gene multiple .........................................................................................................117
12.3. Variana genetic .....................................................................................................................120
12.4. Ereditatea n sens larg; ereditatea n sens restrns ...................................................................121
12.5. Hibridarea transgresiv ............................................................................................................122
Tema nr.13. Ereditatea citoplasmatic ..............................................................................................126
13.1. Gene extranucleare .................................................................................................................. 126
13.2. Androsterilitatea citoplasmatic ...............................................................................................128
Tema nr. 14. Genetica i evoluia populaiilor ..................................................................................132
14.1. Frecvena genelor i genotipurilor ............................................................................................132
14.2. Principiul Hardy Weinberg ....................................................................................................134
14.3. Factorii care modific structura genetic a populaiilor ...........................................................137
Tema nr. 15. Introducere n genetic molecular ..............................................................................145
15.1. Acizii nucleici: structur i funcii ...........................................................................................145
15.2. Forme structurale de ADN .......................................................................................................148
15.3. Niveluri de mpachetare de ADN;denaturarea i renaturarea ADN .........................................150
15.4. ADN repetitiv caracteristic eucariotelor ...................................................................................151
Tema nr. 16. Transferul i utilizarea informaiei genetice ................................................................155
16.1. Replicarea macromoleculei de ADN ........................................................................................155
3
16.2. Transcripia ...............................................................................................................................160
16.3. Procesarea ARN-m ...................................................................................................................161
16.4. Tipuri de ARN ..........................................................................................................................163
16.5. Codul genetic ............................................................................................................................165
16.6. Translaia ..................................................................................................................................166
Tema nr. 17. Gena, structur i funcii ..............................................................................................172
17.1. Concepii despre gen ..............................................................................................................172
17.2. Structura fin a genei ................................................................................................................173
17.3. Structura genei la procariote .....................................................................................................176
17.4. Structura genei la eucariote ......................................................................................................177
17.5. Elemente genetice mobile ........................................................................................................178
Tema nr. 18. Reglajul genetic ...........................................................................................................182
18.1. Reglajul activitii genelor la procariote ..................................................................................182
18.2. Reglajul activitii genelor la eucariote ....................................................................................186
18.3. Rolul interferenei ARN n reglarea activitii genelor ............................................................188
Tema nr. 19. Mutaia i recombinarea genetic ................................................................................191
19.1. Mutaiile genetice ....................................................................................................................191
19.2. Reparaia genetic ....................................................................................................................194
19.3. Recombinarea la nivel molecular .............................................................................................194
Tema nr. 20. Tehnici de genetic molecular cu aplicaii n ameliorarea plantelor .........................197
20.1. Tehnica PCR .............................................................................................................................197
20.2. Markeri moleculari: RAPD, AFLP, SSR, RFLP ......................................................................203
20.3. Selecia asistat de markeri moleculari ....................................................................................208
Test recapitulativ ...............................................................................................................................212
Bibliografie selectiva ....................................................................................................................... 221

4
Tema Nr.1
NOIUNI INTRODUCTIVE
Uniti de nvare:
Obiectul, coninutul i importana geneticii; Terminologie.
Teorii care stau la baza dezvoltrii geneticii
Metode de studiu n genetic.

Obiectivele temei:
nsuirea definiiei geneticii i fixarea termenilor de baz utilizai n genetic ( cum ar fi
ereditatea i variabilitatea, genotip i fenotip), coninutul geneticii;
trecerea n revist a istoricului privind dezvoltarea geneticii i prezentarea celor mai
importante teorii privind ereditatea i variabilitatea caracteristicilor;
stabilirea metodelor de studiu utilizate n genetic pentru analiza ereditii i variabilitii
diferitelor caracteristici.

Timp alocat temei: 2 ore


Bibliografie recomandat:
1. Casian H., 2006. Genetic- support pentru curs.Ed. Printech;
2. Crciun T., i colab., 1995. Genetica vegetal - Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti;
3. Cornea Clina Petrua, 2005. Genetic Ed. Ceres, Bucureti

1.1. Obiectul, coninutul i importana geneticii; Terminologie.


Genetica este tiina care studiaz ereditatea i variabilitatea organismelor. Genetica
explic mecanismele de nregistrare, de stocare, de modificare i de transmitere a informaiei
ereditare din generaie n generaie, precum i procesul interaciunii genotipului cu mediul.
Denumirea de genetic provine de la cuvntul grecesc gennao care nseamn a da natere,
a genera .
Ereditatea (hereditas a moteni, lat.) este proprietatea organismelor de a da natere unor
descendeni asemntori lor. Mai poate fi definit ca fenomenul transmiterii din generaie n
generaie a caracterelor sau procesul transmiterii informaiei genetice de la prini la urmai. Unitatea
elementar care condiioneaz transmiterea i manifestarea caracterelor a fost numit gen ( 1906 de
geneticianul danez W. Johannsen). Alturi de genele care se afl n cromozomi i determin
ereditatea cromozomal, exist i uniti ereditare situate la nivelul citoplasmei, denumite
plasmagene, care determin ereditatea citoplasmatic.
5
Totalitatea factorilor ereditari ai unui organism poart numele de genotip.
Genele i plasmagenele au o mare stabilitate i sunt capabile s se autoreproduc fidel ( funcia
autocatalitic a genei). n acest sens ereditatea constituie elementul conservativ al lumii vii.
Dac se compar descendenii din cadrul unei rase, soi etc, se constat unele deosebiri ntre
indivizi, dar i fa de prini. n natur nu exist doi indivizi identici, unicitatea fiind o caracteristic
de baz a lumii vii. Aceasta nseamn c organismele prezint variabilitate.
Variabilitatea reprezint proprietatea organismelor vii, cu diferite grade de nrudire, de a se
deosebi ntre ele n plan morfologic, fiziologic, biochimic etc. Diferenele ntre indivizi pot fi
determinate de mutaii i recombinri ale materialului genetic (variabilitate ereditar) i de
influena condiiilor de mediu (variabilitate neereditar).
Totalitatea nsuirilor morfologice, fiziologice, biochimice i de comportament ale unui organism
poart numele de fenotip.

1.2. Teorii care stau la baza dezvoltrii geneticii


Genetica, este considerat o tiin tnr, dei preocuprile oamenilor privind ereditatea
caracterelor dateaz din antichitate.
n unele scrieri i desene ale popoarelor antice (egipteni, indieni, greci, romani etc) se gsesc
indicaii cu privire la selecia plantelor i animalelor. O dovad a acestor preocupri o reprezint
sculpturile egiptene vechi de 6000 de ani, n care sunt prezentate pedigreele mai multor generaii de
cai, cu indicaii referitoare la modul cum se transmit la urmai forma capului i a copitei.
n secolul XIX se intensific interesul pentru ereditate i ncepe elaborarea de teorii corpusculare.
Una dintre primele teorii corpusculare a fost elaborat de Ch.Darwin n 1868 sub denumirea de
teoria pangenezei. Conform acesteia, motenirea caracterelor se realizeaz prin intermediul unor
particule denumite gemule, care migreaz din toate prile organismului i pe care sngele le
transport n celulele sexuale, ele transmindu-se n urma fecundrii la urmai. Aceast concepie
este o renoire a teoriei panspermiei enunate de Hippocrates.
Apogeul teoriilor corpusculare l reprezint teoria plasmei germinative, elaborat de August
Weismann n perioada 1875 1876 i definitivat n 1902. Aceast teorie susine c organismul este
format din dou pri deosebite calitativ : soma sau corpul i substana ereditar denumit
germoplasm sau plasma germinativ. Ea reprezint substratul care prin intermediul celulelor
sexuale asigur transmiterea ereditar a caracterelor.
Biologul i matematicianul Gregor Mendel este considerat fondatorul i printele geneticii. El a
efectuat cercetri bazate pe hibridari experimentale la mai multe specii : mazre, porumb, fasole etc.
Ca urmare a elaborat teoria factorilor ereditari conform creia fiecare caracter al organismului este
6
determinat de o anumit particul material denumit factor ereditar ( gen ), localizat n nucleu i
care se transmite la urmai prin intermediul gameilor (celulelor sexuale). Modul de manifestare al
caracterelor n generaiile F1, F2 i n generaiile urmtoare, l-au determinat pe Mendel s emit
concluzii universal valabile, ulterior au fost ridicate la rangul de legi ale ereditii.

Consacrarea geneticii ca tiin este determinat de trei biologi i anume Hugo de Vries ( 1848
1935 ), Carl Correns ( 1864 1933 ) i Erich Tschermac ( 1871 1962 ), care n anul 1900, au
redescoperit independent concluziile lui Gregor Mendel.

Contribuii semnificative la dezvoltarea geneticii au avut experienele lui Thomas Hunt Morgan i
colaboratorilor lui, care au efectuat cercetri la Drosophila melanogaster i au emis trei teze :
plasarea liniar a genelor pe cromozomi; fenomenul de linkage complet i fenomenul de linkage
incomplet, acestea alcatuind teoria cromozomial.

n dezvoltarea geneticii moderne, rolul hotrtor l-au avut cercettorii americani O.T.Avery,
C.M.MacLeod i M.McCarty care descoper rolul genetic al acidului dezoxiribonucleic ( ADN ) din
cromozomi, explicnd astfel fenomenul de transformare genetic la bacterii sesizat de F.Grifftch .

n 1953, J.D.Watson, F.H.C.Crick i M.H.F.Wilkins stabilesc modelul de alctuire al ADN-ului,


ceea ce a dus la impulsionarea cercetrilor privind acizii nucleici.

Mai trziu rezultatele se succed rapid, astfel s-a descoperit rolul i structura ARN-ului, existena
unui limbaj genetic codul genetic, structura genelor, sinteza proteinelor i reglajul genetic al
sintezei proteice etc.

Dup anul 1970 s-au dezvoltat considerabil cercetrile de inginerie genetic. Acest nou domeniu a
dus la : izolarea i sinteza artificial a genelor, transferul intra- i interspecific al genelor, uneori
chiar de la organisme procariote la cele eucariote i viceversa, manipularea materialului genetic la
nivel celular prin realizarea de haploizi prin androgenez i ginogenez experimental la plante,
hibridarea ntre celule vegetale i animale, alctuirea hrilor genetice la mai multe specii inclusiv
pentru om (2005) etc.

Ingineria genetic are implicaii profunde de ordin fundamental i aplicativ, mai ales in crearea de
noi forme vegetale i animale de importan economic, n realizarea de microorganisme capabile s
sintetizeze aminoacizi, proteine, hormoni,vitamine, antibiotice etc, n realizarea terapiei genice cu
importan n medicina uman i veterinar.

Putem concluziona pe baza celor prezentate, marea importan a geneticii i faptul c genetica este
o necesitate pentru specilitii din domeniul biologiei, agriculturii, medicinei.
7
1.3. Metode de studiu n genetic
Pentru studiul ereditii i variabilitii organismelor n genetic sunt utilizate n mod separat
sau asociat mai multe metode de studiu.
Vom enuna cteva dintre acestea:
Metoda hibridologic: se realizeaz hibridarea ntre organisme diferite genetic i se
analizeaz descendena obinut privind motenirea diferitelor caracteristici pe baza analizei
matematice. Metoda a fost introdus de ctre G.Mendel i este folosit i astzi.
Metoda genealogic: este cea mai veche metod ( folosit i n antichitate),
presupune nregistrarea i analiza datelor referitoare la indivizi ntr-o succesiune de generaii. Se
poate stabili astfel modul de transmitere i manifestare a unor caracteristici.
Metoda citologic: se bazeaz pe studiul constituenilor celulari cu rol genetic i
interferena modificrile ce apar la nivelul acestora cu manifestarea diferitelor caracteristici.
Metoda biochimic: aplicat n genetica molecular, se bazeaz pe cunoaterea i
manipularea materialului genetic la nivel molecular. Este o metod ce a permis dezvoltarea n ritm
exponenial a geneticii.
Metoda biometric: presupune nregistrarea datelor privind caracteristicile i
prelucrarea statistic a acestor date. Prin prelucrarea datelor se obin informaii privind ereditatea i
mai ales variabilitatea caracteristicilor. Metoda este folosit cu precdere n analiza caracteristicilor
cantitative ( greutatea boabelor/spic , rezistena la ger, coninutul n zahar, etc).
Metoda radiaiilor: utilizarea diferitelor tipuri de radiaii i efectele mutagene pe
care le au asupra materialului genetic, au dezvoltat aceast metod de studiu n genetic.
TEST DE EVALUARE
Definii ereditatea:
Rspuns:
Ereditatea este proprietatea organismelor de a da natere unor descendeni asemntori lor. Mai
poate fi definit ca fenomenul transmiterii din generaie n generaie a caracterelor sau procesul
transmiterii informaiei genetice de la prini la urmai.

1. Definii fenotipul.
Rspuns:

8
2. La ce se refer teoria cromozomial elaborat de ctre T. Hunt Morgan i
colaboratorii?

3. Care este enunul teoriei factorilor ereditari, emis de ctre G. Mendel?

4. Definii metoda biochimic de studiu n genetic:

5. Definii metoda hibridologic:

Exerciii:
Exemplu rezolvat:
1. Unitile ce asigur ereditatea sunt:
a) Organitele citoplasmatice
b) Nucleul
c) Genele i plasmagenele
Rezolvare: c
2. Care sunt tipurile de erediti:
a) Ereditate nuclear
b) Ereditate cromozomal
c) Ereditate citoplasmatic
d) Ereditate nuclear i citoplasmatic
3. Fenotipul este rezultatul interaciunii dintre :
a) Genotip i mediu
b) Genotip i plasmagene
c) Mediu i plasmagena
4. Harta genetic la om a fost realizat n anul:
a) 1989
b) 2005
c) 2000
9
5. n ce an s-a stabilit structura acizilor nucleici?
a) 1970
b) 1963
c) 1953

Rezumatul temei
Genetica este tiina care studiaz ereditatea i variabilitatea organismelor. Genetica explic
mecanismele de nregistrare, de stocare, de modificare i de transmitere a informaiei ereditare din
generaie n generaie, precum i procesul interaciunii genotipului cu mediul.
Ereditatea (hereditas a moteni, lat.) este proprietatea organismelor de a da natere unor
descendeni asemntori lor. Mai poate fi definit ca fenomenul transmiterii din generaie n
generaie a caracterelor sau procesul transmiterii informaiei genetice de la prini la urmai. Unitatea
elementar care condiioneaz transmiterea i manifestarea caracterelor a fost numit gen ( 1906 de
geneticianul danez W. Johannsen). Alturi de genele care se afl n cromozomi i determin
ereditatea cromozomal, exist i uniti ereditare situate la nivelul citoplasmei, denumite
plasmagene, care determin ereditatea citoplasmatic.
Totalitatea factorilor ereditari ai unui organism poart numele de genotip.
Genele i plasmagenele au o mare stabilitate i sunt capabile s se autoreproduc fidel ( funcia
autocatalitic a genei). n acest sens ereditatea constituie elementul conservativ al lumii vii.
Dac se compar descendenii din cadrul unei rase, soi etc, se constat unele deosebiri ntre
indivizi, dar i fa de prini. n natur nu exist doi indivizi identici, unicitatea fiind o caracteristic
de baz a lumii vii. Aceasta nseamn c organismele prezint variabilitate.
Variabilitatea reprezint proprietatea organismelor vii, cu diferite grade de nrudire, de a se
deosebi ntre ele n plan morfologic, fiziologic, biochimic etc. Diferenele ntre indivizi pot fi
determinate de mutaii i recombinri ale materialului genetic (variabilitate ereditar) i de influena
condiiilor de mediu (variabilitate neereditar).
Totalitatea nsuirilor morfologice, fiziologice, biochimice i de comportament ale unui
organism poart numele de fenotip.
Principalele teorii care stau la baza dezvoltrii geneticii sunt: teoria plasmei germinative,
teoria factorilor ereditari, teoria cromozomial a ereditii, teoria molecular.

Metodele de studiu frecvent folosite n genetic sunt: metoda hibridologic, metoda


genealogic, metoda citologic, metoda biochimic, metoda radiaiilor, metoda biometric.
10
Tema nr. 2
CICLUL DE VIA LA ORGANISME

Uniti de nvare:
Ciclul de via la organismele superioare.
Ciclul de via la bacterii i recombinarea genetic.

Obiectivele temei:
nelegerea proceselor prin care organismele dau natere altora similare lor;
explicarea legturilor dintre generaii;
dobndirea cunotiinelor privind continuitatea informaiei genetice i recombinarea
materialului genetic.

Timpul alocat temei: 2 ore


Bibliografie recomandat:
1. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. I, Ed. Bioterra, Bucureti.
2. Paula Iancu, 2008, Genetic,Ed. Sitech, Craiova.

2.1. Ciclul de via la organismele superioare


La organismele superioare, ciclul de via presupune alternana celor dou faze: faza
diploid (2n) i faza haploid (n). Pentru plante, ciclul de via poate fi exemplificat la porumb, o
specie unisexuat monoic, uor de urmrit.
n urma meiozei la plantele superioare rezult spori. n cazul n care din spori, n procesul
de gametogenez urmeaz a se forma gamei masculi, sporii se mai numesc microspori,
iar procesul de meioz n urma cruia rezult se numete
microsporogenez.
M i c ro sp or o gen ez a s e r ea l i z eaz l a c el u l el e sp e ci al i z at e di pl oi d difereniate
din esutul subepidermal al anterelor, celule numite microscporocite.
n cazul n care de la spori, n procesul de gametogenez urmeaz a se forma gamei femeli,
sporii se mai numesc mega sau macrospori iar procesul de meioz n urma cruia rezult se
numete mega sau macrosporogenez.
11
Megasporogeneza are loc la celulele specializate diploide difereniate din esutul generativ al
ovulului, celule numite megasporocite. Gametogeneza la plantele superioare cuprinde
microgametogeneza sau procesul de formare a gameilor masculi i mega sau
macrogametogeneza, adic procesul de formare a gameilor femeli.
Microgametogeneza se realizeaz n urma a dou diviziuni mitotice haploide pe care le sufer
nucleul fiecrui microspor. n urma primei diviziuni mitotice rezult doi nuclei haploizi i anume
nucleul generativ i cel vegetativ. Cea de-a doua diviziune o sufer numai nucleul generativ n
urma creia rezult ali doi nuclei haploizi sau spermatiile ce reprezint de fapt gameii masculi.
Microsporul mpreun cu cei trei nuclei haploizi, n urma unui proces de maturare se difereniaz
n grunciori de polen sau gametofitul mascul.
Megagametogeneza se realizeaz n urma a trei diviziuni mitotice haploide pe care le sufer
nucleul unui singur megaspor din cadrul celor patru rezultai n urma meiozei. Ceilali trei se
resorb. n urma celor trei diviziuni mitotice rezult opt nuclei haploizi dintre care doi urmeaz a
fuziona pentru a forma nucleul secundar diploid, trei nuclei se repartizeaz n apropierea
micropilului reprezentnd oosfera cu cele dou sinergide , iar trei nuclei la polul opus reprezint
antipodele. Megasporul mpreun cu nucleii menionai reprezint sacul embrionar al ovulului sau
gametofitul femel. Elementele sexuale propriu-zise sunt reprezentate de oosfer i nucleul
secundar.
Fecundarea
La plantele superioare (Angiosperme), cum este i cazul porumbului, este dubl. Dup
germinarea grunciorilor de polen pe stigmat, prin tubul polenic ce strbate stilul spermatiile ajung n
sacul embrionar unde una va fuziona cu nucleul secundar rezultnd un nucleu triploid de la care se
va diferenia endospermul, iar cea de-a doua spermatie va fuziona cu oosfera rezultnd zigotul
diploid de la care se va forma embrionul i apoi planta ntreag (sporofitul). n esutul
generativ al anterelor i ovarelor celulele specializate vor intra din nou n diviziune
meiotic n urma creia vor rezulta sporii, ncheindu-se astfel ciclul de via. La Gimnosperme
precum i la animale, fecundarea este simpl.

2.2. Ciclul de via la bacterii i recombinarea genetic


Bacteriile sunt organisme de tip procariot, fiind lipsite de nucleu, avnd un singur cromozom
de form circular, genoforul, care nu este inclus n membran nuclear.
Pe lng materialul genetic reprezentat de ctre cromozom, la bacterii s-au identificat
elemente genetice numite plasmide. Acestea, sunt structuri genetice ce se pot gsi n citoplasm i se
12
replic independent de cromozomul bacterian, fie integrate n cromozomul bacterian i se replic
sincron cu acesta. Plasmidele sunt alctuite tot din ADN, sunt mai mici dect cromozomul bacterian
i au adesea o structur circular.
Sunt cunoscute mai multe tipuri de plasmide, aa cum ar fi: factorul de fertilitate F ce
determin sexualitatea (F+ mascul, F- femel); factorul R conine gene pentru rezisten la
antibiotice; factorul Col produce colicin, etc.
Plasmidele se pot transfera de la o bacterie la alta, fiind considerate astfel vehicul de
transport pentru gene. Genele pot fi inserate n plasmide i odat cu replicarea lor, se pot replica i
genele inserate, fiind astfel considerate i vehicul de clonare pentru gene.
Recombinarea genetic la bacterii const n transferul ADN de la un organism la altul i se
realizeaz pe ci specifice, cum ar fi : transformarea genetic, conjugarea, sexducia, transducia.
a) Transformarea genetic. Fenomenul a fost descoperit de ctre F.Griffith, n anul 1928, n
urma experienelor cu pneumococi la oareci. n 1944, Avery i colaboratorii au descoperit natura
agentului transformant, acesta fiind ADN izolat din celulele bacteriene.
Acest fenomen poate fi definit ca procesul prin care o celul bacterian ncorporeaz ADN
extracelular liber ( cromozomal sau plasmidial) provenit n urma lizei celulare. Asemenea fragmente
de ADN, pot conine gene care ptrunse n celula receptoare se integreaz n cromozom i se
transmit de-a lungul generaiilor.
Pentru a prelua ADN transformant din mediu extracelular, celulele bacteriene trebuie s
manifeste o anumit stare specific de competen. La unele specii bacteriene, aceasta este o stare
natural, temporar, ce apare ntr-o anumit etap aciclului de dezvoltare, n timp ce la altele ea
poate fi indus doer prin tratamente specifice. n cursul realizrii competenei are loc formarea sau
activarea unor receptori specifici la nivelul peretelui celular, aceti receptori sunt responsabili de
legarea ADN-ului exogen la suprafaa celular.

Etapele procesului de transformare genetic


1. ADN-ul exogen se ataeaz la suprafaa membranei celulare la nivelul situsurilor
receptoare;
2. Ptrunderea n celul a ADN-ului exogen;
3. Realizarea sinapsei ntre ADN exogen i segmentul complementar din ADN-ul bacteriei
receptoare;
4. Integrarea ADN-ului exogen printr-un proces asemntor crossing-overului n
cromozomul bacterian.
13
ADN-ul transformant, inclus n cromozomul bacterian, se replic sincron cu acesta. Pentru a
obine o frecven ridicat de integrare/transformare este necesar ca ADN-ul exogen s provin de la
o tulpin bacterian nrudit cu bacteriile competente receptoare.
b) Conjugarea. Fenomenul a fost descoperit de J.Lederberg i E.L.Tatum n anul 1946, la
Escherichia coli. Ea reprezint procesul de transfer de ADN de la o celul donor la o celul receptor
prin intermediul unei legturi intercelulare directe ( sex-pili- apendici filamentoi la exteriorul
membranei bacteriene) i condiionat de prezena n bacteria donor a unui element genetic special
denumit conjugon (plamidul F).
Pentru realizarea transferului de material genetic prin conjugare, este necesar ca bacteria
donor i cea receptor s vin n contact, fapt pentru care conjugarea este considerat un fenomen de
parasexualitate, similar cu procesul sexual la eucariote.
Plasmidul F. La bacterii sexul este determinat de prezena plasmidului F, considerat un
factor genetic al fertilitii (sex-factor). Celulele cu acest factor sunt considerate mascule F+, iar cele
fr factorul F, sunt considerate femele F-.
1) plasmidul F se poate afla n stare liber n celula bacterian, se replic independent de cromozom,
astfel c bacteria respectiv numai potenial mascul F+ , neavnd capacitatea de a conjuga cu celula
femel F-, dect cu o frecven redus.
2) uneori, plasmidul F este integrat n cromozomul bacterian datorit unei omologii ntre regiuni din
ADN. O astfel de celul capt posibilitatea conjugrii cu celula F- cu o mai mare frecven i se
realizeaz recombinarea genetic. Integrarea plasmidului F n cromozomul bacterian printr-un proces
de crossing-over determin celulele de tip Hfr (high freqvency of recombination).
Datorit descifrrii conjugrii a fost posibil ntocmirea hrilor genetice la bacterii.
c) Sex-ducia. Procesul prin care gene ale cromozomului bacterian sunt ncorporate n plasmidul
F( devine plasmid modificat) i pe care le poate transfera prin conjugare la alte celule bacteriene.
d) Transducia este procesul prin care fagii temperai realizeaz transferul de informaie genetic de
la o bacterie donor la o bacterie receptor. Bacteriofagii temperai au capacitatea de a se integra n
cromozomul bacteriei gazd sub form de profag i de a se replica sincron cu acesta. La un moment
dat profagul se separ de cromozom, se replic autonom i determin liza celulei gazd (ciclul litic).
Putem avea transducie specializat, cnd are loc transferul unei anumite gene i transducie
general, cnd are loc transferul oricrei gene din cromozomul bacterian.

14
TEST DE EVALUARE
1. Ce este macrogametogeneza?
Rspuns:
Macrogametogeneza este procesul de formare a gameilor femeli.

2. Ce este microgametogeneza?

3. Care sunt principalele procese prin care se realizeaz recombinarea genetic la bacterii?

4. Explicai conjugarea la bacterii.

Exerciii
Exemplu rezolvat:
1. Cte oosfere rezult din patru macrosporocii?
a) 2
b) 4
c) 6
Rezolvare: b
1. Cte spermatii rezult din opt microspori?
a) 16
b) 10
c) 12
2. Pentru a prelua ADN exogen o bacterie trebuie sa fie n stare de:
a) Conjugare
b) Competen
c) Donor
3. Conjugonul este un element genetic reprezentat de:
a) Plasmidul F
b) Plasmidul R
c) Plasmidul Col

15
Rezumatul temei

n urma meiozei la plantele superioare rezult spori. n cazul n care din spori, n
procesul de gametogenez urmeaz a se forma gamei masculi, sporii se mai numesc microspori iar
procesul de meioz n urma cruia rezult se numete microsporogenez.

n cazul n care de la spori, n procesul de gamet ogenez urmeaz a se


forma gamei femeli, sporii se mai numesc mega sau macrospori iar procesul de meioz n urma
cruia rezult se numete mega sau macrosporogenez.

Microgametogeneza se realizeaz n urma a dou diviziuni mitotice haploide pe care


le sufer nucleul fiecrui microspor.

Megagametogeneza se realizeaz n urma a trei diviziuni mitotice haploide pe care le


sufer nucleul unui singur megaspor din cadrul celor patru rezultai n urma meiozei.

Bacteriile sunt organisme de tip procariot, fiind lipsite de nucleu, avnd un singur
cromozom de form circular, genoforul, care nu este inclus n membran nuclear.

Pe lng materialul genetic reprezentat de ctre cromozom, la bacterii s-au identificat


elemente genetice numite plasmide.

Principalele mecanisme de recombinare genetic la bacterii sunt: transformarea,


conjugarea, sex-ducia, transducia.

16
Tema nr. 3
EREDITATEA CARACTERELOR CALITATIVE (MENDELIENE)

Uniti de nvare:
Gregor Mendel unul dintre fondatorii geneticii i caracterele calitative.
Monohibridarea i legea segrgrii genelor.

Obiectivele temei:
identificarea caracterelor calitative i nsuirea cunotiinelor privind controlul genetic al
acestora;
explicarea metodei de studiu privind ereditatea caracterelor calitative hibridarea;
trecerea n revista a legilor ereditii caracterelor calitative n cazul monohibridrii, a
mecanismelor citologice;
explicarea test-cross-ului i back-cross-ului.

Timp alocat temei: 3 ore


Bibliografie recomandat:
1. Casian, H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech.
2. Brooker, R. J., 2000, Genetica. Analisi e principi, Zanichelli.
3. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. I, Ed. Bioterra, Bucureti.

3.1. Gregor Mendel unul dintre fondatorii geneticii i caracterele calitative


Primele experinee de hibridare la diferite specii de plante au fost ncepute de Mendel n anul
1857, n grdina mnstirii din Brunn (astzi Brno din Slovacia).
Astfel, el a efectuat ncrucuri la numeroase specii de plante ca:
Pisum, Phaseolus, Zea, Anthirhinum, Melandrium, Ipomoea,
Verbascum, Hieracium, etc., prefernd n mod deosebit mazrea care
ofer o serie de avantaje.n 1865 prezint rezultatele experimentale i
concluziile la care a ajuns, la dou conferine ale Societii de Istorie
Natural din Brunn. Comunicrile au fost publicate ntr-o lucrare de
48 pagini n anul 1866 n analele societii, sub titlul: Versuche uber

17
Pflanzenhybriden (Cercetrile privind hibridarea plantelor).
Gregor Mendel 1822-1886
Rezultatele cercetrilor lui G. Mendel publicate, nu au produs senzaie n lumea biologilor de
atunci, care pe de o parte nu au putut sesiza esena i importana descoperirilor, iar pe de alt parte
Mendel era considerat un cercettor amator. Astfel, concluziile lui Mendel au rmas nerecunoscute
pana n anul 1900, cnd au fost descoperite i ridicate la rangul de legi ale ereditii, moment care
marcheaz apariia geneticii ca tiin.
n concepia geneticii clasice caracterele mendeliene (calitative) sunt acelea care prezint
fenotipuri distincte (contrastante) i sunt controlate de gene majore (mendeliene) dup regula o
gen un caracter (condiionare monogenic). Unele gene majore au efecte pleiotropice, adic o
gen controleaz simultan mai multe caractere calitative, ceea ce reprezint, evident, o abatere de la
regula general amintit mai sus.
n F1 toate plantele hibride sunt uniforme, avnd acelai fenotip. n F2, caracterele calitative
segreg n clase discontinue, cu fenotipuri distincte i usor detectabile, datorate ambelor alele. Marea
majoritate a caracterelor calitative au heritabilitatea mare, fiind puin influenate de mediu. Aceasta
confer seleciei posibiliti mari n detectarea indivizilor cu caractere dorite.
Pentru studiul ereditii i variabilitii se folosete pe scar larg metoda hibridologic.
Aceast metod a permis lui Gregor Mendel s formuleze principalele legi ale ereditii i s pun
bazele geneticii, ca tiin biologic.
n cercetrile sale, Mendel a folosit cu precdere mazrea, plant anual care ofer
numeroase avantaje pentru studiul ereditii si variabilitii caracterelor calitative:
are flori hermafrodite cu polenizare strict autogam (cleistogam), mazrea s-a dovedit un
obiect potrivit pentru analizele genetice, folosind la ncruciare forme pure din punct de vedere
genetic;
este o plant anual i se pot urmri relativ repede descendenele n generaii succesive;
structura morfo anatomic a florii permite realizarea cu destul uurin a hibridri sexuate;
mazrea are numeroase soiuri (varieti care se deosebesc prin unul sau mai multe caractere
contrastante).
Mendel a folosit pentru ncruciare 22 de soiuri pure, la care a luat n considerare 7 caractere
alelomorfe (forma bobului, culoarea bobului, forma pstii uscate, culoarea pstii necoapte,
culoarea cotiledoanelor, poziia florilor pe plant i lungimea tulpinii).
Considerm c este util s definim, civa termeni de baz, folosii frecvent n
explorarea acestor fenomene.
18
Hibridarea reprezint metoda care permite obinerea de plante hibride (hibrizi). Ea
const n principal, n dou operaii: castrarea formei mam i polenizarea cu polen de la forma
tat.

Hibridul reperezint un organism rezultat prin hibridarea (ncruciarea) a doi sau mai
muli genitori (prini) diferii prin unul sau mai multe caractere. Hibridul ntrunete caractere de
la prinii folosii la ncruciare. Printele mam se noteaz cu , iar printele tat cu . Prinii se
noteaz cu P1 i, respectiv P2, iar generaiile hibride (filiaiile) cu F0, F1, F2,......, Fn.

ncruciarea unor forme parentale care se deosebesc printr-o singur pereche de


caractere se numete monohibridare, iar ncruciarea unor indivizi care se deosebesc prin dou
sau mai multe perechi de caractere se numete dihibridare i, respectiv, polihibridare

Schematic, realizarea unei hibridri sexuale se prezint astfel:

Anul I (F0) P1 x P2

n care
P1 i P2 = prinii (genitorii)

F0 = generaia n care se face

Anul II F1 hibridarea

F1 x F1

F1 = prima generaie hibrid


F2 = a doua generaie hibrid

Anul III F2

Caracterelor studiate la soiurile de mazre, de ctre G.Mendel, au dou forme distincte de


manifestare, opuse sau contrastante. Aceste forme de manifestare alternativ ale aceluiai caracter
au fost denumite ulterior alele. Unele caractere prezint mai mult de dou forme alternative de
manifestare, reprezentnd fenomenul de alelism multiplu. La organismele diploide exist pentru
fiecare caracter (factor ereditar) dou alele, care pot fi de acelai fel i indivizii sunt puri
(homozigoi) sau pot fi diferite i indivizii sunt impuri (heterozigoi). n acest caz, la indivizii
impuri (heterozigoi) ntre cele dou alele pot apare diferite relaii.

19
3.2. Monohibridarea i legea segregrii genelor
Monohibridarea este definit ca fiind ncruciarea ntre genitori ce se deosebesc printr-un
singur caracter. n experienele efectuate la mazre, G. Mendel a observat c pentru structurile
genetice heterozigote, fenotipul este rezultatul interaciunii dintre cele dou alele diferite, i a
enunat relaia de tip Pisum sau relaia de dominan i recesivitate.

3.2.1. Relaia de dominan i recesivitate (dominana total)


Cnd fenotipul unui heterozigot se datoreaz numai uneia dintre alele nseamn c ntre cele
dou alele exist o relaie de dominan recesivitate (dominan total sau complet). n acest
caz hibridul F1 (Aa) are acelai fenotip cu printele homozigot dominant (AA) sau altfel spus, Aa
= AA (din punct de vedere fenotipic).
Exemplu: ncrund dou soiuri pure de mazre, unul cu boabe galbene i cellalt cu
boabe verzi, Mendel a obinut n F1 numai plante cu boabe galbene. Acest caracter l-a denumit
dominant, n timp ce caracterul pereche care nu s-a manifestat l-a denumit recesiv.
Mendel a constat uniformitatea plantelor hibride n F1.
Prin autofecundarea plantelor din F1 a obinut n generaia a doua ( F2), att plante cu boabe
galbene, ct i plante cu boabe verzi, n proporie de 3:1. Acest fenomen constatat n F2 a fost
denumit de Mendel segregare sau disjuncia caracterelor (genelor).
Mendel a explicat segregarea prin prezena sub forma de pereche a fiecrui factor ereditar
(gen) n celulele parentale i separarea acestora n timpul meiozei, cnd fiecare gamet primete
numai un singur factor ereditar (alel) din perechea respectiv, ntrucat prinii sunt puri, fiecare
printe va produce un singur tip de gamei. Gameii se unesc n timpul fecundrii i rezult plante
hibride (F1) n care factorii ereditari (alelele) se alatur din nou n perechi. Cnd plantele hibride
din F1 formeaz la randul lor gamei, factorii ereditari se separ din nou, rezultnd de data aceasta
dou tipuri de gamei. Prin unirea la ntamplare a gameilor rezultai, se obine generaia a doua de
indivizi (F2) cu patru combinaii de factori, la care se constat segregarea factorilor ereditari n
dou grupe fenotipice (3:1) i trei grupe genotipice (1:2:1).
Indivizii care posed un singur tip de factori ereditari (alele) sunt puri din punct de vedere
genetic i se numesc homozigoi (AA = homozigote dominante i aa = homozigote recesive).
Plantele hibride din F1 posed ambii factori ereditari (alele) i se numesc impure sau heterozigote
(Aa). La plantele heterozigote se manifest numai caracterul dominant (A), n timp ce caracterul
pereche recesiv (a) rmane n stare ascuns.
Notarea alelelor dominanate se poate face cu majuscul (A) sau cu liter mic i indice + (a+).
Alelele recesive se noteaz de regul cu liter mic (a).
20
Prezentm schema monohibridrii din exemplul anterior privind ncruciarea dintre mazrea
cu boabe galbene i cea cu boabe verzi, ntre care exist relaie de dominan i recesivitate,
cunoscut sub denumirea de monohibridarea de tip Pisum sau cu dominan total. La toate
monohibridrile efectuate la mazre indiferent de caracterele luate n considerare, G Mendel a
constatat raporturi de segregare fenotipic foarte apropiate de 3:1.
Fig.1. Schema unei monohibridri cu dominan total

Boabe galbene Boabe verzi

P AA aa

G A x a

F1 Aa boabe galbene

F2 P Aa Aa

G A a x A a

F2 AA Aa Aa aa

25% 50% 25%

75% plante cu boabe galbene 25% plante cu boabe verzi


n cazul unor experiene similare la animale, psri, etc., n F1 au aprut indivizi uniformi,
iar n F2 o segregare fenotipic n raportul de 3:1. Astfel, L. Cuenot a ncruciat oareci cenuii cu
oareci albi, rezultnd n F1 numai oareci cenuii. Prin ncruciarea oarecilor cenuii din F1, au
rezultat n F2 75% oareci cenuii i 25% oareci albi.
Pe baza analizei generaiei F1 i, respectiv F2, n cazul monohibridarii, Mendel a emis
1.Legea segregrii sau disjunciei genelor n generaia a doua (F2)
21
Prin analiza generaiei F2 la dihibridare i polihibridare, Mendel a emis a doua concluzie,
care ulterior a devenit a doua lege a ereditaii, pe care o enunm anticipat pentru a sesiza esena
mendelismului:
2. Legea combinrii libere a genelor sau a segregrii independente a caracterelor
(apariie la di- i polihibridare a unor combinaii noi de gene la descendenii din F2).
Din schema prezentat rezult n F2 dou raporturi de segregare, i anume:
raportul fenotipic de 3:1:
raportul genotipic de 1 AA : 2 Aa : 1 aa.
Prin autofecundarea generaiei a doua (F2) se obine generaia F3, la care se observ c din
plantele pure cu boabe galbene (AA) rezult numai plante cu boabe galbene, din cele pure cu boabe
verzi se obin numai plante cu boabe verzi i din plante impure cu boabe galbene (Aa) se obin atat
plante cu boabe galbene cat i plante cu boabe verzi n proporie de 3:1.

3.2.2. Testcross-ul
Raportul de segregare fenotipic de 3:1, difer de raportul de segregare genotipic de 1:2:1,
rezult c cele dou genotipuri diferite (AA, Aa) determin acelai fenotip, respectiv culoarea
galben a boabelor. Pentru a putea preciza genotipul unor monohibrizi ce prezint acelai fenotip se
folosete testcross-ul, o ncruciare analizatoare cu un tester
Printele folosit ca tester este ntotdeauna homozigot recesiv pentru toate genele studiate.
Homozigotul produce ntotdeauna un singur tip de gamei, iar un heterozigot monohibrid produce
dou tipuri de gamei cu aceeai frecven. Determinarea structurii genetice a unui monohibrid se
face prin analiza descendenei din F1 (raportul de segregare), care permite s se determine indirect
numrul de gamei al individului testat i respectiv, genotipul acestuia.
Exemplu: a) O plant de mazre cu boabe galbene se ncrucieaz cu o plant cu boabe verzi
(caracter recesiv) i d natere n F1 la plante cu boabe galbene:

n F1 apare numai un singur fenotip- nseamn c individul testat produce numai un fel de
gamei (A) i este obligatoriu homozigot dominant pentru caracterul analizat (AA).
22
b) Considerm cazul cand o plant cu boabe galbene se testeaz cu o plant cu boabe
verzi i rezult plante cu boabe galbene i plante cu boabe verzi n proporie de 1:1 sau 50%:50%.

Individul (planta) testat este heterozigot (Aa) - n F1 au rezultat dou fenotipuri, indicnd
faptul c el a produs dou tipuri de gamei, respectiv A i a.

3.2.3.Backross

ncruciarea unui individ F1 cu unul din prini se numete backross. Uneori n literatura de
genetic, backrossul este utilizat n acelai sens ca testcross- ul. Referindu-ne la exemplul de mai sus
(folosit la testcross), prezentm ncruciarea backross n felul urmtor:

23
Backross-ul spre deosebire de testcross, nu oblig la folosirea printelui recesiv ca
tester. Aa cum se vede n exemplul folosit mai sus, testerul este printele homozigot dominant.

3.2.4. Mecanismul citologic al segregrii genelor


Gregor Mendel a precizat c factorii ereditari sunt particule materiale independente care
n celulele mam (parentale) se gsesc sub form de pereche, iar n gamei cte un singur factor
ereditar din perechea iniial, dup repartizarea acestora la cei doi poli n timpul meiozei.
Segregarea factorilor se realizeaz odata cu formarea gameilor, iar combinarea lor n timpul
fecundrii prin ntalnirea la ntamplare a acestora.
Deoarece factorii ereditari (genele) sunt dispui n cromozomi, cauzele segregrii au fost
asociate cu separarea i repartizarea cromozomilor n diferite combinaii, din celulele mam (2n)
n gamei (n) n timpul diviziunii meiotice. Prin fecundarea gameilor (n) se reface numrul
diploid de cromozomi (2n) i respectiv, perechile de cromozomi, dar n combinaii diferite datorit
asocierii ntampltoare a cromozomilor cu ocazia migrrii lor n gameti .
n 1902, W. Sutton a afirmat c n fiecare cromozom este localizat un anumit numr de
factori ereditari (gene) i c fiecare factor (gena) dintr-un cromozom este independent fa de
factorii ereditari localizai n ceilali cromozomi.

24
Fig 3.2.4.

n cazul n care cei doi prini prezint aceeai alel pe cromozom, n perechea de cromozomi
rezultat dup fecundare, alelele identice vor fi n doza dubla, iar organismul respectiv este
homozigot (dominant AA sau recesiv aa), iar cnd prinii au alele diferite la acelai
cromozom, organismul este heterozigot (Aa). n timpul meiozei (n procesul de formare al
gameilor) organismul heterozigot va produce gamei diferii ntre ei, deoarece ntr-un gamet (la
unul din polii celulei) va trece un cromozom cu alela dominant, iar n cellalt gamet (la cellalt
pol al celulei) va trece cellalt cromozom din pereche cu alela recesiv, devenind astfel
independeni att cromozomii ct i genele localizate pe ei. La o nou fecundare fiecare cromozom
(respectiv alel) din gametul femel se va ntlni fie cu un cromozom cu alel de acelai fel, fie cu
un cromozom cu alt alel din gametul mascul. n felul acesta vor apare indivizi diferii genetic n
combinaii noi de gene, care indic efectul segregrii n procesul de formare al gameilor urmat de
fecundare. Modul cum se realizeaz segregarea cromozomilor i respectiv a genelor (factorilor)
este prezentat n figura 3.2.4.
25
TEST DE EVALUARE

Ce este hibridarea?

Rspuns:

Reprezint ncruciarea ntre doi genitori ce se deosebesc prin unul sau mai multe caractere,
n scopul obinerii de hibrizi ce ntrunesc caracterele prinilor. Presupune dou operaiuni:
castrarea formei mam i polenizarea formei mam cu polen de la forma tat.

1. Ce reprezint relaia de dominan i recesivitate?

2. Prin ce se caracterizeaz caracterele calitative?

Exerciii

Exemplu rezolvat:

Formele alternative ale unei gene poart numele de:

a) Alele

b) Nealele

c) Alelism

Rezolvare: a

De rezolvat:

1. Structura homozigot presupune existena a:

a) Dou alele de acelai fel

b) Dou alele diferite

c) Trei alele de acelai fel

2. n cazul relaiei de dominan total, heterozigotul prezint:

a) Un fenotip intermediar fa de genitori

b) Un fenotip nou fa de genitori

c) Fenotipul unuia dintre genitori

3. Care este raportul fenotipic de segregare n F2 la relaia de tip Pisum?


26
a) 3:1
b) 2:2
c) 1:2:1

Rezumatul temei
Caracterele calitative se deosebesc prin cteva trsturi definitorii. Ele au un determinism genetic
monogenic, exepie fac genele cu efecte pleiotrope; prezint fenotipuri distincte, contrastante;
segreg n generaia F2 n clase fenotipice uor de identificat datorit fenotipurilor distincte i nu
sunt (sau foarte puin) influenate de factorii de mediu.
Primele studii privind ereditatea caracterelor calitative au fost efectuate de ctre
G.Mendel la mazre care prezint o serie de avantaje ( plant cleistogam, anual, numr mic de
cromozomi, etc).
n urma studiilor efectuate folosind monohibridarea i polihibridarea la mazre,
G.Mendel a emis concluzii care ulterior au devenit legi ale ereditii.
Prima lege privind segregarea independent a genelor a fost descoperit la
monohibridare.
Monohibridarea reprezint ncruciarea ntre genitori cese deosebesc printr-un singur
caracter. Hibridarea presupune dou operaiuni: castrarea formei mam i polenizarea acesteia cu
polen de la forma tat. n experienele efectuate la mazre, G.Mendel a reuit s explice rezultatele
obinute pe baza relaiei de dominan total dintre alele. Astfel, n generaia F1, heterozigotul
prezint fenotipul unuia dintre genitori, respectiv dominant, iar n F2 la monohibridare apare un
raport fenotipic de dominant : recesiv.
Structurile genetice homozigote presupun prezena a dou alele de acelai fel, iar
structurile genetice heterozigote presupun existena a dou alele diferite pentru aceeai gen.

27
Tema nr. 4
POLIHIBRIDAREA I LEGEA SEGREGRII INDEPENDENTE A PERECHILOR DE
CARACTERE
Uniti de nvare:
Dihibridarea de tip Pisum;
Testcross-ul la dihibridarea
Trihibridarea de tip Pisum
Verificarea raporturilor de segregare (Testul 2)

Obiectivele temei:
prezentarea i fixarea mecanismelor privind erediatatea n cazul dihibridrii i trihibridrii
explicarea testcross-ului n cazul dihibridrii
deprinderea mecanismelor de emitere a ipotezelor de segregare i verificarea matematic a
acestora.

Timp alocat temei: 3 ore


Bibliografie recomandat:
1. Casian, H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech.
2. Brooker, R. J., 2000, Genetica. Analisi e principi, Zanichelli.
3. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. I, Ed. Bioterra, Bucureti.

4.1. Dihibridarea de tip Pisum


Prin polihibridare se nelege ncruciarea ntre genitori ce se deosebesc prin dou sau mai
multe perechi de caractere. Pentru a nelege modul de transmitere a caracterelor n diferite
generaii, vom exemplifica dihibridarea de tip Pisum i trihibridarea de tip Pisum, putnd astfel
extrapola apoi acest mod de transmitere la nivelul altor tipuri de hibridare ( tetrahibridare,etc) i cu
alte relaii ntre alele.
Aa cum am precizat mai sus, genitorii se deosebesc prin dou perechi de caractere, iar n
cadrul fiecrui caracter avem o relaie de dominan total ( de tip Pisum).
Facem precizarea c este vorba de gene independente, situate pe autozomi diferii (n nici un
caz dou gene situate pe acelai cromozom).
28
Exemplu: ntru-una din experienele sale la mazre, Mendel a ncruciat dou soiuri
pure care se deosebesc prin 2 perechi de caractere, i anume:
1. Culoarea bobului: AA - bob galben
aa - bob verde
2. Forma bobului: BB - bob rotund
bb - bob zbrcit

Unul din soiuri avea boabe galbene i rotunde- pur din punct de vedere genetic (AABB) i
cellalt avea boabe verzi i zbrcite- pur din punct de vedere genetic (aabb). n F1 au rezultat
plante dihibride cu boabe galbene i rotunde dublu heterozigote (AaBb).
Prin autofecundarea plantelor din F1 a rezultat n generaia a doua (F2) patru grupe (clase)
fenotipice n proporie de 9:3:3:1, adic:

9/16 A . B . galbene rotunde (P1 primul printe)


3/16 A . bb galbene zbrcite Combinii noi de gene

3/16 aa B . verzi rotunde (recombinari intercromozomiale)


1/16 aa bb verzi zbrcite (P2 al doilea printe)

Raportul genotipic a fost n proporie de 4 AaBb : 2 AABb : 2 AaBB : 2 aaBb :2 Aabb : 1


AABB : 1 aaBB : 1Aabb: 1 aabb (4:2:2:2:2:1:1:1:1).
Se explic aceast segregare prin faptul ca plantele dihibride din F1 formeaz 4 tipuri de
gamei, n care se afl cte un singur factor ereditar (respectiv cromozom) din fiecare pereche. n
urma fecundarii celor 4 tipuri de gamei rezult 16 combinaii posibile de gene (genotipuri), care
au fost grupate in 4 clase fenotipice n proporia amintit de 9:3:3:1 si 9 genotipuri n proporie de
4:2:2:2:2:1:1:1:1. Dintre toate fenotipurile identificate in F2, Mendel a constatat c n afar de cele
dou fenotipuri parentale cu boabe galbene si netede (A . B . ce reprezint P 1) i boabe verzi i
zbrcite (aabb, ce reprezint P2) au mai aprut n urma combinrii libere i ntmpltoare a
gameilor, respectiv a factorilor ereditari (genelor) dou fenotipuri noi, care prezint un caracter de
la un printe si altul de la cellalt printe, respectiv plante cu boabe galbene i zbrcite (A . bb) i
cu boabe verzi i netede (aa B .).
Din cauza apariiei la dihibridare, vom vedea i la polihibridare, a unor combinaii noi de
caractere (gene) datorit independenei i puritaii gameilor, respectiv a genelor situate pe
cromozomi separai, Gregor Mendel a formulat a doua lege: Legea combinrii libere a genelor
29
(caracterelor) sau segregarea independent a genelor, lege pe care am enunat-o i la
monohibridare pentru a fi grupate la un loc toate concluziile i, respectiv legile mendeliene.
Experienele de dihibridare la mazre presupun relaia de dominan-recesivitate la ambii
loci. Ulterior, ntr-o serie de experimente la plante i animale au fost evideniate i celelalte relaii
alelice (semidominana, codominana, letalitatea, etc.) care au afectat fie un locus, fie ambii loci,
determinnd modificri profunde ale raportului fenotipic de segregare. Astfel, raportul fenotipic de
segregare tipic dihibridrii de tip Pisum cu dominana complet la ambii loci, se poate modifica n
cazul unor relaii alelice de semidominan, letalitate etc., la unul sau ambii loci:
Relaii interalelice Raport fenotipic de segregare
Locus 1 Locus 2
dominant-recesiv semidominant 3:6:3:1:2:1
semidominant semidominant 4:2:2:2:2:1:1:1:1
dominant-recesiv recesiv letal 3:1:6:2
semidominant recesiv letal 1:2:1:2:4:2
recesiv letal recesiv letal 4:2:2:1

Metode pentru analiza dihibrizilor


Pentru analiza ncrucirilor difactoriale se folosesc, in general, urmtoarele metode:
A) Metoda tabelei de combinaii (ahul de combinaii, dup R.C. Punnett)

Gameii maculi
Gameii femeli AB Ab aB ab
AB AABB AABb AaBB AaBb
galben-rotund galben-rotund galben-rotund galben-rotund
Ab AABb Aabb AaBb Aabb
galben-rotund galben-zbrcit galben-rotund galben-zbrcit
Gamei aB AaBB AaBb aaBB aaBb
i galben-rotund galben-rotund verde-rotund verde-rotund
fem ab AaBb Aabb aaBb aabb
eli galben-rotund galben-zbrcit verde-rotund verde-zbrcit

3/16 galben i zbrcit


3/16 verde i rotund
Raport fenotipic de segregare: 1/16 verde i zbrcit
9/16 galben i rotund

30
2/16 AaBB
2/16 aaBb
2/16 Aabb
1/16 AABB
1/16 AAbb
Raport genotipic de segregare: 1/16 aaBB
4/16 AaBb 1/16 aabb
2/16 AABb
Deoarece n metafaza I a meiozei fiecare pereche de cromozomi se separ independent i
apoi, migreaz la poli (respectiv n gamei) n toate combinaiile posibile, la ntmplare i cu
aceeai probabilitate , rezult 4 tipuri de gamei femeli i masculi, care n procesul de fecundare
vor forma 16 combinaii genotipice:
B) Metoda ramificaiilor
Aceast metod este utilizat pentru determinarea tuturor combinaiilor genotipice i
fenotipice posibile, fiind o metod rapid i simplificat.
a) proporia genotipurilor

b) proporia fenotipurilor

31
4.2 Testcross-ul la dihibridarea
Testarea dihibrizilor cu dominan complet (toatal). Pentru determinarea genotipurilor
dihibrizilor cu acelai fenotip, dar genotipuri diferite, se procedeaz la ncruciarea fiecrui
dihibrid cu printele dublu recesiv folosit ca tester.
a) Dac n F1 rezult un raport fenotipic de 1:1:1:1 :dihibridul testat este heterozigot pentru
ambele perechi de carctere, producnd 4 tipuri de gameti:

galben rotund verde zrcit (printele recesiv folosit ca tester)

b) Dac n F1 rezult un raport de segregare fenotipic de 1:1: dihibridul este heterozigot


pentru o singur pereche de caractere, producnd 2 tipuri de gamei:
galben rotund verde zbrcit
P AaBB aabb
G AB AaBb - 1/2
aB x ab aaBb
32
Raportul fenotipic de segregare indic faptul c a segregat culoarea bobului i deci, acest caracter
este heterozigot (Aa), n timp ce caracterul forma bobului este homozigot (BB).

galben rotund verde zbrcit (tester)

P AABb aabb

G AB AaBb 1/2
Ab x ab Aabb

Cel de al doilea caracter, forma bobului, este heterozigot(Bb), iar primul este homozigot
(AA).

