Biologie Celulara PDF

Program postuniversitar de conversie profesional
pentru cadrele didactice din mediul rural

Specializarea BIOLOGIE
Forma de nvmnt ID - semestrul I
BIOLOGIE CELULAR
Marieta COSTACHE
2005
Ministerul Educaiei i Cercetrii
Proiectul pentru nvmntul Rural
BIOLOGIE
Biologie celular
Marieta COSTACHE
2005
2005 Ministerul Educaiei i Cercetrii
Proiectul pentru nvmntul Rural
Nici o parte a acestei lucrri

nu poate fi reprodus fr
acordul scris al Ministerului Educaiei i Cercetrii
Cuprins
CUPRINS GENERAL
INTRODUCERE VI
Unitatea de nvare 1: CELULE PROCARIOTE I EUCARIOTE

pag
Cuprins unitatea 1 1
Introducere unitatea 1 2
Obiective Unitatea 1 2
Informaii generale despre evaluare 3
1.1. Concepte generale de structur i funcionare 4

1.1.1. Compartimentarea ADN i organismele 5
1.1.2. Fluxul de informaie 7
1.1.3. Autoreplicarea macromoleculelor 8
1.1.4. Un spaiu delimitat de o membran 10
1.2. Celulele procariote 11
1.2.1. Organizarea celulei procariote 11
1.2.2. Evoluia metabolismului bacterian 12
1.2.3. De la procariote la eucariote: teoria endosimbiotic 15
1.3. Celulele eucariote i diferenierea celular 16
1.3.1. Celulele eucariote sunt compartimentate 17
1.3.2. Organismele pluricelulare: difereniere celular i reproducere 21
1.4. Rspunsuri i comentarii la testele de autoevaluare 24
1.5. Lucrare de verificare 1 25
1.7. Bibliografie 27
Unitatea de nvare 2: TEHNICI DE EXPLORARE CELULAR
2. 1. Culturi celulare 31
2.1.1. Mediile de cultur 32
2.1.2. Tipuri de culturi 33
2. 2. Metode de microscopie 35
2.2.1. Microscopia optic 35
2.2.2. Microscopia de fluorescen 37
2.3. Metode de separare a componentelor celulare 40
2.3.1. Centrifugarea 41
2.3.1.1. Principiul centrifugrii 41
2.3.1.2. Variantele centrifugrii 42
2.3.2. Cromatografia 45
Proiectul pentru nvamntul Rural i

Cuprins
2.3.2.1. Cromatografie pe hrtie 46

2.3.2.2.Cromatografia pe coloan n faz lichid 47
2.3.2.3. Cromatografia lichid de nalt presiune 48
2.3.2.4 Gel filtrarea 48
2.3.2.5. Cromatografia pe schimbtori de ioni 49
2.3.2.6. Cromatografia de afinitate 49
2.3.2.7. Cromatografia n faz gazoas 50
2.3.3. Electroforeza 50
2.3.3.1. Principiul electroforezei 51
2.3.3.2. SDS-PAGE 51
2.3.3.3. Imunoeletrofocalizare 52
2.3.3.4. Electroforeza bidimensional 52
2.3.3.5. Purificarea i separarea acizilor nucleici 53
2.3.3.6. Aplicaii electroforez 54
2.4. Tehnici de marcare 55
2.4. 1. Marcarea radioactiv 55
2.4.2. Marcarea cu anticorpi 55
2.5. Tehnici ADN recombinat 58
2.5.1. Clonare molecular 58
2.5.2. Transformare de bacterii 60
2.5.3. Enzimele de restricie 62
2.5.4. Construirea unei bnci de ADN genomic 64
2.5.5. Construirea unei bnci de ADNc 65
2.5.6. Reacia PCR 66
Unitatea de nvare 3: Ciclul i Diviziunea Celular
3. 1. Ciclul Celular 78
3.1.1. Interfaza 79
3.1.2 Mitoza 80
3.1.3. Dinamica citoscheletului n timpul ciclului celular 84
3.1.3.1.Microtubulii 84
3.1.3.2. Filamentele de actina 89
3.1.3.3. Filamente intermediare 90
3.1.3.4. Formarea fusului mitotic 94
3. 2. Mecanisme biochimice de control al ciclului celular 97
3.2.1.Cicline 101
3.2.2. Punctele de control 102
3.3. Meioza 104
3.3.1. Originea gameilor 104
ii Proiectul pentru nvamntul Rural

Cuprins
3.3.2. Derularea meiozei 105

3.3.2.1. Diviziunea reducional (sau mitoza heterotipic) 105
3.3.2.2. Diviziunea ecuaional 106
3.3.2.3. Comparaie mitoz meioz 108
3.4. .mbtrnirea celular 108

3.4.1. Reorganizarea genomului nuclear - aberaii cromozomiale 109
3.4.2. Scurtri ale telomerilor i senescena replicativ 109
3.4.3. Aspecte energetice i biochimice 110
3.5. Moarte i nemurire celular 111
3.5.1. Necroza 111
3.5.2. Apoptoza i moartea celular programat 111
3.5.3. Imortalitatea celular cancer 114
3.5.3.1. Imortalitatea celular 114
3.5.3.2. Proprietile celulei tumorale 115
3.5.3.3. Mutaiile i imortalizarea celulelor 115
3.5.3.4. Virusurile ca ageni transformani 116
Unitatea de nvare 4: ORGANIZAREA I FUNCIONAREA CELULEI

4. 1. Structura membranelor 128
4.1.1. Arhitectura membranar 128
4.1.1.1. Dublul strat lipidic 128
4.1.1.2. Proteinele membranare 132
4.1.1.3. Glucidele 134
4. 2. Schimburile cu mediul nconjurtor 135
4.2.1. Transporturi membranare 135
4.2.1.1. Transportul pasiv 137
4.2.1.2. Transportul activ 138
4.2.1.3. Meninerea concentraiilor ionice 139
4.2.1.4. Transportul nutrienilor 141
4.2.1.5. Transportul cu ajutorul veziculelor 142
4.3. Comunicarea intercelular 145
4.4. Traficul intracelular al proteinelor 147
4.4.1. Rolul reticulului endoplasmatic 148
4.4.2. Sinteza proteinelor de ctre ribozomii de la suprafaa RER 149
4.4.3. Glicozilarea proteinelor n RE 150
4.4.4. Biogeneza membranelor n RER 150
4.4.5. Rolul aparatului Golgi 151
4.4.6. Trierea proteinelor 153
Proiectul pentru nvamntul Rural iii

Cuprins
4.5 Mitocondrii i cloroplaste (conversia energiei) 155

4.5.1. Mitocondrii 155
4.5.1.1. Organizarea mitocondriei 156
4.5.1.2. Genomul mitocondrial 157
4.5.1.3. Biogeneza mitocondriilor 158
4.5.1.4. Funciile mitocondriei 159
4.5.1.5. Producerea de ATP 159
4.5.2. Cloroplaste 163
4.6. Nucleul i funciile sale 166

4.6.1. nveliul nuclear 167
4.6.1.1. Structura i funcia complexului porilor nucleari 169
4.6.1.2. Traficul nucleu-citoplasma 169
4.6.2. Nucleul este un organit organizat 171
4.6.2.1. Cromozomii 171
4.6.3. mpachetarea genomului eucariot 176
4.6.3.1. Nucleozomii - primul nivel de organizare al cromozomului 179
4.6.3.2. Nivelurile structurale superioare ale cromatinei 182
4.6.4. Eucromatina i heterocromatina 185
4.7. Rspunsuri i comentarii la testele de autoevaluare unitatea 4 187
Unitatea de nvare 5: COMUNICARE CELULAR I SEMNALIZARE

5.1. Moleculele implicate n semnalizare 197
5.1.1. Liganzi i receptori 199
5.1.2. Clasificare hormoni 200
5.1.3. Mesageri secundari 202
5.2. Receptorii membranei plasmatice 204
5.2.1. Receptori cuplai cu proteinele G 205
5.2.1.1 Proteinele G 205
5.2.1.2. Adenilat ciclaza 208
5.2.1.3. Fosfolipaza C 209
5.2.2. Receptorii care formeaz canale de sodiu i potasiu 210
5.2.3. Receptorii cu activitate enzimatic intrinsec 211
5.3. Receptorii citoplasmici i nucleari 212
5. 4. Rspunsuri i comentarii la testele de autoevaluare 215
iv Proiectul pentru nvamntul Rural

Cuprins
Unitatea de nvare 6: DE LA CELUL LA ORGANISM

6.1. Adeziunea i mobilitatea celular 223
6.1.1. Caderinele 225
6.1.2.2. CAM din superfamilia imunoglobulinelor 226
6.1.3. Rolul moleculelor de adeziune n coeziunea tisular 228
6.1.3.1. Jonciunile nguste 229
6.1.3.2. Jonciunile de ancorare i desmozomii 229
6.1.3.3. Jonciunile de comunicare (gap) 230
6.1.3.4. Bazele moleculare ale mobilitii celulare 231
6.1.4. Adeziunea celul-matrice 232

6.1.4.1. Colagenul i elastina 233
6.1.4.2. Proteoglicanii 235
6.1.4.3. Glicoproteinele extracelulare de adeziune 236
6.2. Celulele primelor stadii embrionare 238
6.2.1. Fecundarea 238
6.2.2. Segmentarea i reorganizarea celulelor embrionare 243
6.3. Bazele moleculare ale diferenierii celulare 244
6.3.1. Organizarea tipic a unei gene eucariote 244
6.3.2. Promotori, stimulatori, inhibitori 246
6.3.3. Diferenierea rezult din expresia n cascada a genelor 248
6.3.4. Morfogeneza 248
6.3.5. Organogeneza 249
6.4. Evenimente celulare specializate 251
6.4.1. Celule stem 251
6.4.2. Celulele imunitare 253
6.4.3. Neuronii i sistemul nervos 256
6.4.4. Celule tumorale i cancer 258
Bibliografie minimal recomandat cursanilor 268
Proiectul pentru nvamntul Rural v

Introducere
INTRODUCERE
Cursul de BIOLOGIE CELULAR - celula unitatea de baz a

ASPECTE lumii vii este proiectat conform principiilor Educaiei la Distan.
GENERALE Face parte din structura modulului de discipline de specialitate
fundamentale care se adreseaz n principal personalului didactic
care urmeaz cursurile Proiectului pentru nvmntul Rural
precum i oricrei persoane care desfoar activiti didactice n
sistemul organizat de educaie la distan.
Cursul dezvolt competene specifice i. este gndit conform

principiilor funcionalitii i coerenei bazndu-se pe cunotinele
aduse de alte discipline ale pachetului de specialitate (chimie,
zoologie, botanic) realiznd concomitent cu introducerea noilor
informaii, o integrare pe orizontal i pe vertical a cunotinelor.
Materialul prezentat este flexibil, accesibil, orientat spre aplicarea
practic a cunotinelor dobndite, ofer anse egale cursanilor i
posibilitatea de formare i perfecionare profesional.
Proiectul pentru nvmntul rural a aprut din necesitatea

CADRU DE specific de a avea un program de formare profesional n domeniul
ORGANIZARE biologiei pentru cadre didactice din nvmntul preuniversitar care,
desfurndu-i activitatea n mediul rural, sunt nevoite s predea
biologia avnd diploma universitar din alt domeniu dect cel al
tiinelor naturii. Cursul este util cadrelor didactice din mediul rural,
att celor care au diplom universitar n domeniul biologie, ct i
celor care sunt calificate n alte domenii, dar urmeaz cursuri de
formare n biologie.
Modulul Biologie celular celula unitatea de baz a lumii vii

are un caracter interdisciplinar, utilizeaz cunotinele asimilate la
alte discipline (chimie, zoologie, botanic) i ofer suportul de baz
pentru nelegerea altor module din cadrul disciplinei biologie
(genetic i microbiologie, biochimie, ecologie i nu n ultimul rnd
biodiversitate i evoluionism).
Cursul este astfel structurat nct ofer o imagine clar i

sintetic asupra principiilor fundamentale care guverneaz
organizarea structural i funcionalitatea celulei ca ntreg i n
contextul asamblrii acesteia n organisme pluricelulare simple i
complexe.
Modulul de Biologie celular este una dintre componentele

structurale ale strategiei de creare a unui program de formare n
domeniul biologiei operant i util nu doar pentru situaii de
conjunctur (ca cea existent n prezent n nvmntul rural).
Acesta i propune s constituie o form de nvmnt cu o
aplicabilitate mai larg. Modulul este conceput astfel nct s poat
utiliza ct mai eficient facilitile moderne de comunicare, metodele
vi Proiectul pentru nvmntul Rural
Introducere
de nvare interactiv i acordarea posibilitilor de autoverificare i

verificare a competenelor dobndite att pe parcursul parcurgerii
unitilor modului ct i la finalizarea acestuia.
Obiectivele generale i specifice ale modulului, n termenii

OBIECTIVELE formrii de competene de specialitate specifice sunt:
MODULULUI 1. Identificarea, clasificarea i caracterizarea tipurilor celulare;
2. nelegerea conceptelor de origine i evoluie a vieii;
3. Utilizarea conceptelor caracteristice metodelor de investigare
celular pentru nelegerea complexitii i diversitii lumii vii;
4. Investigarea fenomenelor i proceselor caracteristice lumii vii
la nivel celular;
5. nelegerea principiilor generale de organizare i diviziune
celular;
6. Explicarea proceselor i fenomenelor de mbtrnire i
nemurire celular n corelaie cu starea de sntate i boal;
7. Clarificarea conceptelor de structur i funcionare celular;
8. Explicarea proceselor de comunicare intra- i intercelular;
9. Identificarea proceselor i structurilor responsabile de
asigurarea energeticii celulare i transferului de informaie genetic
10. Dezvoltarea capacitii de identificarea a principalelor
molecule implicate n semnalizare la nivel celular i intercelular;
11. Utilizarea noiunilor privind structura i funcia diferitelor
compartimente celulare n nelegerea complexitii structurale i
funcionale a organismelor
12. Formarea capacitii de nelegerea a morfogenezei i
individualitii funcionale a organismelor ca urmare a derulrii
evenimentelor celulare specializate.
n conformitate cu cerinele Programului de Educaie la Distan

CONCEPIA pentru nvmntul Rural, prezentul modul este construit n formatul
CURSULUI unui curs de educaie prin coresponden i aduce importante
elemente de noutate n nvmntul biologic superior romnesc.
Sperm c acest format s fie atractiv att pentru grupul int ct i
pentru universitile care vor implementa programul. Modulul este
planificat n programa analitic a semestrului I, anul I, face parte din
cursurile de specialitate fundamentale i necesit n medie 56 de ore
de studiu (28 ore de studiu individual SI, 20 de ore alocate activitii
cu tutorele AT i 8 ore alocate activitii de control pe parcurs TC).
Remarc: intervalele de timp precizate mai sus pot fi mai lungi
sau mai scurte n funcie de bagajul de cunotine anterioare ale
cursantului, de cantitatea de munca alocat fiecrui subiect i de
capacitatea de efort intelectual a acestuia.
Modulul Biologie celular celula unitatea de baz a lumii vii

este structurat n ase uniti de studiu (capitole) i conine ase
lucrri de verificare care vor fi transmise pentru corectare i
comentarii tutorelui la care cursantul a fost alocat. Aceste lucrri sunt
localizate la sfritul fiecrei uniti mpreun cu instruciunile dup
care se va realiza evaluarea dedicate fiecrui capitol. Fiecare unitate
de nvare este presrat cu un numr de teste de autoevaluare
Proiectul pentru nvmntul Rural vii

Introducere
care au rolul de elemente de lucru active care s asigure

comunicarea bidirecional simulat ntre autor i cursant.
Dimensiunile unitilor de studiu sunt diferite ele fiind n
concordan cu importana pe care ncercm s o alocm
problemelor tiinifice tratate i ponderii acestora n formarea
competenelor specifice pe care dorim s le acumulai dup
parcurgerea acestui modul.
Unitatea 1: Celule procariote i eucariote i propune

explorarea conceptele care privesc structura general a celulelor
procariote i eucariote i cteva din conceptele privind originea vieii.
Conine 23 de teste de autoevaluare, 10 figuri i ase cadre
suplimentare care au rolul de a clarifica noiunile teoretice
prezentate.
Unitatea 2: Tehnici de explorare celular v va permite

familiarizarea cu principalele tehnici folosite n explorarea celulelor:
culturi celulare primare, linii celulare, analiza celulelor i
subcomponentelor lor prin metode microscopice, tehnicile de
separare i purificare a componentelor celulare, principalele tehnici
de marcare i de obinere a ADN recombinat. Cele 30 de teste de
autoevaluare, patru cadre suplimentare i 23 de figuri au rolul de v
forma o imagine ct mai bun privind complexitatea i importana
practic a acestor tehnici.
Unitatea 3: Ciclul i diviziunea celular. n cadrul unitii de

studiu v vei putea familiariza cu principalele noiuni privind ciclul
celular i etapele sale, mecanismele biochimice de control ale
acestuia, formarea celulelor sexuale prin procesul meiozei,
mbtrnire, moarte i imortalitatea celular. Textul conine inserate
38 de teste de autoevaluare, patru cadre suplimentare i 36 de figuri
v vor ajuta la o mai bun nelegere i integrare a informaiilor
tiinifice prezentate.
Unitatea 4: Organizarea i funcionarea celulei este capitolul

cel mai complet i complex care v va ajuta s cunoatei celula ca
pe o unitate vie cu caracteristici structurale i funcionale proprii. De
asemenea, vei nelege c celula este n acelai timp capabil s
rspund necesitilor organismului din care face parte fiind deosebit
de receptiv la mediu. Deoarece unitatea are o importan aparte n
nelegerea i asimilarea cunotinelor ntregului modul n structura
acesteia vei gsi integrate 70 de teste de autoevaluare i 37 de
figuri, elemente foarte utile n fixarea noiunilor teoretice.
Unitatea 5: Comunicare celular i semnalizare v va fi

foarte util n nelegerea modului n care celulele interacioneaz
prin intermediul diferitelor sisteme de comunicare intra- i
extracelular. Un loc aparte este acordat moleculelor de semnalizare
extracelular care odat eliberate de celule determin
rspunsuri specifice la nivelul celulelor int. Unitatea este sintetic
structurat i presrat cu 20 de teste de evaluare i 13 figuri.
viii Proiectul pentru nvmntul Rural

Introducere
Parcurgerea i analiza acestora v va fi foarte util n nelegerea

informaiilor tiinifice de actualitate prezentate.
Unitatea 6: De la celul la organism este foarte important

pentru nelegerea conceptelor care privesc formarea i funcionarea
unui organism. Aceast unitate trece n revist noiunile privind
interaciile celul-celul i celul-matrice o atenie deosebit fiind
acordat bazelor moleculare ale diferenierii celulare i
evenimentelor celulare specializate. Conine 35 de teste de
autoevaluare, 21 de figuri i patru cadre suplimentare cu rolul de a
clarifica noiunile teoretice abordate.
Criterii de Evaluare: nivelul de cunoatere a coninutului i

METODE I capacitatea de transfer i aplicare a cunotinelor n contexte noi.
INSTRUMENTE
DE EVALUARE Modaliti de evaluare:
1. Evaluarea pe parcurs cu o pondere de 50% din nota final se
va realiz pe baza testelor de evaluare i a comunicrii cu tutorele i
cu universitatea organizatoare. Evaluarea pe parcurs a cursanilor se
va realiza prin lucrrile de verificare care includ diferite combinaii de:
ntrebri cu unul sau mai multe rspunsuri, rspunsuri simple la
ntrebri sau sub form de eseuri. Reuita la lucrrile de verificare
este asigurat n proporie de peste 80% de parcurgerea i
rezolvarea cu responsabilitate a testelor de autoevaluare. Lucrrile
de verificare vor fi analizate i comentate de ctre tutore i nu vor
necesita supervizarea profesorului. Ele vor avea o pondere de 40%
din nota final. Alte zece procente vor rmne la latitudinea tutorelui
din universitile organizatoare ale programului i vor fi folosite
pentru punctarea seriozitii cursantului i a modului n care acesta
comunic cu instructorii si.
2. Evaluare final cu o pondere de 50% din nota final va
consta ntr-un examen final scris supervizat de profesor. Aceasta va
avea forma unui test final de verificare a cunotinelor.
n educaia la distan o importan deosebit o au sistemele

de comunicare bidirecionale ntre tutore i student. Acestea trebuie
MODALITI selectate cu discernmnt i au ca obiectiv principal o bun
DE comunicare i minimizarea timpului de rspuns. Din acest motiv
COMUNICARE
universitile coordonatoare vor decide care sunt cele mai bune
modaliti de comunicare (pot, telefon, fax, internet) care s
permit o desfurare coerent a activitilor astfel nct ntlnirile
dintre studeni i cadrele didactice coordonatoare s permit
evaluarea periodic a progreselor realizate i notarea acestora.
Perioadele de analiz a lucrrilor de evaluare pe parcurs i data
examenului final vor fi comunicate cursanilor nc de la nceputul
semestrului
MODALITI Fiecare unitate conine la sfrit bibliografia general care a

DE stat la baza ntocmirii materialului teoretic i a testelor de evaluare.
INFORMARE Imaginile inserate n text au fost preluate de pe internet sau din
SUPLIMENTAR
diferite tratate i prelucrate. n cazul celor preluate din tratate avei
Proiectul pentru nvmntul Rural ix

Introducere
sursa bibliografic trecut sub figur. O mare parte a bibliografiei
este format din adrese internet de la diferite universiti pe care le
putei accesa pentru a consulta documentele respective. Va rugm
s observai c bibliografia utilizat n redactarea informaiei este din
ultimii 10 ani. La sfritul modului a fost selectat o bibliografie
minimal, n limba romn, care v va fi util n completarea
cunotinelor. Criteriile care au stat la baza selecionrii acestor
materiale bibliografice au fost: maxim 15 ani de la editare; prezen
ISBN i existena acestora materialelor n fiele de eviden ale
Bibliotecii Centrale Universitare.
x Proiectul pentru nvmntul Rural

Celule procariote i eucariote
Unitatea de nvare 1:
CELULE PROCARIOTE I EUCARIOTE
Cuprins pag
Introducere 2
1.1. Concepte generale de structur i funcionare 4
1.1.1. Compartimentarea ADN i organismele 5
1.1.2. Fluxul de informaie 7
1.1.3. Autoreplicarea macromoleculelor 8
1.1.4. Un spaiu delimitat de o membran 10
1.2. Celulele procariote 11
1.2.1. Organizarea celulei procariote 11
1.2.2. Evoluia metabolismului bacterian 12
1.2.3. De la procariote la eucariote: teoria endosimbiotic 15
1.3. Celulele eucariote i diferenierea celular 16
1.3.1. Celulele eucariote sunt compartimentate 17
1.3.2. Organismele pluricelulare: difereniere celular i reproducere 21
Proiectul pentru nvmnt Rural 1

Introducere
n cadrul acestei uniti de studiu vei putea explora conceptele care

privesc structura general a celulelor procariote i eucariote i cteva din
conceptele privind originea vieii.
Celula, unitatea fundamental a lumii vii, reprezint forma de via cea mai
simpl capabil s creasc independent. Aceasta folosete elementele din
mediul su pentru a sintetiza majoritatea constituenilor necesari diviziunii sale.
Pentru a realiza aceasta sunt necesare dou sisteme moleculare indispensabile:
un sistem de transfer de informaie i un sistem de transformare de energie.
Materialul este presrat cu teste de autoevaluare pe care v recomandm

s le rezolvai n momentul ntlnirii acestora. La finalul capitolului sunt prezentate
rspunsurile la testele de autoevaluare pe parcurs i lucrarea de verificare 1 pe
care la finalul parcurgerii unitii o vei trimite tutorelui.
Obiective Unitatea 1
La terminarea studiului acestei uniti de studiu, trebuie s fii capabili s:
9 Prezentai succint i clar componentele structurale ale celulei;
9 Identificai, clasificai i s caracterizai tipurile celulare (procariote,

animale i vegetale);
9 Precizai conceptele generale de origine i evoluie a vieii;
9 Definii principalele funcii ale organitelor celulare.
9 Contientizai c celulele prezint grade diferite de complexitate n

condiiile n care au acelai plan de organizare;
9 Integrai c formarea unui organism pluricelular este rezultatul unei

organizri sociale n care celulele sunt corelate ntre ele.
2 Proiectul pentru nvmnt Rural

Evaluarea pe parcurs - Testele de autoevaluare (TA)

Unitatea conine n structura sa 23 de teste de autoevaluare
distribuite astfel nct s asigure o bun fixare a noiunilor
prezentate.
Fiecare test de evaluare se bazeaz pe parcurgerea i
nelegerea materialului teoretic prezentat.
Unele dintre testele de autoevaluare sunt sub form de
ntrebri urmate de trei sau patru sau cinci rspunsuri posibile,
fiecare indicat cu o liter n dreptul lui. Pentru a rspunde la aceste
ntrebri, trebuie s ncercuii litera din dreptul rspunsului pe care l
considerai ca fiind corect.
Alte teste v cer s scriei rspunsuri scurte sau s
ncercuii rspunsul corespunztor spaiilor libere;
Exist i teste de autoevaluare care vor necesita rezolvarea
unei probleme sau scrierea unor scurte eseuri prin care s exprimai
prerea voastr asupra anumitor aspecte.
Rspunsurile la testele de autoevaluare sunt prezentate la
sfritul unitii, nainte de lucrarea de verificare 1.
Dac nu reuii s rezolvai cu succes testele de
autoevaluare n momentul ntlnirii lor pe parcursul parcurgerii
testului v recomandm s reluai parcurgerea ntregului material si
apoi s revenii asupra rezolvrii testelor. Unele dintre testele de
autoevaluare sunt foarte simple, rspunsul lor fiind evident n text.
Alte teste necesit o bun integrare a cunotinelor obinute i
parcurgerea ntregii uniti. Enunurile testelor de autoevaluare au
un rol important n fixarea cunotinelor i n formarea unei imagini
de ansamblu asupra materiei.
Lucrri de verificare notate de tutore.
Gradul de dobndire a conceptelor i informaiilor prezentate
n aceast unitate de nvare va fi cuantificat pe baza notei obinute
la Lucrarea de verificare Nr.1 care conine 25 de probleme. Testele
din lucrarea final sunt de acelai tip cu testele de autoevaluare pe
care le vei rezolva pe parcursul parcurgerii materialului unitii 1.
Evaluarea rspunsurilor dumneavoastr la lucrarea de
verificare 1 va fi realizat de tutore la termene stabilite de comun
acord cu administraia universitilor care organizeaz formarea.
Rspunsurile problemelor vor fi transmise direct universitilor
organizatoare. Lucrrile de evaluare pe parcurs au o pondere de
50% din nota final. Lucrarea de verificare 1 va reprezenta 5% din
verificarea pe parcurs. Cele 25 de ntrebri vor fi echivalente i vor fi
notate cu 2 puncte fiecare astfel nct pentru o lucrare corect s
putei acumula 50 de puncte.
Materialul unitii este presrat cu un numr de ase cadre
suplimentare i 10 figuri care au rolul s v fac s nelegei mai
bine noiunile teoretice prezentate. Acestea nu sunt opionale.
Parcurgerea materialelor din cadrele suplimentare i analiza figurilor
inserate n curs v va ajuta la lmurirea noiunilor complexe i la
aprofundarea anumitor subiecte. Un rezultat bun la lucrarea de
verificare este clar condiionat de parcurgerea cu responsabilitate a
testelor de autoevaluare, a cadrelor i de nelegerea figurilor.

1.1. Concepte Obiectivul biologiei celulare este de a nelege derularea

generale de fluxului vieii care pleac de la molecule i ajunge la organisme,
trecnd prin celule i esuturi.
structur i
Celula, unitatea fundamental a lumii vii, reprezint forma de
funcionare via cea mai simpl capabil de autoreproducere. Aceasta
folosete elementele din mediul su pentru a sintetiza majoritatea
constituenilor necesari diviziunii sale. Pentru a realiza aceasta sunt
necesare dou sisteme moleculare indispensabile: un sistem de
transfer de informaie i un sistem de transformare de energie.
Anumite entiti biologice de tipul virusurilor pot fi total sau parial
lipsite de aceste dou componente majore i se reproduc graie
celulelor gazd care suplinesc funciile care lipsesc (Cadrul 1).
TA 1.1. Care dintre urmtoarele afirmaii este cea mai apropiat

descriere a domeniului de studiu al biologiei celulare?
a) studiul proceselor vieii; b) studiul rocilor; c) studiul oamenilor; d)
studiul biodiversitii; e) studiul modului n care oamenii interacioneaz cu
mediul
Cadrul 1.1. Virusurile, parazii moleculari ai celulei

Incapacitatea virusurilor de a produce energie face din acetia parazii
intracelulari obligatorii. Virusurile nu se auto-reproduc niciodat iar forma lor de
parazitism molecular const n introducerea ntr-o celul gazd a unei informaii
genetice noi care exploateaz capacitile metabolice ale celulei gazd
infectate pentru a reproduce materialul viral.
Virionul, unitatea elementar a virusului, este compus dintr-o parte
central care conine ADN sau ARN, nconjurat de o capsid constituit din una
sau mai multe varieti de proteine. Clasificarea virusurilor depinde n primul
rnd de tipul de acid nucleic (ADN sau ARN) sub form monocatenar sau
dublu-catenar i n al doilea rnd de forma capsidei (elicoidal, eicosaedric,
etc.).
Se pot diferenia virusurile bacteriene (sau bacteriofagii) care posed un
genom ADN i virusurile celulelor eucariote al cror genom poate s fie ADN
sau ARN. Virusurile ARN sau retrovirusurile, prezint un ciclu infecios destul
de diferit de cel al virusurilor ADN. Dup infectarea celulei, ARN este
transformat n ADN de ctre o transcriptaz invers viral. ADN viral
neosintetizat se integreaz uor n genomul celulei i poate s se menin o
durat nelimitat sub form de provirus. Acesta produce prin transcripie ARN
viral care servete pe de o parte drept mesager pentru sinteza de proteine
virale i de genom pentru crearea de noi particule virale. Asamblai n
citoplasm, noile virusuri ies din celul prin nmugurire la nivelul membranei
plasmatice, cu consecine destul de reduse asupra funcionrii globale a celulei.
Aceast proprietate a retrovirusurilor face din ei vectori eficace pentru
introducerea de ADN strin n celulele int. Aplicaiile n terapie genic sunt
actualmente foarte numeroase.

1.1.1 Clasificarea organismelor se bazeaz pe absena sau

Compartimentarea prezena n celul a unei membrane care individualizeaz nucleul,
ADN la diferite numit anvelop nuclear. Celulele procariote, lipsite de un nucleu
organisme adevrat, includ eubacteriile i archeobacteriile. Pe de alt parte,
celulele eucariote (protiste, ciuperci, plante i animale) posed o
anvelop nuclear care nconjoar materialul genetic.
Creterea unei celule sau dezvoltarea unui organism
folosind energia furnizat de mediu au drept corolar meninerea
organizrii celulare. Aceasta se transmite de la o celul la alta prin
intermediul materialului genetic sau acidului dezoxiribonucleic
(ADN) purttor i memorie a informaiei acumulate n cursul
evoluiei de miliarde de ani. ADN constituie punctul de start al
informaiei n celul i reprezint o structur stabil i linear, ideal
pentru stocarea i organizarea informaiei. Aceasta poate s
rspund att semnalelor din interiorul celulei ct i celor din mediul
exterior, transferul de informaii fiind astfel reglat.
n cazul cromozomului unic de la procariote, dubla elice ADN
compus din cteva milioane de perechi de baze are o form
circular (tabelul din Figura 1.1). Genomul eucariotelor a cror
mrime i complexitate este variabil, conine n general mai muli
cromozomi. n cromozomii unei celule eucariote, ADN este
suprarsucit n jurul unor proteine specifice numite histone,
formnd o structur compact responsabil de expresia ADN.
TA 1.2. Care sunt cele dou clase ale procariotelor?

a) eucariotele i eubacteriile; b) archeobacteriile i Monera; c)
eubacteriile i archeobacteriile; d) bacteriile i Monera;
TA 1.3. Care dintre urmtoarele structuri sunt celule procariote?
a) plante; b) fungi; c) bacterii; d) animale; e) att b ct i c
Cadrul 1.2. NOT PRIVIND DENUMIRILE BIOLOGICE
Speciile organismelor vii sunt identificate prin perechi de cuvinte latine,

scrise n italic, analoge cu numele de familie i prenumele persoanelor fizice.
De exemplu, pentru bacteria Escherichia coli, genul Escherichia este
echivalentul numelui de familie i este trecut primul; cel de al doilea termen coli este
echivalentul prenumelui i identific specia particular din genul respectiv creia i
aparine microorganismul . n denumirile scurte, numele genului poate fi prescurtat
(E. coli) n timp ce specia trebuie specificat. Cu toate acestea putem folosi adesea
pentru musculia de oet denumirea de Drosophila, cu toate c ne referim de fapt la
Drosophila melanogaster.