4.3.Trihibridarea de tip Pisum

33
Trihibridarea reprezint ncruciarea ntre doi genitori care se deosebesc prin trei perechi de
caractere.
Metodele prezentate la dihibridare se pot generaliza i n cazul ncrucirilor cu trei sau mai
multe perechi de alele localizate pe autozomi diferii.
Dac n reprezint numrul perechilor de alele heterozigote se pot determina proporiile
fenotipice n funcie de principalele relaii alelice (vom vedea n tema urmtoare i alte tipuri de
relaii).
La o trihibridare de tipul AABBCC x aabbcc, se pot folosi aceleai metode de analiz a
descendenilor, metoda ahului de combinaii devine ns complicat i greoaie, fapt pentru care
recomandm metoda ramificaiilor. Adugm al treilea caracter: talia plantelor.
A) metoda ahului de combinaii :schema unei trihibridri se prezint astfel:

P AABBCC x aabbcc
F1 AaBbCc
F2 P AaBbCc AaBbCc

Dup proportiile indicate n tabelul de mai sus, rezult c:


Nr. gamei = 2n =23 =8
Nr. fenotipuri = 2n =23 =8
Nr. genotipuri = 3n =33 = 27
Nr.combinaii = 4n =43 = 64
34
Dac se completeaz ahul de combinaii i se face gruparea combinaiilor pe clase
fenotipice, rezult urmtorul raport de segregare fenotipic:
27/64 cu trei carctere dominante (ABC) printele 1
9/64 cu dou caractere dominante i unul recesiv (Abc)
9/64 cu dou caractere dominante i unul recesiv (AbC) combinaii noi de gene
9/64 cu dou caractere dominante i unul recesiv (aBC)
3/64 cu un caracter dominant i dou recesive (Abc)
3/64 cu un caracter dominant i dou recesive (abC)
3/64 cu un caracter dominant i dou recesive (aBc)
1/64 cu trei caractere recesive (abc) printele 2
Raportul genotipic de segregare este i mai greu de realizat dup acast metod.
B) metoda ramificaiilor: proporia fenotipurilor i genotipurilor este mult mai uor de
realizat:
boabe galbene, netede, talie nalt boabe verzi, zbrcite, talie mic

35
Combinaiifenotipice:

Combinaii genotipice:

36
Raportul genotipic este urmtorul: 8:4:4:4:4:4:4:2:2:2:2:2:2:2:2:2:2:2:2:1:1:1:1:1:1:1:1 = 64

La trihibridare combinaiile noi de gene care rezult sunt n proporie mult mai ridicat fa
de dihibridare. Posibilitile de combinare sunt mai mari, datorit numrului de gene independente
implicate. Astfel, dac la dihibridare proporia combinaiilor noi este de 6/16 (30,7 %), la
trihibridare este de 36/64 (56,8 %). Cu ct doi genitori se deosebesc prin mai multe perechi de
37
caractere, cu att combinaiile noi sunt mai numeroase n defavoarea formelor parentale si
variabilitatea organismelor crete.
4.4. Verificarea raporturilor de segregare (Testul 2)
Pentru verificarea unei ipoteze de segregare, trebuie gsit o metod de calcul care permite
estimarea probabilitii (P), a estimrii abaterilor (diferenelor) ntre valorile observate i cele
ateptate.
Aceast metoda trebuie s in cont de numrul de indivizi (descendeni) analizai i de
gradul de libertate (GL).
GL = n-1 n care n= numrul de clase fenotipice
Testul 2 este metoda de calcul care permite evaluarea unei asemenea probabiliti.
La compararea rezultatelor obinute cu cele ateptate (teoretice) n cadrul unei anumite
ipoteze de segregare, se admite n primul rnd c ipoteza considerat este just i c diferena ntre
rezultatele obinute i cele ateptate se datoreaz numai faptului c numrul de descendeni (indivizi)
analizai este limitat.
Testul 2 se calculeaz dup formula urmtoare:
2 = (d2/t) n care: d = diferena dintre valorile experimentale
i cele teoretice; t = valorile teoretice
n funcie de valoarea lui 2 calculat i gradele de libertate se determin probabilitatea P,
folosind datele din tabelul de date (dup R. A. Fisher i F. Yates)
Tabelul 1
Distribuia 2 (dup Fisher i Yates)
GL Probabilitatea
0,95 0,90 0,80 0,70 0,50 0,30 0,20 0,10 0,05 0,01 0,001
1 0,004 0,02 0,06 0,15 0,46 1,07 1,64 2,71 3,84 6,64 10,83
2 0,10 0,21 0,45 0,71 1,39 2,41 3,22 4,60 5,99 9,21 13,82
3 0,35 0,58 1,01 1,42 2,37 3,66 4,64 6,25 7,82 11,34 16,27
4 0,71 1,06 1,65 2,20 3,36 4,88 5,99 7,78 9,49 13,28 18,47
5 1,14 1,61 2,34 3,00 4,35 6,06 7,29 9,24 11,07 15,09 20,52
6 1,63 2,20 3,07 3,83 5,35 7,23 8,56 10,64 12,59 16,81 22,46
7 2,17 2,83 3,82 4,67 6,35 8,38 9,80 12,02 14,07 18,48 24,32
8 2,73 3,49 4,59 5,53 7,34 9,52 11,03 13,36 15,51 20,09 26,12
9 3,32 4,17 5,38 6,39 8,34 10,66 12,24 14,68 16,92 21,67 27,88
10 3,94 4,86 6,18 7,27 9,34 11,78 13,44 15,99 18,31 23,21 29,59
Nesemnificativ Semnificativ

38
Probabilitatea poate fi experimentat n procente sau n fraciuni de unitate. Dac aceast
probabilitate este prea mic inseamn c raporturile de segregare experimentale nu pot fi luate in
considerare pentru demonstarea unei anumite ipoteze. Se elimin o ipotez cnd P< 5% . n acest
caz, se consider c valorile experimentale se abat semnificativ fa de valorile ateptate (teoretice)
n cadrul ipotezei stabilite.
Abaterile mari dintre valorile experimentale i cele teoretice, n cadrul unei anumite ipoteze,
se pot datora urmtoarelor cauze:
- ipoteza privind raportul de segregare nu este just, caz n care se lanseaz o alt ipotez care s
poat fi luat in considerare;
- valorile experimentale au fost afectate de o serie de erori (determinri greite, impurificri
mecanice sau biologice a descendenei analizate, etc.);
- numrul de indivizi cercetai a fost prea mic.
Testul 2 se folosete in cazul variabilelor continui (caracterelor cantitative) cu o distribuie
normal, iar pentru caracterele calitative unde numrul claselor fenotipice este de obicei restrns,
n unele cazuri trebuie s se introduc o corecie pentru a ine cont de absena continuitii.
Aceast corecie implic o uoar diminuare a valorii lui 2 , care poate avea importan mare n
vecintatea valorii critice corespunztoare lui P5%. Aceast corecie este obligatorie cnd anumite
clase fenotipice cuprind ntre 5 10 indivizi. Testul 2 corectat se calculeaz dup formula:
2corectat = [(d 0,5)2 /t]
Exemplu:
La ncruciarea unui soi de mazre cu boabe galbene cu un soi cu boabe verzi rezult n F1
numai plante cu boabe galbene. n F2 din cele 400 plante s-au gsit 90 plante ale cror boabe sunt
verzi. Presupunem c acest caracter este guvernat de o singur gen i boabe galbene (Y. ) este
dominant fa de boabe verzi (yy).
Rezolvare:

P: YY(galbene) x yy(verzi)

F1: Yy(galbene)

F2: Raport teoretic: 3/4Y. (galbene)


1/4 yy (verzi)

39
Fiind vorba de numai dou clase fenotipice se calculeaz obligatoriu 2 corectat:
Clase Valori Valori (e t) 0,5 [(e t) 0,5]2/ t
fenotipice exper. (e) teoretice (t)
Boabe galbene 310 3/4 x 400 = 300 9,5 0,300
Boabe verzi 90 1/4 x 400 = 100 9,5 0,902
Total 400 400 2 = 1,102

GL = 2 1 = 1

Testul 2 nu are valoare semnificativ, ntruct P > 20% i deci, ipoteza privind raportul de
segregare este just.

TEST DE EVALUARE
Rspuns:
Enunai cea de adoua lege a lui G.Mendel:
Cea de a doua lege se refer la combinarea liber a genelor (caracterelor) sau segregarea
independent a perechilor de gene. Ca urmare in F2 apar combinaii (fenotipuri) noi- valabil la
polihibridare.

1. Care este raportul fenotip n F2 la o trihibridare de tip Pisum?

Exerciii
Exemplu rezolvat:
Cnd se respinge o ipotez de segregare?
a) P=4%
b) P<5%
c) P>5%
Rezolvare: b
1. Cte tipuri de gamei va forma un individ cu structura genetic AABbCcDd?
a) 8;
b) 10;
c) 6.

40
Rezumatul temei

La polihibridare este descoperit cea de a doua lege a ereditii: segregarea independent a


perechilor de caractere i combinarea liber a acestora. Ca urmare n generaia F2 pe lng
fenotipurile de tip parental, vor apare i fenotipuri noi n proporii diferite n funcie de numrul de
caractere luat n considerare.

Sunt prezentate pentru dihibridare i trihibridare metodele ahului de combinaii i metoda


ramificaiilor pentru determinarea raporturilor fenotipice i genotipice n generaia F2. La
dihibridarea de tip Pisum n F2 apare un raport fenotipic de 9:3:3:1. n cazul unei trihibridri raportul
devine 27:9:9:9:3:3:3:1.

n cazul analizei unei populaii se emite o ipotez de segregare privind ereditate


caracterelor.Aceasta se verific cu ajutorul testului 2. . El permite estimarea diferenelor dintre
valorile experimentale i cele teoretice. Confirmarea ipotezei se face n funcie de valoarea
probabilitii P extrase din tabelul de date al lui Fisher i Yates, n funcie de valoarea lui 2 i GL.

La o valoare mai mare de 5% a probabilitii, ipoteza se confirm. O probabilitate mai mic


de 5% poate apare dac ipoteza nu este corect; valorile experimentale au fost afectate de erori;
numrul de indivizi din populaie este prea mic.

41
Tema nr. 5
INTERACIUNI GENICE

Uniti de nvare:
interaciuni ale genelor alele.
sisteme plurialele; penetran i expresivitate; gene i mediu
Interaciuni ale genelor nealele.

Obiectivele temei:
evidenierea altor interaciuni ale genelor alele i fixarea mecanismelor ereditii caracterelor
sub inflena acestor interaciuni;
prezentarea sistemelor de alele multiple i interactiunile dintre acestea, precum i
comportarea genelor n anumite condiii de mediu;
prezentarea i fixarea diferitelor relaii ce apar ntre gene nealele i efectele pe care le au
asupra transmiterii caractelor n diferitele generaii.

Timp alocat temei: 3 ore


Bibliografie recomandat:
1. Casian, H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech.
2. Corneanu Mihaela, Corneanu,G., 2005, Genetica general i evoluia genomului,
Ed.Universitaria, Craiova.
3. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. I, Ed. Bioterra, Bucureti.

5.1. Interaciuni ale genelor alele


Vom prezenta i alte interaciuni ntre genele alele dect dominana total cea pe care am
prezentat-o n tema anterioar. Aceste relaii au fost puse n eviden la diferite specii i duc la
modificarea raportului fenotip din F2 fa de cel cunoscut la dominan total. Pentru exemplificare
vom utiliza monohibridarea.

5.1.1. Semidominana (dominana incomplet)


Este o relaie alelic interalelic n care heterozigotul din F1 (Aa) are un fenotip
intermediar ntre cei doi prini heterozigoi. Fiecare alel este responsabil de un anumit grad de
42
expresie fenotipic fa de cealalt alel. Este important de reinut faptul c dei formele
heterozigote par s fie un amestec de fenotipuri ale prinilor homozigoi, fiecare alel pstreaz
identitatea sa i segreg normal n meioz.
Simbolizarea n cazul semidominanei se face printr-o liter care ndic gena
considerat i cu cte un indice pentru fiecare alel, pentru a arta c niciuna dintre alele nu este
dominant.
Acest tip de monohibridare este cunoscut i sub denumirea de Zea, dat fiind descoperirea
sa pentru prima dat la porumb.
Exemplu: la ncruciarea unei varieti de porumb cu boabe albastre (CA CA) cu o
varietate cu boabe galbene (CG CG) au rezultat n F1 plante hibride cu boabe violet (CA CG). n F2,
s-a produs segregarea n proporie de 1/4 albastru (CA CA) : 2/4 violet (CACG) : 1/4 galben (CG
CG).
Cu alte cuvinte dintre indivizi prezint fenotipul genitorului P1; 2/4 dintre indivizi
prezint fenotipul intermediar; indivizi prezint fenotipul genitorului P2. Relaia a fost
identificat i la alte specii (Mirabilis jalapa).

5.1.2. Supradominana
Este relaia interalelic, n care un individ n stare heterozigot (Aa) determin o sporire sau
o intensificare a fenotipului fa de indivizii homozigoi de tip parental (Aa > AA > aa). Acest
fenomen este mai pregnant n cazul unor caractere cantitative ca: talia, fertilitatea, vigoarea, etc,
avnd importan n apariia heterozisului.
n acest caz, n F2, raportul fenotip va fi: fenotipul P1: 2/4 fenotipul supradominant:
fenotipul P2.

5.1.3. Codominana
Sistemului sangvin la om prezint patru grupe de snge notate cu A, B, AB i 0, controlate
genetic de locului I cu trei alele multiple, i anume: IA (alela pentru producerea aglutinogenului
A), IB (alela pentru aglutinogenul B) i I0 (alela pentru lipsa aglutinogenilor).
Alelele IA i IB sunt dominante asupra alelei I0, iar cnd se gsesc mpreun la acelai
individ sunt codominante, determinnd un fenotip nou i, respectiv grupa sangvina AB. Prezentm
n continuare fenotipurile i genotipurile posibile innd cont de relaiile existente.

43
Grupa sangvina (fenotipul) Genotipul
A IA IA sau IA I0
B IB IB sau IB I0
AB (codominanta) IA IB
0 I0 I0
Cunoaterea acestor relaii alelice este necesar pentru realizarea transfuziilor de snge
(persoanele cu grupa 0 sunt donatori universali, iar persoanele cu grupa AB sunt primitori
universali; persoanele cu grupa sangvin A primesc sange de la A i 0, persoanele cu grupa
sangvin B de la B i 0, iar 0 numai de la 0) i n stabilirea paternitii. Cunoscnd grupa sangvin
a copilului i a mamei se pot cunoate grupele sangvine ale tatlui prezumtiv.
Exemplu: Cnd copilul are grupa B i mama 0, tatl nu poate avea dect grupa B
(homozigot sau heterozigot) sau grupa AB.

5.1.4. Letalitatea
Unele alele pot provoca moartea individului n perioada prenatal sau postnatal n stadii
diferite de dezvoltare. Asemenea alele au fost denumite letale. O alel letal dominant poate
determina moartea individului n stare homozigot (LL) i, uneori chiar n stare heterozigot (Ll);
ea se elimin din populaie n momentul cand apare n constituia unui individ. O alel letal
recesiv determin moartea individului numai n stare homozigota (ll). Dup caz, indivizii
heterozigoi sunt n aparen normali sau pot manifesta unele deficiene, care ns nu le afecteaz
viabilitatea.
Putem preciza dou tipuri de letalitate:
a) Letalitatea de dominan cnd o alel dominant n stare homozigot (uneori chiar
heterozigot) provoac moartea indivizilor;

b) Letalitatea de recesivitate cnd o alel recesiv n stare homozigot provoac moartea


indivizilor.

Exemple: a) Studiul unor oareci galbeni a artat c ei sunt ntotdeauna heterozigoi,


deoarece la ncruciarea lor rezult o descenden n proporie de 2 oareci galbeni : 1 oarece de
alt culoare. Din raportul de segregare, oarecii galbeni homozigoi lipsesc, deoarece ei mor nc
din stadiul embrionar.

44
Rezult urmatoarele genotipuri i fenotipuri:
Genotipul Fenotipul Raportul de segregare
LL galbeni (letali)
2Ll galbeni(viabili) 2:1
ll alt culoare (viabili)

b) Cantitatea de clorofil la Anthirrhinum este controlat de o gen la care alela


recesiv este letal n stare homozigot. n descenden pot apare urmatoarele genotipuri i
fenotipuri:
Genotipul Fenotipul Raportul de segregare
CC verde (normale)
2Cc verde deschis (normale) 3:0
cc albe (letale)
n acest caz, rezult practic un raport de segregare de 3:0, n loc de 3:1.
Genele letale pot fi clasificate dup diferite criterii, i anume:
a. Dup celulele n care apar:
- gametice, cnd gameii cu gene letale sunt neviabili;
- zigotice, cnd zigotul cu gene letale este neviabil.
b. Dup cromozomii n care apar:
- autozomale, cnd se afl pe autozomi;
- heterozomale, cnd se afl pe cromozomii sexului.
c. Dup gradul de letalitate (penetran) al indivizilor:
- letale propriu-zise, cnd se produce moartea tuturor indivizilor:
- semiletale, cnd circa 50% din indivizi mor;
- subletale, cnd pier circa 30% din indivizi.

5.2. Sisteme plurialele


Exist n natur gene ce prezint mai mult de dou alele, este vorba de o serie de alele multiple
sau de o serie plurialelic. Un individ normal diploid nu poate avea mai mult de dou alele diferite
sau de acelai fel pentru o anumit gen sau locus (cte una pe fiecare cromozom homolog).
n cadrul unei serii de alele multiple pot exista relaii de dominan complet, semidominan
sau codominan. Cele mai frecvente sunt relaiile alelice de dominan i recesivitate.
Pentru simbolizarea alelelor multiple trebuie mai nti cunoscut ierarhia de dominan.
Exemple:
45
a) culoarea ochilor la Drosophila este guvernat de o serie de alele multiple ( 12 alele),
variind de la rou(tipul slbatic, notat cu w+ ) pana la alb (tipul mutant far pigment, notat cu w).
n cadrul seriei plurialelice, fiecare alel (cu excepia lui w) produce pigment, ns din ce n ce mai
puin pe masur ce se avanseaz ctre alela complet recesiv (w) fa de toate celelalte. Ierarhia de
dominan este urmatoarea: w+ > w co >w bl >w e >w ch >w a >w h >w bh > w t >wp >wi >w. Alela de
tip slbatic w+ este dominant fa de toate celelalte alele ale seriei, iar alela w este recesiv fa de
toate celelalte alele din serie. Genotipurile heterozigote ntre diferitele alele recesive prezint
fenotipuri intermediare.
b) Tipurile de grupe sangvine la om este un alt exemplu de alelism multiplu. Alela IA este
codominat cu alela IB, iar alela I0 este recesiv fa de acestea. Relaiile ntre aceste alele se
noteaza astfel: (IA = IB) > I0.
c) Seria de alele multiple albino la iepuri, la care blana prezint urmatoarele culori:
c+c+ = agouti tipul slbatic ,
cchcch = gri tipul Chinchilla ,
chch = alb cu extremitile de culoare neagr tipul Himalaia
cc = alb tipul albino.
La ncruciarea tipului slbatic c+c+ cu toate celelalte tipuri (cchcch, chch, cc) n F1 s-a
manifestat culoarea agouti a tipului slbatic, iar n F2 s-a obinut un raport de segregare de 3:1 n
toate cazurile. Aceasta demonstreaz c este vorba de alele ale aceluiai locus i c ntre ele exist
relaia de dominan recesivitate. Pe baza ncrucirilor ntre diferitele tipuri de alele s-a stabilit
urmatoarea ierarhie de dominan: c+c+ > cchcch >chch> cc.
d) Serii de alele multiple la plante. La numeroase specii de plante, anumite caractere sunt
controlate de serii de alele multiple. Astfel, la trifoiul alb la locusul v exist 8 alele dominante
care produc pete albe pe frunze de diferite forme i mrimi. La porumb, s-a identificat la locusul R
o serie de peste 12 alele, atat dominante, ct i recesive, care controleaz pigmentaia pericarpului
i aleuronei.

5.2.1 Penetran i expresivitate


n condiii diferite de mediu, indivizi cu alele identice pentru acelai locus ( aceeai structur
genetic) pot prezenta fenotipuri diferite. Capacitatea unei gene sau a unui grup de gene de a se
exprima fenotipic n condiii determinate de mediu se numete penetran, iar gradul de
exprimare al fenotipului se numete expresivitate.

46
Exemple:
a) Polidactilia (apariia de degete suplimentare) manifestat la om, este determinat de
prezena genei dominante P. Pentru fenotipul normal corespunde genotipul pp. Cu toate acestea,
indivizi cu genotipul Pp nu prezint polidactilie.
Pentru acest caz, spunem c penetrana genei P este
mai mic de 100%.
b) Polidactilia se poate exprima numai la mini
i nu la picioare. Este vorba de o expresivitate diferit

5.2.2. Relaiile dintre gene i mediu

Diversitatea factorilor de mediu i mai


ales intensitatea cu care acioneaz asupra organismelor n anumite etape ale dezvoltrii acestora,
pot influena n mod foarte diferit manifestarea unor gene.
Exemple:
a) plantele de Primula crescute la temperaturi de 30-37 o C i umiditate mare, produc floi albe,
iar la temperaturi sub 30 oC produc flori roii;
b) plantele mutante de porumb cu port pitic tratate cu hormoni (gibereline) se dezvolt normal i
au talie nalt;
c) iepurele de Himalaia crescut la temperaturi de peste 30 oC devine complet alb, iar la
temperaturi de 24-26 oc capat culoarea neagr la extremitatea cozii, picioarelor, urechilor i
botului.
Anumite gene au o manifestare diferit la factorii de mediu, fiind afectai numai o
parte din indivizi, dei au acelai genotip.
Alte gene sub influena unor factori de mediu manifest fenotipuri similare altor gene
(fenocopii).

5.3. Interaciuni ntre gene nealele


n cadrul acestor interaciuni vom prezenta relaiile epistatice dintre gene nealele
(dou gene diferite) i genele complementare. Se va vedea o modificare a raporturilor fenotipice
cunoscute pn n prezent. Pentru a putea prezenta aceste relaii se impune prezena a dou gene.
Aceste gene nu sunt alele i sunt independente (plasate pe cromozomi diferii).

47
5.3.1. Epistaziile
Genele care inhib aciunea altor gene (gene nealele) se numesc epistatice, iar genele inhibate
se numesc gene hipostatice. Pot fi att alele dominante, ct i recesive.
n cazul epistasiei ntre doi loci se obin n F2 raporturi fenotipice diferite de cele de la o
dihibridare. Putem spune c exist trei tipuri de epistazii.

5.3.1.1. Epistazia de dominan


Cnd alela dominant a unui locus, de exemplu alela A (responsabil de un anumit fenotip)
inhib manifestarea fenotipic a alelelor din alt locus B (B sau b) ea se numete epistazie de
dominan. Alelele locusului B se manifest numai la indivizii homozigoi recesivi pentru locusul
epistatic (aaBb i aabb). Astfel, indivizii cu genotipul A . B . i A . bb au acelai fenotip determinat
de gena epistatic dominant A i indivizii aaB . i respectiv aabb (fr alela epistatic dominant A)
vor avea alte dou fenotipuri. n F2 raportul clasic de 9:3:3:1 se modific i devine 12:3:1.
Exemplu:
La ncruciarea ntre un soi de ovz cu glume negre cu un soi cu glume albe s-au obinut n F1
numai plante negre, iar n F2 a avut loc segregarea n raportul de 12/6 plante cu glume negre;
3/16 cu glume cenuii : 1/16 plante cu glume albe.
Raportul de segregare din F2 indic faptul c pentru culoarea glumelor sunt implicate dou
perechi de gene, iar c gena dominant pentru culoarea neagr este epistatic fa de gena
dominant pentru culoarea cenuie.
Notnd cu N culoarea neagr, C culoarea cenuie, nn i cc culoarea alb, dihibridarea
de mai sus se prezint astfel:

glume negre glume albe


P NNCC nncc

G NC x nc

F1 NnCc glume negre

n F2, rezult :

48
5.3.1.2. Epistazia de recesivitate
O gen recesiv homozigot aa inhib exprimarea fenotipic a alelelor unui locus B, se
consider c genotipul aa exercit o epistazie recesiv asupra locusului B. Aceasta nseamn c aa
inhib pe BB, Bb i bb.
Exemplu:
oarecii albi sunt din punct de vedere genetic de tip slbatic (agouti) deoarece conin
gena A, care ns nu se manifest datorit genei recesive epistatice cc, care inhib formarea
oricrui pigment. Ei au genotipul AAcc sau Aacc.
La ncruciarea unor oareci albi (AAcc) cu oareci negri (aaCC) au rezultat n F1 oareci de
tip slbatic (agouti), iar n F2 un raport de segregare de 9 agouti : 3 negri : 4 albi.
Este vorba de un singur caracter (culoarea prului),dar raportul de segregare indic faptul c
sunt implicate dou gene cu relaie epistatic (gen epistatic recesiv). Notnd cu A . agouti, aa
culoarea alb, C . culoarea neagr, cc culoarea alb (epistatic).
albi negri

5.3.1.3. Epistazia de dominan i recesivitate


n acest caz, o gena dominanta A inhib o alt gen dominant B, iar gena recesiv
homozigot bb inhib gena recesiv homozigot aa.
49
Indivizii A.B. , A.bb i aabb au acelai fenotip, iar indivizii aaB. au un alt fenotip. Raportul
de segregare ntre cele dou fenotipuri este de 13 : 3.

Exemplu:

Leghorn (alb) Wyandotte (alb)

P IICC x iicc

F1 IiCc (alb)
F2 9 I.C. - alb
3 I.cc - alb 13 alb

1 iicc - alb

3 iiC. neagr 3 neagr

Raportul fenotipic este de 13 : 3.

La incruciarea ntre rasele de gini albe, Leghorn x Wyandotte, n F1 rezult numai gini
albe, iar n F2 segreg n raporul de 13 gini albe : 3 gini negre. Numrul de 16 combinaii n F2
indic prezena a dou perechi de gene ntre care apar interaciuni epistatice. S-a dedus c rasa
Leghorn este genetic de culoare neagr (C .), dar nu se manifest din cauza unei gene epistatice
dominante (I .). Rasa Wyandotte are gena recesiv cc, care la rndul ei inhib gena ii ce produce
culoare. Culoarea neagr apare numai la genotipul iiC .

5.3.2. Genele complementare

Complementaritatea presupune interaciunea a dou sau mai multe gene nealele pentru
controlul unui caracter. Genele cu aciune complementar, fie n stare homozigot, fie n stare
heterozigot, conlucreaz i duc la apariia unei caracteristici deosebite.

Complementaritatea a dou gene dominante a fost pus n eviden la dovleac, la care dou
gene dominante ( A i B ) acioneaz aditiv la determinarea formei i mrimii fructului. Astfel
plantele cu genotipul aabb au cea mai mic mrime i forma alungit. Prezena unei singure gene
dominante (A sau B) sub form homo- sau heterozigot determin forma sferic, iar prezena
ambelor gene dominante determin mrimea cea mai mare i forma de disc, efectele celor dou gene
dominante se cumuleaz. Raportul caracteristic al dihibridrii de 9:3:3:1 va deveni n acest caz de
9:6:1.
50
P AABB x aabb
Disc alungit
F1 AaBb
Disc
F2 9/16 A.B. disc
3/16 A.bb sfer
3/16 aaB. sfer
1/16 aabb alungit
La Lathyrus odoratus, exist varieti de plante cu flori roii i varieti de plante cu flori
albe. La ncruciarea a dou varieti cu flori albe, n F1 s-au obinut plante cu flori roii, prin
autopolenizarea acestora n F2 au rezultat plante cu flori roii i plante cu flori albe ntr-un raport de
9:7.
Raportul de segregare indic o dihibridare. Culoarea roie apare cnd sunt prezente ambele
gene dominante, dac exist doar o gen dominant (sau niciuna) nu apare culoarea roie.
F2 9/16 A.B. roie
3/16 A.bb alb
3/16 aaB. alb
1/16 aabb alb

51
TEST DE EVALUARE
Rspuns:
Cum poate fi definit relaia de semidominan?
Relaia n care heterozigotul prezint un fenotip intermediar ntre fenotipurile parentale.
Raportul de segregare n F2 este 1/4P1: 2/4 semidominant: 1/4P2.

1. Explicai relaia de letalitate de recesivitate.

2. Definii penetrana unei gene.

3. Definii seria de alele multiple i dai exemple.

4. Definii relaia de tip Zea i indicai raportul de segregare pentru generaia F2.

Exerciii
Exemplu rezolvat:
La ncruciarea ntre doi genitori de Mirabilis jalapa cu flori roz, au rezultat indivizi flori
albe : 2/4 indivizi flori roz :1/4 indivizi flori roii. Raportul confirm relaia de:
a) Supradominan
b) Codominan
c) Semidominan
Rezolvare: c
1. Mama are grupa sangvin AB, tatl grupa 0. Ce grupe sangvine poate avea copilul?
a) A i B
b) AB i A
c) B i 0
2. Culoarea alb a florilor de Primula se manifest la temperaturi de:
a) 35C
b) 25C
52
c) 18C
3. Manifestarea polidactiliei doar la mini se datoreaz:
a) Penetranei
b) Fenocopiilor
c) Expresivitii
4. Mama are grupa sangvin B, copilul grupa O. Ce grup sangvin poate avea tatl?
a) O sau AB
b) O sau A heterozigot, B hetrozigot
c) O sau B homozigot
5. n cazul unei epistazii de recesivitate, raportul de segeregare n F2 este:
a) 9:3:4
b) 15 :1
c) 12 :3 :1
Rezumatul temei
Cercetrile hibridologice efectuate dup redescoperirea legilor mendeliene au relevat cazuri
n care ntre alelele unei gene pot apare i alte relaii dect cea de dominan i recesivitate.
Astfel pentru unele situaii sunt prezentate relaiile de semidominan, supradominan,
codominan i letalitate, cu modificrile caracteristice ale raportului de segregare din generaia F2.
n cazul relaiei de semidominan, heterozigotul prezint un fenotip intermediar fa de
fenotipurile parentale, iar n generaia F2 va apare un raport fenotip de 1:2:1. De asemeni, relaia de
codominan i supradominan presupune un raport fenotip n F2 de 1:2:1. Definirea acestor relaii
se face comparnd fenotipul heterozigotului cu fenotipurile parentale. Astfel, pentru supradominan,
heterozigotul prezint un fenotip ce depete prinii, iar pentru codominan el prezint un fenotip
nou.
De asemenea, pentru determinismul unor caractere pot s apar i interaciuni ntre gene
nealele (epistaziile i complementaritatea), interaciuni ntre gene i mediu. Aceste interaciuni ntre
gene nealele presupun existena unor gene ce au aciune de inhibare gene epistatice i existena
altor gene inhibate gene hipostatice. n funcie de tipul genei epistatice, putem avea epistazie de
dominan ( raport fenotipic 12:3:1), epistazie de dominan i recesivitate ( raport fenotipic
13:3), epistazie de recesivitate ( 9:3:4). Raportul clasic de la dihibridare ( 9:3:3:1) suport o abatere
aparent n cazul interaciunilor dintre gene nealele. Exprimarea unui caracter depinde i de
interaciunea dintre gene i mediu, pot apare devieri fenotipice n funcie de anumii factori de
mediu.
53
Tema nr. 6
TEORIA CROMOZOMIAL A EREDITII

Uniti de nvare:
Drosophila melanogaster obiect de studiu. Aezarea liniar a genelor pe cromozomi.
Transmiterea nlnuit a genelor plasate pe acelai cromozom linkage.
Crossing-over sau schimbul reciproc de segmente cromozomale (gene) ntre cromozomii
omologi.

Obiectivele temei:
enumerarea i prezentarea tezelor emise de ctre Thomas Hunt Morgan i colaboratorii lui n
urma studiilor efectuate la Drosophila melanogaster.
fixarea mecanismelor privind transmiterea genelor linkage i recombinarea genetic ce poate
apare n cazul acestor gene ( completeaz cunotiinele privind ereditatea caracterelor).
trecerea n revist a diferiilor factori ce pot influena manifestarea crossing-over-ului.
Timp alocat temei : 3 ore
Bibliografie recomandat
1. Casian, H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech.
2. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. I, Ed. Bioterra, Bucureti.
3. Hartl ,D. L., Jones, E., 2000, Genetica. Principi e applicazioni, Editoriale Grasso.

6.1. Drosophila melanogaster obiect de studiu.


Aezarea liniar a genelor pe cromozomi

Thomas Hunt Morgan, profesor la Universitatea Columbia din New York, mpreun cu
colaboratorii si C.B. Bridges, A.H. Sturtevant, H.J. Muller, au
elaborat teoria cromozomial a ereditii, care asociaz genele cu
cromozomii.
Cercetrile efectuate n anii 1910 1915 asupra musculiei
de oet Drosophila melanogaster, au permis concluzii ce sunt
cunoscute astzi ca teze i completeaz tabloul privind ereditatea
caracterelor.

54
Drosophila melanogaster se nmulete foarte repede, la temperatura de 20C se obine o
generaie n 12 zile. Astfel, se puteau studia mai multe generaii pe an comparativ cu mazrea
obiect de studiu la G.Mendel. Fiecare femel produce cteva sute de descendeni ce cresc pe un
mediu minimal, astfel c numrul indivizilor cercetai ntr-un interval scurt este foarte mare.
Numrul de cromozomi n celula somatic este mic la Drosophila melanogaster (2n=8) i pot fi uor
identificai.
T.H.Morgan i colaboratorii au identificat peste 500 de mutaii care afecteaz organele
insectei (vezi fig.5.1 ) :
culoarea ochilor w = alb forma aripilor vg+= normale
pr= purpurie vg= vestigiale
se= sepia
culoarea corpului y+ = cenuiu
y = galben
yb = negru

Fig.nr. 6.1 Diferite mutante la Drosophila melanogaster (culoarea ochilor, forma aripilor, culoarea
corpului)

Prin ncruciarea mutantelor ntre ele


sau cu tipul slbatic s-a studiat modul de
transmitere ereditar a diferitelor gene.
Aceste rezultate corelate cu cercetri
citologice au dus la elaborarea celor mai
importante teze privind mecanismul
cromozomial al ereditii.
Teoria cromozomial a ereditii
cuprinde trei teze:
plasarea liniar a genelor pe
cromozomi (care a fost asemuit cu
aranjarea mrgelelor ntr-un irag);
tendina genelor de pe acelai cromozom de a se transmite n bloc sau nlnuite (linkage),
adic de a intra n gamei n combinaii parentale, comportndu-se ca o unitate n ereditate.
Cnd dou sau mai multe gene sunt localizate n acelai cromozom, spunem c sunt nlnuite.
55
Ele pot fi nlnuite fie pe un autozom (gene linkage), fie pe un cromozom al sexului (gene
sexlikage);
tendina genelor nlnuite de a intra n gamei n alte combinaii dect cele parentale, acest
fenomen fiind denumit crossing-over. n esen, crossing-over-ul reprezint un schimb
reciproc de segmente cromatidice nesurori ntre doi cromozomi omologi. n urma acestui
schimb de material genetic (gene) apar cromatide recombinate cu combinaii noi de gene,
denumite crossovere sau recombinri, fiind deosebite de combinaiile parentale.

Prima tez a teoriei cromozomiale a ereditii consider c genele sunt plasate pe cromozomi
n anumite poziii denumite loci ( locus singular). Pe ambii cromozomi este prezent cte o alel
pentru fiecare gen, astfel putem avea starea homozigot ( AA sau aa) sau heterozigot (Aa).
T.H. Morgan i colaboratorii au ajuns la aceast concluzie n urma analizrii unor musculie
ce aveau 2n=7 cromozomi fa de 2n=8. Au sesizat corelaia dintre lipsa unui cromozom i absena
anumitor caracteristici, cum ar fi prezena ochilor. De asemenea ei au identificat la musculia de oet
peste 500 de mutante, iar numrul total de cromozomi este 8, ca urmare pe fiecare cromozom trebuie
s se fie mai multe gene.

6.2. Transmiterea nlnuit a genelor plasate pe acelai cromozom linkage


Studiul fenomenului de linkage a permis evidenierea mai multor situaii. Astfel, s-a stabilit
c el poate fi complet (absolut sau total), atunci cnd genele de pe acelai cromozom au tendina
permanent de a rmne nlnuite i incomplet (relativ sau parial), cnd ntre cromozomii
omologi au loc schimburi reciproce de gene.
Vom analiza n continuare linkage-ul complet ( cea de a doua tez).
Detectarea linkage-ului se poate face n dou moduri:
a) prin testcross-ul heterozigotului F1 (mai ales la organismele dioice unde
ncruciarea se face uor).
Metoda const n apariia n descendena testcross a unui raport de segregare 1:1,
indiferent de numrul de gene nlnuite.
La testcross-ul unui dihibrid heterozigot (F1), n cazul genelor independente (gene
localizate pe cromozomi diferii), rezult un raport de segregare de 1:1:1:1.

56
n cazul testcross-ului unui dihibrid heterozigot cu gene nlnuite (situate pe acelai
cromozom) rezult raportul de segregare de 1:1. reprezentnd formele parentale:

*Orice deviere de la raportul testcross de 1:1:1:1 indic o abatere de la combinarea


independent, cel mai adesea datorat fenomenului de linkage.
Exemplu:
La ncruciarea unor masculi heterozigoi de Drosophila cu corp cenuiu i aripi normale
(BVg/bvg) cu femele dublu recesive cu corp negru i aripi vestigiale (bvg // bvg) folosite ca tester,
rezult n loc de 1 BbVgvg : 1 Bbvgvg : bbVbvb : 1 bbvgvg, ct ar fi rezultat la combinarea
indepentent a genelor, un raport simplu de 1 BVg // bvg : 1bvg // bvg, care indic nlnuirea
celor dou gene. Acest testcross se prezint schematic astfel:
57
c) prin studiul generaiei F2 (preferabil la organismele hermafrodite i monoice la care
testcross-ul se execut mai dificil). n cazul unei dihibridri cu gene independente raportul
fenotipic n F2 este de 9:3:3:1, iar la o dihibridare cu gene linkage, precum i la orice polihibridare
linkage raportul n F2 este de 3:1. O dihibridare cu gene linkage se desfaoar dup schema de mai
jos. Linkage-ul complet se manifest rar. El poate fi prezent numai ntr-o pereche sau ntr-o
regiune oarecare a unei perechi de cromozomi, care nu poate s conjuge. Raport fenotipic
3:1

58
6.3. Schimbul reciproc de gene (Crossing-over-ul)
Crossing over-ul apare n meioz, dar poate s apar i n mitoz, n diferite esuturi i
organe.
n cursul meiozei, fiecare cromozom se duplic n dou cromatide surori, identice.
Cromozomii omologi se mperecheaz (conjug) i formeaz tetrade cromatidice; ntre cromatidele
nesurori pot avea loc schimburi reciproce de segmente (gene). n schema de mai jos prezentm
situaia cnd are loc un singur crossing over ntre dou gene, A i B.

Rezult c dou dintre cele patru cromatide nu au suferit crossing over i au genele asociate
ca n cromozomii parentali (cromatide parentale), iar celelalte dou cromatide au suferit crossing
over-ul (schimb reciproc de gene) i prezint asociaii noi de gene (cromatide recombinate sau
remaniate).
Un crossing over n afara intervalului A-B nu produce schimbri ntre cei doi markeri (A i
B). Dac ntre doi loci (A-B) apar dou crossing overe ntre aceleai cromatide surori, cromatidele
rezultate la sfritul meiozei vor fi toate de tip parental. Orice dublu crossing over ntre doi markeri
A i B, nu poate fi decelat dect n prezena unui al treilea marker C situat ntre A i B. Dac ntre A
i C, pe de o parte i ntre C i B, pe de alt parte, probabilitile de apariie a unui crossing over sunt
x i, respectiv y, probabilitatea crossing overe-lor duble (unul ntre A i C i altul ntre C i B) este
egal cu produsul xy.
Crossing over-ul se detecteaz ca i linkage-ul prin testcross-ul heterozigotului F1 i analiza
ralortului de segregare n F2.
a) detectarea crossing over-ului prin testcross (la crossing over-ul ntre doi loci).
59
Un dublu heterozigot care se testeaz cu printele dublu recesiv poate avea dou poziii ale
alelelor: a) poziia cis, cnd ambele alele dominante se gsesc pe un cromozom, iar alelele recesive
pe cromozomul omolog (AB // ab) si b) poziia trans, cnd fiecare cromozom are o alel dominant
i alt alel recesiv (Ab // aB). Analizele hibridologice efectuate la Drosophila de ctre Morgan i
colaboratorii au relevat faptul c heterozigotul F1 folosit ca femel formeaz patru tipuri de gamei n
proporii diferite: gameii de tip parental apar cu o frecven mare, iar gameii recombinai cu o
frecven sczut. Testerul mascul este homozigot i recesiv, formnd un singur tip de gamei. n
descendena testcross apar patru fenotipuri n proporii determinate de cele patru tipuri de gamei.
Combinaiile parentale (non cross overe), care apar n proporia cea mai mare, indic intensitatea
linkage-ului ntre cei doi loci considerai, iar tipurile noi de indivizi reprezint recombinrile genelor
(crossovere). Analiza acestor rezultate i-au permis lui Morgan s constate c frecvena crossing
over-ului ntre cele dou gene (B i Vg) reprezint distana dintre aceste gene localizate n acelai
cromozom. Cnd s-au folosit n analize hibridologice ali loci (gene), frecvena recombinrilor a fost
alta, demonstrnd astfel, corelaia dintre frecvena crossing overe-lor nregistrate i distana ntre
genele implicate.
Exemplu:
La ncruciarea unei femele heterozigote de Drosophila cu corp cenuiu i aripi normale (BVg // bvg)
cu un mascul dublu recesiv (bvg // bvg) au rezultat n descendena acestui testcross 41,5% indivizi cu
corp cenuiu i aripi normale,

60
41,5% cu corp negru i aripi vestigiale, 8,5% cu corp cenuiu i aripi vestigiale i 8,5% cu corp
negru i aripi normale. Primele dou fenotipuri reprezint combinaiile parentale (non crossovere)
care nsumeaz 83%, iar ultimele dou fenotipuri reprezint recombinri ale celor dou gene
(crossovere), datorate schimbului reciproc de gene ntre cei doi cromozomi omologi, nsumnd 17%.
b) detectarea crossing over-ului prin analiza descendenei F2 (la crossing over-ul ntre cei
doi loci).
n cazul a doi loci independeni (nu manifest linkage), segregarea fenotipic n F2 este tipic
mendelian, adic de 9:3:3:1. Dac cei doi loci manifest linkage incomplet, atunci n F2 se vor
manifesta fenotipic n exces combinaiile parentale (non crossoverele), n timp ce recombinrile
(crossoverele) vor apare cu o frecven sczut, dependent de distana dintre genele considerate.

6.3.1. Factorii care influeneaz crossing-over-ul


Dintre factorii care influeneaz direct sau indirect fenomenul de crossing over menionm pe
cei mai semnificativi, i anume (T. Crciun i colab., 1978):
Sexul. La origanismele cu lips de omologie ntre cromozomii sexului X i Y, nsoit adesea
de absena chiasmelor ntre autozomii omologi (n profaza I a meiozei), nu apare sau este
foarte redus fenomenul de crossing over. La organismele cu crossing over la ambele sexe,
exist adesea diferene de la un sex la altul. De regul, o frecven mai sczut a crossoverelor
se observ la sexul heterogametic.
Vrsta. La Drosophila melanogaster, Bridges (1927) a constatat c femele de vrst diferite
produc crossovere n proporii variabile. Astfel, la nceputul maturitii sexuale se nregistreaz
o frecven maxim de crossovere, iar dup aceea la intervale diferite de timp, s-au observat
mai multe minime. La porumb, s-au observat, de asemenea, fluctuaii ale frecvenei de
crossovere n raport cu vrsta plantelor.
Zona heterocromatinei. n zona heterocromatinei a cromozomului, situat de o parte i de
alta a centromerului, precum i n satelii, chiasmele lipsesc sau se gasesc cu o frecven
redus. Genele din aceast parte a cromozomului sunt foarte dense, puternic spiralizate, cu
posibiliti mici de transcripie i deci, de funcionare, fiind considerate inactive. Putem spune
c heterocromatina inhib manifestarea crossing-overului.
Modificrile n structura cromozomului. n funcie de natura lor, pot reduce sau suprima
prezena chiasmelor ntre cromozomii omologi. Aceste modificri apar cu frecven mare n
urma tratamentelor cu ageni mutageni n doze mari, care induc numeroase i diferite
dislocaii cu efecte negative asupra organismelor. Practic, toate tipurile de modificri n
61
structura cromozomilor (deficienele, duplicaiile, inversiile, translocaiile) n stare
heterozigot suprim sau reduc apariia chiasmelor prin lipsa omologiei induse artificial ntre
cromozomii pereche.
Modificrile numrului de genomuri sau de cromozomi (autopoliploidia, alopoliploidia,
monosomia) reduc sau suprim total apariia chiasmelor i respectiv, a crossing over-ului.
Factorii de mediu (temperatura, lumina, umididatea, nutriia, etc.) pot afecta n mod diferit,
n anumite etape ale dezvoltrii oraganismelor, apariia chiasmelor i respectiv, a crossing
overe-lor, mai ales n regiunile heterocromatice ale cromozomilor.

6.3.2. Tipuri de crossing-over


Crossing over-ul se poate clasifica dup mai multe criterii, dintre care menionm:
a) dup tipul de diviziune celular n care apare se cunosc dou tipuri de crossing over, i
anume:
1) crossing over meiotic:
are loc n profaza I a meiozei i se identific n diplonem, prin apariia chiasmelor ntre
cromatidele nesurori ale cromozomilor omologi. Este tipul cel mai frecvent de crossing over, care
prin recombinrile intracromozomiale, reprezint o surs foarte important a variabilitii
organismelor. Condiiile majore pentru manifestarea fenotipic a acestui tip de crossing over sunt:
prezena obligatorie a cromozomilor omologi n stare heterozigot i realizarea formaiunilor
citologice de tetrad cromatidic.
2) crossing over mitotic sau somatic:
Crossing- overul este asociat n mod normal, cu diviziunea meiotic. n anumite condiii i cu o
frecven foarte redus, un fenomen asemntor poate avea loc i in diviziunea mitotic (n
celulele somatice de la plante i animale, la sfritul interfazei sau n profaza mitotic, cnd
cromozomii pereche au formate cele 4 fire cromatidice i sunt n stare heterozigot. Acest tip de
crossing over a fost denumit crossing over mitotic sau somatic i se detecteaz fenotipic prin
segregarea mitotic a genelor marker pe acelai individ, determinnd apariia de esuturi mozaicate
(esuturi normale alturi de esuturi recombinate). Crossing over-ul mitotic a fost pus n eviden la
Drosophila melanogaster (C. Stern, 1936); la plante (J.H. Taylor, 1958), precum i la numeroase
microorganisme (bacterii, ciuperci).

b) dup nivelul la care are loc ruperea i schimbul de segmente cromozomiale, crossing over-
ul poate fi:
62
1) crossing over egal, atunci cnd chiasmele apar ntre loci omologi (la acelai nivel sau
punct) i segmentele cromatidice care se schimb sunt egale (identice); acesta este tipul normal de
crossing over, cu ruperi i schimburi simetrice (egale) de segmente cromatidice:

2) crossing over inegal, atunci cnd chiasma i, respectiv, schimbul segmentelor


cromatidice care se schimb sunt inegale. n cazul crossing over-ului inegal dispare condiia de
heterozigoie a cromozomilor omologi. Datorit acestui tip aparte de crossing over, ntr-o
cromatid remaniat vor apare una sau mai multe gene n dublu exemplar, iar fenomenul se
numete duplicie, iar n cealalt cromatid vor lipsi genele respective, de unde i denumirea de
deficien (vezi figura de mai jos).
Crossig over-ul inegal i consecinele sale asupra cromatidelor implicate

3) crossing over-ul nelegitim, atunci cnd chiasma apare ntre cromozomi


heteromorfici care au poriuni (zone) homoloage sau parial homoloage (la indivizi haploizi sau
poliploizi)
c) dup complexitatea materialului genetic implicat n crossing over distingem dou tipuri:
1) crossing over intergenic (ntre gene) n care schimbul reciproc ntre cromozomii
omologi cuprinde segmente de cromatide cu una sau mai multe gene. Este tipul obinuit de
crossing over a crui valoare de schimb depinde de distana dintre gene.
2) crossing over intragenic (n cadrul aceleiai gene), reprezint schimburi reciproce ntre
subunitile unor gene complexe (loci compleci), denumite subgene sau pseudoalele.
63
6.3.3. Alctuirea hrilor cromozomale
Harta cromozomal constituie reprezentarea grafic a cromozomilor cu indicarea
ordinei i distanei relative a genelor linkage (pe fiecare cromozom). Dac distana dintre gene este
estimat prin frecvena crossoverelor (n uniti Morgan), reprezint o hart genetic. Dac pentru
localizarea genelor pe cromozomi se folosesc observaii citologice ale crossoverelor asociate cu
mutaii, dislocaii cromozomale etc., se obine harta citologic. Cele mai complete, sunt hrile
citogenetice,care se alctuiesc pe baza studiilor citologice ale crossoverelor, asociate cu stabilirea
genelor de pe fiecare cromozom i a distanelor dintre ele (proporionale cu frecvena
crossoverelor).
Alctuirea hrilor genetice presupune o serie de etape, i anume:
delimitarea grupelor linkage prin identificarea unor gene marker n fiecare cromozom (gene
care se transmit n bloc), folosind fenomenul de aneuploidie;
stabilirea distanei dintre genele din acelai cromozom prin determinarea frecvenei
crossoverelor;
determinarea ordinei (poziiei) genelor n cromozomi.