Nume Mrimea Mrimea

comun genomului relativ a
(perechi genomului
de (E. coli = 1)
nucleotide)
VIRUSURI
SV40 5,2 x 103 1,3 x 10-3
Bacteriofag 4,8 x 104 1,2 x 10-2
Virus Herpes de tip bovin 1,4 x 105 3,5 x 10-2
CELULE PROCARIOTE Bacterii
Mycoplasma capricolum 0,7 x 106 1,7 x 10-1

6
Staphylococcus aureus 2,9 x 10 7,2 x 10-1
6
Escherichia coli 4,0 x 10 1
Myxococcus xantus 9,7 x 106 2,6
CELULE EUCARIOTE
Ciuperci
Saccharomyces Drojdii 1,5 x 107 3,7
cerevisiae Ciuperci 1,5 x 10 7 3,7
Aspergillus niger
Animale Musc 1,8 x 108 4,5 x 10
Drosophila melanogaster
Mus musculus oarece 2,7 x 109 6,7 x 102
9
Bos taurus Taur 3,2 x 10 8,0 x 102
9
Homo sapiens Om 3,4 x 10 8,5 x 102
Plante
Arabidopsis thaliana Arabete 7,0 x 107 1,7 x 101
9
Zea mays Porumb 3,9 x 10 9,7 x 102
10
Alium cepa Ceap 1,8 x 10 4,5 x 103
Figura 1.1. Mrimea i complexitatea genomului la cteva virusuri i celule
TA 1.4. O bacterie cu greutatea de aproximativ 10-12 g se poate divide la

fiecare 20 de minute. Dac o singur celul se divide cu aceast frecven, ct
timp este necesar ca masa bacterian s fie egal cu cea a Pmntului (6 x 1024
kg). Comparai rezultatul obinut de dumneavoastr cu faptul c bacteriile i au
originea acum mai bine de 3,5 miliarde de ani i de atunci s-au divizat mereu.
Explicai aparentul paradox. (Numrul de celule N n cultur la timpul t este
dat de ecuaia N=N0 x 2 t/G, unde N0 este numrul de celule la timpul zero, iar G
este timpul unei generaii).
TA 1.5. Una dintre distinciile cheie dintre celulele procariote i eucariote o

reprezint prezena n celule ________, care lipsete din celule ___________
a) eucariote a unui nucleu ..procariote
b) procariote a unui nucleu n ..eucariote
c) procariote de ADN eucariote
d) eucariote de ADN ..procariote
e) procariote a unui organit citoplasmatic .eucariote

1.1.2. Fluxul de Celule procariote i eucariote posed att mecanisme

informaie comune ct i distincte pentru reglarea expresiei genelor i a
fluxului de informaie de la ADN la proteine (Figura 1.2).
Transcrierea ADN de ctre ARN polimeraze constituie prima etap
comun pentru toate organismele. n urma acestui proces se
formeaz molecule de ARN (ARN mesager - ARNm, ARN de
transport - ARNt, ARN ribozomal ARNr).
n citoplasma celulelor procariote, ribozomii se fixeaz la
moleculele de ARN mesager (ARNm) n curs de sintez i traduc
imediat informaia genetic n proteine. n celulele eucariote,
anvelopa nuclear separ locul transcripiei de cel al traducerii
informaiei genetice. La eucariote genele au o structur mozaicat
fiind compuse din, fragmente a cror secven nucleotidic va fi
tradus n proteine (exoni) i din secvene care nu vor fi traduse
(introni i secvene repetitive). n nucleu, transcriptul primar nou
sintetizat (ARNm) conine o succesiune de exoni separai de introni
care vor fi eliminai prin procesul de maturare. Moleculele de ARNm
mature trec n citosol, fraciunea solubil a citoplasmei, unde sunt
traduse. Maturarea ARNm confer celulelor eucariote posibilitatea
diversificrii informaiei genetice prin combinarea alternativ a
exonilor, o operaie extrem de important n dezvoltarea
organismelor.
Figura 1.2. Fluxul de informaie genetic la procariote i eucariote
TA 1.6. Care din urmtoarele organisme folosete ADN ca material

genetic?
a) procariotele; b) eucariotele; c) archea; d) numai a i c; e) a, b i c
TA 7. Care dintre urmtoarele caracteristici se regsesc att la bacterii ct

i la organismele din grupul Archea?
a) citosol; b) nucleu; c) ADN; d) numai a i c; e) a, b i c

Sinteza prebiotic a moleculelor organice mici - aminoacizii,

1.1.3. Autoreplicarea glucidele i acizii grai a condus, n conformitate cu diferitele
macromoleculelor teorii privind originea vieii, la un amestec molecular favorabil
asocierii anumitor constitueni pentru a forma polimeri de mari
dimensiuni (macromolecule) (Figura 1.3).
O dat format, un polimer poate influena formarea altor

polimeri, dup exemplul polinucleotidelor care servesc drept matri
i care iniiaz reaciile de polimerizare a noi polinucleotide. Astfel
de mecanisme de matriare complementar necesit prezena de
catalizatori pentru a crete viteza de sintez a copiilor identice.
Moleculele de ARN pot aciona i drept catalizatori (ribozime) iar
aceast dualitate pare s fi furnizat chiar baza evoluiei primelor
sisteme vii.
ARN posed dou proprieti fundamentale ale structurilor

vii: una de purttoare a informaiei genetice, analog genotipului,
dependent de structura nucleotidic i, cealalt, analog
fenotipului, definit printr-o structura tridimensional care posed
proprieti catalitice. Se pare c moleculele de ARN sunt mai bine
adaptate stocrii i replicrii informaiei genetice dect catalizei.
Pentru a a-i asuma funcia catalitic, polipeptidele (proteinele)
compuse dintr-un numr important de aminoacizi diferii, adopt
diferite conformaii tridimensionale. Structura proteinelor
favorizeaz un mare numr de funcii catalitice dintre care unele au
contribuit la creterea vitezei de replicare a ARN.
Se pare c ADN a aprut i s-a manifestat efectiv ca purttor al

informaiei genetice ntr-o etap ulterioar apariiei i funcionrii
ARN. Spre deosebire de ARN, acesta exist sub forma unei duble
elice format din dou molecule polinucleotidice complementare.
ADN i ARN sunt polinucleotide formate din uniti
mononucleotidice care au n constituia lor grupri fosfat, structuri
glucidice cu cinci atomi de carbon (riboza n ARN i deoxiriboza n
ADN), i patru baze azotate. Trei baze azotate sunt comune
ambilor acizi nucleici (adenina A, guanina G i citozina C) iar cea
de a patra este diferit: timina (T) n ADN i uracilul (U) n ARN.
Structura dublu-catenar a ADN uureaz replicarea i autorizeaz
procesul de reparare (catena intact servind de matri model).
Faptul c deoxiriboza este lipsit de o grupare hidroxil face
molecula de ADN mai stabil chimic. Putem concluziona c aceste
considerente au fcut ca n timpul evoluiei ADN s detroneze ARN
n ceea ce privete funcia de depozitare a informaiei genetice.

Figura 1.3. Simularea atmosferei primitive care a dus la apariia vieii pe Pmnt
(prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition,
Benjamin Cummings, 6 Edition, 2002)
th
Cadrul 1.3. Concepte asupra viului

Cum definim viaa?
9 Celula este unitatea structural a viului;
9 Elementele care compun viul: carbonul, azotul, oxigenul, hidrogenul i

multe alte elemente constituie materie lipsit de via;
9 Celulele prezint grade diferite de complexitate i au acelai plan de

organizare;
9 Viaa se bazeaz pe schimburi de energie;
9 Toate celulele pot s provin dintr-o singur celul prin diviziune sau
prin fuziune;
9 Toate celulele cresc, mbtrnesc i mor
9 Exist o mare diversitate de celule vii i de organisme unicelulare i

pluricelulare

1.1.4. Un spaiu Atta timp ct moleculele sunt libere s difuzeze n mediul

limitat de o nconjurtor, replicarea materialului genetic nu se poate realiza
membran eficient. Izolarea moleculelor favorizeaz interaciunile i
accelereaz capacitatea de reacie aflat la originea celulei
primitive. Moleculele amfifile compuse dintr-o regiune hidrofob
(insolubil n ap) i din una hidrofil (solubil n ap) se agreg
instantaneu n mediu apos pentru a forma bistrate lipidice. Acestea
formeaz vezicule nchise care izoleaz de mediul exterior un
spaiu interior apos. Moleculele i ionii coninui ntr-un spaiu astfel
definit difer ca natur i concentraie de cele din mediul exterior.
Elaborarea celulei primitive sau celulei ancestrale, strmo

comun al tuturor celulelor vii actuale ar fi putut fi rezultatul evoluiei
de la o accesibilitate total a macromoleculelor la compuii din
mediu i izolarea lor ermetic (cadrele 1.4 i 1.5). Pentru ca ntre
cele dou spaii astfel definite s se stabileasc schimburi a fost
necesar ca anumite secvene peptidice hidrofobe incluse n
membran s asigure rolul de transportori. Astfel, membranele
celulei ancestrale ar putea fi rezultatul aglomerrii fosfolipidelor i
peptidelor membranare. Problema este care dintre fosfolipide sau
peptide s-au regsit cu o probabilitate mai mare la originea unui
astfel de nivel de organizare.
Figura 1.4. Viaa a nceput de la un strmo comun Ultimul Strmo Universal

Comun (USUC), acum 3,5 miliarde de ani.

1.2. Celulele Unul dintre criteriile care stau la baza clasificrii

procariote organismelor este absena sau prezena nucleului individualizat.
Celulele procariote lipsite de un nucleu veritabil, includ eubacteriile
(prezente n sol, ap i ca organisme comensale cu celelalte
Archeobacterii organisme vii) i archeobacteriile (din anumite nie ecologice). De
cealalt parte se afl celulele eucariote (protiste, ciuperci, plante i
Eubacterii animale) care posed o membran nuclear care separ materialul
genetic de restul celulei (Figura 1.4). Cromozomul unic al celulelor
procariote este format dintr-o molecul de ADN dublu catenar
circular care conine cteva milioane de perechi de baze.
1.2.1. Organizarea Bacteriile, organismele procariote cele mai simple ntlnite n

celulei procariote toate mediile naturale, prezint caracteristici comune. Adesea, un
perete celular, format din peptidoglicani, nconjoar membrana
plasmatic i confer celulei form rigid. De asemenea, este
prezent o membran extern care posed un numr variabil de
flageli i pili (Figura 1.5).
Figura 1.5. Structura celulei procariote (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J. B.

th
Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6 Edition, 2002)
Bacteriile au un compartiment citoplasmatic unic care

conine un nucleoid format dintr-o molecul simpl circular de
ADN asociat cu ARN i proteine. Pe lng ADN, prezent n
nucleoid, citoplasma majoritii bacteriilor conine mici molecule
circulare de ADN, numite plasmide. Cel mai adesea acestea
confer celulei rezisten la antibiotice i la alte toxine. n condiii
favorabile, bacteriile se multiplic rapid prin diviziune (scisiparitate).
Capacitatea lor de adaptare la condiiile de mediu i de diviziune
rapid fac ca aceste celule s constituie suporturi excelente pentru
numeroase analize biochimice i de biologie molecular, in vitro.

Cele dou grupuri de bacterii (archeobacterii i eubacterii) se

1.2.2. Evoluia ramific n mai multe subgrupe n funcie de sursa de energie
metabolismului utilizat pentru a asigura sinteza componentelor celulare. Anumite
bacterii, autotrofe, se dezvolt n prezen bioxidului de carbon ca
bacterian unic surs de carbon, n timp ce altele, heterotrofe, necesit
compui organici pentru cretere i reproducere. n funcie de
sursele de energie i de carbon bacteriile se pot clasifica n:
- chimiotrofe care obin energie din compui minerali. n

aceast categorie se regsesc bacteriile chimiolitotrofe care
formeaz un subgrup restrns care conine microorganisme care
oxideaz hidrogenul (Hydrogenomonas), nitriii (Nitrobacter),
compuii redui ai sulfului (Thiobacillus), amoniacul (Nitrosomonas)
i bacteriile chimiorganotrofe (entrobacterii, etc) care i obin
energia din compui organici;
- fototrofe care folosesc lumina solar ca prim surs de

energie i care se dezvolt fie ntr-un mediu pur mineral (bacterii
fotolitrotrofe: Thiorhodaceae bacterie sulfuroas roie,
Chlorobacteriaceae, bacterie sulfuroas verde), fie n prezen de
compui organici;
- fotoorganotrofe de tipul Athiorhodaceae, (bacterie roie

nesulfuroas).
TA 1.8. Care dintre urmtoarele afirmaii face o distincie corect ntre

celulele procariote i eucariote ce poate fi atribuit absenei citoscheletului la
procariote?
a) organitele compartimentate sunt prezente numai n celulele eucariote;
b) la procariote nu se observ o deplasare citoplasmatic;
c) numai celulele eucariote sunt capabile de micare
d) de obicei celulele procariote au un diametru de 10 m sau mai mic;
e) numai celulele eucariote concentreaz materialul genetic ntr-o regiune
separat de restul celulei;

Cadrul 1.4 Evoluia Lumii Vii (a)
Toate organismele vii aparin uneia din cele trei categorii:

eubacteriile, archea i eucariotele.
Nimeni nu tie exact cum a debutat viaa, dar strmoul comun al
tuturor organismelor vii a existat pe Pmnt nc de acum aproximativ
patru miliarde de ani, la puin timp dup formarea planetei care este
estimat la 4, 6 miliarde de ani.
La origine primele celule, aprute probabil acum mai bine de 3,5

miliarde de ani, foloseau pentru cretere moleculele prezente n mediul lor
care se presupune c era reprezentat de o sup prebiotic. Aceste
microorganisme se consider a sta la originea chimiorganotrofelor. Aceste
heterotrofe primitive au achiziionat progresiv capacitatea de a elibera
energia din anumii compui preluai din mediu i de a o folosi pentru
sinteza unor macromolecule indispensabile pentru supravieuire i
multiplicare. Caracteristicile biochimice comune ale ntregii descendene
celulare indic c microorganismele primitive posedau aproximativ o mie
de gene care ulterior s-au diversificat prin duplicare i mutaii aleatoare ale
secvenelor. Dac anumite gene au oferit anumite avantaje selective, ele au
fost conservate la generaiile urmtoare. Aceste organisme primitive, care
au creat ci metabolice, au devenit din ce n ce mai independente de
moleculele din mediul nconjurtor. Evoluia cilor metabolice s-a realizat
prin adugarea progresiv de noi reacii enzimatice.
De asemenea, astfel de mecanisme ar putea explica existena unor

mari familii de proteine nrudite dar specializate cum sunt pompele i
transportorii care se regsesc la toate organismele vii. Iniial, datorit lipsei
oxigenului de pe suprafaa Pmntului, cile metabolice cele mai vechi ar fi
trebuit s fie anaerobe. De altfel, glicoliza (metabolizarea glucozei n
absena oxigenului) ocup un loc central ntre cile metabolice. Aceasta
este prezent la majoritatea celulelor i conduce la formarea
adenozintrifosfat (ATP) care servete ca surs de energie direct utilizabil.
Multe dintre eubacterii i archeobacterii (archea) triesc la

temperaturi ridicate i folosesc ca surs de energie hidrogenul. Strmoul
comun, de care s-au desprit relativ repede putea avea aceleai
caracteristici. O perioada scurt de timp archea au fcut parte din aceeai
linie filogenetic cu eucariotele, fapt care se reflect n mecanismele
similare de transcripie a ADN i ARN cu toate c restul caracteristicilor le
apropie mai mult de bacterii. nc de la nceput microorganismele au
dominat pmntul prin numrul, varietatea speciilor i habitatele lor. i n
prezent eubacteriile i archea rmn organismele cele mai abundente din
ap, aer i uscat.

Cadrul 1. 5: Evoluia Lumii Vii (b)
Despre eucariotele primitive se cunosc puine lucruri n afar de

faptul c genomul lor putea fi la fel de strvechi ca i cel al eubacteriilor i
al archea. Organismul eucariot contemporan cel mai primitiv este o amib
numit Pelomyxa palustris care nu posed mitocondrii. n cursul evoluiei
eucariotele cele mai numeroase i mai heterogene au fost protistele
unicelulare microscopice. Respiraia la primele eucariote a fost introdus
de bacterii simbiotice asemntoare cu proteobacteriile. Ulterior cea mai
mare parte a genelor bacteriene au migrat ctre nucleul gazdei , cu excepia
unui numr mic de gene coninute n organitele numite mitocondrii.
Eubacteriile stau la originea fotosintezei. Dezvoltarea pigmenilor

capabili s foloseasc energia care provenea de la lumina solar pentru a
fixa bioxidul de carbon sau azotul i de a elabora molecule organice
complexe a reprezentat unul dintre evenimentele fundamentale ale
evoluiei. Acest eveniment s-a produs ntr-un stadiu destul de tardiv al
evoluiei cnd simbioi de tipul cianobacteriilor au introdus fotosinteza la
algele roii, i cea mai mare parte a genelor bacteriene au migrat ctre
nucleul gazdei.
Organizarea pluricelular a aprut dup aproximativ un miliard de

ani. Analiza evoluiei ribozomilor indic c animalele, plantele i ciupercile
provin din organisme asemntoare algelor care s-au dezvoltat acum
aproximativ 670 1 200 milioane de ani. Anumite fosile care au fost datate
ca trind acum 570 milioane de ani prezint similitudini frapante cu
embrionii animalelor contemporane, ceea ce sugereaz c primele animale
multicelulare erau de mrime mic comparabile cu larvele i embrionii
nevertebratelor contemporane. Divergena principalelor ramuri filogenetice
ale animalelor a dus la dezvoltarea de animale macroscopice. n acest mod
s+ar putea explica discordana ntre datele moleculare i cele obinute din
analiza fosilelor care indic o divergen mult mai recent a animalelor.
TA 1.9. Care sunt argumentele care susin ipoteza c toate celulele vii au
evoluat dintr-o celul ancestral strmo. nchipuii-v primele zile ale evoluiei
vieii pe pmnt. Credei c aceast celul a fost singura care s-a format?
TA 1.10. Formarea moleculelor complexe n condiii prebiotice a avut loc

deoarece:
a) ele se formeaz spontan i n prezent;
b) aceste molecule sunt mai stabile dect molecule simple
c) exista mult energie disponibil pentru formarea acestor molecule;
d) ele au fost formate de ctre organisme care folosind energia solar

Cadrul 1.6. Escherichia coli, bacteria cea mai utilizat n

laborator
Escherichia coli, bacterie n form de baton (2 m lungime i 1 m
diametru), comensal cu numeroase mamifere (prezent n tractul intestinal al
acestora) rmne celula cea mai folosit n laboratoare. Ea face parte din
categoria bacteriilor Gram negative care posed un perete celular ce nconjoar
membrana plasmatic i o membran extern. La nivelul membranei externe,
exist filamente numite pili care servesc la aderarea bacteriei la suprafaa altor
celule. Printre acetia pilul sexual s-a dovedit a fi indispensabil pentru conjugare,
faz n timpul creia o parte din materialul genetic (sub form de ADN
monocatenar) se transmite de la o bacterie dotat cu un factor de fertilitate
(bacterie mascul F+) la o bacterie lipsit de acest factor (bacterie femel F-).
Celula care a primit noul patrimoniu l folosete pentru creterea capacitilor de
reproducere. Datorat schimbrii de material genetic se poate discuta de
sexualitate bacterian.
Citoplasma E. coli conine de la 1 la 4 molecule de ADN circular i 15 000
la 30 000 ribozomi. n condiii ideale de cultur, bacteria se multiplic rapid
realizndu-se o diviziune la fiecare 20 de minute.
Datorit necesitilor sale nutriionale simple (ap, sruri minerale, i o
surs de energie, de exemplu glucoz) este o bacterie uor de cultivat. n
numeroase laboratoare i n bncile de celule sunt disponibile multe tulpini de E.
coli cu caracteristici genetice diverse. E. coli reprezint un model celular foarte
utilizat n cercetrile de biochimie i biologie molecular. Cunotinele acumulate
asupra genomului su haploid i metabolismului fac ca aceast bacterie s
reprezinte una dintre .principalele unelte celulare pentru ingineria genetic.
n mediul bogat n oxigen pe care nu l puteau utiliza,

1.2.3. De la anumite organisme anaerobe au dezvoltat o strategie de
procariote la supravieuire asociindu-se cu organismele aerobe i trind astfel n
eucariote: Teoria simbioz. Pentru moment teoria endosimbiotic constituie explicaia
endosimbiotic cea mai plauzibil privind originea celulelor eucariote. Mitocondriile
i cloroplastele, organite care asigur sinteza ATP n celulele
eucariote, deriv dintr-un proces de endosimbioz care a implicat
bacteriile aerobe i cianobacteriile (vezi cadrele 1.4 i 1.5).
La eucariotele moderne acestea provin din mitocondriile i

cloroplastele strvechi i se divid prin sciziparitate asemenea
bacteriilor. Ele posed propriul lor ADN i toat mainria proprie
sintezei proteinelor pe care le codific. Exist o omologie
important de secven nucleotidic ntre ADN mitocondrial i cel al
anumitor bacterii aerobe ct i ntre ADN din cloroplaste i
cianobacterii.

Teoria endosimbiotic este susinut i de similitudinile

existente ntre ribozomii acestor organite i cei ai bacteriilor dar i
prin asemnrile structurale ntre cianobacterii i cloroplaste
(mrime, structurarea clorofilei n lamele). Deoarece cantitatea de
ADN a diminuat enorm i cea mai mare parte a proteinelor sunt
codificate n prezent de genomul nuclear i apoi importate n
organite, acestea au devenit dependente de celulele gazd
(Tabelul din Figura 1.6).
Caracteristici Celule procariote Celule eucariote

Organizare Unicelulare Uni i multicelulare;
Bacterii i Archea Celule difereniate care
formeaz diverse esuturi
protiste, ciuperci, plante,
animale
Mrime 1-10 m 5-100 m
Metabolism Aerob i anaerob Principal aerobe, oxidare
Oxidare dependent restrns la
de enzime din compartimentul
membrana plasmatic mitocondrial
ADN ADN circular n Complex ADN-histone,
citoplasm; organizare n cromozomi n
Absena histonelor nucleu delimitat de ctre
anvelopa nuclear
ARN i Sintez n acelai Sintez i maturare de
proteine compartiment ARN n nucleu; proteine
sintetizate n citoplasm
Nutriie Absorbie i Absorbie, ingestie i
fotosintez fotosintez (vegetale)
(cianobacterii)
Diviziune Sciziune Mitoz cu elaborarea unui
celular fus mitotic
Citoschelet Absen Microtubuli, filamente de
actin, etc
Organite Puin reprezentate Organite delimitate de ctre
sau absente membrane: aparat Golgi,
reticulum endoplasmic,
mitocondrii, cloroplaste
(vegetale)
Micri Absen Endocitoz, exocitoz
intracelulare
Figura 1.6. Comparaie ntre principalele caracteristici ale procariotelor i
eucariotelor
Celulele eucariote sunt nconjurate de o membran

1.3. Celulele
plasmatic. Alte membrane intracelulare delimiteaz
eucariote i compartimentele din interiorul celulei, fiecare compartiment fiind
diferenierea caracterizat prin structur, compoziie biochimic i funcii precise
celular (Figura 1.7).

1.3.1. Celulele Anvelopa nuclear delimiteaz dou compartimente majore:

eucariote sunt nucleoplasma i citoplasma. Mrimea i complexitatea ADN din
compartimentate celulele eucariote au necesitat mecanisme elaborate pentru plierea
sa sub o form compact cu ajutorul histonelor, proteine bazice
care interacioneaz cu ADN. Complexul fibros format, cromatina,
se poate condensa i rsuci pentru a da natere structurilor numite
cromozomi care conin totalitatea genelor nucleare. La eucariote
toat mainria necesar expresiei genelor se gsete n nucleu, n
timp ce la procariote, att elementele responsabile de transcripie
ct i de translaie sunt prezente n citoplasm.
Cea mai mare parte a celulelor eucariote au un reticulum

endoplasmatic (situs de sintez a proteinelor i fosfolipidelor), un
aparat Golgi (organit care adug structuri glucidice proteinelor
membranare, lizozomale i secretoare), lizozomi (un compartiment
care conine enzime de digestie intracelular), peroxizomi
(compartimente care conin enzimele implicate n reacii oxidative)
i mitocondrii (structuri care convertesc n ATP energia coninut n
hran). n tabelul din figura 1.8 sunt prezentai principalii
constitueni celulari i cteva din funciile acestora.
Figura 1.7. Structura celulei animale (prelucrat dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all.
4th edition, 2000)

Element celular Descriere

Membrana Bistrat lipidic de 7 nm grosime care conine proteine interne i periferice.
Plasmatic Membrana care ncercuiete celula i conine canale i pompe pentru
trecerea ionilor i a nutrienilor, receptori pentru factorii de cretere,
hormonii i neurotransmitorii (n nervi i muchi). Aceste mecanisme
moleculare permit transducia stimulilor n semnale moleculare
Jonciuni aderente Legturi punctiforme n centur ntre celulele asociate n filamente de actin
fixate pe peretele citoplasmatic
Desmozomi Legturi punctiforme ntre celulele asociate n filamente intermediare pe
peretele citoplasmatic
Jonciuni Zon localizat la nivelul regiunii de comunicare dintre dou celule unde
comunicante membranele plasmatice se reunesc pentru a forma canale intercelulare
minuscule care permit trecerea moleculelor mici dintr-o celul n alta
Jonciuni nguste Jonciuni fine care exist n spaiul dintre dou celule epiteliale
Filamente de actin microfilamente cu o mrime de 8 nm care constituie o reea elastic
vscoas n citoplasm i servesc drept ghid pentru deplasrile generate
de miozin
Filamente Filamente cu o mrime de 10 nm, constituite din proteine de tip keratin
intermediare care se comport ca tendoane rigide n interiorul citoplasmei
Microtubuli Polimeri tubulari formai din tubulin cu un diametru 25 nm, care reprezint
principalul constituent al cililor, flagelilor i fusului mitotic. Microtubulii
constituie ghidul pentru deplasarea organitelor generat de dinein i
kinezin
Centrioli Cilindru mic constituit din nou triplete de microtubuli, situai n centrul
celulei (centrozom) i la baza cililor i flagelilor; elementele
pericentrozomale permit nuclearea i fixarea microtubulilor
Microviloziti Extensii cilindrice subiri ale membranei plasmatice ranforsate n partea
intern cu fascicule de filamente de actin
Cili/Flageli Organite mobile care se proiecteaz n afara celulei i care sunt nconjurate
de membrana periplasmic; micrile lor sunt acionate de ctre o axonem
format din nou dublete de microtubuli, doi microtubuli distinci i o enzim
(dineina) care este implicat n transducia de energie
Particule de glicogen Form de stocare a polizaharidelor
Ribozomi Particule constituite din ARN i proteine care sunt implicate n sinteza
proteic
Reticul endoplasmatic Saci membranari aplatizai situai n mediul intracelular la care se asociaz
rugos ribozomii responsabili pentru sinteza proteinelor secretate i a proteinelor
membranare care se integreaz n membran
Reticul endoplasmatic Saci membranari plai situai n spaiul intracelular lipsit de ribozomi, care
neted asigur sinteza lipidelor, metabolismul medicamentelor i sechestrarea
calciului
Aparatul Golgi Grup de saci membranari aplatizai cu vezicule care asigur mpachetarea
proteinelor secretate i particip la glicozilarea proteinelor
Anvelopa nuclear Membran dubl legat de reticulul endoplasmatic care limiteaz nucleul
Pori nucleari Canale de talie mare n membrana nuclear, cu dispozitive de control, care
regleaz trecerea proteinelor i ARN ctre interiorul i exteriorul nucleului
Eucromatina Form activ i dispersat a cromatinei n interfaz
Heterocromatina Cromatin condensat inactiv
Nucleol Situs intranuclear al sintezei i maturrii ARN ribozomal; asamblarea
ribozomilor
Lizozomi Structur sub form de saci delimitat de o membran impermeabil care
conine enzime hidrolitice
Peroxizomi Structur sub form de saci delimitat de membran; conin catalaz i
diferite oxidaze
Mitocondrie Organit delimitat de o membran extern neted i de o membran intern
crenelat care formeaz cripte; conine enzime care asigur oxidarea
acizilor grai i fosforilarea oxidativ a ADP
Figura 1.8. Inventarul constituenilor celulari la eucariote

Compartimentarea confer mai multe avantaje celulelor

eucariote. Membranele constituie o barier care permite fiecrui
organit s pstreze un mediu ionic i enzimatic particular. Fiecare
dintre aceste medii favorizeaz subtipuri de reacii biochimice
vitale. Urmtoarele exemple ilustreaz aceast noiune:
- Segregarea enzimelor de digestie din structura lizozomului
previn distrugerea celorlali constitueni celulari;
- Sinteza de ATP este condiionat prin caracterul

impermeabil al membranei mitocondriale; reaciile care elibereaz
energie antreneaz apariia unui gradient de protoni de o parte i
de alta a membranei, pe care enzimele membranare l utilizeaz
pentru a genera ATP;
- Membrana nuclear delimiteaz un compartiment n care

sinteza i maturarea moleculelor de ARN transcrise de pe structura
genelor se poate realiza nainte ca moleculele de ARNm matur s
treac n citoplasm unde dirijeaz sinteza proteic;
- Peretele celular este propriu celulei vegetale i este

constituit dintr-o mbinare de fibre. Grosimea i rigiditatea sa sunt
variabile dar ntotdeauna peretele este mult mai gros ca membrana
plasmatic. Peretele celular compus din celuloz i hemiceluloz
constituie limita celulei vegetale (Figura 1.9).
Figura 1. 9. Structura celulei vegetale (prelucrat dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all.
4th edition, 2000)
La plante fotosinteza se realizeaz n cloroplaste locul

producerii substanelor energetice care poate fi comparat cu o
central solar). Cloroplastul este i el limitat de dou membrane
iar n stroma conine ADN (Figura 1.9).

TA 1.11. Dovezile c organismele au un strmo comun sunt:

a) acelai cod genetic care se regsete peste tot; b) toate organismele
folosesc aminoacizi cu aceeai chiralitate; c) arborii filogenetici care se bazeaz
pe secvene nucleotidice au un singur punct de origine; d) toate rspunsurile
TA 1.12. Care dintre urmtoarele cuvinte desemneaz un exemplu de
organit?
a) amiba; b) muchiul; c) stomacul; d) sistemul digestiv; e) cloroplastul
TA 1.13. Care din urmtoarele structuri nu este prezent n celulele
procariote?
a) ADN; b) peretele celular; c) membrana plasmatic; d) ribozomii; e)
reticulul endoplasmatic
TA 1.14. Care dintre urmtoarele structuri nu este parte a sistemului
endomembranar?
a) mitocondria; b) aparatul Golgi; c) reticulul endoplasmatic rugos; d)
lizozomii; e) reticulul endoplasmatic neted
TA 1.15. Cele patru clase de compui cu carbon care se gsesc n toate
organismele vii sunt:
a) glucidele, lipidele, aminoacizii i zaharurile; b) lipidele, aminoacizii,
membranele i nucleotidele; c) proteinele, lipidele, aminoacizii i nucleotidele;
d) aminoacizii, glucidele, nucleotidele i acizii grai
Celulele eucariote au un citoschelet. Trei tipuri de polimeri

proteici: filamentele de actin, microtubulii i filamentele
intermediare, formeaz o matrice citoplasmatic vscoas i
elastic care furnizeaz celulei o structur cu o anumit rigiditate.
Printre altele, filamentele de actin i microtubulii servesc de ghid
pentru mai multe proteine motoare care asigur mobilitatea ntregii
celule i a organitelor n interiorul citoplasmei.
Citoscheletul format din filamente de actin i din microtubuli
este indispensabil supravieuirii, chiar i la ciuperci i la plante care
posed un perete de celuloz rigid care constituie o structur rigid
care mpiedic micarea ntregii celule. n ciuda acestei
constrngeri determinat de peretele celular, aceste celule sunt
dependente de existena citoscheletului i a structurilor motoare
care i sunt asociate pentru a permite migrarea organitelor n
interiorul citoplasmei i segregarea cromozomului.
TA 1.16. De ce este avantajos pentru celulele eucariote s dezvolte

sisteme de membrane interne care s le permit importul substanelor din
exterior?
TA 1.17. Care dintre urmtoarele organite nu sunt strns asociate cu
sistemul endomembranar?
a) anvelopa nuclear; b) cloroplastul; c) aparatul Golgi (AG); d)
membrana plasmatic; e) reticulul endoplasmatic (ER)

TA 1.18. Care dintre urmtoarele organite este comun pentru celulele

plantelor i animalelor?
a) cloroplastele; b) peretele celulozic; c) tonoplastul; d) mitocondria; e)
centriolii
TA 1.19. Care dintre urmtoarele perechi structur-funcie sunt greit

combinate?
a) nucleol; producere de ribozomi; b) lizozomi; digestie intracelular; c)
ribozomi; sintez proteic; d) Golgi; secreie de produi celulari; e) microtubuli;
contracie muscular
Formarea unui organism pluricelular este rezultatul unei

1.3.2. Organismele organizri sociale n care celulele sunt corelate ntre ele (Figura
pluricelulare: 1.10).
difereniere celular
i reproducere
Figura 1.10. Complexitatea organismului uman (prelucrat dup Molecular Cell Biology,
Lodish, et all. 4th edition, 2000)

Eucariotele au dezvoltat un anumit numr de mecanisme

pentru a asigura aceast funcie. De exemplu, n urma diviziunii
celulare, celulele fiice rmn legate ntre ele prin puni
citoplasmatice. La plantele superioare, pe lng punile
citoplasmatice (plasmodesme), celulele sunt meninute ntr-o
structur rigid de alveole constituite din celuloz (peretele celular),
secretat de ctre celule. La animale, aderenele dintre membranele
plasmatice i matriele extracelulare particip la meninerea
organizrii pluricelulare. n general, asocierea celulelor conduce la
specializarea acestora pentru diferite funcii (proces de difereniere)
i la cooperarea lor pentru a genera organisme superior organizate.
n organismele pluricelulare, diferenierea celulelor este

nsoit de o mare diversitate de mrime i form, corelate cu
funciile asigurate de celule (celule alungite: neuroni; celule
disociate biconcave: hematiile). Astfel, celulele regrupate ntr-un
organ adopt morfologii variate (pavimentoase, cilindrice, etc.)
adesea nsoite de diferenieri apicale (microviloziti: celule
epiteliale intestinale, etc.). n esutul conjunctiv, celulele sunt
dispersate ntr-o matri extracelular i au form de stea sau sunt
fuziforme (condrocite, fibroblaste, etc.).
Celulele epiteliale, sanguine sau germinale mascule sunt

rennoite pornind de la celule stem adulte (sue) pe toat perioada
vieii unui individ. Spre deosebire de acestea, celulele nalt
difereniate cum sunt neuronii i celulele musculare au pierdut
capacitatea de a se divide la fel de frecvent. Exist i cazuri
intermediare, ca de exemplu celulele hepatice care nu se divid
dect dac ficatul a pierdut din masa sa normal (ablaie parial,
hepatit).
n general, la eucariotele unicelulare, mitoza constituie un

mod de reproducere simplu, asexuat, care furnizeaz doi indivizi
identici genetic cu celula parental. Mecanismul de reproducere al
animalelor i plantelor superioare este mult mai complex.
Reproducerea sexuat determin intervenia a dou celule
germinale sau gamei masculi i femeli a cror fuziune asigur
dezvoltarea unui descendent genetic diferit de cei doi prini. ntr-un
organism pluricelular se stabilete foarte devreme o disjuncie
fundamental ntre celulele germinale de care depinde propagarea
speciei i celelalte celule somatice care alctuiesc structura
organismului.

TA 1.20. Care dintre organite sunt prioritar implicate n sinteza de acizi

grai, fosfolipide i steroizi?
a) ribozomii; b) lizozomii; c) reticulul endoplasmatic neted; d) mitocondria;
e) veziculele contractile
TA 1.21. Ce nivel ierarhic de organizare reprezint o frunz de arar?

a) esut; b) organ; c) organit; d) populaie; e) organism
TA 1.22 n termenii organizrii ierarhice a vieii, o amib reprezint

___________ca nivel de organizare, n timp ce un cine
reprezint_______________ca nivel de organizare
a) celul i organism .un organism multicelular
b) numai o celulun organism
c) numai un organito celul i un organism multicelular
d) numai un organit.un organism unicelular
TA 1.23. care este diferena dintre un esut i un organ?

a) nivelul de organizare tisular este mult mai larg dect al organului;
b) esutul nu este compus din celule; organul este compus din celule;
c) un esut nu poate exista dac nu este componentul unui organ, n timp
ce un organ poate exista independent de esut;
d) un organ include mai multe esuturi;
e) esuturile nu sunt considerate ca fiind sisteme vii; organele sunt
considerate ca fiind sisteme vii.