TEST DE EVALUARE
Cine a elaborat teoria cromozomial a ereditii?
Rspuns:
Teoria cromozomial a ereditii a fost elaborat de Thomas Hunt Morgan mpreun cu
colaboratorii si C.B. Bridges, A.H. Sturtevant, H.J. Muller. Teoria cuprinde trei teze i
asociaz genele cu cromozomii.

1. Care a fost materialul de studiu folosit de ctre T.Morgan?

2. Definii linkage-ul complet.

3. Care sunt metodele de evideniere a linkage-ului.

64
Exerciii
Exemplu rezolvat:
1. Care este numrul somatic de cromozomi la Drosophila melanogaster?
a) 2n=8;
b) 2n=12;
c) 2n =6.
Rezolvare: a
2. Cte mutante a identificat T.Morgan la musculia de oet?
a) 200;
b) 500;
c) 600.
3. n cazul linkage-ului complet, raportul fenotipic obinut prin testcross este:
a) 3:1;
b) 1:1:1:1;
c) 1:1.
4. n cazul linkage-ului complet n generaia F2 va apare un raport fenotipic:
a) 9:3:3:1;
b) 3:1;
c) 1:1.

Rezumatul temei
T.Hunt Morgan i colaboratorii au evideniat modul de transmitere al genelor plasate pe
acelai cromozom. Ei au obinut rezultate diferite n cazul dihibridrilor fa de G.Mendel, care a
studiat gene independente. Ca urmare au fost elaborate trei teze: 1) plasarea liniar a genelor pe
cromozom; 2) linkage-ul complet i 3) crossing-overul.
n cazul manifestrii linkage-ului complet, raportul de segregare n generaia F2 este de 3:1,
ceea ce demonstreaz c genele plasate pe acelai cromozom se comport ca o singur unitate
ereditar.
n cazul crossing-overului, fenotipurile parentale reapar n proporii egale i mari, iar
recombinrile apar n proporii mai mici n funcie de distana dintre gene.
Pentru punerea n eviden a tezelor sunt utilizate metoda studiului generaiei F2 i testcross-
ul heterozigotului F1.
65
Crossing-overul este influenat de o serie de factori ce pot favoriza sau defavoriza manifestarea
acestuia: sexul, vrsta, zona heterecromatic, modificrile structurale i numerice ale
cromozomilor, factorii de mediu.
Clasificarea crossing-overului se realizeaz dup mai multe criterii, cel mai adesea el este
meiotic ( are loc n pachinem- profaza I), rareori este mitotic.
Recombinarea realizat asigur variabilitatea organismelor, respectiv supravieuirea speciilor.
Frecvena crossoverelor precizeaz distana dintre genele plasate pe acelai cromozom i ca
urmare au putut fi realizate hrile genetice la mai multe specii, inclusiv om.

66
Tema nr. 7
VARIAII ALE NUMRULUI DE CROMOZOMI. EUPLOIDIA.

Uniti de nvare :
Ploidia: definiie i clasificare.
Monoploidia i haploidia: caracteristici, importan i inducere experimental.
Poliploidia: catacteristici, importan i inducerea experimental.

Obiectivele temei :
nsuirea noiunilor referitoare la ploidie : numrul de baz X , starea diploid, euploidie ,
aneuploidie, etc ;
Fixarea caracteristicilor monoploizilor, haploizilor , utilizarea lor n agricultur i metode de
inducere;
Fixarea caracteristicilor poliploizilor, clasificarea poliploizilor, utilizarea n agricultur i
metode de inducere.

Timpul alocat temei: 3 ore


Bibliografie recomandat:
1. Casian, H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech.
2. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. I, Ed. Bioterra, Bucureti.
3. Russel, P. J., 1998, Genetica, EDISES.

7.1. Ploidia
Cel mai adesea , numrul de cromozomi din celule este constant ( diploid n celulele somatice
i haploid n celulele sexuale). Uneori, acest numr sufer modificri (creterea sau reducerea), ceea
ce duce la o variaie a numrului de cromozomi cu implicaii i asupra fenotipului indivizilor
afectai. Aceast modificare a numrului de cromozomi este cunoscut sub denumirea de ploidie.
Variaiile numerice pot apare spontan n natur sau sunt induse de ctre om, unele dintre ele
prezentnd interes pentru producie sau n lucrrile de ameliorare ale speciilor.
67
Pentru aprecierea gradului de ploidie, este necesar s se cunoasc numrul de baz sau X
caracteristic fiecrei specii. Numrul de baz (X) reprezint numrul haploid de cromozomi al
speciei ancestrale.
Exemplu:
Pisum sativum are x=7 ; 2n=2x=14 este un diploid.
Triticum aestivum are x=7 ; 2n=6x=42 este un hexaploid.
Mutaiile numeric cromozomale pot fi clasificate n dou mari categorii :

1) Euploidia variaie ce implic ntreg genomul, putem discuta despre o reducere sau o
multiplicare a acestuia ;
2) Aneuploidia variaie ce afecteaz doar unul, doi cromozomi din genom.

n cadrul acestei teme vom face referire la euploidie, variaie a numrului de cromozomi ce
afecteaz ntreg genomul i se poate referi la o reducere sau o multiplicare a numrului de
cromozomi. Aceasta presupune c euploidia la rndul ei se mparte n dou categorii :
monoploidia respectiv poliploidia.

7.2. Monoploidia i haploidia


Monoploidia, este fenomenul prin care numrul de cromozomi din celulele somatice se
reduce la jumtate. n celulele somatice, plantele monoploide au numrul de cromozomi egal cu
cel din celulele gametice. Dup modul n care se formeaz, formele monoploide se grupeaz n
dou categorii: monoploide i haploide.
Monoploidia reprezint starea celulelor somatice, sau a organismelor, la care numrul de
cromozomi corespunde cu numrul de baz, posed un singur set cromozomal (x). Monoploizii se
formeaz prin reducerea la jumtate a numrului de cromozomi la speciile diploide, posednd
numrul gametic de cromozomi. Exemplu: 2n=2x prin reducerea la jumtate rezult n=x.
Monoploizii prezint fiecare cromozom (respective gen) ntrun singur exemplar, starea de
hemizigoie. Ca urmare indivizii prezint vigoare redus, rezisten mic la factorii de mediu i
sunt sterili datorit lipsei sinapselor n timpul meiozei. Apariia monoploizilor poate fi spontan
sau indus artificial de ctre om.
Haploidia reperezint reducerea la jumtate a numrului de cromozomi din celulele
somatice la plantele poliploide. Exemplu 2n=4x prin reducere apare n=x+x.

68
7.2.1.Importana monoploizilor i inducerea experimental
Datorit vigorii reduse i sensibilitii mari fa de factoriii de mediu, monoploizii nu sunt
folosii n producie, interesul lor este n procesul de ameliorare. Astfel, prin dublarea numrului de
cromozomi se obin rapid forme homozigote numite linii izogene.
n cazul speciilor autogame , liniile izogene sunt folosite n procesul de selecie (metod de
ameliorare). Caracteristicile prezentate de aceste linii (manifestarea genelor recesive este posibil
datorit homozigoiei) pot corespunde obiectivelor de ameliorare urmrite de specialiti.
n cazul speciilor alogame, liniile izogene sunt folosite pentru obinerea hibrizilor comerciali
F1, ce manifest efectul heterozis. x

Importana monoploizilor:
Datorit vigorii reduse i sensibilitii mari fa de factorii de mediu, monoploizii nu sunt
folosii n producie, interesul lor este pentru procesul de ameliorare. Astfel, prin dublarea numrului
de cromozomi se obin rapid forme homozigote numite linii izogene.
n cazul speciilor autogame , liniile izogene sunt folosite n procesul de selecie (metod de
ameliorare). Caracteristicile prezentate de aceste linii pot corespunde obiectivelor de ameliorare
urmrite de specialiti. Importana genetic a monoploizilor const n manifestarea integral a
tuturor genelor, inclusiv a celor recesive. Din acest punct de vedere, monoploizii constituie un
material ideal pentru studiile de mutagenez. La monoploizi, mutaiile aprute pot fi decelate chiar
n anul producerii lor, deoarece se manifest n fenotip toate genele, inclusiv cele recesive, contrar
celor de la poliploizi, care trebuie cutate n generaiile segregante.
n cazul speciilor alogame, liniile izogene sunt folosite pentru obinerea hibrizilor comerciali
F1, ce manifest efectul heterozis, aceste linii fiind superioare celor consangvine.
Inducerea monoploidiei :
Formele monoploide pot fi obinute in vivo ct i in vitro.
1. Metodele utilizate pentru inducerea in vivo a haploidiei sunt:
- iradierea polenului cu radiaii ionizante sau ultraviolete n vederea distrugerii unei
spermatii, ce duce la formarea de haploizi dintr-o oosfer nefecundat;
- polenizarea ntrziat i tratamentele cu ocuri de temperatur imediat dup polenizare;
- ndeprtarea staminelor florale, fapt ce mpiedic polenizarea normal;
- inactivarea nucleilor spermatici prin tratamente cu diferite substane chimice, care
favorizez o dezvoltare partenogenetic;
- inhibarea creterii tubului polinic prin tratament cu hidrazida maleic.
69
2. Metodele de inducere in vitro a haploidiei sunt:
- culturi de antere, din grunciori de polen imaturi sau n culturi de ovule nefecundate, pe
medii artificiale.
Tehnica de obinere n culturi de antere sau ovule nu este aplicabil la toate organismele,
deoarece exist unele specii refractare la aceste procedee.
O tehnic deosebit de avantajoas este metoda bulbosum, n care forma diploid de orz
(Hordeum sativum) a fost polenizat cu polen de la forma slbatic Hordeum bulbosum. n
succesiunea diviziunilor mitotice cromozomii speciei Hordeum bulbosum au fost eliminai, dnd
natere unui embrion haploid. Procesul de haploidizare este aproape similar cu fenomenul de
incompatibilitate genetic ntre seturile cromozomale ale celor dou specii, chiar dac fecundarea
are loc. Prin utilizarea metodei bulbosum s-au obinut rapid forme homozigote, fiind posibil
introducerea n cultur a numeroase varieti noi de orz. Metoda se preteaz i la alte specii.

7.3. Poliploidia
Poliploidia: este definit ca variaia numrului de cromozomi ce presupune multiplicarea
numrului de baz X, superioar lui 2. n cadrul poliploidiei categoriile sunt clasificate dup dou
criterii:
1. Dup numrul de multiplicare:
Artioploizi numrul de multiplicare este par (4x, 6x, 8x,etc). Aceti indivizi au meioz
normal datorit homologiei cromozomilor i sunt fertili.
Perisoploizi numrul de multiplicare este impar (3x, 5x, etc) sunt deobicei sterili i se
recomand la speciile cu nmulire vegetativ.
2. Dup modul de obinere:
Autopoliploizi
Alopoliploizi
o Autopoliploizii: rezult n urma multiplicrii propiului numr de cromozomi, cel mai
adesea sunt forme fertile i se recomand utilizarea lor n producie.
2n=2x AA
Dublare nr. cromozomi

2n=4x AAAA
n celulele poliploide apar o serie de modificri care sunt identificate prin investigare
microscopic. Datorit numrului sporit de cromozomi, celulele sunt mai mari, diametrul celulelor
somatice este mai mare i conin un numr sporit de cloroplaste. n celula poliploid numrul
70
cromocentrilor nucleolari este de asemenea mai mare. Diametrul grunciorilor de polen de la
organismele poliploide, ca i numrul porilor germinativi a polenului este mai mare.

Macroscopic se disting mai multe particulariti, habitusul plantelor este mai mare i mai
viguros, cu numr mic de tulpini, lstari sau ramificaii, dar de dimensiuni mult mai mari. Plantele
au flori mai puine dar mari i intens colorate. Aparatul foliar este alctuit dintr-un numr mai mic
de frunze, de dimensiuni mai mari i de un verde intens.

La plante, poliploidia este corelat i cu importante modificri fiziologice i biochimice.


Astfel, plantele prezint o cantitate de clorofil i o capacitate sporit de fotosintez, rezisten
crescut la stresul climatic i ageni patogeni, manifestnd, n general, o bun homeostazie
(adaptabilitate) la condiii de mediu nefavorabile, asociate ns cu tardivitate.

Ca urmare a efectului de dozaj, plantele poliploide au o capacitate crescut de sintez a


substanelor proteice, a glucidelor, a vitaminelor, pigmenilor etc.

Fertilitatea autoploizilor, n general, este mai sczut, mai ales la perisoploizi, deoarece apar
diferite anomalii n desfurarea meiozei. Anomaliile sunt frecvente n profaza I, deoarece alturi
de bivaleni, se formeaz i uni-, tri- i tetra- valeni. Multivalenii segreg dezordonat (nebalansat)
n anafaza I ceea ce duce la formarea de gamei neechilibrai, pe acest considerent se recomand
utilizarea plantelor poliploide numai atunci cnd din punct de vedere economic, intereseaz masa
vegetativ i nu producia de semine (plante furajere, plante ornamentale, sfecl de zahr etc.).

Alopoliploizii: are loc multiplicarea seturilor de cromozomi provenite prin hibridare


interspecific sau intergeneric. Formele aloploide se pot realiza prin ncruciarea ntre specii
ndeprtate genetic, urmat de dublarea numrului de cromozomi la hibrizii F1, rezult
amfidiploizi sau amfiploizi.

Pentru natur, aloploidia, n special cea genomal, este deosebit de important, asigurnd
evoluia speciilor.

Un poliploid natural, este grul comun (Triticum aestivum 2n = 6x = 42). Prin studiul
speciilor slbatice diploide sau tetraploide, cu numrul de baz, x = 7, s-a reconstituit evoluia
grului. n meioz, n celulele mam se formeaz 21 de bivaleni, fiecare cromozom fiind
reprezentat de un singur omolog. Formarea bivalenilor este controlat de gena Ph, situat pe
braul lung al cromozomului 5B. Cu toate c specia este hexaploid, comportamentul diploid,
simulat de formarea bivalenilor, este asigurat de gena Ph.

Grul comun ii are originea n trei specii diploide diferite i cu genomuri diferite, AA, BB
i DD (vezi figura 7.1).
71
Originea aloploid a fost stabilit pentru multe alte specii. Prunus domestica este un aloploid
ntre Prunus spinosa (2n=4x=32) i Prunus cerosifera (2n=2x=16). Alte exemple de specii
aloploide: Nicotiana tabacum, 2n = 48 (n. silvestrys, 2n = 24 x N. tomentosiformis, 2n=24),
Brassica napus, 2n = 38 (B. oleracea, 2n = 18 x B.capestris, 2n = 20) etc.

Amfiploizii manifest att caracteristicile celor dou forme parentale, ct i a poliploizilor,


manifestnd homeostazie ridicat. Amfiploidia este o cale deosebit de facil pentru obinerea de
specii noi, artificiale. O prim ncercare n acest sens este a lui G.D. Karpecenko (1928), care a
obinut un hibrid fertil ntre varz (Brassica oleracea, 2n = 18) i ridiche (Raphanus sativus, 2n =
18). Hibridul obinut a fost ns steril.

Diagrama evoluiei posibile a grului hexaploid (Triticum aestivum)


72
7.3.1. Inducerea artificial a poliploidiei
Pentru crearea de poliploizi artificiali s-au pus la punct numeroase metode de modificare a
diviziunii celulare.
Se preteaz la poliploidizare acele specii care prezint un numr mic de cromozomi, la care
n primul rnd se utilizeaz masa vegetativ i mai puin seminele, precum i speciile care
prezint un grad ridicat de sterilitate, crendu-se posibilitatea de a se multiplica vegetativ.
Cele mai utilizate metode de inducere a poliploidiei sunt:
- tratamente cu ocuri de temperatur, ridicate sau sczute, aplicate la diferite organe, esuturi
sau celule aflate n diviziune. ocurile de temperatur deregleaz aparatul mitotic (fusul nuclear)
genernd artioploidie;
- metoda centrifugrii i a iradierii, conduc la inhibarea fusului de diviziune, microtubulii nu se
asambleaz ca s formeze firele acromatice sau sunt distrui, fiind posibil apariia unor nuclei de
restituie;
- metoda regenerrii se bazeaz pe dublarea numrului de cromozomi prin endomitoz, frecvent
ntlnit n culturile de celule i calusurile de cicatrizare (punctul de altoire), celule care se multiplic
n prezena heteroauxinei;
- metoda poliembrioniei se bazeaz pe predispoziia unor specii (Zea mays, Secale cereale etc.),
de a forma semine cu doi sau mai muli embrioni, dintre care unii pot fi poliploizi;
- metoda tratamentului chimic, cu colchicin sau cu proto-oxid de azot, este cea mai eficient
i mai frecvent utilizat.
Metoda a fost elaborat de A.F. Blakeslee i O.T. Avery (1937) i se bazeaz pe aciunea
colchicinei asupra fusului din celulele n diviziune. Colchicina este un alcaloid extras din bulbi de
brndu de toamn (Colchicum autumnale) care datorit aciunii ei citostatice, are capacitatea de
a bloca formarea fusului , dar nu mpiedic clivajul longitudinal al cromozomilor. Astfel, se va
forma o singur celul cu numr dublu de cromozomi.
Soluia apoas de colchicin n concentraie de 0,1 1,0% poate fi utilizat pentru
tratamentul seminelor, a vrfurilor vegetative i rdcinilor plantelor, a mugurilor, a florilor sau
inflorescenelor.
Sub influena colchicinei, diviziunea sufer unele modificri, fiind denumit C-mitoz i C-
meioz. Colchicina, nu are aciune semnificativ asupra cromozomilor, clivarea centromerului i
separarea cromatidelor este normal, n interfaza dintre diviziuni formndu-se cromozomi cu
morfologie specific. Colchicina blocheaz polimerizarea tubulinei i n acest fel, formarea fusului
de diviziune este anihilat.
73
n urma colchicinizrii, n mitoz apar schimbri specifice i anume: profaza decurge
normal. n metafaz, n absena fusului de diviziune, cromozomii nu se dispun la centrul celulei,
pentru a forma placa metafazic, rmnnd dispersai n citoplasm (pseudometafaz sau C-
metafaz). La cromozomii puternic condensai, cromatidele apar desfcute, fiind unite numai la
centromer (configuraia literei X, cromozomi-X sau cromozomi-C). Cele patru cromatide ale unei
perechi de cromozomi rmn n aceeai celul, formnd nucelul de restituie cu un numr dublu de
cromozomi.
Meioza celulelor colchicinizate se caracterizeaz prin absena fenomenelor sinaptice. Astfel
c n C-metafaz, cromozomii nu formeaz bivaleni, ei rmn ca univaleni. n C-anafaza I,
cromozomii omologi nu se separ, toi cromozomii fiind inclui ntr-un singur nucleu, denumit
nucleu de restituie, care va avea un numr dublu de cromozomi. Meioza de acest tip, genereaz
formarea gameilor diploizi, care n urma fecundrii, vor da natere zigoilor tetraploizi.
Din seminele tratate cu colchicin, pot aprea plante noi, n totalitate poliploide. Aplicarea
tratamentului la pri vegetative ale plantei, determin formarea de himere, esuturi mixoploide, n
care alterneaz celule diploide i poliploide.

7.3.2. Importana poliploidiei


Poliploidia, este un proces cu importan deosebit, att pentru evoluie ct i pentru
ameliorarea plantelor.
n evoluie, autoploidia reprezint o important surs de variabilitate, numeroase specii
avnd o origine poliploid (cartoful 2n = 48; alunele de pmnt 2n = 40; etc.)
A. Mntzing (1967), consider c exist o corelaie pozitiv ntre numrul de cromozomi i
durata vieii unei plante. Numeroase specii perene au provenit din plante anuale cu un numr mic
de cromozomi. Astfel, Sorghum sudanensis, form anual, are n = 10 cromozomi n timp ce forma
peren, Sorghum helepense are n = 20 cromozomi; Helianthus annus, cu n = 17, este o specie
anual, pe cnd Helianthus tuberosus, specie peren are n = 51 cromozomi.
Pentru ameliorarea plantelor, autoploizii constituie un material biologic de o importan
deosebit.
Poliploidia determin sporirea cantitii de ADN, implicit a numrului de gene i respectiv a
variabilitii genetice generale de efectul de doz.
La plante, poliploidia este corelat cu importante modificri morfologice, fiziologice i
biochimice. n consecin, n programele de ameliorare a plantelor sunt utilizate formele
autoploide, valorificndu-se anumite particulariti, cum ar fi, vigoarea vegetativ, coninut ridicat
74
n proteine sau n vitamine, pigmenii, precum i rezintena sporit la temperaturi excesive, secet,
boli i duntori.
Din punct de vedere practic poliploidia are o importan economic deosebit. Astfel, la
triploizi, la care sterilitatea mpiedic reproducerea sexuat, nu se formeaz semine, ceea ce este
deosebit de util n cazul strugurilor pentru stafide (3n = 57), pepenelui verde (3n = 33),
bananierului (3n = 33) sau ananasului (3n = 75), forme preferate de consumatori.
La sfecla de zahr, triploizii au cel mai ridicat coninut de zahr i cea mai mare producie
de rdcini.
Formele autoploide sunt importante pentru sectorul plantelor ornamentale, deoarece
dimensiunile florilor sunt mai mari, pigmentaia este mult mai intens i florile se pstreaz mai
mult (lalele, crizanteme, garoafe, narcise).
Producerea de semine este un alt domeniu n care autoploidia are o mare aplicabilitate.
Datorit segregrii deficitare i ncetinit, prin autoploidie se pot obine combinaii hibride, cu
heterozis mai stabil n succesiunea generaiilor.
TEST DE EVALUARE
1. Definii euploidia.
Rspuns:
Euploidia variaie ce implic ntreg genomul, putem discuta despre o reducere sau
multiplicare a acestuia.

2. Definii monoploidia:

3. Definii poliploidia:

Exerciii:
Exemplu
1. Prin numarul de baza X, se intelege:
a) Numrul de cromozomi din celulele somatice
b) Numrul de cromozomi din celulele sexuale
c) Numrul haploid de cromozomi ai speciei ancestrale.
Rspuns: c
2. Liniile izogene se pot obine din:
a) poliploizi;
b) monoploizi;
c) perisoploizi.
3. Triticum aestivum este o specie:
a) autopoliploid;
75
b) haploid;
c) alopoliploid.
4. n procesul de producie prezint importan:
a) monoploizii;
b) poliploizii;
c) haploizii.

Rezumatul temei
n cazul n care modificrile numrului de cromozomi implic setul de baz X, avem
euploidie. Euploidia se poate referi la o reducere a setului de baz, caz n care avem monoploidie,
sau la o multiplicare a acestuia i este poliploidie.
Monoploizii sunt cu vigoare redus, sensibili la factorii de stress, sterili datorit meiozei
anormale i se pot utiliza n lucrrile de ameliorare; prin diploidizare se obin liniile izogene cu
interes n selecia speciilor autogame sau n obinerea hibrizilor comerciali F1 ce manifest heterozis
la speciile alogame. Formele monoploide pot fi obinute in vivo ct i in vitro.
Poliploizii, datorit numrului crescut de cromozomi prezint efectul de doz, cele mai multe
caractere de interes agronomic fiind amplificate i sunt folosii n producie. Dup modul de obinere
exist autopoliploizii i alopoliploizii. Autopoliploizii rezult n urma multiplicrii propriului numr
de cromozomi i sunt cel mai adesea fertili. Alopoliploizii se obin prin ncruciarea a dou specii
sau genuri diferite. Hibridul obinut este steril, dar prin dublarea numrului de cromozomi rezult
amfidiploidul care este fertil. Exist alopoliploizi naturali ( Triticum aestivum,Prunus domestica) i
artificiali ( Triticale= gru x secar, Batat= tomat x cartof). Inducerea poliploidiei se poate realiza
prin mai multe metode: tratamente cu ocuri de temperatur, metoda centrifugrii i a iradierii,
metoda regenerrii, metoda poliembrioniei, metoda tratamentului chimic.
n programele de ameliorare a plantelor sunt utilizate formele autoploide, valorificndu-se
anumite particulariti, cum ar fi, vigoarea vegetativ, coninut ridicat n proteine sau n vitamine,
pigmenii, precum i rezintena sporit la temperaturi excesive, secet, boli i duntori.
Euploidia

76
Tema nr.8
VARIAII ALE NUMRULUI DE CROMOZOMI. ANEUPLOIDIA.

Uniti de nvare:
aneuploidia: definiie i caracteristici;
tipuri de aneuploidie;
importana aneuploidiei
Obiectivele temei:
trecerea n revist a diferitelor tipuri de aneuploizi ;
evidenierea importanei aneuploizilor i utilizarea lor.
Timp alocat temei: 1 or
Bibliografie recomandat:
1. Casian, H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech.
2. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. I, Ed. Bioterra, Bucureti.

8.1 Aneuploidia
Aneuploidia, este fenomenul prin care modificarea numeric afecteaz numai anumite
perechi omoloage de cromozomi, adic n nucleul celulelor exist n plus sau n minus, unul sau
mai muli cromozomi.
Dac ntr-un cariotip alturi de numrul diploid de cromozomi (2n), se afl unu sau mai
muli cromozomi, aneuploidia este de tip hiperploid (polisomie). Dac din garnitura diploid se
pierde unul sau mai muli cromozomi, aneuploidia este de tip hipoploid (oligosomie).
Cu toate c aspectele genetice i citogenetice ale fenomenului de aneuploidie sunt diferite,
n esen toate au cauze comune i anume:
- non-disjuncia cromozomilor n mitoz sau meioz i, n consecin, repartizarea inegal a
materialului genetic la celulele fiice;
- formarea trivalenilor i univalenilor n loc de bivaleni normali;
- apariia aberaiilor n structura unor cromozomi;
- absena sinapsei sau sinapsis parial ntre unii cromozomi, fenomen mai frecvent observat
la cromozomii lungi. n general, vitalitatea i fertilitatea aneuploizilor, este mai redus.
Gametul femel tolereaz mai bine aneuploidia, gameii masculi aneuploizi nu sunt viabili,
aneuploidia transmindu-se pe linie matern.
77
Ca urmare a efectului de doz, polisomii prezint unele particulariti, specifice
cromozomilor suplimentari. La oligosomi, ca urmare a reducerii dozei de material genetic, apar
caracteristici noi fa de formele iniiale 2n, fapt care permite stabilirea importanei fiecrui
cromozom.

8.2 Tipuri de aneuploidie


Hiperploidia sau polisomia, se ntlnete n situaia cnd, pe lng perechea de cromozomi
omologi se gsete un cromozom n plus, adic 2n + 1, fenomen numit trisomie sau, cnd unei
perechi de cromozomi i se altur doi cromozomi, 2n + 2, fenomen denumit tetrasomie.
Trisomia a fost evideniat, pentru prima dat, de A.F. Blakeslee (1921) ntr-o cultur de
Datura stramonium, 2n = 24, a cror plante posedau habitus modificat, viguroase i cu frunze
deosebite de celelalte. J. Belling (1924), analizndu-le citologic constat existena unui cromozom
n plus, adic 2n=24+1, fa de forma euploid normal.
Dup tipul extracromozomului i a configuraiilor din profaza I, exist mai multe clase de
trisomie:
- trisomia primar, atunci cnd n meioz extracromozomul se comport asemntor cu cei
doi omologi la care se ataeaz, formnd o configuraie n lan, un trivalent. Dac se formeaz un
extravalent, la dou perechi de cromozomi, fenomenul se numete trisomie primar dubl
(2n+1+1);
- trisomia secundar, extracromozomul este un izocromozom (izocromozomul se formeaz
ca urmare a diviziunii transversale i nu longitudinale a centromerului),care n meioz, n
zigonem, formeaz configuraii de inel;
- trisomia teriar, extracromozomul este un cromozom translocat, care n meioz mpreun
cu celelalte dou perechi, formeaz un lan.
Tetrasomia a fost observat pentru prima oar tot la Datura stramonium. n urma
fecundrii unui ovul n+1 cu polen n+1, rezult un tetrasom. Polisomia poate afecta oricare pereche
de cromozomi, att la organismele diploide ct i la cele poliploide. n general, tetrasomia nu are
afecte negative asupra organismului vegetal.
i la om sunt cunoscute cteva maladii genetice determinate de fenomenul de trisomie
autozomal sau heterozomal.
Sindromul Down sau trisomia 21, a fost primul exemplu de trisomie la om, descris n 1866
de ctre Down. Persoanele afectate au expresia feei de tip mongoloid, nsoit de anomalii
cardiace, ntrziere minatal, talie redus, greutate corporal mic.
78
Sindromul Klinefelter (XXY) sau trisomia pentru cromozomii sexului, determin la
persoanele afectate o slab dezvoltare sexual, atrofie testicular, ginecomastie, retardare mintal
i sterilitate.
Exist i tipuri de sindrom Klinefelter cu constituia XXYY sau XXXY. Adiia suplimentar
de heterozomi amplific severitatea simptomelor, manifestri antisociale i comportament agresiv,
anomalii ale personalitii, nlime foarte mare.
Hipoploidia sau oligosomia reprezint starea unor celule sau a unor organisme care au
pierdut un cromozom din garnitura normal, fenomen denumit monosomie (2n-1) sau o pereche de
cromozomi, fenomen denumit nulisomie (2n-2).
Hipoploidia se ntlnete foarte rar la speciile diploide. Organismele monosomice sau
nulosomice nu sunt viabile dac cromozomul care lipsete este de importan vital. ansa de
supravieuire o au numai speciile poliploide, ca urmare a fenomenului de compensare, determinat
de efectul de doz. Monosomia pentru cromozomul X, sau sindromul Turner, se ntlnete la
specia uman. Femeile cu un singur cromozom X nu posed cromatin sexual, au statur mic,
gt plat, dezvoltare sexual rudimentar, ntrziere mintal.
La mamifere, formele trisomice sau monosomice pentru heterozomii X, pot fi depistate
citologic prin intermediul cromatinei sexuale Barr.

8.3 Importana aneuploizilor


Din punct de vedere teoretic, aneuploizii asigur identificarea rolului genetic al unor
cromozomi, legturile dintre cromozomi, precum i rolul diferitelor gene n expresia fenotipic a
unor caracteristici. Stabilirea rolului pe care l au cromozomii, prin absena lor din garnitura
cromozomal, este dificil de realizat, deoarece fiecare cromozom are o semnificaie bine conturat
n supravieuirea gametului sau a individului.
Dei organismele aneuploide nu au importan economic direct, cercetrile n acest
domeniu au luat amploare, datorit rolului lor n procesul de ameliorare a plantelor.
O realizare deosebit n acest domeniu a avut-o E.R. Sears (1953), care a reuit s creeze 21
de linii nulisomice la soiul de gru Chinese Spring, stabilind astfel rolul genetic al fiecrui
cromozom. Un caracter, dac este controlat de o gen plasat pe un anumit cromozom, efectele
acestei gene pot lipsi la plantele nulisomice pentru perechea respectiv de cromozomi.
Dup obinerea tuturor liniilor nulisomice i precizarea rolului genetic al cromozomilor s-a
putut trece la substituirea acestora dintr-un genom, cu cromozomi aparinnd altui genom, de la
alt specie. Metoda permite nlocuirea unuia sau mai multor cromozomi din genomul diploid a
79
unei specii, cu un numr egal de cromozomi omologi, provenii de la o alt specie, realizndu-se
astfel genotipuri cu o valoare de recombinare mbuntit.
n liniile de substiutuie intraspecific, pot fi fixate anumite caracteristici valoroase de la
donori cu gene particulare valoroase n receptori cu structur genetic deficitar pentru o gen
(rezistena la boli i la condiii nefavorabile de mediu).
Lucrrile lui B.C. Jenkins (1956), privind adiia i substituia de cromozomi de la secar
(specie donor), purttoarea unor caractere valoroase (rezistena la ger, la soluri acide i duntori)
la gru (specie receptor), a dus la obinerea de linii de substituie cu 2n=42 cromozomi, dintre care
40 de cromozomi ai grului i doi cromozomi de la secar, purttori de gene valoroase.
Utilizarea aneuploidiei n ameliorarea plantelor are i unele dezavantaje, deoarece, uneori
specia receptoare pierde gene valoroase, situate pe cromozomul substituit, iar o dat cu
ncorporarea cromozomului strin, pe lng gene valoroase, pot fi incluse i unele gene nedorite.
Numrul de cromozomi, este o caracteristic de baz a tututror organismelor.
Aneuploizii au avut de asemenea un rol important n evoluia speciilor. Monosomii (2n-1) i
trisomii (2n+1) permit precizarea rolului unor cromozomi i ntocmirea hrilor cromozomale.
TEST DE EVALUARE
1. Definii aneuploidia.
Rspuns:

Aneuploidia, este fenomenul prin care modificarea numeric afecteaz numai anumite perechi
omoloage de cromozomi, adic n nucleul celulelor exist n plus sau n minus, unul sau mai
muli cromozomi.

2. Precizai tipurile de aneuploidie.

3. Enumerai cauzele apariiei aneuploizilor.

Exerciii:
Exemplu
1. Nulisomia poate fi letal:
a) pentru organisme diploide;
b) pentru organisme poliploide.
80
Rspuns: a
2. O specie care are 2n=16, ci monosomici diferii poate forma?
a) 16;
b) 32;
c) 8.
3. Aneuploizii prezint importan pentru:
a) ameliorare;
b) producie;
c) producere de smn.
Rezumatul temei
Aneuploidia, este fenomenul prin care modificarea numeric afecteaz numai anumite
perechi omoloage de cromozomi, adic n nucleul celulelor exist n plus sau n minus, unul sau
mai muli cromozomi. n general, vitalitatea i fertilitatea aneuploizilor, este mai redus.
Hiperploidia sau polisomia, se ntlnete n situaia cnd, pe lng perechea de cromozomi
omologi se gsete un cromozom n plus, adic 2n + 1, fenomen numit trisomie sau, cnd unei
perechi de cromozomi i se altur doi cromozomi, 2n + 2, fenomen denumit tetrasomie.
Hipoploidia sau oligosomia reprezint starea unor celule sau a unor organisme care au
pierdut un cromozom din garnitura normal, fenomen denumit monosomie (2n-1) sau o pereche de
cromozomi, fenomen denumit nulisomie (2n-2).
Apariia diferitelor tipuri de aneuploizi se poate datora:
- non-disjuncia cromozomilor n mitoz sau meioz i, n consecin, repartizarea inegal a
materialului genetic la celulele fiice;
- formarea trivalenilor i univalenilor n loc de bivaleni normali;
- apariia aberaiilor n structura unor cromozomi;
- absena sinapsei sau sinapsis parial ntre unii cromozomi, fenomen mai frecvent observat
la cromozomii lungi.
Aneuploizii asigur identificarea rolului genetic al unor cromozomi, legturile dintre
cromozomi, precum i rolul diferitelor gene n expresia fenotipic a unor caracteristici.
n liniile de substiutuie intraspecific, pot fi fixate anumite caracteristici valoroase de la
donori cu gene particulare valoroase n receptori cu structur genetic deficitar pentru o gen
(rezistena la boli i la condiii nefavorabile de mediu).

81
Tema nr. 9
RESTRUCTURRI CROMOZOMIALE
Uniti de nvare:
restructurri cromozomiale: caracteristici i clasificare;
restructurri ce afecteaz numrul de gene : deleii i duplicaii;
restructurri ce afecteaz ordinea genelor pe cromozomi: inversii i translocaii.
Obiectivele temei:
fixarea tipurilor de restructurri cromozomiale ;
identificarea efectelor fenotipice i genotipice ale diferitelor tipuri de restructurri
cromozomiale.
Timp alocat temei: 2 ore
Bibliografie recomandat:
1. Casian, H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech.
2. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. I, Ed. Bioterra, Bucureti.

9.1. Restructurri cromozomiale caracteristici i clasificare


Speciile de plante i animale au cromozomi cu o organizare, volum, lungime i form bine
definite. Aceste caracteristici sunt n general constante i se pastreaz de la o generaie la alta,
datorit capacitaii cromozomilor de a se duplica identic la fiecare diviziune celular. Pe fiecare
cromozom exist, n mod normal, cte un centromer, care ocup o poziie fix. De-a lungul
cromozomilor se gsesc, n ordine liniar, genele, al cror numr este caracteristic pentru fiecare
cromozom i sunt aranjate ntr-o ordine serial precis.
Ocazional, sub influena unor factori naturali sau artificiali (fizici sau chimici), structura
cromozomilor poate s se schimbe. Tipurile de modificri care afecteaz structura cromozomilor
au fost denumite dislocaii (aberaii cromozomiale sau anomalii cromozomiale). La baza acestor
schimbri structurale st nsuirea cromozomilor de a se fragmenta (rupe) transversal sub aciunea
anumitor ageni fizici sau chimici i capacitatea fragmentelor cromozomale de a se reuni prin
capetele lor (n punctele de ruptur) sau de a se alipi la ali cromozomi care au suferit fragmentri
n lungimea lor. n felul acesta, pot avea loc rearanjri ale materialului cromozomal care, in esen
determin modificri structurale n numr limitat. Fiecare cromozom poate fi afectat de una sau
mai multe rupturi, iar fragmentele rezultate se pot reuni dnd aranjamente noi, care genereaz
formarea de cromozomi noi sau grupe linkage diferite i, n consecin, cariotipuri modificate.
82
n cadrul unui anumit cromozom, schimbrile pot avea loc n acelai bra sau ntre cele dou
brae. Segmentele rezultate din fragmentarea cromozomului pot fi mici, afectnd numai
extremitile cromozomului sau pot fi mari, includ i centromerul. La unirea segmentelor se poate
pstra succesiunea liniar a genelor sau pot apare succesiuni noi care, adesea, sunt nsoite de
"efecte de poziie".
La nivelul cromozomilor omologi sau al cromatidelor acestora pot apare, de asemenea,
schimbri structurale rezultate din unirea fragmentelor aprute sub influena diferiilor factori
dislocani (mutageni).
La nivelul cromozomilor neomologi, schimburile de material genetic, ca urmare a unirii
segmentelor dislocate din doi sau mai muli cromozomi neomologi, pot determina modificri n
structura i numrul genelor sau n succesiunea lor.
Inducerea modificrilor structurale ale cromozomilor se realizeaz spontan, cu o frecven
relativ mic, diferit de la o specie la alta, determinate de cauze nc puin cunoscute i artificial,
cu o frecven mult mai mare, prin folosirea unor ageni fizici sau chimici cu rol dislocant.
Cercetarea modificrilor structurale i morfologice la cromozomii afectai de dislocaii a
relevat faptul c acestea se pot grupa n principal, n dou categorii distincte, i anume:
I. Schimbri n numrul de gene (deleii i duplicaii);
II.- Schimbri n succesiunea (aranjarea) genelor (inversii i translocaii).

9.2. Deleii i duplicaii


1. Deleia sau deficiena, care const n pierderea unui fragment de cromozom (cu una sau mai
multe gene). Asemenea nuclei, celule sau indivizi sunt deficieni pentru gena sau genele
respective.
Deficiena poate afecta unul sau mai muli cromozomi i poate avea loc n orice poriune a
cromozomului. Cnd se pierde un segment terminal, deleia se numete terminal, iar cnd se
pierde un segment central, deleia se numete intercalar sau interstiial. Fragmentele pierdute
care sunt lipsite de centromer (acentrice) i nu se ataeaz la ali cromozomi, care au suferit i ei
rupturi, nu sunt viabile. Ele se resorb n masa citoplasmei.
Efectul deleiilor asupra vigorii i feritilitii organismului este diferit, n funcie de natura
organismului i de mrimea fragmentului pierdut. Pierderea unor fragmente mari este, de cele mai
multe ori, letal pentru organism sau pentru gameii n care se produc.
Deleiile sau deficienele pot fi homozigote (cnd ambii gamei prezint aceeai deficien)
sau heterozigote (cnd numai un gamet prezint deficien).
83
Identificarea deficienelor se poate face prin metode citologice i genetice. Din punct
de vedere citologic, nu se pot detecta deleiile n stare homozigote, ci numai n stare heterozigot.
Deleiile terminale se pot observa la microscop prin faptul c datorit deficienei
cromozomul este mai scurt (vezi fig. 9.1.). n cazul deficienelor intercalare, la mperecherea
cromozomului deficient cu omologul sau normal, acesta din urm formeaza o bucl n poriunea
segmentului n plus, care permite detectarea deficienei . Cu ct deficienele sunt mai mari, cu att
ele pot fi mai uor evideniate citologic. Cromozomii deficieni la ambele capete formeaz cel mai
adesea cromozomi inelari i fragmente acentrice. La organismele heterozigote, cu deficien n
cromzomul ce posed alelele dominante se vor manifesta alelele recesive din cromzomul pereche,
alele corespunzatoare celor din fragmentul pierdut. Aceasta d natere la fenomenul de
pseudodominan. De asemenea, unele deleii pot fi identificate i prin modificarea raportului de
segregare.
Fig. 9.1. Deleie terminal

Fig. 9.2. Deleie intercalar i conjugarea cromozomilor

84
2. Duplicaia const n catigarea unui fragment de la un cromzom omolog. n urma
duplicaiei organismul respectiv posed una sau mai multe alele n duplicat, n acelai cromozom.
ntr-o celul diploid o anumit gen sau mai multe gene sunt reprezentate de dou ori.
Apariia duplicaiei presupune ruperea simultan a doi cromozomi, deoarece segmentele
cromozomale se pot uni numai cu alte segmente care prezint cel puin un punct de ruptur.
Segmentele cromozomale nu se pot uni cu cromozomi ntregi. Dup un anumit timp, fragmentele
de cromozomi i pierd capacitatea de reunire. Segmentele de cromozomi pot fi inserate la un
cromozom omolog, parial omolog sau chiar la unui neomolog, n diferite poziii. Cnd segmentul
de cromozom transpus ocup poziia dup segmentul identic (de exemplu GHGH), duplicaia se
numete n tandem. n alte cazuri, duplicaia este dispus n tandem invers (GHHG), nu este
inserat dup segmentul identic (GHIJGH) sau este dispus n cromozomi neomologi
(ABCDEFGHI - MNOPQRGHST).

Fig. 9.3. Conjugarea n meioz ntre un cromozom normal i omologul su duplicat

Cel mai adesea, duplicaia rezult n urma fenomenului de crossing over inegal. Din acest caz,
duplicaia apare ntr-unul din cromozomii omologi, pe cnd n cellalt cromozom omolog va rezulta
o deficien . Un exemplu foarte cunoscut de duplicaie este la Drosophila melanogaster, la locusul
Bar din cromozomul X (vezi fig. 9.4.). La plante (porumb, orz, maare, etc) se cunosc, de
asemenea, mai muli loci duplicai, n diveri cromozomi.

85
Fig. 9.4. Duplicaia segmentului cromozomal cu locusul Bar la Drosophila

Detectarea duplicaiilor se face att prin studii citologice, ct i prin observaii asupra efectelor
fenotipice la indivizii afectai. Studiile citologice pentru evidenierea unei duplicaii se realizeaz
mult mai uor comparativ cu deficiena terminal. Duplicaiile heterozigote mai lungi formeaz
bucle n profaza I a meiozei (stadiul de pachinem). Trebuie stabilit dac aceste bucle sunt
determinate de o deleie (unde face bucla cromozomul normal) sau de inversiune (unde particip
ambii cromozomi la formarea buclei). Organismele care posed duplicaii pot determina un fenotip
nou ce poate afecta uneori, un complex de caracteristici care se transmit la urmai.
Adesea, la realizarea fenotipului nou se adaug influena genelor adiacente (efectului de
poziie), ct i schimbarea balanei genelor.

9.3. Inversii i translocaii


1. Inversiunea const n rotirea unui fragment distinct cu 180 n cadrul aceluiai cromozom.
n acest caz, un segment de cromozom se detaseaz i, apoi, se reaeaz cu genele n ordinea
inversat. Aceasta mpiedic apariia crossing over-ului ntruct regiunile inversate i cele
neinversate din cromozomii omologi nu au loc sinapse. Acest supresor al crossing over-ului este
simbolizat cu litera C.
Cnd inversiunea are loc n acelai bra al cromozomului, fr s includ centromerul, se
numeste inversiune paracentric (ABCDE.HGFI). Dac inversiunea afecteaz segmente
cromozomale n care este cuprins i centromerul se numete inversiune pericentric
(ABGFE.DCHI). n acest caz, ruperile pot fi apropiate de centromer la distane simetrice sau
86
asimetrice. Mecanismul apariiei unei inversii este prezentat n figura de mai jos (fig. 9.5.).
Inversiunea poate fi heterozigot cnd afecteaz numai unul dintre cromozomii omologi, sau
homozigot cnd afecteaz ambii cromozomi omologi.

Cromozomii afectai de inversiunea homozigot au o comportare citologic normal.

Fig. 9. 5. Mecanismul apariiei unei inversiuni

Fig. 9. 6. Conjugarea cromozomilor n cazul inversiei

n cazul inversiunii heterozigote paracentrice cromozomul afectat de inversiune face o bucl


prin rsucire, n timp ce crozomul omolog normal, formeaz o "bucl" corespunztoare cromozomului
inversat, n aa fel nct, alelele homoloage s ajung n aceeai poziie (fig. 9.6.). Dac inversiunea
afecteaz un segment destul de mare, este posibil s apar fenomenul de crossing over n bucla ce
se formeaz. Ca urmare, poate rezulta n urma crossing over-ului un cromozom dicentric i unul
acentric
87
n cursul anafazei I a diviziunii meiotice, cromozomul dicentric va forma o punte datorit
tendinei de migrare a celor doi centromeri ctre polii opui. Asemenea puni de inversie au fost
observate la numeroase plante i animale.
Inversiunile au importan n formarea unor cariotipuri noi i, deci, a unor forme noi, n
localizarea unor gene, n meninerea unor stocuri genetice (prin inhibarea crossing over-ului), n
fixarea genetic a heterozisului, etc.

2. Transpoziiile i translocaiile sunt schimbri intra i, respectiv, inter cromozomale.


Transpoziia reprezint transferul unui segment de cromozom dislocat, ntr-o alt poziie, n
acelai cromozom. Efectul fenotipic major este marcat de efectul de poziie.
Translocaia reprezint schimbul de segmente cromozomale ntre cromozomii neomologi.
Segmentele de cromozomi translocate pot cuprinde o poriune de cromozom sau chiar un bra
ntreg. Schimbul de segmente cromozomale se realizeaz n urma ruperii cromozomilor. Alipirea
segmentelor de cromozomi se face numai n punctele unde au avut loc ruperi.
Studiile citologice au scos n eviden mai multe tipuri de translocaii. Tipul cel mai frecvent l
reprezint translocaia reciproc, care const n schimbul de fragmente cromozomale ntre doi sau
mai muli cromozomi neomologi. Cnd schimbul de fragmente se realizeaz ntre doi cromozomi
neomologi se numete translocaie simpl, iar ntre toi cromozomii din nucleu, se numete
translocaie complex sau multipl. Uneori, pot fi afectai succesiv, reciproc, trei sau mai muli
cromozomi - n acest caz, translocaia se numete succesiv.
Translocaia poate fi heterozigot sau homozigot, dup cum sunt afectai unul sau ambii
cromozomi dintr-o pereche homoloag, prezentnd aceleai translocri de segmente cromozomale.
Prin ncruciarea unor indivizi normali cu indivizi afectai de translocaie reciproc se obin
hibrizi de translocaie, care n pachinem formeaz diferite configuraii specifice cromozomilor
translocai. La imperecherea, de exemplu a doi cromozomi translocai cu cromozomii omologi
normali, cei patru cromozomi vor forma o figur n form de cruce, care permite asocierea
poriunilor homoloage pe ntreaga lungime a cromozomilor. n diachinez translocaiile heterozigote
formeaz o configuraie n form de "8". Forma de inel apare n lipsa chiasmei dintre centromer i
punctul de translocaie (regiunea interstiial), iar forma de "8", dup apariia chiasmei n regiunea
interstiial .

88
Fig. 9. 7. Translocaia heterozigot i conjugarea meiotic

n urma meiozei, heterozigoii pentru translocaie produc 50% gamei fertili (cei care conin
toate genele) i 50% gamei sterili (cei n care lipsesc gene). Prin fecunadrea liber a gameilor fertili
se obin 25% indivizi homozigoi normali, 50 heterozigoi de traslocaie i 25% homozigoi de
trasnlocaie. n descendena, indivizii homozigoi (att cei normaii, cat i cei de translocaie) vor fi
stabili, iar indivizii heterozigoi de translocaie vor segrega n acelai raport de 1:2:1. Hibrizii de
translocaie se identific relativ uor citologic, prin configuraiile specifice de cercuri sau de inele i
prin procentul de circa 50% polen steril.
Apariia translocaiei a fost studiat la microorganisme (Escherichia, Aspergillus,
Neurospora), la Drosophila, la plantele superioare (orz, porumb, mazre, tomate, gru, tutun etc),
la animale i la om (relevata prin numeroase anomalii ereditare).
Prin translocaie se pot transfera gene de rezisten la factorii de stress sau alte gene dorite
de om. n acest scop, se aplic hibridarea cu specii slbatice sau specii rustice, urmat de inducerea
la hibrizi a unor dislocaii cu ajutorul unor ageni fizici sau chimici i selecia descendenilor
valoroi care posed genele transferate. Metoda a dat rezultate bune la gru, unde E.R.Sears (1956)
89
a reuit s transfere gene de rezisten la rugina brun de la Aegilops umbellulata la grul hexaploid.
De asemenea, translocaiile au fost utilizate la provocarea sterilitii unor specii de plante agricole
i pomi fructiferi.
n cercetrile de genetic teoretic unele translocaii se folosesc drept markeri genetici n
analizele citologice i hibridologice, la fixarea heterozisului i localizarea pe cromozom a unor
gene.
La unele specii un numr mare de cromozomi au suferit translocaii reciproce, formnd aa-
numitele sisteme de translocaie. Aa este cazul celor mai multor specii de Oenothera. n timp ce O.
hookerii formeaz n mod regulat 7 bivaleni, la 0. biennis cei 14 cromozomi se dispun n dou
inele (unul din 6 i altul din 8 cromozomi) datorit unor translocaii multiple, iar la O. muhcata toi
cei 14 cromozomi formeaz un singur inel .
O importan deosebit n ameliorarea plantelor o are inducerea translocaiilor multiple, n
care sunt implicai toi cromozomii din cariotip ntr-un singur inel de translocaie. Acest fenomen,
observat la Oenothera lamarkiana a servit ca model pentru crearea unor genotipuri homozigote la
porumb. Astfel, C.R. Bumham (1946) a sugerat faptul c i la porumb se poate obine o linie de
translocaie multipl care s includ ntr-un singur inel toi cei 10 cromozomi din setul haploid.
Prin ncruciarea acesteia cu o form normal se obine n F1 un hibrid care conine inelul haploid de
translocaie i un set haploid de cromozomi (n = 10 cromozomi normali). Prin autopolenizarea
hibrizilor F1 de translocaie vor rezulta n F2 25 % genotipuri de translocaie, 50 % heterozigoi de
translocaie i 25% homozigoi normali, care reprezint o linie pur genetic (homozigot) obinut
numai n dou generaii.
Prin schimbul de segmente cromozomale cu ajutorul agenilor dislocani se pot obine noi
grupe linkage cu gene favorabile, ducnd astfel, la obinerea de soiuri noi.
Principala metod de detectare a translocaiilor este cercetarea citologic n timpul meiozei
sau mitozei, care pe baza configuraiilor specifice n diferite faze ale diviziunii celulare, permit s
se precizeze localizarea, tipul i frecvena translocaiilor la diferite organisme analizate.