1.4. Rspunsuri i comentarii la testele de autoevaluare
TA 1.1: a; TA 1.2: c; TA 1.3: c; TA 1.5: a; TA 1.6: e; TA 1.7: d; TA 1.8: b; TA 1.10: c;

TA 1.11: d; TA 1.12: e; TA 1.13: e; TA 1.14: a; TA 1.15: d; TA 1.17: b; TA 1.18. d; TA 1.19:
e; TA 1.20: c; TA 1.21: b; TA 1.22: a; TA 1.23: d
TA1.4: 6x 1039 bacterii vor avea aceeai greutate cu Pmntul

6x1039 =2t/20 n conformitate cu ecuaia exponenial de cretere
Dac rezolvm ecuaia pentru t, obinem valoarea lui t =132 de generaii. De la
apariia bacteriilor pe pmnt (3,5 miliarde de ani) au trecut deja 5x1014 generaii.
Este clar c masa bacteriilor de pe aceast planet este oricum apropiat de masa
Pmntului. Acesta ilustreaz c creterea exponenial poate s apar numai timp de
cteva generaii (care reprezint perioade de timp nesemnificative n raport cu timpul
evolutiv).
n orice scenariu realist, resursele de hran devin limitate foarte rapid. Acest calcul
simplu, ne demonstreaz c aceast capacitate de diviziune rapid n condiiile unei
cantiti de hran insuficient, reprezint numai unul dintre factorii care asigur
supravieuirea speciei. Hrana, este n general srac (insuficient) i celulele bacteriene
sunt printre cele mai adaptate la schimbrile de mediu.
TA 1.9: Exist o serie de dovezi care s ateste existena unui strmo comun.
Analiza celulelor actuale dovedete un incredibil grad de similitudine la nivelul
componentelor de baz care realizeaz procesele interne din majoritatea tipurilor celulare.
De exemplu, multe ci metabolice sunt conservate de la o celul la alta iar componentele
care intr n structura acizilor nucleici i a proteinelor sunt aceleai n toate celulele vii. De
asemenea este demonstrat existena unor proteine cu rol important n celul care au o
structur aproape similar la procariote i eucariote.
Cu toate c teoretic exist mai multe posibiliti de a sintetiza proteine care pot
realiza aceleai funcii, exist dovezi copleitoare care ne demonstreaz c cele mai
importante structuri i procese au fost inventate numai o singur dat i apoi au devenit
legi sau procese cheie n timpul evoluiei.
Totui, pare cu adevrat neverosimil ca prima celul supravieuitoare s devin
fondatorul primordial al lumii celulare de astzi. Cum evoluia nu este un proces
dirijat/direcionat cu un scop fix/cu o finalitate sau progresie decis anterior, este mult mai
probabil s fi existat un numr mare de experiene celulare (ncercri celulare) nereuite
care s se fi multiplicat (replicat) un anumit timp i apoi s dispar deoarece nu se puteau
adapta la schimbrile de mediu sau nu puteau s supravieuiasc n competiie cu alte
tipuri celulare.
Deci, putem specula c strmoul primordial celular a fost o celul norocoas
care a ajuns ntr-un mediu relativ stabil n care a avut ansa s se multiplice i s
evolueze.
TA 1.16: Dup ce preiau substanele din mediu de tipul particulelor de hran,

celulele eucariote le pot reine pentru hrnirea individual (pentru propriul interes). Spre
deosebire de eucariote, bacteriile nu dein modalitile de capturare a unor cantiti
(buci) de hran; acestea pot exporta substanele utile pentru degradarea hranei
(substanelor hrnitoare) din mediu, dar produii acestei activiti trebuie apoi
mprii/distribuii cu alte celule din aceeai vecintate.

1.5. Lucrare de verificare 1
1.1. Care dintre urmtoarele componente este prezent n celulele procariote?

a) mitocondria; b) ribozomii; c) anvelopa nuclear; d) cloroplastele; e) reticulul
endoplasmatic
1.2. Care dintre urmtoarele afirmaii fac o distincie corect ntre celulele procariote
i eucariote care poate fi atribuit absenei citoscheletului la procariote?
a) organitele compartimentate sunt prezente numai n celulele eucariote; b) la
procariote nu se observ o deplasare citoplasmatic; c) numai celulele eucariote sunt
capabile de micare; d) de obicei celulele procariote au un diametru de 10 m sau mai
mic; e) numai celulele eucariote concentreaz materialul genetic ntr-o regiune separat
de restul celulei;
1.3. Care sunt principalele componente din structura ADN?
a) proteinele; b) glucidele i lipidele; c) 20 de aminoacizi; d) 26 nucleotide; e) patru
nucleotide
1.4. Meninerea unui mediu intern relativ stabil se refer la:
a) taxonomie; b) selecie natural; c) evoluie; d) teorie celular; e) homeostazie
1.5. Care dintre urmtoarele afirmaii furnizeaz dovezi privind existena unui
strmo comun al tuturor organismelor vii?
a) folosirea ubiquitar a catalizei de ctre sistemele vii; b) universalitatea codului
genetic; c) structura nucleului; d) structura cililor; e) structura cloroplastelor
1.6. Care dintre urmtoarele sunt celule procariote?
a) plante; b) fungi; c) bacterii; d) animale; e) att B ct i C
1.7. Care din urmtoarele structuri nu este prezent n celulele procariote?
a) ADN; b) peretele celular; c) membrana plasmatic; d) ribozomii; e) reticulul
endoplasmatic
1.8. Care dintre urmtoarele structuri nu conine ribozomi funcionali?
a) o celul procariot; b) o mitocondrie de la plante; c) un cloroplast; d) o
mitocondrie animal; e) un nucleol
1.9. Care dintre organite sunt n principal implicate n sinteza de acizi grai,
fosfolipide i steroizi?
a) ribozomii; b) lizozomii; c) reticulul endoplasmatic neted; d) mitocondria; e)
veziculele contractile
1.10. Care structur reprezint situsul sintezei proteinelor care pot fi exportate din
celul?
a) reticulul endoplasmatic rugos; b) lizozomii; c) plasmodesma; d) veziculele Golgi;
e) jonciunile nguste
1.11. Crei structuri i vei asimila funcia de secreie care determin, de exemplu,
formarea unui nou perete celular la plante?
a) reticulul endoplasmatic neted; b) lizozomii; c) plasmodesma; d) veziculele Golgi;
e) jonciunile nguste
1.12. Care dintre urmtoarele afirmaii nu sunt mperecheate corect?
a) nucleol - ARN ribozomal; b) nucleu-replicarea ADN; c) lizozomi sintez
proteic; d) membran celular - bistrat lipidic; e) citoschelet microtubuli
1.13. Care dintre urmtoarele componente celulare nu este direct implicat n
sintez sau secreie?
a) ribozomii; b) reticulul endoplasmatic rugos; c) corpii Golgi; d) reticulul
endoplasmatic neted; e) lizozomii
1.14. Din urmtoarele afirmaii care este comun pentru mitocondrii i cloroplaste?
a) se produce ATP; b) este prezent ADN; c) sunt prezeni ribozomi; d) numai b i c
sunt corecte; e) a, b i c sunt corecte
1.15. Organitele care conin ADN sunt:

a) ribozomi; b) mitocondrii; c) cloroplaste; d) numai b i c sunt corecte; e) a, b i c
sunt corecte
1.16. O celul secretoare animal i celulele fotosintetice dintr-o frunz sunt
similare n multe puncte de vedere cu excepia: a) ambele au aparate Golgi; b) ambele au
mitocondrii; c) ambele au proteine de transport pentru transportul activ al ionilor; d) ambele
au cloroplaste; e) ambele au o membran celular
1.17. Care dintre urmtoarele structuri sunt capabile s converteasc energia
luminoas n energie chimic? a) cloroplastele; b) mitocondriile; c) leucoplastele; d)
peroxizomii; e) corpii Golgi
Pentru urmtoarele ntrebri, folosii o liter care s aduc n coresponden

structura cu propriul su tip celular. Alegei categoria cea mai larg. Fiecare rspuns poate
fi folosit odat, de mai multe ori sau niciodat.
A. o trstur pentru toate celulele
B. se gsesc numai n celulele procariote
C. se gsesc numai n celulele eucariote
D. se gsesc numai n celulele plantelor
E. se gsesc numai n celulele animale
1.18. Membrana plasmatic
1.19. Tonoplastul
1.20. Nucleoidul
Referii-v la urmtorii cinci termeni pentru a rspunde la urmtoarele ntrebri.
Alegei cel mai adecvat termen pentru fiecare faz. Fiecare termen poate fi folosit o dat,
de mai multe ori sau niciodat.
A. lizozomii
B. tonoplatii
C. mitocondria
D. aparatul Golgi
E. peroxizomii
1.21. Secret multe polizaharide
1.22. Conine enzime hidrolitice
1.23. Ajut la reciclarea materialului organic celular
1.24. Unul dintre principalii transformatori celulari de energie
1.25. Membranele care nconjoar cloroplastul provin: a) numai de la strmoul
procariot al cloroplastelor; b) de la strmoul procariot (membrana intern) i de la gazda
eucariot (membrana extern); c) de la strmoul procariot (membrana extern) i de la
gazda eucariot (membrana intern); d) numai de la strmoul eucariot.

1.6. Bibliografie unitatea 1
1. Biologie cellulaire, Jean Michel Petit, Abderrahman Maftah, Raymond Julien,

Masson,, Paris 1997, Chapitre 1: Cellules de procaryotes et deucaryotes
2. Cell Biology, Thomas D. Pollard, William C. Earnshaw, Elsevier, 2004
3. http://www.geniebio.ac-aix-marseille.fr/- Ressources Multimdia en Biochimie -
Gnie Biologique; Biotechnologies
4. http://www.bio.umontreal.ca/cours/Bio-1154/evolution.htm, Biologie cellulaire I
5. http://www.boskitos.com/fac/biocel/ Biologie Cellulaire PCEM1
6. http://www.web-books.com/MoBio/Free/Contents.htm, Molecular Biology Web
Book Contents
7. http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/sommaires/bc.htm, Biologie Cellulaire
8. http://schwann.free.fr/biocell03.html, Cours de Biologie Cellulaire
9. Biologie molculaire, Abderrahman Maftah, Raymond Julien, Masson, Paris 1996
10. Biologie Molculaire et Cellulaire, Exercices et corriges, Nathan Universit,
1994
11. Biochimie, gntique, Biologie molculaire, J Etienne, 3eme dition, Masson,
1996
12: Biologie cellulaire, Thomas D. Pollard, William C. Earnshaw, edition francaise,
Elsevier, 2004, Chapitre 1: Principes gnraux de lorganisation de la cellule
13, The Cell a Molecular Approach, Geoffrey M. Cooper, Robert E. Hausman, third
edition, ASM Press, 2004, Chapter 1: An overview of cells and cell research
14. Biologie Cellulaire et Molculaire, concepts et expriences, Gerald Karp, De
Boeck Universit, 1998, Chapitre 1: Introduction ltude de la biologie cellulaire
15. Essential Cell Biology, An introduction to the Molecular Biology of the Cell,
International Student edition, B. Alberts, D. Bray, A. Johnson, J. Lewis, M. Raff, K.
Roberts, P. Walter, Garland Publishing Inc, 2004, Chapter 1: Introduction to Cells.
16. Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Editor, International
Edition, Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 7: A tour of the Cell
17. Test Bank For Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Editor, ,
Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 7: A tour of the Cell
18. Molecular Biology of the Cell, A problems approach, J. Wilson, T. Hunt, Garland
Science, Forth edition, 2002
20. www.ustboniface.mb.ca, Bienvenue la page d'accueil pour le cours Biologie
21. Molecular Cell Biology, Lodish, Berck, Zypousky, Matsudaira, Baltimore,
Darnell, 4th edition, 2000, Freeman and Company, Chapter 1: Life Begins with Cells
22. www.med.univ-angers.fr, Licence de Biologie Cellulaire.
23. web-books.com, Molecular Biology Web Book Contents
24. http://www.cu.lu/labext/rcms/cppe/cellfr.html, CPPE Module S2: Biologie
cellulaire
25. http://www.cbc.umn.edu/~mwd/courses.html, Course/Tutorial on Cell Biology
26. http://web.mit.edu/esgbio/www/7001main.html, Hypertextbook Cell Biology
27. http://www.univ-ag.fr/, Cours de Biologie cellulaire
28. www.emc.maricopa.edu/faculty/farabee/BIOBK/BioBookCHEM1.html, On-Line
Biology Book:
29. http://www.infobiogen.fr/deambulum/index.php, DEAMBULUM - Cours en
biologie : Biologie cellulaire

Tehnici de explorare celular
Unitatea de nvare 2
TEHNICI DE EXPLORARE CELULAR
pag
Cuprins 28
Introducere 29
2. 1. Culturi celulare 31
2.1.1. Mediile de cultur 32
2.1.2. Tipuri de culturi 33
2. 2. Metode de microscopie 35
2.2.1. Microscopia optic 35
2.2.2. Microscopia de fluorescen 37
2.3. Metode de separare a componentelor celulare 40
2.3.1. Centrifugarea 41
2.3.1.1. Principiul centrifugrii 41
2.3.1.2. Variantele centrifugrii 42
2.3.1.3.Centrifugarea n gradient de densitate 44
2.3.2. Cromatografia 45
2.3.2.1. Cromatografie pe hrtie 46
2.3.2.2.Cromatografia pe coloan n faz lichid 47
2.3.2.3. Cromatografia lichid de nalt presiune 48
2.3.2.4 Gel filtrarea 48
2.3.2.5. Cromatografia pe schimbtori de ioni 49
2.3.2.6. Cromatografia de afinitate 49
2.3.2.7. Cromatografia n faz gazoas 50
2.3.3. Electroforeza 50
2.3.3.1. Principiul electroforezei 51
2.3.3.2. SDS-PAGE 51
2.3.3.3. Imunoelectrofocalizare 52
2.3.3.4. Electroforeza bidimensional 52
2.3.3.5. Purificarea i separarea acizilor nucleici 53
2.3.3.6. Aplicaii electroforez 54
2.4. Tehnici de marcare 55
2.4. 1. Marcarea radioactiv 55
2.4.2. Marcarea cu anticorpi 55
2.5. Tehnici ADN recombinat 58
2.5.1. Clonare molecular 58
2.5.2. Transformare de bacterii 60
2.5.3. Enzimele de restricie 62
2.5.4. Construirea unei bnci de ADN genomic 64
2.5.5. Construirea unei bnci de ADNc 65
2.5.6. Reacia PCR 66
28 Proiectul pentru nvmntul Rural

Introducere
n cadrul acestei uniti de studiu v vei putea familiariza cu principalele

tehnici folosite n explorarea celulelor. Acestea vizeaz: realizarea de culturi
celulare primare sau cultivarea de linii celulare cu anumite caracteristici i analiza
celulelor si subcomponentelor lor prin metode microscopice. Un loc important l
ocup tehnicile de separare i purificare a componentelor celulare n scopul
caracterizrii ct mai exacte a acestora. Sunt trecute n revist principalele tehnici
de marcare i nu n ultimul rnd sunt prezentate principiile i aplicaiile unora
dintre cele mai moderne tehnici de obinere a ADN recombinat. Materialul este
presrat cu teste de autoevaluare pe care v recomandm s le rezolvai pe
msur ce parcurgei materialul teoretic. Acestea au rolul de a v
confirma/infirma nelegerea noiunilor prezentate i reprezint o modalitate util
de autoverificare a cunotinelor indispensabil rezolvrii testelor din lucrarea de
verificare nr. 2. La finalul capitolului sunt prezentate rspunsurile la testele de
autoevaluare pe parcurs i lucrarea de verificare pe care la finalul parcurgerii
unitii o vei trimite tutorelui.
Obiective generale
Utilizarea conceptelor caracteristice metodelor de investigare
celular pentru nelegerea complexitii i diversitii lumii vii;
nelegerea investigrii fenomenelor i proceselor caracteristice lumii

vii la nivel celular.
Obiective specifice
La terminarea studiului acestei uniti trebuie s fii capabili s:
9 nelegei diferena ntre culturi celulare primare i linii;
9 prezentai succint i clar principalele tehnici microscopice, principiile

i aplicaiile acestora;
9 facei diferena ntre diferitele tehnici de separare a componentelor

celulare;
9 definii principiile principalelor tehnici de separare i s putei

enumera unele dintre aplicaiile lor;
9 precizai care sunt principalele tehnici folosite n tehnologia ADN

recombinat i s recunoatei aplicaiile acestora,


Unitatea conine n structura sa 31 teste de autoevaluare
distribuite astfel nct s asigure o fixare eficient a noiunilor
prezentate.
Unele dintre testele de autoevaluare sunt ntrebri urmate
de trei sau patru sau cinci rspunsuri posibile, fiecare indicat cu o
liter n dreptul lui. Pentru a rspunde la aceste ntrebri, trebuie s
ncercuii litera din dreptul rspunsului pe care l considerai ca fiind
corect.
Alte teste v vor cere s scriei rspunsuri scurte sau s
textului v recomandm s reluai parcurgerea ntregului material si
apoi s revenii asupra rezolvrii testelor. Unele dintre teste sunt
simple i direct corelate cu textul parcurs, rspunsul lor fiind evident
n timp ce altele necesit o bun integrare a cunotinelor obinute i
parcurgerea ntregii uniti. De asemenea, enunurile testelor au
rolul lor n fixarea cunotinelor i n formarea unei viziuni de
ansamblu asupra informaiei prezentate.

Gradul de dobndire a cunotinelor privind conceptele
prezentate n aceast unitate de nvare va fi cuantificat pe baza
notei obinute la Lucrarea de verificare Nr.2 care conine 20 de
probleme. Testele din lucrarea final sunt de acelai tip cu testele
de autoevaluarea din unitatea 2.
verificare 2 va fi realizat de tutore la termene stabilite de comun
organizatoare. Evaluarea pe parcurs are o pondere de 50% din nota
final. Lucrarea de verificare 2 va reprezenta 4% din verificarea pe
parcurs. Cele 20 de ntrebri vor fi echivalente i vor fi notate cu 2
puncte fiecare, astfel nct pentru o lucrare corect s putei
acumula 40 de puncte.
Materialul prezentat conine patru cadre suplimentare i 23
de figuri care prezint informaii menite s ntregeasc sau s
clarifice noiunile prezentate. Acestea nu sunt opionale deoarece
v vor ajuta la lmurirea noiunilor teoretice prezentate. Un rezultat
bun la lucrarea de verificare este clar condiionat de parcurgerea cu
responsabilitate a testelor de autoevaluare, a cadrelor i de
nelegerea figurilor.

2.1. Culturi n ultimele decenii au fost posibile descoperiri fundamentale

celulare n domeniul biologiei organismelor graie tehnicilor de culturi
celulare att procariote ct i eucariote.
Dac bacteriile i drojdiile cresc rapid pe medii simple,
celulele provenind de la eucariote superioare (de exemplu, celulele
de mamifere) n cultur nu i conserv capacitatea de a se
multiplica dect dac mediul de cultur aduce un anumit aport de
elemente nutritive i factori de cretere (Cadrul 2.1).
Culturile de celule (sau de esuturi) i au originile n secolul
19 cnd oamenii au nceput s examineze n detaliu esuturile i
organele organismelor n recipiente de sticl. Dei, termenul in vitro
nseamn literal n sticl, n prezent majoritatea culturilor celulare
se realizeaz n sau pe plastic i pe alte tipuri de materiale (Cadrul
2.2).
Prima ncercare, ncununat de succes, de a cultiva celule
izolate din organismul vertebratelor a fost realizat n anul 1907 de
ctre Ross Harrison, care era interesat n diferenierea neuronilor.
Alexis Carrel, 1912, a cultivat celule n diferite condiii i a constatat
c n condiiile n care mediul este corespunztor i schimbat cu
regularitate, celulele pot crete n cultur o perioad ndelungat de
timp.
n prezent, culturile celulare i propun s reproduc in vitro
condiiile existente in vivo pentru a permite celulelor normale (ne-
tumorale) s creasc n cultur. Sunt cultivate n laborator celule
dintr-un numr mare de organisme i esuturi din diferite surse
pentru scopuri foarte diferite:
- studiul propriu-zis al sistemelor celulare (proliferare, condiii
de cretere, evoluia ciclului celular, controlul creterii celulelor
tumorale i modularea expresiei genice);
- n domeniul biologiei dezvoltrii pentru a realiza studii de
dezvoltare i difereniere;
- obinerea de plante i animale transgenice;
- studii de citogenetic i genetic molecular;
- studii de citotoxicitate pentru diferite medicamente i
substane xenobiotice (ageni poluani);
Dup separarea celulelor din esuturi, exist 2 modaliti de
baz prin care acestea pot fi cultivate:
- ntr-o cultur de mas, cnd n recipientul de cultur este
adugat un numr relativ mare de celule, care colonizeaz fundul
recipientului i formeaz un strat de celule relativ uniform genernd
un monostrat.
- ntr-o cultur clonal, cnd un numr relativ mic de celule
este introdus n recipientul de cultur i se fixeaz de substrat la o
anumit distan una de cealalt. n acest caz, proliferarea celulelor
determin formarea de colonii individuale sau clone celulare, ale
cror membri sunt derivai din aceeai celul iniial.

2.1.1. Mediile de Alegerea mediului de cultur difer n funcie de scopurile

cultur urmrite.
Majoritatea mediilor de cultur sunt constituite dintr-un
amestec de molecule cu mas molecular mic (Cadrul 2.1).
Aportul de proteine i de factori de cretere i de adeziune se
realizeaz, n general, prin adugarea de ser (10-20%). Cel mai
folosit este SFV (serul fetal de viel) la care se adaug uneori
molecule mult mai specifice n funcie de tipul culturii realizate:
- insulin care stimuleaz proliferarea celor mai multe tipuri
celulare in vivo i care acioneaz sinergic cu numeroi hormoni;
- factori de cretere: factorul de cretere epidermic (EGF -
Epidermal Growth Factor), factorul de cretere fibroblastic (FGF -
Fibroblastic Growth Factor), factorul de cretere derivat din
plachete (PDGF Platelet Derived Growth Factor), factorul de
cretere nervos (NGF - Nervous Growth Factor);
- proteine de tipul transferinei care asigur transportul fierului
i al albuminei implicat n fixarea i transportul acizilor grai;
- factori de adeziune, fibronectin, colagen, care asigur
fixarea celulelor de flaconul de cultur.
Majoritatea mediilor folosite uzual sunt disponibile comercial
sub form de pudr sau lichid.
Cadrul 2.1.Compoziia mediului de cultur pentru celulele de

mamifere
Aminoacizi Vitamine Sruri Alte
anorganice componente
Arginin Biotin Ca(NO3)2 Glucoz
Asparagin Colin KCl HEPES
Acid aspartic Pantotenat MgSO4 Rou fenol
Cistein Acid folic NaCl Penicilin
Acid glutamic Nicotinamid NaHCO3 Streptomicin
Glutamin Piridoxal Na2HPO4
Glicin Riboflavin
Histidin Vitamina B12
Hidroxiprolin Tiamin
Leucin
Lizin Concentraia aminoacizilor variaz de la 0,1 la 0,2 mM;
Metionin vitaminele nu depesc 1M. Cele dou antibiotice,
Fenilalanin penicilin i streptomicin, mpiedic creterea eventualelor
Prolin bacterii contaminante. Rou fenol servete de indicator de
Serin pH. Culturile se realizeaz n flacoane de sticl sau din
Treonin plastic speciale care permit ataarea celulelor. Flacoanele
Triptofan sunt meninute la 370C ntr-o atmosfer care conine, n
general, 5% CO2.
Tirozin

2.1.2. Tipuri de Dup disocierea dintr-un esut prin tratament mecanic sau
culturi prin hidroliz enzimatic menajat (de exemplu cu tripsin), celulele
aduse n suspensie pot s supravieuiasc n cultur. Dac celulele
provin direct dintr-un esut cultura se numete primar. n general,
celulele sunt selectate din cultura primar i plasate n alte
recipiente pentru a obine culturi secundare. n cursul pasajelor
succesive (timp de mai multe sptmni), celulele continu s
exprime proprietile specifice esutului lor de origine. De exemplu,
celulele care provin din muchiul scheletic embrionar formeaz
fibre musculare gigantice care pstreaz capacitatea de
contractare; celulele nervoase stabilesc sinapse ntre ele. Astfel de
fenomene nu pot fi studiate dect n cultur.
Cu toate acestea durata de via a celulelor rmne limitat.

Celulele din piele, n principal fibroblastele nu se pot divide mai mult
de cinzeci de ori nainte de a muri.
n prezent, lista celulelor care pot fi crescute n cultur este
extrem de larg i include elemente ale esuturilor conjunctive
(fibroblaste, osteoblaste, condrocite), celule musculare, celule
epiteliale de la nivelul ficatului, plmnului, pielii, snului, rinichiului,
etc.; celule nervoase, endocrine, melanocite, celule tumorale, etc.
Identificarea unor markeri specifici unui anumit tip celular
face posibil determinarea tipului de esut i liniei din care au
derivat aceste celule.
Celulele care provin din tumori canceroase sunt nemuritoare

i se propag nedefinit ducnd la constituirea de linii celulare. Cea
mai cunoscut linie (celule HeLa) provine din carcinom uterin
(Helene Lacks) i este perpetuat n laboratoare din 1952. Celulele
normale dup transformare cu virusuri sau ageni tumorigeni devin
nemuritoare.
Liniile celulare prezint urmtoarele avantaje:

- manifest viteze mari de cretere la densiti celulare mari;
- prezint necesiti mici pentru ser;
- sunt capabile de cretere n suspensie sau pe suprafa;
- pot fi meninute cu uurin n medii simple.
Principalele lor dezavantaje sunt reprezentate de o
instabilitate cromozomial mai mare, divergena cu fenotipul donor
i pierderea markerilor specifici esutului.
n prezent, numrul mare de linii celulare constituie un

material folosit cu predilecie pentru nelegerea mecanismelor de
sintez a constituenilor celulari i reglarea expresiei acestora n
diferite procese fiziologice i fiziopatologice. Pentru analiz se
folosesc tehnici de microscopie, de identificare in situ i studii
moleculare.

Cadru 2.2. In Vivo, in Vitro, in Silico
In vivo i in vitro, aceste dou locuiuni latine, prima semnificnd n

organismul viu i a doua n sticl, sunt folosite pentru a desemna
condiiile n care se deruleaz experimentele biologice.
Dac termenul in vitro este fr ambiguitate deoarece se refer la
experienele care se realizeaz n afara organismului viu, n general n
tuburi de experien, termenul in vivo se refer la reaciile fiziologice
observabile n organismul viu. Se consider c acesta se folosete abuziv
cnd este folosit pentru celule n cultur scoase din contextul organismului.
Acestor locuiuni li se adaug acum termenul in silico care desemneaz
cipurile pe baz de siliciu care sunt utilizate pentru calculatoarele
moderne. De fapt, astzi este dificil de conceput cercetarea fr sprijinul
informatic. Fr capacitatea de analiz i stocare a mijloacelor informatice
nu ar fi posibil memorizarea miilor de secvene de ADN cunoscute i nici
compararea acestora cu informaiile stocate n bncile de date ntr-un
interval de cteva minute.
Informatica nu intervine numai n stocarea informaiei genetice ci se
dovedete la fel de indispensabil ca unealt n modelizarea molecular i
n analiza structurilor tridimensionale. Studiul interaciilor molecul-molecul
(de exemplu: ligand-receptor) graie modelrii asistat de calculator
constituie astzi baza concepiei noilor medicamente.
TA 2.1. Prezentai succint folosind ntre 50 i 100 de cuvinte

principalele scopuri pentru care sunt folosite culturile de celule.
TA 2.2. Care dintre afirmaiile de mai jos privind avantajele utilizrii

liniilor celulare sunt false:
a) manifest viteze mari de cretere la densiti celulare mari;
- b) prezint necesiti mici pentru ser;
- c) prezint instabilitate cromozomial mai mare;
- d) sunt capabile de cretere n suspensie;
- e) pot fi meninute cu uurin n medii simple.
- TA 2.3. Care dintre urmtoarele afirmaii privind compoziia mediilor
de cultur pentru celulele eucariote sunt adevrate:
- a) aminoacizi;
- b) antibiotice;
- c) nucleotide purinice i pirimidinice;
- d) ser fetal de viel;
- e) acizi grai eseniali
TA 2.4. Comentai ntr-un scurt eseu de maxim 100 de cuvinte
termenii: in vivo, in vitro i in silico.

2.2. Metode de
microscopie Din cauz mrimii reduse a obiectului de studiu, biologia
celular depinde, mult mai mult dect alte domenii ale biologiei, de
punerea la punct de noi aparate i tehnologii. Vizualizarea la
microscop este posibil graie proprietilor favorabile ale spectrului
electromagnetic:
1) Lungimea de und a luminii vizibile permite vizualizarea
celulelor ntregi n timp ce lungimile de und ale electronilor permit
vizualizarea asamblrii macromoleculelor i organitelor celulare.
2) Lentilele de sticl permit focalizarea luminii vizibile n timp
ce lentilele electromagnetice focalizeaz electronii. Limita de
rezoluie, adic capacitatea de a distinge dou puncte diferite, este
direct corelat cu lungimea de und a luminii. n general, limita
puterii de rezoluie n lumin vizibil cu lentile de sticl este situat
n jur de 0,2 m. Pentru moment razele X cu lungime de und
scurt nu permit vizualizarea, deoarece nu exist tehnici adecvate
de focalizare, dar analiza de difracie prin cristale moleculare
constituie pn n prezent principala tehnic de determinare a
structurii atomice a macromoleculelor celulare.
Microscopul asigur dou funcii: i) mrirea imaginii unui

eantion pentru a o face vizibil cu ochiul liber sau cu o camer. Cu
toii tim c o lentil permite mrirea unei imagini; ii) realizarea unui
contrast care permite evidenierea detaliilor imaginii mrite este o
alt proprietate la fel de important a microscopiei.
2.2.1. Microscopia
optic Microscopia optic (sau fotonic) a relevat biologilor c
celulele, sub form de agregate, intr n constituia esuturilor
vegetale i animale. Aceast descoperire pe care a fcut-o Van
Leeuwenhoek n 1964, a stat la originea teoriei celulare a lui
Schwann (1835) i la dezvoltarea extraordinar a tehnicilor de
microscopie n biologie.
Aspecte generale
Microscopia optic folosete devierea unui flux (ondulatoriu)
de fotoni prin dou sisteme convergente (lentile), obiectivul i
ocularul, pentru a forma o imagine mrit a obiectului studiat
(Figura 2.1a). Calitatea imaginii depinde de puterea de separare
numit i rezoluia microscopului. Aceasta se calculeaz folosind
formula:
d =0,61 x /n x sin
unde d corespunde distanei minime care separ cele dou
obiective. Puterea de separare se poate ameliora diminund
lungimea de und , crescnd indicele de refracie n al mediului
situat ntre lamel i obiectiv i crescnd unghiul reprezentat de
nclinaia cea mai mare a razelor care penetreaz n obiectiv n
raport cu axa optic a microscopului (Figura 2.1 b).

Figura 2.1. Structura microscopului optic
Microscopia optic clasic este pe fond clar, adic

eantionul este iluminat de o lumin alb omogen. Cea mai mare
parte a celulelor nu absorb ntr-un interval relativ ngust al
spectrului vizibil ( cuprins ntre 400 i 700 nm), astfel nct
contrastul este foarte slab n urma unei iluminri pe fond clar. Limita
de rezoluie este de 0,2m, de 500 de ori mai mare dect a ochiului
uman. Totui cele mai mici structuri biologice observabile cu acest
tip de microscop sunt bacteriile sau organitele celulare
(mitocondriile, cloroplastele) a cror mrime este de aproximativ
0,5m. Din acest motiv sunt folosite tehnici de colorare care permit
creterea absorbiei luminii i contrastul. Eantioanele trebuie s fie
relativ subiri, de ordinul a 1 m, deoarece coloraia nu permite
vizualizarea de esuturi groase. Seciunile realizate pentru studii
histologice sau anatomopatologice se obin fixnd celulele printr-un
tratament chimic nainte de includerea acestora n parafin sau
rin i decuparea eantionului cu un microton (aparat care
permite decuparea eantionului n seciuni foarte subiri). Seciunile
astfel obinute sunt tratate cu diferii colorani.
Observarea celulelor vii necesit alte tehnici de contrast.
Acestea sunt toate utile i pentru studiul celulelor fixate.
Microscopul cu contrast de faz permite obinerea contrastului
utiliznd interferena dintre lumina difuzat de ctre eantion i o
raz luminoas de referin decalat. Variaiile de grosime sau
indice de refracie (viteza de propagare a luminii) sunt vizibile chiar
dac eantionul absoarbe puin sau deloc lumina.
TA 2.5. Prezentai trei modaliti de mrire a rezoluiei unui microscop;
TA 2.6. Credei c eantioanele vizualizate pe lam pot fi identice cu cele vii?

Microscopia pe fond negru i sub lumin polarizat este

folosit n situaii specifice n biologie. La examenul pe fond negru,
eantionul este luminat n funcie de un unghi oblic, astfel nct
numai lumina reflectat de eantion s fie recuperat la nivelul
obiectivului. De fapt ntr-o camer ntunecat putem vedea uor
particulele de praf ntr-o faz luminoas. Contrastul furnizat permite
vizualizarea microtubulilor izolai pe fond negru. Cu aceast tehnic
pot fi observate numai structuri foarte simple. Microscopia n lumin
polarizat permite obinerea unei imagini strlucitoare pe un fond
nchis la culoare.
2.2.2.Microscopia Acest tip de microscopie necesit prezena unui colorant sau

de fluorescen unei proteine fluorescente n eantion. Aceast tehnic este foarte
sensibil i permite vizualizarea individual a coloranilor sau a
proteinelor fluorescente. Absorbia unui foton de ctre o molecul
fluorescent antreneaz excitarea unui electron ctre o stare
energetic mai nalt. Cteva nanosecunde mai trziu, molecula
emite un foton cu o lungime de und mai mare (de energie mai
sczut) cnd electronul revine la starea sa iniial (Figura 2.2).
Anumite molecule, numite flourocromi absorb fotonii la o anumit
lungime de und (excitaie) pentru a emite apoi lumina la o alt
lungime de und (emisie) superioar celei de excitaie. De
exemplu, colorantul fluorescent rodamina, absoarbe lumin verde
cu lungime de und scurt i emite lumin roie cu o lungime de
und mai mare.
Microscoapele de fluorescen folosesc filtre i oglinzi
dicroice de reflecie selectiv pentru a asigura: iluminarea
eantioanele fluorescente la lungimea de und corespunztoare
excitaiei i vizualizarea luminii emise cu lungime de und mai
mare. Filtrele de emisie elimin lumina de excitaie reflectat de
ctre eantion, astfel nct regiunile fluorescente ale eantionul s
apar luminoase. Pentru a deveni fluorescente, moleculele
purificate (lipide, proteine sau acizi nucleici) pot fi marcate cu un
colorant fluorescent i injectate ntr-o celul vie unde se vor orienta
ctre localizarea lor natural.
Molecule marcate fluorescent pot fi utilizate pentru
localizarea unei inte ntr-o celul fixat i permeabilizat. O
posibilitate interesant este folosirea acestei tehnici pentru a putea
identifica molecule n celule fixate. n aceste cazuri colorantul
fluorescent poate fi legat la un anticorp care recunoate specific
molecula int. O alt modalitate o reprezint marcarea unui
oligonucleotid cu un colorant fluorescent i folosirea acestuia drept
sond pentru secvene complementare de acizi nucleici n celule
fixate.