TEST DE EVALUARE
1. Precizai tipurile de restructurri cromozomiale:
Rspuns:
Acestea se pot grupa n principal, n dou categorii distincte, i anume:
I. Schimbri ale numrului de gene (deleii i duplicaii);
II.- Schimbri n succesiunea (aranjarea) genelor (inversii i translocaii).
90
2. Precizai tipurile de deleii:

Exercitii:
Exemplu
1. Restructurrile cromozomiale ce afecteaz numrul de gene, sunt:
a) inversiunile;
b) deleiile;
c) deleiile i duplicaiile.
Rspuns: c
2. Starea de hemizigoie poate fi ntlnit n cazul:
a) deleiilor;
b) duplicaiilor;
c) deleiilor i duplicaiilor.
3. Pentru meninerea efectului heterozis ar putea fi utilizate:
a) deleiile;
b) translocaiile;
c) duplicaiile.

Rezumatul temei

Ocazional, sub influena unor factori naturali sau artificiali (fizici sau chimici), structura
cromozomilor poate s se schimbe. Tipurile de modificri care afecteaz structura cromozomilor
au fost denumite dislocaii (aberaii cromozomiale sau anomalii cromozomiale).
La baza acestor schimbri structurale st nsuirea cromozomilor de a se fragmenta (rupe)
transversal sub aciunea anumitor ageni fizici sau chimici i capacitatea fragmentelor
cromozomale de a se reuni prin capetele lor (n punctele de ruptur) sau de a se alipi la ali
cromozomi care au suferit fragmentri n lungimea lor.
n felul acesta, pot avea loc rearanjri ale materialului cromozomal care, in esen determin
modificri structurale n numr limitat.
Fiecare cromozom poate fi afectat de una sau mai multe rupturi, iar fragmentele rezultate se
pot reuni dnd aranjamente noi, care genereaz formarea de cromozomi noi sau grupe linkage
diferite i, n consecin, cariotipuri modificate.
Restructurrile cromozomiale pot fi clasificate astfel:
1. Restructurri ce afecteaz numrul de gene:
a) deleii - const n pierderea unui fragment de cromozom (cu una sau mai multe gene).
Asemenea nuclei, celule sau indivizi sunt deficieni pentru gena sau genele respective.
91
b) duplicaii - const n catigarea unui fragment de la un cromzom omolog. n urma
duplicaiei organismul respectiv posed una sau mai multe alele n duplicat, n acelai
cromozom, ntr-o celul diploid o anumit gen sau mai multe gene sunt reprezentate de
dou ori.
c) inversiunea const n rotirea unui fragment distinct cu 180 n cadrul aceluiai cromozom.
d) transpoziiile i translocaiile sunt schimbri intra- i, respectiv, inter cromozomale.

Transpoziia reprezint transferul unui segment de cromozom dislocat, ntr-o alt poziie, n
acelai cromozom. Efectul fenotipic major este marcat de efectul de poziie. Translocaia
reprezint schimbul de segmente cromozomale ntre cromozomii neomologi.

92
Tema nr. 10
DETERMINISMUL GENETIC AL SEXELOR

Uniti de nvare:
Determinismul cromozomial al sexelor;
Determinismul genomial al sexelor;
Determinismul genic al sexelor;
Reglajul genetic al diferenierii sexelor la plante;

Obiectivele temei:
prezentarea i fixarea mecanismelor genetice prin care este determinat sexul;
cunoterea reglajului genetic al diferenierii sexelor la plante i influena hormonilor vegetali;

Timp alocat temei: 3 ore


Bibliografie recomnadat:
1. Badea, E., Rduoiu, S., Nicolae, I., Raicu, P., 2000, Genetica-genetic molecular i inginerie
genetic, Ed. Bioterra, Bucureti.
2. Brooker, R. J., 2000, Genetica. Analisi e principi, Zanichelli.
3. Brackdorff, N., 1984, Linactivation du chromosome X, La Recherche, Vol. 25, 136-141.
4. Casian, H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech.

10.1. Determinismul cromozomial al sexelor


La un numr nsemnat de specii de animale i plante, sexul este determinat de o pereche de
cromozomi denumii cromozomii sexului sau heterozomi. Unul din sexe este homogametic
(produce un singur tip de gamei) i se noteaz, de regul cu XX, iar cellalt sex este
heterogametic (produce dou tipuri de gamei) i se noteaz cu XY sau XO. La unele specii de
plante i animale n determinismul sexului sunt implicai mai mui heterozomi.
A) Sexul mascul heterogametic. La mamifere (inclusiv om) i la unele insecte (Diptere) masculii
normali au constituia genetic XY i produc dou tipuri de gamei: X i Y, iar femelele au
constituia genetic XX i produc un singur tip de gamei: X. Acest tip de determinism etse cunoscut
sub denumirea de tipul XY (tipul Drosophila) i se prezint astfel:

93
n fiecare generaie se asigur astfel, un raport de 1:1 ntre masculi i femele.
La anumite insecte din ordinul Hemiptera i Orthoptera, masculii sunt de asemenea
heterogametici, ns ei conin un singur cromozom X care nu are un omolog Y (au un cromozom
mai puin). Acest determinism este denumit curent tipul XO (tipul Protenor) i se prezint astfel:

B) Sexul femel heterogametic. Se ntlnete la insectele din ordinul Lepidoptera, Trichoptera,


la amfibieni, peti, psri etc.
Sexul femel heterogametic poate prezenta dou tipuri, i anume: XY(tipul Abraxas) i XO
(tipul fluture).
Masculii sunt homogametici XX. Uneori, se noteaz femelele cu ZW sau ZO, iar masculii cu
ZZ, n scopul de a atrage atenia c femela este heterozigot.

Determinismul de tipul XY (ZW) se prezint n felul urmtor:

94
1 : 1

Determinismul de tipul XO sau ZO se prezint astfel:

10.2. Determinismul genomial al sexelor


Este cunoscut faptul c albinele mascule (trntorii) se dezvolt prin partenogenez din ou
nefecundate i sunt, deci, haploizi (n). femelele (att lucrtoarele, ct i reginele) se dezvolt din
ou fecundate i sunt diploide (2n). Nici un cromozom sexual nu este implicat n acest mecanism
de deteminare a sexului (caracteristic ordinului Hymenoptera, din care fac parte furnicile, albinele,
viespile etc.). Cantitatea i calitatea hranei de care dispun larvele diploide detremin apariia unor
lucratoare sterile sau a unei regine fertile. Deci, mediul influeneaz numai sterilitatea sau
fertilitatea, fr s intervin n determinismul sexului care este controlat genetic. Proporia ntre
femele i masculi n descenden este sub controlul reginei. Majoritatea oulor depuse de regin
(matc) vor fi fecundate i vor rezulta femele diploide (lucrtoare) sterile. Oule pe care regina le
alege nu vor fi fecundate i vor da natere la masculi haploizi fertili. Fa de regina diploid (2n),
la care meioza este normal, la masculii haploizi (n) meioza este anormal, fr reducerea
95
cromatic. Astfel, n prima diviziune a meiozei (diviziunea heterotipic) toi cromozomii, n numr
haploid, migreaz spre un singur pol, rezultnd o singur celul haploid (de restituie), iar n
diviziunea urmtoare (diviziunea homeotipic) rezult doar o diad spermatidic i, ulterior gamei
funcionali (fertili).

10.3. Determinismul genic al sexelor

a) factori sexuali complementari. La insectele din ordinul Hymenoptera se cunosc cel


puin dou specii la care determinarea sexului mascul este sub controlul unui singur locus (o alel
haploid sau n stare diploid homozigot). La viespea parazit Bracon hebetor, denumit frecvent
Habrobracon juglandis, se cunosc cel puin 9 alele la locusul sexului, care se noteaz cu s a, s b,
s c,, s i). Toi masculii sunt fie diploizi homozigoi, indiferent pentru care dintre alele (s as a, s
b
s b, s is i ), fie haploizi pentru una din alelele acestui locus (s a, s b, sc,.., s i). Femelele sunt
obligatoriu heterozigote (s as b, s bs c, s bs I etc.). Acest tip de determinism genic se prezint astfel:

P: s as b sa

Femel diploid mascul haploid

G: sa sb x sa

F1: sa s as a s as b sb

mascul mascul femel mascul

haploid diploid diploid haploid

Printre descendenii diploizi exist un mascul la o femel (s as a, s as b); printre descendenii


haploizi exist doi masculi (s a, s b ).

b) gene transformatoare de sex. La Drosophila o gen recesiv (tra) de pe cromozomul 3,


n stare homozigot transform o femel diploid ntr-un mascul steril.

Femelele XtraXtra seamn morfologic cu masculii normali, cu excepia faptului c au


testicule reduse. Aceast gen este fr efect la masculii normali, adic XtraY.

c) determinismul monogenic la microorganisme. La unele microorganisme


(Chlamidomonas, Neurospora, etc) tipul sexual este sub controlul unui cuplu de alele. Indivizii
haploizi care posed aceeai alel nu fuzioneaz pentru a forma un zigot; indivizii cu alele diferite
ale aceluiai locus sexual fuzioneaz i produc zigoi.
96
10.4. Reglajul genetic al diferenierii sexelor la plante
Studiul sexualitii la plante are importan pentru cunoaterea mecanismelor diferenierii
organelor de reproducere al florilor, a raportului dintre sexe i a determinismului genetic al
componentelor de producie (numr de flori pe plant, numr de fructe pe plant, greutatea medie
a fructelor etc.). De asemenea, cunoaterea determinismului genetic al sexelor permite modificarea
raportului ntre sexe n favoarea unor obiective economice, inhibarea funcinrii unuia dintre sexe
(de exemplu, androsterilitatea) cu impotan n producerea de semine hibride, transformarea
genetic a plantelor monoice n dioice, etc.
La gimnosperme, majoritatea speciilor sunt dioice, n timp ce la angiosperme dimorfismul
sexual (dioicitatea) este un fenomen rar (circa 0,5-0,7 %), cuprinznd un numr relativ mic de
specii, dintre care menionm: Cannabis sativa, Humulus lupulus, Bryonia dioica, Melandrium
album, Urtica dioica, Fragaria elatior, etc., precum i speciile de Populus, Salix, Rumex, .a.
Marea majoritate a angiospermelor sunt ns hermafrodite (90-93 %) i unisexuat monoice (5-7
%).
Dup modul de fecundare, cele mai multe specii de plante sunt alogame i previn
autopolenizarea prin diferite mecanisme morfo-fiziologice i genetice. Numrul speciilor
autogame sau preponderent autogame este mic.
Fa de cele menionate mai sus, se poate conchide c n determinismul sexului la plante
sunt implicate mai multe mecanisme genetice.

10.4.1. Determinismul genetic la plantele dioice


Determinarea genetic a sexelor la plante s-a fcut cu precdere la speciile unisexuat dioice.
Pe baza cercetrilor la unele specii de plante dioice s-a constatat c sexele au un determinism genetic
cromozomial, asemntor cu tipul Drosophila sau tipul Abraxas, uneori fiind implicai
heterocromozomi multipli. Principalele tipuri de determinism cromozomial al sexelor sunt (dup T.
Crciun i colab., 1978):
- sexul femel XX i sexul mascul XY.
Acest mecanism se ntlnete la Canabis sativa, Melandrium album, Brionia dioica, Urtica
dioica, ca i celelalte specii sau varieti de Humulus, Populus, Salix, Vitis, Rumex etc. Acest
mecanism este prezent la speciile poliploide. Astefel, la specia tetraploid de Rumex tenuifolius
(2n = 4x = 28) sexul femel are structura (XX) XX, iar cel mascul (XX) XY. La specia hexaploid
de R. acetosella (2n = 6x = 42) sexul femel are structura (XXXX) XX i sexul mascul (XXXX)
XY. La speciile subdioice, la care sexul mascul heterogametic produce i flori subandroice (Vitis
97
vinifera, asparagus officinalis) pot aprea plante mascule cu structura YY viabile. Asemenea
indivizi masculi apar prin autopolenizarea plantelor subandroice (XY) care segreg n raportul
1XX : 2XY : 1XY. La alte specii dioice subandroice nu apar prin autopolenizare masculi YY, fie
datorit unei mutaii letale recesive, fie a deleiei locusului viabilitii din cromozomul Y;
- sexul femel XX i sexul mascul XO.
Acest tip de determinism se ntlnete la genul Dioscorea.
- sexul femel XX i sexul mascul XY1Y2.
n acest caz, sexul mascul are 2n + 1 cromozomi i este prezent la Rumex acetosa, R. hastatulus i
Humulus japonicus. Planta mascul produce n meioz tot dou tipuri de gamei, i anume: X i
Y1Y2 (acetia rmn legai).
- sexul femel X1X1X2X2 i sexul mascul X1Y1 X2 X2Y2.
Se ntlnete la Humulus lupulus var. cordifolius (2n = 16 A + 4 X femela i 2n = 16 A + 2X +
2Y masculul).
- sexul mascul XX i sexul femel XY.
Este similar cu tipul Abraxas i se gsete la unele forme din genul Fragaria.

10.4.2. Determinismul sexelor la plantele hermafrodite i monoice.


La aceste tipuri de plante, sexul este determinat de gene majore (determinism genic).
Ambele sexe sunt homogametice, iar n gameii lor se gsesc gene care favorizeaz feminitatea (F)
i masculinitatea (M sau m). Pe lng genele sexului, pot exista i alte gene care pot suprima
(inhiba) apariia unui sex sau altul. Astfel, prin recombinarea genelor normale cu cele mutante
(supresoare) implicate n fromarea organelor florale la porumb (plant monioc) C.A. Emerson
(1932) i D.F. Jones (1944) citai de T. Crciun i colab., 1978, au obinut plante dioice de
porumb. Ei au descoperit c n controlul genetic al sexelor la porumb sunt implicai trei loci, i
anume:
- locusul I: TS - determin panicul normal, cu flori mascule.
tsts - inhib formarea florilor mascule i determin apariia
florilor female n panicule.
- locusul II: SK - dezvoltarea normal a pistilului (carpelei).
sksk - inihib formarea pistilului.
-locusul III: Ba - dezvoltarea normal a tiuletelui (inflorescenei
femele).
baba - inhib formarea tiuletelui.
98
Prin combinarea n diferite moduri a genelor sexului, la porumb se pot obine urmtoarele
genotipuri i fenotipuri, care pot transforma porumbul n plant dioic:
TS ts sksk - mascul TS ts baba - mascul
tsts sksk - femel tsts baba - femel
La castravei, sexul este controlat, n general, de doi loci: St-st i M-m, ale cror combinare
n diferite moduri dau natere la urmtoarele genotipuri i fenotipuri ale sexului:
StStMM - plant monoic (masculi + femele);
ststMM - plant femel;
StStmm - plant andromonoic (masculi + femele);
Ststmm - plant cu flori hermafrodite.
Obinerea de linii consangvinizate ginoice cu capacitate de combinare ridicat (reacie
puternic n F1 o vigoare hibrid puternic i producii mari de castravei pe plantele ginoice
(mam), care evident au numai flori femele, productoare de fructe.

10.4.3. Hormoni vegetali si expresia sexului


Expresia sexului este afectat de ctre hormonii vegetali la multe specii monoice i dioice.
n plus, factorii de mediu, precum temperatura, fotoperioada pot induce reversia sexului, posibil
datorit schimburilor la nivelul hormonal. De asemenea, au fost observate diferene privind nivelul
hormonilor endogeni ntre cele dou sexe.
Efectul specific al hormonilor asupra sexului variaz n funcie de specie. De exemplu,
aplicarea giberelinei la florile femele de castravete conduce la masculinizarea acestora, iar
aplicarea sa pe florile mascule coduce la feminizarea lor. Exemplele de reversie sexual induse de
aplicarea hormonilor vegetali sugereaz c la multe specii cu flori unisexuate, meristemele
acestora sunt sexual bipotente, iar genele implicate n determinarea sexului pot determina reversia
sexual ca urmare a schimbrii nivelurilor sau raporturilor hormonilor endogeni.
Porumbul reprezint prima plant la care au fost izolate gene ce determin sexul. Aceste
gene au fost analizate din punct de vedere genetic, biochimic i molecular, iar rezultatele acestor
analize au condus la concluzia c hormonii vegetali joac un rol foarte important n procesul
determinrii sexuale. De exemplu, mutaiile genelor D (dwarf = piticire) i An1 (Anther ear 1 =
tiulete masculinizat 1) afecteaz dezvoltarea sexual a florilor din tiulete. Dezvoltarea pistilului
este normal, dar cea a staminelor este derepresat, fapt ce conduce la obinerea unei plante cu
paniculul hermafrodit, iar tiuletele masculinizat. Mutaiile acestor gene produc i o ntrziere a
nfloririi, o modificare a staturii plantelor, cauznd fenotipul de piticire. Studiile biochimice i
99
genetice au evideniat faptul c plantele mutante pentru gena D sunt deficiente n giberelin, iar
aplicarea exogen a acestui hormon conduce la revenirea plantelor la fenotipul normal.
TEST DE EVALUARE
Rspuns:
1. Caracterizaii determinismul cromozomial de tip Drosophila:
Tipul Drosophila se caracterizeaz prin sex femel homogametic de tip XX i sex mascul
heterogametic de tip XY sau XO la subtipul Protenor.

2. Caracterizai mecanismul genic de determinare a sexului.

Exerciii:
Exemplu rezolvat
1. Determinismul cromozomial al sexelor cuprinde tipurile:
a) protenor i fluture;
b) drosophila i abraxas;
c) drosophila i protenor.
Rspuns: b.
2. Plantele prezinta un control genetic al sexelor de tip:
a) genic;
b) cromozomial;
c) cromozomial i genic.
3. Genele sex-linkage sunt plasate pe:
a) autozomi;
b) heterocromozomi;
c) autozomi i heterocromozomi.

4. Cti cromozomi va avea un mascul n cazul unei specii ce aparine subtipului


Protenor, iar femela are 2n= 18
a) 18;
b) 19;
c) 17.
5. n cazul porumbului sunt implicate n controlul genetic al sexelor:
100
a) heterocromozomi
b) gene

Rezumatul temei
Caracterele sexuale de ordin morfologic, anatomic, fiziologic, comportamental sunt foarte
bine exprimate la animale i la om. La plantele superioare ele sunt mai puin distincte, deoarece att
n cazul speciilor dioice, ct i unisexuat-monoice, diferenele dintre exemplarele mascule sau
femele i respectiv, dintre ramurile cu flori ma
scule sau female, se limiteaz adeseori numai la structura aparatelor florifere.
Caracterele sexuale primare sunt controlate genetic (cele care asigur formarea unui anumit
gen de celule sexuale, diferene n structura organelor de reproducere), iar caracterele sexuale
secundare sunt sub influena sistemului hormonal ( vocea la om etc).
Sexualitatea prezint importan prin faptul c asigur variabilitatea genetic a populaiilor.
n cursul evoluiei, selecia natural acineaz pe fondul acestei varaiabiliti imense, care permite
supravieuirea i reproducerea indivizilor celor mai bine adaptai la condiiile noi de mediu.
Reproducerea sexuat reprezint tipul de nmulire cel mai rspndit n lumea plantelor i
animalelor, ea realizndu-se foarte diferit pe scara evoluiei organismelor.
Prin reproducerea sexuat alogam se asigur ncruciarea ntre indivizi diferii genotipic, care
determin creterea vigorii i a capacitii de adaptare a organismelor, fenomen cunoscut sub
denumirea de heterozis. n acest sens, plantele alogame s-au adaptat pe diferite ci la prevenirea
autofecundrii (prin decalarea maturitii gameilor, protandrie i protoginie, heterostilie,
monoicitatea i dioicitatea, autoincompatibilitatea sau autosterilitatea etc.).
Cele mai importante mecanisme genetice pentru controlul sexelor sunt: determinismul
cromozomial la care regsim tipul Drosophila ( XX i XY) cu subtipul Protenor ( XX i
XO) i un alt tip Abraxas ( XY i XX) cu subtipul Fluture ( XO i XX); determinismul
genomial unde sexul este determinat de ntreg genomul (haplodiploidie) i determinismul genic la
care rolul revine unor gene sexuale.
Referitor la plante, n controlul genetic al sexelor pot interveni unul sau mai multe mecanisme
din cele prezentate. Pentru diferitele specii sunt precizate mecanismele valabile i se ine cont i de
factorii ce pot influena sexul, astfel prin controlul factorilor putem interveni asupra modificrii
raportului ntre sexe.

101
Tema nr. 11
EREDITATEA CARACTERELOR SEX-LINKAGE
Uniti de nvare:
Factorii care influeneaz determinismul genetic al sexului;
Sex-influenare
Sex-imitare
Ereditatea caracterelor sex-linkage.

Obiectivele temei:
trecerea n revist i fixarea principalilor factor ice influeneaz determinismul genetic
al sexului;
cunoaterea modului n care se realizeaz ereditatea caracterelor sex-linkage

Timp alocat temei : 3 ore


Bibliografie recomnadat:
1. Badea, E., Rduoiu, S., Nicolae, I., Raicu, P., 2000, Genetica-genetic molecular i inginerie
genetic, Ed. Bioterra, Bucureti.
2. Brooker, R. J., 2000, Genetica. Analisi e principi, Zanichelli.
3. Brackdorff, N., 1984, Linactivation du chromosome X, La Recherche, Vol. 25, 136-141.
4. Casian, H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech.

11.1. Factorii care influeneaz determinismul genetic al sexelor


La numeroase specii de plante i animale, inclusiv la om, o serie de factori de mediu,
administrarea de hormoni, anomalii n structura i numrul cromozomilor sexuali afecteaz
determinismul genetic al sexelor, n special n ceea ce privete raportul ntre sexe i modul de
reproducere.
Factorii de mediu. Dintre factorii de mediu, un rol important n determinismul sexelor l au
condiiile de nutriie, lumina, temperatura, umiditatea etc. (P. Raicu, 1991).
n ceea ce privete condiiile de nutriie s-a constatat c dac larvele de Bonellia virilis
(virme) sunt crescute separat devin femele, iar dac sunt crescute mpreun ntr-un vas cu femele
adulte, ele ptrund n trompa acestora unde triesc parazit i devin masculi de dimensiuni foarte
mici, comparaticv cu femelele. Dac dup un timp se scot din trompa femelei i sunt crescui
izolat, devin indivizi hermafrodii. De asemenea, masculii au fost transformai n femele prin
adugarea n apa marin,n care triesc, a unor cantiti foarte mici de HCl sau CuSO4.
La unele specii de animale, variaia temperaturii poate modifica determinismul genetic al
sexelor. Astfel, c i stolonii i hidranii, care repezint tipul vegetativ de nmulire, meduzele
tipul sexual de nmulire, sunt influenate puternic de temperatura mediului. La temperaturi ceva
102
mai ridicate ele produc numai ovule i sunt de sex femel, la temperaturi ceva mai sczute
(mijlocii) devin hermafrodite (produc att ovule ct i spermatozoizi), iar la temperaturi relativ
sczute devin mascule (produc numai spermatozoizi).
Un exemplu de influen a luminii asupra schimbrii sexului, chiar de mai multe ori pe an, l
reprezint palmierul brazilian Attalea humifera. n anumite condiii, de densitate mare cu arbori
mai nali care umbresc, plantele devin de sex masculin, iar n cazul cnd plantele sunt izolate sau
au aceeai nlime cu arborii din jur, capt sexul femel. La umbrire, plantele redevin mascule.
n condiii modificate de mediu, n care sunt implicai mai muli factori (temperatura,
lumina, umiditatea etc.) la unele specii de plante apar modificri nsemnate privind diferenierea
inflorescenelor i raportul dintre sexe. De exemplu, la porumb, n condiii de temperaturi mai
reduse, umiditate mare i luminozitate sczut se constat apariia de flori femele n inflorescena
mascul, formarea de flori mascule n inflorescena femel, tendina de ramificare a tiuletelui,
sterilitatea florilor mascule etc., crescnd considerabil proporia florilor femele. Aceste modificri
sunt mult mai profunde la formele de porumb originar din zonele subtropicale, care sunt bine
adaptate la zile scurte i temperaturi ridicate. La castravei, n condiii de zi scurt i temperaturi
mai reduse (primvara) apare tendina plantelor de feminizare i invers, n condiii de zi lung i
temperaturi ridicate (vara) se manifest tendina de masculinizare. De asemenea, la cnep, n
condiii de zi scurt crete proporia de plante femele pn la 80-90% fa de 50% n condiii
normale.
Hormonii sexului. La vertebrate, inclusiv om, detreminismul sexelor are dou etape distincte:
i) etapa genetic, care la om ncepe cu zigotul pn la formarea gonadelor (ovare i testicule) i
dureaz pn la a 60-a zi de la fecundare. n aceast etap sexul este determinat n exclusivitate de
cromozomii sexului: ii) etapa hormonal, n care procesul de sexualizare masculin continu sub
influena hormonilor androgeni (testosteronul), iar sexualizarea feminin evolueaz pasiv sub
determinism genetic, pn la formarea ovarelor (gonadelor femele). Diferenierea definitiv a
sexelor se realizeaz n preajma pubertii, cnd producerea de hormoni femeli (foliculina i
progesteronul) i masculi (testosteronul), capt importan deosebit n procesul de sexualizare.
Importana hormonilor sexuali a fost relevat la animale vertebrate prin administrarea de
hormoni de la un sex la altul, n diferite stadii ale vieii, care au produs modificri n expresia
fenotipic a sexului (T. Crciun i colab., 1978).
Anomalii n structura i numrul cromozomilor sexuali. O serie de modificri n
structura i numrul cromozomilor sexuali, cum ar fi deleiile, duplicaiile, inversiile i
translocaiile, care apar la sexul homogametic (XX), non-disjuncia cromozomilor sexului n
103
meioz etc., pot determina apariia unor genotipuri anormale ce altereaz expresia fenotipic a
sexului. Dintre anomaliile mai frecvente n ereditatea sexului menionm:

- ginandromorfismul. La unele specii dioice (insecte, animale, om etc.) s-a observat apariia
unor organisme la care unele pri ale corpului sunt de tip femel, iar altele de tip mascul. Dup
extinderea esuturilor femele i, respectiv mascule, pe acelai individ, ginandromorfismul poate fi
bilateral, cnd anomaliile au aprut n diviziunile ulterioare (T. Crciun i colab., 1978).

Cercetrile ntreprinse la Drosophila, ncepnd cu anul 1919 de ctre A. sturtevant, T.


Morgan i C. Bridges au dus la concluzia c acest fenomen apare cu o frecven de 1 : 2000 sau 1
: 3000 musculie normale, preciznd i principalele cauze care guverneaz aceast anomalie.

O prim cauz a ginandromorfismului bilateral (transversal sau longitudinal), la care


jumtate din organism este tipic femel i cealalt jumtate este tipic mascul, o reprezint
pierdera unuia dintre cromozomii X la sexul femel (XX) n una din celulele fiice ale zigotului la
prima sa diviziune mitotic. n felul acesta, o celul fiic va avea structura normal XX i prin
diviziuni mitotice repetate va da netere la celule i esuturi de tip femel, iar cealalt celul fiic
(care a pierdut un cromozom X sau a migrat la timp din placa ecutorial ctre polul celulei fiice)
va avea structura XO i, prin diciziuni succesive, va da natere la esuturi de tip mascul (vezi
figura 11.1.).

Fig. 11. 1.

Apariia ginandromorfismului bilateral la Drosophila datorit pierderii unui cromozom X la


prima diviziune a zigotului:

n cazul situaiei cnd pierdera cromozomului X are loc mai trziu (la o diviziune
ulterioar), esutul sau poriunea cu structura XO (mascul) va fi mai mic i va fi integrat n
corpul femelei adulte, fiind observat sub forma de mozaicuri cu caractere sexuale diferite genetic.
104
La alte mamifere i la om, ginandromorfismul bilateral apare tot la prima diviziune a
zigotului la un individ mascul (XY) prin pierderea cromozomului Y cu rol masculinizant (vezi
figura 11. 2.).

Fig. 11.2.
Ginandromorfismul bilateral la om i alte mamifere

O a doua cauz care genereaz ginandromorfismul bilateral const n apariia de ovule


binucleate datorit inhibrii formrii corpuscului polar n meioz. Astfel, la femelele de
Drosophila s-au descoperit ovule cu cte doi nuceli, fiecare avnd un cromozom X. Prin
fecundarea acestor ovule cu spermatozoizi diferii, unul X i cellalt Y, va rezulta un oragnism cu
o parte a sa cu structura XX (femel) i cealalt cu structutra XY (mascul), determinnd apariia
unui ginandromorfism bilateral (vezi figura 11.3.).

Fig.11.3.
Apariia ginandromorfismului bilateral prin fecundarea unei ovule binucleate

105
A treia cauz care determin apariia de organisme ginandromorfe, caracteristic insectelor
din Hymenoptere, cu determinism sexual haplo-diploid, const tot n apariia de ovule binucleate,
fiecare nucleu avnd n cromozomi. Prin fecundarea numai a unuia dintre nucleii acestor ovule cu n
cromozomi, cu un spermatozoid haploid (n) va rezulta jumtate din corp diploid (2n) de tip femel i
cealalt jumtate din corp (rezultat din nucelul nefecundat) haploid (n), de tip mascul (vezi figura
11. 4.).
Fig. 11. 4
Apariia ginandromorfismul bilateral la Hymenoptera

Non-disjuncia heterocromozomilor. Cercetrile efectuate la om cu diferite afeciuni de


comportament, deficien mintal, tulburri endocrine, steriliate, nanism, surzenie, etc., au evideniat
faptul c In majoritatea cazurilor, acestea sunt asociate cu anomalii n numrul cromozomilor. Sunt
cunoscute o serie de maladii grave cu denumiri diferite, dintre care le prezentm pe cele mai
frecvente (P. Raicu, 1990, 1997):
- sindromul Klinefelter ntlnit la brbaii cu structurile cromozomiale XXY, XXXY,
XXYY sau XXXYY, care const n deficien mintal, tulburri endocrine, sterilitate, surzenie,
etc.);
- sindromul de agresivitate descoperit recent i, care dup unele constatri apare cu o
frecven de circa 1% n anumite populaii. Se ntlnete la brbaii cu formula cromozomial
XYY. n aparen, aceti brbai sunt normali, dar n anumite circumstane de stres devin agresivi
i constituie adesea, un pericol social;
-sindromul Turner se ntlnete la femeile cu cariotip heterozomal XO (se apreciaz c
deficiena n cromozomul X apare n ovul). Aceste femei se caracterizeaz prin nanism, sterilitate,
surzenie, demen etc.
Fenotipuri femele anormale apar i la structurile cromozomiale de tipul XXX sau XXXX.
106
Non-disjuncia cromozomilor sexului la nceputul embriogenezei poate determina, aa cum
s-a precizat mai nainte, mozaicuri genetice de esuturi cu diverse caractere sexuale primare i
secumdare.

11.2. Sex-influenare
Genele influenate de sex pot fi situate pe orice autozom sau pe poriunile homoloage ale
cromozomilor sexului. Alelele acestor loci influenai de sex se exprim n mod diferit la masculi
i femele: aceiai alel va fi dominant la mascul i recesiv la femel sau invers. Aceasta se
datoreaz n mare parte, mediului intern care este determinat de hormoni sexuali.
Caracterele influenate de sex se gsesc cel mai frecvent la animalele superioare, care
posed un sistem endocrin dezvoltat.
Exemplu:
Gena responsabil de formarea cheliei este dominat la brbai i recesiv la femei (S.
William, 1977).

Genotipuri Fenotipuri
Genotipuri Brbai Femei
bb cu chelie cu chelie
bb cu chelie normal
bb normal normal

11.3. Sex-limitare
Anumite gene se exprim numai la unul din cele dou sexe. De exemplu, taurii (la bovine)
posed numeroase gene ce controleaz producia de lapte, ei pot s le transmit la fiicele lor, ns
nici ei i nici fii lor nu pot exprima acest caracter. Producia de lapte este deci un caracter cu
expresie variabil, limitat numai la femele. Cnd penetrana unei gene la un sex este egal cu zero,
acest caracter va fi limitat la cellalt sex.
Un exemplu se refer la penajul de coco (la psri) care nu se exprim dect la masculi.

107
11.4 Ereditatea caracterelor legate de sex (sex-linkage)

11.4.1. Ereditatea caracterelor legate de sex la tipul Drosophila


O gen localizat pe cromozomul X i foarte rar pe Y se numete legat de sex. Prima gen
legat de sex a fost observat la Drosophila; este vorba de gena recesiv (w) care determin
culoarea alb a ochilor, n timp ce gena dominant (W) determin culoarea roie (tipul slbatic).
Masculii nu posed dect o singur alel legat de sex, iar aceast stare se numete hemizigoie.
Diferite ncruciri ntre masculi i femele cu alele pentru culoarea ochilor se prezint astfel:

n F2 toate femelele au ochii roii, iar jumtate din masculi au ochii roii i jumtate au ochii
albi. Raportul fenotipic global ntre indivizii F2 (indiferent de sex) este de 3 roii : 1 alb.
La ncruciarea invers (femele cu ochi albi x masculi cu ochi roii), rezult:

108
n acest caz asistm n F1 la o transmitere n cruce (cris cros) a culorii ochilor; masculii
motenesc culoarea alb de la mam, iar femelele motenesc culoarea roie de la tat.
n F2 rezult:

n F2 jumtate din femele i masculi au ochii roii i jumtate au ochii albi. Raportul global
de segregare este de 1 rou : 1 alb.
Analizele hibridologice la Drosophila melanogaster au artat c numeroase alte carctere
sunt determinate de gene X sex linkage i se transmit similar la descendeni ca i culoarea
ochilor (ex. Mutantele: aripi tiate, ochi lozenge, corp galben i multe altele).
Pe lng acest tip general de ereditate a caracterelor legate de sex, exist i unele tipuri
particulare, determinate de existena unor gene pe cromozomul Y care nu au gene (alele)
homoloage pe cromozomul X. Astfel, la om se cunosc cteva gene situate pe poriunea
neomoloag a cromozomului Y denumite gene holandrice. Dintre genele holandrice studiate pn
n prezent menionm gena care produce brbai cu prul aspru i epos, gena pentru urechi
proase, gena pentru degete de la picior sudate prin membran i alte gene mai puin studiate.
n acest caz carcterele respective se exprim numai la masculi i se transmit din tat n fiu. Aceste
gene care sunt total nlnuite pe cromozomul Y sunt denumite gene Y-complet sex-likage (T.
Crciun i colab., 1978).

11.4.2. Ereditatea caracterelor legate de sex la tipul Abraxas


Ereditatea sexului de tip Abraxas a fost observat i valorificat naintea ereditii de tip
Drosophila, caracterizat printr-un mecanism total opus determinrii genetice a sexelor la
Drosophila i anume: femelele sunt heterogametice (XY sau ZW) i masculii homogametici (XX
sau ZZ).
Acest tip de ereditate (prezent la psri, fluturi, peti), la care transmiterea caracterelor n
cruce (cris-cros) este similar cu ereditatea sexului la tipul Drosophila pentru sexul homogametic
(XX) cu gene recesive homozigote, poate fi utilizat n practic cel puin la psri i viermii de
mtase, pentru detectarea i izolarea timpurie a sexelor, folosind unele gene marker translocate pe
109
cromozomii sexului. Ca gene marker translocate de pe autozomi pe cromozomii sexului i care se
folosesc n procesul de autosexare se utilizeaz gena pentru culoarea pufului (alela B produce puf
galben, iar alela recesiv b determin puf negru), gena care determin culoarea penelor (alela S
produce penaj auriu i alela s produce penaj argintiu) i gene care controleaz viteza de cretere a
penajului (K determin creterea rapid, normal i k cretere lent).
De exemplu, la ncruciarea unui coco din rasa Langshan cu penaj negru (XbXb) cu o gin
din rasa Plymouth Rock cu penaj vrgat (XBY), n F1 se manifest ereditatea cris-cros, femelele
avnd penaj negru, iar masculii penaj vrgat, ceea ce permite izolarea cu uurin a sexelor imediat
dup ecloziune (autosexare). Schematic aceast hibridare de autosexare se prezint astfel:

Separarea timpurie a sexelor la gini, permite aplicarea unui regim de alimentaie difereniat
n funcie de destinaia de consum. Astfel, masculii sunt recombinai pentru broiler (cretere
intensiv), iar femelele pentru producia de ou.
La ncruciarea reciproc (invers) cu cocoi vrgai (XBXB) i femele negre (XbY), n F1
toi indivizii sunt vrgai, iar n F2 segreg n raportul global de 3 vrgai : 1 negru (50% din
femele sunt negre i 50% vrgate, iar masculii sunt toi vrgai).
TEST DE EVALUARE
Rspuns:
1. Definii genele influenate de sex.
Sunt gene plasate pe autozomi sau heterocromozomi, ce se comport ca dominante sau recesive,
n funcie de sexul la care se gsesc.

2. Enumerai factorii ce pot influena sexul:

Exerciii:
Exemplu rezolvat
110
1. Fenomenul de cris-cross se manifest n cazul n care sexul homogametic prezint:

a) dou alele dominante


b) dou alele recesive
c) alel dominant i una recesiv
Rspuns: b

2. Sindromul Klinefelter are structura cromozomial:

a) XXY;
b) XYY;
c) XY.
3. Procesul de autosexare la psri se bazeaz pe:

a) tipul crestei;
b) culoarea pufului;
c) forma ciocului.
Rezumatul temei

Referitor la plante, n controlul genetic al sexelor pot interveni unul sau mai multe mecanisme
din cele prezentate. Pentru diferitele specii sunt precizate mecanismele valabile i se ine cont i de
factorii ce pot influena sexul, astfel prin controlul factorilor putem interveni asupra modificrii
raportului ntre sexe.

Sexul este sub control genetic, dar pot apare modificri n sensul devierii sexului sub
influena diferiilor factori. Dintre cei mai importani factori putem meniona :

Factorii de mediu. Condiiile de nutriie, lumina, temperatura, umiditatea. Aceti factori sunt
importani din punct de vedere agronomic. Trebuie respectate cerinele diverselor specii fa de
aceti factori pentru a nu se modifica raportul dintre sexe.

Hormonii sexului. La vertebrate, inclusiv om, detreminismul sexelor are dou etape distincte: i)
etapa genetic, care la om ncepe cu zigotul pn la formarea gonadelor (ovare i testicule) i
dureaz pn la a 60-a zi de la fecundare. n aceast etap sexul este determinat n exclusivitate de
cromozomii sexului: ii) etapa hormonal, n care procesul de sexualizare masculin continu sub
influena hormonilor androgeni (testosteronul), iar sexualizarea feminin evolueaz pasiv sub
determinism genetic, pn la formarea ovarelor (gonadelor femele). Diferenierea definitiv a sexelor
se realizeaz n preajma pubertii, cnd producerea de hormoni femeli (foliculina i progesteronul) i
masculi (testosteronul), capt importan deosebit n procesul de sexualizare.
111
Anomalii n structura i numrul cromozomilor sexuali. O serie de modificri n structura i
numrul cromozomilor sexuali, cum ar fi deleiile, duplicaiile, inversiile i translocaiile, care apar
la sexul homogametic (XX), non-disjuncia cromozomilor sexului n meioz etc., pot determina
apariia unor genotipuri anormale ce altereaz expresia fenotipic a sexului. Ereditatea caracterelor
sex-linkage este asemntoare celei mendeliene cu excepia cris-cross-ului, fenomenul de
transmitere n cruce a caracterelor ce apare n cazul n care sexul homogametic prezint alelele
recesive n stare homozigot. Fenomenul are utilizare pentru autosexare. Dac nu se ndeplinete
condiia pentru cris-cross, atunci caracterul sex linkage se va transmite mendelian pstrnd
raportul caracteristic (uniformitatea indivizilor din F1 i raportul de 3:1 n F2).

112
Tema nr. 12
EREDITATEA CARACTERELOR CANTITATIVE
Uniti de nvare:
Determinismul genetic al caracterelor cantitative
Sisteme de gene multiple;
Variana aditiv; variana de dominan; varian de epistazie;
Eritabilitatea n sens larg; eritabilitatea n sens restrns;
Hibridarea transgresiv (segregarea sau variaia transgresiv)

Obiectivele temei:
fixarea noiunilor folosite n biometrie;
prezentarea controlului genetic al caracterelor cantitative i regulile privind ereditatea acestora;
trecerea n revist a diferitelor sisteme de alele multiple i raportul fenotipic n cazul fiecrui
sistem;
prezentarea varianei genotipice i categoriile de variane aferente;
dobndirea cunotinelor privind eritabilitatea caracterelor cantitative sau coeficientul de ereditate;
explicarea hibridrii transgresive.
Timp alocat temei: 3 ore
Bibliografie recomandat:
1. Andrei P.,1998, Genetic Ed. Museum, Chiinu
2. Prnu Ghe.,2010, Genetica i ameliorarea arborilor- Ed. Silcic, Bucureti.

12.1. Determinismul genetic al caracterelor cantitative


Caracterele mendeliene sunt denumite caractere calitative, controlate de gene majore
(mendeliene), cu efecte marcante asupra fenotipului i care practic, nu sunt influenate de condiiile de
mediu. Cel mai adesea, un caracter calitativ este controlat de o singur gen major (mendelian).
Majoritatea caracterelor i nsuirilor organismelor nu se manifest ns, prin diferene
pregnante, fiind uneori imposibil de a separa fenotipurile cu variaii mici i greu de sesizat.
Numeroase caractere cu importan economic precum elementele de productivitate (numrul de frai,
numrul de inflorescene, numrul de boabe, greutatea fructelor sau seminelor pe plant, etc), capacitatea
de producie (producia de semine, fructe, de mas vegetativ sau producia de ln, lapte, ou etc),
nsuirile fiziologice (rezisten la ger, la secet, la cdere etc), nsuirile biochimice (coninutul n
proteine, n ulei, n aminoacizi etc) prezint o gam continu de fenotipuri ntre minus i plus varianta
(variaie continu). Aceste caractere sau nsuiri ale organismelor se pot numra, cntri sau msura,
113
exprimndu-se numeric prin diferite valori care indic expresia lor fenotipic. Asemenea caractere au fost
denumite caractere metrice sau cantitative, iar ramura geneticii care se ocup cu studiul lor a cptat
denumirea de genetic cantitativ. n controlul expresiei fenotipice a caracterelor cantitative sunt
implicate dou sau mai multe perechi de gene denumite gene multiple, poligene sau gene minore;
fiecare gen contribuie la realizarea fenotipului ntr-o anumit proporie i foarte discret, nct sunt
necesare metode destul de complicate pentru determinarea efectului lor. De asemenea, caracterele
cantitative sunt influenate putemic de factorii de mediu, care pot determina deviaii ale fenotipului ntr-
un sens sau altul.
Genele care intervin n controlul caracterelor cantitative pot avea efecte aditive i egale,
efecte aditive i inegale i efecte opoziionale. Pe lnga genele multiple cu efecte aditive care au
ponderea cea mai mare n cadrul varianei genetice, pot interveni i unele gene nealele cu moduri de
aciune diferite.
n general, genele multiple implicate n manifestarea unui caracter cantitativ sunt situate n
cromozomi neomologi (gene independente). Prezena n acelai cromozom a mai multor loci din
acelai sistem de gene multiple (aprui prin duplicaie) constituie o piedic puternic n obinerea
unor genotipuri care s posede fie numai alele pozitive (active sau contribuitoare) fie numai alele
negative (inerte sau neutrale).
La nceputul geneticii mendeliene se considera c exist o diferen fundamental
ntre caracterele calitative i cele cantitative. Revine meritul lui Nilsson-Ehle (1909), de a elucida
legtura ntre aceste dou tipuri de caractere. Una dintre experienele clasice care i-a permis s
explice mecanismul ereditii cantitative a constat n ncruciarea unui soi de gru cu boabe de
culoare roie foarte intens cu un soi cu boabe albe.
n F1 toi indivizii erau omogeni, avnd boabe de culoare roie intermediar, iar n F2 a
rezultat un raport global de segregare de 15 roii : 1 alb. Dup gruparea atent a indivizilor dup
intensitatea culorii bobului au rezultat 5 clase fenotipice, cu variaie continu, ntr -un raport de
1:4:6:4:1. El a interpretat aceste rapoarte fenotipice de segregare ca reprezentnd segregarea a
dou perechi de alele cu efecte individuale cumulative care determin acelai caracter (vezi figura
12. 1.).

114
Fig. 12. 1. Ereditatea culorii bobului
Rou intens Alb

P R1R1R2 R2 r 1r 1r2r2
G R1R2 x r 1r2
F1 R1r 1R2r2 - rou intermediar
Autofecundare
F2
G R1R2 R1r2 r1R2 r1r2

R1R2 R1R1R2R2 R1R1R2r2 R1r1R2R2 R1r1R2r2
R1r2 R1R1R2r2 R1R1r2r2 R1r1R2r2 R1r1r2r2
r1R2 R1r1R2R2 R1r1R2r2 r1r1R2R2 r1r1R2r2
r 1r 2 R1r1R2r2 R1r1r2r2 r1r1R2r2 r1r1r2r2

Din analiza generaiei F2 rezult c:

1/16 4/16 6/16 R1R1r2r2 4/16 R1r1r2r2 1/16 r1r1r2r2


R1R1R2R2 R1R1R2r2 R1r1R2r2 r1R1R2r2
R1r1R2r2 r1r1R2r2
R1R1r2R2 R1r1R2r2 r1r1r2R2
R1r1R2r2
R1r1R2R2 r1r1R2R2
R1r1R2r2
rou rou intens rou interm. rou deschis alb
foarte
intens
4 alele 3 alele 2 alele 1 alel 0 alele
active active active activ active

Fiecare alel activ R1 i R2 contribuie cu o anumit parte la determinarea culorii roii, fiind
denumite gene active (contribuitoare sau favorabile), n timp ce alelele r1 i r2 determin numai
culoarea alb (fenotipul rezidual), fiind denumite gene inerte (neutrale). Deci, distribuia genotipurilor i
fenotipurilor calculate pe baza alelelor active i a celor neutrale este de 1:4:6.4.1, adic 1/16 posed 4
alele active, 4/16 posed 3 alele active, 6/16 posed 2 alele active, 4/16 prezint o singur alel
activ i 1/16 nu au nici o alel activ.
115
n alte experiene similare s-a gsit c la gru, culoarea boabelor este controlat de trei perechi de
gene. n acest caz, raportul general de segregare a fost de 63 boabe roii de diferite nuane: 1 bob alb,
rezultnd 47 clase fenotipice de la rou la alb n proporie de 1:6:15:20:15:6:1. Din cele prezentate mai
sus, rezult c pe masur ce numrul de gene implicate n determinismul unui caracter cantitativ
crete, numrul claselor fenotipice crete progresiv dup o distribuie binomial, n timp ce frecvena
claselor extreme descrete.

n genetica cantitativ, ca de altfel i n genetica calitativ, se folosesc frecvent noiunile de


"caracter" i "nsuire". Considerm necesar s precizm c prin caracter se nelege o particularitate
morfologic sau anatomic, iar prin nuire se nelege o particularitate fiziologic, biochimic,
tehnologic sau adaptativ.

Pentru studiul ereditaii i variabilitaii caracterelor cantitative se fac n mod obligatoriu


msurtori, numrtori sau cntriri asupra unor populaii de indivizi, urmate de gruparea,
prelucrarea i interpretarea datelor. tiina care indic metodele de calcul, de sintez i de interpretare a
rezultatelor experimentale privind modul de transmitere al caracterelor cantitative de la prini la urmai,
poart denumirea de biometrie, genetic cantitativ, biostatistic sau genetic statistic. Karl Pearson
a definit biometria ca fiind "tiina ce utilizeaz metodele matematice n studiul ereditii i
variabilitii vieuitoarelor". Biometria deriv de la cuvintele greceti "bios" - via i "metros"- a
msura.

Obiectul biometriei l constituie variaiiie care se prezint sub form de valori numerice
rezultate din msurtori, numrtori, cntriri, analize etc, efectuate asupra organismelor ntregi sau a
unor pri ale acestora (spice, boabe, inflorescene, frunze, ramuri etc). Biometria opereaz cu date
biologice i permite compararea populaiilor experimentale (soiuri, linii, hibrizi, sue, cloni etc) cu
populaiile ideale, formulnd concluzii teoretice i practice pe baza datelor experimentale.

Analiza genetic a caracterelor cantitative trebuie s raspund unor exigene care s sporeasc
eficacitatea seleciei n procesele de ameliorare. Astfel, orice analiz genetic trebuie s rezolve n
principal, urmatoarele probleme:

-s precizeze contribuia genotipului (G) i a mediului (E) n exprimarea fenotipic a diferitelor


caractere n cadrul unui eantion de indivizi;

-s calculeze diferenele dintre diferite populaii i s stabileasc semnificaia (veridicitatea) acestor


diferene;

- s calculeze principalele valori (indici statistici) care furnizeaz informaii ct mai precise asupra
gradului de variabilitate al caracterelor analizate;
116
- s permit compararea valorilor empirice calculate pe probe medii cu valorile teoretice ale
populaiilor statistice, care s indice corespondena ntre, datele experimentale i cele teoretice;
- s stabileasc tipul i gradul de corelaie dintre caracterele analizate;
-s calculeze diferenele de selecie, progresul genetic i indexul de selecie pentru caracterele cu
importan economic.
n perioada 1910-1913 EM. East i colaboratorii (citai de T.Crciun i colab., 1978) au
studiat ereditatea dimensiunilor tiuletelui la porumb, ajungnd la concluzii similare cu cele ale lui
Nilsson-Ehle. Pentru relevarea ereditii lungimii tiuletelui de porumb, E.M. East a ncruciat un soi
de porumb zaharat cu tiulete lung cu un alt soi de porumb de floricele cu tiulete mic, obinnd n F1
tiulei de lungime intermediar ntre cei doi prini. Studiul generaiei F2 a evideniat o mare
variabilitate a lungimii tiuletelui ntre limite foarte largi, avnd o frecven maxim indivizii din clasele
de lungime mijlocie, in timp ce variabilele extreme au avut o frecven foarte mic. Gruparea
indivizilor din F2 n clase fenotipice (dup lungimea tiuleilor) a dus la obinerea a 5 clase ntr-un
raport de 1:4:6.4:1, sugernd faptul c acest caracter este controlat de dou perechi de gene multiple.
Tot E.M. East (1916) a pus n eviden ereditatea cantitativ a lungimii corolei la florile de
tutun. Pentru aceasta el a ncruciat dou soiuri pure de N. longiflora cu un soi cu tubul corolei lung i
cellalt cu tubul corolei scurt. n F1 plantele aveau flori cu lungime mijiocie a corolei, iar n F2 s-a
observat o mare variabilitate a acestui caracter, fr a se gsi indivizi cu valorile extreme ale prinilor.
Autorul a explicat acest fenomen prin implicarea unui numar relativ mare de gene multiple, ceea ce a
determinat apariia cu frecvent redus a formelor extreme. Reapariia formelor parentale ar fi posibil
n contextul unei populaii hibride F2 mult mai numeroase.
Ulterior, au fost studiate numeroase caractere cantitative determinate de sisteme de gene
multiple cu efecte aditive la mazre, soia, gru, gura leului, tomate, etc.

12.2. Sisteme de gene multiple


De la nceput geneticienii s-au preocupat de stabilirea relaiilor alelice i intergenice din
cadrul sistemelor poligenice.
n experientele de pionierat ale lui Nillson-Ehle efectuate la gru s-a descoperit faptul
c genele multiple implicate n culoarea bobului au efecte egale i aditive. Ulterior, odat cu
diversificarea i dezvoltarea cercetrilor de genetic cantitativ s-au descoperit i alte sisteme de
gene multiple: cele cu efecte inegale i aditive i cele cu efecte opoziionale, precum i relaia
genelor multiple cu gene din afara sistemului poligenic (gene cu dominan total, gene
epistatice, gene modificatoare etc).
117
Pentru relevarea relaiilor posibile dintre genele multiple s presupunem c avem un
sistem poligenic cu 4 perechi de gene care controleaz un anumit caracter cantitativ. Unul dintre
prini are genele active (contribuitoare), respectiv A1 A1 A2 A2 A3 A3 (P 1 ), iar cellalt printe
are numai genele neutrale, respectiv a1a1a2a2a3a3a4a4 (P2). Dac se consider c fiecare alel
activ contribuie la realizarea caracterului cu trei uniti, iar o alel neutral contribuie cu o
singur unitate, atunci putem s exemplificm principalele modele de sisteme poligenice
(T.Crciun i colab., dup V. Granth, 1964; 1975).

12.2.1. Sisteme de gene multiple cu efecte egale i aditive (modele polimerice).


n acest sistem, genele implicate au efecte egale i aditive, iar modul lor de comportare n F 1
i F2 se prezint astfel:

P1: A1A1A2A2A3A3A4A4 = 6 + 6 + 6 + 6 = 24

P2: a1a1a2a2a3a3a4a4 =2+2+2+2= 8

F1: A1a1A2a2A3a3A4a4 = 4 + 4 + 4 + 4 = 16 (intermediar)

n F2, vor rezulta 9 clase fenotipice cu variaie continu, n raportul de 1:8:28:56:70:56:28:8:1,


cu valorile extreme de 1/256 A1A1A2A2A3A3A4A4 - 1/256 a1a1a2a2a3a3a4a4. Reprezentarea grafic a
distribuiilor din F2 determin o curb normal i simetric cu extremele 8 i 24, iar media de 16 (la
mijlocul curbei).
Dac la unul dintre loci, ntre cele dou alele apare relaia de dominan i recesivitate, de
exemplu ntre A1 i a1, atunci valoarea i distribuia fenotipurilor va fi urmtoarea:

P1: A1A1A2A2A3A3A4A4 = 6 + 6 + 6 + 6 = 24
P2: a1a1a2a2a3a3a4a4 =2+2+2+2= 8
F1: A1 a1A2a2A3a3A4a4 = 6 + 4 + 4 + 4 = 18

n scest caz, valoarea hibridului F1 nu mai este intermediar (este mai mare), iar n F2 rezult tot 9
clase, ns curba de variaie va fi asimetric, deviat spre printele P1.

12.2. 2. Sisteme de gene multiple cu efecte inegale i aditive (modele anisomerice).

118
n acest caz, alelele din sistem au contribuii diferite (inegale) la realizarea fenotipului. Dac n
exemplul folosit locusul A1 are efecte triple fa de locii A2, A3 i A4 (n lipsa dominanei totale),
modelul anisomeric se prezint astfel:

P1: A1A1A2A2A3A3A4A4 = 18 + 6 + 6 + 6 = 36
P2: a1a1a2a2a3a3a4a4 = 6 + 2 + 2 + 2 = 12
F1: A1a1A2a2A3a3A4a4 = 12 + 4 + 4 + 4 = 24
F1:A1A1A2A2A3A3A4A4 a1a1a2a2a3a3a4a4
1/256 1/256
i n scest caz, n F1 hibrizii prezint valori intermediare, iar n F2 ei se distribuie tot dup o
curb simetric, cu un numr mai mare de clase fenotipice i cu o frecven mai redus a indivizilor cu
valori mijlocii. Dac una dintre perechile de gene manifest dominan total (de exemplu, A1 > a1),
atunci n F1 i n F2 curba de variaie sufer o deviaie spre printele P1 cu alela dominant:

P1: A1A1A2A2A3A3A4A4 = 18 + 6 + 6 + 6 = 36
P2: a1a1a2a2a3a3a4a4 = 6 + 2 + 2 + 2 = 12
F1: A1 a1A2a2A3a3A4a4 = 12 + 4 + 4 + 4 = 24
Deci hibridul F1 > (P1 + P2) / 2

12.2. 3. Sisteme de gene multiple cu efecte opozitionale


n acest caz, unele gene din sistem acioneaz n sens pozitiv, iar altele n sens negativ. Expresia
fenotipic rezult din suma algebrica a genelor multiple implicate. Folosind tot exemplul anterior cu
4 loci, n care gena A1 are efect pozitiv, iar genele A2 , A3 i A4 au efecte negative, rezult
urmatoarele fenotipuri:

P1: A1A1A2A2A3A3A4A4 = 54 - 6 - 6 - 6 = 36
P2: a1a1a2a2a3a3a4a4 = 18 - 2 - 2 - 2 = 12
F1: A1a1A2a2A3a3A4a4 = 36 - 4 - 4 - 4 = 24
Se observ c i n aceast situaie, fenotipul este intermediar n F1, iar n F2, anumite genotipuri
(combinaii de gene) depsesc valorile extreme, datorit segregrii transgresive. Astfel, genotipul
A1A1a2a2a3a3a4a4 cu fenotipul 54 -2-2-2-2 = 48, care depaete cu mult parintele cu fenotipul
maximal (P1 = 36) i este dublu comparativ cu F1 = 24, n timp ce genotipul a1a1A2A2A3A3A4A4 cu
fenotipul 18 - 2 6 - 6 = 4 este cu mult inferior printelui minimal (P2 = 12). O situaie similar
apare i n F1, n situaia n care la unii loci din sistemele opoziionale sunt implicate gene majore
119
cu dominan complet. Astfel, dac perechea de alele multiple cu efecte pozitive A1a1 manifest
dominan total n F1, atunci genotipul din F1 (A1a1A2a2A3a3A4a4 a4) cu fenotipul 54 4 4 4 = 42
depete printele maximal, P1 cu fenotipul 54 6 6 6 = 32.

12.3. Variana aditiv; variana de dominan; varian de epistazie


Variabiliatatea unei populaii se apreciaz prin msurarea varianei. n acest scop se alege o
prob medie de indivizi dintr-o populaie, se msoar caracterul cantitativ ce se studiaz. Datele
primare ale analizei se prezint n iruri de variaie, specificndu-se frecvena cazurilor cuprinse
ntre limitele fiecrei clase.
Valoarea varianei unei populaii de plante sau animale, reprezint variana totala sau
fenotipic a unui caracter oarecare, indiferent dac aceast variabilitate este determinat genetic sau
este cauzat de condiiile de mediu.
mprirea varianei fenotipice numai n varian genotipic i varian datorit mediului nu
este suficient pentru a nelege proprietile genetice ale unei populaii i n special nu se dezvluie
cauza asemanri dintre rude. De aceea variana genotipic, n funcie de modul de aciune a genelor,
a fost mprit n: varian aditiv(VA), varian de dominan(VD) i variana interaciunii(VI).
Variana genetic aditiv sau variana valori de ameliorare reprezint componentul cel mai
important al variaiei totale ce se transmite ereditar i este determinat de aciunea genelor polimere
cu efect aditiv. Vriana genetic aditiv este cauza principal a asemnrii ntre rude i determinana
principal a proprietailor genetice ale unei populaii, precum i a rspunsului populaiei la selecie.
Este singurul component care poate fi uor estimat pe baza observaiilor fcute asupra unei populaii.
inndu-se seama de importana varianei aditive, n mod practic, variana fenotipic se subdivide n
varian genetic aditiv i restul, alctuit din variana genetic neaditiv i variana mediului.
Variana genetic a dominanei face parte din variana genetic total determinat de
manifestarea dominanei intre alelele unui locus n cazul unei forme heterozigote. Ea reprezint
devaia unui hibrid de la valoarea medie a caracterului prinilor si heterozigoi. n figura 1.1. se
perzint cazul cnd n urma ncruciri ntre parinii homozigoi A1 A1 i A2 A2 , heterozigotul A1 A2
dup fenotip este mai aproape de genotipul A2 A2 dect de genitorul A1 A1. Abaterea heterozigotului
de la punctul mediu datorit dominanei este notat prin distana d. Diferena dintre genitorii
homozigoi este egal cu a+a sau 2a.
n dependen de gradul de dominan ntre valorile a i d pot aprea diferite situaii:
d = 0 lipsa total a dominanei;
d = a dominan complet;
120
d < a dominan incomplet;
d>a supradominan.
Variana genetic a interaciunii se datoreaz interaciunii unor gene nealele. Variana
interaciunii(VI) include interaciunile ntre valorile aditive ale diferiilor loci(aditiv x aditiv, VAA),
include interaciunile ntre contribuia aditivitii i dominanei (aditiv x dominant, VAD),
interaciunile ntre genele dominante(dominant x dominant, VDD). Deci, variana genetic datorit
interaciunii poate fi descompus astfel:VI=VAA+VAD+VDD.
Tabelul 12.2. Descompunerea varianei pentru unele caractere la Drosophila melanogaster.
Varina Simbolul Caracterul
Peri Torace Ovar Ovule
Fenotipic Vp 100 100 100 100
Genetic aditiv VA 52 43 30 18
Genetic neaditiv VP + VI 9 6 40 44
Mediului VE 39 51 30 38

Variana genetic a interaciunii genelor complic foarte mult analiza statistic a ereditii
cantitative. Evidenierea interaciunii genelor nealele sau a rolului lor n modificarea manifestrii
genelor prezente n ali loci este dificil. Din aceast cauz calculul statistic al valorii varianei
interaciunii adesea nu se efectueaz.
mprirea varanei genetice n categoriile menionate are mai mult un caracter teoretic.
Separarea componenilor de dominan i interaciune se efectueaz printr-o tehnic destu de
complicat care necesit un mare numr de observaii

12.4. Eritabilitatea n sens larg; eritabilitatea n sens restrns


Eritabilitatea, denumit uneori i coeficientul de ereditate, reprezint un parametru genetic
care determin gradul de asemnare dintre rude. Altfel spus, eritabilitatea exprim proporia
varianei totale atribuit efectului mediu al genelor, respectiv gradul n care o anumit caracteristic
este transmis descendenilor, deci msura n care aceasta este reproductibil.
Se noteaz cu h2 i se exprim matematic prin raportul dintre variana de natur genetic
existent pentru un caracter i variana total, fenotipic:
121
h2 = 2G / 2F
Cunoaterea mrimii coeficientului de eritabilitate este foarte important, deoarece selecia n
vederea ameliorrii caracterelor d rezultate cu att mai bune cu ct eritabilitatea este mai mare. De
aceea, acest parametru a mai fost denumit coeficient de determinare genetic sau coeficient de
predicie genetic.
Exist dou tipuri de eritabilitate: n sens larg(genotipic), notat cu h2G i n sens restrns(n
sens strict), notat cu h2A(genetic).
Eritabilitatea n sens larg (genotipic) red regresia valorii genotipice asupra valorii
fenotipice i ia n calcul att componenta genetic determinat de aditivitate, ct i pe cea neaditiv:
h2G= 2G / 2F= (2A + 2D + 2I) / 2F
Acest tip de eritabilitate este reproductibil n ntregime prin nmulirea vegetativ.
Eritabilitatea n sens restrns (genetic) se determin ca regresia valorii aditive a genelor
asupra valorii fenotipice:
h2 A = 2A / 2F
Variana aditiv definete, aa cum s-a mai precizat, valoarea de ameliorare, deoarece
cuantific ndeosebi caractere cantitative de interes n programe de ameliorare a diverselor specii.
Dac eritabilitatea este privit ca regresia valorii de ameliorare(VA) ctre valoarea
fenotipic(VF), se poate deduce c cea mai bun apreciere a valorii de ameliorare a unui individ
rezult din produsul dintre valoarea lui fenotipic(F) i coeficientul de eritabilitate(h2):
2A = h2 2F sau VA = h2 VE
Coeficientul de eritabilitate poate avea valori ntre 0 1. Dac h2 = 0, nu exist nicio legtur
ntre genotip i fenotip, caracterul respectiv fiind indus exclusiv de factorii de mediu, nefiind astfel
reproductibil la descendeni. Pe msur ce valorile coeficientului de eritabilitate cresc, determinismul
genetic al caracterelor este din ce n ce mai mare. Astfel, eritabilitatea este maxim(100%) cnd h2 =
1, ceea ce nseamn c n realizarea caracterului respectiv intervin numai cauze genetice, fr a fi
implicai factorii de mediu. Aa sunt, de exemplu, caracterele definitorii ale speciilor, cum sunt tipul
normal de sexualizare prin determinism cromozomal sau structura normal a florilor, forma de
ansamblu a frunzelor .a.

12.5. Hibridarea transgresiv (segregarea sau variaia transgresiv)


Variaia transgresiv, ca rezultat al hibridrii ntre forme deosebite genetic are unele efecte
asemntoare cu heterozisul, n sensul c n urma ncrucirii apar indivizi cu fenotipuri superioare
prinilor.
122
Deosebirile ntre cele dou fenomene, ambele proprii caracterelor cantitative sunt ns mult
mai numeroase. Astfel, heterozisul se manifest n F1, n stare heterozigot i afecteaz toi indivizii
acestei generaii, n timp ce variaia transgresiv apare ncepnd cu generaia F2, n stare homozigot
(stabil) i afecteaz un numr foarte redus de indivizi; heterozisul este rezultatul combinrii genelor
multiple iar variaia transgresiv este rezultatul recombinrii genelor multiple n urma segregri
acestora.
Condiia esenial pentru apariia variaiilor transgresive (pozitive sau negative) este ca
formele parentale s nu reprezinte extreme ale unui caracter poligenic, adic prinii s nu fie saturai
n gene active (AABBCCDD) i, respectiv gene inactive (aabbccdd). Astfel, la o hibridare cu alele
active, i respectiv inactive la doi loci, apariia variaiilor transgresive are loc dup schema:

P: AAbb x aaBB
F1: AaBb
F2: 1/16 AABB - este variaia transgresiva pozitiv ( cu toate alele pozitive), cu un fenotip superior
ambilor parini.
1/16 aabb - este variaia transgresiv negativ (cu toate alele negative), cu un fenotip inferior
ambilor prini.
ntre aceste fenotipuri extreme sunt cuprini indivizi cu 3 alele pozitive (4/16), cu dou alele
pozitive (6/16) i cu o alel pozitiv (4/16). Deci, raportul fenotipic de segregare este de 1:4:6:4.
La o hibridare transgresiv de tipul AABBCCdd x aabbccDD n F1 rezult heterozigotul
AaBbCcDd cu un fenotip intermediar, iar n F2 pot aprea variaii transgresive pozitive cu o
frecven de 1/256 AABBCCDD care depete printele maximal i variaii transgresive negative
cu o frecvent de 1/256 aabbccdd, care au fenotipuri inferioare printelui minimal.
Frecvena variaiilor transgresive este cu att mai mare cu ct numrul genelor multiple ce
determin caracterul luat n considerare este mai mic i invers. Aceasta nseamn c la caracterele
determinate de un numr relativ mare de gene trebuie s avem o descenden foarte numeroas n
generaiile de segregare.
Probabilitatea de a se ncrucia indivizi cu alele opuse, care s dea forme transgresive n
generaiile segregante (F2, backcross, etc.) depinde de numrul combinaiilor hibride. Cu ct numrul
i diversitatea partenerilor de ncruciare este mai mare, cu att ansa de a se ntlni "parteneri ideali"
este mai mare. n acest scop, hibridrile dialele cu parteneri foarte diferii genetic i numeroi sunt
cele mai recomandate i folosite n acest scop.

123
TEST DE EVALUARE
1. De cine sunt influenate caracterele cantitative?
Rspuns :
Caracterele cantitative sunt influenate putemic de factorii de mediu, care pot determina deviaii ale
fenotipului ntr-un sens sau altul.

2. Definii hibridarea transgresiv:

Exerciii
Exemplu rezolvat
1. Ce exprim eritabilitatea?
a) gradul de transmitere al unui caracter datorit genotipului
b) gradul de transmitere al unui caracter datorit factorilor de mediu
Rspuns: a
2. Variana fenotipic reprezint:
a) variana genotipic i variana mediului
b) variana genotipic i variana aditiv
3. Biometria analizeaz caracterele:
a) calitative
b) cantitative
4. Variaia transgresiv are efecte asemntoare cu:
a) consangvinizarea
b) homozigoia
c) heterozisul

Rezumatul temei
Caracterele mendeliene sunt denumite caractere calitative, controlate de gene majore
(mendeliene), cu efecte marcante asupra fenotipului i care practic, nu sunt influenate de condiiile de
mediu. Cel mai adesea, un caracter calitativ este controlat de o singur gen major (mendelian).
Genele care intervin n controlul caracterelor cantitative pot avea efecte aditive i egale,
efecte aditive i inegale i efecte opoziionale. Pe lnga genele multiple cu efecte aditive care au
ponderea cea mai mare n cadrul varianei genetice, pot interveni i unele gene nealele cu moduri de
aciune diferite.
124
n genetica cantitativ, ca de altfel i n genetica calitativ, se folosesc frecvent noiunile de
"caracter" i "nsuire". Considerm necesar s precizm c prin caracter se nelege o particularitate
morfologic sau anatomic, iar prin nuire se nelege o particularitate fiziologic, biochimic,
tehnologic sau adaptativ.
tiina care indic metodele de calcul, de sintez i de interpretare a rezultatelor experimentale
privind modul de transmitere al caracterelor cantitative de la prini la urmai, poart denumirea de
biometrie, genetic cantitativ, biostatistic sau genetic statistic. Karl Pearson a definit biometria ca
fiind "tiina ce utilizeaz metodele matematice n studiul ereditii i variabilitii vieuitoarelor".
Biometria deriv de la cuvintele greceti "bios" - via i "metros"- a msura.
Variabiliatatea unei populaii se apreciaz prin msurarea varianei. n acest scop se alege o
prob medie de indivizi dintr-o populaie, se msoar caracterul cantitativ ce se studiaz.
Valoarea varianei unei populaii de plante sau animale, reprezint variana totala sau
fenotipic a unui caracter oarecare, indiferent dac aceast variabilitate este determinat genetic sau
este cauzat de condiiile de mediu.
Eritabilitatea exprim proporia varianei totale atribuit efectului mediu al genelor, respectiv
gradul n care o anumit caracteristic este transmis descendenilor, deci msura n care aceasta este
reproductibil.
Condiia esenial pentru apariia variaiilor transgresive (pozitive sau negative) este ca
formele parentale s nu reprezinte extreme ale unui caracter poligenic, adic prinii s nu fie saturai
n gene active (AABBCCDD) i, respectiv gene inactive (aabbccdd).

125
Tema nr. 13
EREDITATEA CITOPLASMATIC

Uniti de nvare:
Gene extranucleare din citoplasm
Androsterilitatea citoplasmatic
Obiectivele temei:
prezenarea i dobndirea cunotiinelor privind diferenele dintre ereditatea nuclear si
ereditatea citoplasmatic;
cunoaterea mecanismului privind ereditatea caracterelor citoplasmatice;
nsuirea noiunilor privind androsterilitatea citoplasmatic la plante.

Timp alocat temei: 2 ore


Bibliografie recomandat:
1. Stnescu V., 1983. Genetica si ameliorarea speciilor forestiere Ed. Didactica si
Pedagogica, Bucuresti
2. Nicolae I. i colab., 2000. Genetica, Principii de baz ale ereditii - Ed. Bioterra, Bucuresti

13.1. Gene extranucleare din citoplasm


Dat fiind interdependena dintre nucleu i citoplasma unei celule, care numai mpreun
asigur existena i funciile celulei ca unitate funcional a organismului, s-a constatat c anumite
caractere i nsuiri se transmit datorit unor determinani genetici din citoplasm. Astfel, s-a ajuns la
concluzia c exist o ereditate nuclear (cromozomial) de tip mendelian, care a explicat relaiile
din F1 n urma hibridrii, raporturile de segregare, transmiterea independent i cea nlnuit a
genelor, relaiile ntre gene neomogene, etc. i o ereditate citoplasmatic (extracromozomial) de
tip mendelian cu transmitere uniparental a caracterelor i care a explicat fenomene eseniale ale
practicii cum ar fi : unele tipuri de androsterilitate la plante, ereditatea plastidic, ereditatea la hibrizii
reciproci, predeterminarea, etc..
La folosirea termenilor n cazul ereditii nucleare se include noiune de genotip (totalitatea
genelor din cromozomi), iar la ereditatea citoplsmatic se utilizeaz noiunea de plasmotip
(totalitatea plasmagenelor din citoplasm, plasmagena fiind unitatea ereditatea din citoplasm prin
analogie cu gena din nucleu). Dup localizarea plasmagenelor n diferite organite citoplasmatice,
acestea au diferite denumiri precum : plastogene (pentru genele din plastide), mitogene sau
condriogene (pentru genele din mitocondrii), kinetogene etc.
126
Descoperirile genetice fundamentale, fcute n numai cteva decenii ale acestui secol, preau
s confirme ipotezele multor geneticieni c substratul material al ereditii ar fi localizat exclusiv n
nucleu, care ar deine astfel un rol singular n ereditate.
Ideea c citoplasma ndeplinete totui un anumit rol n ereditate nu a fost ns abandonat,
mai ales c o serie de date faptice dovedeau acest lucru. Astfel, n anul 1902, botanistul C. Correns
remarcase la planta Mirabilis jalapa apariia unor ramuri anormale, cu frunze albicioase sau avnd
poriuni verzi, ce alterau cu poriuni albe, lipsite de cloroplaste aa numita forma albomaculata.
Efectund polenizri ntre florile de pe ramurile normale (cu frunze verzi) i florile de pe ramurile cu
frunze anormale, Correns ajunge la o serie de date interesante (Tab.13.1. ).
Descendena n cazul polenizrii florilor de pe ramuri cu frunze
normale i anormale la Mirabelis jalapa
Ramuri cu flori mascule Ramuri cu flori femele Descendeni F1
Verzi Verzi
Verzi Albe Albe
Verzi Ptate Verzi, albe, ptate
Verzi Verzi Verzi
Albe Albe Albe
Albe Ptate Verzi, albe, ptate
Frunze

Albe Verzi Verzi


Frunze

Ptate Albe Albe


Frunze

Ptate Ptate Verzi, albe, ptate


Frunze

Ptate
Frunze

Rezult din Tab. 13.1. c segregarea descendenilor nu se face conform proporiilor


Frunze
Frunze

mendeliene, acetia semnnd cu forma maternal, cu excepia florilor de pe ramuri cu frunze ptate,
Frunze

care, independent de forma mascul, determin apariia unor descendeni cu frunze normale, albe i
Frunze

ptate.
Un alt caz a fost descries de ctre Gregory (1915) la Primula sinensis, la care florile de pe
ramuri cu frunze verzi produc numai descendeni verzi, cele de pe ramuri cu frunze albe numai
descendeni albi, iar cele pe ramuri cu frunze variegale - descendeni verzi, albi sau ptai.
Explicaia fenomenului, care ulterior a mai fost confirmat i la numeroase alte plante (peste
20 de genuri), const n aceea c sacul embriomar matern conine primordiile cloroplastelor, n
timp ce grunciorii de polen, fiind mult mai mici, sunt lipsii aproape total de citoplasm i de
primordii ale cloroplastelor, aa nct zigotul motenete tipul de cloroplaste al florilor female.
Cloroplastele i deci coloraia frunzelor sunt transmise pe cale extranucleara, numai pe baz
posibilitilor ereditare de care dispune citoplasma.
127
n sfera aceluiai fenomen de ereditate citoplasmatic pe linie matern se ncadreaz i
diferenele care apar la ncruciri ntre anumite animale sau plante, n funcie de form matern.
La plante, din ncruciarea reciproc dintre dou specii de muchi, Funaria higrometrica i
F. mediterranea, deosebite destul de mult prin forma i mrimea frunzelor, prin tipul organelor de
reproducere .a. au rezultat hibrizi asemntori mult mai mult cu genitorul matern dect cu cel
patern.
Fenomenul de transmitere a unor caractere prin intermediul citoplasmei materne se numete
matroclinie.
Faptul este explicabil avnd n vedere c celulele sexual femele conin o cantitate mult
sporit de citoplasm, n comparaie cu cele mascule, ceea ce asigur transmiterea ereditar a unor
anumite nsuiri. n afar de aceasta, la mamifere, organismul matern poate influena dezvoltarea
hibridului n cursul vieii intrauterine. De asemenea, la plantele superioare, zigotul ncepe s se
divid imediat dup fecundare, formnd embrionul nc din perioada cnd acesta se afl n
organismul matern. Pe de alt parte, la Angiospermae endospermul, depozitarul substanelor nutritive
de rezerv ale embrionului, este format din celule triploide (3n), cu dou garnituri de cromozomi (2n)
de origine matern i numai o garnitur (n) de origine patern, ceea ce face ca influenarea
endospermului s fie mai pronunat pe linie matern. Esenial ns n ereditatea extranucleara este
faptul c n citoplasm se localizeaz genomuri specifice (cloroplastic, mitocondrial) sau factori
genetici necromozomiali, cu aparat genetic propriu, care au rol direct n ereditate.
Influena genelor citomplasmei la animale, crora le lipsesc plastidele, s-a pus n eviden la
Lymantria dispar, la care plasma spermei i ovulei se deosebete la diferite rase. n cazul cnd
diferenele sunt mici sau lipsesc are loc o segregare obinuit, mendelian, a genelor; dac ns
deosebirile sunt mari, atunci citoplasma ovulei fecundat determin apariia n proporii excedentare
a unor fenotipuri i, deci, modificarea raporturilor normale de segregare (Goldschmidt i col., 1924).
O serie de fenomene de ereditate extranuclear se datoresc prezenei n citoplasma celulelor
a particulelor simbiotice de tip infecios (Kappa, Lambda, Miu etc.).

13.2. Androsterilitatea citoplasmatic


Prin citoplasm, la unele plante se transmite nsuirea de a fi lipsite de polen sau de a produce
polen neviabil, steril, fenomenul fiind cunoscut sub numele de androsterilitate.
Fenomenul androsterilitii a fost pus n evident la Satureja hortensis de ctre C. Correns, n
anul 1904, iar ulterior a fost relevat i la porumb, iarb de Sudan, sfecl pentru zahr .a.. Caracterul
respectiv se folosete pe scar larg n lucrrile de hibridare, de exemplu la porumb, fcnd inutil
128
operaia costisitoare i pretenioas de castrare a florilor, n vederea obinerii de hibrizi simpli sau
dubli de porumb.
De fapt, androsterilitatea este o nsuire ereditar care se poate transmite prin factori
ereditari recesivi localizai n citoplasm, ca i prin factori din nucleu i din citoplasm.
Androsterilitatea nuclear, observat la plante autogame, nu prezint importan practic
din cauza apariiei descendenilor sterili n proporii mari i, ca urmare, nu este folosit n procesul
de producere a seminelor hibride.
Androsterilitatea citoplasmatic este determinat de factori citoplasmatici S, care se
comport ca factori dominani fa de factorul citoplasmatic de fertilitate F al plantelor cu aceeai
formul genotipic. Prin polenizarea plantelor androsterile (S) cu polen de la plante androfertile apar
n F1 numai plante androsterile, deoarece citoplasma provine n ntregime de la gametul femel. Din
aceste motive, androsterilitatea citoplasmatic are importan paractic deosebit, folosindu-se cu
mult success n producerea seminei hibride la porumb, sorg, sfecl pentru zahr, gru, cartof .a.
Recent s-a dovedit c genele pentru androsterilitate citoplasmatic nu sunt cloroplastice, cum s-a
crezut un timp, ci gene mitocondriale al cror AND a suferit alterri de structur i funcie.
La porumb fenomenul androsterilitii a fost descoperit de M. M. Rhoades (1933). Pentru
stabilirea naturii factorilor citoplasmatici materni care provoac androsterilitatea i a factorilor
nucleari paterni, Rhoades a efectuat polenizarea repetat a plantelor androsterile cu polen de la o
linie normal cu genom bine cunoscut. Dup mai multe generaii de retroncruciare s-a realizat
transferul genomului celulei sexuale paterne n citoplasma celulei sexuale materne. nlocuirea
genomului propriu cu genomul unei forme fertile nu a restabilit androsterilitatea, fapt care a
confirmat c androsterilitatea este o nsuire cauzat de factori localizai n citoplasm, care
acioneaz independent de factorii nucleari.
Androsterilitatea nuclear - citoplasmatic este determinat de factorul citoplasmatic S
care se manifest n prezena factorilor nucleari n stare recesiv rr. Plantele care conin aceti
factori au posibilitatea de a releva att fenomenul de androsterilitate, ct i pe cel de restaurare a
fertilitii, ca urmare a faptului c n citoplasm, pe lng factorul de sterilitate S, dein i factorul de
fertilitate F, iar n nucleu intervin factorii dominani ai restaurrii fertilitii RR.

TEST DE EVALUARE
1. Cum se numete fenomenul de transmitere a unor caractere prin intermediul
citoplasmei materne?
Rspuns:
129
Fenomenul de transmitere se numete matroclinie.

2. Ce este androsterilitatea?

1. Exerciii
Exemplu rezolvat:
1. La plante, prin tipul organelor de reproducere au rezultat hibrizi asemantori cu :
a) genitorul patern
b) genitorul matern
Rspuns : b)
2. n F1 prin polenizarea plantelor androsterile (S) cu polen de la plante androfertile
apar plante:
a) androsterile
b) androfertile
c) androsterile i androfertile
3. Materialul genetic de la nivelul citoplasmei, poart denumirea:
a) gene
b) plasmagene
c) subgene

Rezumatul temei
Exist o ereditate nuclear (cromozomial) de tip mendelian, care a explicat relaiile din F1 n
urma hibridrii, raporturile de segregare, transmiterea independent i cea nlnuit a genelor,
relaiile ntre gene neomogene, etc. i o ereditate citoplasmatic (extracromozomial) de tip
mendelian cu transmitere uniparental a caracterelor i care a explicat fenomene eseniale ale
practicii cum ar fi: unele tipuri de androsterilitate la plante, ereditatea plastidic, ereditatea la hibrizii
reciproci, predeterminarea, etc..
Fenomenul de transmitere a unor caractere prin intermediul citomplsmei materne se numete
matroclinie.
Prin citoplasm, la unele plante se transmite nsuirea de a fi lipsite de polen sau de a produce
polen neviabil, steril, fenomenul fiind cunoscut sub numele de androsterilitate.
Androsterilitatea este o nsuire ereditar care se poate transmite prin factori ereditari recesivi
localizai n citoplasm, ca i prin factori din nucleu i din citoplasm.
130
Androsterilitatea nuclear, observat la plante autogame, nu prezint importan practic din
cauza apariiei descendenilor sterili n proporii mari i, ca urmare, nu este folosit n procesul de
producere a seminelor hibride.
Androsterilitatea citoplasmatic este determinat de factori citoplasmatici S, care se
comport ca factori dominani fa de factorul citoplasmatic de fertilitate F al plantelor cu aceeai
formul genotipic.
Androsterilitatea nuclear - citoplasmatic este determinat de factorul citoplasmatic S care
se manifest n prezena factorilor nucleari n stare recesiv rr. Plantele care conin aceti factori au
posibilitatea de a releva att fenomenul de androsterilitate, ct i pe cel de restaurare a fertilitii, ca
urmare a faptului c n citoplasm, pe lng factorul de sterilitate S, dein i factorul de fertilitate F,
iar n nucleu intervin factorii dominani ai restaurrii fertilitii RR.

131
Tema nr.14
GENETICA I EVOLUIA POPULAIILOR
Uniti de nvare:
Frecvena genelor i genotipurilor;
Principiul Hardy-Weinberg;
Factorii care modific structura genetic a populaiilor.
Obiectivele temei:
dobndirea cunotinelor privind elementele de genetica populaiilor;
explicarea principiului Hardy-Weinberg;
trecerea n revist a diferiilor factorii care modific structura genetic a populaiilor.

Timp alocat temei: 3 ore


Bibliografie recomandat:
1. Crciun T., i colab., 1995. Genetica vegetal - Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti;
2. Gallia Butnaru, Ion Nicolae, Simona Rduoiu, Floarea Nicolae, 2000. Genetica Principii de
baz ale ereditii, Vol I, Ed. Bioterra, Bucureti.
3. Prnu Ghe.,2010, Genetica i ameliorarea arborilor- Ed. Silvic, Bucureti.

14.1. Frecvena genelor i genotipurilor


Noiunea de populaie a fost utilizat i introdus n biologie de ctre W. Johannsen, n anul
1903, care a definit-o ca un grup de indivizi care aparin unor biotipuri diferite (Ceapoiu, 1976).
Din punct de vedere genetic, populaia reprezint o grupare de indivizi aparinnd aceleai specii
care ocupa un areal geografic limitat, au aceeai structur i pun bazele geneticii populaiilor.
n cadrul unei populaii, setul complet de informaii genetice ( toate alelele existente ) pe care
le posed indvizii acesteia poart numele de fondul de gene al populaiei. n decursul timpului, acest
fond de gene se poate modifica, dar el se afl n echilibru dinamic permanent.
n cadrul unei populaii genetice ideale ncruciarea ntre indivizi se realizeaz la ntmplare, spunem
c populaia este panmitic, spre deosebire de cele naturale, unde are loc selecia n favoarea unui
anumit fenotip sau genotip.
Structura genetic a unei populaii este dat de fecvena alelelor i a genotipurilor existente n
cadrul su. Frecvena unei alele la locusul caracteristic, reprezint proporia pe care acesta o deine
n cadrul populaiei. Frecvena unui genotip reprezint proporia pe care acesta l deine n cadrul
populaiei.
132
Cele mai multe informaii privind structura genetic i evoluia unei populaii se obin prin
stabilirea frecvenelor alelelor. Aceasta, deoarece, spre deosebire de genotip care este supus mereu
segregrii i recombinrii, alelele sunt mai mult mai stabile, ele realiznd de fapt, puntea de legtur
ntre genitori i descendeni.
Pentru a prevedea structura genetic a urmatoarelor generaii ale unei populaii i a putea
efectua ncruciri n cadrul su, este necesar calcularea frecvenei alelelor n cadrul acesteia.
Conform legilor lui Mendel, dac la un locus ce determin un anumit caracter, exist doua alele A i
a, gemeii purttori ai alelei A provin de la genotipurile AA i de la jumtate din gameii genotipului
Aa. Acelai lucru se poate afirma i despre gameii coninnd alela a ( de la genotipul aa i jumtate
de la Aa ) .
Dac din 100 de exemplare 36 aparin genotipului AA, 48 genotipului Aa i 16 celui aa,
rezult frecvenele relative ale genotipurilor 36% AA, 48% Aa i 16% aa.
Frecvena genotipurilor este determint, aa cum se va vedea n continuare, de frecnea genelor din
populaia parental.
n cazul considerat mai sus, frecvena relativ a genelor se calculeaz pornind de la numrul
total al exemplarelor (N=100) i al celor din fiecare categorie genotipic: D=36 numrul de
homozigoi dominani, H=48 numrul de heterozigoi i R=16 numrul de heterozigoi recesivi.
D+H+R=N.
n locusul autozomal considerat, fiecare exemplar prezint cte doua alelele, iar suma
acestora n populaie este de 2N.
Numarul absolut al alelelor se calculeaz cu relaiile:
P(A) = 2D+H i Q(A) = 2R+H,
n care P(A) frecvena absoluta a alelei dominante i Q(A) frecvena absolut a
alelei recesive.
Frecvenele relative ale celor dou alele rezult din relaiile:
p(A) = (2D+H)/2N=(D+1/2H)/N i q(a) = (2R+H)/2N=(R+1/2H)/N.
Suma frecvenelor relative ale alelelor A i a va fi: p(A)+q(a) = 1, de unde :
p(A) = 1-q(a) i q(a) = 1-p(A).
Exprimarea frecvenei relative a genotipurilor n funcie de frecvena relativ a genelor rezult din
relaia binomial: [p(A)+q(a)] = 1, de unde : p(AA)+2pq(Aa)+q(aa) = 1, aa nct :
- frecvena relativ a homozigoilor dominani este p ;
- frecvena relativ a heterozigoilor este dat de produsul 2pq ;
- frecvena relativ a homozigoilor recesivi etse dat de q .
133
Frecvena relativ a genotipurilor n populaia descendenilor este determinat de frecvena relativ a
genelor n gameii produi de populaia parental, aa cum rezult din tabelul 14.1.

Gamei produi de prini Fond gametic mascul

P(A) q(a)

Fond gametic femel p(A) p(AA) pq(Aa)

Q(a) Pq(Aa) q(aa)

Tabelul 14.1. Frecvena relativ a genotipurilor n populaia descendenilor n funcie de


frecvena relativ a genelor n populaia parental (dup ofletea, 2005)

ntruct q = 1- p, exprimarea structurii genetice a populaiei pentru locusul bialelic n funcie


de frecvena relativ a genei dominante va fi: p(AA)+2p(1-p)Aa+(1-p)aa=1.
Aceste ecuaii reprezint expresiile matematice ale Legii Hardy Weinberg privind frecvena
genelor i a genotipurilor n populaii, prentru locii genetici bialelici. mperecherea n condiiile
panmixiei afer anse egale de ntlnire la fecundare a gameilor produi de prini.
ntr-o populaie panmictic, n funcie de genotipurile existente i frecvenele lor relatiove se
poate stabili frecvena tipurilor de mperecheri. Frecvenele relative ale combinaiilor genotipice
posibile sunt: p(AAxAA) x p(AAxAA) + 4pq(AAxAa) + 4pq( AAxaa) + 4pq( Aaxaa) + 2pq(
Aaxaa) + q(aaxaa) x q(aaxaa) = 1.
Modalitile de evaluare a frecvenei genelor i genotipurilor rmn valabile i n cazul
polialeliei, prin extensia lor la relaii trinomice, tetranomice s.a.m.d., n funcie de numrul de alele
existente n populaie n locusul genic considerat.

14.2. Principiul Hardy-Weinberg


n anul 1908, matematicianul englez G.H. Hardy i medicul german W. Weinberg, studiind
n mod independent frecvena genelor i a genotipurilor ntr-o populaie panmictic, au ncercat s
dea un rspuns la ntrebarea ce se ntmpl cu frecvena acestora n generaia descendent, n absena
forelor evolutive, punnd astfel bazele geneticii populaiilor. Conform Legii Hardy Weinberg,
ntr-o populaie panmictic aflat n echilibru i avnd un efectiv numeros, frecvena genelor i a
genotipurilor se menine constant de-a lungul generaiilor. Cu alte cuvinte, frecvena alelelor
134
dintr-o populaie se menine constant n diferite generaii, n absena influenei factorilor evolutivi
externi sau interni. O populaie poate crete sau se poate micora prin migraia indivizilor sau prin
modificarea natalitii i a mortalitii. Legea Hardy-Weinberg face abstracie de efectele mutaiei,
migraiei i seleciei la nivelul unei populaii, referindu-se la un caz ipotetic, practic inexistent n
natur, deoarece nu exist populaii n echilibru perfect.
Se consider o populaie panmictic mare i nchis (fr migraii), n cadrul creia nu au loc
mutaii i nu opereaz selecia, care cuprinde indivizi homozigoi dominani (AA) i recesivi (aa),
aflai n procent egal. Se pot realiza pe baz de probabilitate urmtoarele tipuri de ncruciri (Tab.
14. 2):
AA aa
50% 50%
AA AA Aa
50% 25% 25%
aa Aa aa
50% 25% 25%
Tab.14.2. Repartiia indivizilor n F1 la ncruciarea ntre organisme homozigote avnd
aceeai frecven.
n urma panmixiei, n generaia F1, din punct de vedere genotipic vor exista indivizi
heterozigoi Aa pe lng cei homozigoi dominani AA i recesivi aa. Din punct de vedere fenotipic,
n F1, 75% dintre indivizi prezint caracterul dominant A, iar 25% pe cel recesiv a, segregarea fiind
n raport de 3:1. Dac se consider c organismele din F1 vor da natere la un numr egal de gamei
n urma diviziunii meiotice, pentru fiecare printe Aa, jumtate dintre gamei vor conine doar gena
A, iar cealalt jumtate doar gena a, atunci frecvena genelor va fi i ea egal, fiecare dintre cele dou
gene A i a, fiind prezent n procentaj egal (50% A sau 0.5A si 50% a sau 0.5a), indivizii de tip AA
dnd natere doar la gamei purttori ai genei A, n timp ce homozigoii recesivi aa vor forma doar
gamei ce conin gena a.
INDIVIZI GAMEI

AA 25% A 25%
Aa 50% A 25% a 25%
aa 25% a 25%

Total A 50% ; a 50%


Tab.14.3. Frecvena genotipurilor i genelor n F1

Prin combinarea acestor gamei, se obine n F2 o segregare mendelian de:


135
25% indivizi homozigoi AA, 50% indivizi heterozigoi Aa i 25% indivizi homozigoi aa. adic o
frecven a genotipurilor identic cu cea din F1.
n ceea ce privete fenotipurile, ele sunt de asemenea identice cu cele din F1, adic:
75%A i 25%a.
Frecvena celor dou gene nu este ntotdeauna n procentaj egal n populaie. Cazul n care
ntr-o populaie frecvena genelor alele este egal, se ntlnete foarte rar. Astfel, dac se consider
cazul unei populaii n care 80% dintre indivizi sunt AA (80% din totalul gameilor poart alela A)
iar restul de 20% dintre indivizi sunt aa (20% din totalul gameilor poart alela recesiv a), n urma
mperecherii ntmpltoare a gameilor, pe baz de probabilitate se obine repartiia indivizilor n F1:
64% homozigoi dominani (AA)
32%heterozigoi Aa
4%homozigoi recesivi aa
Adic 96% dintre indivizi vor avea fenotipul A, caracterul recesiv a fiind ntlnit doar la 4%
dintre indivizi.
Dac se urmrete repartizarea genelor n aceast generaie se constat c frecvena genei A
este de 80%, iar a genei a, de 20%.
INDIVIZI GAMEI

AA 64% A 64%
Aa 32% A 16% a 16%
aa 4% a 4%

Total A 80% ; a 20%


Tab.14.4. Frecvena genotipurilor i genelor n F1
Matematic, rezultatele studiului populaiilor efectuate de G.Hardy i W.Weinberg,
pot fi generalizate astfel: dac frecvena gameilor A este p i a gameilor a este q.
Distribuia fenotipurilor n descenden este de p2 AA+2pq Aa + q2 aa , reprezentnd o
distribuie binomial, adic (p+q)2 = p2+ 2pq+q2=constant .
Dar p+q =1 ceea ce nseamn c q = 1-p , putnd fi nlocuit i rezultnd :
p 2 AA+ 2 p(1-p) Aa + (1-p) 2 aa .
Frecvena genotipurilor AA, Aa, aa se pstreaz constant de-a lungul generaiilor, la fel i
frecvena genelor. De exemplu gena A va avea frecvena:
p 2 + p(1-p) = p 2 + p p 2 = p.Iar a are frecvena p(1-p) + (1-p)2 = p-p 2 + 1-2p +p 2= 1-p
Cunoscnd frecvena genei A (q = 80% = 0,8) i a alelei a (p = 20% = 0,2) se poate
determina frecvena genotipurilor i fenotipurilor descendenei : AA= q2= 64% ,
136
aa = (1-q)2= 4% , 2Aa = 32% .
Fenotipic , 96% dintre indivizi manifest caracterul dominant i 4% caracterul recesiv.
Invers, dac se tie c ntr-o populaie frecvena fenotipului A este de 96% i cea a lui a de
4%, se poate calcula frecvena genei dominante A i a alelei recesive a, astfel:
aa = 4% = 0,04 , a = 0,04 = 0,2 = 20% , A = 100 - 20 = 80% .
De asemenea se poate calcula ci dintre indivizii cu fenotipul dominant sunt homozigii
(AA) sau heterozigoi (Aa): AA = q2 = 64%, Aa = 2(1-q) = 2x 0,8x0,2 = 32%.

14. 3. Factorii care modific structura genetic a populaiilor


Factorii modificatori ai structurii genetice a populaiei pot fi grupai n dou categorii:
1) factori care prin aciunea lor in procesul reproduciei modific frecvena genelor si implicit
a genotipurilor, acetia fiind: migraia, mutaia, selecia natural si driftul genetic;
2) factori care prin aciunea lor n procesul reproducei modific frecvena genotipurilor, chiar
daca nu schimb frecvena genelor: deriva genetic i consangvinizarea.

14.3.1. Migraia
Migrarea indivizilor nspre i dinspre populaie afecteaz frecvena alelelor la un locus
datorit eliminrii i respectiv, achiziionrii de alele noi.
Pentru a identifica efectul migrrii indivizilor se determin rata migrarii proporia alelelor
din populaia analizat care este nlocuit de alele migratoare n fiecare generaie. Considerm c
intr-o populaie frecvena alelelei etse egal cu p, iar n populaia donatoare este egal cu P. Daca
migraia are loc ntr-un singur sens intr-o porporie egala cu m pentru fiecare generaie, atunci
diferena ntre frecvenele celor dou populaii va descrete de m ori in fiecare generaie.
Se constat c schimbarea frecvenei unei alele ntr-o populaie n care are loc migrarea indivizilor
depinde de proporia indivizilor implicai i de frecvenele acesteia n populaiile donor acceptor.
Prin migrarea indivizilor ntr-o alt populaie se schimb componena acesteia, iar prin transmiterea
noilor alele la descendeni se realizeaz o mbogire a fondului genetic al populaiei.

14.3.2. Mutaia
Mutaia reprezint o modificare n structura i funciile materialului genetic, care nu este
determinat prin recombinare i se transmite la descendeni din generaie n generaie. Sunt
reproductibile la descendeni acele mutaii care afecteaz materialul genetic din gamei , n timp ce,
la plante, modificrile genetice existente doar n celulele somatice pot fi transmise urmailor direci
137
doar n cazul nmulirii vegetative. Descendenii care au dobndit de la prini o mutaie somatic n
urma multiplicrii vegetative vor putea ns transmite modificarea genetic respectiv i prin
nmulire sexuat, cu condiia s fie fertili.

Indivizii purttori ai unei mutaii sunt denumii mutani, iar genele aprute prin mutaie sunt
denumite mutante. Gena normal care suport o modificare prin mutaie se numete gen de tip
slbatic. Anumite gene sunt predispuse la mutaii i sunt denumite mutabile, iar alte gene denumite
mutatoare determin sporirea considerabil a ratei mutaiilor altor gene.

Dei mutaiile sunt considerate sursa primar a variabilitii organismelor, totui rata
mutaiilor natuarle nu este foarte mare. Acest lucru se datoreaz faptului c, ntr-o generaie, la un
locus respectiv o gen din 10 mii pn la un milion, se poate produce o modificare genetic de
origine mutagen.

14.3.3. Selecia natural

Potrivit legii Hardy Weinberg, se presupune c genotipurile particip la reproducere n mod


egal. Cu toate acestea, presiunea de selecie exercitat de mediu sau de ali factori poate s se
manifeste diferit n funcie de natura genotipului avut n vedere ( AA, Aa, aa). Genotipurile
defavorizate devin prin urmare mai puin numeroase n populaie. n consecin genele lor vor fi
transmise cu o frecven mai mic generaiei urmatoare. Se produce astfel o variaie a frecvenei
genelor i deci a structurii populaiei ( frecvenei genotipurilor ) de la o generaie la alta.

Contribuia proporional a fiecarui genotip (individ) la descendenele generaiei urmatoare


este denumit valoare de adaptare (fitness) notat cu W. Ea este definit n raport cu coeficientul de
selecie (s) ca fiind W=1-s.

Intensitatea seleciei care se exercit pe un genotip particular se numete coeficient de


selecie (s) i reprezint reducerea proporional a contribuiei gametice a unui genotip particular
comparat cu un genotip standard, de obicei cel mai favorizat.

14.3.4. Driftul genetic

Driftul genetic reprezint schimbarea frecvenei alelelor de la o generaie la alta, unde un rol
important l joac modul arbitrar sau hazardul prin care aceste alele se transmit de la prini la
urmai.

Tot ansa este cea care, n unele cazuri, stabilete dac un individ supravieuiete i se
reproduce.
138
Cnd forele selective sunt absente sau relativ slabe, frecvena alelelor tinde s creasc sau s
scad. Astfel, driftul genetic poate s conduc la dispariia anumitor alele n favoarea altora, o
populaie ajungnd s se separe n dou populaii divergente cu seturi diferite de alele.

14.3.5. Consangvinizarea
Consangvinizarea reprezint autofecundarea forat a plantelor alogame sau ncrucisarea ntre
indivizi nrudii, la animale i om, ( frate x sor, tat x fiic, mam x fiu).
Descendena consangvin timp de mai multe generaii succesive a unei plante alogame sau a
unei perechi de indivizi ( la animale ) este cunoascut sub denumirea de linie consangvinizat.
Efectul major al consangvinizrii este obinerea de genotipuri noi, homozigote, ca urmare a
desfacerii populaiei autofecundate n genotipurile componente. Astfel, consangvinizarea reprezint
o alt surs important de variabilitate genetic.
Consangvinizarea constituie o metod utilizat in ameliorarea numeroaselor specii de plante
alogame (porumb, floarea soarelui, sfecl, ceap, varz, morcov, castravei etc.), precum si la unele
specii de animale (psri, porci etc.).
EFECTELE FENOTIPICE ALE CONSANGVINIZRII
Datorit consangvinizrii, are loc o reducere puternic a vitalitii, care afecteaz capacitatea
de cretere, de reproducere i de adaptare, mai ales dup prima autofecundare forat ( C1). Acest
fenomen cunoscut i sub denumirea de de depresiune de consangvinizare, variaz foarte mult cu
specia de plante. Astfel, este nul la dovleac, foarte mic la sfecl i foarte puternic la porumb,
floarea soarelui, varz, salat, ceap, morcov, etc. Reducerea vitalitii are loc pan la C7 C8 , cnd
se ajunge la un minim de consangvinizare.
Scderea vitalitii este marcat de reducerea taliei, a suprafeei foliare, diminuarea
elementelor de productivitate i, respectiv, scderea evident a produciei, apariia unor deficiene
clorofiliene etc.
Un efect fenotipic important l reprezint scderea rezistenei liniilor de consangvinizare la
anumii factori de mediu datorit gustrii bazei genetice. Odat cu creterea numrului de generaii
consangvine se realizeaz uniformitatea fenotipic a liniilor consangvinizate, care practic dup 7-10
generaii sunt homozigote la majoritatea locilor.
EFECTELE GENOTIPICE ALE CONSANVINIZRII
Cele mai importante efecte genotipice sunt urmtoarele:
1) segregarea puternic in primele generaii de autofecundare si desfacerea populaiei
n biotipurile componente care pot fi : homozigot-recesive, homozigot-dominante,
homozigot-recesive pentru anumii loci i homozigot-dominante pentru ali loci.
139
Genotipurile homozigot-recesive se identific relativ uor i prezint n unele
cazuri caracteristici duntoare, cum ar fi: plante pitice, debile, sterile, cu deficiene
clorofiliene etc. Ele pot fi identificate n C1 sau C2 i pot fi eliminate uor.
2) creterea homozigoiei odat cu numrul de generaii consangvine. Indicele folosit
frecvent pentru aprecierea gradului de homozigoie ntr-o populaie autopolenizat
n funcie de numrul locilor luai n considerare, generaia de consangvinizare i
numrul indivizilor dintr-o generaie de consangvinizare, este coeficientul de
consangvinizare.
IMPORTANA LINIILOR CONSANGVINIZATE
Aa cum s-a artat, liniile consangvinizate au n general, vitalitate redus, motiv pentru care
nu pot fi folosite direct n producie. Cu toate acestea, la majoritatea speciilor alogame anuale,
obinerea i folosirea liniilor consangvinizate n ameliorarea acestor specii, este o metod eficace din
urmtoarele considerente majore:
1. unele linii consangvinizate sunt valoroase datorit manifestrii unor gene recesive n star
homozigot, care controleaz caractere si insusiri dorite de om, cum ar fi: port erect, tuf
compact, frunze sesile, coninut redus in alcaloizi, rezisten mare la anumii factori de mediu,
etc.;
2. obinerea efectului heterozis prin ncrucusarea liniilor consangvinizate i obinerea
hibrizilor comerciali F1, care treptat tind s nlocuiasc soiurile la numeroase specii de plante.