Figura 2.2. Schema structurii microscopului de fluorescen
Microscopia confocal reprezint o alt tehnic care permite

obinerea de imagini pentru eantioane fluorescente. n locul
iluminrii cu o raz luminoas, eantionul este excitat de ctre o
raz laser focalizat ngust pe cele trei dimensiuni x, y, z ale
spaiului. Lumina care nu vine direct din punctul de focalizare este
eliminat cu ajutorul unui dispozitiv. Fascicolul laser de excitaie
baleiaz eantionul i lumina emis de fiecare punct este colectat.
Imaginile de fluorescen sunt reconstituite de calculator. O serie
de imagini confocale obinute din planuri diferite permit o
reconstituire tridimensional a eantionului.
2.2.3. Microscopia Cu o lungime de und cuprins ntre 1 i 10-3 nm, electronii,

electronic spre deosebire de fotoni, coboar limita de separare la nivel de
angstrom (0,1 nm). ntr-un microscop electronic, sursa luminoas
este un filament constituit cel mai adesea din tungsten, care nclzit
la o temperatur ridicat, emite n vid electroni la vrful unei
coloane cilindrice. Accelerai de o mare diferen de potenial,
aceti electroni formeaz un fascicul care este canalizat de ctre o
serie de condensatori. Imaginea se obine n dou moduri:
Microscopia Electronic de Transmisie (MET) prin

transmisia de electroni prin eantion;
Microscopia Electronic de Baleiaj (MEB) prin reflexia

electronilor de ctre eantion.

Prepararea eantionului pentru microscopie electronic

Deoarece eantioanele sunt plasate sub vid se elimin
posibilitatea observrii de celule vii hidratate. Celulele i esuturile
sunt mai nti fixate n glutaraldehid care creeaz puni ntre
proteinele vecine i apoi tratate cu tetraoxid osmium pentru a
stabiliza membranele. Slaba putere de penetrare a electronilor face
necesar tierea de seciuni foarte fine de 50 la 100 nm. Pentru a
obine astfel de seciuni, eantioanele au fost n prealabil
deshidratate i incluse ntr-o rin care se polimerizeaz i
formeaz un bloc care nconjoar preparatul.
Contrastul n microscopie electronic depinde de numrul
atomic al elementului. Cu ct acesta este mai mare cu att
electronii sunt mai dispersai i crete contrastul. Deoarece
moleculele biologice sunt constituite majoritar din elemente cu
numere atomice sczute (carbon, azot, hidrogen, oxigen, etc.), este
necesar tratarea seciunilor cu sruri ale metalelor grele (uraniu,
osmiu, plumb) n scopul revelrii mai bune a constituenilor celulari.
Observarea spaiului intramembranar se realizeaz dup o
criofactur i un criodecapaj.
Microscopia electronic de transmisie (MET)

Limita sa de rezoluie este la nivel de nanometru i este de
100 de ori mai mare dect cea a microscopului fotonic.
Profunzimea cmpului este slab (grosimea tranei spaiului n care
toate punctele eantionului furnizeaz o imagine net). Observaiile
tridimensionale sunt dificile chiar dac se folosesc foarte multe serii
de seciuni seriate (Figura 2.3). Prin analiza succesiv a seciunilor
se realizeaz reconstituirea structurilor tridimensionale.
Figura 2.3. Principiul MET: a) pregtirea probelor; b) principiul general al MET i

structura schematic a microscopului

Microscopia electronic de baleiaj (MEB)

Preparatul este baleiat cu un fascicul convergent de
electroni. Cnd acetia lovesc obiectul analizat, electronii sunt
emii sau difuzai de ctre suprafaa obiectului. Unghiul de impact
cu suprafaa variaz i imaginea, reconstituit pe ecran, se
compune din zone strlucitoare i sumbre care i dau un aspect
tridimensional. Profunzimea cmpului n MEB este considerabil,
totui rezoluia sa se limiteaz la 10 nm.
TA 2.7. Sub forma unui eseu de maxim 200 de cuvinte discutai

avantajele i dezavantajele relative ale microscopiei optice i electronice.
TA. 2.8. Cum putei mai bine vizualiza : a) o celul vie din piele; b) o
mitocondrie de drojdie; c) o bacterie; d) un microtubul
2.3. Metode de n momentul descoperirii unei noi molecule, nu tim nimic

separare a despre aceasta. Biologul nu dispune de nici o informaie asupra
naturii sale, masa molecular i concentraia fiind necunoscute.
componentelor Caracterizarea complet a acesteia este dificil deoarece celula
celulare conine mii de molecule, majoritatea acestora ntr-o proporie foarte
sczut. Moleculele care se afl ntr-o concentraie mai mare sunt
bine studiate de mult timp i pe msur ce cunotinele evolueaz,
substanele pe care trebuie s le analizm sunt ntr-o concentraie
mai mic n preparatele studiate. Din acest motiv a fost necesar
punerea la punct a unor tehnici din ce n ce mai performante care
s conduc la concentrarea eantioanelor la valori compatibile cu
studiile propuse avnd drept unic ghid efectul biologic.
n alte cazuri, biologul este obligat s concentreze o
molecul cunoscut n scopul dozrii ct mai precise a acesteia. n
acest sens exist tehnici de concentrare care permit dozarea mai
multor eantioane, avnd n acelai timp un factor de concentrare
suficient de reproductibil pentru ca rezultatul s fie semnificativ.
n biologie tehnicile de separare i de concentrare pot fi
grupate n dou categorii:
i) cele care se bazeaz pe proprietile fizico-chimice ale
moleculei (densitate, mas molecular, sarcin electric, pH);
ii) cele care se bazeaz pe proprietile biologice
(recunoatere antigen/anticorp sau enzim/substrat).
Toate aceste tehnici sunt performante i au principii de baz
foarte simple. n schimb, realizarea tehnic este adesea foarte
delicat datorit constrngerilor impuse de materialul biologic.
TA 2.9. Care sunt criteriile dup care pot fi clasificate tehnicile de separare
a componentelor celulare

2.3.1. Centrifugarea Orice corp suspendat ntr-un lichid suporta aciunea a dou
fore: fora gravitaional (greutatea sa) care l orienteaz n jos i
fora lui Arhimede care l dirijeaz n sus. n funcie de densitatea
sa, superioar sau inferioar mediului, fora rezultant va fi dirijat
n sus sau n jos i corpul va urca sau va cobor n lichid. Acest
fenomen se numete sedimentare. Macromoleculele biologice sunt
i ele supuse acestei reguli. De exemplu, celulele roii dintr-un tub
n care am prelevat snge cad la fundul acestuia. Celulele albe, mai
puin dense formeaz un strat fin la partea superioar. Dac timpul
de ateptare este mai lung moleculele se vor repartiza n trei grupe:
i) cele care se vor poziiona pe fund; ii) cele care vor urca ctre
suprafa; iii) cele care vor continua s rmn n soluie. n
concluzie, dac modulm corect densitatea mediul este posibil
purificarea unei molecule.
Acest fenomen este de durat i necesit aproximativ o or
n cazul sngelui unde celulele sunt destul de mari. Cea mai mare
parte a moleculelor biologice sunt mult mai mici iar sedimentarea
natural necesit mult mai mult timp: mai multe sptmni, ani sau
secole.
Dac acceleraia gravitaional ar fi mai mare, de exemplu

100 G, lucrurile ar fi foarte diferite: cele dou fore i rezultanta lor
2.3.1.1. Principiul ar fi mult mai importante i moleculele ar sedimenta mult mai rapid.
centrifugrii Deoarece nu tim s acionm asupra acceleraiei gravitaionale
care la nivelul pmntului rmne 1 G (9,81m/s2), trebuie s
folosim o alt acceleraie.
Toi ne-am jucat mcar odat n via cu o greutate fixat la
captul unei sfori i am putut constata c de la o anumit vitez
fora dominant nu mai este greutatea ci fora centrifug. Aceast
for a putut fi exploatat n biologie. Un aparat special numit
centrifug realizeaz separarea preparatelor biologice la viteze de
mii sau sute de mii de rotaii pe minut, producnd acceleraii de mai
multe mii de G asupra moleculei de purificat. Astfel, sedimentarea
se produce n cteva ore n loc de mai muli ani. Din acest punct de
vedere, centrifugarea este o tehnic foarte rezolutiv. n momentul
de fa o serie de centrifugi mici (numite centrifugi de mas) sunt
aparate de separare curente n laboratoarele de biologie,
asemenea frigiderelor n gospodrie. Altele mai mari i mai rapide,
numite ultracentrifugi, fac parte din aparatele grele care sunt
cumprate i exploatate n comun de mai multe laboratoare.
O centrifug este constituit dintr-un ax care poart un rotor
special, ansamblul fiind antrenat de ctre un motor foarte puternic.
Rotorul conine lcauri, situate simetric de o parte i de alta a axei,
n care pot fi introduse tuburi care conin preparatele biologice de
separat. Ansamblul este nchis ntr-o cuv etan n timpul rotirii din
motive de securitate.

n timpul utilizrii centrifugii i mai ales a ultracentrifugii se

ridic dou probleme: dezechilibrul rotorului i degajarea de
cldur.
Prima problem are o importan major pentru utilizator
deoarece un dezechilibru de 1g de o parte i de alta a rotorului se
traduce printr-un echivalent de 100kg asupra axului la o vitez de
100 000 G. O asemenea dereglare determin ruperea rotorului i
decolarea acestuia cu o vitez i o for foarte mare. La o astfel de
vitez nici mcar pereii de beton ai laboratorului nu reprezint o
piedic. Toi biologii din vechea generaie au trit sau au auzit
vorbindu-se de astfel de accidente. n prezent, aceast problem
este mai puin critic deoarece materialele sunt de o calitate mult
mai bun i exist sisteme de securitate care mpiedic
ultracentrifuga s accelereze dac este detectat un astfel de
dezechilibru. Cu toate acestea cea mai bun protecie o reprezint
echilibrarea cu grij a tuburilor pereche.
Cea de a doua problem este i mai jenant deoarece la

viteza de rotaie a centrifugilor i ultracentrifugilor, frecarea aerului
de rotor produce o nclzire important iar moleculele biologice sunt
foarte sensibile la cldur. O prim msur este rcirea rotorului,
majoritatea centrifugilor fiind echipate cu astfel de sisteme. Totui,
la 50 000 sau 100 000 de rotaii pe minut aceast msur nu este
suficient. Soluia pentru a reduce forele de frecare este de a
realiza nvrtirea rotorului n vid. Ultracentrifugile sunt echipate cu
pompe de vid extrem de performante.
Centrifugarea reprezint una dintre puinele tehnici prin care
se pot separa cantiti mari de material putnd fi utilizate i n
sistem industrial. Exemplul cel mai cunoscut l reprezint
sterilizarea laptelui care reprezint o centrifugare moderat care
sedimenteaz bacteriile, substanele din compoziia laptelui fiind
mult mai uoare nu sunt afectate.
TA 2.10. Care este fora responsabil de realizarea separrii prin

centrifugare i cum acioneaz ea?
TA 2.11. Care sunt problemele care apar n timpul centrifugrii i care sunt
soluiile tehnice folosite pentru rezolvarea lor?
2.3.1.2. Variantele La nceputul centrifugrii, amestecul care conine

centrifugrii substanele care trebuie separate este depus la suprafaa lichidului.
n cursul centrifugrii, moleculele coboar n funcie de densitatea
lor. Viteza de sedimentare este exprimat printr-o unitate
independent de densitatea mediului numit Svedberg (S). Cu ct
valoarea n Sverdberg este mai mare, cu att molecula va ajunge

mai repede pe fundul tubului. La sfritul centrifugrii, tubul conine

dou faze distincte: un depozit mai mult sau mai puin solid la
fundul tubului care corespunde moleculelor care au reuit s se
depun i care
se numete sediment, i o faz lichid care conine toate
moleculele care nu au atins fundul tubului i care formeaz
supernatantul. Dup caz, moleculele de separat sunt n sediment,
n supernatant sau distribuite ntre cele dou. n ultimul caz
considerm c parametrii centrifugrii nu au fost bine alei.
Pornind de la aceste criterii simple, biologii au dezvoltat mai
multe variante ale centrifugrii (Figura 2.4). O bun purificare a
diferitelor organite se poate realiza ntr-o singur etap dac
centrifugarea se realizeaz n gradient de densitate. Molecula care
urmeaz a fi purificat nu este neaprat nici cea mai dens i nici
cea mai puin dens. De asemenea, se poate dori obinerea unui
profil de sedimentare, adic studierea concentraiei n molecule n
funcie de coeficientul de sedimentare. Biologii au reuit s
imagineze i s fabrice medii cu densiti variabile care se
repartizeaz difereniat formnd un gradient de densitate n tubul
de separare.
Figura 2.4. Principiile centrifugrii

2.3.1.3.Centrifugare Densitatea mediului variaz descresctor i continuu de la

a n gradient de partea inferioar la cea superioar a tubului. La sfritul
densitate centrifugrii, moleculele vor fi repartizate n benzi n funcie de
densitatea lor. Aceast tehnic poate fi considerat o extrapolare a
celei descris mai sus, dar n realitate finalitatea
este foarte diferit. Tehnica i propune obinerea unui profil al
densitii moleculelor dintr-o soluie i nu servete numai la
separarea moleculelor pe care dorim s le studiem.
De exemplu, centrifugarea n gradient de densitate permite
separarea variantelor aceleiai proteine. Coninutul tubului se
repartizeaz cu ajutorul unui colector de fracii n mai multe
eprubete care nu conin dect o form a moleculei. Acestea pot fi
identificate separat. Dac se cunoate coeficientul de sedimentare
al fiecrei molecule se poate trasa un profil de densitate al
moleculelor. Acest profil reprezint cantitatea de molecule n funcie
de fracie (deci i de densitate). Se pot obine mai multe picuri.
Dac un astfel de pic corespunde unei molecule (de exemplu o
enzim) aceasta poate fi msurat separat i se poate calcula
proporia fiecrui component n totalitatea amestecului.
Figura 2.5. Centrifugarea n gradient de sucroz a organitelor celulare
TA 2.12. Este posibil separarea prin sedimentare a unor particule

foarte mici folosind centrifugarea diferenial n gradient de densitate. Dac da,
explicai principiul tehnicii

2.3.2.Cromatografia Aceast tehnic permite separarea de molecule n soluie

(faz mobil) graie interaciilor lor cu un suport (faza staionar) n
funcie de diferite criterii: absorbie, afiniti chimice, sarcini
electrice, mas molecular, etc.
Cromatografia ca i centrifugarea este o tehnic cu un

principiu extrem de simplu dar care prin perfecionare a devenit o
modalitate de separare foarte performant. De exemplu,
cromatografele sunt utilizate actualmente pentru detectarea
poluanilor n laboratoarele specializate.
Cu toate acestea fiecare dintre noi poate realiza o

cromatografie la el acas cu materiale simple. Facei o pat de
cerneal cu un stilou pe o bucat de hrtie i apoi lsai s cad o
pictur de ap. Constituenii cernelii vor difuza, formnd cercuri
concentrice n jurul petei iniiale. Primele cromatografii imaginate
acum un secol nu erau cu mult mai complicate i totui sunt folosite
i astzi.
Substana ai crei constitueni dorim s i izolm este

antrenat de un fluid care circul ntr-un mediu poros care va
ncetini componentele substanei. n funcie de interaciile care
exist ntre fiecare dintre constitueni i fluid pe de o parte i ntre
acetia i mediul poros pe de alt parte, acetia vor fi antrenai mai
repede sau mai ncet. Astfel, constituenii substanei se vor separa
unii de alii. Pentru detectarea diferitelor componente exist dou
posibiliti: repartizarea pe ansamblul mediului (de exemplu o foaie
de hrtie) i revelarea tuturor prin colorarea specific substanei de
interes (Figura 2.6). n exemplul de mai sus mediul este foaia de
hrtie, fluidul este apa i substana de separat este cerneala.
n funcie de suport i de mediul lichid care asigur

realizarea separrii exist mai multe tipuri de cromatografie:
i) cromatografia pe hrtie, cea mai simpl;
ii) filtrarea pe gel care realizeaz separarea moleculelor n
funcie de mrimea lor;
iii) cromatografia de schimb ionic care folosete drept suport
rini schimbtoare de ioni;
iv) cromatografia de afinitate care exploateaz nalta
specificitate a interaciilor legturilor biologice;
v) cromatografie pe coloan n faz lichid - HPLC (High
Performance Liquid Chromatography) variant a acesteia, una
dintre metodele cele mai eficace de separare a moleculelor;
vi) cromatografia pe coloan n faz gazoas care este cea
care permite separarea celor mai mici cantiti de materie.

2.3.2.1. Aceast tehnic este cea mai simpl. Benzi de hrtie de filtru
Cromatografie pe sunt meninute vertical, baza fiind nmuiat ntr-un solvent care este
hrtie n general ap. Substana de separat este depus la baza benzii de
hrtie chiar deasupra suprafeei lichidului. Lichidul va urca de-a
lungul benzii de hrtie prin capilaritate, va antrena cu el fiecare
substan cu o vitez diferit. Un trasor, molecul colorat foarte
solubil n solvent va migra cu aproximativ aceeai vitez cu acesta
i va permite urmrirea progresiei frontului. Cnd naintarea este
terminat banda de hrtie va fi tratat global cu revelatori specifici.
Moleculele detectate vor aprea sub forma de pete colorate
(spoturi) repartizate ntre punctul de plecare i frontul de migrare al
trasorului. Pentru o anumit molecul, acelai solvent i acelai
suport de hrtie, raportul distan de migrare/front de migrare al
trasorului este constant ceea ce permite identificarea unei
substane. Dup fotografiere pentru conservarea rezultatului, banda
poate fi decupat pentru a recupera spoturile i a solubiliza
moleculele pe care le conine pentru analiza i dozare. Teoretic,
tehnica se poate realiza pe orice tip de hrtie dar pentru a asigura
reproductibilitatea rezultatelor furnizorii fabric astzi hrtii speciale
cu porii perfect calibrai i chiar materiale care nu au nimic n
comun cu hrtia.
Figura 2.6. Cromatografie pe hrtie. a) principiul separrii; b) evidenierea

spoturilor separate

2.3.2.2. n acest tip de cromatografie, substana poroas este

Cromatografia pe format din bile mici coninute ntr-o coloan, lichidul intrnd printr-o
coloan n faz extremitate i ieind prin cealalt. Aici, solventul este deplasat activ
lichid cu ajutorul unei pompe. Principala diferen este c moleculele care
se vor deplasa diferit prin coloan i vor avea o anumit ntrziere
n migrare vor iei din coloan n momente diferite. Un detector
plasat la ieire va decela trecerea fiecrei substane. Detectorul se
bazeaz pe proprietile fizice ale moleculei de detectat, cum ar fi
de exemplu rezistivitatea, daca particulele sunt ncrcate, sau
fluorescena la iradierea cu lumin ultraviolet. Calibrarea perfect
a detectorului va permite identificarea moleculei i determinarea
concentraiei acesteia. De asemenea compusul va putea fi
recuperat n urma colectrii fluxului de ieire sub form de fracii.
Aceast variant de cromatografie este mai complex dar
mai performant. Dac se variaz materialele coninute n coloan
i condiiile de separare obinem diferite variante ale metodei.
Figura 2.7. Cromatografie n faz lichid
TA 2.13. Care sunt principalele tipuri de tehnici de separare cromatografic;
TA 2.14. Care dintre urmtoarele criterii de separare cromatografic sunt

greite: a) absorbia pe suport; b) capacitatea de a forma legturi covalente; c)
afiniti chimice; d) sarcini electrice, e) mas molecular.

2.3.2.3. n aceast variant, interiorul coloanei este supus unei

Cromatografia presiuni importante. Diferiii constitueni vor fi separai mult mai
lichid de nalt eficace permind lucrul cu coloane mai mici. n timp ce o coloan
presiune (HPLC, standard poate s fie ntre 20 cm i 1 metru nlime, o separare
High Pressure HPLC se poate realiza pe coloane de 5 cm cu aceeai eficacitate.
Liquid Tehnica permite folosirea unei cantiti reduse de mediu poros, de
Chromatography) faz lichid i deci de substane de separat. Toate variantele de
coloane descrise n variantele anterioare pot fi aplicate n tehnica
HPLC. Astzi printr-o modificare de limbaj, acronimul HPLC i-a
schimbat semnificaia n High Performance Liquid
Chromatography sau cromatografie lichid de mare performan
(Figura 2.8).
Figura 2.8. Principiul HPLC
Diverse coloane cromatografice

2.3.2.4 Gel filtrarea Gel filtrarea sau cromatografia de excluziune reprezint o
separare n funcie de mrimea particulelor. Variind diametrul bilelor
utilizate pentru separare se pot ncetini moleculele mari n timp ce
cele mici vor trece printre bile i vor migra mai rapid. Invers, dac
folosim bile poroase moleculele mici vor penetra n acestea i vor fi
ntrziate n timp ce moleculele care nu intr n bile trec direct i
mult mai repede (Figura 2.9).
Figura 2.9. Principiul gel filtrrii

2.3.2.5. Cromatografia pe schimbtori de ioni reprezint o tehnic

Cromatografia pe de separare n funcie de sarcin care folosete ca suport rini
schimbtori de ioni schimbtoare de anioni sau cationi. Dac folosim bile ncrcate, cu
sarcini negative (schimbtori de cationi) sau cu sarcini pozitive
(schimbtori de anioni) moleculele (de exemplu proteine) care
poart sarcini opuse se vor fixa n timp ce celelalte vor migra. Cnd
toate moleculele sunt fixate, se crete progresiv fora ionic a
solventului, moleculele se separ de bile unele dup altele, fiecare
n funcie de propria for ionic, i vor trece prin faa detectorului
(Figura 2.10).
Aceast variant cromatografic ca i gel filtrarea nu este
suficient pentru a obine un preparat nalt purificat.
Figura 2.10. Cromatografie pe schimbtori de ioni
2.3.2.6. Cromatografia de afinitate exploateaz specificitatea

Cromatografia de deosebit a interaciilor biologice.
afinitate Grefarea prin legturi covalente a unui ligand la suprafaa
unei matrice inerte (suport) permite purificarea unei proteine dintr-
un amestec. De exemplu, interacia enzim-substrat n care
substratul servete de ligand favorizeaz purificarea enzimei care
recunoate substratul la nivelul situsului su catalitic. De
asemenea, anticorpii specifici pot servi drept liganzi pentru a reine
pe o coloan proteina fa de care au fost produi. n toate cazurile,
dup eluarea celorlalte molecule, proteinele fixate sunt detaate
schimbnd eluantul astfel nct s rup interaciile protein-ligand
(Figura 2.11). Prin aceast tehnic bazat pe specificitatea de
recunoatere, factorul de purificare poate atinge 10 000 la o singur
trecere prin coloan.
TA 2.15. Analizai comparativ principiile urmtoarelor tipuri de cromatografie:

gel filtrare, cromatografia pe schimbtori de ioni i cromatografia de afinitate. Care
dintre aceste considerai c este mai eficient.

Figura 2.11. Cromatografia de afinitate
2.3.2.7. Este un tip de cromatografie pe coloan, dar n acest caz

Cromatografia n fluidul este nlocuit de gaz. Substana de analizat este evaporat.
faz gazoas Fluidul gazos o va antrena pe coloan care va ntrzia diferiii
constitueni gazoi. La ieirea de pe coloan aceti constitueni vor
putea fi detectai prin diferite tehnici: spectrometrie de mas,
spectrometrie, ionizare, etc. Aceast modalitate de separare
permite detectarea substanelor sub form de urme. Este o tehnic
folosit mai mult n mineralogie dect n biologie.
2.3.3. Asemenea tehnicilor descrise anterior, electroforeza permite

Electroforeza o separare a moleculelor pe baza unei proprieti fizice, n acest
caz sarcina electric. Principiul const n dispunerea soluiei care
conine moleculele de separat pe un gel preparat n soluie apoas
i aplicarea unei diferene de potenial ntre anod i catod. Ionii
pozitivi se vor deplasa ctre catod iar ionii negativi ctre anod,
moleculele neutre nefiind supuse deplasrii. Aceast tehnic este
cu att mai important cu ct asigur realizarea de separri foarte
fine ale diferitelor molecule i este destul de uor de realizat. De
asemenea, prin modul su de operare tehnica permite tratarea
simultan a mai multor eantioane pe acelai gel i n aceleai
condiii experimentale. Datorit calitilor tehnica este curent
folosit de laboratoarele cercetare, de analize medicale dar i
pentru a doza proteinele sanguine.

2.3.3.1. Principiul Mediul de migrare este constituit n general dintr-un gel apos
electroforezei (agaroz sau poliacrilamid) turnat pe o plac orizontal sau ntre
dou plci de sticl dispuse vertical. Capetele gelului vin n contact
cu lichidul conductor care face legtura ntre catod i anod.
Eantioanele de separat sunt aplicate ntr-o serie de godeuri
practicate n gel. Ele sunt combinate cu un colorant ale crui
proprieti sunt astfel alese nct s migreze mai rapid dect
componentele amestecului pentru a permite supravegherea migrrii
moleculelor de separat care sunt, n general, invizibile n aceast
etap. Cnd migrarea este terminat, gelul este colorat cu bromur
de etidium (pentru evidenierea acizilor nucleici) sau uscat i relevat
cu diferii ageni de colorare (n cazul separrii proteinelor). Fiecare
molecul separat apare sub forma unei benzi perpendiculare pe
direcia de migrare i a crei grosime depinde de concentraie.
Figura 2.12. Principiul electroforezei
Diferitele variante de electroforez

2.3.3.2. SDS PAGE Tehnica electroforetic n gel de acrilamid PAGE (n
englez Poly Acrilamide Gel Electrophoresis) a gsit numeroase
aplicaii: electroforeza unidimensional SDS-PAGE util pentru a
separa proteinele n funcie de masa lor molecular,
izoelectrofocalizarea, electroforeza bidimensional, etc.
Varianta cea mai rspndit este SDS - PAGE, folosit
pentru separarea proteinelor n funcie de masa lor molecular.
Proteinele sunt denaturate i saturate cu detergentul SDS (Sodium-
Dodecyl Sulfate) ncrcndu-se negativ deoarece sarcinile
detergentului acoper complet sarcinile proprii proteinelor. Viteza
de migrare a ansamblului proteine denaturate/SDS va depinde
numai de lungimea catenei proteice. Dac nu ar exista suportul de
gel toate moleculele ar migra cu aceeai vitez. Prezena gelului
ncetinete proteinele mari, ele repartizndu-se de-a lungul
traseului n funcie de masa lor molecular.

2.3.3.3. Imunoelectrofocalizarea (IEF) reprezint o variant a gel

Imunoelectrofo- electroforezei care presupune impunerea unui gradient de pH n
calizare gelul de separare. Suportul electroforetic este compus dintr-un gel
de poliacrialmid saturat cu o soluie de amfolii. Moleculele
polianionice i policationice dac sunt plasate ntr-un cmp electric
se separ i formeaz un gradient continuu dependent de sarcina
lor. Proteinele native sunt supuse aciunii cmpului electric i vor
migra n funcie de sarcina electric (pKa) care variaz n funcie de
pH. Moleculele supuse unei electroforeze bidimensionale (pe o
direcie IEF i pe alta SDS-PAGE) vor fi separate mult mai bine.
Gelul reprezint un mediu solid care poate fi manipulat fiind

2.3.3.4.
posibil aplicarea mai multor tehnici succesive de electroforez
Electroforeza
pentru a obine electroforeze bidimensionale. n cazul separrilor
bidimensional
bidimensionale, eantionul este depus ntr-un singur godeu i este
aplicat prima variant de separare. Cnd migrarea n prima
direcie este terminat, poziia gelului se schimb i se realizeaz o
migrare perpendicular pe prima folosind o a doua tehnic.
Moleculele separate n funcie de cele dou criterii se repartizeaz
ntr-un sistem de dou coordonate ceea ce permite o rezoluie mai
bun. n general, n cursul primei etape separarea moleculelor se
realizeaz ntr-un gel ngust n funcie de sarcina lor electric (IEF).
ntr-o a doua etap gelul ngust este depus la captul altui gel i se
realizeaz o separare de tip SDS-PAGE. Cele dou criterii
independente, sarcin i mrime, fac ca aceast tehnic s fie cu
adevrat rezolutiv. Astfel, pe un singur gel pot fi separate pn la
2000 de polipeptide diferite, ceea ce corespunde numrului de
proteine diferite dintr-o bacterie. Evidenierea proteinelor separate
(spoturilor) se realizeaz cel mai bine prin colorare cu AgNO3
(Figura 2.13).
Figura 2.13. Electroforeza bidimensional

2.3.3.5. Purificarea Etapele urmrite n purificarea acizilor nucleici sunt diferite

i separarea acizilor de cele utilizate pentru proteine, acestea fiind reflectate n
nucleici diferenele structurale fundamentale dintre cele dou tipuri de
macromolecule. Pentru purificarea ADN prima etapa o reprezint
omogenizarea celulelor i izolarea nucleelor din care se extrage
ADN. Mediul de extracie conine detergeni utilizai pentru liza
nucleelor, eliberarea materialului genetic i inhibarea activitii
nucleazelor.
Urmtoarele etape de purificare au drept principiu separarea
ADN i ARN de produii care l contamineaz (ARN sau ADN i
proteine). Dup deproteinizare cu fenol i cu fenol/cloroform
suspensia este separata prin centrifugare n doua faze. Faza
apoas care conine acizii nucleici este precipitat din soluie cu
etanol rece. ADN este rulat pe o bagheta de sticl pe msur ce
precipit la interfaa ntre alcool i soluia salina, n timp ce ARN
precipit pe fundul recipientului. Dup aceasta purificare iniial,
ADN este rehidratat i tratat cu ribonucleaza pentru a elimina ARN
contaminant i este reprecipitat cu etanol. n general, ARN este
purificat n acelai mod utiliznd deoxiribonucleaz care
degradeaz ADN n etapele finale de purificare.
Separarea ADN prin electroforeza n gel

Electroforeza n gel este folosit n aceeai msur i pentru
separarea acizilor nucleici, care difer prin greutatea lor moleculara
(numrul de nucleotide). n general, moleculele mici de ADN sau
ARN (de cteva sute de nucleotide) sunt separate prin
electroforeza n gel de poliacrilamid. Deoarece moleculele mai
mari traverseaz dificil reeaua de poliacrilamid sunt separate n
gel de agaroz, mai poros. Concentraiile gelurilor de agaroz sunt
variabile n funcie de mrimea fragmentelor de separat.
Separarea acizilor nucleici prin electroforeza se bazeaz pe
acelai principiu ca i separarea proteinelor prin SDS-PAGE. Spre
deosebire de proteine, toi acizi nucleici, indiferent de lungimea lor,
au densitate de sarcin negativ constant care determin
capacitatea lor de a migra n cmp electric. Cu ct greutatea
molecular ADN sau ARN este mai mare, cu att este ncetinit
migrarea lor. Sensibilitatea separrii electroforetice n poliacrilamid
este data de faptul c pot fi separate molecule de ADN sau ARN
care difer numai printr-o singur nucleotid. Aceasta proprietate a
stat la originea migrrii produilor de secvenializare ADN. n figura
2.14 este prezentat principiul separrii acizilor nucleici n gel. Toate
fragmentele de ADN separate n gel pot fi localizate prin colorare cu
bromur de etidiu, care se intercaleaz la nivelul dublei elice i
prezint fluorescen portocalie sub lumin UV

Figura 2.14. Electroforeza ADN
2.3.3.6. Aplicaii Separarea electroforetic este util att pentru simpla

electroforez identificare a proteinelor i acizilor nucleici ct i pentru realizarea
de amprente ale acestora pe suport de nitroceluloz
sau nailon. Pentru acizii nucleici tehnicile de transfer sunt numite
Southern blot pentru ADN i Northern blot pentru ARN. n cazul
proteinelor tehnica poart numele de Western blot. n cazul acizilor
nucleici, dup separarea electroforetic n gel de agaroz, i
identificarea benzilor cu bromur de etidium se poate realiza
hibridizarea molecular cu ajutorul unor sonde (ADN, ARN sau
ADNc) marcate radioactiv, fluorescent sau chemiluminescent.
Identificarea proteinelor la sfritul electroforezei se
realizeaz prin colorare (albastru de Coomasie, nitrat de argint) sau
prin autoradiografie pentru proteinele sintetizate n prezen de
aminoacizi radioactivi. Combinarea celor dou permite identificarea
n ansamblul proteinelor colorate a celor care sunt nou sintetizate i
deci radiomarcate ca rspuns la o eventual stimulare celular.
Totui, o astfel de abordare necesit transferul prin capilaritate al
proteinelor pe un suport solid (filtru de nitroceluloz) care apoi
permite realizarea autoradiografiei. n cazul tehnici Western blot
evidenierea proteinelor se realizeaz cu anticorpi specifici dup
transferul lor pe membrane.
TA 2.16. Se presupune c o protein ubiquitar este prezent n

mitocondrie, cloroplaste i nuclei. Ce experien putei realiza pentru a testa
aceast ipotez? Descriei experienele n termenii tehnici necesari?
TA 2.17 Electroforeza n gel de agaroz separ moleculele ADN pe baza:

a) secvenei nucleotidice din captul coeziv; b) secvenei lor nucleotidice; c)
cantitii de adenin, n corelaie cu cea de timin; d) cantitii de adenin, n
corelaie cu cea de guanina; e) lungimii lor.
TA 2.18. Moleculele mici de ADN i ARN sunt separate mai bine pe: a) gel
de agaroz; b) gel de poliacrilamid; c) pe membrane de hrtie; d) prin SDS-
PAGE; e) prin gel filtrare

2.4. Tehnici de Proprietile intrinseci (fizico-chimice) ale macromoleculelor

marcare pot fi folosite pentru detectarea lor. Metodele cele mai sensibile,
capabile s reveleze cu o mare specificitate un numr mic de
molecule (plecnd de la 1000 la un ordin de concentraie de 10-
12
M), necesit folosirea de radioelemente i/sau de anticorpi.
Aplicarea radioactivitii
2.4.1. Marcare Moleculele radioactive permit urmrirea cvasitotalitii
radioactiv proceselor celulare i localizarea acestora. Experienele constau n
furnizarea unui precursor sub forma de macromolecule radioactive
(Tabelul din Figura 2.15) celulelor pentru ca acesta s poat fi
difereniat de precursorul endogen. Cele dou forme ale
precursorului sunt incorporate nedifereniat n macromolecule.
Pentru a urmri n timp evoluia n celul a precursorului radioactiv
acesta este introdus n celul pentru un timp scurt (puls).
Modalitatea de abordare favorizeaz localizarea moleculelor nou
sintetizate, care se realizeaz dup fixare i colorarea celulelor
pentru observare microscopic. Preparatele sunt apoi acoperite de
o emulsie fotografic. Radiaiile emise de ctre radioizotopi
acioneaz asupra bromurii de argint coninut n emulsia
fotografic i formeaz puncte negre de argint dup developarea
autoradiografiei. Suprapunerea fotografiilor obinute n microscopie
nainte i dup autoradiografie permite localizarea
macromoleculelor n celul. De exemplu, marcarea cu uridin 3H,
precursor al ARN, evideniaz c sinteza acestui acid nucleic se
realizeaz n nucleu, nainte de trecerea rapid n citoplasm.
Izotop Timp de Precursori radioactivi

njumtire
3
H 12,3 ani Aminoacizi, nucleotide, glucide
14
C 5570 ani Aminoacizi, nucleotide, glucide
32
P 14 zile nucleotide
35
S 87 zile Nucleotide, metionin
Figura 2.15. Izotopi utilizai curent n biologie
2.4.2. Marcarea cu Marcarea cu anticorpi

anticorpi Anticorpii, proteine ale sistemului imunitar, exist sub forma
a milioane de forme diferite determinate n principal de variabilitatea
situsului de recunoatere a antigenului care provoac sinteza lor.
Fiecare anticorp posed o singur specificitate antigenic care i
confer o valoare inestimabil pentru localizarea unei molecule
precise n celul. Cuplarea anticorpilor cu molecule fluorescente
(microscopie de fluorescen) sau cu particule dense n electroni
(sfere de aur coloidal pentru microscopia electronic) va favoriza
reperarea antigenului n celul. Cnd numrul de antigene prezente
n celul este destul de important este suficient o marcare direct,
n timp ce o concentraie sczut de antigen necesit o marcare
indirect care s determine creterea sensibilitii detectrii.
Exist i alte metode de identificare cum ar fi cuplarea unei enzime

cu un anticorp (test imunoenzimatic). n prezena substratului
enzimei fiecare situs catalitic va transforma mii de molecule
permind detectarea unei cantiti infinitezimale de antigen.
Metoda cea mai simpl de obinere de anticorpi const n
efectuarea de injecii repetate cu un antigen unui animal (iepure,
capr, oarece, etc.). Totui, diferite limfocite B vor reaciona i vor
produce anticorpi diferii. Serul prelevat de la animal va conine un
amestec eterogen de anticorpi (anticorpi policlonali) orientai ctre
diferitele pri (epitopi) ale moleculei injectate. Specificitatea
acestora poate avea de suferit (acelai epitop poate fi purtat de
antigene distincte). Deoarece izolarea acestora este un proces
foarte dificil se utilizeaz alternativa producerii de anticorpi
monoclonali (Cadru 2.3).
Tehnicile de marcare cu anticorpi sau cu radioizotopi
necesit observarea celulelor la microscop, ceea ce limiteaz
cantitatea de celule analizate. O alt tehnologie, citometria n flux,
crete considerabil posibilitile deoarece autorizeaz analiza i
trierea unitar a unui numr mare de celule (Cadrul 2.3).
Cadrul 2.3. Producerea de anticorpi monoclonali

Pentru a palia eterogenitatea anticorpilor secretai n ser de ctre
numeroasele limfocite stimulate (clone) de ctre antigen, Milstei i Kohler au
pus la punct o tehnic destinat producerii de anticorpi pornind de la o singur
clon de limfocite B. Dup imunizarea unui animal cu antigenul ales, sunt
prelevate limfocite din splin. Deoarece aceste celule nu supravieuiesc n
cultur, ele sunt fuzionate cu plasmocite mielomatoase (celule ale liniei
limfocitare devenite nemuritoare datorit malignizrii). Celulele hibride, astfel
obinute (sau hibridomele) posed informaia genetic pentru sinteza
anticorpilor monoclonali adus n sistem de limfocitele B i capacitatea de
proliferare continu (nemurirea) conferit de celulele tumorale. Graie folosirii
unui mediu selectiv, numai celulele hibride sunt capabile s creasc i s
formeze numeroase colonii (clone). Fiecare clon secret un anticorp
particular orientat ctre unul dintre numeroii epitopi ai antigenului ales.
Analiza supernatantelor de cultur permite selecionarea clonelor
productoare ai anticorpilor dorii (adic orientai numai fa de unul dintre
epitopii antigenului). Anticorpii pot fi produi apoi n cantiti mult mai mari prin
cultura repetat a hibridomelor (Figura 2.16).