14.3.6. Fenomenul de heterozis


Heterozisul este fenomenul opus consagvinizrii, care reprezint expresia genetic favorabil
a hibridrii. Cu alte cuvinte, heterozisul reprezint cresterea vigorii hibride n F1 n urma ncrucisrii
ntre forme (linii consagvinizate, soiuri, etc.) diferite genetic. ncepand cu generaia F2, efectul
heterozis scade datorit segregrii. Fenomenul de heterozis are un rol deosebit n ameliorarea
plantelor alogame, el putandu-se fixa la plante cu nmulire vegetativ. De asemenea, heterozisul se
manifest i la plantele autogame (tomate, ardei, etc.).
Intensitatea heterozisului este foarte mare la ncrucisarea ntre linii consangvinizate sau ntre
soiuri (linii pure) i scade la ncrucisarea ntre forme cu grad ridicat de heterozigoie.
Fenomenul heterozis afecteaz att caracterele cantitative (elemente de productivitate, nsuiri
biochimice, nsuiri fiziologice etc), ct i o serie de carctere calitative (culoarea i forma unor gene,
etc.).
140
Dup natura caracterelor i nsusirilor afectate se disting urmtoarele tipuri de heterozis
(Gustafsson, 1951):
- heterozis reproductiv cnd n F1 sporete productiviteatea de semine i respectiv,
producia de fructe;
- heterozis somatic cnd n F1 crete considerabil masa vegetativ;
- heterozis adaptiv cnd n F1 se nregistreaz o cretere a rezistenei plantelor la anumii
factori de mediu; acest tip de heterozis apare mai ales la ncrucirile ndeprtate.
Efectul heterozis ( HF1) se calculeaz frecvent in dou moduri, i anume:
HF1 = XF1- (XP1 + XP2 )/2 sau HF1 = XF1 Xpmax , n care: XF1 = media aritmetic a
populaiei F1 pentru caracterul analizat; XP1 = media aritmetic a populaiei printelui cu valoarea
fenotipic maxim, notat cu P1, XP2 = media aritmetic a populaiei printelui cu valoarea minim,
notat cu P2 .
n generaiile urmtoare, efectul heterozis scade cu 50% de la o generaie la alta datorit
reducerii heterozigoilor cu cate 50%. Astfel, HF2 =1/2 HF1 HF3 = 1/2 HF2 etc.
IMPORTANA PRACTIC A HETEROZISULUI
Pe lng rolul heterozisului n evoluia plantelor, el este considerat ca o metod de ameliorare
extrem de preioas si benefic pentru sporirea produciei agricole. Aa se explic faptul c la
numeroase specii agricole hibrizii F1 se afirm foarte rapid i cu siguran ei vor nlocui soiurile
existente n cultur.
Cercetrile efectuate la plantele autogame (Lerber, 1954) au dus la concluzia c efectul
heterozis poate fi mare i foarte important n direcia heterozisului reproductiv (creterea produciei
de fructe, de semine etc) i adaptiv, i mai puin semnificativ in direcia cresterii masei vegetative.
Odat cu descoperirea sterilitii mascule si a genelor restauratoare de fertilitate, precum i a
posibilitilor de polenizare se asigur premize rapide de ameliorare a unor specii autogame foarte
importante cum sunt : graul, orzul, mazrea, fasolea, soia etc.
Dintre plantele legumicole, tomatele, ardeii, vinetele, castraveii, pepenii etc., manifest un
pronunat efect heterozis. La plantele pomicole a fost semnalat o cretere a vigorii hribride la prun
i piersic.
La unele specii de plante heterozisul din F1 poate fi fixat n descenden prin inmulirea
vegetativ a hibrizilor din prima generaie. Micropropagarea prin culturi de celule i meristeme apare
ca o alternativ rapid de fixare a heterozisului.
Fixarea heterozisului se poate realiza i pe diferite ci genetice, precum: inducerea
popliploidiei, inducerea unor translocaii multiple, a unor deficiene i inversii cromozomale, etc.
141
TEST DE EVALUARE
Exemplu:
1. Ce reprezint populaia din punct de vedere genetic ?
Rspuns:
Populaia reprezint o grupare de indivizi aparinnd aceleai specii care ocup un areal
geografic limitat, au aceeai structur i se pot reproduce.

1. n ce const principiul Hardy Weinberg?

2. Ce reprezint valoarea de adaptare a fiecarui individ?

Exerciii
Exemplu :
1. De cine este dat structura genetic a unei populaii ?
a) de frecvena alelelor i a genotipurilor existente n cadrul su;
b) de frecvena alelelor i a fenotipurilor existente n cadrul su;
c) de fenotipul i genotipul acestora.
Rspuns: a
2. Ce reprezinta mutaia?
a) reprezint o modificare n structura materialului genetic;
b) reprezint o modificare n structura i funciile materialului genetic;
c) reprezint o modificare fenotipic.
3. Mutaia se transmite la descendeni din generaie n generaie?
a) da;
b) nu;
c) doar atunci cnd ambii prini sunt heterozigoi.
4. Cum sunt denumite genele care sunt predispuse la mutaii?
a) mutatoare;
b) multiple;
c) mutabile.
142
5. Cine sunt considerate surs primar a variabilitii organismelor ?
a) migraiile;
b) mutaiile.
6. Liniile consangvinizate pot fi folosite:
a) n producie
b) n ameliorare
7. Efectul heterozis se poate menine:
a) dou generaii;
b) o singur generaie;
c) mai multe generaii.

Rezumatul temei
Noiunea de populaie a fost utilizat i introdus n biologie de ctre W. Johannsen, n anul
1903, care a definit-o ca un grup de indivizi care aparin unor biotipuri diferite (Ceapoiu, 1976).
Din punct de vedere genetic, populaia reprezint o grupare de indivizi aparinnd aceleiai
specii care ocupa un areal geografic limitat, au aceeai structur i pun bazele geneticii populaiilor.
n cadrul unei populaii, setul complet de informaii genetice (toate alelele existente) pe care
le posed indvizii acesteia poart numele de fondul de gene al populaiei. n decursul timpului, acest
fond de gene se poate modifica, dar el se afl n echilibru dinamic permanent.
n anul 1908, matematicianul englez G.H. Hardy i medicul german W. Weinberg, studiind n
mod independent frecvena genelor i a genotipurilor ntr-o populaie panmictic, au ncercat s dea
un rspuns la ntrebarea ce se ntmpl cu frecvena acestora n generaia descendent, n absena
forelor evolutive, punnd astfel bazele geneticii populaiilor. Conform Legii Hardy Weinberg, ntr-o
populaie panmictic aflat n echilibru i avnd un efectiv numeros, frecvena genelor i a
genotipurilor se menine constant de-a lungul generaiilor. Cu alte cuvinte, frecvena alelelor dintr-o
populaie se menine constant n diferite generaii, n absena influenei factorilor evolutivi externi
sau interni. O populaie poate crete sau se poate micora prin migraia indivizilor sau prin
modificarea natalitii i a mortalitii. Legea Hardy-Weinberg face abstracie de efectele mutaiei,
migraiei i seleciei la nivelul unei populaii, referindu-se la un caz ipotetic, practic inexistent n
natur, deoarece nu exist populaii n echilibru perfect.
Factorii modificatori ai structurii genetice a populaiei pot fi grupai n dou categorii:
143
1) factori care prin aciunea lor in procesul reproduciei modific frecvena genelor si
implicit a genotipurilor, acetia fiind: migraia, mutaia, selecia natural si driftul
genetic;
2) factori care prin aciunea lor n procesul reproducei modific frecvena
genotipurilor, chiar daca nu schimb frecvena genelor: deriva genetic i
consangvinizarea.
Consangvinizarea reprezint autofecundarea forat a plantelor alogame sau ncrucisarea ntre
indivizi nrudii, la animale i om, (frate x sor, tat x fiic, mam x fiu).
Descendena consangvin timp de mai multe generaii succesive a unei plante alogame sau a
unei perechi de indivizi (la animale ) este cunoascut sub denumirea de linie consangvinizat. Efectul
major al consangvinizrii este obinerea de genotipuri noi, homozigote, ca urmare a desfacerii
populaiei autofecundate n genotipurile componente. Astfel, consangvinizarea reprezint o alt surs
important de variabilitate genetic.
Heterozisul este fenomenul opus consagvinizrii, care reprezint expresia genetic favorabil
a hibridrii. Cu alte cuvinte, heterozisul reprezint cresterea vigorii hibride n F1 n urma ncrucisrii
ntre forme (linii consagvinizate, soiuri, etc.) diferite genetic. ncepand cu generaia F2, efectul
heterozis scade datorit segregrii. Fenomenul de heterozis are un rol deosebit n ameliorarea
plantelor alogame, el putandu-se fixa la plante cu nmulire vegetativ. De asemenea, heterozisul se
manifest i la plantele autogame (tomate, ardei, etc.).

144
Tema nr.15
INTRODUCERE N GENETICA MOLECULAR. ACIZII NUCLEICI I
SEMNIFICAIA LOR GENETIC.

Uniti de nvare:
Acizii nucleici: structur i funcii;
Forme structurale de ADN;
Niveluri de mpachetare a ADN; Denaturarea i renaturarea ADN;
ADN repetitiv caracteristic eucariotelor;
Obiectivele temei:
nsuirea termenilor de baz utilizai n genetic ereditar ( cum ar fi acizi nucleici, ADN,
ARN) i rolul acestora;
trecerea n revist a formelor structurale de ADN respectiv monocatenar i bicatenar;
cunoaterea semnificaiei termenilor de denaturare i renaturare a ADN-ului i utilizarea lor
n hibridare, precum i nelegerea noiunii de ADN repetitiv.
Timp alocat temei: 3 ore
Bibliografie recomandat:
1. Gallia Butnaru, Ion Nicolae, Elena Tma, 1999. Genetic molecular. Ed. Mirton, Timioara;
2. Paula Iancu, 2008. Genetic - Ed. Sitech, Craiova;
3. Victor Stnescu, 1983. Genetica i ameliorarea speciilor forestiere.Ed. Didactic i pedagogic,
Bucureti.

15.1. Acizii nucleici: structur i funcii


Cu ajutorul determinrilor chimice si citologice, s-a descoperit c acizii nucleici ndeplinesc
funcia genetic de a nregistra, conseva i transmite informaia ereditar de la o celul la alta, de la
un individ a altul i de la o generaie la alta. Astfel, este unanim acceptat afirmaia, conform careia,
baza material a ereditaii este reprezenta de acidul dezoxiribonucleic (ADN-ul) i acidul ribonucleic
(ARN-ul), ambii fiind prezeni n celulele organismelor eucariote, sau solitari n cazul organismelor
procariote: ADN-ul reprezint suportul material al informaiei genetice la bacterii si adenovisui,
respectiv ARN-ul la ribovirui.
a) Structura chimic i molecular a acizilor nucleici
145
Acizii nucleici reprezentai de acidul dezoxiribonucleic (ADN) si cel ribonucleic
(ARN) sunt substante chimice cu o structur macromolecular, alcatuite din unuiti mai simple,
numite nucleotide. Un nucleotid este alctuit dintr-un nucleozid i un radical fosforic. Un nucleozid
este alctuit dintr-o baza azotat i o pentoz: riboza i dezoxiriboza.
Bazele azotate din macromolecula acizilor nucleici de la toate vieuitoarele sunt de
dou tipuri:
- baze purinice: adenina (A) i guanina (G);
- baze pirimidinice: citozina (C), timina (T), uracil (U).
Pentozele care intr n alctuirea acizilor nucleici sunt dezoxiriboza, la AND i riboza, la
ARN.

Fig. 15.1. Bazele purinice i pirimidinice. Structura chimic a principalelor baze azotate care
intr n componena moleculei acizilor nucleici (ADN i ARN)

Se constat c bazele purinice sunt aceleai n ambii acizi nucleici , ns dintre bazele
pirimidinice, numai citozina este comun, timina gasindu-se numai n ADN, iar uracilul numai n
ARN.

146
b) Funciile acizilor nucleici
Acizii nucleici reprezint substratul ereditii. Ei au inscris, sub form de codificare
biochimic informaia ereditar n catena polinucleatidic. Acetia au rol i n pstrarea informaiei
genetice (atat ADN-ul, ct i ARN-ul), dar i n sinteza proteinelor (numai ARN-ul).
Acizii nucleici ndeplinesc dou funcii: funcia autocatalitic i heterocatalitic.
1. Funcia autocatalitic (replicaie, sintez sau copiere). Se realizeaza n nuclei n interfaza
ciclului celular i are 3 faze:
1) Faza G1: cromozomii sunt monocromatidici, au 2 cromoneme, are loc sinteza
enzimelor necesare replicaiei.
2) Faza S: cromozomii devin bicromatidici, au 4 cromoneme n prezenta enzimei
ADN polimeraza, se dubleaz cantitatea de ADN.
3) Faza G2 : are loc sinteza proteinelor necesare organizrii fusului de diviziune.

2. Functia heterocatalitic implica TRANSCRIPIA informaiei dintr-o catena de ADN5-


3 n molecula de ARN mesager i TRANSLAIA care reprezint decodificarea informaiei din
molecula de ARN mesager n lanul protidic.
TRANSCRIPIA
La procariote n procesul de transcripie este copiat informaia genetic din mai multe gene. Gena
procariotelor are numai ADN informaional. ARN polimeraza recunoate un segment de ADN numit
promotor, se uneste cu acesta permind desfurarea transcripiei. La eucariote transcripia se
realizeaz dintr-o singur gen care are segmente informaionale (EXONI) i segmente
noninformaionale (INTRONI). n prima faz este copiat gena n ntregime n ARN premesager
apoi intronii sunt eliminai i se sintetizeaz ARN mesager neutru.
ETAPELE TRANSCRIPIEI:
1. Iniierea - ncepe cu codonul AUG sau CUG
2. Alungirea - implic aezarea pe baz de complementaritate a nucleotidelor n
ARN mesager.
3. nlocuirea nseamn sfaritul informaiei marcat prin prezena unui CODON STOP.

147
TRANSLAIA

Are loc n citoplasm la nivelul ribozomilor, const n transferul informaiei din molecula de
ARN mesager n lanul protidic.

ETAPELE TRANSLATIEI:

1. Recunoaterea locului de unde ncepe translaia;

2. Pregatirea aminoacizilor pentru sinteza proteinelor.

15.2. Forme structurale de ADN

Structura primar a ADN-ului

Structura monocatenar reprezint structura primar a ADN-ului. Secvena bazelor azotate n


cadrul structurii primare a ADN-ului este specific pentru fiecare specie i reprezint modalitatea de
nscriere a informaiei ereditare n molecula de ADN sub form de codificare biochimic.

Prin polimerizarea (sau nlnuirea) nucleotidelor, se formeaz lanuri polinucleotidice, adic


acizii nucleici. Legturile dintre nucleotide sunt fosfo-diesterice. Aceste legturi esterice se formeaz
ntre grupul fosfat al unei nucleotide (ribonucleotida sau dezoxiribonucleotida) i atomul de carbon
din poziia 3 al pentozei (riboza sau dezoxiriboza) nucleotidului vecin.

Un lan polinucleotidic are o polaritate: o extrem 3', cu un grup hidroxil i o alta 5' , cu un
grup fosfat. O singur caten (lan) de acid nucleic este un polimer fosfat-pentoz cu bazele purinice
i pirimidinice ataate sub forma de grupri laterale.

Informaia genetic este nregistrat n succesiunea bazelor.

Structura secundar a ADN-ului

Structura secundar a AND a fost stabilit n anul 1953 de ctre J.D.Watson i F.H.C. Crick
i corespunde tipului B de ADN, prezent n regiunile de eucromatin, cu gene active metabolic.
Conform acestui model, molecula de ADN este alcatuit din dou catene macromoleculare,
antiparalele, cu direcie diferit de naintare, rsucite n jurul unui ax comun, avnd forma unei scari
n spiral. Dublul helix prezint rsucirea spre dreapta, fiind uor asimetric i prezint dou scobituri
(una mare, una mic) .
148
Fig. 15.2. Structura primar a ADN-ului

Molecula de ADN este format din doua catene polinucleotidice nfaurate una n
jurul celeilalte, ntr-un dublu helix de dreapta. Bazele azotate i implicit cele dou catene ale
moleculei de ADN se leaga ntre ele prin puni de hidrogen. Punile de H dintre A-T sunt duble, iar
cele dintre C-G sunt triple. Coloana zahar-fosfat se afl la exteriorul helixului, iar bazele azotate sunt
orientate spre interior (centru) n planuri aproximativ perpendiculare pe axa (lungimea) moleculei.

Molecula de ADN are forma unei scari n spiral: balustradele sunt constituite din
coloanele zahar-fosfat, iar treptele fiind reprezentate din bazele azotate.

Cele doua catene polinucleotidice sunt: antiparalele, un lan fiind orientat n directia 3' -5'
,iar celalalt n directia 5' -3 ' i complementare, secvena nucleotidelor dintr-o caten "dictnd"
secvena nucleotidelor din cealalta caten.

Adenina se leag ntotdeauna de timin i citozin de guanin (A-T; C-G).

De exemplu dac o caten conine secvena TACGTA, cealalt caten trebuie s conin secvena
ATGCAT, din cauza regulilor de mperechere menionate aici.

Principiul complementaritii, care reglementeaz mperecherea bazelor, asigur att


autoreplicarea, ct i transferul informaiei genetice n succesiune bazelor.

149
15.3. Niveluri de mpachetare a ADN; denaturarea i renaturarea ADN

Moleculele de ARN au un rol esenial n meninerea strii compacte a ADN. S-au


propus mai multe modele de mpachetare a moleculei de ADN. Cel mai acceptat este acela propus de
Pettijohn i Hecht (l974), n acord cu care, mpachetarea se face printr-un proces de pliere i
supraspiralizare (formare de suprahelice). Se formeaz astfel o structur condensat, meninut prin
aciunea asociat a proteinelor din nucleoid.
Modelul de mpachetare prin pliere i supraspiralizare ncearc s explice mecanismul
molecular al drumului invers, de la structur circular relaxat a macromoleculei de ADN, la
arhitectura corpuscului dens existent n celul.
Pentru mpachetare, se consider c molecul dublu catenar, circular, iniial se
pliaz n 40-60 de domenii egale. Punctele de pliere sunt determinate de molecule de ARN nscnde,
legate cu una dintre extremiti de ARN-polimeraz. Moleculele de ARNr i ARNt, mpreun cu
ARN-polimeraz particip la formarea i meninerea domeniilor de pliere. Prin pliere, diametrul
cromosomului scade la circa 30 Am. n interiorul fiecrui domeniu de pliere are loc un proces de
supraspiralizare. Supraspiralizarea este o stare fizic n care molecula de ADN se pliaz prin rasucire
n jurul propriei axe .
Moleculele de ADN dublu catenare pot suferi modificri importante ale proprietilor
lor fizice, ca rezultat al aciunii unor factori fizici (temperatura) sau chimici (modificri de pH,
prezena unor substane de tipul alcoolilor, cetonelor etc) .
Prin nclzire la temperaturi cuprinse ntre 63 i 100 grade C, timp de circa 10 minute,moleculele de
ADN dublu catenare avnd diverse proveniene, sufer o rupere a legturilor de hidrogen dintre
catenele complementare, precum i a legturilor van der Waals dintre bazele azotate stivuite,
determinnd trecerea la structura monocatenar a ADN-ului, proces denumit denaturare.
Denaturarea termic este denumit i topire, deoarece nclzirea ADN-ului,furnizeaz
energia necesar ruperii legturilor de hidrogen.Zonele din ADN bogate n guanin sau citozin se
topesc la temperaturi mai nalte, deoarece ntre G - C exist trei legturi de hidrogen, fiind astfel
mai rezistente la denaturare. ntre adenin i timin exist 2 legturi de hidrogen, denaturarea
zonelor bogate n A - T realizndu-se la temperaturi mai joase. Dovada n acest sens o constituie
faptul c denaturarea ncepe n zone bogate n A - T, iar temperatura de topire poate oferi indicii
asupra compoziiei n baze azotate a ADN-ului.Dac dup denaturarea complet, catenele separate
sunt rcite brusc, legturile de hidrogen nu se mai refac, ADN-ul rmnnd sub forma
monocatenar, fiind aa numitul ADN denaturat.
150
Cnd rcirea este lent, legturile de hidrogen se refac ntre catenele complementare,
refcndu-se i dublu helix al moleculei de ADN, proces numit renaturarea ADN-ului.
Dup denaturare - renaturare ADN-ul i pstreaz proprietile biologice.

Fig. 15.3. Denaturarea, renaturarea i hibridarea AD

15.4. ADN repetitiv caracteristic eucariotelor


ADN-ul repetitive este format din secvene nucleotidice (de tip A - T sauG - C), repetate de
ordinul a zecilor sau sutelor de mii ntr-un lan polinucleotidic. n general aceste secvene sunt
considerate lipsite de informaie genetic.n funcie de numrul repetrilor, ADN repetitiv se
clasific n: ADN nalt repetitiv i ADN moderat repetitiv.
ADN nalt repetitiv reprezint 5 - 10% din totalul ADN-ului celular,fiind reprezentat de
secvene nucleotidice n medie de 1.500 pb, care se repet ntre 50.000 i 1milion de ori.
Aceste secvene nalt repetate sunt localizate mai ales n regiunile telomerice i centromerice
ale cromozomului.
ADN moderat repetitiv reprezint 15 - 40% din totalul ADN-ului celular,cuprinznd secvene
mediu repetate, ntr-un numr de copii de 500 - 5.000 de ori.ADN-ul mediu repetat are o
aranjare caracteristic n genom, fiind reprezentat desecvene mediu repetate, separate cu
secvene de ADN nerepetitiv (secvene informaionale). Aceasta clas de secvene
dezoxiribonucleotidice este destul de heterogen,fcnd parte din cadrul ei i o serie de gene
funcionale reprezentate n copii multiple,cum ar fi genele pentru sinteza ARN-ribozomal i a
histonelor, ale cror numr de copii este cuprins ntre 500 i 2.000 n genom. Din categoria
ADN-ului moderat repetitiv, fac parte i elementele genetice mobile, care se pot deplasa n
interiorul genomului, fiind denumite elemente transpozabile. Secvenele repetitive din
molecula de ADN au funcii nc insuficient cunoscute. Mult timp s-au considerat a fi
151
secvene genetice inactive, dar recent s-a emis ipoteza c au un rol reglator i intervin n
procesul de difereniere celular.

TEST DE EVALUARE
1. Care este funcia principala a acizilor nucleici?
Rspuns:
Cu ajutorul determinrilor chimice si citologice, s-a descoperit c acizii nucleici ndeplinesc
funcia genetic de a nregistra, conseva i transmite informaia ereditar de la o celul la alta, de
la un individ a altul i de la o generaie la alta. Astfel, este unanim acceptat afirmaia, conform
careia, baza material a ereditaii este reprezenta de acetia.

2. Definii procesul de renaturare ADN.

3. Explicai structura secundar a ADN-ului.

Exerciii
Exemplu rezolvat
1. Care baze pirimidinice nu sunt comune ADN-ului i ARN-ului:
a) T,C;
b) U,T;
c) G,U;
Rspuns: b
2. Acizii nucleici ndeplinesc dou funcii:
a) funcia autocatalitic i heterocatalitic;
b) funcia autocatalitic i ereditar;
c) funcia autocatalitic, heterocatalitic i ereditar.
3. Ct reprezint ADN nalt repetitiv din totalul ADN-ului celular?
a) 4 10% ;
b) 5 - 10% ;
c) 15 40%.
152
4. O nucleotid este alcatuita din:
a) o baza azotat, un zahar i radical fosforic
b) o baz azotat i un zahar
c) o baz azotat i un radical fosforic
5. Ribovirusurile prezinta ca material genetic:
a) ADN
b) proteine
c) ARN
6. Bazele azotate ce intra in alcatuirea AND sunt:
a) A, G, C, T
b) A, G, C, U
c) A, G, C
7. Complementaritatea catenelor de AND se refera la legaturi de tip:
a) A-T; C-G
b) A-G; C-T
c) A-C; T-G
8. O solutie de AND supusa la temperaturi ridicate duce la separarea catenelor,
proces denumit:
a) degivrare
b) degradare
c) denaturare

Rezumatul temei

Acizii nucleici reprezentai de acidul dezoxiribonucleic (ADN) si cel ribonucleic (ARN) sunt
substante chimice cu o structur macromolecular, alcatuite din unuiti mai simple, numite
nucleotide. Un nucleotid este alctuit dintr-un nucleozid i un radical fosforic. Un nucleozid este
alctuit dintr-o baza azotat i o pentoz: riboza i dezoxiriboza.
Bazele azotate din macromolecula acizilor nucleici de la toate vieuitoarele sunt de dou
tipuri:
- baze purinice: adenina (A) i guanina (G);
153
- baze pirimidinice: citozina (C), timina (T), uracil (U).
Pentozele care intr n alctuirea acizilor nucleici sunt dezoxiriboza, la AND i riboza, la ARN.
Acizii nucleici reprezint substratul ereditii. Ei au inscris, sub form de codificare
biochimic informaia ereditar n catena polinucleatidic. Acetia au rol i n pstrarea informaiei
genetice (atat ADN-ul, ct i ARN-ul), dar i n sinteza proteinelor (numai ARN-ul).
ADN-ul prezint doua tipuri structurale: structura monocatenar (reprezint structura
primar a ADN-ului) i structura secundar a AND-ului.
S-au propus mai multe modele de mpachetare a moleculei de ADN. Cel mai acceptat este
acela propus de Pettijohn i Hecht (l974), n acord cu care, mpachetarea se face printr-un proces de
pliere i supraspiralizare (formare de suprahelice). Se formeaz astfel o structur condensat,
meninut prin aciunea asociat a proteinelor din nucleoid.
Modelul de mpachetare prin pliere i supraspiralizare ncearc s explice mecanismul
molecular al drumului invers, de la structur circular relaxat a macromoleculei de ADN, la
arhitectura corpuscului dens existent n celul.
ADN-ul repetitive este format din secvene nucleotidice (de tip A - T sauG - C), repetate de
ordinul a zecilor sau sutelor de mii ntr-un lan polinucleotidic. n general aceste secvene sunt
considerate lipsite de informaie genetic.n funcie de numrul repetrilor, ADN repetitiv se
clasific n: ADN nalt repetitiv i ADN moderat repetitiv.

154
Tema nr.16
TRANSFERUL I UTILIZAREA INFORMAIEI GENETICE

Uniti de nvare:
Replicarea macromoleculei de ADN (sinteza ADN);
Transcripia (sinteza ARN);
Procesarea ARN-m;
Tipuri de ARN;
Codul genetic;
Translaia (sinteza proteinelor);

Obiectivele temei:
dobndirea cunotinelor privind modelul semiconservativ de replicare a moleculei de
ADN;
trecerea n revist a diferitelor tipuri de ARN, sinteza acestora i rolul lor;
explicarea proceselor de transcripie i translaie referitoare la sinteza proteic;
trecerea n revist a codului genetic.

Timp alocat temei: 3 ore


Bibliografie recomandat:
1. Casian H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech
2. Szilagyi L., 2007, Genetic, Ed. Amanda Edit
3. Victor Stnescu, 1983, Genetica i ameliorarea speciilor forestiere, Ed. Didactic i
pedagogic, Bucureti.

16.1. Replicarea macromoleculei de AND (sinteza ADN)


O condiie esenial ce trebuie ndeplinit de ctre o substan pentru a putea fi numit
material genetic este aceea de a se multiplica (replica) cu cea mai mare fidelitate, astfel nct, n
procesul de diviziune celular, celulele fiice s conin aceeai informaie genetic ca i celula mam
din care au provenit.
n momentul n care au propus structura fizic bicatenar a ADN, Watson i Crick au propus
i modelul de replicare a acestuia: cele dou catene ale celulei mam sunt folosite ca matrie pentru
sinteza altor dou catene, fiice. Moleculele de ADN din nou formate vor avea cte o caten veche
provenit de la celula mam (matria) i o caten nou sintetizat. Acest mod de replicare poart
numele de replicare semiconservativ i a fost demonstrat experimental de ctre cercettorii
155
Mathews Meselson i Franklin Stahl, n 1958, utiliznd izotopul greu al azotului (N15) i separnd
moleculele de ADN cu greuti diferite prin centrifugare n gradient de densitate.
Replicarea ADN este un proces biochimic complex la care particip un ntreg aparat
enzimatic. Din cadrul acestuia fac parte:
1) ADN helicazele enzime care se leag de ADN-ul bicatenar, determin separarea
celor dou catene complementare i formarea furcii de replicare;
2) SSD (single stranded DNA) proteine care se leag de ADN -ul bicatenar sub form
de tetrameri i mresc viteza de replicare;
3) ADN girazele permit desfacerea celor dou catene la nivelul furcii de replicare;
4) Primaza (un tip de ARN polimeraza) sintetizeaz o scurt secven de ARN
primer - prin ataarea de nucleotide la catena matri, pe baz de complementaritate;
5) ADN polimerazele: Pol III funcia de elongare (polimerizare) 5 3 i Pol I cu
funciile: 5 3 elongare; 5 3 exonucleazic; 3 5 exonucleazic
(corectare);
6) ADN ligazele formeaz legturi covalente ntre C5 i C3 ale celor dou nucleotide
alturate.
Din punct de vedere chimic, sinteza ADN este, de fapt, o reacie de polimerizare. i, pentru
c este o reacie biochimic, trebuie s fie catalizat de ctre o enzim: ADN polimeraza.

ADNpolimeraza
H-P-P-P-Nn OH + H-P-P-P-Nx-OH Nn+1 + H2O + PP

Pentru a realiza sinteza ADN, enzima ADN-polimeraza are nevoie de:


1) prezena nucleotidelor sub form de trifosfai: dATP, dGTP, dCTP, dTTP; absena
uneia dintre acestea sau modificarea radicalilor de la atomii implicai n polimerizare
(C5 i C3) conduce la astoparea procesului;
2) prezena unei catene ce poate fi folosit ca matri; aceasta va determina, de fapt
ordinea bazelor azotate din noua caten;
3) prezena unei scurte secvene de nucleotide (ADN sau ARN), numit primer, care s
poat oferi captul C3-OH necesar formrii legturii covalente; cu alte cuvinte, ADN
polimeraza nu poate iniia sinteza unei catene de ADN de novo.
Deoarece ADN polimeraza poate aduga nucleotide doar la captul 3-OH, rezult c sinteza
noii catene este orientat Intotdeauna n direcia 53 (prima nucleotid are captul 5 liber, iar ultima
156
are captul 3 liber). n acelai timp, pentru c cele dou catene mam sunt antiparalele, este necesar
ca i catenele fiice s fie antiparalele. Acest fapt complic mecanismul de replicare a ADN. Mai
precis, pentru a se ndeplini toate condiiile, replicarea trebuie s fie semidiscontinu: o caten fiic
este sintetizat continuu, iar cealalt discontinu, sub forma unor fragmente mici de ADN care, apoi,
sunt reunite (vezi figura 16.1.).

16.1.1. Etapele procesului de sintez ADN


1) ADN-helicazele se ataaz la molecula de ADN bicatenar, la o anumit secven de baze
azotate numit originea replicrii (ORI) i desfac cele dou catene legate prin legturi de hidrogen.
Se formeaz de-a lungul moleculei o zon monocatenar sub forma unei bucle care, pe msur ce
helicazele nainteaz ntr-o direcie sau alta se lrgete din ce n ce mai mult.

Fig. 16.1. Sinteza ADN

2) Pentru a menine starea monocatenar necesar replicrii, proteinele SSD (single stranded-
DNA) se ataeaz la cele dou catene sub form de octameri.

157
3) Primazele, avnd la dispoziie nucleotidele sub form de trifosfai (dATP, dCTP, dGTP,
dUTP), ncep s le ataeze la catenele matri, pe baz de complementaritate, sintetiznd un fragment
scurt de ARN (50-75 nucleotide), numit primer. Reinem c, datorit orientrii antiparalele a celor
dou catene matri, primerii trebuie s fie i ei antiparaleli.

4) ADN polimeraza III (POL III), avnd la dispoziie captul 3-OH de la fiecare primer
ncepe s adauge la acesta noi nucleotide. Helicazele nainteaz de-a lungul ADN-ului separnd din
ce n ce mai mult cele dou catene iar, n urma lor, vine Pol II care i realizeaz funcia
polimerazic: adugarea de nucleotide la captul 3-OH utiliznd ca matri vechea caten de ADN.
Este important de reinut c, datorit orientrii antiparalele a celor dou catene matri i, datorit
faptului c, datorit orientrii antiparalele a celor dou catene matri i, datorit faptului c sinteza
de ADN are loc doar n direcia 5 3,una dintre catenele fiice, i anume cea care nainteaz n
aceeai direcie 5 3, se va sintetiza continuu (catena conductoare leading), pe cnd
cealalt, fiind antiparalel, se va sintetiza discontinuu (catena lagging), sub form de fragmente
scurte, denumite fragmentele Okazaki. Deoarece viteza de replicare este foarte mare, din cnd n
cnd, Pol III integreaz greit nucleotidele n catena fiic (de exemplu A n loc de C). n acest caz,
intervine enzima ADN polimeraza I (Pol I) care, datorit funciei sale exonucleazice n direcia
3-5, denumit i cea de corectur (proofreading), ndeprteaz nucleotida greit ncorporat, iar
Pol III i reia activarea de la acel punct.

5) Att catena continu, ct i cea discontinu, au la captul 5 primerul ARN sintetizat de


primaze. Acesta trebuie ndeprtat, funcie realizat tot de ctre Pol I prin domeniul su exonucleazic
n direcia 5 3.

6) Pe catena discontinu, prin eliminarea primerilor ARN ramn poriuni din catena matri
nefolosite pentru replicare (goluri). Acestea sunt umplute de ctre Pol I prin funcia sa polimerazic.

7) Fragmentele Okazaki sunt unite cu ajutorul enzimei ADN-ligaza care formeaz legtura
covalent ntre C5al unui fragment i C3' al urmatorului fragment.

158
Fig.16.2. Etapele sintezei ADN

16.1.2. Replicaia ADN la procariote i eucariote

Majoritarea organismelor procariote posed ADN dispus n form circular, ceea ce complic
oarecum procesul de replicare, innd cont de faptul c ADN este un dublu helix. Replicarea acestuia
ncepe dintr-un singur punct (ORI) i nainteaz n ambele direcii -replicare bidirecional.

La E.coli a fost demonstrat prin autoradiografiere c replicarea cromozomului su are loc tot
circular, acesta lund forma literei greceti theta () - replicarea tip (vezi figura 5.3.). La ORI,
cele dou catene se desfac, furca de replicare nainteaz n ambele direcii i, pentru a evita
suprarsucirea i tensionarea celor dou catene la polul opus lui ORI, enzimele numite
topoizomeraze creaz tieturi n una din cele dou catene, aceasta se rsucete, iar tensiunea este
eliminat.

Anumite virusuri cu ADN-ul circular, datorit faptului c au nevoie de un numr foarte mare
de copii ale acestuia, au adoptat o alt strategie de replicare a cromozomului lor. Modelul lor de
replicare poart numele de cercul rotativ i este prezentat n figur. Una dintre cele dou catene este
tiat la ORI i se creaz cele dou capete: unul 5' cu P i cellalt cu 3'-OH.

159
Fig. 16.3. Replicare de tip i cercul rotativ
Avnd la dispoziie captul 3'-OH, enzima ADN polimeraza ncepe s adauge noi nucleotide
folosind ca matri catena netiat, circular. Prin adugare de nucleotide la captul 3', captul 5' este
mpins nainte fapt care conduce implicit, la rotirea catenei din interior (cercul rotativ). De cele mai
multe ori, prin rotirea catenei din interior se formeaz lanuri lungi de ADN bicatenare cuprinznd
mai multe copii ale ADN-ului iniial. n final, enzimele vor tia acest lan n fragmentele
corespunztoare fiecrui cromozom, acestea se unesc i sunt identice cu ADN-ul circular pe baza
cruia au fost sintetizate.
La eucariote, ADN-ul este liniar, deci replicarea decurge n mod normal. Datorit lungimii
foarte mari a cromozomilor eucariotelor i vitezei mari de replicare a acestora, este necesar ca
procesul s nceap n mai multe puncte, mai multe ORI, de la fiecare dintre acestea, furca de
replicare naintnd n ambele direcii (replicare bidirecional).

16.2 Transcripia (sinteza ARN)


Transcripia este primul pas n procesul de expresie al genelor. Mai precis, este vorba de
sinteza unei molecule de ARN, utiliznd ca informaie ADN.
Aa cum am vzut n capitolul referitor la strucrura chimic a acizilor nucleici, ntre ADN i
ARN exist dou diferene majore: riboza nlocuite dezoxiriboza, iar uracilul nlocuiete timina.
Sinteza ARN este, din punct de vedere chimic, tot o reacie de polimerizare. O reacie
catalizat, de aceast dat, de ARN polimeraza.
Sinteza ARN prezint numeroase asemnri cu cea a ADN:
a) prezena nucleotidelor sub form de ribonucleleozide 5' fosfat(ATP,CTP,GTP, TTP);
b) prezena unei catene de ADN ce poate fi folosit ca matri. Observai c ARN ul se
sintetizeaz pe baza informaiei genetice din ADN i nu se replic, precum acesta din urm.
Ordinea bazelor azotate din ADN determin ordinea bazelor azotate din ARN.
160
Spre deosebire de ADN-polimeraza, ARN-polimeraza poate iniia sinteza de novo a unei
catene polinucleotidice. Cu alte cuvinte, ea nu necesit prezena unui primer anterior sintetizat. La
fel ca i ADN-polimeraza, ataeaz la carbonul 3'-OH o nou nucleotid, ceea ce dovedete c i
sinteza ARN este orientat n direcia 5' > 3'. Prin urmare, catena de ADN trebuie s fie
orientat in direcfia 3' -> 5' pentru c sinteza ARN este continu.
Ceea ce este foarte important de reinut este faptul c, pentru sinteza unui anumit ARN, cu o
anumit secven de baze azotate, este folosit, ca matri, o singur catena din molecula de ADN.
Aceasta este denumit catena sens, iar complementara sa - catena antisens. Dar, pentru sinteza
tuturor tipurilor de ARN sunt folosite ambele catene ADN. Cu alte cuvinte, o caten de ADN
poate fi sens pentru un tip de ARN i antisens pentru altul (vezi figura 5.4.).

Fig. 16.4. Sinteza ARN- ului folosind ca matri ADN-ul

16.3. Procesarea ARN-m


Este cel care transcrie informaia genetic din nucleu, de la nivelul ADN-ului i o transport
n citoplasm, pentru a fi tradus (translatat) n proteine la nivelul ribozomilor.
La procariote, ARNm este utilizat direct n translaie, fr nici o alt modificare. Spre
deosebire de acestea, la eucariote, prin transcripie, se sintetizeaz o molecul de ARNm primar
(transcript primar) care sufer o serie de modifcri pentru a deveni ARNm matur. Aceste
modificri poart numele de procesarea transcriptului primar i includ:
1) Adugarea la captul 5a unui grup de nucleotide terminal numit cap ce conine guanozina
modificat sub form de metil. Capul este necesar pentru ataarea ARNm matur la
ribozomi i iniierea translaiei.
161
2) Adaugarea la captul 3' a unui grup de nucleotide terminal (peste 200 de nucleotide) de tipul
poliadenozina - coada poli A. Aceasta asigur stabilitate moleculei de ARNm la
aciunea ribonucleazelor (enzime ce degradeaz ARN-ul) prezente n citoplasm.

3) Eliminarea secvenelor noninformaionale (intronilor) i reunirea celor


informaionale(exonilor). Este un proces complex cunoscut sub numele de mbinarea ARN-ului
(ARN splicing) ce are loc la nivelul spliceozomilor (particule situate n nucleu formate din
proteine i cteva tipuri de ARN nuclear mic - ARNnm). Moleculele de ARNnm conin secvene
complementare cu capetele 5' i 3 ale intronilor i exonilor, capete pe care,le aduc unul n
apropierea celuilalt, determinnd cuplarea lor i, n final, eliminarea intronilor.

Din analiza secvenelor de baze azotate din exoni i din introni s-a constatat c exist dou
secvene consens: una donor (capatul 5') i alta acceptor (capatul 3). n figur este prezentat
schematic mbinarea a doi introni prin eliminarea intronului. n urma eliminrii, intronul ia forma
unui lasso i, apoi, este fragmentat n secvene foarte mici. Legtura care se formeaz la nivelul
intronului, ntre A i G, este una atipic; C5 de la G se ataseaz la C2' de la A deoarece C3'este
ocupat de restul lanului nucleotidic.

LaTetrahymena eliminarea intronilor dintr-un precursor al ARN ribozomal este cu totul


special. Acesta se mpacheteaz n aa fel nct autoelimin intronii. Este prima dovad c ARN-
ul poate avea i rol enzimatic, cataliznd reacii chimice. Un astfel de ARN cu rol enzimatic poart
numele de ribozime.

Existena intronilor n transcriptul primar a fost demonstrat i pe baza hibridrilor


moleculare de tipul ADN - ARNm pentru aceeai gen. S-a constatat ca ADN formeaz din loc n
loc bucle, care reprezint secvenele noninformaionale eliminate n procesul de formare a ARNm
matur.

Numrul intronilor variaz foarte mult de la o gen la alta, dar, n general, eucariotele
inferioare au mai puini introni comparativ cu cele superioare. Majoritatea intronilor par s nu aib
o anume funcie, aceasta deoarece genele sintetizate artificial fr introni, au aceeai funcie ca i
cele cu introni. Dar, uneori, acetia pot include secvene reglatoare ale genei i, deci, reglatoare ale
transcripiei. n orice caz, ei au un rol esenial n evoluia genelor.

162
Fig. 16.5. Schema eliminrii intronilor

n cadrul unui ARNm matur se disting trei zone distincte:


a) captul 5' sau liderul care nu este folosit n translaie i, n anumite cazuri, determin rata acesteia;
b) secvena codificatoare avnd ntre 500 i 3000 baze azotate (n funcie de numrul de aminoacizi
din catena polipeptidic);
c) captul 3' sau coada care, de asemenea, nu este translatat. La procariote, majoritatea ARNm au o
via foarte scurt, de cteva minute. La eucariote, n schimb, viaa acestora este de cteva ore, dei
exist variaii mari de la cteva minute la cteva zile. Viaa scurt a ARNm reprezint un alt mod de
a regla activitatea unei gene.

16.4 Tipuri de ARN


A fost descris existena mai multor tipuri de ARN, care prezint caracteristici structurale i
funcionale diferite. Acestea sunt substane macromoleculare, alctuite dintr-o singur caten
polinucleotidic, ce n anumite regiuni poate prezenta o structur bicaten, datorit rsucirii catenei
in jurul propriei axe i formrii unor puni de hidrogen de tipul A=U, GC i invers.
ARN viral. ARN viral constituie materialul genetic de la ribovirusuri, ex : virusul mozaicului
tutunului, virusul poliomelitei, virusul gripal i altele. Prezint de obicei o form liniar, excepie
fcnd doar virusul encefalomelitei oarecilor care are structur circular. Mrimea i greutatea sa
molecular sunt dependente de cantitatea de informaie genetic pe care o posed. Se replic n
celula gazd n mod diferit .
163
ARN nuclear mic (ARN-nm sau ARN-sn). A fost evideniat n nucleii celulei animale.
ARN-nm interacioneaz cu proteine specifice formnd mici particule nucleare ribonucleoproteice.
Sinteza ARN-mn se realizaeaz cu ajutorul enzimei ARN-polimeraza III.
ARN mesager (ARNm). Este cel care transcrie informaia genetic din nucleu, de la nivelul
ADN-ului i o transport n citoplasm, pentru a fi tradus (translatat) n proteine la nivelul
ribozomilor.
La procariote, ARNm este utilizat direct n translaie, fr nici o alt modificare. Spre
deosebire de acestea, la eucariote, prin transcripie, se sintetizeaz o molecul de ARNm primar
(transcript primar) care sufer o serie de modifcri pentru a deveni ARNm matur(aa cum s-a
prezentat la procesarea ARNm).
ARN de transport (ARN-t). Este o molecul mic de ARN (70-90 de nucleotide) care aduce
aminoacizii la locul de sintez a proteinelor i, care, particip, prin domeniile sale (buclele
monocatenare i captul 3) la patru procese distincte care, cronologic, se desfoar astfel:
1) ataarea enzimei aminoacil sintetaza specific fiecrui tip de aminoacid;
2) ataarea unui anumit aminoacid la captul 3' ce se termin ntotdeauna cu secvena CCA. ARNt
care prezint ataat aminoacidul corespunztor se numete ARNt ncrcat.
3) ataarea la ARN ribozomal din componena ribozomului.
4) ataarea la codonul din ARNm i formarea legturilor de H dintre codon i anticodon.
n consecin pentru fiecare aminoacid esenial, exist un anumit tip de ARNt care se leag la
o anumit aminoacilsintetaz i recunoate un anumit codon din ARNm. Pentru a putea rspunde la
toate aceste procese fiecare ARNt are o anumit structur tridimensional. n figur este prezentat
configuraia unui ARNt cu domeniile sale i modul n care se leag aminoacidul la capatul 3'.

Fig.16.6. Structura ARN t

164
ARN ribozomal (ARN-r) reprezint circa 85% din cantitatea total de ARN din celul, fiind
localizat n ribozom unde este asociat cu proteinele. Ribozomii sunt particule ribonucleoproteice
(alctuite din ARN-ribozomal i proteine), de form relativ sferic, prezente att la procariote, ct i
la eucariote. Se afl, deasemenea, n constituia mitocondriilor i a cloroplastelor, organite celulare
de origine endosimbiont.
Ribozomii din mitocondrii i cloroplaste de la eucariote prezint caracteristici similare cu
cele ale ribozomilor de la procariote.

16.5. Codul genetic


Doar patru baze azotate sunt necesare pentru a determina ordinea celor douzeci
de aminoacizi dintr-o caten polipeptidic. Acest fapt este posibil deoarece o anumit combinaie de
trei baze azotate adiacente este utilizat pentru introducerea unui anumit aminoacid. Aceast
secven de trei baze azotate poart numele de codon, iar totalitatea codonilor alctuiete codul
genetic .
Ipoteza codului genetic sub form de triplet a fost dovedit matematic. Astfel, dac o singur
baz azotat ar fi codificat un aminoacid, atunci ar exista doar patru aminoacizi, dac dou baze
azotate ar codifica un aminoacid, atunci 42 = 16 aminoacizi posibili, n fine, dac trei baze azotate
codific un aminoacid, atunci 43 = 64.
Dei exist doar 20 de aminoacizi eseniali, 61 de codoni dintre cei 64 codific integrarea
aminoacizilor, ceea ce nseamn c mai muli codoni vor determina includerea aceluiai aminoacid
n catena polipeptidic.
Prima dovad acceptat drept evident a codului genetic sub form de triplei a fost
reprezentat de experimentul de inserare i deleie a anumitor baze azotate dintr-o secven
codificaroare. n procesul de translaie bazele azotate sunt citite secvenial, codon dup codon, orice
baz azotat inserat sau deletat duce la modificarea ntregului cadru de citire i, n consecin la
modificarea catenei polipeptidice inserate.
Vorbim aadar, de aa-numitul cadru de citire. Mutaiile acestuia (deleii, inserii de baze
azotate) din experimentele de translaie efectuate in vitro au dovedit c fiecare aminoacid din catena
polipeptidic este codificat de ctre o triplet de baze azotate - un codon.

165
O alt caracteristic extrem de important a codului genetic o reprezint degenerarea sa. Se
observ n tabel c toi aminoacizii, cu excepia metioninei i triptofanului, sunt codificai de cel
putin doi codoni. Dac analizm structura bazelor azotate ce intr n componena codonilor care
codific acelai aminoacid, observm c prima i cea de a doua sunt aceleai pentru toi (excepie
face leucina la care se poate schimba i cea de a doua baz). Cea care se schimb este baza azotat
numrul 3, care mai poart numele i de poziia labil. Raionamentul existenei bazei labile este
unul de natur energetic: sinteza proteic trebuie s decurg cu vitez foarte mare, iar formarea
celor trei legturi de hidrogen ntre codon i anticodon necesit timp i energie mai mult,
comparativ cu formarea doar a dou legturi.
Cea mai important caracteristic a codului genetic o reprezint universalitatea sa. Indiferent
de natura sau de gradul de evoluie al organismului pe care l analizm, aceeai triplet de baze
azotate codific acelai aminoacid. Prin urmare, codul genetic are o origine foarte veche, la nceputul
existenei primelor organisme.

16.6. Translaia
Reprezint procesul final de expresie al unei gene, respectiv acela de sintez a unei catene
polipeptidice avnd drept surs de informaie ADN. Translaia se desfaoar n citoplasm la
166
eucariote sau n citosol la procariote dar, ntotdeauna, la nivelul ribozomilor. Aa cum am vazut,
informaia genetic prezent la nivelul ADN ajunge la ribozomi sub forma codificat ARNm.

Fig16.7. Schema translaiei


Pentru a se putea iniia procesul de translatie este nevoie ca cei 20 de aminoacizi s fie gata
de a participa la formarea legturilor peptidice. Aceasta nseamn c ei trebuie s fie ataai fiecare la
ARNt -ul corespunztor lui. Reacia de ataare a fiecrui aminoacid la ARNt este catalizat de
enzima aminoacil ARN sintetaza. Enzima trebuie s posede capacitatea de a recunoate att
aminoacidul ct i ARNt-ul corespunztor. Recunoaterea se bazeaz pe existena, att la enzima, ct
i ARNt a unor conformaii tridimesionale ce permit mbinarea perfect dintre un anumit ARNt i o
anumit aminoacil ARNt sintetaz. De exemplu, leucil-ARNt-sintetaza se va putea cupla doar cu
ARNt ce va transporta aminoacidul leucin i care posed anticodonul pentru leucin.
Ribozomii, la nivelul crora are loc sinteza proteic, sunt alctuii din dou subuniti:
subunitatea mic i subunitatea mare. Denumirea lor este bazat pe constana de sedimentare. De
exemplu, ribozomii 70S de la E.coli au subunitatea mic de 30S, iar cea mare de 50S. n mod
normal, atunci cnd ribozomii nu sunt implicai n sinteza proteic, cele dou subuniti sunt
separate, ele unindu-se doar pentru a realiza aceast funcie. Prin unirea lor, n interiorul subunitii
mari se creeaz dou situsuri de reace: situsul peptidil (situs P) i situsul aminoacil (situs A) la
nivelul crora se vor integra ARNt ncrcai cu aminoacizii corespunztori.

16.6.1. Etapele sintezei proteice


1) Inierea catenei polipeptidice.
167
Subunitatea mic a unui ribozom se ataeaz la ARNm (matur la eucariote sau cel direct sintetizat, la
procariote), la secvena lider. Aceast nou structur este recunoscut de ctre subunitatea mare a
ribozomului care se va ataa i ea, rezultnd astfel, un complex format dintr-un ribozom complet i o
caten polinucleotidic de ARNm. Ribozomul are capacitatea de a nainta pe ARNm pn cnd, la un
moment dat, ntlnete codonul de iniiere - AUG. Orice ARNm, indiferent de tipul catenei
polipeptidice pe care o codific, trebuie s prezinte acest codon de iniiere. ntlnind acest codon,
ribozomul se oprete i permite ataarea la situsul A a ARNt cu anticodonul corespunztor: UAC.
Acest ARNt este ncrcat cu aminoacidul corespunztor: - metionina. ntre bazele azotate ale
codonului i cele ale anticodonului se formeaz legturile de H corespunzatoare datorit
complementaritii bazelor azotate.

2) Elongarea catenei polipeptidice.

Dup ataarea ARNt ce transport metionina la situsul A, ribozomul nainteaz din nou pe ARNm.
Astfel, nct ARNt-Metionina se mut n situsul P, situsul A ramnnd liber. Aici se va integra
urmtorul ARNt ce corespunde din punct de vedere al anticodonului (n figur, ARNt ce transport
prolina i are anticodonul GGC). Se constat c, acum, ambele situsuri sunt ocupate cu cte un ARNt
ce transport cte un aminoacid. ntre acetia din urm se formeaz legatura peptidic (COOH de la
metionin i NH2 de la prolin). Formarea acestei legturi nu mai permite medoninei s rmn
ataat i la ARNt-ul care a transportat-o, motiv pentru care acetia se separ. ARNt pentru
metionin, rmnnd fr aminoacid prsete situsul P. La situsul A rmne ARNt cu prolina dar,
de care, acum este legat i metionina prin legatura peptidic. Ribozomul se deplaseaz pe ARNm cu
nc o triplet de nucleotide astfel nct conformaia iniial prezent n situsul A ajunge n situsul P.
Situsul A rmne din nou liber pentru ataarea urmtorului ARNt i aa mai departe. Elongarea
reprezint de fapt, un ciclu de evenimente prezentate mai sus care se repet din nou i din nou, pn
cnd se ajunge la codonul de terminare a sintezei proteice.

3) Terminalizarea catenei polipeptidice.

n ARNm exist trei triplete de baze azotate: UAA, UAG i UGA pentru care nu exist nici un ARNt
cu anticodonul corespunztor. Aceste triplete se numesc codoni stop. n momentul n care ribozomul
ajunge pe ARNm la nivelul lor, nemaiexistnd nici un ARNt care s aduc un alt aminoacid, nu se
mai formeaz o alt legatur peptidic i, n consecin, sinteza proteic nceteaz. Catena
polipeptidic este eliberat, iar cele dou subuniti ribozomale se separ de ARNm.

Translaia prezint o caracteristic important i anume, aceea c are loc ntr-o anumit direcie.
Primul aminoacid are liber radicalul NH2, iar ultimul are liber radicalul COOH. n figura de mai jos
168
(fig.5.8.) este ilustrat procesul de expresie al unei gene innd cont de orientrile transcripiei i
translaiei.

Fig. 16.8. Dogma central a geneticii

TEST DE EVALUARE
1. Cine a emis modelul semiconservativ privind replicarea ADN i ce presupune acesta?
Rspuns:
Watson i Crick au emis ipoteza replicrii ADN dupa modelul semiconservative. Conform
acestui model, iniial are loc ruperea puntilor de hydrogen, rezultand AND monocatenar.
Ulterior, fiecare catena original servete drept matri pentru sinteza unei catene noi. Vor
rezulta doua molecule noi, fiecare avnd o catena veche i o caten nou-sintetizat. Datorit
punilor de hidrogen complementare de tipul A=T, GC i invers, secvena nucleotidelor din
cele dou molecule rezultate este identic cu secvena de nucleotide din molecula original.
Astfel cele dou molecule, respective cele doua celule fiice, vor avea aceeai baz ereditar.

2. n ce const transcripia ?

169
3. Care e diferena dintre ADN-polimeraza i ARN-polimeraza?

Exerciii
Exemplu rezolvat
Ct reprezint ARN-ul ribozomal (ARN-r) din cantitatea totala de ARN din celula:
a) circa 85%;
b) sub 70%;
c) Peste 95%.
Rspuns: a
1. Translaia se desfaoar ntotdeauna la nivelul :
a) aparatului Golgi;
b) mitocondriilor;
c) ribozomilor.
2. Transcripia se realizeaz:
a) n citoplasm;
b) n nucleu;
c) n nucleu i citoplasm.
3. Codonul reprezint:
a) dou baze azotate;
b) o baz azotat i un zahar;
c) un triplet de baze azotate.
4. Aminoacizii liberi se ataeaz de
a) ARNm;
b) ARNr;
c) ARNt.
5. Se poate spune despre codul genetic c este:
a) universal, degenerat;
b) specific, suprapus.

170
Rezumatul temei
Replicarea macromoleculei de ADN (sinteza ADN) - Watson si Crick au emis ipoteza
replicrii ADN dupa modelul semiconservativ. Conform acestui model, iniial are loc ruperea
puntilor de hidrogen, rezultnd ADN monocatenar. Ulterior, fiecare caten original servete drept
matri pentru sinteza unei catene noi. Vor rezulta dou molecule noi, fiecare avnd o catena veche
i o caten nou-sintetizat. Datorit punilor de hidrogen complementare de tipul A=T, GC i
invers, secvena nucleotidelor din cele dou molecule rezultate este identic cu secvena de
nucleotide din molecula original. Astfel cele dou molecule, respective cele dou celule fiice, vor
avea aceeai baz ereditar.
Sinteza proteic, controlat de ADN existent n cromozomi i coninnd informaia genetic
necesar sintezei proteinelor, debuteaz prin sinteza n nucleu a acidului ribonucleic mesager (ARN-
m, copie negativ fidel a unei catene polinucleotidice a ADN). Fenomenul se numete transcripie
i const n transferarea informaiei genetice din ADN n ARN-m.
Tipuri de ARN: ARN viral, ARN nuclear mic, ARN mesager, ARN de transport, ARN ribozomal
(ARN-r)
Cea mai important caracteristic a codului genetic o reprezint universalitatea sa. Indiferent
de natura sau de gradul de evoluie al organismului pe care l analizm, acelai triplet de baze azotate
codific acelai aminoacid. Prin urmare, codul genetic are o origine foarte veche, la nceputul
existentei primelor organisme.
Translaia reprezint procesul final de expresie al unei gene, respectiv acela de sintez a unei
catene polipeptidice avnd drept surs de informaie ADN. Translaia se desfaoar n citoplasm la
eucariote sau n citosol la procariote dar, ntotdeauna, la nivelul ribozomilor. Aa cum am vzut,
informaia genetic prezent la nivelul ADN ajunge la ribozomi sub forma codificat - ARNm.

171
Tema nr. 17
GEN, STRUCTUR I FUNCII
Uniti de nvare:
Concepii despre gen
Structura fin a genei
Structura genei la procariote
Structura genei la eucariote
Elemente genetice mobile: transpozoni, retrotranspozoni
Obiectivele temei:
dobndirea cunotinelor necesare nelegerii modului de funcionarea a genelor;
trecerea n revist a formelor structurale ale genei la procariote i eucariote;
cunoaterea semnificaiei termenilor genetici:transpozoni si retrotranspozoni;
Timp alocat temei: 3 ore
Bibliografie recomandat:
1. Casian H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech
2. Szilagyi L., 2007, Genetic, Ed. Amanda Edit

17.1.Concepii despre gen


T. H. Morgan si colaboratorii si (1910), n rezultatul investigatiilor efectuate cu musculiele
de oet, au stabilit c genele sunt localizate n cromozomi si sunt particule materiale, aranjate liniar
de-a lungul cromozomului, iar fiecare gen ocup un loc bine definit, care se numete locus.
Pornind de la aceast idee, a fost elaborat concepia clasic, conform creia gena are trei
caracteristici de baz:
Unitate funcional (determin caracteristicile ereditare);
Unitate mutaional (structura chimic a genei se schimb prin mutaie, ceea ce duce la
apariia caracterului nou);
Unitate de recombinare (n cadrul procesului de crossing-over are loc un schimb de gene
corespunztoare ntre cromatidele nesurori ale cromozomilor omologi). n concepia clasic gena
stabilete ordinea aminoacizilor n molecula proteic ce determin caracterul dat. O gen este
alctuit din aproximativ 900-1500 de nucleotizi din lanul de ADN (sau ARN viral). n anul 1941
concepia clasic despre gen s-a completat cu ipoteza o gen o enzim,formulat de G. W.
Beadle si E. L. Tatum. Iradiind cu raze ultraviolete culturile prototrofe de ciuperci Neurospora
sitophila si Neurospora crassa, ei au obinut o serie de mutaii biochimice dependente de sinteza
anumitor enzime.
172
17.2. Structura fin a genei

Fig. 6.1. Gene


Gena (din gr. genos descendent) reprezint unitatea elementar a eredittii. Pentru a
specifica particularittile eredittii G. Mendel (1865) a folosit termenul de factor ereditar.
Noiunea de gen a fost propus de W. I. Johannsen (1909) pentru a desemna unitatea ereditar de
baz, care este localizat n cromozomi si nu prezint subdiviziuni. Genele sunt redate prin simboluri
din 1-5 litere, care desemneaz succint caracterul afectat n limbile latin sau englez. Tipul normal
(slbatic) al caracterului respectiv se noteaz cu semnul +. Genele aprute prin modificarea genelor
normale sunt numite gene mutante.
De regul, genele slbatice sunt dominante (predomin n prima generaie). n rezultatul
procesului de mutaie, una i aceeai gen poate aprea sub mai multe forme discrete, cunoscute sub
denumirea de alele. Alelele sunt expresii difereniate ale unui caracter. n fiecare cromozom exist
doar o singur gen alel. n organismele diploide, fiecare gen se afl n doz dubl n cei doi
cromozomi omologi, ocupnd acelai locus i fiind gene identice (alele).

n cazul n care gena a suferit mai multe procese mutaionale n aceti loci se pot gsi gene
polialele. n funcie de plasarea lor n autozomi sau heterozomi, genele pot fi autozomale sau
heterozomale. n cazul plasrii lor n heterozomi, genele manifest fenomenul de sex-linkage,
transmindu-se cu frecven mai mare la unul dintre sexe. Dup funcia lor, genele sunt divizate n:
gene structurale, gene reglatoare i gene operatoare.
Genele structurale codific diferite proteine cu rol structural sau enzimatic. Cele operatoare
declaneaz sau nu activitatea genelor structurale. Genele reglatoare controleaz i dirijeaz
activitatea genei operatoare i a genei structurale.
173
Dup apariia geneticii moleculare, n anii 50-60, gena este definit drept un segment de
ADN sau ARN care conine informaia genetic necesar sintezei unei catene polipeptidice. Gena
este alctuit dintr-o secven de codoni care codific succesiunea aminoacizilor ntr-o caten
polipeptidic.
Conform concepiei o gen o caten polipeptidic, unele proteine sunt sintetizate pe baza
informaiei genetice din dou sau mai multe gene. De exemplu; hemoglobina A de la om este
alctuit din dou catene polipeptidice a i b i este determinat de dou gene diferite. V. M. Ingram
(1957) pune n relief particularitile de structur a hemoglobinei (HbS), diferit de cea normal
(HbA), prin substituia glutaminei cu valina n poziia a 6-a a lantului ).
S. Benzer (1957), cercetnd mutaiile r ale fagului T4 ce paraziteaz pe E . coli, a dovedit c
mutaiile i recombinrile pot avea loc la nivel intragenic, adic la nivelul codonilor i a nucleotizilor
aparte. El propune o serie de noiuni noi, i anume:
muton cea mai mic subdiviziune a genei, echivalent dup mrime cu un
nucleotid, a crui schimbare se soldeaz cu o mutaie;
recon cea mai mic subdiviziune a genei care poate fi separat i schimbat
prin crossing-over;
cistron cea mai mic parte funcional a materialului genetic reprezentat de
ADN (sau ARN viral).
W. Gilbert (1978) a propus termenii de exon (fig.17.2.) pentru denumirea fragmentelor
informaionale, numrul acestora variaz de la o gen la alta (ntre 2 i mai mult de 50) i
intron(fig.17.3.) pentru fragmentele neinformaionale.

Figura.17.2. Exoni

174
Figura.17.3.Introni

B. Mc. Clintorck nc n anul 1940 a demonstrat fenomenul de instabilitate somatic la porumb.


Datorit acestui fenomen, pe frunze, pe tulpini, pe inflorescene, pe endospermul boabelor apar pete
de culoare. Pentru a explica fenomenul, B. Mc. Clintorck a presupus c exist elemente de control,
care au capacitatea de a circula dintr-o regiune n alta a genomului si se pot insera n diverse locuri n
genom. Aceste elemente au fost numite elemente genetice transpozabile transpozoni.Astfel, s-a
dovedit c gena este o unitate mult mai complex dect se credea iniial.

Conform concepiei moderne:

gena constituie unitatea funcional a informaiei ereditare;

gena reprezint segmentul de ADN (sau ARN viral) format n medie din 1000-1500 de
nucleotizi dispui liniar;

n cadrul genei pot avea loc recombinri i mutaii;

exist gene structurale i reglatoare;

genele structurale codific sinteza proteinelor;

genele reglatoare controleaz i dirijeaz aciunea genelor structurale;

exist diferite mecanisme ale reglrii activitii genelor la procariote i eucariote.

175
17.3. Structura genei la procariote
Materialul genetic la procariote se caracterizeaz printr-o serie de particulariti i anume:
genomul bacterian este alctuit din dou categorii de determinani genetici:
genele eseniale (eucromozomiale), localizate n cromozomul bacterian;
genele accesorii, localizate n afara cromozomului bacterian, exist, mai mult sau mai puin,
autonom (plasmidele, elementele genetice transpozabile, fagii);
molecula de ADN este circular (marginile ei sunt unite prin legturi covalente);
molecula de ADN nu formeaz complexe cu proteinele histonice si nehistonice (este nud);
genomul bacterian este reprezentat printr-un numr relativ restrns de gene;
genomul bacterian contine un singur grup linkage (caracteristic cromozomului bacterian
sau nucleoidului);
bacteriile sunt organisme haploide (atunci cnd nu are loc replicarea ADN), dar pot fi
diploide i parial diploide, n funcie de sinteza ADN);
transmiterea caracterelor ereditare este diferit de cea a eucariotelor, ntruct lipsete
procesul clasic al reproducerii sexuale.
Cromozomul bacterian este alctuit dintr-o molecul de ADN dublu catenar circular.
Lungimea ei variaz ntre 1000-1400 m, diametrul fiind de 2,5 nm. Numrul de nucleotizi la E.coli
este de 4,1 106, iar masa molecular de circa 2,5 109 daltoni. Schema general a reglrii activitii
genelor procariote a fost propus de geneticienii F. Jacob si J. Monod n 1961 si expus n lucrarea
Mecanismul reglajului genetic n sinteza proteinelor. Dup schema de mai jos, genele cu funcii
nrudite, care funcioneaz asociat, sunt organizate n operon (fig.17.4.).

Fig.17.4.Schema unui operon

R gena reglatoare; P promotor; O operator;


S gene structurale; T terminator; r represor.
Un operon este transcris ntr-o singur molecul de ARNm si este alctuit din gena promotor,
gena-operator, gena reglatoare, genele structurale i terminator. La procariote genele structurale
funcioneaz n grup, iar la eucariote funcioneaz individual. Genele structurale sunt urmate de un
176
sector de ADN, numit terminator, care condiioneaz sfritul transcripiei ARNm .Genele promotor
i operator sunt precedate de ctre o gen reglatoare. Ea este separat de genele operonului, asupra
cruia acioneaz. Gena reglatoare, prin produsul su chimic (represor), dirijeaz activitatea genei
operatoare i a genelor structurale prin inducia sau represia transcripiei.

17.4. Structura genei la eucariote

Fig.17.5. Structura genei bacteriene i a genei eucariote

La eucariote materialul genetic are o organizare cu mult mai complex. Moleculele liniare de
ADN, dublu catenare, formeaz complexe cu proteinele histonice, alctuind fibra elementar
nucleohistonic (nucleozomal). Aceste substane, completndu-se cu ARN i proteinele
nehistonice, formeaz cromatina, materialul din care se difereniaz, n procesul de diviziune,
cromozomii.De menionat c la eucariote materialul genetic se caracterizeaz printr-o discontinuitate
genetic (n molecula de ADN se succed secvene informaionale (exoni) i neinformaionale
(introni), care sunt eliminate n procesul de transcripie a informaiei genetice (fig.6.5). Purttorii
materiali ai informaiei ereditare sunt considerai cromozomii. Termenul a fost propus n anul 1888
de ctre W. Waldeyer. Acesta a descoperit nite corpusculi cromatici n celulele n diviziune.
Cromozomii (din gr. chroma culoare, soma corp) reprezint uniti structurale compacte,
constante, alctuite din acizi nucleici i proteine, vizibili n timpul diviziunii celulare la o tratare cu
colorani bazici. Cromozomii au un rol deosebit n viaa celulei (organismului), deoarece asigur
transmiterea caracterelor la descendeni. La organismele eucariote, genele nu sunt organizate n
operoni, sistemele de reglaj fiind mult mai complicate dect la bacterii. n general, reglarea activitii
genelor la eucariote este mai puin studiat. Intronii i exonii ntr-o gen ocup poziii stabile, i sunt
variabili n numr i mrime.
177
17.5. Elemente genetice mobile: transpozoni, retrotranspozoni

Fig.6.6. Transpozonii

Transpozonii sau genele sltree (jumping genes) sunt secvene de ADN care se pot
insera repetat n mai multe situsuri ale unui genom. Mecanismul prin care un transpozon se
deplaseaz dintr-un situs n altul este de tipul cut and paste. Acest tip de gene a fost descoperit de
ctre Dr. Barbara McClintock de la Cold Spring Harbor Laboratory, New York, descoperire ce i-a
adus in 1983 Premiul Nobel pentru Medicin. Implicaiile acestor gene sltree se pot dovedi n
timp de amploarea descoperirii structurii ADN-ului de ctre Watson i Crick.

Dr. McClintock a pornit de la observaia c unele dintre boabele roii de porumb indian
prezentau dungi sau pete albe de diverse forme, pe cnd altele erau colorate uniform n rou, galben
sau erau complet albe. Prezena dungilor sau petelor albe nu putea fi explicat folosind legile
mendeliene i a dus la identificarea transpozonilor. Aceste gene pot inhiba sau bloca producerea de
pigment n anumite celule. Spre exemplu, dac transpozonul se deplaseaz pe o poziie adiacent
unei gene care codific producerea unui anumit pigment, celula va deveni incapabil s produc
pigmentul respectiv (de culoare roie, n cazul boabelor de porumb). Aadar, acestea vor
prezenta dungi sau pete albe sau vor fi n ntregime albe, n funcie de durata n care transpozonul se
situeaz n vecintatea genei de interes.

Fig.17.7. Boabele roii de porumb indian


178
n ceea ce ne privete, transpozonii se regsesc n ADN-ul fiecrei celule, iar per total
reprezint cca 50% din ADN-ul uman, ns activitatea predominant este la nivelul creierului, ceea
ce reprezint o cauza pentru apariia diferenelor comportamentale n cazul rudelor apropiate (chiar
gemeni).
Exist dou clase majore de transpozoni n funcie de modul n care se deplaseaz n
interiorul materialului genetic:

clasa 1 - retrotranspozonii, care se deplaseaz cu ajutorul enzimei reverstranscriptaz, ce


transform fragmente de ARN n ADN; dintre acetia, gena L1 este un exemplu important;
retrotranspozonii sunt majoritari n genomul uman;
clasa 2 - transpozonii autonomi, care utilizeaz pentru deplasare enzima protein-
transpozaza.

TEST DE EVALUARE
1. Enumerai cele trei caracteristici de baz ale genei, conform concepiei clasice.
Rspuns:
Cele trei caracteristici de baz ale genei sunt:
unitate functional (determin caracteristicile ereditare);
unitate mutational (structura chimic a genei se schimb prin mutatie, ceea ce duce la
aparitia caracterului nou);
unitate de recombinare (n cadrul procesului de crossing-over are loc un schimb de gene
corespunztoare ntre cromatidele nesurori ale cromozomilor omologi).

2.Enumerai cteva particulariti ale genei la procariote.

3. Care este structura genei la eucariote?

Exerciii
Exemplu rezolvat:
1. Poziia pe care o ocup o gen pe cromozom, se numete:
a) muton;
b) cistron;
179
c) locus.
Rezolvare: c
2. Cea mai mic subdiviziune a genei este:
a) recon;
b) muton;
c) situs.
3. Exonul este prezent n gena de la :
a) procariote;
b) eucariote;
c) procariote i eucariote.
4. Transpozonii cuprind clasele:
a) reverstranspozonii i retrotranspozonii;
b) retrotranspozonii i transpozonii autonomi.

Rezumatul temei

T. H. Morgan i colaboratorii si (1910), n rezultatul investigaiilor efectuate cu musculiele


de oet, au stabilit c genele sunt localizate n cromozomi i sunt particule materiale, aranjate liniar
de-a lungul cromozomului, iar fiecare gen ocup un loc bine definit, care se numete locus.
Pornind de la aceast idee, a fost elaborat concepia clasic, conform creia gena are trei
caracteristici de baz:
Unitate funcional (determin caracteristicile ereditare);
Unitate mutaional (structura chimic a genei se schimb prin mutaie, ceea ce duce la
apariia caracterului nou);
Unitate de recombinare (n cadrul procesului de crossing-over are loc un schimb de gene
corespunztoare ntre cromatidele nesurori ale cromozomilor omologi).
Gena (din gr. genos descenden) reprezint unitatea elementar a ereditii. Pentru a
specifica particularitile ereditii G. Mendel (1865) a folosit termenul de factor ereditar.
S. Benzer (1957), cercetnd mutaiile r ale fagului T4 ce paraziteaz pe E . coli, a dovedit c
mutaiile i recombinrile pot avea loc la nivel intragenic, adic la nivelul codonilor i a nucleotizilor
aparte. El propune o serie de noiuni noi, i anume:
muton cea mai mic subdiviziune a genei, echivalent dup mrime cu un
nucleotid, a crui schimbare se soldeaz cu o mutaie;
180
recon cea mai mic subdiviziune a genei care poate fi separat si schimbat
prin crossing-over;
cistron cea mai mic parte funcional a materialului genetic reprezentat de ADN (sau
ARN viral).
Materialul genetic la procariote se caracterizeaz printr-o serie de particulariti si anume:
genomul bacterian este alctuit din dou categorii de determinani genetici:
genele eseniale (eucromozomiale), localizate n cromozomul bacterian;
genele accesorii, localizate n afara cromozomului bacterian, exist, mai mult sau mai puin,
autonom (plasmidele, elementele genetice transpozabile, fagii);
molecula de ADN nu formeaz complexe cu proteinele histonice si nehistonice (este nud);
genomul bacterian conine un singur grup linkage (caracteristic cromozomului bacterian
sau nucleoidului);
bacteriile sunt organisme haploide (atunci cnd nu are loc replicarea ADN), dar pot fi
diploide i parial diploide, n funcie de sinteza ADN);
transmiterea caracterelor ereditare este diferit de cea a eucariotelor, ntruct lipsete
procesul clasic al reproducerii sexuale.
La eucariote materialul genetic are o organizare cu mult mai complex. Moleculele liniare de
ADN, dublu catenare, formeaz complexe cu proteinele histonice, alctuind fibra elementar
nucleohistonic (nucleozomal). Aceste substane, completndu-se cu ARN i proteinele
nehistonice, formeaz cromatina, materialul din care se difereniaz, n procesul de diviziune,
cromozomii.
Transpozonii sau genele sltree (jumping genes) sunt secvene de ADN care se pot
insera repetat n mai multe situsuri ale unui genom. Dr. McClintock a pornit de la observaia c
unele dintre boabele roii de porumb indian prezentau dungi sau pete albe de diverse forme, pe
cnd altele erau colorate uniform n rosu, galben sau erau complet albe. Prezena dungilor sau
petelor albe nu putea fi explicat folosind legile mendeliene i a dus la identificarea
transpozonilor. Aceste gene pot inhiba sau bloca producerea de pigment n anumite celule.
Retrotranspozonii, se deplaseaz cu ajutorul enzimei reverstranscriptaza, ce transforma
fragmente de ARN in ADN; dintre acetia, gena L1 este un exemplu important;
retrotranspozonii sunt majoritari n genomul uman.

181
Tema nr.18
REGLAJUL GENETIC LA PROCARIOTE I EUCARIOTE

Uniti de nvare:
Reglajul activitii genelor la procariote;
Reglajul activitii genelor la eucariote;
Rolul interferenei ARN n reglarea activitii genelor;

Obiectivele temei:
dobndirea cunotinelor privind mecanismele de reglaj genetic la procariote i
eucariote;
trecerea n revist a rolului interferenei ARN n reglarea activitii genelor;
Timp alocat temei: 2 ore
Bibliografie recomandat:
1. Casian H., 2006, Genetica suport pentru curs, Ed. Printech
2. Szilagyi L., 2007, Genetic, Ed. Amanda Edit
3. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. II, Ed. Bioterra, Bucureti.

18.1. Reglajul activitii genelor la procariote


n 1961, a fost publicat lucrarea Mecanismul reglajului genetic n sinteza proteinelor
(Journal of Molecular Biology), de ctre geneticienii francezi Francois Jacob i Jacques Monod. n
aceast lucrare a fost elaborat teoria reglajului genetic la procariote, ulterior, ctignd Premiul
Nobel.
Celula se comport ca un sistem autoreglat. Nucleul sau nucleoidul din celul este centrul de
comand i control al ntregii activiti celulare. Nucleul primete printr-un sistem enzimatic
informaii despre evenimentele ce au loc n citoplasm i intervine n controlul activitii celulare
prin declanarea, intensificarea sau stoparea producerii (funciei) unor proteine specifice. Mesajele
nucleului sunt expediate prin intermediul ARNm. Ca urmare putem spune ca sinteza proteinelor i a
enzimelor celulare nu este constant n timp, ea variaz n funcie de necesitile celulei.
Rolul proteinelor reglatoare este de a aciona ca nite comutatori chimici i n funcie de
prezena sau absena unui anumit compus pune proteina respectiv n poziia pornire sau oprire.
F. Jacob i J.Monod au descoperit urmtoarele ci de reglare genic a sintezei proteice:
182
inducia enzimatic;

represia enzimatic;

retroinhibiia enzimatic.
Inducia enzimatic este fenomenul prin care celulele au capacitatea de a produce enzimele
necesare metabolizrii unor substane, care nu sunt de obicei prezente n mediu. Acest fenomen de
inducie se realizeaz numai n prezena n mediu a substratului sau inductorului, iar enzimele
corespunztoare lor sunt numite enzime inductibile i au rol catabolic fiind implicate n degradarea
substratului.
De exemplu, dac n mediul nutririv al bacteriei E.coli se introduce galactoza, bacteria va
ncepe s produc enzima galactozidaza, care degradeaz specific galactoza. n acest caz, galactoza
acioneaz ca inductor, contribuind la sinteza enzimei de degradare.
Represia enzimatic este fenomenul opus induciei enzimatice, prin care este inhibat sinteza
proteic datorit unui represor. Represorul este o substan ce inhib sinteza uneia sau mai multor
proteine prin blocarea genelor. Represorul poate interaciona att cu un metabolit particular numit
efector, ct i cu o gen din operon, numit operator. Interaciunea dintre represor i operator
previne aciunea genelor structurale din operon.
Retroinhibiia enzimatic sau inhibiia prin feedback sau efectul Novick Szilard este un alt
sistem de control al sintezei proteice, care const n inhibarea sau blocarea activitii unei enzime n
urma interaciunii cu produsul final al acesteia. n cazul unui lan metabolic, unde intervin mai multe
enzime, produsul final prezent n cantitate mare inhib moleculele existente ale enzimei, controlnd
prima etapa a lanului metabolic. Un exemplu interesant care ilustreaz deosebirea dintre represia
enzimatic i retroinhibiia enzimatic a fost studiat la E.coli, bacterie la care prezena n mediu n
exces a aminoacidului L-izoleucina are un efect dublu asupra cii metabolice respective:
1) blocheaz activitatea enzimei L-treonin deaminaz, prima dintre cele cinci enzime care
transform L-treonina n L-izoleucin;
2) blocheaz producerea de ctre celule a tuturor enzimelor (inclusiv L-treonina deaminaz)
necesare pentru sinteza L-izoleucinei.
Cercetrile privind reglajul genetic la procariote, au dus la concluzia c genele ce acioneaz
asupra unei ci metabolice nu au o activitate independent, ci ele fac parte din uniti mai mari
denumite operoni ce funcioneaz coordonat.
La E.coli se aproximeaz c exist circa 200 operoni, din care numai activitatea unora este
mai bine cunoscut. Posibilitatea utilizrii lactozei din mediu se realizez cu ajutorul a trei enzime, a
183
cror sintez este determinat de trei gene structurale ce intr n alctuirea operonului lac. Aceste trei
gene se gsesc dispuse n ordine de-a lungul cromozomului bacterian.
n absena lactozei, genele structurale care determin sinteza celor trei enzime sunt inactive.
Adugndu-se lactoza n mediu, cele trei gene sunt din nou active i imediat ncepe sinteza celor trei
enzime. Activitatea celor trei gene structurale este controlat de o gen reglatoare 1+, care acioneaz
asupra lor prin intermediul unui represor. Absena lactozei duce la sintetizarea unei proteine
represoare, care se cupleaz cu un segment de ADN, denumit operator dispus naintea celor trei gene
structurale, iar activitatea genelor respective este blocat.
Exist mutante la care s-a pierdut controlul produciei celor trei enzime si acestea sunt
sintetizate permanent, chiar i in lipsa lactozei. Acestea sunt mutante de tip i care afecteaz gena
reglatoare.
Exist mutante ale celor trei gene structurale notate cu z, y i a, care determin sinteza
unor enzime modificate funcional i structural. Genele structurale determin fiecare sinteza unei
enzime, conform modelului o gen-o enzim.
Operonul lac este alctuit din urmtoarele subuniti dispuse n ordine: promotorul (p),
operatorul (o) si cele trei gene structurale z, y, a. Prima dintre aceste subuniti se numete
promotor este reprezentat de o secven de nucleotide, care servete ca loc de recunoatere pentru
enzima ARN polimeraza, determinnd, astfel, iniierea transcripiei. Operonul este, de asemenea,
format dintr-o secven de nucleotide care servete pentru cuplarea sa cu represorul elaborat de gena
reglatoare.

Operatorul lac este nonfuncional, pentru c n absena lactozei din mediu, gena reglatoare
sintetizeaz represorul care se cupleaz cu operatorul, inactivnd genele structurale. n prezena
lactozei, represorul se modific structural, iar el devine incapabil de a se cupla cu operatorul.
Operatorul lac devine funcional, cele trei enzime sunt sintetizate i lactoza poate fi metabolizat.
184
Inductori i corepresori. Moleculele represorilor pot fi i de form activ, dar i de form
inactiv. Aceast aspect depinde de combinarea lor cu moleculele mici de inductori si de corepresori.
Din alturarea inductorului cu corepresorul rezult un represor inactiv, n timp ce ataarea molecului
corepresoare de represor modific represorul inactivat ntr-o form activ. n concluzie, inductorul i
corepresorul au o aciune antagonist.
Enzimele alosterice. Prin enzime alosterice se neleg acele enzime care posed urmtoarele
caracteristici: prin fixarea unui inductor sau a unui inhibitor are loc modificarea conformaiei enzimei
i ele devin active sau inactive. Locul n care se fixeaz inductorul sau inhibitorul nu posed nici o
analogie structural cu substratul, fapt care a determinat ca acest tip de enzime s fie numite
alosterice. Inductorul i inhibitorul au primit denumirea de efectori alosterici.

Represorul este o protein sintetizat de o gen situat separat de operonul cu o activitate pe


care o regleaz.

18.1.1.Caracteristicile modelului Jacob-Monod


Reglajul activitii genelor a fost elaborat de F. Jacob i de J. Monod (1961) pe baza
cercetrilor proprii prin sinteza rezultatelor obinute din studiul bacteriilor. Acesta a fost primul
model imaginat de Jacob-Monod, care postuleaz existena unui operator, gena adiacent cu genele
structurale, avnd posibilitatea de a se combina sau nu cu un represor, indicnd sau blocnd
funcionarea genelor structurale. De aici, operatorul poate fi considerat un receptor al represorului.
Operatorul este plasat pe cromozom alturi de genele structurale i are rolul de a recepiona
semnalele emise de genele reglatoare, respectiv proteinele sintetizate n acest scop i le transform n
realitate prin acionarea asupra genelor structurale. Gena operatoare este un comutator chimic, care
declaneaz sau nu activitatea genelor structurale dintr-un lan metabolic.
Modelul Jacob-Monod are dou caracteristici mai importante:
1. stimularea unei sinteze se produce prin derepresarea ei, prin mpiedicarea funcionrii unui
represor al ei;
2. reglajul este de tip da sau nu, totul sau nimic, el nu afecteaz viteza de transcriere.
Cantitatea de proteine structurale sau de enzime sintetizate depinde de tipul de funcionare al
genelor operonului respectiv.
185
Mecanismul de reglaj genetic poate fi afectat de mutaii, att n ce privete genele reglatoare,
dar i n cele operatoare.
Operonul este un segment continuu de ADN, de pe cromozomul bacterian i corespunde
unui grup de gene, el se comport ca o singur unitate de transcripie genetic (produce o singur
molecul de ARNm) i de reglare genetic.

Operonul cuprinde:
1) Gene structurale un anumit numr, ce conin informaia genetic pentru sinteza unei
polipeptide (vezi fig. de mai sus).
2) Operator se afl naintea genelor structurale, ea permite sau nu funcionarea genelor
structurale. Operatorul blocheaz activitatea genelor structurale cnd este cuplat cu represorul.
3) Promotor- reprezint punctul de iniiere a sintezei ARNm.
4) Gene reglatoare produsul genei reglatoare este o substan cu rol represor. Represorul
poate bloca gena operatoare i deci ntreg operonul.
n sistemele represibile, represorul este activ, acioneaz gena operatoare i ca urmare ARN
polimeraza nu poate sintetiza ARNm de-a lungul genelor structurale.
n sistemele inductibile, reepresorul este inactiv, operonul este liber i se sintetizeaz ARNm.

18.2. Reglajul activitii genelor la eucariote


n celulele organismelor eucariote se afl o cantitate mare de ADN i de gene. La un moment
dat, funcioneaz numai o mic parte, n funcie de tipul celulei respective i de condiiile de mediu.
Celulele organismelor multicelulare conin acelai material genetic. Diferenierea celular se
realizeaz numai prin schimbri privind secvene de ADN, ce sunt decodificate n proteine i nu
reprezint schimbri ireversibile n macromolecula de ADN. Prin urmare, celulele specializate din
organism sintetizeaz anumite seturi de proteine.

186
Exist dou tipuri de baz de reglare a activitii genelor la eucariote:

1. reglajul genetic pe termen scurt, care se bazeaz pe mecanisme moleculare reversibile,


reprezentate de modificri n activitatea unor gene ce determin fluctuaii n intensitatea de
ADN, de ARN i de proteine n celule.

2. reglajul genetic pe termen lung, care este ireveribil i implic fenomene de difereniere
celular, ce are loc n cursul dezvoltrii ontogenetice, pornind de la celula ou (zigotul).
Acesta este un reglaj genetic ntiprit n memoria celulei i este ereditar i stabil.

Sinteza proteinelor nseamn exprimarea fenotipica a genelor. La eucariote ARNm


este monocistronic. Reglajul genetic al sintezei proteice n celula eucariot are un caracter
complex i se realizeaz la 5 nivele diferite, de-a lungul ntregii ci de sintez.

1. Reglajul genetic la nivel transcripional, la eucariote, ca i la procariote este nivelul cel mai
important la care se realizeaz controlul activitii genelor. Reglajul genetic transcripional
nseamn determinarea exact a unor gene transcrise din genom (ADNARN). La eucariote,
acest control transcripional este pozitiv, realizndu-se cu ajutorul unor proteine activatoare,
ce indic unde, cnd i pentru ct timp trebuie s funcioneze gena.

2. Reglajul genetic la nivelul maturrii ARNm - se controleaz eliminarea intronilor i


asamblarea exonilor, avnd loc, un proces de reglaj genetic, rezultnd ARNm matur.

3. Reglajul genetic la nivelul migrrii ARNm n citoplasm este acela care decide ce secvene
de ARNm vor fi degradate n nucleu i care vor fi exportate n citoplasm, unde se realizeaz
sinteza proteic. Este vorba de enzime diferite ce opereaz n tipuri diferite de celule, fapt
care determin ce sinteze proteice caracteristice vor realiza celulele respective.

4. Reglajul genetic la nivelul translaiei const n faptul c nu toate moleculele de ARNm


migrate n citoplasm vor fi utilizate n procesul sintezei proteice, se selecteaz anumite
molecule de ARNm ce vor fi translate.

5. Reglajul genetic la nivelul degradrii ARNm are rolul de a selecta moleculele de ARNm
matur migrate n citoplasm, care vor urma s fie degradate. ARNm-ul din cazul genelor
hemoglobinei are o mare stabilitate n timp, astfel c el servete repetat pentru sinteza
proteic.

La eucariotele superioare s-au identificat dou clase de cromatin: heterocromatina sau


cromatina condensat i eucromatina sau cromatina mai puin condensat.
187
Heterocromatina este inactiv n transcripia ADN, care este foarte puternic condensat i se
replic foarte trziu n faza S a ciclului celular. Ea conine gene inactive i exist dou subclase de
heterocromatin: constitutiv i facultativ.

18.3. Rolul interferenei ARN n reglarea activitii genelor


n anul 1998, cercettorii Andrew Z. Fire i Craig C. Mello au descoperit c poate exista
ARN bicatenar ce este capabil s declaneaz silenierea genelor (ARNi). Ca urmare, putem spune
c ARNi este un mecanism ce intervine n reglajul genetic la eucariote.
ARNi este activat cnd moleculele de ARN apar cu dubl caten n celul. Dubla caten a
ARN duce la degradarea acelor molecule de ARN-m ce prezint acelai cod genetic cu cel din ARN
bicatenar. Cnd astfel de molecule de ARN-m dispar, gena corespunztoare este sileniat i nu poate
avea loc sinteza proteic.
ARN-interferent poate fi deci un factor de sileniere a exprimrii genetice. Interferena ARN
reprezint un fenomen prezent la toate organismele superioare (plante, animale, oameni).
n urma studiilor efectuate, deasemenea s-a stabilit rolul ARN-i mpotriva infeciilor cu
virusuri ARN la plante, iar n laboratoarele specializate este utilizat acest ARN dublu catenar pentru
determinarea funciei diferitelor gene n cadrul celulei.

188
TEST DE EVALUARE
1. Definii retroinhibiia enzimatic:
Rspuns:
Retroinhibiia enzimatic sau inhibiia prin feedbackeste un alt sistem de control al sintezei
proteice, care const n inhibarea sau blocarea activitii unei enzime n urma interaciunii cu
produsul final al acesteia.

2. Enumerai componentele operonului.

3. Definii reglajul genetic la nivel transcripional:

Exerciii
Exemplu rezolvat:
1. Punctul de iniiere a sintezei ARNm este reprezentat de:
a) operator
b) operon
c) promotor
Rspuns: c
2. La eucariote ARNm este:
a) policistronic
b) monocistronic
3. Interferena ARN presupune existena:
a) ARN monocatenar
b) ARN ribozomal
c) ARN bicatenar

Rezumatul temei
Celula se comport ca un sistem autoreglat. Nucleul sau nucleoidul din celul este centrul de
comand i control al ntregii activiti celulare. Nucleul primete printr-un sistem enzimatic
informaii despre evenimentele ce au loc n citoplasm i intervine n controlul activitii celulare
prin declanarea, intensificarea sau stoparea producerii (funciei) unor proteine specifice. Mesajele
189
nucleului sunt expediate prin intermediul ARNm. Ca urmare putem spune ca sinteza proteinelor i a
enzimelor celulare nu este constant n timp, ea variaz n funcie de necesitile celulei. La
organismele procariote exist operonul - un segment continuu de ADN, de pe cromozomul bacterian
ce corespunde unui grup de gene, el se comport ca o singur unitate de transcripie genetic (produce
o singur molecul de ARNm) i de reglare genetic. Cile de reglaj genetic sunt asigurate prin:
inducia enzimatic; represia enzimatic; retroinhibiia enzimatic.
La eucariote reglajul genetic este mai complex, el se poate realiza la nivelul nucleului prin
reglaj genetic la nivel transcripional i reglaj genetic la nivelul maturrii ARNm. Tot la
eucariote reglajul poate s apar la nivelul citoplasmei, respectiv : reglaj la nivelul migrrii
ARNm; la nivelul degradrii ARNm i la nivelul translaiei ( se selecteaz moleculele de ARN
translate).
Recent s-a stabilit c n celula eucariot poate exista ARN bicatenar ce duce la apariia
interferenei, un proces prin care se suprim expresia genelor i implicit sinteza proteic
corespunztoare.

190
Tema nr. 19
MUTAIA SI RECOMBINAREA GENETIC
Unitile de nvare:

Mutaiile genetice;
Reparaia genetic;
Recombinarea la nivel molecular.

Obiectivele temei:
trecerea n revist a istoricului privind mutaiile genetice, definiia i importana
cunoaterii lor;
fixarea mecanismelor moleculare ce duc la apariia mutaiilor genice i consecinele
acestora;

Timp alocat temei: 2 ore


Bibliografie recomandat:
1. Crciun T., Tomzei, I.,Cole, N.,Butnaru, G.,1991, Genetic vegetal, Ed. Didactic i
Pedagogic, Bucureti.
2. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. II, Ed. Bioterra, Bucureti.
3. Palii, A.,1998, Genetic,Ed. Museum,Chiinu.

19.1. Mutaiile genetice


Cercetarea mutaiilor a contribuit la dezvoltarea cunotinelor despre ereditate,la cunoaterea
tainelor evoluiei i la elaborarea unor sisteme de clasificare a plantelor pe baza genetic. De
asemenea, prin mutaii s-a ajuns la descifrarea codului genetic, care reprezint una din cele mai
senzaionale descoperiri ale secolului nostru.
Noiunea de mutaie a fost introdus de Hugo de Vries, in anul 1901, pentru a defini
schimbrile ereditare brute i intmpltoare observate timp de 15 ani la lumnaric Oenothera
lamarkiana. n baza studierii variaiilor ereditare la aceast plant, Hugo de Vries a elaborat teoria
mutaionista. Conform acestei teorii mutaiile apar brusc (far fome intermediare), sunt total ereditare,
se produc n diferite direcii (pot fi utile, duntoare sau indiferente organismului). n consecin,
mutaiile pot da natere dintr-o dat la specii noi. Pe msur ce s-au intensificat crecetrile n acest
domeniu, au fost fcute corective la concepia ininiiala. E.Bauer a definit mutaia ca fiind o varietate
191
ereditar care nu este rezultatul unei ncruciari, iar R.P. Wagner i H.K.Mitchell(1964) susin c
mutaia reprezint orice schimbare ereditar care nu se datorete segregrii sau unei recombinri
normale a materialului genetic neschimbat. Descoperirile geneticii moleculare au demonstrat c
moleculele de AND sau ARN viral sunt constituite din anumite secvene de nucleotide ce conin un
mesaj chimic codificat pentru sinteza unei erori n succesiunea sau n numrul nucleotidelor dintr-o
gen, care se copiaz i se transmite greit. n felul acesta, rezult alele noi sau gene mutante cu
funcii i, repectiv, fenotipuri diferite transmisibile la urmai (sunt ereditare).
Mutaiile reprezint o surs substanial de variaie, care nu numai c mbogete populaia cu
genotipuri noi, dar, n urma recombinrilor ntre ele, mresc gradul de heterozigoie al populaiilor i
sporesc capacitatea de adaptare a acestora. Procesul de mutagenez, schimbarea materialului ereditar
n urma cruia se produc mutaii, n ansamblu cu recombinarea genetic constituie un important factor
al evoluiei, deoarece reprezint materialul de baz asupra cruia acioneaz selecia natural n
vederea realizrii unor noi populai, specii, genuri etc. Existena diverselor mutaii la plante i animale
a fost observat de mult vreme, mai ales din secolul al-XIX-lea, n legatur cu dezvoltarea fitotehniei
i zootehniei. Individul care a suferit o mutaie se numete mutant, orice modificare n dicionarul
genetic i poate gsi exprimarea fenotipic, prin apariia de caractere noi. Prin mutaie se nelege
orice schimbare brusc ereditar, n structura i funciile materialului genetic, adic a genelor i
cromozomilor, care se transmit de la o generaie la alta i care se datoreaz recombinrilor genetice
sau segregri factorilor ereditari.
Mutaiile genice sunt denumite genomutaii sau punctiforme, cnd sunt determinate de
schimbri structurale la nivelul unei nucleotide sau cel mult a unei perechi de nucleotide din ADN.
Cnd schimbrile depesc o pereche de nucleotide, mutaiile sunt mari. Mutaia este un eveniment
rar, pentru c genele sunt relative stabile. nc din anul 1953, J.D.Watson i F.C.H.Crick, odat cu
descrierea structurii macromoleculei de ADN, au emis ipoteza copierii eronate (miscopying theory)
conform creia mutaia este o eroare n sinteza nucleotidelor, ce se comite n timpul replicrii ADN.
Ipoteza Watson-Crick referitore la mecanismul molecular al mutaiilor genice consider c
printre cauzele ce duc la modificrile structurii ADN-ului pot fi urmtoarele:
Substituia (nlocuirea) unei baze azotate cu alta;
Deleia (pierderea) i adiia (inseria) uneia sau a ctorva perechi de nucleotide;
Inversia unei secvene de nucleotide din macromolecula de ADN;
Duplicaia unei perechi de nucleotide.
Substituia se poate realiza prin dou ci:
192
a) tranziia, cnd are loc nlocuirea unei baze cu alta din aceiai categorie (o baz purinic
nlocuiete o alt baz purinic, sau una piramidinic nlocuiete alta piramidinic). Schematic aceste
schimbri pot fi reprezentate n felul urmtor:

AG i TC;

b) transversia, cnd o baz purinic nlocuiete o baz pirimidinic sau o baz pirimidinic
nlocuiete una conform schemei urmtoate:

TG i AC

GT i GC

Asemenea modificri n structura ADN-ului au loc n urma aciunii diferenelor ageni


mutageni. Mutaiile genice modific cadrul de citire a mesajului genetic din ADN i, respectic,
modific ordinea nucleotidelor din ADN. Schimbarea cadrului de citire determin modificarea
informaiei genetice nu nsa i a codului genetic ca atare. La nivelul mutantului vor funciona aceleai
principii de codificare ale codului de triplete, numai c prin mutaie se vor schimba codonii, rezultand
codoni de acelaii sens, codoni de sens greit si codoni nonsens. Schimbarea de baze din ADN este
reflectat n schimbarea ordinii nucleotidelor din ARN, care, la randul sau, va determina o secvena
alterat de aminoacizi.

Mutaiile genice duc, fie la pierderea total sau parial a capacitii de sintez a uneia din
proteinele specifice, fie la sinteza unei proteine diferite ca propieti, din cauza nlocuirii uneia sau a
mai multor aminoacizi. Prin modificarea proteinelor apar noi caractere metabolice sau chiar
morfologice. Genele mutante se transmit la descendeni conform legilor mendeliene, iar raportul de
segregare este condiionat de caracterul dominant, codominant sau recesiv al genomutaiei. n unele
cazuri, modificarile la nivelul macromoleculelor de ADN nu se reflecta asupra ordinii aminoacizilor n
lanul polipeptidic din cauza codului genetic degenerat.

Principala caracteristic a mutaiilor genetice const n faptul c fenomenul se ntlnete rar.


Faptul acesta este deosebit de avantajos cel puin, din dou puncte de vedere: n primul rnd, confer
constan ereditaii, asigurnd asemnarea descendenilor cu parinii, iar n al doilea rnd, dac inem
cont c majoritatea mutaiilor sunt duntoare, rata mic a mutaiei menine la un nivel sczut
proporia indivizilor letali, prevenind moartea genetic a populaiei sau a speciei. Specificitatea este o
alta trstur, n sensul c ele afecteaz, n principiu,o singur caracteristic ereditar. Mutaiile genice
se produc att in celulele sexuale ct i n cele somatice.

193
19.2. Reparaia genetic
Prin reparaie genetic se nelege refacerea de la nivelul molecule de ADN. Integritarea
materialului genetic este protejat prin mecanisme de reparare enzimatic, care minimizeaz sau
anuleaz efectele mutagenilor. Toate sistemele de reparare de la nivelul moleculelor de ADN, se
grupeaz n: mecanisme de reparare prereplicative i mecanisme de reparare postreplicative.
Repararea prereplicativ: fenomenele reparatorii au loc naintea sintezei moleculei de
ADN, acestea fiind relativ specifice diferitelor grupe de organisme.
Repararea postreplicativ: are loc la ntuneric i implic att replicarea ct i recombinarea
catenelor de ADN. Activitatea de reparare postreplicativ, este activ atunci cnd sunt continue, sau
cnd are loc ruperea complet a structurii bicatenare a AND-ului. Prin acest tip de reparare se refac
leziunile provocate de radiaiile X, se elimin efectele secundare ale dimerizrii, cauzat de radiaia
ultraviolet, precum i de unele procese fiziologice. Dimerii apar ca o consecina a alterri induse de
radiaiile UV.
Repararea AND prin inducerea sistemului SOS: Sistemul SOS intr n aciune atunci cnd
n molecul de ADN s-a format un numr mare de leziuni, pe care mecanismele anterioare nu au avut
capacitatea de a le repara. Reacia SOS provoac sinteza unei ADN-polimeraze speciale, care
tolereaz leziuni i permite replicarea ADN-ului modificat.
Repararea genetic este un proces de contracarare a efectelor mutagene, prin care se reface o
leziune a materialului genetic. Se poate realiza n faza prereplicativ prin reacia fotoenzimatic sau
prin excizie, n faza postreplicativ, precum i prin inducerea sistemului SOS

19.3. Recombinarea la nivel molecular


Recombinarea genetic la nivel molecular se realizeaza prin deplasarea unei secvene de
informaie de la o molecul de ADN la alta. Recombinarea rezulta prin schimb reciproc de material
genetic ntre moleculele omoloage de ADN (cromozomi omologi), de origine matern si patern.
Fenomenul este denumit crossing-over si are loc n profaza meiozei I. Cromozomii omologi (materni
si paterni) din fiecare pereche se apropie, se formeaz tetradele (bivalenii), se stabilesc punctele de
contact ntre cromatidele omoloage, acestea se rup, se schimba reciproc segmentele i se sudeaz la
cromatidele omoloage. Rezultatul: apariia unor cromatide recombinate.
Importana: Apar cromozomi recombinai (cu noi combinaii de gene) care vor fi distribuii
n finalul meiozei n gamei gameii formai vor fi foarte variai din punct de vedere genetic i prin
participarea lor la fecundaie vor sta la baza variabilitii genetice a descendenilor.
194
TEST DE EVALUARE
1. Ce sunt mutaiile genice?
Rspuns:
Mutaiile genice sunt denumite genomutaii sau punctiforme, cnd sunt determinate de schimbri
structurale la nivelul unei nucleotide sau cel mult a unei perechi de nucleotide din ADN.

2. Ce reprezint procesul de mutagenez?

3. Ce asigur mutaia pentru populaii?

Exerciii
Exemplu rezolvat:
1. Care din urmtoarele substituii este tranziie:
a) A G;
b) A- C;
c) A T.
Rspuns: a
2. Mutaiile genice sunt fenomene ce apar:
a) rar;
b) frecvent.
3. Reparaia genic se realizeaz:
a) postrepicativ;
b) prereplicativ;
c) prereplicativ i postreplicativ;
4. Recombinarea genetic se realizeaz prin:
a) test-cross;
b) back-cross;
c) crossing-over.