Figura 2.16. Principiul producerii de anticorpi monoclonali
Cadrul 2.4. Citometrie n flux

Aceast metod permite analiza ntr-un timp foarte scurt a unui numr
de parametrii fizici caracteristici unei celule. Celulele n suspensie, antrenate
de un flux de lichid, trec prin faa unui fascicul laser. Aceast trecere prin faa
unei surse luminoase permite msurarea:
i) mrimii celulei i refringenei sale (coninutul n granule
citoplasmatice) graie difuziei luminii;
ii) emisiei de lumin de ctre flourocromii fixai de o celul n cursul
unei incubri prealabile.
Alternativele metodologice oferite de aceast tehnic sunt nenumrate.
Pot fi analizate celule vii, bacterii i organite izolate (mitocondrii). Marea
diversitate a fluorocromilor face din citometria n flux o modalitate de analiz
semi-cantitativ a constituenilor celulari i a funciei acestora. Prin utilizarea
unui substrat artificial cuplat cu un fluorofor a fost posibil msurarea activitii
enzimatice n celul fr a o distruge. Viteza de analiz, aproximativ 1000
celule pe secund, autorizeaz achiziia de date despre un numr mare de
celule i evidenierea evenimentelor rare (1/1000). Celulele care intr n
aceast categorie pot fi triate i colectate i apoi eventual repuse n cultur.
Toate domeniile biologiei folosesc citometrie n flux. La nceput
principala sa utilizare a fost pentru studiul ciclului celular. Astzi exist
numeroase aplicaii n domeniul medical: tiparea celulelor prealabil
transplantului de organe; prognosticul de supravieuire n SIDA (inversarea
raportului limfocitelor T4 i T8), ajutor n diagnosticul cancerului, etc.

2.5. Tehnici ADN Clonarea ADN este o tehnica destinat producerii de

recombinat cantitii mari dintr-o molecul de ADN specific. Segmentul care
trebuie sa fie clonat este nti introdus ntr-un vector ADN care
servete drept vehicul de transport ntr-o celula gazd adaptat,
cum este bacteria E. coli. Vectorul conine secvene care permit
replicarea sa n celula gazd.
Tipuri de vectori
2.5.1.Clonare Plasmidele i fagemidele, care se dezvolt n bacterii, sunt
molecular utilizate foarte mult pentru manipularea fragmentelor de gene
aparinnd oricrui organism.
O plasmid este o molecul de ADN dublu catenar
circular, extra-cromozomial capabil s se replice, independent
de cromozomul bacterian, ntr-o celul, i care poate fi transferat
ntr-o alt celul. Plasmidele sunt molecule mici (de 3 la 10 kpb).
Cele folosite n ingineria genetic au fost foarte mult modificate i
conin o origine de replicare, unul sau mai multe gene care confer
rezisten la antibiotice (factori de selecie) i un situs de
policlonare. Un situs de policlonare reprezint o secven de ADN
care este constituit dintr-o succesiune de secvene recunoscute i
care pot fi decupate de diferite enzime de restricie. n plasmide pot
fi clonate fragmente de pan la 5 kb (Figura 2.17a). Fragmentele
mai mari vor fi greu acceptate n astfel de plasmide.
Fagemide (tip Bluescript) sunt molecule, hibride obinute prin
combinarea unei plasmide cu un fag. Acestea sunt molecule de
ADN dublu catenare, circulare, care pot fi obinute sub form
monocatenar n anumite condiii. Ele posed o origine de
replicare, cel puin o gen de rezisten la un antibiotic, un situs de
policlonare i o secven care provine de la fagul M13 i permite
obinerea formei monocatenare. n general, promotori ai ARN
polimerazei sunt introdui n amonte sau n aval de situsul de
policlonare, pentru a putea produce molecule de ARN prin
transcripie in vitro. n aceti vectori pot fi introduse fragmente de
ADN de pn la 10 kb.
Bacteriofagii i cosmidele sunt folosite ca vectori de clonare,

la fel ca plasmidele, mai ales pentru realizarea de bnci de ADN
genomic i ADNc. Acetia pot integra fragmente cu o talie mai mare
dect plasmidele.
Un bacteriofag este un virus bacterian. Cel mai folosit este
bacteriofagul care are aproximativ 50 kb (Figura 2.17b). ADN su
bicatenar linear posed extremiti coezive (secvenele cos) care
permit circularizarea acestuia n urma infeciei. ADN fagic este
mpachetat ntr-o carcas proteic. n urma infeciei unei bacterii,
particula fagic folosete mainria enzimatic a bacteriei pentru
multiplicare i produce particule fagice identice care la rndul lor
infecteaz alte celule.

Avantajul unui vector fagic fa de un vector plasmidial este

c pot fi clonate fragmente mai mari de ADN (n medie 20 kb).
Cosmidele sunt vectori hibrizi de mrime mic avnd

caracteristicile unei plasmide (origine de replicare, gene de
selecie) i ale unui bacteriofag (secvene cos, necesare pentru
ncapsidarea ADN n particule fagice). Fragmentele de ADN
exogen sunt introduse n cosmide ntre dou situsuri cos. Acestea
pot avea o mrime de aproximativ 35 - 45 kb. n bacterie, cosmida
se replic ca o plasmid, deoarece ea nu mai posed genele
fagului necesare producerii de noi particule fagice.
Vectorul de clonare este decupat cu ajutorul unei enzime de

restricie care recunoate un situs unic (n general plasat la nivelul
situsului de policlonare). ADN exogen din organismul donor este i
el digerat cu aceeai enzim de restricie. Fragmentele obinute
posed i la capete pri ale secvenei ADN recunoscut de ctre
enzima de restricie. Integrarea fragmentului n vector se va realiza
dac aceste dou componente sunt aduse mpreun n prezena
unei ligaze capabil s catalizeze formarea unei legturi covalente.
ntre capete. Plasmida nou obinut circular este numit
recombinat deoarece a integrat insertul. n cazul genomului viral
se nlocuiete o regiune din structur cu fragmentul de ADN strin.
Figura 2.17. Exemple de vectori de clonare; a) plasmid; b) fag lambda

2.5.2. Transformare Dup clonarea fragmentelor de ADN ntr-un vector, acesta

de bacterii trebuie integrat ntr-un microorganism n scopul amplificrii,
purificrii sau exprimrii genei pe care o conine. Aceasta integrare
se face prin transformare genetic. Principiul const n integrarea
ntr-o celul bacterian (n general E. Coli) sau eucariot (de
exemplu drojdii) a vectorilor recombinai. Cnd un vector
recombinat este integrat prin transformare genetic ntr-o celul
nou, acesta este capabil s se replice autonom. n acest fel el
multiplic i fragmentul de ADN pe care l conine integrat la nivelul
situsului de policlonare, permind amplificarea fragmentului n
cantitate mare (Figura 2.18).
Pentru a facilita intrarea moleculelor de ADN prin peretele i

membrana plasmatic, bacteriile aflate n faz exponenial de
cretere sunt fragilizate (de ex printr-un tratament cu CaCl2 la
40C). Bacteriile astfel preparate, numite bacterii competente, sunt
puse n contact cu soluia de plasmid care trebuie integrat.
Membrana plasmatic este permeabilizat temporar (formare
tranzitorie de micropori) prin oc termic sau electric. Procesul de
integrare a unei molecule de ADN recombinat n bacterii se
numete transformare. Ulterior, bacteriile sunt cultivate pe un mediu
cu geloz care conine factorul de selecie (de obicei antibioticul)
corespunztor genei de rezisten coninut de ctre plasmid. Prin
aplicarea acestui agent selectiv, se vor dezvolta numai bacteriile
care au integrat plasmida. Astfel, plasmida recombinat se va
multiplica n celul, amplificnd n acest mod i secvena clonat.
Figura 2.18. Clonarea unui fragment de ADN i obinerea bacteriilor transformate

Dac o bacterie este transformat cu ajutorul unei plasmide

ea se dezvolt pe un mediu cu geloz pentru a forma o colonie.
Fiecare colonie corespunde unui ansamblu de bacterii identice,
care provin din diviziunea unei singure celule. Meninerea
plasmidei ntr-o bacterie recombinat este asigurat de presiunea
selectiv exercitat de prezenta factorului de selecie n mediul de
cultur (Figura 2.18). Dac se realizeaz clonarea ntr-un
bacteriofag pe mediul de cultur tapisat cu bacterii se vor obine
plaje de liz. Fiecare plaj conine milioane de particule de fag
purtnd o singura copie a aceluiai fragment de ADN eucariot.
Cnd este atins nivelul de amplificare dorit, celulele sunt
recoltate, ADN este extras i ADN plasmidial recombinat este uor
separat de cromozomul bacterian mult mai mare. Plasmidele
recombinate izolate pot fi tratate cu enzima de restricie utilizat
pentru producerea lor i pot fi eliberate segmentele ADN clonate de
restul de ADN, care a servit drept vector.
Un avantaj important al clonrii l constituie faptul c se
produce o cantitate mare de ADN particular i c este posibil
separarea de fragmente diferite plecnd de la acelai amestec.
Pentru a detecta prezena unei secvene de ADN particulare se
analizeaz (screening) toate plcile de cultur care conin
coloniile bacteriene (sau plajele de fagi) combinnd tehnica de
obinere a replicilor i hibridizarea in situ. De pe aceeai plac de
cultur se pot obine mai multe replici care conserv intact poziia
coloniilor bacteriene n toate plcile. Una din replici este apoi
utilizat pentru a localiza secvena ADN de interes (Figura 2.19).
Aceasta tehnic necesit liza celulelor i fixarea ADN la suprafaa
unui filtru. O sond ADN marcat este folosit pentru detectarea
secvenei de interes. Hibrizii marcai sunt localizai prin
autoradiografie. Este posibil selecionarea reprezentanilor viabili
corespunztori clonelor sau plajelor de liz identificate i cultivarea
bacteriilor sau fagilor selecionai. n acest mod se realizeaz
izolarea n stare pur i n cantitate mare a fragmentului de ADN
dorit.
TA 2.19. Plasmidele sunt importante n biotehnologie molecular, deoarece

ele sunt:
a) un vehicul pentru inserarea de ADN recombinat n bacterie;
b) situsuri de recunoatere pe catenele ADN recombinat;
c) suprafee pentru sinteza proteic n recombinaii eucariotici;
d) suprafee pentru procesele respiratorii la bacterii;
e) provirusuri incorporate n ADN gazd

Figura 2.19. Identificarea coloniilor i plajelor de liz care conin

fragmente de ADN recombinat de interes
2.5.3. Enzimele de Enzimele de restricie sunt endonucleaze care scindeaz

restricie ADN dublu catenar ntr-un mod definit i reproductibil la nivelul unor
situsuri specifice, indiferent de originea sa.
Ele au permis nlturarea principalului obstacol tehnologic
privind manipularea ADN, deoarece pot reduce ntr-o maniera
reproductibil, un genom ntreg la o serie de fragmente
caracteristice pentru o specie dat. n acest fel genele sau pri ale
genelor devin entiti fizice izolabile. Enzimele din aceast
categorie sunt responsabile pentru fenomenul de restricie de unde
i numele lor.
TA 2.20. Care este sursa principala de enzime de restricie?

a) celulele care recunosc componentele self ; b) tehnologia ADN
recombinant; c) virusurile; d) celulele din stratul epitelial; e) bacteriile
Fenomenul de restricie: multiplicarea bacteriofagilor n

bacterii n mii de exemplare duce la liza acesteia. Exist situaii n
care procesul nu se produce fiind imposibil multiplicarea
bacteriofagului.

Una dintre explicaiile acestui comportament bizar este

procesul de restricie care presupune distrugerea ADN fagic imediat
dup intrarea sa n bacterie de ctre un sistem de protecie format
din enzimele de restricie. Bacteriile rezistente la infecia cu virus au
capacitatea de a metila propriul ADN la nivelul unor adenine sau
citozine pentru a-l proteja de aciunea enzimelor de restricie.
Cele mai utilizate sunt enzimele de restricie de tip II care
recunosc situsuri de restricie specifice de 4, 6 sau 8 perechi de
baze. Secvenele recunoscute sunt ntotdeauna palindromice.
Aceasta nseamn c secvena este identic la nivelul celor doua
catene cnd se citete n sensul 5-3. Deci, fragmentarea se
efectueaz pe cele dou catene la nivelul aceluiai situs.
Enzimele de restricie de tip II pot da natere la dou tipuri
de fragmente: i) cu capete drepte, egale, n situaia n care enzima
scindeaz exact la acelai nivel pe cele dou catene ADN; ii) cu
capete coezive sau colante, cnd tierea la nivelul celor dou
catene se face decalat.
Figura 2.20. Tipuri de tieturi
TA 2.21. Cum i protejeaz o celula bacterian ADN propriu de enzimele

de restricie?
a) prin adugarea de grupri metil la adenin i citozin; b) utiliznd
ADN ligaza pentru a fixa ADN bacterian ntr-un cerc nchis; c) adugnd
histone pentru a proteja ADN dublu catenar; d) prin formarea capetelor coezive
sticky ends ale ADN bacterian pentru a mpiedica enzima de la ataare; e)
prin adugarea de legturi fosfodiesterice covalente la ADN bacterian.
TA 2.22. Ce este un vector de clonare?

a) enzima care rupe ADN n fragmente de restricie; b) o sond ADN
utilizat pentru a localiza o gena particular n genom; c) un agent, ca de
exemplu - un plasmid, utilizat pentru a transfera ADN dintr-o soluie in vitro ntr-
o celula viabil; d) aparatul de laborator utilizat pentru a clona gene; e) capt
coeziv al unui fragment ADN.
TA 2.23. Procesul prin care o bacterie preia un plasmid dintr-o soluie din
mediu se numete: a) transformare; b) transcripie; c) tranziie; d) transducie;
e) translaie

2.5.4. Construirea Obinerea unei bnci de ADN genomic este necesar pentru
unei bnci de ADN caracterizarea unei secvene genomice particulare pentru stabilirea
genomic unei hri fizice a unui genom sau pentru secvenializarea unor
regiuni sau a ntregului genom.
O banc de ADN genomic reprezint un ansamblu de vectori
recombinai fiecare coninnd un fragment diferit din genomul
speciei studiate. Principiul const n: i) izolarea ADN genomic de la
specia de interes; ii) digerarea ADN cu o enzim de restricie care
permite obinerea de fragmente de restricie de mrime compatibil
cu vectorul ales; iii) clonarea fragmentelor ntr-un vector de clonare;
iv) integrarea vectorilor recombinai n microorganisme n scopul
multiplicrii acestora (Figura 2.21). De exemplu, vectorii fagici sunt
mult mai bine adaptai clonrii unei secvene genomice particulare
n timp ce cosmidele i vectorii YAC (Yeast Artificial Chromosomes)
sunt alei n scopul caracterizrii genomului. Banca obinut este
constituit din milioane de clone recombinate.
Deoarece ADN genomic este identic n toate celulele
aceluiai individ, proveniena tisular a acestuia nu are importan.
Figura 2.21: Schema simplificat a realizrii unei bnci genomice
TA 2.24. Fragmentele ADN specifice ale unei bnci genomice sunt coninute n: a)
plasmide recombinate n bacterii; b) ADN viral recombinat; c) Cromozomi eukariotici; d)
a i b; e) a, b i c.

2.5.5. Construirea Populaiile de ARNm prezente ntr-un anumit esut sunt

unei bnci de ADNc caracteristice pentru acesta. Manipularea ARNm este un proces
foarte delicat (cantitate mic, sensibilitate la nucleaze) i este
necesar transformarea moleculelor de ARNm n ADN dublu
catenar uor de manipulat i adaptat tehnicilor de clonare n vectori
bacterieni. O banc de ADNc (ADN complementar) este
reprezentativ pentru populaiile de ARNm prezente ntr-un anumit
esut i unui stadiu determinat al dezvoltrii acestuia. O banc de
ADNc poate fi considerat ca o fotografie instantanee a
populaiilor de ARNm reprezentate.
Construirea unei bnci de ADNc necesit urmtoarele etape:
i) purificarea ARNm poliadenilat aparinnd organului (prin
cromatografie de afinitate pe coloane de poliT); ii) copierea acestor
molecule de ARNm sub form de ADN monocatenar complementar
sub aciunea unei revers-transcriptaze inverse; iii) eliminarea
specific a ARNm prin tratament cu ribonucleaz H sau hidroxid de
sodiu; iv) sinteza celui de al doilea bra de ADN prin aciunea unei
ADN polimeraze; v) legarea de oligonucleotide (adaptori) pentru a
crea situsuri de restricie; vi) clonarea ntr-un vector (plasmid sau
fag); vii) integrarea vectorilor recombinai ntr-o bacterie (Figura
2.22). Vectorii de clonare folosii pentru construirea unei bnci de
ADNc sunt plasmide sau fagi.
Figura 2.22: Schema etapelor realizrii unei bnci de ADNc (ARNm)
TA 2.25. Prima etap n prelucrarea moleculelor de ARNm pentru construirea

unei bnci de ADNc se realizeaz utiliznd: a) ARN polimeraza pentru a transcrie gena;
b) o enzima de restrictie pentru a rupe gena n segmente mai scurte; c) revers-
transcriptaza pentru a obine ADN complementar monocatenar; d) ADN polimeraza
pentru obine produsul polipeptidic; e) ADN ligaza pentru a uni fragmentele de ADN care
codifica pentru un polipeptid particular.

2.5.6. Reacia PCR Reacia PCR (Polymerase Chain Reaction) este o tehnic
folosit pentru amplificarea direct a unor secvene de ADN ale
cror extremiti 3 i 5 sunt cunoscute. Amplificarea se realizeaz
prin repetarea reaciilor de alungire (sintez) n prezena unei ADN
polimeraze i a unor oligonucleotide specifice (primeri)
Descoperirea bacteriilor termofile care produc ADN polimeraze
termostabile a fcut posibil automatizarea procesului i
dezvoltarea exploziv a aplicaiilor acestei tehnici.
Principiul de amplificare in vitro se bazeaz pe repetarea a
trei etape: i) denaturarea celor dou catene de ADN la temperatur
ridicat (n jur de 950C) pentru a obine molecule de ADN
monocatenare; ii) hibridizarea oligonucleotidelor (primerilor)
complementare pentru o secven de ADN monocatenar int
(temperatura ntre 400C - 650C pentru hibridizarea corect a
primerului); iii) reacia de alungire (sintez) realizat de ctre o
ADN polimeraz termostabil (Taq polimeraza) plecnd de la
primeri (temperatur optim de 720C) (Figura 2.23).
Produii obinui n urma acestui prim ciclu sunt din nou

denaturai prin nclzire i un nou ciclu compus din aceleai faze se
repet. Fiecare caten nou sintetizat reprezint o nou matri
pentru polimeraz. La fiecare ciclu, numrul de copii ale
fragmentului de ADN se dubleaz creterea numrului produilor
de reacie fiind exponenial. Numrul optim de cicluri este de 30-
35. Tehnic de PCR a revoluionat literalmente cercetrile n
biologia molecular i are numeroase aplicaii att n clonarea i
studiul expresiei genelor ct i n cercetarea polimorfismului
genetic.
Figura 2.23. Prezentare schematic a principiului reaciei PCR i verificare

produilor prin electroforez

Aplicaiile tehnicii PCR sunt multiple:

i) pentru identificarea mutaiilor prezente n ADN de la
eucariote (mutaii sau deleii responsabile de apariia deficienelor
congenitale, cancer, etc.;
ii) clonarea unor gene specifice;
iii) amplificarea de fragmente de ADN genomic rare;
iv) taxonomie i filogenie molecular;
v) depistarea maladiilor genetice: diagnostic prenatal de
anemie falciform, fenilcetonurie, beta-talasemii, maladii genetice
legate de sex;
vi) obinerea de sonde utilizate pentru stabilirea de amprente
genetice (minisatelii);
vii) depistarea agenilor patogenivirali: HIV, virusul hepatitei
B, leucemiei ATL, papiloma virusuri genitale implicate n apariia de
cancere;
viii) depistarea infeciilor bacteriene: micobacterii
(Micobacterium tuberculosis), parazii ca toxploasmele;
ix) depistarea oncogenelor implicate n numeroase tipuri de
cancer;
x) corelarea maladiilor autoimune cu tiparea HLA i cu
diabetul insulino-dependent;
xi) analiza ADN din diferite fosile;
TA 2.26. Reacia de polimerizare n lan (PCR) este importanta deoarece

permite: a) inserarea genelor eucariote n plasmide procariote; b) ncorporeaz
gene n virusuri; c) formeaz ADN din transcripi ARN; d) formeaz multe copii ale
unui segment ADN int; e) insereaz secvene reglatoare n genele eucariote.
TA 2.27. Reacia de polimerizare n lan (PCR) poate fi utilizat pentru a
amplifica ADN din urmtoarele structuri: a) o fosil; b) o celul fetal; c) un virus;
d) b i c; e) a, b i c.
Utilizai urmtoarele posibiliti pentru a rspunde la ntrebrile de mai jos.

Fiecare alegere poate fi fcut o dat, mai mult dect o dat, sau deloc.
A) enzime de restricie
B) ADN ligaza
C) Revers-transcriptaza
D) ARN polimeraza
E) ADN polimeraza
TA 2. 28. Care enzima fixeaz permanent mpreun fragmentele ADN care

au capete coezive complementare ?
TA 2.29. Care enzima este folosita pentru a forma ADN complementar

(ADNc) din ARNm?
TA 2.30. Care enzima este utilizata pentru a forma copii multiple de gene
prin PCR?
TA 2.31. Care enzime scindeaz moleculele de ADN la situsuri specifice?


R TA 2.1.Sunt cultivate n laborator celulele dintr-un numr mare de organisme i
esuturi din diferite surse pentru scopuri foarte diferite:
- studiul propriu-zis al sistemelor celulare (proliferare, condiii de cretere, evoluia
ciclului celular, controlul creterii celulelor tumorale i modularea expresiei genice);
- n domeniul biologiei dezvoltrii pentru a realiza studii de dezvoltare i difereniere;
- obinerea de plante i animale transgenice;
- studii de citogenetic i genetic molecular;
- studii de citotoxicitate pentru diferite medicamente i substane xenobiotice (ageni
poluani);
R TA 2.4: In vivo i in vitro, aceste dou locuiuni latine, prima semnificnd n
organismul viu i a doua n sticl, sunt folosite pentru a desemna condiiile n care se
deruleaz experimentele biologice. Dei, termenul in vitro nseamn literal n sticl, n
prezent majoritatea culturilor celulare se realizeaz n sau pe plastic. n prezent, culturile
celulare i propun s reproduc in vitro condiiile existente in vivo pentru a permite
celulelor normale i tumorale s creasc n cultur.
Dac termenul in vitro este fr ambiguitate deoarece se refer la experienele care
se realizeaz n afara organismului viu, n general n tuburi de experien, termenul in vivo
se refer la reaciile fiziologice observabile n organismul viu. Se consider c acesta se
folosete abuziv cnd este folosit pentru celule n cultur scoase din contextul
organismului. Acestor locuiuni li se adaug acum termenul in silico care desemneaz
cipurile pe baz de siliciu care sunt utilizate pentru calculatoarele moderne.
R TA 2.5. Limita de rezoluie, adic capacitatea de a distinge dou puncte diferite,
este direct corelat cu lungimea de und a luminii. Limita puterii de rezoluie n lumin
vizibil cu lentile de sticl este situat, n general n jur de 0,2 m. Puterea de separare (de
rezoluie) se poate ameliora diminund lungimea de und , crescnd indicele de refracie
n al mediului situat ntre lamel i obiectiv i crescnd unghiul reprezentat de nclinaia
cea mai mare a razelor care penetreaz n obiectiv n raport cu axa optic a microscopului
R TA 2.6. Da dac eantionul este destul de subire. Dac trebuie s observm un
eantion gros este necesar prelucrarea prin fixare i tratarea cu colorani specifici
R TA 2.7. Microscopia optic este mult mai uor de folosit i necesit instrumente
mult mai simple. Pot fi rezolvate (identificate) uor obiectele cu o mrime de 1 m; limitele
cele mai sczute (joase) de rezoluie sunt de 0,2 m care reprezint limita teoretic impus
de lungimea de und a luminii vizibile. Lumina vizibil nu distruge i trece uor prin ap,
fcnd posibil observarea celulelor vii.
Microscopia electronic este mult mai complicat att n ceea ce privete prepararea
probei (care trebuie s fie extrem de subire i bine ntins, colorat cu metale grele
electrono-dense i complet deshidratat) dar i n ceea ce privete natura instrumentului.
Celulele nu se pot observa vii. Rezoluia microscopiei electronice este mult mai mare, astfel
nct pot fi uor rezolvate/vizualizate obiecte de aproximativ 10 nm. Pentru a evidenia orice
detaliu structural, microtubulii, mitocondria i bacteriile este recomandat utilizarea
(analizarea prin) microscopiei electronice. Totui, este posibil ca aceste structuri s fie
colorate i cu colorani specifici i apoi s se determine localizarea prin microscopie optic.
R TA 2.8: i) o celul vie din piele se vizualizeaz mai bine prin microscopie optic; ii)
o mitocondrie de drojdie prin microscopie optic; iii) o bacterie prin microscopie optic; iv)
un microtubul prin microscopie pe fond ntunecat

R TA 2.9. n biologie tehnicile de separare i de concentrare pot fi grupate n funcie

de i) proprietile fizico-chimice ale moleculei (densitate, mas molecular, sarcin
electric, pH); ii) de proprietile biologice (recunoatere antigen/anticorp sau
enzim/substrat).
R TA 2.10. Fora responsabil de realizarea separrii prin centrifugare i
ultracentrifugare este fora centrifug. Un aparat special numit centrifug realizeaz
separarea preparatelor biologice la viteze de mii sau sute de mii de rotaii pe secund,
producnd acceleraii de mai multe mii de G asupra moleculei de purificat. Sedimentarea
se produce astfel n cteva ore n loc de mai muli ani.
R TA 2.11. n timpul utilizrii centrifugii i mai ales a ultracentrifugii se ridic dou
probleme: dezechilibrul rotorului i degajarea de cldur. Dezechilibrul este rezolvat prin
folosirea de materiale i tehnici performante care permit echilibrarea foarte bun rotorului.
De asemenea automatizarea permite detectarea oricrui dezechilibru i oprirea centrifugii
n timp util. Cea de a doua problem este i mai jenant deoarece sunt separate molecule
biologice foarte sensibile la cldur. O prim msur a fost echiparea centrifugilor i
ultracentrifugilor, cu sisteme de rcire a rotorului i cu pompe de vid extrem de
performante.
R TA 2.12. Da este posibil separarea. n cazul acestei tehnici de ultracentrifugare
densitatea mediului variaz descresctor i continuu de la partea inferioar la cea
superioar a tubului. La sfritul centrifugrii, moleculele vor fi repartizate n benzi n funcie
de densitatea lor.
R TA 2.13. n funcie de suport i de mediul lichid care asigur realizarea separrii
exist mai multe tipuri de cromatografie:
i) cromatografia pe hrtie, cea mai simpl;
ii) filtrarea pe gel care realizeaz separarea moleculelor n funcie de mrimea lor;
iii) cromatografia de schimb ionic care folosete drept suport rini schimbtoare de
ioni;
iv) cromatografia de afinitate care exploateaz nalta specificitate a interaciilor
legturilor biologice;
v) cromatografie pe coloan n faz lichid - HPLC variant a acesteia, una dintre
metodele cele mai eficace de separare a moleculelor;
vi) cromatografia pe coloan n faz gazoas permite separarea celor mai mici
cantiti de materie
R TA 2.14. b
R TA 2.15. Gel filtrarea sau cromatografia de excluziune reprezint o separare n
funcie de mrimea particulelor. Variind diametrul bilelor utilizate pentru separare se pot
ncetini moleculele mari n timp ce cele mici vor trece printre bile i vor migra mai rapid.
Invers, dac folosim bile poroase moleculele mici vor penetra n acestea i vor fi ntrziate
n timp ce moleculele care nu intr n bile trec direct i mult mai repede.
Cromatografia pe schimbtori de ioni reprezint o separare n funcie de sarcin care
folosete ca suport rini schimbtoare de anioni sau cationi. Dac folosim bile ncrcate,
cu sarcini negative (schimbtori de cationi) sau cu sarcini pozitive (schimbtori de anioni)
moleculele (de exemplu proteine) care poart sarcini opuse se vor fixa n timp ce restul vor
migra. Cnd toate moleculele vor fi fixate, se crete progresiv fora ionic a solventului,
moleculele se vor separa de bile unele dup altele, fiecare n funcie de propria for ionic,
i vor trece prin faa detectorului
Cromatografia de afinitate exploateaz specificitatea deosebit a interaciilor
biologice.
Grefarea prin legturi covalente a unui ligand la suprafaa unei matrice inerte
(suport) permite purificarea unei proteine dintr-un amestec. Interacia enzim-substrat n

care substratul servete de ligand favorizeaz purificarea enzimei care recunoate

substratul la nivelul situsului su catalitic. De asemenea, anticorpii specifici pot servi drept
liganzi pentru a reine pe o coloan proteina fa de care au fost produi. n toate cazurile,
dup reluarea celorlalte molecule, proteinele fixate sunt detaate schimbnd eluantul astfel
nct s rup interaciile protein-ligand.
Cea mai eficient este cromatografia de afinitate deoarece se bazeaz pe
specificitatea de recunoatere iar factorul de purificare poate atinge 10 000 la o singur
trecere prin coloan.
R TA 2.16. Se propune realizarea unui eseu care va fi prezentat tutorelui
R TA 2.2: c; R TA 2.3: a, b i d; R TA 2.17. e; R TA 2.18. b; R TA 2.19: a; R TA 2.20:

e; R TA 2.21: a; R TA 2.22: c;
R TA 23: a; R TA 24: d; R TA 25: c; R TA 2.26: d; R TA 2.27: e; R TA 2.28: b; R TA
2.29: c; R TA 2.30: e; R TA 2.31: a.

V 2.1. Liniile celulare prezint o serie de proprieti care le confer avantaje de

cultivare. Care dintre afirmaiile de mai jos sunt false:
a) manifest viteze mari de cretere la densiti celulare mari; b) prezint necesiti mici
pentru ser; c) prezint instabilitate cromozomial mai mare; d) sunt capabile de cretere n
suspensie; e) pot fi meninute cu uurin n medii simple.
- V 2.2. Mediile folosite pentru culturile de celule eucariote sunt mai complexe dect
cele pentru procariote i conin: a) aminoacizi; b) factori de cretere specifici; c) nucleotide
purinice i pirimidinice; d) ser fetal de viel; e) acizi grai eseniali. Care dintre urmtoarele
afirmaii sunt adevrate?
V 2.3. Care sunt principalele aplicaii ale culturilor de celule i esuturi.
V 2.4. Prezentai principale avantaje ale utilizrii tehnicilor microscopice i discutai
comparativ principiile microscopiei de fluorescen i electronic.
V 2.5. Care sunt tehnicile microscopice cele mai adaptate obinerii unei rezoluii mai
bune pentru a vizualiza: a) o celul vie; b) o mitocondrie de drojdie; c) o bacterie; d) un
microtubul;
V 2.6. Ultracentrifugarea este o tehnic foarte eficient care permite o foarte bun
separare a particulelor de mrime mic deoarece: a) aparatele folosite sunt performante; b)
particulele se pot nclzi n timpul separrii; c) posibilitatea folosirii unui gradient de
densitate n tuburi; d) aparatele sunt prevzute cu sisteme de vid care permit o separare n
funcie de sarcin; e) orice particul sedimenteaz n timp sub aciunea forei de gravitaie.
V 2.7. Prezentai principiul separrilor folosind fora centrifug i soluiile tehnice
utilizate pentru a obine rezultate ct mai bune.
V 2.8. Analizai comparativ principiile urmtoarelor tipuri de cromatografie: gel
filtrare, cromatografia pe schimbtori de ioni i cromatografia de afinitate. Care dintre
aceste considerai c este mai eficient?
V 2.9. Care sunt tehnicile experimentale pe care le vei folosi pentru a separa cu
succes o protein care este prezent n mai multe compartimente celulare. Credei c este
posibil o purificare avansat a acesteia? A Dac da, facei o schem a principalelor etape
care trebuie parcurse.
V 2.10, Electroforeza SDS-PAGE separ proteinele pe baza: a) secvenei de
aminoacizi din captul amino terminal; b) proporiei de aminoacizi hidrofobi; c) sarcinii
electrice a ntregii molecule; d) capacitii de a forma structuri secundare i teriare
caracteristic proteinelor; e) masei moleculare.
V 2.11. Moleculele mari de ADN sunt separate mai bine pe: a) gel de agaroz; b) gel
de poliacrilamid; c) pe membrane de hrtie; d) prin SDS-PAGE; e) prin cromatografie de
afinitate
V 2.12. Putem realiza un experiment de clonare dac avem la dispoziie: a) separai
toi cromozomii unei celule; b) plasmide; c) secvene nucleotidice necodificate; d) bacterii;
e) b i d
V 2.13. Care dintre enzimele de mai jos a fost utilizata pentru a produce molecula
din figura alturat? a) ligaza; b) transcriptaza; c) o enzima de restricie; d) ARN
polimeraza; e) ADN polimeraza

V 2.14. Se presupune c ncercai s clonai o gena ntr-o plasmid i un coleg v

ofer un preparat de ADN tiat cu enzima de restricie X. Gena pe care dorii s o inserai
posed la capete situsuri de clivare cu enzima de restricie Y. n laborator avei o plasmid
care posed un singur situs pentru Y, dar nu i pentru X. Care va fi strategia pe care o vei
alege pentru a rezolva problema: a) inserai fragmentele tiate n plasmid cu direct X, fr
clivarea plasmidei; b) tiai plasmida cu enzima de restricie X i inserai n plasmid
fragmentele tiate cu Y; c) tiai din nou ADN cu enzima de restricie Y i inserai aceste
fragmente n plasmida tiat cu aceiai enzim; d) clivai plasmida de dou ori cu enzima
de restricie Y i legai dou fragmente la capetele fragmentelor de ADN uman tiat cu
enzima de restricie X; e) clivai plasmida cu enzima X i apoi inserai gena n plasmid
V 2.15. Care dintre enzimele enumerate de mai jos sunt necesare pentru a produce
ADN recombinat?
a) endonucleaza i transcriptaza; b) enzime de restricie i ligaza; c) polimeraza i
ligaza; d) transcriptaza i ligaza; e) ADN polimeraza i topoizomeraza.
V 2.16. Ce este un vector de clonare?
a) enzima care rupe ADN n fragmente de restricie; b) o sonda ADN utilizat pentru a
localiza o gena particular n genom; c) un agent, de exemplu - o plasmid, utilizat pentru
a transfera ADN dintr-o soluie in vitro ntr-o celul viabil; d) aparatul de laborator utilizat
pentru a clona gene; e) capt coeziv al unui fragment ADN
Utilizai informaiile urmtoare pentru a rspunde la ntrebrile de mai jos.
O gena eucariot are capete coezive produse de ctre endonucleaza de restricie

EcoRI. Gena este adugat unui amestec care conine EcoRI i o plasmid bacterian care
poarta dou gene, una pentru rezisten la ampicilina i alta pentru tetraciclina. Plasmidul
are un situs de recunoatere a EcoRI localizat n gena rezistenta la tetraciclina. Amestecul
este incubat timp de cteva ore i apoi este adugat mediu de cretere bacterian. Bacteriile
vor fi lsate sa creasc peste noapte i apoi sunt nsmnate pe o plac Petri utiliznd o
tehnica care produce colonii izolate. Probe prelevate din aceste colonii sunt apoi crescute
n medii diferite: mediu nutritiv plus ampicilin; mediu nutritiv plus tetraciclin, mediu nutritiv
cu ampicilin i tetraciclin, mediu nutritiv fr antibiotice.
V 2.17. Bacteria care conine plasmida obinut prin clonare molecular va creste n:
a) numai mediu nutritiv; b) numai mediu nutritiv cu tetraciclin; c) numai mediu
nutritiv cu tetraciclin i ampicilin; d) mediu nutritiv i mediu nutritiv cu tetraciclin i
ampicilin; e) mediu nutritiv i mediu nutritiv cu ampicilin;
V 2.18. Bacteria care conine plasmida, dar nu gena eucariot, va crete n:
a) mediu nutritiv cu ampicilin dar nu n mediu nutritiv cu tetraciclin i ampicilin; b)
mediu nutritiv care conine antibiotice; c) mediu nutritiv cu tetraciclin dar nu conine
ampicilina; d) toate cele patru tipuri medii e) mediu nutritiv care nu conine antibiotice
V 2.19. De ce a fost inserat gena n plasmid nainte de a fi pus n amestec cu
bacteria ?
a) plasmida acioneaz ca un vector pentru a introduce gena n bacterie; b) plasmida
conine regiuni de control necesare pentru replicarea genic; c) gena eucariot conine
introni care trebuie ndeprtai din plasmid; d) numai a i b sunt corecte; e) a, b i c sunt
corecte
V 2.20. n care mediu va crete bacteria care nu preia nici o plasmid?
a) numai mediu nutritiv; b mediu nutritiv i mediu nutritiv cu tetraciclin; c) mediu
nutritiv i mediu nutritiv cu ampicilin; d) mediu nutritiv cu tetraciclin i cel cu ampicilin; e)
toate patru mediile

2.8. Bibliografie

Masson, Paris 1997, Chapitre 2: Mthodes dexploration de la cellule
Book Contents
10. Biologie Molculaire et Cellulaire, Exercices et corriges, Nathan Universit,
1994
11. Biochimie, gntique, Biologie molculaire, J Etienne, 3eme dition, Masson,
1996
Elsevier, 2004, Chapitre 5: Techniques de recherche
edition, ASM Press, 2004, Chapter 1: An overview of cells and cell research
Boeck Universit, 1998, Chapitre 17 : Techniques de biologie cellulaire et moleculaire
Roberts, P. Walter, Garland Publishing Inc, 2004, Chapter 1: Introduction to Cells.
Edition, Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 20: DNA technology and
Genomics
Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 20: DNA technology and Genomics
19. http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/lafont/sommaires/bc.htm, Mthodes physiques
de sparation et danalyse et mthodes de dosage des biomolcules
Darnell, 4th edition, 2000, Freeman and Company, Chapter 1: Life Begins with Cells
cellulaire
Biology Book:

Ciclul i diviziunea celular
Unitatea de nvare 3
Ciclul i Diviziunea Celular
pag
Cuprins 74
Introducere 75
3. 1. Ciclul celular 78
3.1.1. Interfaza 79
3.1.2 Mitoza 80
3.1.3. Dinamica citoscheletului n timpul ciclului celular 84
3.1.3.1.Microtubulii 84
3.1.3.2. Filamentele de actina 89
3.1.3.3. Filamente intermediare 90
3.1.3.4. Formarea fusului mitotic 94
3. 2. Mecanisme biochimice de control al ciclului celular 97
3.2.1.Cicline 101
3.2.2. Punctele de control 102
3.3. Meioza 104
3.3.1. Originea gameilor 104
3.3.2. Derularea meiozei 105
3.3.2.1. Diviziunea reducional (sau mitoza heterotipic) 105
3.3.2.2. Diviziunea ecuaional 106
3.3.2.3. Comparaie mitoz meioz 108
3.4. .mbtrnirea celular 108
3.4.1. Reorganizarea genomului nuclear - aberaii cromozomiale 109
3.4.2. Scurtri ale telomerilor i senescena replicativ 109
3.4.3. Aspecte energetice i biochimice 110
3.5. Moarte i nemurire celular 111
3.5.1. Necroza 111
3.5.2. Apoptoza i moartea celular programat 111
3.5.3. Imortalitatea celular cancer 114
3.5.3.1. Imortalitatea celular 114
3.5.3.2. Proprietile celulei tumorale 115
3.5.3.3. Mutaiile i imortalizarea celulelor 115
3.5.3.4. Virusurile ca ageni transformani 116

Introducere
n cadrul acestei uniti de studiu v vei putea familiariza cu principalele

noiuni privind ciclul celular i etapele sale, mecanismele biochimice de control ale
acestuia, formarea celulelor sexuale n urma meiozei, mbtrnirea celular, moarte
i imortalitate celular.
Ciclul celular reprezint totalitatea modificrilor pe care le sufer celulele n

decursul vieii i care poart responsabilitatea diviziunii i multiplicrii celulare.
Diviziunea celular este rezultanta cariochinezei (diviziunea mitotica a

nucleului) dirijat de fusul mitotic i a citocinezei (diviziunea citoplasmei) datorat
inelului contractil. Aceste dou entiti, fusul mitotic i inelul contractil sunt rezultatul
unui rearanjament al citoscheletului care confer celulei interfazice arhitectura sa
intern.
Rspunsul celulei la un stimul exterior converge cel mai adesea ctre

parametrii de reglare ai ciclului celular. Punctele de control ale ciclului celular au fost
considerate etape n care toate evenimentele specifice ale fazei precedente
trebuiesc ndeplinite.
Reproducerea sexuat necesit fuziunea a doi gamei provenii de la cei doi

prini. Mecanismul fuziunii celor doi gamei, i deci a nucleelor lor, duce n timpul
fecundrii la o nou celula diploid. Acest lucru este posibil doar dac gameii,
contrar celulelor somatice cu 2n cromozomi, sunt haploizi i conin n cromozomi. n
timpul elaborrii gameilor, gametogeneza, celulele stem germinale diploide sufer o
diviziune reducional, meioza, proprie celulelor reproductoare. n timpul meiozei
are loc doar o duplicare a ADN dup care celula se angajeaz n dou diviziuni
succesive.
mbtrnirea biologic este un proces fundamental care se observ la aproape

toate fiinele vii. Este caracterizat printr-o deteriorare progresiv a sistemelor
biologice, conducnd la creterea mortalitii care este corelat cu naintarea n
vrst. nelegerea mecanismelor senescenei este de interes particular, pentru c
are implicaii largi att pentru om ca individ ct si pentru societate.
Multiplicarea celulelor este reglat cu grij ca rspuns la nevoile specifice ale

corpului. La animalele tinere, multiplicarea celular este mai crescut dect moartea
celular, astfel nct animalele tinere cresc n mrime. La aduli procesul de formare
i de moarte celular este echilibrat pentru a produce o stare staionar.
Ocazional, controalele perfecte care regleaz multiplicarea celular sunt

dereglate. Celula n care apare aceast dereglare ncepe s creasc i se divide ntr-
un mod neregulat, fr a ine seam de necesitile organismului. Descendenii unei
celule care motenesc o capacitate de proliferare crescut, fr a rspunde
procesului de reglare, duc la formarea unei clone de celule capabile s se multiplice
la infinit. n final, aceste celule nedorite pot forma o mas de celular numit tumor.
Proiectul pentru nvmntul Rural 75

Obiective generale
nelegerea principiilor generale de organizare i diviziune

celular;
Explicarea proceselor i fenomenelor de mbtrnire i

imortalitate celular n corelaie cu starea de sntate i
boal
Obiective specifice
Identificai:
i) etapele de control ale ciclului celular i s putei recunoate actorii

implicai n acestea;
ii) funciile celulare care necesit intervenia direct a citoscheletului;
iii) asemnrile i deosebirile dintre mitoz i meioz;
iv) aspectele genetice i biochimie ale procesului de mbtrnire;
v) modalitile de evoluie a proceselor de apoptoz i proliferare
celular.
Cunoatei:
i) etapele ciclului celular cu identificarea modificrilor pe care le

sufer celula pe parcursul derulrii acestuia;
ii) proteinele citoscheletului i modul lor de asamblare n filamente i
tubuli (fenomenul de polimerizare/depolimerizare i dinamismul filamentelor
de actin i microtubuli);
iii) proteinele motrice i modul lor de interacie cu actina i tubulina;
iv) etapele meiozei i rezultatele acestora;
v) modificrile care apar n organizarea celular n timpul mbtrnirii;
vi) modificrile care apar n organizarea celular n timpul apoptozei
i procesului de proliferare tumoral.


prezentate.
Unele dintre testele de autoevaluarea sunt ntrebri urmate
corect.
Rspunsurile i comentariile la testele de autoevaluare sunt
prezentate la sfritul unitii, nainte de lucrarea de verificare 3.
Lucrri de verificare notate de tutore

Gradul de dobndire a conceptelor i procedurilor prezentate
din lucrarea final sunt de acelai tip ca i testele de autoevaluare
pe care le vei rezolva pe parcursul parcurgerii materialului unitii 3.
verificare 3 va fi realizat de tutore la termenul stabilit de comun
parcurs. Cele 30 de ntrebri sunt echivalente i vor fi notate cu 2
Materialul conine patru cadre suplimentare i 36 de figuri
care prezint informaii menite s ntregeasc sau s clarifice
noiunile prezentate. Acestea nu sunt opionale. Un rezultat bun la
lucrarea de verificare este clar condiionat de parcurgerea cu
nelegerea figurilor. Dac nu reuii s rezolvai cu succes testele
de autoevaluare n momentul ntlnirii lor pe parcursul parcurgerii
testului v recomandm s reluai ntregul material si apoi s
revenii asupra rezolvrii testelor. Unele dintre testele de
autoevaluare sunt foarte simple i direct corelate cu textul parcurs,
rspunsul lor fiind evident n text. O serie de teste necesit o bun
integrare a cunotinelor obinute i necesit parcurgerea ntregii
uniti. Enunurile testelor au i ele rolul lor n fixarea cunotinelor i
n formarea unei viziuni de ansamblu asupra materiei.

3. 1. Ciclul Axioma lui Rudolf Virchow orice celul provine dintr-o

Celular celul ilustreaz conceptul de multiplicare celular prin diviziune.
Observaia microscopic relev existena fazei M sau mitozei care
precede diviziunea n dou a unei celule. n cursul mitozei,
cromozomii se condenseaz i se aliniaz la ecuatorul celulei.
De ce se divide o celul?
Mitoza asigur ndeplinirea mai multor fenomene:
i) dezvoltarea embrionar; ii) creterea general a organismelor,
de la natere pn la stadiul adult; iii) creterea continu a anumitor
organisme i/sau organe (arborii, prul, dinii la rumegtoare,
unghiile, etc.); iv) rennoirea celulelor moarte (celulele cutanate,
hematiile, etc.); v) asigur cicatrizarea diferitelor rni; vi) conserv
identitatea celular n timpul dezvoltrii i rennoirii celulelor din
aceleai organe, esuturi, etc.; vii) apariia dereglrilor de proliferare
la nivelul celulelor somatice de tip cancer.
Ce declaneaz mecanismul ?
Diferite ipoteze:
i) un factor ereditar de mrime: fiecare tip celular are o talie
ereditar care, o data atins i depit, provoac diviziunea;
ii) raportul nucleu/citoplasm: nucleul nu ar putea controla
eficient dect o cantitate limitat de citoplasm; reducerea la
jumtate a volumului de citoplasma ar restabili un control eficient
aducnd raportul n favoarea nucleului care este ntotdeauna
neschimbat ca numr de cromozomi;
iii) raportul membran/citoplasm: suprafaa membranei
citoplasmatice nu ar putea asigura schimburi eficace dect pentru o
cantitate limitata de citoplasma; reducerea la jumtate a citoplasmei
ar aduce raportul n favoarea membranei citoplasmatice;
iv) existena semnalelor citoplasmatice: s-a demonstrat c
un nucleu, care se divide normal ntr-un anumit tip celular,
transplantat n alt citoplasma nu se mai divide.
Descrierea fenomenului Fazele ciclului celular
Filmarea celulelor n diviziune arat c mitoza i citocineza

reprezint un ansamblu de modificri continue. Din motive didactice
care s permit nelegerea fenomenului i reinerea evenimentelor
eseniale, acesta este subdivizat:
i) o faz preparatoare, interfaz, care este i o faz de

repaus care reprezint 90% din ciclul celular, invizibil n
microscopie optic i a crei durat variaz ntre 10 i 24 de ore la
mamifere;

ii) faza de diviziune, format din patru etape funcionale,

vizibile la microscopul optic: profaza, metafaza, anafaza i
telofaza, cu o durat de aproximativ o or. n timpul acesteia
nucleul i citoplasma vor fi divizate, procesele respective fiind
numite cariochinez i citocinez. n esen studiul mitozei este
axat pe cariochinez i n cadrul acesteia pe modificrile suferite de
cromozomi.
3.1.1. Interfaza Mult timp s-a considerat c n celulele aflate n aceast faz
nu se ntmpl nimic. Analiza cantitii de ADN n celulele cu o rat
de diviziune crescut a demonstrat c acesta se dubleaz rapid
nainte de fazele vizibile. Procesul este asigurat de enzima ADN
polimeraza care copiaz catenele parentale matri i sintetizeaz,
pe baza de complementaritate (adenina - timina i citozina -
guanina) dou catene noi omologe. La sfritul interfazei, nucleul,
care conine unul sau mai muli nucleoli, este bine definit i
nconjurat de un nveli nuclear. Centrozomul, unic, este replicat i
microtubulii pornesc din centrozom ntr-o structur stelat numit
aster.
Analitic interfaza se subdivide n trei perioade distincte:

a) faza G1 (gap = interval) care se ntinde ntre faza M i
nceputul fazei de sinteza a ADN. Durata sa variaz de la cteva
ore la cteva zile. Condiioneaz durata ciclului celular i constituie
o perioad critic. Celulele care nu pot trece de aceasta etap intr
n stare quiescent, faza G0. n faza G1 are loc activarea tuturor
elementelor necesare sintezei ADN, graie unui proces de
transcripie susinut;
b) faza S n timpul creia coninutul ADN al unei celule trece

de la 2n (2n cromozomi, fiecare cu o cromatid pe cromozom) la 4n
(2n cromozomi rmne, fiecare cu dou cromatide identice).
Duplicarea cromatinei depinde de starea sa de condensare.
Eucromatina, care corespunde regiunilor de ADN frecvent
transcrise sub form de ARN, este duplicat prima n timp ce
heterocromatina (corespunztoare regiunilor represate) este
duplicat tardiv;
c) faza G2, n general foarte scurt, se caracterizeaz printr-

o cretere mare a volumului celular. Celulele embrionare precoce
posed toate elementele necesare unei sinteze rapide de ADN i
diviziunii. n acest caz, interfaza se reduce la faza S, i determin
diminuarea dimensiunilor celulei n timpul numeroaselor diviziuni
caracteristice acestui stadiu de dezvoltare (Figura 3.1)


TA 3.1. Ce este ciclul celular? Care sunt etapele acestuia ?

Figura 3.1. Etapele ciclului celular cu

evidenierea interfazei i mitozei
3.1.2 Mitoza Mitoza nu se poate derula dect dac cromatina se

condenseaz n entiti distincte (cromozomii) destinate s asigure
o bun repartiie a materialului genetic ntre cele dou celule fiice.
Repartiia se realizeaz n urma activrii fusului mitotic
indispensabil segregrii i n paralel cu condensarea cromozomilor.
Succesiunea etapelor mitozei este urmtoarea:
a) Profaza este o faz de organizare. Membrana

citoplasmatic i modific permeabilitatea i schimburile cu
exteriorul sunt diminuate. n nucleu, nucleolii se deplaseaz la
periferie i dispar. Fibrele de cromatin se condenseaz n spiral.
Exist trei nivele de condensare care conduc la formarea de
cromozomi vizibili la microscopul fotonic. Fiecare cromozom
duplicat are dou cromatide identice reunite printr-un centromer. n
citoplasma, se formeaz fusul de diviziune compus din microtubuli
i proteine care se dispun ntre cei doi centrozomi. Centrozomii se
ndeprteaz unul de celalalt i microtubulii formeaz un fus care
nconjoar nucleul plecnd de la o poziie polar (Figura 3.2).
b) Metafaza este un punct cheie al mitozei. nceputul

su, pro-metafaza, se caracterizeaz printr-o ruptur brusc a
nveliului nuclear. n acest stadiu, cromozomii devin accesibili unei
clase de microtubuli ai fusului mitotic (microtubuli kinetocorieni)
care se leag la cromozomi la nivelul kinetocorilor (structuri
specializate de la nivelul centromerilor care ghideaz migrarea
cromozomilor). n urmtoarea etap nveliul nuclear este distrus n
ntregime; lamina nuclear este dezorganizat i centrozomii se
poziioneaz la polii celulei. Cromozomii formeaz placa metafazic
n urma alinierii pe placa ecuatorial, situat la distan egal de cei
doi poli ai fusului. Se stabilete un echilibru ntre cele dou
cromatide ale cromozomului meninute i orientate ctre polii opui
ai fusului mitotic.

Figura 3.2 Etapele profazei: 1,2- profaza, debut: cromozomii se

individualizeaz. Centrozomul a fost duplicat la sfritul interfazei; 3,4 - profaza,
continuare: cromozomii se subiaz i se curbeaz. Fiecare cromozom este
constituit din dou cromatide unite la nivelul centromerilor kinetocorieni.
Cromozomii sunt foarte scuri i subiri. Centrozomii se vor separa. Cei doi
centrozomi i microtubulii constituie astere care migreaz ctre polii celulei. Cele
dou astere se poziioneaz la polii opui. Microtubulii constituie fusul dispus
ntre cei doi centrozomi ; 5,6 - Profaza, sfrit: membrana nuclear dispare.
Cromozomii nu mai sunt n nucleu, dar sunt prini ntr-o structura care pregtete
dispunerea ecuatorial.
Figura 3.3: Metafaza toi cromozomii sunt plasai la

ecuatorul fusului i constituie placa ecuatorial. Nu
mai exista semnale inhibitoare.
c) Anafaza nu dureaz dect cteva minute i ncepe cnd

centromerul dedublat al fiecrui cromozom se separ n dou,
elibernd astfel cromatidele surori. Fiecare cromatid devine din
acest moment un cromozom ntreg, condus de fus ctre polii
celulei. Cromozomii sunt atrai ctre poli ca urmare a contraciei
microtubulilor. Mitocondriile se concentreaz la nivelul plcii
ecuatoriale iar polii se ndeprteaz unul de altul.
TA 3.2. Cte nivele de condensare fac posibil vizualizarea cromozomilor

metafazici la microscopul optic.

Figura 3.4: Anafaza: toi kinetocorii se

separ. Microtubulii ataai kinetocorilor
se depolimerizeaz i cromozomii urc
spre poli; cromatidele individualizate
ajung la poli urcnd de-a lungul
microtubulilor. Un cerc de fibre
contractile (acto-miozina) apare n jurul
celulei n plan ecuatorial.
d) Telofaza marcheaz sfritul mitozei (telos = fin).

Microtubulii polari alungesc celula i la poli se formeaz noii nuclei.
Cele dou noi nveliuri nucleare se constituie din nveliul nuclear
al celulei mam i regiuni din membrana reticulului endoplasmatic.
Reapar nucleolii, fiecare cromozom i pierde organizarea spaial
compact i reia forma cromatinei iniiale. Mitocondriile, ca i
celelalte organite sunt redistribuite. Mitoza, adic diviziunea unui
nucleu n dou nuclee identice genetic, s-a terminat. Citocineza
(diviziunea citoplasmei) este deja bine conturat deoarece cele
dou celule fiice se vor individualiza la puin timp dup mitoz.
e) Citocineza ncepe la sfritul anafazei cu formarea unei

linii de diviziune prin invaginarea membranei la ecuatorul
membranei celulare, perpendicular pe axul longitudinal al fusului
mitotic. Diviziunea n dou celule fiice se realizeaz graie elaborrii
unui inel contractil, compus dintr-un fascicul de filamente de actin
i miozin, asociate pe faa intern a membranei plasmatice. O
dat cu invaginarea liniei, are loc o pierdere progresiv a
filamentelor la nivelul inelului contractil pn se ajunge la un punct
strns ntre cele dou celule fiice. Procesul se ncheie cu ruperea
acestui punct cnd celula pare s sufere o ntindere centripet care
separ complet celule fiice. n celulele vegetale, care au un perete
celulozic, citocineza apare ca un mecanism centrifug. O structura
dubl, numit plac celular se constituie n timpul telofazei la
ecuatorul celulei mam, plecnd de la centru i fuzionnd cu
peretele celulei-mam astfel nct cele dou celule vegetale noi
sunt formate (Figura 3.5).
TA 3.3. Toate afirmaiile de mai jos sunt adevrate, cu excepia:

a) mitoza produce noi nuclei cu exact aceiai nzestrare cromozomial
ca i nuclei parentali;
b) mitoza poate avea loc fr citocinez;
c) mitoza i citocineza sunt necesare pentru reproducerea asexuat;
d) toate celulele provin dintr-o celula preexistent;
e) fusurile mitotice n celulele procariote sunt compuse din microtubuli

Figura 3.5: Telofaza-citocinez. 1. fibrele se contract. 2. anvelopa nuclear se

reformeaz; 3. Realizeaz un sfincter care restrnge diametrul celulei la nivel
ecuatorial; 4. Celula se mparte progresiv n dou. Membrana nuclear se
reconstituie n jurul fiecrui set de cromozomi. Cromozomii se decondenseaz
progresiv.
TA 3.4. Centromerul este o regiune n care:

a) cromatidele sunt ataate una cu alta;
b) cromozomii metafazici devin aliniai;
c) cromozomii sunt grupai n timpul telofazei;
d) nucleul este localizat anterior mitozei;
e) se formeaz noi microtubuli
TA 3.5. Toate afirmaiile de mai jos privind evenimentele din timpul pro-
metafazei mitozei sunt adevrate, cu excepia:
a) centriolii se deplaseaz ctre polii opui;
b) nucleolul nu mai poate fi observat;
c) nveliul nuclear dispare;
d) cromozomii sunt duplicai;
e) fusul de diviziune este organizat
TA 3.6. De obicei, dar nu ntotdeauna, citocineza urmeaz mitoza. Daca o
celul termina mitoza, dar nu citocineza, care va fi rezultatul?
a) o celul cu un singur nucleu mare;
b) o celul cu concentraii mari de actin i miozin;
c) o celul cu doi nuclei mici anormali;
d) o celul cu doi nuclei;
e) o celul cu doi nuclei, dar cu jumtate din cantitatea de ADN
TA 3.7. Cum reprezint diviziunea celular un liant ntre om i primele
celule eucariote?
TA 3.8. Fuziunea celulelor n G1 i S nu d aceleai rezultate ca fuziunea
celulelor n G2 i S. Care este diferena i cum se explic?
TA 3.9. In timpul crei faze (cror faze) ale mitozei vom ntlni cromozomi
compui din dou cromatide?
a) de la interfaza pn la anafaz;
b) de la G1 a interfazei pn la metafaz;
c) de la metafaz pn la telofaz;
d) de la anafaz pn la telofaz;
e) de la G2 a interfazei pn la metafaz

3.1.3. Dinamica Diviziunea celular este rezultanta cariochinezei (diviziunea

citoscheletului n mitotic a nucleului) dirijat de fusul mitotic i citocinezei (diviziunea
timpul ciclului citoplasmei) datorat inelului contractil. Aceste dou entiti, fusul
celular mitotic i inelul contractil sunt rezultatul unui rearanjament al
citoscheletului care confer celulei interfazice arhitectura sa intern.
Citoscheletul
Citoscheletul formeaz o reea complex de filamente i
tubuli care se ntinde n toat citoplasma. Fa de scheletul osos
care este rigid, citoscheletul este o structur foarte dinamic care
se reorganizeaz continuu n timpul diferitelor evenimente celulare
(migrare, diviziune, etc.).
Toate elementele citoscheletului (filamente de actina,
intermediare i microtubuli) sunt structuri proteice alungite care
rezulta prin polimerizare de structuri monomere.
Trei tipuri principale de structuri proteice constituie
citoscheletul: filamentele de actin (microfilamente), filamentele
intermediare, microtubulii (Figura 3.6 ). Acestea confer forma
celulei i forele necesare migrrii, constituind un real un suport,
proprietate important mai ales pentru celula animal care nu
prezint perete extern. Aceast reea la care se ataeaz
organitele servete i ca mijloc de transport.
Figura 3.6: Componentele citoscheletului: 1. Microtubulii constituie o reea

cu centrul situat la nivelul centrozomului; 2. Filamentele intermediare constituie
o reea poziionat sub membrana nuclear intern i care ocup ntreg spaiul
citoplasmatic constituind lamina; 3. Microfilamentele de actin constituie o
reea localizat n principal sub suprafaa celular.
3.1.3.1.Microtubulii Microtubulii sunt bine reprezentai n celulele eucariote, i mai

ales n celulele nervoase unde reprezint 10-20% din proteinele
totale (Figura 3.7). Microtubulii sunt formai din molecule de
tubulina, heterodimeri rezultai prin asocierea a dou polipeptide
globulare, -tubulin i -tubulin. Un microtubul este o structur
cilindric, goal n interior, constituit din 13 protofilamente.
Protofilamentele sunt compuse dintr-o alternan de subuniti de
i -tubulin, asamblate cu aceeai polaritate (Figura 3.8).

Fiecare dimer rezult din asocierea - i -tubulinei. Exist

diverse forme de tubulin: 6 forme -tubulin i 6 forme -tubulin.
Au mai fost caracterizate forme de , i -tubuline care se gsesc
n structurile centriolare. i -tubulina leag GTP. La -tubulin
GTP este prins n interior i nu poate fi schimbat, n timp ce GTP
legat cu -tubulina este expus la suprafaa i poate fi schimbat
(Figura 3.8).
Figura 3.7. Localizarea celular a citoscheletului (celule neuronale) (prelucrat

dup http://www.cbc.umn.edu/~mwd/courses.html)
Figura 3.8: Componentele microtubulilor (prelucrat dup Molecular Cell Biology, Lodish, et
all. 4th edition, 2000)

Asamblarea microtubulilor
Microtubulii rezultai prin asamblarea paralel a
protofilamentelor sunt structuri polare cu o extremitate (+) capabil
de cretere rapid i o extremitate (-) care tinde s disocieze dac
nu este stabilizat. Stabilizarea extremitilor
(-) se efectueaz graie ancorrii n centrozom, situat n
proximitatea nucleului. Extremitatea (+) este acum liber s-i
creasc dimensiunile prin adugarea tubulinei (Figura 3.9). Aceste
structuri sunt extrem de labile i ntr-o celul funciile microtubulilor
depind n parte de aceasta stabilitate. Un alcaloid de tipul
colchicinei mpiedic polimerizarea microtubulilor (este utilizat
pentru a bloca celulele n diviziune n metafaza), n timp ce taxolul i
stabilizeaz.
Extremitatea cu cretere rapida (plus) este liber, n timp ce
extremitatea minus este, cel mai adesea, prins n centrozom.
Centrozomul este un complex proteic organizat n jurul a dou
structuri numite centrioli. Centriolii conin mai multe forme de
tubulin (, , , i ). n general, centrozomul se gsete
aproape de nucleu i numele su provine de la faptul c reprezint
aproximativ centrul celular. Plecnd de la centrozom se adug
dimerii de tubulina (alpha i beta) ncrcai cu GTP (alfa la polul
minus i beta la polul plus) i se elaboreaz protofilamente, care se
asambleaz unele cu altele lateral, formnd straturi. Acestea se
pliaz progresiv pentru a forma microtubulul, cilindric i rigid (Figura
3.9).
Figura 3.9: Asamblarea microtubulilor (prelucrat dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all.
4th edition, 2000)
TA 3.10. Taxolul este un medicament anticanceros extras din tisa (Texus

sp). n celulele animale, el distruge formarea microtubulilor prin legarea la acetia
i accelerarea asamblrii lor din tubulin. Surprinztor, acesta stopeaz mitoza. n
concluzie, taxolul afecteaz: a) fibrele fusului mitotic de diviziune; b) anafaza; c)
formarea de centrioli; d) asamblarea cromatidei; e) faza S a ciclului celular

Cadru 3.1: Evenimentele ciclului celular depind de

proteinele motrice asociate microtubulilor
Dou familii de proteine motrice interacioneaz cu microtubulii. Kinezinele
care se deplaseaz spre extremitatea plus i dineinele care se deplaseaz spre
extremitatea minus (direcia centrozomului) (Figura 3.10). Proteinele asociate cu
microtubulii (MAP - Microtubule Associated Proteins) i stabilizeaz i intervin n
interaciile lor cu ali compui celulari. Aceste proteine sunt la rndul lor asociate
cu alte proteine. Kinezina este asociat cu o caten proteic uoar care i
permite fixarea i transportul organitelor celulare. Dineina este cuprins ntr-un
complex proteic constituit din ase catene intermediare. Acest complex permite
i el fixarea organitelor. Proteinele motrice utilizeaz energia derivat din
hidroliza repetat a ATP pentru a se deplasa pe microtubul.
Aceste proteine sunt compuse din dou catene grele, fiecare avnd un
cap globular care leag ATP i o coad constituita dintr-o suit de domenii sub
form de bastona. Capul se leag la microtubul i are activitate ATP-azic (de
hidroliz a ATP). Acesta reprezint partea motrice, n timp ce coada, la care se
asociaz catene uoare, interacioneaz cu constituenii celulari al cror
transport specific l asigur (Figura 3.10).
Figura 3.10: Proteine motrice care interacioneaz cu microtubulii (prelucrat

TA 11. De ce credei c este posibil s cunoatem mai bine dinamica

microtubulilor injectai cu tubulina fluorescent dect cu tubulina marcat radioactiv?
Va putei imagina o ntrebare pentru care rspunsul s fie pozitiv pentru utilizare
tubulinei marcata radioactiv?