195
Rezumatul temei
Cercetarea mutaiilor a contribuit la dezvoltarea cunotinelor despre ereditate, la cunoaterea
tainelor evoluiei i la elaborarea unor sisteme de clasificare a plantelor pe baz genetic. De
asemenea, prin mutaii s-a ajuns la descifrarea codului genetic, care reprezint una din cele mai
senzaionale descoperiri ale secolului nostru.
Mutaiile reprezint o surs substanial de variaie, care nu numai c mbogaete populaia
cu genotipuri noi,dar, n urma recombinrilor ntre ele, mresc gradul de heterozigoie al populaiilor
i sporesc capacitatea de adaptare a acestora. Prin mutaie se nelege orice schimbare brusc
ereditar, n structura i funciile materialului genetic, adic a genelor i cromozomilor, care se
transmit de la o generaie la alta i care se datoreaz recombinrilor genetice sau segregri factorilor
ereditari.
Mutaiile genice sunt denumite genomutaii sau punctiforme, cnd sunt determinate de
schimbri structural la nivelul unei nucleotide sau cel mult a unei perechi de nucleotide din ADN.
Cnd schimbrile depesc o pereche de nucleotide, mutaiile sunt mari. Mutaia este un eveniment
rar, pentru c genele sunt relativ stabile. Mutaiile genice duc, fie la pierderea total sau parial a
capacitii de sintez a uneia din proteinele specifice, fie la sinteza unei proteine diferite ca
propieti, din cauza nlocuirii uneia sau a mai multor aminoacizi.
Principala caracteristica a mutaiilor genetice const n faptul c fenomenul se ntlnete rar.
Faptul acesta este deosebit de avantajos cel puin, din dou puncte de vedere: n primul rnd, confer
constan ereditii, asigurnd asemnarea descendenilor cu prinii, iar n al doilea rnd, dac
inem cont c majoritatea mutaiilor sunt duntoare, rata mic a mutaiei menine la un nivel sczut
proporia indivizilor letali, prevenind moartea genetic a populaiei sau a speciei. Specificitatea este
o alt trstur, n sensul c ele afecteaz, n principiu,o singur caracteristic ereditar. Mutaiile
genice se produc att in celulele sexuale ct i n cele somatice.
Prin reparaie genetic se nelege refacerea de la nivelul molecule de ADN. Integritarea
materialului genetic, este protejat prin mecanisme de reparare enzimatic, care minimizeaz sau
anuleaz efectele mutagenilor. Toate sistemele de reparare de la nivelul molecule de ADN, se
grupeaz n: mecanisme de reparare preplicative i mecanisme de reparare postreplicative.
Repararea genetic este un proces de contractare a efectelor mutagene, prin care se reface o leziune a
materialului genetic. Se poate realiza in faza prereplicativ prin reacia fotoenzimatic sau prin
excizie, n faza postreplicativ, precum i prin inducerea sistemului SOS.

196
Tema nr.20
TEHNICI DE GENETIC MOLECULAR CU APLICAIE N AMELIORAREA
PLANTELOR
Uniti de nvare:
Tehnica PCR (Polymerase Chain Reaction);
Markeri moleculari: RAPD, AFLP, SSR; RFLP;
Selecia asistat de markeri moleculari.
Obiectivele temei:
nsuirea noiunii de Polymerase Chain Reaction i etapele metodei de amplificare
enzimatic a unei secvene de ADN;
cunoaterea diferitelor variante tehnice i aplicaii ale tehnologiei PCR;
cunoaterea semnificaiei termenilor markeri moleculari, precum i ntelegerea tipurilor de
markeri;
prezentareaa seleciei asistat de markeri moleculari;

Timp alocat temei: 3 ore
Bibliografie recomandat:
1. Gheorghe Prnu. Genetica i ameliorarea plantelor. Ed. Silvic, Bucureti, 2010.
2. Rodica Pop, Studiul variabilitii somaclonale la via de vie cu ajutorul markerilor
moleculari
3. http://www.usamvcluj.ro
4. http://www.bio.unibuc.ro

20.1. Tehnica PCR (Polymerase Chain Reaction)


Reacia PCR (Polymerase Chain Reaction = Reacie de Polimerizare n Lan) este o metod
de amplificare enzimatic in vitro a unei anumite secvene de ADN. n prezent a fost dezvoltat o
adevarat tehnologie PCR care este folosit ntr-o varietate foarte mare de domenii: biologie
molecular, tiinele mediului, criminalistic, tiine medicale, biotehnologie, microbiologie,
industria alimentar, epidemiologie etc.
Din punct de vedere chimic, reacia PCR este constituit din cicluri succesive de replicare
ADN in vitro, folosind 2 primeri oligonucleotidici ce hibridizeaz cu cele 2 catene ale secvenei
originale (folosit ca matri n replicare). Diferena esenial ntre o asemenea reacie de replicare i
un proces de replicare ADN in vivo, l reprezint faptul c n reacia PCR etapa de desfacere a
dublului helix matri i, respectiv, cea de ataare a primerilor, nu sunt realizate enzimatic, ci prin
197
parcurgerea unor trepte de temperatur, iar singura enzim folosit n reacie este o ADN polimeraz
ADN-dependent (cu funcie de replicaz).
O reacie PCR este format din n cicluri (ntre 25 i 40), n fiecare ciclu fiind parcurse 3
etape principale: denaturarea termic a matriei (deci, desfacerea dublului helix ADN), ataarea
primerilor i polimerizarea propriu-zis. La terminarea unui ciclu de replicare in vitro (de
amplificare), cantitatea de ADN rezultat este dubl fa de matri. Mai mult, produsele rezultate
ntr-un ciclu sunt folosite ca matri n ciclul urmator, astfel nct numrul final de copii ADN este de
2n x y, unde y = numrul iniial de copii, iar n = numrul de cicluri de replicare. Este de subliniat
faptul c moleculele acumulate exponenial reprezint copii ale matriei care la capete au incorporai
primerii.
n concluzie, reacia PCR este o metod prin care se obin cantiti mari dintr-o anumit
secven ADN. Aceste molecule pot fi ulterior manipulate/analizate fr a fi necesar o prealabil
clonare molecular a acestora.
Componentele reaciei :
a) Matria ADN. De cele mai multe ori, ntr-o reacie PCR se introduc molecule de ADN d.c.
linear/circular ce include secvena de amplificat.
Puritatea ADN introdus ca matri reprezint un parametru important pentru succesul unei
reacii PCR. De exemplu, cantiti mari de ARN dintr-un extract ADN pot chelata ionii de Mg++,
determinnd astfel o activitate sczut a ADN polimerazei. Pe de alt parte, o serie de contaminani
din extractul ADN pot inhiba aciunea ADN polimerazei.
Cantitatea de matri ADN introdus ntr-o reacie PCR influeneaz puternic performana
reaciei.
b) Primerii oligonucleotidici. n general, dimensiunea primerilor folosii n reaciile PCR este
cuprins ntre 15 i 30 bp i, de obicei, sunt complementari cu capetele 5 i, respectiv, 3 ale regiunii
ce urmeaz a fi amplificat. Se recomand ca primerii s aib un procent molar de guanin + citozin
(% mol GC) cuprins ntre 40 60% i s aib o distribuie echilibrat a domeniilor bogate n A/T i
G/C. Este recomandabil ca cei 2 primeri s aib valori Tm care s permit temperaturi de ataare
ntre 55 i 65oC (pentru specificitate maxim se folosesc temperaturi de 62-65oC). Pe de alt parte,
este ideal ca cei 2 primeri s aib valori Tm identice sau foarte apropiate i s nu prezinte secvene cu
complementaritate intracatenar (i care, deci, s determine structuri secundare interne). Totodat,
pentru a se evita dimerizarea primerilor, este necesar ca primerii s nu fie complementari unul cu
celalalt. n general, concentraiile optime ale primerilor ntr-o reacie PCR sunt cuprinse ntre 0.1 i
0.6 M. Intr-o reacie PCR, un parametru important l repezint temperatura de ataare a primerilor la
198
matria ADN (primer annealing temperature). Astfel, n cazul primerilor cu valori ridicate de Tm
poate fi crescut temperatura de ataare a primerilor. Acest lucru conduce la minimizarea atarilor
nespecifice, la reducerea cantitii de dimeri de primeri, precum i la creterea cantitii de produs
PCR corect.
c) ADN polimeraza termostabil. n prezent n toate reaciile de tip PCR se introduc ADN
polimeraze termostabile. Variantele naturale ale unor asemnea enzime au fost izolate din
microorganisme termofile, care posed echipamente enzimatice cu temperaturi optime ridicate (mai
mari de 70oC) i care sunt capabile s desfoare activitile specifice i dup treceri peste
temperaturi extreme (n jur de 100oC). n marea majoritate a cazurilor, pornind de la asemenea
variante naturale, ADN polimeraze termostabile au fost manipulate genetic (cu obinerea unor
variante ameliorate) i clonate n tulpini de E.coli (microorganism ce este mult mai uor de crescut i
manipulat dect bacteriile termofile).
n majoritatea experimentelor, cantitatea optim de ADN polimeraz termostabil
(sau de amestec de ADN polimeraze) este cuprin ntre 0.5 i 0.25 U / 50 l volum de reacie.
Treptele de temperatur ale unei racii PCR standard:
Denaturarea iniial:
Pentru ca o reacie PCR s se desfoare eficient, este foarte important ca moleculele
ADN matri s fie denaturate iniial complet. Acest lucru poate fi realizat prin nclzirea iniial
amestecului de reacie 2 min la 94-95 grade C.
Treapta de denaturare din cadrul fiecrui ciclu:
De obicei, este suficient o denaturare de 20-30 sec la 94-95 grade C, dar aceasta
trebuie adaptat funcie de termocycler i de tuburile folosite (de ex., dac se lucreaz n tuburi de
500 l sunt necesari timpi mai lungi dect dac se lucreaz n tuburi de 200 l). Totodat, pentru
matrie bogate n GC se recomand folosirea unor timpi de denaturare mai lungi.
Ataarea primerilor:
n marea majoritate a experimentelor, temperatura de ataare a primerilor trebuie
determinat i optimizat empiric. Alegerea acestei temperaturi reprezint unul din factorii cei mai
critici pentru asigurarea unei nalte specificiti a reaciei PCR. Dac temperatura de ataare este mult
prea nalt, nu are loc ataarea primerilor, iar dac temperatura este prea sczut, atunci crete
probabilitatea atarilor nespecifice.
Polimerizarea propriu-zis:
Taq ADN pol polimerizeaz aproximativ 60 baze per secund la 72 grade C. n
fiecare ciclu, o perioad de polimerizare de 45s este suficient pentru amplificarea unor fragmente de
199
pn la 1 kbp. Pentru amplificarea unor fragmente mai mari de 1 kbp, timpul se calculeaz n
multiplii de 45s, urmat de ajustri pentru diverse matrie.
Pentru a obine o cantitate ct mai mare de amplicon, se poate varia timpul de
polimerizare, astfel: pentru primele 10 cicluri se folosete un timp constant de polimerizare (de ex.
45s pentru 1 kbp), iar pentru urmtoarele 20 de cicluri se crete timpul de polimerizare cu 2-5s per
ciclu (de ex. 50s pentru ciclul 11, 55s pentru ciclul 12 etc). O asemenea mrire progresiv a timpului
de polimerizare ofer enzimei mai mult timp pentru polimerizare, pentru c pe msur ce reacia
PCR avanseaz, n amestecul de reacie se gsete din ce n ce mai mult matri i din ce n ce mai
puin enzim activ (randamentul enzimei scade datorit expunerii prelungite la temperaturi nalte).
Numrul de cicluri :
ntr-o reacie PCR obinuit, mai puin de 10 molecule de matri pot fi amplificate n
mai puin de 40 de cicluri, obinndu-se un produs (amplicon) detectabil n electroforez n gel de
agaroz. La o cretere mult prea mare a numrului de cicluri, se pot acumula produi de reacie
nespecifici.
Polimerizarea (extensia) final:
n multe reacii, dup ultimul ciclu de amplificare, tuburile de reacie se in 5-15 min
la 72oC pentru a realiza polimerizarea complet a produilor pariali, precum i renaturarea
moleculelor monocatenare.
Variante tehnice i aplicaii ale tehnologiei PCR :
Marele avantaj al tehnicilor PCR l reprezint faptul c permite obinerea unei cantiti mari
dintr-o anumit secven ADN, fr a necesita clonarea acesteia n prealabil ntr-o molecul de tip
vector. Pe de alt parte, tehnologia PCR a revoluionat i implicarea geneticii moleculare n domenii
n care se apeleaz la cantiti foarte mici de ADN. Asemenea situaii se ntlnesc n:
diagnosticul unor boli monogenice, precum i detectarea de noi tipuri de mutaii n
gene importante n anumite boli;
diagnosticul unor infecii umane: permite detectarea particulelor infecioase
bacteriene i virale chiar aflate ntr-o proporie mic, chiar pentru specii ce se cultiv
dificil in vitro, chiar pentru patogeni cu variabilitate antigenic mare, i chiar pentru
patogeni ce au perioad mare de laten; astfel, pot fi identificai indivizii umani
pozitivi nainte de seroconversie;
studii privind mecanismele genetice ce acompaniaz procesele maligne (detectarea
secvenei i esutului n care se exprim anumite oncogene n diverse procese
maligne);
200
studii de taxonomie, sistematic i filogenie molecular: obinerea rapid a unei
cantiti mari din secvene ADN cu valoare taxonomic i/sau filogenetic;
biologia populaiilor, inclusiv la organisme mici: tehnologia PCR permite
secvenierea rapid a unor molecule de ADN de la foarte muli indivizi, fr a necesita
n prealabil clonarea acestora;
studii de antropologie: tehnica PCR permite n prezent recuperarea i analiza unor
secvene ADN din fosile;
medicin legal: cu ajutorul reaciilor PCR pot fi n prezent analizate la nivel
molecular o serie ntreag de probe biologice.
nafar de toate aceste aplicaii directe ale tehnologiei PCR, pornind de la reacia iniial de
amplificare, au fost imaginate o serie ntreag de variante tehnice ce permit abordarea unor
manipulri ct mai acurate a moleculelor de acizi nucleici.
1. Obinerea unor cantiti suficiente dintr-o anumit secven
Cu ajutorul tehnologiei PCR se pot obine cantiti suficiente dintr-o anumit secven ADN,
astfel nct s poat fi folosit n diverse manipulri, inclusiv pentru secveniere sau experimente de
clonare.
2. Obinerea de sonde ADN/ARN marcate
Foarte multe tehnici de obinere de sonde ADN/ARN folosesc variante de reacii PCR. Astfel,
ntr-o prim variant, se folosesc primeri marcai (n sistem radioactiv sau neradioactiv de marcare)
i dNTP nemarcate. Ampliconii obinui ntr-o asemenea reacie sunt molecule dublu-catenare
marcate la capete (primerii unei reacii PCR intr n structura produilor de reacie).
ntr-o alt variant tehnic, n reacia PCR se introduc att primeri marcai, ct i dNTP
marcate. Ampliconii obinui vor fi reprezentai de molecule marcate pe toat lungimea.
n ambele cazuri, ampliconii rezultai sunt denaturai termic, obinndu-se n final sondele
monocatenare utilizabile n reaciile de hibridizare molecular.
3. PCR n mutageneza situs-specific
Pornind de la faptul ca primerii folosii ntr-o reacie PCR sunt inclui n produsele PCR
(ampliconi), au fost dezvoltate o serie ntreag de variante tehnice ale acestei reacii. Astfel, n
experimentele de mutagenez situs-specific, modificrile dorite pot fi introduse n ampliconi pe
calea primerilor, fie c este vorba de inserii sau de deleii.
n toate aceste cazuri se utilizeaz o tehnologie PCR n care reacia de amplificare este
mprit n 2 reacii PCR separate n care sunt amplificate cele 2 secvene ADN aflate de o parte i
de alta a situsului de modificat. n aceste 2 etape se folosesc perechi de primeri constituite dintr-un
201
primer extern (pentru captul moleculei ADN iniiale) i un primer intern (primerii interni sunt
complementari situsului de modificat i conin n secven modificarea dorit). Prin folosirea unor
asemenea primeri, ampliconii rezultai conin deja modificarea dorit, precum i o zon de
complementaritate inter-ampliconi.
Dup aceast etap se realizeaz ndepartarea primerilor interni, amestecarea celor 2 produse
PCR, denaturarea termic a moleculelor urmat de renaturarea acestora n condiii de stringen. Se
adaug primeri exteriori i se realizeaz o noua reacie PCR, al crei rezultat va fi reprezentat de
molecule ADN identice cu matria initial, coninnd ns i modificarea dorit.
Spre deosebire de tehnicile clasice de mutagenez, i chiar de experimentele de mutagenez
cu ajutorul transposonilor, asemenea variante tehnice de PCR permit o rezoluie i o acuratee mult
mai mare n obinerea de molecule ADN modificate. n mare majoritate, aplicaiile practice vizeaz
analiza corelaiilor dintre secvena de nucleotide a unor molecule ADN i realizarea anumitor funcii.
4. PCR n obinerea de molecule ADN recombinate
Un alt set de studii i propun analiza funciilor de promotor a unor secvene ADN, sau chiar
obinerea de molecule ADN recombinate cu rat nalt de transcriere. n acest scop, se folosete o
schem de manipulare genetic similar celei de mai sus. Astfel, se realizeaz 2 reacii PCR separate
n care sunt amplificate secvena potenial promotor i, respectiv, secvena codificatoare. n ambele
reacii PCR se utilizeaz perechi de primeri constituite dintr-un primer extern i un primer intern (n
acest caz, primerii interni conin i o poriune complementar celeilalte molecule). Etapele urmtoare
sunt similare: ampliconii rezultai n aceste 2 reacii PCR se amestec, se denatureaz i se
renatureaz n condiii de stringen. n aceast a treia reacie PCR se introduc doar primeri externi i
se obin molecule ADN recombinate, formate din secvena promotor i din secvena codificatoare.
5. ARN PCR
O serie ntreag de experimente vizeaz obinerea de molecule de ADNc (complementar cu
anumite molecule ARN). O variant tehnic utilizeaz reaciile de revers-transcriere, n timp ce o alt
variant se bazeaz pe reacii PCR . Astfel, dupa denaturarea structurilor secundare ale moleculelor
ARN, se ataeaz un primer complementar capului 3 al moleculei ARN i are loc sinteza primei
catene de ADNc. n aceast reacie se folosete o ADN polimeraz ARN-dependent (revers-
transcriptaz), de tipul AMV-RT (Avian Mieloblastosis Virus Revers-Transcriptase), MLV-RT
(Murine Leukaemia Virus Revers-Transcriptase), rTth(recombinant Thermus thermophilus DNA
polymerase). Hibridul ARN:ADN obinut n aceast reacie de revers-transcriere este supus unei
reacii de distrugere a catenei ARN cu RNaza H, dup care la catena ADN rmas este ataat un
primer complementar cu capul 3 al acesteia. Dup sinteza celei de-a doua catene ADN, moleculele
202
sunt introduse ntr-o reacie PCR obinuit la sfritul creia sunt obinute moleculele de ADNc
(complementar cu moleculele ARN de la care s-a plecat). Avantajul unei asemenea variante tehnice
l reprezint faptul c se obine o cantitate mare a secvenelor ADNc.
PCR invers: n foarte multe experimente este necesar amplificarea unor molecule de ADN cu
secven necunoscut. Un asemenea caz este i cel n care se studiaz situsurile n care se insereaz o
serie de transposoni sau genomul unor virusuri . In aceast situaie se secioneaz cu endonucleaze de
restricie o molecul ADN ce cuprinde secvena cunoscut (transposon, genom viral) ncadrat de
secvene necunoscute (aparinnd genomului gazdei). Aceast molecul este apoi circularizat i
introdus ntr-o reacie PCR n care se folosesc primeri complementari cu capetele secvenei
cunoscute. Ampliconul rezultat este reprezentat de secvena necunoscut.
6. PCR in situ
Una din limitrile tehnicii PCR o reprezint necesitatea de a extrage i purifica matria (ADN
sau ARN) nainte de amplificare. Varianta tehnic PCR in situ combin o reacie PCR cu o
hibridizare molecular in situ. Astfel, reacia PCR se realizeaz n celule intacte i este apoi detectat
prin hibridizare in situ (ntreaga reacie, att PCR, ct i hibridizarea, se realizeaz pe esut
mparafinat i plasat pe lama de microscop). Printr-o asemenea tehnica se poate identifica foarte
exact care celule poseda o anumita secven ADN, sau care exprima o anumita gena. Pe de alta parte,
se reduce foarte mult riscul contaminarii produselor PCR cu alte secvene ADN.

20.2. Markeri moleculari: RAPD, AFLP, SSR; RFLP


Pentru conservarea eficient a resurselor genetice vegetale este necesar stabilirea ct mai
exact a variabilitii genetice a acestora, ce poate fi determinat la dou nivele, fenotipic i
genotipic. Variabilitatea fenotipic se bazeaz pe analiza morfologiei plantelor, cea genetic pe
markerii moleculari.
Markerii genetici sunt de trei tipuri: markeri morfologici, markeri proteici i markeri
moleculari. (Vicente i colab, 2004)
Markerii morfologici sunt uor de utilizat, nu necesit echipamente costisitoare, putndu-
se efectua o evaluare rapid a fenotipului cu ajutorul lor. Ca dezavantaje, prezint urmtoarele: se
gsesc n numr limitat, sunt influenai de condiiile de mediu i de stadiul de dezvoltare al plantei i
necesit evaluarea de ctre experi n cunoaterea speciei respective.
Markerii biochimici (proteici) se bazeaz pe proprietatea proteinelor de a fi separate n
urma electroforezei. Tipuri de markeri biochimici sunt proteinele rezultate n urma stocrii
seminelor, izoenzimele.
203
Markerii ADN (moleculari) evideniaz polimorfismul la nivelul ADN-ului nuclear i
citoplasmatic. Markerii moleculari nu sunt influenai de condiiile de mediu, fiind o msur
obiectiv a variabilitii, exist n numr nelimitat, acoperind ntregul genom, dar necesit
echipamente complexe de analiz. Markerii ideali ar fi caracterizai de urmtoarele proprieti:
polimorfism ridicat, reproductibilitate mare, codominan, distribuie uniform n genom,
distinctivitate (s evidenieze diferenele ntre indivizi nrudii), neinfluenai de condiiile de mediu,
neutri (alela prezent la locusul markerului s fie independent, fr efect asupra presiunii de selecie
aplicat individului), necostisitori, uor de utilizat. (Vicente i colab, 2004).
Markerii RAPD (Random amplified polymorphic DNA - polimorfisme de ADN amplificate
aleator) sunt rezultai prin amplificarea PCR a unor segmente necunoscute de ADN genomic cu
ajutorul unei amorse decamere aleatoare (Williams i colab., 1990). Produii de amplificare sunt
migrai ntr-un gel de agaroz i vizualizai prin colorare cu bromur de etidiu (fluorescent n
lumin ultraviolet) sau azotat de argint. Diversitatea genetic i relaiile de nrudire dintre indivizi se
evalueaz pe baza prezenei sau absenei benzilor, rezultnd o amprent genetic specific.
n urma amplificrii cu amorsa decamer aleatoare rezult un numr mare de fragmente de
dimensiuni variabile (300-2000 pb), ns acestea pot prezenta problema co-migrrii (fragmentele cu
aceeai greutate molecular pot avea structuri diferite, astfel presupunerea lipsei polimorfismului
pentru banda respectiv fiind eronat). Fiind o metod simpl, necostisitoare i care nu necesit
cunoaterea secvenei de ADN int, RAPD se utilizeaz i astzi n analizele genetice, dei markerii
sunt dominani iar reproductibilitatea ntre laboratoare e sczut. (Karp, A. i colab, 1997).
Avantajele analizei RAPD constau n:
relevarea unui numr relativ mare de polimorfisme;

posibilitatea automatizrii analizei;


costuri sczute;

utilizarea metodelor de vizualizare prin fluorescen n locul celor bazate pe


radioactivitate;

analizarea unui numr mare de probe ntr-o singur zi;


nu implic un grad foarte ridicat de pregtire al personalului din laborator.
Dezavantaje:
Comportamentul dominant al markerilor RAPD. De exemplu, n genetic populaiilor
frecvena alelelor nu poate fi exprimat din moment ce homozigoii (AA) nu pot fi deosebii de
heterozigoi (Aa). Acelai lucru este valabil pentru studiile de cartare genic n care se analizeaz
204
generaiile de segregare F1 sau F2. Din moment ce indivizii AA nu pot fi deosebii de cei Aa o
informaia valoroas se pierde.
Sensibilitatea mrit a tehnicii. n general s-a ajuns la un consens n ceea ce privete
reproductibilitatea analizei RAPD, acceptndu-se c aceasta este mare n cadrul aceluiai laborator.
Rezultatele devin neconvingtoare atunci cnd datele trebuie transferate de la un laborator la altul.
Din aceast cauz trebuie acordat o deosebit atenie standardizrii analizei ntre colaboratori aflai
n laboratoare diferite.
Markerii AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism)-Polimorfisme de lungime
ale fragmentelor amplificate
AFLP reprezint o tehnic elaborat de VOS i colab. (1995) i reprezint o combinaie ntre
metoda RFLP i PCR. Tehnica const n digestia ADNului cu enzime de restricie, iar la capetele
fragmentelor rezultate se ataeaz secvene dublu catenare specifice (adapters) cu ajutorul ADN
ligazelor. Aceste secvee mpreun cu secvenele alturate, reprezentnd situsul de restricie al
enzime, vor constitui locurile de fixare ale primerilor n vederea amplificrii prin PCR. La capetele
3 ale primerilor se vor aduga anumite nucleotide care vor permite amplificarea selectiv unei
categorii de secvene din setul de fragmente de restricie. Nu vor fi amplificate dect acele fragmente
de restricie care au nucleotidele ce flancheaz situsul de restricie complementare cu nucleotidele
selective ale primerilor. Separarea produilor de amplificare se realizeaz prin electroforez n geluri
de poliacrilamid i evideniere prin autoradiografie.
Mai recent se utilizeaz i marcajul cu fluorescen i utilizarea secveniatoarelor automate.
Fragmentele de restricie care urmeaz s fie amplificate se obin cu ajutorul a dou enzime de
restricie, EcoRI i MseI (la una dintre ele situsul de restricie apare cu o frecven redus n cadrul
genomului - rare cutter, la cealalt frecvena este mare frequent cutter).
Prin metoda AFLP are loc amplificarea predominant a acelor fragmente de restricie care au la unul
din capete o secven rezultat ca urmare a fragmentrii cu o enzim frequent cutter i la cellalt
capt cu o enzim rare cutter . Numrul fragmentelor amplificate poate fi controlat prin alegerea
enzimei i prin numrul bazelor care se adaug la captul trei al primerului. Cu o singur combinaie
de enzime (una care taie la ase baze iar cealalt la patru baze) este posibil amplificarea a 100.000
de fragmente din care se pot selecta pentru fiecare reacie AFLP ntre 50 i 100 de fragmente. Ca i
n cazul markerilor RAPD fragmentele de interes pot fi extirpate din gel, purificate, clonate,
secveniate i transformate n markeri SCAR cu ajutorul unor primeri specifici. Spre deosebire de
metoda RAPD metoda AFLP are un grad mai ridicat de reproductibilitate, iar rezoluia fragmentelor
este mult mai bun. Cel mai mare avantaj al metodei este sensibilitatea cu care poate depista
205
polimorfismele ADN. La via de vie, metoda AFLP au fost aplicat n special pentru identificarea
unor clone i a diferenelor genetice existente la nivel molecular ntre acestea, avnd n vedere c un
aspect important n producia i calitatea vinului l reprezint caracterizarea clonelor.
Astfel, BELLIN i colab. (2000), au utilizat 50 de perechi de primeri cu scopul de a compara
diferite clone de Pinot. VIGNANI i colab. (1996) i SENSI i colab. (1996) au aplicat metoda AFLP
i SSR pentru stabilirea relaiilor genetice ntre clonele de Sangiovese. Rezultatele ncurajatoare
obinute au dus la concluzia c tehnicile bazate pe aceti markeri moleculari pot fi utilizate pentru
diferenierea i/sau identificarea unor clone. De asemenea, se remarc i studiile intreprinse de
IMAZIO i colab. (2002), asupra a 24 de clone de Traminer de provenien diferit. Ei au analizat
comparativ clonele de Traminer utiliznd tehnica SSR (Simple Sequence Repeats), AFLP (Amplified
Fragment Length Polymorphism) i MSAP (Methyl-sensitive Amplified Length Polymorphsim).
Rezultatele obinute arat c cea mai adecvat tehnic pentru evidenierea polimorfismului ntre
clone s-a dovedit a fi tehnica AFLP. Tehnica MSAP a fost utilizat pentru evaluarea diferenelor
calitative privind gradul de metilare a ADN-ului ntre clonele analizate. Cercetrile lor sugereaz c
diferenele morfologice ntre clone sunt probabil, datorate efectului sinergic al modificrilor genetice
i epigenetice. Variabilitatea genetic clonal la soiul Pinot noir a fost pus n eviden de asemenea,
tot prin tehnica AFLP, constatndu-se faptul c n acest caz exist variabilitate att intra ct i
interclonal (BLAICH i colab., 2007). Tehnica AFLP fiind relativ ieftin, iar rezultatele obinute
avnd reproductibilitate ntre diferite laboratoare de analiz molecular constituie un instrument
valoros pentru identificarea i analiza unor clone, facilitnd eforturile de patentare clonal la via de
vie.
Markerii RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism)
Primele ncercri de diagnosticare a variabilitii somaclonale pe baza markerilor genetici au
fost fcute prin metodologia RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism), creia autorul
(POTTER, 1991) i-a modificat scopul iniial, de urmrire a distribuiei polimorfice a alelelor ntr-o
populaie segregat, pentru a pune n eviden mutaiile ntr-o populaie clonat. Ulterior, detectarea
variabilitii somaclonale a nceput s fie fcut i pe baza analizelor RAPD. Aceast metod
prezint numeroase avantaje comparativ cu RFLP: tehnica este mai simpl, mult mai rapid, necesit
o cantitate mic de material iniial, esutul poate fi prelevat direct in vitro, absena radioactivitii i
repetabilitatea destul de bun a analizelor RAPD.
Markerii SSR (Simple Sequence Repeats)
Secvenele microsatelit constituie repetiii n tandem ale unor secvene di, tri sau tetra
nucleotidice. Cele mai frecvente repetiii sunt cele dinucleotidice, cum ar fi (CA)n, (CT)n, (AT)n. La
206
plantele superioare exist o secven microsatelit nucleotidic, care se repet dup 30-100 kb, cea
mai frecvent fiind secvena (AT)n (NYBOM i colab., 1989, 1990; HOEPFNER i colab., 1993;
BOTTA i colab., 1995).

Polimorfismul microsateliilor este dat de numrul de secvene nucleotidice care se repet. n


msura n care se cunoate ordinea nucelotidelor la secvenele nvecinate microsateliilor, se pot
concepe primeri specifici, care vor permite amplificarea fragmentelor de ADN, ce nglobeaz
microsateliii. Lungimea acestor fragmente se determin apoi prin migrare n gel de poliacrilamid.
Variabilitatea markerilor microsatelii se datoreaz diferenelor de lungime a fragmentelor de AND
amplificate. n cazul secvenelor automatizate, primerii specifici fiecrei secvene microsatelit sunt
marcai cu o substan fluorescent, profilul benzilor fiind citit cu ajutorul unui fascicul de laser, care
va depista fiecare produs de amplificare n funcie de substana fluorescent cu care a fost marcat.

Markerii microsatelii au fost introdui mai recent pentru identificarea viei de vie. THOMAS
i SCOTT (1993), citai de ULANOVSKY i colab. (2001) au reuit s caracterizez 20 de varieti de
vi de vie utiliznd markeri microsatelii. Ei au propus utilizarea microsateliilor pentru stabilirea
unei baze de date internaionale referitoare la descrierea varietilor de vi de vie, datorit nivelului
mare de polimorfism, a codominanei, simplicitii i repetabilitii analizelor moleculare SSR.
BOTTA i colab. (1995), citai de ULANOVSCY i colab. (2001), au dovedit c markerii
microsatelii posed o buna capacitate pentru identificarea varietilor, dar nu i a clonelor de vi de
vie, concluzie la care au subscris i SILVESTRONI i colab. (1997) care au analizat la nivel
molecular clone din cultivarele Sangiovese i Fortana. SEFC i colab. (1998) utiliznd 10 loci
microsatelitari au obinut diferite benzi paterne pentru fiecare dintre cele 60 de varieti de vi de vie
din colecia de germoplasm analizat.

LOUREIRO i colab. (1998), au utilizat de asemenea, tehnica SSR pentru identificarea


varietii Albario. HERRERA i colab. (2002) au folosit amprentele ADN generate cu ajutorul
tehnicilor RAPD i ISSR-PCR (Inter Simple Sequence Repeat Polymerase Chain Reaction) pentru a
compara patru cultivare de Vitis vinifera folosite pe scar larg n Chile, respectiv Cabernet
Sauvignon, Cabernet Franc, Merlot i Carmenere. Referina extern a fost constituit din material
vegetal provenit din Frana. Cele dou tehnici au evideniat diferene ntre cultivarele studiate,
metoda ISSR avnd o putere de difereniere mai mare dect RAPD, ceea ce sugereaz utilizarea
tehnicii ISSR-PCR atunci cnd se lucreaz cu numr mare de cultivare.

Astfel, a fost observat variabilitate ntre clonele de Merlot, clona original din Chile i
proveniena din Frana, rezultatele sugernd c cele dou clone reprezint genotipuri diferite. n
207
schimb, pentru celelalte cultivare, cele dou tehnici demonstreaz uniformitatea populaiilor din
Chile.
Tehnica SSR i AFLP a fost utilizat n amprentarea genetic a unor varieti de vi de vie,
pentru rezolvarea cazurilor de omonimie i sinonimie, precum i pentru identificarea genotipurilor
parentale la unele varieti remarcabile, cum este de exemplu soiul Cabernet Sauvignon (BOWERS,
MEREDITH, 1997).ntr-un alt studiu AKKAK i colab. (2005), au analizat diversitatea genetic a
unor soiuri i varieti de vi de vie autohtone provenite din bazinul Mrii Mediterane si Algeria,
folosind 12 markeri SSR. Dintre cele 60 de cultivare analizate au fost identificate 34 de genotipuri
diferite, ceea ce arat faptul c tehnica SSR poate fi utilizat cu succes i n studiul relaiilor
intraspecifice la aceast specie.
Tehnicile RAPD, AFLP i SSR au fost utilizate cu succes i n studiile de cartare genetic la
via de vie. Astfel, n anul 2002, THIS i colab. s-au preocupat de ntocmirea unei hri genetice de
referin n cazul descendenilor obinui n cazul ncrucirii dintre soiurile Syrah x Grenache.
ntocmirea hrii genetice s-a bazat pe utilizarea markerilor microsatelii polimorfi VNI i VMC.
Hrile genetice ntocmite pe baza markerilor SSR sunt extrem de interesante, deoarece permit
evidenierea grupelor de linkage la nivelul unor combinaii hibride.
De asemenea, markerii SSR VMC au fost testai att n cazul unor soiuri de Vitis vinifera, ct
i Vitis riparia. Aproximativ 80% dintre locusurile identificate cu ajutorul markerilor SSR la Vitis
vinifera fiind reproductibile i la Vitis riparia. Aceti markeri sunt interesani pentru studiile
filogenetice la unele specii nrudite.
Perfecionarea metodelor de analiz a ADN-ului, cum ar fi RAPD, AFLP i SSR au deschis
noi posibiliti de caracterizare i comparare a genotipurilor, independent de fenotip i, respectiv, de
exprimarea genelor n funcie de condiiile de mediu. Utilizarea tehnicilor de analiz bazate pe PCR
au permis detectarea polimorfismului ADN n loci dispui randomizat (RAPD, AFLP) sau specific
(SSR) n genom. Utilizarea markerilor ADN a crescut enorm potenialul pentru caracterizarea
soiurilor cultivate i a descendenilor acestora.

20.3. Selecia asistat de markeri moleculari


Pe lng interesul lor fundamental markerii moleculari prezint importan deosebit n
domeniul seleciei.n ameliorarea convenional, se utilizeaz selecia bazat pe fenotip sau pe
markerii morfologici. O astfel de selecie este de multe ori mai puin eficient datorit numrului de
gene care controleaz un anumit caracter, a gradului n care mediul afecteaz expresia acestor gene.
Selecia asistat de markeri moleculari (MAS) este o metod de selecie indirect care
presupune selecia plantelor purttoare a regiunilor care sunt implicate n expresia caracterelor de
208
interes (plante rezistente) prin markerii moleculari (Landjeva i colab., 2007). n prezent selecia
asistat de marker moleculari este axat pe:
1. selecia caracterelor cu importan economic, pentru care selecia bazat numai pe fenotip este
dificil sau necesit costuri ridicate
2. selecia caraterelor cantitative, pentru care selecia bazat pe fenotip este dificil
3. piramidarea genelor de rezisten.
Selecia asistat de markeri moleculari este considerat o metod foarte util n ameliorarea
pentru rezistena la boli a speciilor cultivate deoarece:
Identificarea genotipului de rezisten prin testarea n cmp este costisitoare, necesit timp
ndelungat i este foarte mult influenat de condiiile de mediu. Cu ajutorul markerilor se
elimin influena mediului n selecie.
Selecia se poate realiza fr a recurge la teste de inoculare, permind astfel evitarea
erorilor asociate cu utilizarea acestor proceduri, fiind posibil ameliorarea rezistenei n
arealuri unde patogenul nu exist.
Schema de selecie este accelerat ntruct selecionerii pot conchide prezena genei prin
prezena markerului naintea expresiei fenotipice.
Markeri linkai cu diferite gene de rezisten ofer posibilitatea combinrii mai multor gene
(piramida genelor) atunci cnd selecia anumitor gene n prezena altor gene este dificil.

TEST DE EVALUARE
1. Ce reprezinta reacia PCR?
Rspuns:
Reacia PCR (Polymerase Chain Reaction = Reacie de Polimerizare n Lan) este o metod de
amplificare enzimatic in vitro a unei anumite secvene de ADN.

2. Care sunt etapele principale parcurse n fiecare ciclu al reaciei PCR?

3. Ce reprezinta markerii moleculari si care sunt principalii markeri moleculari?

4. Ce reprezinta selecia asistat de markeri moleculari ?

209
Exerciii
Exemplu:
5. Markerii moleculari sunt:
a) influenai de condiiile de mediu;
b) n numr limitat;
c) o msur obiectiv a variabilitii.
Rspuns: c

3. n tehnica PCR, polimerizarea se realizeaz n prezena enzimei:


a) Taq pol;
b) ADN polimeraza;
c) ARN polimeraza.

4. Primerii sunt :
a) zaharuri;
b) oligonucleotide;
c) enzime.
5. n domeniul agricol markerii moleculari prezint importan deosebit pentru:
a) consangvinizare;
b) poliploidie;
c) selecie.
6. Rezultatul reaciei PCR se numete:
a) replicon;
b) amplicon;
c) splicon.

Rezumatul temei
Reacia PCR (Polymerase Chain Reaction = Reacie de Polimerizare n Lan) este o metod
de amplificare enzimatic in vitro a unei anumite secvene de ADN. O reacie PCR este format din
n cicluri (ntre 25 i 40), n fiecare ciclu fiind parcurse 3 etape principale: denaturarea termic a
matriei (deci, desfacerea dublului helix ADN), ataarea primerilor i polimerizarea propriu-zis.
Componentele reaciei PCR sunt: Matria ADN, Primerii oligonucleotidici, ADN polimeraza
termostabil
210
Treptele de temperatur ale unei racii PCR standard sunt: Denaturarea iniial, Treapta de
denaturare din cadrul fiecrui ciclu, Ataarea primerilor, Polimerizarea propriu-zis, Numrul de
cicluri, Polimerizarea (extensia) final.
Marele avantaj al tehnicilor PCR l reprezint faptul c permite obinerea unei cantiti mari
dintr-o anumit secven ADN, fr a necesita clonarea acesteia n prealabil ntr-o molecul de tip
vector. Pe de alt parte, tehnologia PCR a revoluionat i implicarea geneticii moleculare n domenii
n care se apeleaz la cantiti foarte mici de ADN.
Pentru conservarea eficient a resurselor genetice vegetale este necesar stabilirea ct mai
exact a variabilitii genetice a acestora, ce poate fi determinat la dou nivele, fenotipic i
genotipic. Variabilitatea fenotipic se bazeaz pe analiza morfologiei plantelor, cea genetic pe
markerii moleculari.
Markerii ADN (moleculari) evideniaz polimorfismul la nivelul ADN-ului nuclear i
citoplasmatic.
Markerii RAPD sunt rezultai prin amplificarea PCR a unor segmente necunoscute de ADN
genomic cu ajutorul unei amorse decamere aleatoare.
Markerii AFLP const n digestia ADNului cu enzime de restricie, iar la capetele
fragmentelor rezultate se ataeaz secvene dublu catenare specifice (adapters) cu ajutorul ADN
ligazelor.
Markerii RFLP pun n eviden mutaiile ntr-o populaie clonat
Markerii SSR constituie repetiii n tandem ale unor secvene di, tri sau tetra nucleotidice.
Selecia asistat de markeri moleculari (MAS) este o metod de selecie indirect care
presupune selecia plantelor purttoare a regiunilor care sunt implicate n expresia caracterelor de
interes (plante rezistente) prin markerii moleculari.

211
TEST RECAPITULATIV

1. Care sunt tipurile de erediti:


a) Ereditate nuclear
b) Ereditate cromozomal
c) Ereditate citoplasmatic
d) Ereditate nuclear i citoplasmatic
2. Fenotipul este rezultatul interaciunii dintre :
a) Genotip i mediu
b) Genotip i plasmagene
c) Mediu i plasmagena
3. Harta genetic la om a fost realizat n anul:
a) 1989
b) 2005
c) 2000
4. n ce an s-a stabilit structura acizilor nucleici?
a) 1970
b) 1963
c) 1953
5. Cte spermatii rezult din opt microspori?
a) 16
b) 10
c) 12
6. Pentru a prelua ADN exogen o bacterie trebuie sa fie n stare de:
a) Conjugare
b) Competen
c) Donor
7. Conjugonul este un element genetic reprezentat de:
a) Plasmidul F
b) Plasmidul R
c) Plasmidul Col

8. Structura homozigot presupune existena a:


a) Dou alele de acelai fel
212
b) Dou alele diferite
c) Trei alele de acelai fel
9. n cazul relaiei de dominan total, heterozigotul prezint:
a) Un fenotip intermediar fa de genitori
b) Un fenotip nou fa de genitori
c) Fenotipul unuia dintre genitori
10. Care este raportul fenotipic de segregare n F2 la relaia de tip Pisum?

a) 3:1
b) 2:2
c) 1:2:1
11. Cte tipuri de gamei va forma un individ cu structura genetic AABbCcDd?
a) 8;
b) 10;
c) 6.
12. Mama are grupa sangvin AB, tatl grupa 0. Ce grupe sangvine poate avea copilul?
a) A i B
b) AB i A
c) B i 0
13. Culoarea alb a florilor de Primula se manifest la temperaturi de:
a) 35C
b) 25C
c) 18C
14. Manifestarea polidactiliei doar la mini se datoreaz:
a) Penetranei
b) Fenocopiilor
c) Expresivitii
15. Mama are grupa sangvin B, copilul grupa O. Ce grup sangvin poate avea tatl?
a) sau AB
b) sau A heterozigot, B hetrozigot
c) sau B homozigot
16. n cazul unei epistazii de recesivitate, raportul de segeregare n F2 este:
a) 9:3:4
b) 15 :1
213
c) 12 :3 :1
17. Cte mutante a identificat T.Morgan la musculia de oet?
a) 200;
b) 500;
c) 600.
18. n cazul linkage-ului complet, raportul fenotipic obinut prin testcross este:
a) 3:1;
b) 1:1:1:1;
c) 1:1.
19. n cazul linkage-ului complet n generaia F2 va apare un raport fenotipic:
a) 9:3:3:1;
b) 3:1;
c) 1:1.
20. Liniile izogene se pot obine din:
a) poliploizi;
b) monoploizi;
c) perisoploizi.
21. Triticum aestivum este o specie:
a) autopoliploid;
b) haploid;
c) alopoliploid.
22. n procesul de producie prezint importan:
a) monoploizii;
b) poliploizii;
c) haploizii.
23. O specie care are 2n=16, ci monosomici diferii poate forma?
a) 16;
b) 32;
c) 8.
24. Aneuploizii prezint importan pentru:
a) ameliorare;
b) producie;
c) producere de smn.
214
25. Starea de hemizigoie poate fi ntlnit n cazul:
d) deleiilor;
e) duplicaiilor;
f) deleiilor i duplicaiilor.
26. Pentru meninerea efectului heterozis ar putea fi utilizate:
d) deleiile;
e) translocaiile;
f) duplicaiile.

27. Plantele prezinta un control genetic al sexelor de tip:


a) genic;
b) cromozomial;
c) cromozomial i genic.
28. Genele sex-linkage sunt plasate pe:
a) autozomi;
b) heterocromozomi;
c) autozomi i heterocromozomi.
29. Cti cromozomi va avea un mascul n cazul unei specii ce aparine subtipului
Protenor, iar femela are 2n= 18
a) 18
b) 17
c) 19
30. n cazul porumbului sunt implicate n controlul genetic al sexelor:
a) heterocromozomi
b) gene
31. Fenomenul de cris-cross se manifest n cazul n care sexul homogametic prezint:
a) doua alele dominante;
b) doua alele recesive;
c) o alel dominant i una recesiv;

32. Sidromul Klinefelter are structrura cromozomial:


a) XXY;
b) XYY;
c) XY
215
33. Procesul de autosexare la psri se bazeaz pe:
a) tipul crestei;
b) culoarea pufului;
c) forma ciocului.

34. Variaia fenotipic reprezint:


a) variana genotipic i variana mediului;
b) variana genotipic i variana aditiv
35. Biometria analizeaz caracterele:
a) calitative
b) cantitative
36. Variaia transgresiv are efecte asemntoare cu:
a) consangvinizarea
b) homozigoia
c) heterozisul
37. n F1 prin polenizarea plantelor androsterile (S) cu polen de la plante
androfertile apar plante:
a) androsterile
b) androfertile
c) androsterile i androfertile

38. Materialul genetic de la nivelul citoplasmei, poart denumirea:

a) gene
b) plasmagene
c) subgene
39. Ce reprezinta mutaia?
a) reprezint o modificare n structura materialului genetic;
b) reprezint o modificare n structura i funciile materialului genetic;
c) reprezint o modificare fenotipic.
40. Mutaia se transmite la descendeni din generaie n generaie?
a) da;
b) nu;
c) doar atunci cnd ambii prini sunt heterozigoi.
41. Cum sunt denumite genele care sunt predispuse la mutaii
216
a) mutatoare;
b) multiple;
c) mutabile.
42. Cine sunt considerate surs primar a variabilitii organismelor ?
a) migraiile;
b) mutaiile.
43. Liniile consangvinizate pot fi folosite:
a) n producie
b) n ameliorare
44. Efectul heterozis se poate menine:
a) dou generaii;
b) o singur generaie;
c) mai multe generaii.
45. Acizii nucleici ndeplinesc dou funcii:
a) funcia autocatalitic i heterocatalitic;
b) funcia autocatalitic i ereditar;
c) funcia autocatalitic, heterocatalitic i ereditar.
46. Ct reprezint ADN nalt repetitiv din totalul ADN-ului celular?
a) 4 10% ;
b) 5 - 10% ;
c) 15 40%.
47. O nucleotid este alcatuita din:
a) o baza azotat, un zahar i radical fosforic;
b) o baz azotat i un zahar;
c) o baz azotat i un radical fosforic.
48. Ribovirusurile prezinta ca material genetic:
d) ADN
e) proteine
f) ARN
49. Bazele azotate ce intra in alcatuirea AND sunt:
a) A, G, C, T
b) A, G, C, U
c) A, G, C
217
50. Complementaritatea catenelor de AND se refera la legaturi de tip:
a) A-T; C-G
b) A-G; C-T
c) A-C; T-G
51. O solutie de AND supusa la temperaturi ridicate duce la separarea catenelor,
proces denumit:
a) degivrare
b) degradare
c) denaturare
52. Translaia se desfaoar ntotdeauna la nivelul :
a) aparatului Golgi;
b) mitocondriilor;
c) ribozomilor.
53. Transcripia se realizeaz:
a) n citoplasm;
b) n nucleu;
c) n nucleu i citoplasm.
54. Codonul reprezint:
a) dou baze azotate;
b) o baz azotat i un zahar;
c) un triplet de baze azotate.
55. Aminoacizii liberi se ataeaz de
a) ARNm;
b) ARNr;
c) ARNt.
56. Se poate spune despre codul genetic c este:
a) universal, degenerat;
b) specific, suprapus.
57. Cea mai mic subdiviziune a genei este:
a) recon;
b) muton;
c) situs.
58. Exonul este prezent n gena de la :
218
a) procariote;
b) eucariote;
c) procariote i eucariote.
59. Transpozonii cuprind clasele:
a) reverstranspozonii i retrotranspozonii;
b) retrotranspozonii i transpozonii autonomi.
60. La eucariote ARNm este:
a) policistronic
b) monocistronic
61. Interferena ARN presupune existena:
a) ARN monocatenar
b) ARN ribozomal
c) ARN bicatenar
62. Mutaiile genice sunt fenomene ce apar:
a) rar;
b) frecvent.
63. Reparaia genic se realizeaz:
a) postrepicativ;
b) prereplicativ;
c) prereplicativ i postreplicativ;
64. Recombinarea genetic se realizeaz prin:
a) test-cross;
b) back-cross;
c) crossing-over.
65. n tehnica PCR, polimerizarea se realizeaz n prezena enzimei:
a) Taq pol;
b) ADN polimeraza;
c) ARN polimeraza.
66. Primerii sunt :
a) zaharuri;
b) oligonucleotide;
c) enzime.
219
67. n domeniul agricol markerii moleculari prezint importan deosebit
pentru:
a) consangvinizare;
b) poliploidie;
c) selecie.
68. Rezultatul reaciei PCR se numete:
a) replicon;
b) amplicon;
c) splicon

220
BIBLIOGRAFIE SELECTIV

1. Andrei P.,1998, Genetic Ed. Museum, Chiinu.


2. Badea, E., Rduoiu, S., Nicolae, I., Raicu, P., 2000, Genetica-genetic molecular i
inginerie genetic, Ed. Bioterra, Bucureti.
3. Brackdorff, N., 1984, Linactivation du chromosome X, La Recherche, Vol. 25, 136-141.
4. Brooker, R. J., 2000, Genetica. Analisi e principi, Zanichelli.
5. Casian H., 2006. Genetic- support pentru curs.Ed. Printech.
6. Cornea Clina Petrua, 2005. Genetic Ed. Ceres, Bucureti.
7. Crciun T., i colab., 1995. Genetica vegetal - Ed. Didactic i Pedagogic, Bucureti.
8. Crciun T., Tomzei, I.,Cole, N.,Butnaru, G.,1991, Genetic vegetal, Ed. Didactic i
Pedagogic, Bucureti.
9. Corneanu Mihaela, Corneanu,G., 2005, Genetica general i evoluia genomului,
Ed.Universitaria, Craiova.
10. Gallia Butnaru, Ion Nicolae, Simona Rduoiu, Floarea Nicolae, 2000. Genetica Principii
de baz ale ereditii, Vol I, Ed. Bioterra, Bucureti.
11. Gallia Butnaru, Ion Nicolae, Elena Tma, 1999. Genetic molecular. Ed. Mirton,
Timioara.
12. Hartl ,D. L., Jones, E., 2000, Genetica. Principi e applicazioni, Editoriale Grasso.
13. Lizica Szilagyi , 2007, Genetic, Ed. Amanda Edit.
14. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. I, Ed. Bioterra, Bucureti.
15. Nicolae, I., Rduoiu, S., Butnaru, G.,Nicolae, F., 2000, Genetica- principii de baz ale
ereditii, Vol. II, Ed. Bioterra, Bucureti.
16. Paula Iancu, 2008, Genetic,Ed. Sitech, Craiova.
17. Prnu Ghe.,2010, Genetica i ameliorarea arborilor- Ed. Silcic, Bucureti.
18. Rodica Pop, Studiul variabilitii somaclonale la via de vie cu ajutorul markerilor moleculari.
19. Russel, P. J., 1998, Genetica, EDISES.
20. Victor Stnescu, 1983. Genetica i ameliorarea speciilor forestiere.Ed. Didactic i
pedagogic, Bucureti.
21. http://www.usamvcluj.ro.
22. http://www.bio.unibuc.ro

221