Funciile microtubulilor:
i) deplasarea organitelor pe microtubuli: dimerii de dinein i

kinezin se pot ataa cu ajutorul cozii la structuri intracelulare cum
sunt neurofilamentele, reticulul endoplasmatic, aparatul Golgi,
membrana citoplasmatic, cromozomii (kinetocori) i veziculele de
secreie. Interacia cu microtubulii prin cap permite deplasarea
acestor structuri celulare. Kinezina asigur transportul ctre
extremitatea plus a microtubulului, transport care se realizeaz
anterograd (de la corp ctre ramificaiile terminale). Dineina va
asigura transportul ctre extremitatea minus, transport retrograd
(Figura 3.10);
ii) micarea cililor: flexiunea fasciculelor de microtubuli

permite micarea cililor i flagelilor. La suprafaa epiteliului
respirator (bronhii i trahee), regiunile cu cili se onduleaz
coordonat, permind deplasarea unidirecional (ctre exterior) a
mucusului bronhic. Micarea este un fenomen activ, aprut dintr-o
recuperare pasiv, n care cilul revine la poziia iniial. Micarea
unui cil se produce prin flexiunea prii centrale, axonema (Figura
3.11 ).
Figura 3.11. Micarea cililor i axonema (prelucrat dup

http://www.cbc.umn.edu/~mwd/courses.html)
Axonema este constituit dintr-o armtur de microtubuli

aranjai n nou dublete periferice care nconjoar un dublet central.
Fiecare dublet periferic este format prin asamblarea a doi
microtubuli care pun n comun trei protofilamente.
n fiecare dublet un microtubul este asociat cu dinein.
Dineina interacioneaz cu dubletul adiacent pentru a determina o
micare de alunecare a unui dublet pe altul. Dineina ciliar are un
domeniu motor care hidrolizeaz ATP pentru a se deplasa pe
microtubul ctre extremitatea minus.

3.1.3.2. Filamentele Actina

de actina n numeroase celule animale este proteina cea mai
abundent (cel puin 5% din masa proteic total). Filamentele de
actina formeaz structuri dinamice care sunt mai mult sau mai puin
stabile prin asociere cu alte proteine. De exemplu, formele
stabilizate se gsesc n microvili i celulele musculare. Actina este
o protein care leag ATP i are doi poli: unul pozitiv i unul negativ
(Figura 3.12).
S-au identificat trei clase de actine: a) -actina n celulele
musculare (striate i netede); b) -actina (patru forme); c) -actina.
Ultimele dou clase se gsesc n celulele ne-musculare.
Diversitatea molecular dintre diferitele tipuri de actin este foarte
mic acestea avnd peste 90% identitate de secven. Proteinele
de legtur cu rol important n polimerizare i stabilizarea
filamentelor de actina pot permite cuplarea filamentelor ntre ele i
iniierea micrii.
Figura 3.12.
Microfilamentele de
actin (prelucrat dup
http://www.infobiogen.fr
/deambulum/index.php)
Polimerizarea actinei
Actina polimerizeaz (n prezena ATP) ntr-o elice strns

de 5-9 nm diametru, formnd un filament flexibil i polar. (Figura
3.12 ). Microfilamentele sau actina F (7nm n diametru) rezult din
polimerizarea actinei G, cea mai abundent dintre proteinele
citoscheletice n numeroase celule eucariote. Filamentele de actin
polimerizeaz ca microtubulii i prezint o extremitate (+) cu
cretere rapid i o extremitate (-) stabil. Pe faa intern a
membranei plasmatice actina se leag la proteine specifice i
confer celulei un suport mecanic necesar executrii micrilor
celulare. n celulele musculare scheletice, filamentele de actin pot
forma structuri stabile.

Rol n citocinez
La sfritul mitozei, dup ce cromozomii s-au separat graie
microtubulilor (telofaza), filamentele de actina formeaz la periferia
celulei i perpendicular pe axul fusului mitotic un fascicul contractil
numit inel contractil. Cnd inelul se contract, el separ celula
mama n dou celule fiice (citocinez).
3.1.3.3. Filamente Filamentele intermediare sunt polimeri proteici rezisteni i

intermediare durabili cu un diametru de 10 nm, prezeni n citoplasma majoritii
celulelor. Se numesc intermediare pentru ca diametrul lor aparent
este cuprins ntre cel al filamentelor de actin (microfilamente) i
microtubuli. n majoritatea celulelor, o reea extensiv de filamente
intermediare nconjoar nucleul i se ntinde pn la periferia
celulei. Sunt legate i cu desmozomii i hemidesmozomii (Figura
3.13).
Polimerizarea filamentelor intermediare
Fa de actin i tubulin, care sunt proteine globulare,

tipurile proteice din constituia filamentelor intermediare sunt
molecule fibroase foarte alungite. Secvena lor n aminoacizi
favorizeaz formarea dimerilor superrsucii (Figura 3.13). n timpul
asamblrii, doi dimeri foarte rsucii se asociaz antiparalel pentru
a forma o subunitate tetramer numit protofilament (3 nm n
diametru). Tetramerii se altur unui filament intermediar n curs de
alungire i opt astfel de protofilamente formeaz filamentul
intermediar cu diametrul de 10 nm (Figura 3.13). Componentele
filamentelor intermediare se gsesc rar n stare liber (monomeri).
Procesul de asamblare sau disociere filamentului este un proces
lent care poate avea loc ntr-un interval de cteva minute, n timp
ce actina i tubulina necesit pentru asociere numai cteva
secunde.
Figura 3.13. Structura filamentelor intermediare (prelucrat dup

http://www.infobiogen.fr/deambulum/index.php)

Componentele filamentelor intermediare
Fa de genele actinei i tubulinei, bine conservate n

evoluie, genele care codific filamentele intermediare sunt diverse
i grupate ntr-o familie de aproximativ 50 de membrii formnd ase
clase diferite (Tabelul din figura 3.14).
Nume Numr GM kDa Asociere cu Expresie

Clasa
de gene predominanta n
1 keratina acid 18 40-65 clasa 2 celule epiteliale
2 keratina bazica 18 51-86 clasa 1 Celule epiteliale
3 desmina 1 53 homopolimer Celule musculare
GFAP Glial Fibrillary
1 50 homopolimer celule gliale
Acidic Protein
periferina 1 57 Homopolimer Neuroni
sinemina 1 190 clasa 3 Celule musculare
vimentina 1 54 homo sau hetero Fibroblaste
4 neurofilament L, M i
3 70-200 L, M sau H neuroni
H
alpha-internexina 1 55 homopolimer neuroni embrionari
5 Toate clasele
lamina 4 62-72 homopolimer
(nucleu)
6 neuroni embrionari,
Nestina 1 230 homopolimer
miocite
Figura 3.14. Componentele filamentului intermediar
Rol n ciclul i diviziunea celular - Susinerea nveliului nuclear
Reeaua de filamente intermediare, polimeri ai laminei, care

dubleaz faa intern a nveliului nuclear, formeaz lamina
nuclear. Aceasta susine nveliul nuclear i d nucleului o form
stabil, n general, globular. n timpul mitozei, lamina nuclear se
dezorganizeaz datorita fosforilrii componentelor (de ctre un
complex kinazic ciclinaB/Cdk1). Dezintegrarea sa permite intrarea
n aciune a unui alt tip de elemente citoscheletice, microtubulii,
care particip la formarea fusului i separarea cromozomilor (Figura
3.15 ).
Foarte stabile n celul, filamentele intermediare au un rol

structural i sunt frecvent asociate cu microtubulii. Proteinele din
constituia lor sunt toate molecule fibroase cu un domeniu central
cilindric. Aceste proteine formeaz homo- sau heterodimeri care se
asambleaz elicoidal. Expresia genic depinde de esut, i de
aceea aceste proteine sunt divizate n mai multe clase: i) vimentina
n celule endoteliale, vase sanguine i fibroblaste; ii) desmina n
celule musculare; iii) keratina n piele i fanere (pr, unghii, etc.)
unde este majoritar; iv) filamente gliale n neuroni i astrocite.

Figura 3.15 : Filamente intermediare (lamina) n nucleu (prelucrat dup

Cadru 3.3. O organizare particular a citosheletului se

observ n celula muscular
Celulele musculare sunt celule n care citoscheletul este foarte bine
elaborat i n care actina reprezint 20% din masa proteic total. Muchiul
este modelul cel mai bine studiat al mobilitii bazate pe actin. Exista dou
tipuri de muchi: striat, cum sunt muchii scheletici i cardiac, i neted, larg
rspndit n organism la nivelul vaselor, tubului digestiv, uterului i bronhiilor.
Muchiul scheletic este constituit din celule gigant, miocitele, (lungi de
civa centimetri pentru c rezult prin fuziunea a mii de mioblaste n cursul
dezvoltrii). n fiecare celul, citoscheletul are numeroase uniti identice
numite miofibrile (Figura 3.16). Fiecare miofibril este constituit dintr-o
juxtapunere liniar de sarcomere, de aproximativ 3 m, unite prin discurile Z.
Filamentele intermediare, constituite din desmin (proteina de 53 kDa),
nconjoar miofibrilele la nivelul discurilor Z i face miofibrilele solidare unele
cu altele i cu membrana celular (gigant). n acest mod se realizeaz
alinierea sarcomerelor (subuniti ale miofibrilelor) care confer muchiului
scheletic aspectul sau caracteristic striat n microscopie optic (Figura 3.17).
n muchiul scheletic, filamentele de actin sunt asociate cu
filamentele de miozina. Miozinele sunt o familie de proteine care convertesc
energia ATP pentru a-i schimba conformaia pentru a se deplasa prin
alunecare n lungul filamentelor de actin. Miozina II, molecul prezent n
muchi, formeaz oligomeri de filamente subiri care, asociate cu filamentele
de actina, constituie structura numit sarcomer care constituie o subunitate a
miofibrilei. Aceasta formeaz o structura cilindric de 1-2 m diametru,
adesea de lungime egal cu celula (Figurile 3.17 i 3.18).
Contracia este rezultatul alunecrii capetelor miozinei n urma
hidrolizei ATP. S-a calculat ca o molecula de ATP permite o deplasare de
11nm. Viteza acestei deplasri atinge 4 m/s i fora dezvoltat este de
aproximativ 3-4 pN.

Diversitatea filamentelor intermediare servete la

identificarea celulelor i, n cazul unei celule tumorale, la
determinarea originii tisulare a tumorii.
Laminele nucleare sunt filamente intermediare ntlnite n
toate celulele unde formeaz o reea (lamina) care ader pe faa
intern a nveliului nuclear. Aceast structur dinamica se
dezasambleaz rapid la nceputul mitozei i se reorganizeaz la
sfritul acestei faze.
Figura 3.16. Organizarea muchiului striat (prelucrat dup

Figura 3.17. Sarcomerul ca unitate de contracie (prelucrat dup Biology, N. A.

Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin
Cummings, 6th Edition, 2002)
TA 3.12. Descriei structura sarcomerului unei microfibrile a muchiului

scheletic i modificrile care se produc n timpul contraciei sale.

TA 3.13. Dou familii de proteine motrice interacioneaz cu microtubulii: a)

kinezinele; b) ciclinele; c) dineinele; d) albuminele; e) a i c sunt adevrate
TA 3.14. Cum definii citoscheletul i care sunt componentele sale principale
TA 3.15. Descriei trei funcii diferite ale microtubulilor i trei funcii ale
filamentelor de actina.
TA 3.16. Comparai structura unui microtubul complet asamblat, a unui filament

de actina si a unui filament intermediar
TA 3.17. Comparai rolurile kinezinei i dineinei citoplasmatice n micarea

cililor.
3.1.3.4. Formarea n cea mai mare parte a celulelor, asterii se organizeaz n

fusului mitotic jurul centrozomilor, care constau ntr-o pereche de centrioli i
materialul pericentriolar asociat acestora. Fiecare aster acioneaz
ca un veritabil centru organizator de microtubuli sau MTOC (pentru
MicroTubule Organizing Center) nainte de sfritul profazei, fusul
mitotic este constituit din doi asteri legai prin civa microtubuli
interpolri.
n profaza tardiv, timpul de njumtire al unui microtubul
scade brusc de la 5 minute la 15 secunde, iar numrul de
microtubuli ce pornesc din centrozom crete considerabil. Astfel se
explic de ce nceputul fazei M este marcat de trecerea rapid a
microtubulilor interfazici relativ lungi i puin numeroi la un numr
mare de microtubuli mici care nconjoar fiecare centrozom i
particip la elaborarea fusului mitotic.
Pentru a discuta asamblarea fusului mitotic este necesar
descrierea organizrii sale. Fusul mitotic metafazic matur este o
structur cu simetrie bilateral n centrul creia sunt localizai
cromozomii flancai de aranjamente formate din microtubuli care
iradiaz spre poli. Structura fusului este determinat prin aciunea a
aproximativ apte tipuri deferite de kinezine i a dineinei
citoplasmatice. Adesea, aceste proteine motrice au funcii diferite.
Deci, fusul este o structur foarte dinamic a crui morfologie se
modific permanent.
Fusul mitotic este constituit din trei clase de microtubuli:
i) microtubuli polari care interacioneaz ntre ei la centrul
fusului i asigur apoi ndeprtarea polilor la fiecare extremitate a
fusului;
ii) microtubuli kinetocorieni, purttori ai cromozomilor;
iii) microtubuli interpolari sau astrali situai la exteriorul
fusului i a cror rspndire din centrozom menine organizarea
intracelular n mitoz i orienteaz forele necesare separrii
polilor.

TA 3.18. Identificai principalele modaliti de modificare a microtubulilor
TA 3.19. Care sunt principalele tipuri de care constituie fusul mitotic?
Placa metafazic, structur tipic aparent imobil, rezult

dintr-un proces de asamblare complex a crui stabilitate este
asigurat printr-un schimb continuu de subuniti de tubulina cu
tubulina liber din celul. Legturile ntre microtubulii polari i
celelalte structuri cum sunt kinetocorii i centrozomii se realizeaz
prin intermediul proteinelor motrice microtubulare (Figura 3.18).
Figura 3.18. Formarea fusului mitotic (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J.

B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6th
Edition, 2002)
Cu toate c lungimea medie a microtubulilor kinetocorieni
este aproximativ constant n cursul metafazei, microtubulii se
modific continuu prin trei modaliti: i) adugare constant de noi
subuniti de tubulin (aproximativ 10 uniti pe secund) la nivelul
extremitii plus prin care sunt ataai de kinetocori; ii) un numr
echivalent de subuniti de tubulin se disociaz lent la
extremitatea minus de la nivelul polilor fusului. Deci, subunitile de
tubulin migreaz permanent de-a lungul microtubulilor
kinetocorieni, de la kinbetocori la poli. iii) toi microtubulii ataai la
fiecare kinetocor i modific lungimea n mod coordonat n urma
oscilaiilor cromozomiale.
Segregarea cromozomilor ntre cele dou celule fiice este un
proces foarte precis. Pentru a atinge acest nivel de precizie,
majoritatea celulelor ntrzie intrarea lor n anafaz pn cnd toi
cromozomii au o orientare bipolar. Acesta reprezint punctul de
control al metafazei la nivelul cruia se detecteaz dac alinierea
cromozomilor i asamblarea fusului au fost corect realizate n
timpul metafazei.

Remodelarea microtubulilor n anafaz

nceputul anafazei care corespunde separrii cromatidelor
surori este unul dintre evenimentele cele mai impresionante din
ntreg ciclul celular. Cromatidele surori se orienteaz ctre polii
fusului (anafaza A) i apoi polii se separ (anafaza B). De
asemenea, anafaza este faza n care fusul mitotic activeaz
cortexul celular pentru prepararea citocinezei.
Deci, anafaza este dominat de micarea ordonat a
cromatidelor surori ctre polii opui ai fusului, care rezult din
aciunea combinat a proteinelor motoare i din modificrile de
lungime ale microtubulilor (Figura 3.20).
Micarea cromozomilor ctre polii opui rezult din dou
mecanisme independente. Primul se desfoar n anafaza A, i i
are originea n micorarea microtubulilor kinetocorieni a cror
depolimerizare la nivelul kinetocorilor se efectueaz cu vitez mare.
Al doilea mecanism se observ n anafaza B i corespunde
separrii polilor prin creterea distanei de separare. Are loc o
polimerizare la nivelul extremitilor distale ale microtubulilor polari,
i o alunecare ctre poli ajutat de proteinele motrice din familia
kinezinei.
Microtubulii astrali se alungesc n toate direciile plecnd de
la poli n timpul anafazei B. n asocierea cu proteinele motrice, ca
dineina, genereaz o for care permite separarea polilor fusului
(Figura 3.19).
Figura 3.19. Remodelarea

microtubulilor n
anafaz(prelucrat dup
Molecular Cell Biology, Lodish, et
all. 4th edition, 2000)

La sfritul anilor 80 a devenit clar c procesele moleculare

3.2. Mecanisme care regleaz cele dou evenimente cheie ale ciclului celular:
biochimice de replicarea cromozomilor i segregarea celular sunt fundamental
control al similare n toate celulele eucariote. Tehnicile de biochimie, genetic
ciclului celular i biologie molecular au fost folosite pentru studiul diferitelor
aspecte ale ciclului celular la eucariote. Acestea au scos n
eviden c replicarea celular este primordial controlat de
realizarea corect a replicrii ADN i mitozei. Controlul suprem al
acestor evenimente l au mai multe protein kinaze heterodimere
mici care sunt compuse dintr-o subunitate reglatoare (ciclina) i o
subunitate catalitic (cdk - kinaza dependent de ciclin). Aceste
kinaze regleaz activitile mai multor proteine implicate n
replicarea ADN i n mitoz asigurnd fosforilarea la nivelul unor
situsuri specifice. Procesul are drept rezultat activarea unor
proteine i inhibarea altora astfel nct s se realizeze coordonarea
activitilor.
Rspunsul celulei la un stimul exterior converge cel mai
adesea ctre parametrii de reglare ai ciclului celular. n condiii
normale, rolul complexelor ciclin/cdk este esenial pentru
nelegerea comportamentului celular. Importana acestei ci de
semnalizare este mai bine neleas cnd constatm c
dezvoltarea tumoral se explic adesea prin dereglare a unor ci
de semnalizare eseniale. Ciclul celular se articuleaz n jurul a
patru faze cu durat inegal (Figura 3.20). n cea mai mare parte a
timpului, celula se afl n faza G1; n cursul fazei S se realizeaz
replicarea ADN; se trece apoi n faza G2 i apoi se realizeaz
mitoza. Faza G1 este cea mai lung i o putem defini ca o faz
control n care celula se asigur c mediul su i permite s se
divid. Aceast etap este extrem de controlat. Un anumit control
se manifest i n faza G2 unde celula se asigur c replicarea
ADN s-a realizat corect.
Figura 3.20. Prezentare sintetic a fazelor ciclul celular (prelucrat dup

Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th edition, 2000)

Concentraiile ciclinelor, subunitile reglatoare ale protein

kinazelor heterodimere care controleaz evenimentele ciclului
celular, cresc i descresc pe durata derulrii acestuia. Subunitile
catalitice (kinazele ciclin dependente n englez Ciclyn-
Dependent Kinases CDKs) nu prezint activitate kinazic dac nu
sunt asociate cu diferite cicline. Ciclinele asociate determin care
dintre proteine vor fi fosforilate de ctre un anumit complex ciclin-
CDK. n figura 3.21 este evideniat rolul celor trei clase majore de
complexe cicline-CDK care controleaz trecerea prin ciclul celular:
fazele G1 i S i complexele cicline-CDK mitotice.
Cnd celulele sunt stimulate s se replice complexele

cicline-CDK din faza G1 sunt primele exprimate. Acestea pregtesc
celula pentru faza S prin activarea factorilor de transcripie care
promoveaz transcripia genelor care codific enzimele necesare
sintezei ADN i genelor care codific ciclinele i kinazele ciclin
dependente din faza S. Activitatea complexelor cicline-CDK din
faza S este iniial controlat de inhibitori. Mai trziu, n faza G1,
complexele cicline-CDK ale fazei G1 induc degradarea inhibitorilor
din faza S prin fosforilarea acestora i prin stimularea cuplrii lor cu
ubicuitin determinat de ctre un complex multiproteic.
Degradarea inhibitorilor poliubicuitinati din faza S de ctre
proteazom elibereaz complexele cicline-CDK ale fazei S. Odat
activate, acestea fosforileaz situsurile reglatoare ale proteinelor
care sunt implicate n replicarea ADN, care se asambleaz la
nivelul originilor de replicare n timpul G1. Fosforilarea acestor
proteine iniiaz replicarea ADN i are rolul de a mpiedica
reasamblarea de noi complexe de pre-replicare. Din cauza acestei
inhibiii, fiecare cromozom este replicat numai o dat n timpul
trecerii prin ciclul celular asigurndu-se meninerea numrului
corect de cromozomi n celulele fiice.
Complexele cicline-CDK mitotice sunt sintetizate n timpul

fazelor S i G2, dar activitile lor sunt inute sub control prin
fosforilare la nivelul situsurilor inhibitoare pn ce sinteza ADN este
complet. O dat activate prin defosforilarea situsurilor inhibitoare,
complexele cicline-CDK mitotice fosforileaz mai multe proteine
care promoveaz condensarea cromozomilor, retragerea anvelopei
nucleare, asamblarea aparatului fusului mitotic i alinierea
cromozomilor condensai la nivelul plcii metafazice. n timpul
mitozei complexul de promovare a anafazei APC, (n englez
Anaphase Promoting Complex), care conine multe subuniti de
ubicuitin ligaz, poliubicuitineaz proteinele reglatoare cheie
marcndu-le pentru degradarea proteozomal. Un substrat
important al APC este securina, o protein care inhib degradarea
proteinelor care asigur legarea cromatidelor surori.

Figura 3.21. Reglarea ciclului celular (prelucrat dup

Poliubicuitinarea securinei de ctre APC este iniiat n timp

ce kinetocorii (asamblai la nivelul centromerilor tuturor
cromozomilor) se ataeaz la microtubulii fusului determinnd
aranjarea cromozomilor n placa metafazic.
Dup ce cromozomii sunt aliniai APC poliubicuitineaz
securina determinnd degradarea sa proteozomal i n consecin
degradarea proteinelor care conecteaz cromatidele surori.
Aceast secven de evenimente iniiaz anafaza determinnd
cromatidele surori s segrege ctre polii opui ai fusului mitotic. n
anafaza trzie, tot APC poliubicuitineaz i promoveaz
degradarea ciclinelor mitotice. Procesul este inhibat pn ce
cromozomii care segreg ajung la locurile lor n celula n diviziune.
Degradarea ciclinelor mitotice conduce la inactivarea activitii
protein kinazice a CDK. Descreterea activitii acestora permite
protein-fosfatazelor active constitutiv s nlture gruprile fosfat
care au fost adugate de ctre complexele cicline-CDK mitotice
unor proteine specifice. Ca rezultat, cromozomii deja separai
decondenseaz, anvelopa nuclear se reface n jurul nucleelor nou
formate, aparatul Golgi se reasambleaz n timpul telofazei i
citoplasma se divide n timpul citocinezei conducnd la formarea
celor dou celule fiice.

La nceputul fazei G1 a noului ciclu, fosfatazele

defosforileaz proteinele care formeaz complexele de pre-
replicare. Aceste proteine au fost fosforilate de ctre complexele
cicline-CDK din faza S anterioar i au fost pstrate n aceast
stare, n timpul mitozei, de ctre complexele cicline-CDK mitotice.
Ca urmarea a defosforilrii din G1 se vor reasambla noi complexe
de pre-replicare la nivelul originilor de replicare pentru viitoarea
faz S.
Fosforilarea APC de ctre complexele cicline-CDK ctre
sfritul G1 inactiveaz complexul permind acumularea ciclinelor
specifice fazei S i mitozei necesare ciclului urmtor. Trecerea prin
trei etape critice de tranziie: G1/S, metafaz/anafaz,
anafaz/telofaz i citocinez este ireversibil deoarece aceste
tranziii sunt reglate dirijate de ctre proteine reglatorii care sunt
degradate. Prin urmare, celulele sunt obligate s traverseze ciclul
celular ntr-o singur direcie. n organismele superioare, controlul
ciclului celular este realizat n primul rnd prin reglarea sintezei i
activitii complexelor cicline-CDK. Factorii de cretere extracelulari
funcioneaz drept mitogeni, inducnd sinteza complexelor cicline-
CDK din G1. Activitatea acestora i a altor complexe cicline-CDK
este reglat prin fosforilarea la nivelul diferitelor situsuri inhibitoare
i activatoare din subunitatea catalitic. Dac mitogenii au acionat
o perioad suficient de timp, ciclul celular continu ctre mitoz
chiar dac acetia sunt nlturai. Punctul de la finalul fazei G1 n
care trecerea prin ciclul celular devine independent de aciunea
mitogenilor este numit punct de restricie (Figura 3.21).
TA 3.20. Celulele care sunt ntr-o etap n care nu se divid sunt n faza:
a) G0; b) G2; c) G1; d) S; e) M
ntrebrile de mai jos se refer la 5 afirmaii, legate de ciclul celular. Pentru

fiecare fraza sau propoziie, selectai rspunsul (marcat prin litere mai jos) cel mai
adecvat. Fiecare rspuns poate fi folosit o dat, de mai multe ori sau deloc.
a) G0 ; b) G1; c) S; d) G2; e) M
TA 3.21. Aici se afl punctul de restricie

TA 3.22. Celulele musculare i nervoase sunt n aceast faz.
TA 3.23. Este cea mai scurt faz a ciclului celular.
TA 3.24. ADN este replicat n aceast faz a ciclului celular.
TA 3.25. Ciclinele sunt degradate la sfritul acestei faze.
TA 3.26. Care este denumirea enzimelor care controleaz activitatile altor
proteine prin fosforilare?
a) ATP-aze; b) kinaze; c) cicline; d) cromatina; e) protein kinaze

3.2.1. Ciclinele Ciclinele conin cel puin dou domenii funcionale. Primul, ntlnit
la toate clasele de cicline, este cyclin box, regiune conservat de
100 aminoacizi care asigura dou funcii:
i) recunoate i favorizeaz legarea ciclinei la kinaza CDK

corespunztoare; variaiile de secvena n aceast regiune
responsabil de recunoaterea unei cicline particulare, permite
clasificarea ciclinelor n sub-familii;
ii) activeaz domeniul catalitic (kinazic) al proteinei CDK.
Al doilea domeniu prezent doar la ciclinele de tip A i B,

localizat n regiunea N terminal a proteinei, corespunde unei
regiuni numita destruction box. Aceasta regiune conine un motiv
din aminoacizi bine conservai (secvena consens RALGDIGN)
urmat de o regiune bogat n lizin cu un situs de recunoatere
pentru legarea mai multor molecule de ubiquitina (proteina mic
termostabil de 76 aminoacizi). Astfel modificat, ciclina va fi
degradat de un complex multienzimatic, numit proteazom.
n tabelul din figura 3.22 sunt prezentate pentru

exemplificare cteva cicline i kinaze dependente de cicline
implicate n reglarea ciclului celular la diferite organisme
cdk Cicline Fazele ciclului

asociate celular implicate
S. pombe
cdc2 Cdc13 G2 >M
S.cerevisiae
cdc28 Cln1, Cln2, G1 >S
Cln6 S
Clb5, Clb6 G2 >M
Clb1,
Clb2,Clb3,
Clb4
Mamifere CiclinaD1, G1
Cdk2 D2, D3 G1->S
CiclinaE S
Cdk4 Ciclina A G1
Cdk3 CiclinaD1, G1
Cdc2 (Cdk1) D2, D3 G2->M
CiclinaD1, Metafaza>Anafaza
D2,D3
CiclinaA
CiclinaB
Figura 3.22. Kinaze dependente de cicline (cdk) la drojdii i n celule de

mamifere

3.2.2. Punctele de
Mecanisme de supraveghere a ciclului celular
control
Mecanismele specifice de supraveghere detecteaz erorile
i induc blocarea ciclului celular la puncte cheie de tranziie. Astfel,
n celulele de mamifere, arestarea ciclului n faza G1 consecutiv
unei alterri a ADN este controlat de genele ATM (gena care prin
dereglare provoac ataxie telangiectazic) i p53 (gena supresoare
tumoral esenial n controlul integritii ADN). Debutul anafazei
este ntrziat dac n celul cromozomii nu sunt toi perfect aliniai
pe fusul mitotic.
Punctele de control ale ciclului celular au fost considerate
etape n care toate evenimentele specifice ale fazei precedente
trebuiesc ndeplinite. Aceste puncte de control pot fi i puncte de
oprire, blocnd tranziia ctre faza urmtoare.
Intrarea n mitoz depinde de starea de fosforilare a
complexului MPF (n englez Maturation Promoting Factor sau
Mitosis Promoting Factor). Fosfatazele i kinazele care controleaz
procesul sunt i ele supuse unei reglri care funcioneaz dup
acelai principiu.
Factorii de cretere sunt necesari pentru stimularea
proliferrii. Legarea unui factor de cretere la receptorul su
membranar iniiaz o cascad de evenimente (transducerea
semnalului) care stimuleaz celula s ndeplineasc faza G1 i s
se angajeze n faza S. Factorii de cretere induc transcripia a
numeroase gene, dintre care cele precoce codific factori de
transcriere. Astfel, o familie de factori, numii E2F, este necesar
pentru transcrierea unor gene care codific numeroase proteine
implicate n sinteza deoxiribonucleotidelor i ADN n timpul tranziiei
G2/S.
Diferitele tranziii G1/S, S/G2, G2/M depind de protein
kinaze, asociate cu ciclinele lor i/sau fosfataze.
Etapele cheie ale ciclului celular evit catastrofe genetice
care ar putea surveni dac celula depete inopinat un punct de
control. De exemplu, dac anafaza ncepe nainte ca toi
cromozomii s se fixeze la microtubulii kinetocorieni, vor fi celule
fiice n care anumii cromozomi vor lipsi i/sau cu cromozomi
supranumerari. Cnd acest proces, numit non-disjuncie, se
produce n timpul diviziunilor care genereaz gamei femeli i
masculi, pot aprea trisomii care au drept consecine anomalii de
dezvoltare i retardare mental. Punctele de control permit evitarea
numeroaselor erori ca:
i) replicarea parial a ADN nainte de intrarea n mitoz;
ii) defecte de asamblare a fusului mitotic care antreneaz o
distribuie incorect a cromozomilor;
iii) anomalii la nivelul structurii ADN care ar putea genera
mutani care scap de controlul proliferrii (carcinogeneza) (Figura
3.23).

Figura 3.23. Mecanismul de supraveghere a ciclului celular(prelucrat dup

Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition,
Benjamin Cummings, 6th Edition, 2002)
Cadru 3.4. Puncte de control i starea cromozomilor

Kinazele CDK i apariia lor succesiv nu este suficient pentru a explica
mecanismele de reglare i ordinea fazelor ciclului celular. Starea substratelor,
proteice asociate cu cromatina, este responsabil de duplicarea ADN sau de
separarea cromozomilor.
Iniierea sintezei ADN sub controlul CDK n faza S nu are loc dect dac
se formeaz n prealabil un complex de pre-replicare (pre-RC) la originea
duplicrii cromatinei. Acest complex include diverse tipuri proteice:
i) proteinele complexului ORC (Origin Recognition Complex);
ii) o protein instabil, cdc6p;
iii) un al doilea complex proteic compus din proteine din familia MCM
(MiniChromosome Maintenance)
Un cromozom bine pregtit va fi duplicat. n timpul fazei G1, se

sintetizeaz cdc6p care se fixeaz la cromatin la nivelul complexului ORC,
ntotdeauna prezent. Proteinele MCM pot interaciona acum cu cromatina n
apropierea ORC-cdc6p. Acest ansamblu constituie pre-RC. n timpul tranziiei
G1/S, complexele ciclinaB-CDK (S-CDK) i cdc7-Dbf4 (DDK) elimin proteinele
cdc6p i MCM. Aceasta declaneaz sinteza ADN i mpiedic formarea unui
nou pre-RC. La sfritul duplicrii, cromatidele surori rmn asociate. Graie
inactivrii CDK implicate n formarea fusului mitotic, n faza M, cromozomii se
pot alinia i forma placa metafazic. M-CDK activeaz complexul APC
(Anaphase Promoting Complex) care favorizeaz disocierea cromatidelor surori
i faciliteaz migrarea ctre poli.

TA 3.27. Separarea cromatidelor n timpul mitozei este determinat de:

a) semnale interne originare de la centromer; b) activarea de proteine
care in laolalt cromatidele surori; c) apariia de cicline n apropierea
kinetocorului; d) activarea unui complex de promovare-anafazic (APC
anaphase-promoting complex); e) eliberarea unui factor de cretere derivat din
aparatul Golgi
TA 3.28. Proteinele care sunt implicate n reglarea ciclului celular i care
prezint fluctuaii ale concentraiei n timpul ciclului celular sunt numite:
a) ATP-aze; b) kinetocori; c) centrioli; d) pompe protonice; e) cicline
TA 3.29. ntr-o celul este indus o mutaie al crui rezultat este
ncetarea producerii unei protein kinaze normale n faza M. Care vor fi
urmatoarele consecine imediate ale acestei mutaii:
a) celula va intra prematur in anafaza; b) celula nu va prsi niciodat
metafaza; c) celula nu va intra niciodata n metafaz; d) celula nu va intra
niciodat n profaz; e) celula va suferi o mitoza normala, dar nu va mai intra n
faza urmatoare G1.
3.3. Meioza Reproducerea sexuat necesit fuziunea a doi gamei

provenii de la cei doi prini. Mecanismul fuziunii celor doi gamei,
i deci a nucleelor lor, duce n timpul fecundrii la o nou celul
diploid. Acest lucru este posibil doar dac gameii, contrar
celulelor somatice cu 2n cromozomi, sunt haploizi i conin doar n
cromozomi. n timpul elaborrii gameilor, gametogenez, celulele
stem germinale diploide sufer o diviziune reducional, meioz,
proprie celulelor reproductoare. n timpul meiozei are loc doar o
duplicare a ADN dup care celula se angajeaz n dou diviziuni
succesive.
3.3.1. Originea Meioza este o form de diviziune celular care nu privete

gameilor dect celulele sexuale. Se tie c fiecare individ ncepe viaa sub
forma unei singure celule, oul (sau zigotul) care reprezint
rezultatul fuziunii a dou celule (un ovul i un spermatozoid).
Celulele noastre posed 46 de cromozomi, celulele prinilor notri
la fel i noi suntem rezultatul fuziunii unei celule provenite de la
fiecare dintre ei. Deci, este clar c spermatozoidul i ovulul nu
posed 46 de cromozomi.
Indiferent dac este vorba de o celul animal sau vegetal,
meioza prezint o constan remarcabil de la o specie la alta. De
asemenea, comportamentul cromozomilor n timpul meiozei este
acelai la cele dou sexe. n acelai timp, fenomenele
citoplasmatice variaz de la un sex la altul. n continuare vom
discuta elementele comune meiozei indiferent dac este vorba de
o celul mascul sau femel, vegetal sau animal.

Celulele sexuale sunt totipotente i dotate cu individualitate

deoarece ele sunt singurele care pot s se separe de organism i
s supravieuiasc liber. Ele formeaz un esut particular,
germinal, prin opoziie cu cel somatic care formeaz restul
organismului.
Meioza (de la grecescul meion = mai mic) nu are loc dect
3.3.2. Derularea
la nivelul celulelor reproductoare (ovogonii i spermatogonii) i
meiozei
const n dou diviziuni celulare succesive:
i) prima sau mitoza reductoare const ntr-o reducere a
cromatinei de la 2n la n;
ii) a doua este mitoza ecuaional.
Pentru fiecare dintre cele dou diviziuni succesive ale

meiozei distingem o: profaz, metafaz, anafaz; telofaz. n text
i n schemele prezentate vom folosi simbolul I pentru a desemna
prima diviziune i simbolul II pentru cea de a doua.
3.3.2.1. Diviziunea Profaza I: cromozomii se individualizeaz n filamente.

reducional (sau Puin mai trziu, cromozomii omologi se cupleaz i se ngroa.
mitoza Cromozomii fiecrei perechi se plaseaz unul lng altul, la
heterotipic) nivelul centromerilor, ca i cum ar dori s formeze un singur
cromozom. Nucleolii i membrana nuclear se estompeaz;
cromozomii se fisureaz longitudinal n dou cromatide (formate
n urma duplicrii ADN n timpul interfazei). Cromatidele rmn
ataate ntre ele prin intermediul centromerilor. Fiecare pereche
de cromozomi omologi devine n acest stadiu o tetrad format
din 4 cromatide. Cromatidele aceleiai tetrade se rsucesc una n
jurul celeilalte ducnd la tetrade din ce n ce mai ndesate
(scurtate).
Dup formarea tetradelor, atracia dintre cromozomii
omologi se diminueaz i ei au tendina de a se separa. n acel
moment, la anumite nivele se observ ncruciri ntre cele 4
filamente (cromatide), punctele de ncruciare fiind numite
chiasme
Chiasmele sunt manifestrile perceptibile ale schimburilor
ntre cromatidele de origine matern i patern. Aceste schimburi
nu prezint importan dac stocul de gene (sau factori ereditari)
este identic la cei doi prini (linii pure). Totui, acestea sunt
extrem de importante n cazul ncrucirilor ntre varieti diferite.
Deci, crossing-over-ul (sau nclecarea) permite apariia de noi
asortri ale genelor pe cromozomi. Ctre sfritul profazei I,
intrarea n joc a unor fore de torsiune provoac ruperea
chiasmelor care par s se deplaseze ctre extremitatea
cromatidelor.

Metafaza I este marcat prin apariia unui fus acromatic.

Tetradele se regrupeaz la nivelul plcii ecuatoriale astfel nct
centromerii lor se situeaz de o parte i de alta a planului
ecuatorial. n fiecare tetrad, cele dou centromere tind s se
resping, ndeprtnd unul de altul cei doi cromozomi (constituit
fiecare din dou cromatide)
Anafaza I: insistm asupra faptului c n nici un moment
centromerii nu se cliveaz astfel nct cei doi cromozomi ai
fiecrei perechi se separ fr a se divide pentru a trece n una
sau alta din cele dou celule fiice, indiferent de originea patern
sau matern. Fiecare din cele dou celule fiice nu primete dect
jumtate din numrul diploid de cromozomi 2n. n fiecare celul, o
pereche este reprezentat prin unul dintre cromozomii omologi,
dar acetia nu sunt asemntori calitativ cu cei ai celulei iniiale
din cauza schimburilor de material genetic care s-au produs ntre
cromatide n timpul profazei I.
Telofaza I: cele dou loturi de n cromozomi fisurai ajuni la
cei doi poli ai celulei rmn individualizai fr a fi despiralizai.
Dup o faz de ateptare, mai scurt sau mai lung, celulele intr
n cea de a doua diviziune (Figura 3.24).
Figura 3.24. Etapele meiozei (prelucrat dup

3.3.2.2. Diviziunea Aceast a doua diviziune meiotic nu prezint nici un

ecuaional caracter particular. n timpul anafazei II, n urma diviziunii
centromerilor, cele dou cromatide surori se separ, se
orienteaz n direcia polilor i se individualizeaz n cromozomi.
Din fiecare din cele dou celule se formeaz alte dou celule,
evident haploide.
Profaza II: este foarte rapid deoarece cromozomii nu au
disprut n cursul telofazei I. Fusul de diviziune se reformeaz.

Metafaza II: cromozomii (n) se dispun la nivelul plcii

ecuatoriale i fiecare centromer ncepe s se divid.
Anafaza II: diviziunea centromerilor mparte n dou
cromatidele surori care se deplaseaz n direcia polilor i se
individualizeaz n cromozomi.
Telofaza II: cele dou celule (cu n cromozomi) se divid prin
constricie central. Cromozomii se despiralizeaz i membrana
nuclear i nucleolul se reformeaz (Figura 3.24).
TA 3.30. Care este termenul care poate fi folosit pentru celula care
conine 22 perechi de autozomi i doi cromozomi X?
a) o celul ou nefertilizat; b) o celul spermatic; c) o celul somatic
mascul; d) o celul somatic femel; e) att a, ct i D sunt corecte.
TA 3.31. Care dintre urmtoarele afirmaii sunt false?
a) la om, fiecare din cei 22 autozomi maternali au un cromozom paternal
omolog;
b) la om, a 23-a pereche, cromozomii sexului, determin dac persoana
este femel (XX) sau mascul (XY);
c) seturile haploide (n), unice de cromozomi din ovul i sperm se unesc n
timpul fertilizrii, formnd o singur celul zigot diploid (2n);
d) la maturitate sexual, ovarele si testiculele produc gamei diploizi prin
meioz;
e) ciclurile de via sexual difer n timpul meiozei n legtur cu
fertilizarea
TA 3.32. Fazele meiozei care produc cele mai multe variaii determinate
de crossing-over i sortare independent sunt:
a) profaza I i telofaza II; b) profaza II i anafaza II; c) metafaza I i
telofaza II; d) anafaza I i profaza II; e) profaza I i anafaza I
TA 3.33. Cromozomii recombinai sunt rezultatul: a) procesului de
crossing-over; b) factori de mediu ca de exemplu radiaiile i substanele chimice
cancerigene; c) mutaii; d) separarea de cromozomi omologi n metafaza I din
meioz; e) mperecherea incorect de nucleotide ADN
TA 3.34. Care dintre urmtoarele evenimente au loc la sfritul meiozei I?
a) cromozomii omologi sunt separai;

b) numrul cromozomilor este conservat;
c) cromatidele surori sunt separate;
d) sunt formate patru celule fiice;
e) celulele spermatice se prelungesc pentru a forma un cap si o prelungire
(coad)
f)
TA 3.35. Care dintre urmtoarele afirmaii despre procesul meiozei este
adevrat?
a) rezult dou celule diploide;
b) rezult patru celule diploide;
c) rezult patru celule haploide;
d) rezult patru autozomi;
e) rezult patru chiasme;

3.3.2.3. Comparaie Dac n urma mitozei o celula somatic diploid duce la

mitoz - meioz obinerea a dou celule fiice diploide care conserv acelai
patrimoniu genetic, meioza, care vizeaz doar celulele diploide
germinale, d natere la patru celule al cror genom poate diferi
major contribuind astfel la diversitatea mare a indivizilor aceleiai
specii (Figura 3.25).
Figura 3.25. Comparaie mitoz-meioz (prelucrat dup

3.4. mbtrnirea mbtrnirea biologic este un proces fundamental care se

celular observ la aproape toate fiinele vii. Este caracterizat printr-o
deteriorare progresiv a sistemelor biologice, conducnd la
creterea mortalitii, cretere corelat cu vrsta. nelegerea
mecanismelor senescenei prezint un interes particular, pentru c
are implicaii largi att pentru om ca individ ct i pentru societate.
Mai clar, nelegerea mecanismelor care conduc la senescena
uman va oferi strategii noi pentru lupta mpotriva bolilor severe
care sunt legate de mbtrnire (diferite tipuri de cancer, maladia
Alzheimer, boli cardiovasculare) i se poate atepta o cretere
semnificativ a calitii vieii la vrste naintate. Cu toate c
importana cercetrilor este evident, este uimitor ct de puin se
cunoate despre bazele mbtrnirii. n acest moment, nu este clar
dac este vorba de un singur mecanism conservat evolutiv, prin
care toate sistemele biologice mbtrnesc, sau dac exist cte un
mecanism unic pentru specii diferite. n orice caz, pe lng
aspectele cunoscute, este clar c exist o component genetic a
senescenei, i este de asemenea clar c schimbrile dependente
de vrsta ale informaiei genetice joac un rol important.

Procesele care conduc la acumularea de alterri n structura ADN,

acumulri care s-a observat c sunt corelate cu vrsta i sunt
dependente de doi factori majori: rata cu care se petrec aceste
alterri i capacitatea sistemelor biologice de a le repara. n plus,
au fost identificate cteva tipuri clare de modificri. Unele alterri
sunt nespecifice i se petrec n mod aleator. Alte schimbri sunt
rezultatul activitii difereniale a anumitor secvene nucleotidice
(gene care sunt activate odat cu naintarea n vrst, elemente
genetice mobile). De asemenea, schimbrile n structura ADN pot fi
subtile, avnd loc la nivelul nucleotidelor, sau pot include regiuni
mai mari ale informaiei genetice.
3.4.1. Printre reorganizrile mari ale genomului nuclear, care se

Reorganizarea tie c se petrec n diferite sisteme biologice, s-a raportat o
genomului nuclear - modificare a numrului cromozomilor legat de vrst. Pe lng
aberaii aceste modificri s-au identificat i anormaliti structurale ale
cromozomiale cromozomilor, care se accentueaz odat cu naintarea n vrsta.
De exemplu, n celulele somatice de la pacieni cu sindromul
Werner (un model de mbtrnire accelerat) s-a evideniat o
inciden ridicat a translocaiilor, deleiilor i inversiunilor. Aceste
date sugereaz c o cretere a ratei mutaiilor somatice, joac un
rol important n acest sindrom.
Pe lng aceste schimbri cromozomiale generale,
reorganizri ale regiunii ADNr, o regiune a genomului nuclear care
const din gene repetate ARN4r, a fost evideniat ca reprezentnd
o regiune n care se petrec schimbri n structura cromozomului
legate de vrst.
3.4.2. Scurtri ale Celulele somatice ale vertebratelor au o capacitate limitat

telomerilor i de proliferare. Acest fenomen, denumit senescena replicativ, este
senescena controlat de un mecanism molecular de numrare (ceas molecular)
replicativ care s-a sugerat a fi legat de un tip specific de reorganizare a ADN
care se petrece la capetele cromozomilor, numite telomeri. n timpul
proliferrii celulare, cromozomii sunt replicai de ctre ADN
polimeraza convenional, o enzima care este dependent de un
primer ARN pentru a iniia replicarea. Dup ndeprtarea primer-
ului, noua caten ADN format este scurtat la captul 5. Acest
proces este repetat la fiecare ciclu celular i este considerat a fi
responsabil pentru reducere n timp a capacitii de proliferare.
Capacitatea de proliferare scade dac celulele sunt prelevate de la
indivizi mai btrni. Deci, exist un stadiu de la care celula pierde
natural capacitatea de a se divide i i crete probabilitatea de a
intra n faza G0.

Acesta este procesul de senescen celular prin analogie

cu mbtrnirea ntregului organism.
Au fost emise numeroase ipoteze care ncearc s explice
senescena celular. Unele sugereaz c acumularea mutaiilor
aleatorii defavorabile altereaz posibilitatea reproducerii unui
patrimoniu genetic corect. Prin limitarea numrului de diviziuni,
celula va fi protejat de consecinele transmiterii unui numr prea
mare de erori.
Comportamentul telomerilor n diviziune poate furniza o alt
explicaie a instalrii senescenei. Secvenele repetitive de ADN de
la extremitatea fiecrui cromozom (telomerii) sunt replicate de ctre
telomeraz o enzim specific pentru realizarea acestui proces. n
timpul diviziunilor succesive se observ o scurtare a telomerilor
datorat absenei telomerazei din celulele somatice, n timp ce
aceasta este prezent n celulele germinale. Reducerea progresiv
a numrului de motive repetitive ar putea fi cauza opririi progresive
a diviziunilor. Numrul diviziunilor celulare este oarecum predefinit
de numrul secvenelor repetitive telomerice.
3.4.3. Aspecte Metabolismul celular, i mai ales respiraia mitocondrial

energetice i sunt principala surs de oxigen activ sub forma de radicali
biochimice superoxid care vor forma radicali hidroxilai. n celul exist
mecanisme de aprare fa de formarea unor astfel de molecule.
Ele includ enzime ca superoxid dismutaza, catalaza, glutation
reductaza, dar i molecule antioxidante (vitamina E, quinone,
vitamina C, etc.). n procesul mbtrnirii celulare i n lipsa
mecanismelor de aprare, radicalii hidroxilai se acumuleaz n
celul, interacioneaz cu numeroi constitueni celulari i sunt
responsabili de leziuni oxidative, n principal la nivelul lipidelor
membranare, proteinelor i ADN.
mbtrnirea este asociat cu disfunciile mitocondriale care

apar n diferite esuturi i care contribuie la degenerescena
acestora i la etiologia bolilor degenerative care apar odat cu
naintarea n vrst. Mitocondriile sunt cei mai mari generatori de
Specii Reactive de Oxigen (ROS) n celul. Una din primele inte
ale acestor radicali este mitocondria, unde ADN este alterat
ireversibil. Majoritatea studiilor care asociaz mbtrnirea cu
disfunciile mitocondriale sunt orientate ctre enzimele implicate n
fosforilarea oxidativ i asupra modificrilor pe care le sufer
Alterarea lipidelor membranare duce la diminuarea
capacitii mitocondriei de a sintetiza ATP. Aceste modificri au
drept consecin moartea celular.

3.5. Moarte i Activitatea vitala a celulei are la baz o multitudine de

procese fizice i chimice care au ca substrat, n cea mai mare
nemurire
parte, materie organica format din compui de carbon i procese
celular care se desfoar n mediul intern al celulei (o soluie apoas
concentrat de substane chimice). ntreruperea sau perturbarea
proceselor respective poate duce uneori la dispariia funciilor vitale,
respectiv la moartea celular.
Se cunoate de mai mult timp faptul c moartea celular att
a celulei ca organism unicelular ct i ca element dintr-un organism
pluricelular, poate surveni accidental prin aciunea distructiv
asupra celulei a numeroi factori sau ageni externi (fizici, chimici,
biologici) .
Moartea celular are dou origini distincte: necroza celular,
adesea datorat interveniei factorilor de mediu i apoptoza i/sau
moarte celular programat de origine genetic
3.5.1. Necroza Necroza apare ca urmare a aciunii brutale a unor stimuli

externi sau interni cuprinznd neselectiv o serie de celule aflate sub
aciunea acestora. Necroza poate fi datorat aciunii a numeroi
factori cum ar fi: atacul complementului, hipoxia peste anumite
limite, toxine, infecii virale litice, hipo- sau hipertermia, ca i
numeroi ali ageni fizici sau chimici. Dac necroza apare ca
rspuns celular la aciunea unor ageni patogeni aceasta este
urmat de regul de un rspuns inflamator.
Scderea nivelului ATP reprezint precursorul modificrilor
morfologice care apar n cursul necrozei. Aici are loc o degradare a
fosfolipidelor i o rupere a proteinelor care formeaz citoscheletul,
cu activarea fosfolipazelor i a proteazelor care sunt activate prin
creterea calciului citosolic. Stimulii care declaneaz necroza
cresc permeabilitatea membranelor plasmatice att prin alterarea
structurii acestora (complement, liz viral) ct i printr-o
insuficien a pompelor membranare cationice (Figura 3.26).
3.5.2. Apoptoza i Dac necroza vizeaz un grup de celule contigue, situate la

moartea celular nivelul situsului supus stresului, moartea celular programat
programat afecteaz celule izolate i permite eliminarea silenioas prin
fagocitoz a corpilor celulari indezirabili sau devenii inutili.
Un astfel de proces intervine n timpul dezvoltrii embrionare
i fetale unde contribuie la morfogeneza sau n eliminarea
limfocitelor B i T.
n afara celor dou funcii, ea constituie un sistem eficace de
aprare. Prin autodistrugere, celula infectat de un virus l
mpiedic pe acesta s se replice i s infecteze celulele vecine.

Este de ateptat c dereglarea programului de moarte celular s

aib consecine nefaste pentru organism. Procesul este reprimat n
diferite forme de cancer, maladii autoimune, maladii virale i este
activat n cazul SIDA i n anumite maladii neurodegenerative.
Reglarea apoptozei este la fel de complex ca i cea a
ciclului celular. Majoritatea semnalelor inhibitoare ale apoptozei
stimuleaz proliferarea celular.
Conceptul de apoptoz nglobeaz dou aspecte:

i) primul se refer la faptul c celula i poate ntrerupe
funciile vitale, murind n absena unor factori externi;
ii) al doilea se refer la faptul c pentru a-i ntrerupe
funciile vitale celula dispune de mecanisme proprii (cu consum de
energie) biologice i biochimice, relativ specifice.
Activarea mecanismelor prin care se realizeaz apoptoza
duce la modificri celulare caracteristice, care se pot observa prin
tehnici uzuale de microscopie optic, fluorescent sau tehnici
imunohistochimice. Aceste modificri morfologice sunt net diferite
de cele din cursul morii celulare datorate unor ageni externi,
respectiv ai necrozei i cuprind: condensarea citoplasmei,
fragmentarea ADN, depozitarea cromatinei n partea intern a
membranei nucleare, formarea de vezicule care conin pri de
nucleu i organite celulare intacte i, n final, formarea de corpi
apoptotici care vor fi fagocitai (Figura 3.26).
Cel mai tipic exemplu de apoptoza poate fi observat la
organismele pluricelulare n cursul dezvoltrii embrionare, unde
datorit dezvoltrii rapide o serie de celule trebuie distruse nainte
ca ciclul lor de via s se ncheie, pentru a face loc altor celule i a
da organului respectiv forma i volumul corespunztoare.
Existena unor mecanisme celulare proprii de autodistrugere
celular presupune existena unor gene care s declaneze i s
coordoneze aceste procese. Astfel, se consider c fiecare celul
posed programe genetice pentru autodistrugere. Aa a aprut
termenul de moarte celular programat similar celui de
apoptoz .
O caracteristic important a apoptozei este faptul c
celulele moarte prin acest proces sunt eliminate rapid prin
recunoaterea i ingestia lor de ctre celulele specializate n
fagocitoz (sau chiar celule nvecinate) fr s existe alterri ale
celulelor vecine i fr s existe reacii inflamatorii. n acest mod
sunt eliminate celulele nedorite dintr-un esut sau celulele care au
suferit alterri structurale ireparabile. Astfel, apoptoza apare ca un
mecanism de meninere a dinamicii celulare ntr-un esut prin faptul
c apoptoza este un proces antagonist mitozei.

Exist practic o balana mitoz/apoptoz ntr-un esut sau

organism pluricelular care n condiii normale duce la o dezvoltare
sau funcionalitate normal a acestora. Astfel, creterea tisular ca
i numrul de celule dintr-un esut depind de raportul
mitoz/apoptoz.
Cercetri actuale au evideniat c ionii de calciu, ceramidele
i metabolismul oxidativ au rol cheie n declanarea apoptozei. Pe
lng diversitatea de semnale, exist i un anumit numr de gene,
nalt conservate evolutiv , care regleaz apoptoza.
Gena bcl-2 (B Cell Lymphoma-2) asigur supravieuirea
celulei. Proteina Bcl-2 formeaz cu proteina Bax (Bcl-2 associated
x protein) un heterodimer. Controlul apoptozei depinde de raportul
concentraiilor celor dou. Proteina Bcl-2 previne modificrile
datorate radicalilor liberi. Un exces de Bcl-2 protejeaz contra
apoptozei, n timp ce un exces de Bax favorizeaz procesul. Celula
poate rspunde la semnalele morii celulare dup un model de tip
reostat n funcie de capacitatea de a asambla heterodimeri Bcl-
2/Bax antiapoptotici sau homodimeri Bax/Bax favorabili apoptozei.
Figura 3.26. Comparaie apoptoz - necroz

3.5.3. Imortalitatea Multiplicarea celulelor este reglat cu grij ca rspuns la

celular - cancer nevoile specifice ale corpului. La animalele tinere, multiplicarea
celular este mai crescut dect moartea celular, astfel nct
animalele tinere cresc n mrime. La aduli procesul de formare i
de moarte celular este echilibrat pentru a produce o stare
staionar (de echilibru).
Ocazional, controalele perfecte care regleaz multiplicarea
celular sunt dereglate. Celula n care apare aceast dereglare
ncepe s creasc i se divide ntr-un mod neregulat, fr a ine
seam de necesitile viitoare a le corpului pentru acest tip celular.
Dac o astfel de celul prezint descendeni care motenesc
capacitatea de proliferare celular fr a rspunde procesului de
reglare, rezultatul este o clon de celule capabile s se multiplice la
infinit. n final, aceste celule nedorite pot forma o mas celular
numit tumor. Unele tumori sunt benigne i nu au consecine
foarte grave asupra sntii organismului dect dac sunt foarte
mari. Altele, n schimb, tind s se disperseze n organism i pot
cauza boli de tipul cancerului. Toate tipurile de cancer sunt
provocate de anomalii la nivelul secvenelor genelor.
Cancerul este cauzat de mutaii, dar exist dou diferene
cheie ntre cancer i celelalte boli genetice. n primul rnd, cancerul
este, n principal, determinat de mutaii la nivelul celulelor somatice,
n timp ce alte boli genetice sunt determinate de mutaii la nivelul
celulelor germinale. Cu toate acestea, unii indivizi motenesc
diferite mutaii genetice care i predispun la dezvoltarea anumitor
tipuri de cancer. n al doilea rnd, un anumit cancer nu este
rezultatul unei singure mutaii ci mai degrab al acumulrii ctorva
modificri (de la trei la 20 de mutaii), n funcie de tipul de cancer.
Acestea trebuie s afecteze mai ales genele care n mod normal
sunt implicate n reglarea multiplicrii celulare. Au fost identificate
peste 30 gene supresoare tumorale i mai mult de 100 oncogene
dominante
3.5.3.1. Imortalitatea n general, celulele puse n contact cu un virus, cu ageni

celular chimici care complexeaz ADN sau chiar iradiate cu raze UV, sunt
transformate. Celulele astfel tratate i apoi injectate la animale, sunt
capabile s formeze tumori. Procesul se numete transformare
malign.
Celulele transformate difer de linia parental. De exemplu,
alterrile pot proveni de la integrarea unor gene virale n genomul
celular. Alte modificri cum sunt pierderea controlului creterii,
modificri morfologice, interacii celul-celul, modificarea expresiei
genice, etc., pot fi corelate sau rmn independente.

3.5.3.2. Proprietile Capacitatea de diviziune nedefinit (nemurire) poate fi rezultatul

celulei tumorale numeroaselor modificri ale exigenelor celulare:
i) o diminuare a necesarului de factori de cretere. n
anumite cazuri celulele devin apte s produc proprii lor factori de
cretere i receptorii corespunztori. Aceast situaie duce la
instalarea unei autostimulri (stimulare autocrin) favorabil
proliferrii;
ii) pierderea capacitii de oprire a creterii i intrarea n
quiescen;
iii) pierderea necesitaii de ancorare;
iv) schimbri morfologice: celula are tendina s se
rotunjeasc i s diminueze interaciile sau aderena cu celulele
nconjurtoare;
v) pierderea inhibiiei de contact: n mod normal, dac
celulele n diviziune intr n contact unele cu altele se opresc din
migrare pentru a evita astfel suprapunerea. n esuturile normale,
celulele stabilesc ntre ele jonciuni gap i nceteaz micarea.
Celulele tumorale pierd aceasta inhibiie a micrii datorat
contactului i se ntreptrund unele cu altele stabilind foarte puine
contacte ntre ele
Ultimele trei caracteristici fac ca celulele s fie mai mobile,
independente i capabile s colonizeze alte esuturi pentru a forma
metastaze.
Toate aceste modificri comportamentale ale celulei vizeaz
fie activitile citoplasmatice, fie activitile de la suprafaa celulei.
Totui, punctul de plecare n carcinogeneza (formarea tumorilor)
rezulta din modificrile proteinelor codificate de genomul nuclear.
Diferenele dintre celulele normale i tumorale provin din
defecte ale transcripiei anumitor gene i/sau o stabilitate crescut
a transcripilor lor. Concentraia anumitor molecule de ARNm
crete, n timp ce a altora scade. Totui, numai 3% din mesagerii
prezeni n celula canceroas sunt specifici acestei celule.
3.5.3.3. Mutaiile i Adesea, expresia uneia sau a dou gene mutante poate fi
imortalizarea suficient pentru transformarea unei celule. Se numete oncogen
celulelor o gen al crei produs proteic este capabil s transforme o celul n
cultur sau s induc proliferare malign (cancer) la un individ.
Majoritatea oncogenelor cunoscute provin din gene celulare
normale, numite proto-oncogene datorit capacitii lor de a genera
oncogene. Acestea au rolul de a asigura funcii importante n celula
normal. Dac sunt modificate ca urmare a prin inducerii unor
mutaii discrete pot fi responsabile de instalarea nemuririi celulare.
Oncogenele sunt implicate n reglarea ciclului celular, i de aceea
produii lor modificai determin celula sa scape de controlul
ciclului.

Anomaliile cromozomiale sunt i ele responsabile de

oncogenez. Astfel, celula umana normal conine 23 de perechi
de cromozomi, uor de recunoscut graie structurii lor specifice.
Celulele canceroase sunt adesea aneuploide, adic au un numr
anormal de cromozomi, inferior sau superior de 2n. Adesea, se pot
observa translocri cromozomiale datorate fuziunii elementelor
aparinnd la doi cromozomi diferii. Este cazul cromozomului
Philadelphia care corespunde fuziunii cromozomului 9 majoritar cu
o mica regiune din cromozomul 22, i reciproc fuziunea
cromozomului 22 aproape n totalitate cu un fragment scurt din
cromozomul 9. Pacienii cu un astfel de cariotip sufer de o form
de leucemie acut.
3.5.3.4. Virusurile n funcie de genom (ADN sau ARN) se cunosc dou tipuri
ca ageni de virusuri. Dac genomul viral se integreaz n genomul celulei
transformani gazd infectat i se transmite ntr-un mod stabil celulelor fiice,
discutm de un proces de transformare celular. Celula devine
canceroasa dac modificrile genetice datorate integrrii ADN viral
duc la achiziionarea capacitii de proliferare nedefinit
(imortalizare). Mecanismul integrrii este diferit n cazul virusurilor
ADN i ARN
Virusurile ADN responsabile de tumori conin oncogene care
sunt ageni transformani ai celulelor, prin intermediul produilor lor,
oncoproteinele. Acestea sunt indispensabile multiplicrii virusului i
trebuie s fie sintetizate de celula gazd. Sintetiznd enzimele
necesare replicrii ADN viral, celula stimuleaz replicarea propriului
ADN i n consecin diviziunea sa. Dac infecteaz o celula
normal quiescent, virusul o determin s se divid i poate
determina producerea unei tumori.
Virusurile ARN conin oncogene derivate din genele celulare
care au fost capturate i apoi ncorporate n genomul gazdei printr-
un proces stabil numit transducie genetic. Aceste gene celulare
se numesc proto-oncogene i prin capturare dau natere genelor
virale. Didactic, pentru a face distincie ntre forma celular i viral
a acestor gene, se utilizeaz prefixele c i v urmate de numele
genei. Astfel, o gen responsabil pentru formarea unei tumori la
pui, se numete c-src la animal i v-src la virusul responsabil de
inducerea tumorii. Gena v-src care se integreaz aleatoriu n
genomul gazdei, n anumite celule se poate integra n gena c-src.
Perturbarea expresiei acesteia poate conferi celulei infectate un
avantaj proliferativ care o poate determina s se multiplice mai
rapid i s formeze tumori.

TA 3.36. Cercetrile n domeniul cancerului au artat c celulele

canceroase:
a) transforma celulele normale prin alterarea genelor implicate n controlul
mitozei;
b) ntotdeauna se dezvolt ntr-o tumor;
c) conin mai mult dect numrul normal de cromozomi;
d) sunt incapabile sa finalizeze ciclul celular, dup faza S;
e) intr i ies din faza G0 de trei ori nainte de a se divide.
TA 3.37. Care dintre urmtoarele afirmaii este adevrat n ceea ce

privete celulele canceroase?
a) nu manifest o inhibiie dependent de densitate cnd cresc n cultur;
b) cnd nceteaz s se mai divid, procesul se produce n etape
ntmpltoare ale ciclului celular;
c) au scpat de sub controlul ciclului celular;
d) b i c sunt adevrate;
e) a, b i c sunt adevrate
TA 3.38. Vinblastina este un medicament chimioterapeutic standard

utilizat pentru a trata cancerul. Din moment ce interfer cu asamblarea
microtubulilor, eficacitatea sa trebuie sa fie corelat cu:
a) distrugerea formrii fusului mitotic de diviziune;
b) inhibarea fosforilrii proteinei de reglare;
c) suprimarea producerii de ciclina;
d) denaturarea miozinei si inhibarea formrii clivrii;
e) inhibarea sintezei ADN
TA 3.38. Una dintre diferenele dintre o celul canceroas i una normal

este evideniat prin faptul c:
a) celula canceroas este incapabil s sintetizeze ADN;
b) ciclul celular al celulei canceroase este ntrerupt n faza S;
c) celulele canceroase continu s se divid chiar daca au ajuns la
confluen;
d) celulele canceroase nu pot funciona corespunztor deoarece ele
sufer de inhibiie dependent de densitate;
e) celulele canceroase sunt ntotdeauna n faza M a ciclului celular.


R TA 3.1. Ciclul celular reprezint totalitatea modificrilor pe care le sufer celulele n
decursul vieii i care este responsabil de multiplicarea celular. Fazele sunt: o faz
preparatoare, interfaz, care este i o faz de repaus care reprezint 90% din ciclul
celular, invizibil n microscopie optic i a crei durat variaz ntre 10 i 24 de ore la
mamifere; faza de diviziune, format din patru subuniti funcionale i vizibile la
microscopul optic: profaza, metafaza, anafaza i telofaza, cu o durat de aproximativ o
or. n timpul acestui fenomen, nucleul i citoplasma vor fi divizate,
R TA 3.2. Exista 3 nivele de condensare care conduc la formarea de cromozomi
vizibili la microscopul fotonic.
R TA 3.3. e; R TA 3.4. a; R TA 3.5. d; R TA 3.6: d;
R TA 3.7: Cele dou moduri principale de reproducere asexuat i sexuat
necesit diviziunea celular. Orice caten ADN a unui organism provine, prin mitoz sau
meioz, din catenele ADN parentale.
R TA 3.8. O celula n faza G2 nu a fost activat pentru a iniia sinteza ADN pentru
ca i-a duplicat deja ADN i nu va rencepe imediat. O unitate de replicare nu poate trece
dect printr-un ciclu de replicare n timpul aceluiai ciclu celular.
R TA 3.9. e; R TA 3.10: a;
R TA 3.11: Modificrile de fluorescen pot fi urmrite observnd o celula vie la
microscop, n timp ce, pentru localizarea radioactivitii, celula trebuie omort.
Radioactivitatea este mai bun pentru msurri cantitative, ca viteza de sintez a tubulinei
sau incorporarea sa n microtubuli ntr-un timp scurt.
R TA 3.12. vezi cadru 3. 3 pagina 93; R TA 3.13: e
R TA 3.14. Citoscheletul reprezint o reea complex de filamente i tubuli care se
ntinde n toat citoplasma. Este o structura foarte dinamica care se reorganizeaz
continuu n timpul diferitelor evenimente celulare (migrare, diviziune, etc.). Citoscheletul
este constituit din trei tipuri principale de structuri proteice: filamentele de actin
(microfilamente), filamentele intermediare, microtubulii .
R TA 3.15.
Funciile microtubulilor: i) deplasarea organitelor pe microtubuli (RE, aparat Golgi,
membrana citoplasmatic, vezicule de secreie); ii) deplasarea cromozomilor (kinetocori);
iii) micarea cililor i flagelilor;
Funciile filamentelor de actin: i) rol n stabilitate celular - formeaz structuri
dinamice mai mult sau mai puin stabile prin asociere cu alte proteine (microvili i celulele
musculare); ii) rol n micare i n iniierea micrii; iii) formarea inelului contractil de la
sfritul mitozei care asigur separarea celulelor fiice (citokinez).
R TA 3.16. Se va realiza un eseu de maxim 300 de cuvinte care va fi prezentat
tutorelui
R TA 3.17. Kinezina asigur transportul ctre extremitatea plus a microtubulului,
transport anterograd (de la corpul celular ctre ramificaiile terminale). Dineina asigur
transportul ctre extremitatea minus, transport retrograd. n fiecare dublet un microtubul
este asociat cu dineina. Dineina interacioneaz cu dubletul adiacent pentru a determina o
micare de alunecare a unui dublet pe altul. Dineina ciliar are un domeniu motor care
hidrolizeaz ATP pentru a se deplasa pe microtubul ctre extremitatea minus.
R TA 3.17. prin trei modaliti: a) adugare constant de noi subuniti de tubulin
la nivelul extremitii plus prin care sunt ataai de kinetocori; b) disocierea lent a unui
numr de subuniti de tubulin de la extremitatea minus a polilor fusului; subunitile de
tubulin migreaz permanent de-a lungul microtubulilor kinetocorieni. c) toi microtubulii
ataai la fiecare kinetocor i modific lungimea n mod coordonat n urma oscilaiilor
cromozomiale.
R TA 3.18. Fusul mitotic este constituit din trei clase de microtubuli:

a) Microtubuli polari care interacioneaz ntre ei la centrul fusului i asigur apoi
ndeprtarea polilor la fiecare extremitate a fusului; b) Microtubuli kinetocorieni, purttori ai
cromozomilor; c) Microtubuli interpolari sau astrali situai la exteriorul fusului i a cror
rspndire din centrozom menine organizarea intracelular n mitoz i orienteaz forele
necesare separrii polilor.
R TA 3.20. a; R TA 3.21: b; R TA 3.22: a; R TA 3.23: e; R TA 3.24: c; R TA 3.25: e;
R TA 3.26: b; R TA 3.27: d; R TA 3.28: e; R TA 3.29: e; R TA 3.30: d; R TA 3.31: d;
R TA 3.32: e; R TA 3.33: a; R TA 3.34: a; R TA 3.35: c; R TA 3.36: a; R TA 3.37: e; R TA
3.38: a; R TA 3.38: c;

V. 3.1. Precizai cteva funcii generale ale citoscheletului.

V. 3.2. Comparai structura unui microtubul complet asamblat, unui filament de
actina i a unui filament intermediar.
V. 3.3. Enumerai diferitele tipuri de proteine care se leag la actina i precizai
funcia fiecreia.
V. 3.4. Definii mitoza
Urmtoarele ntrebri se refera la urmtorii termeni. Fiecare termen poate fi folosit o
data, de mai multe ori sau deloc.
a) telofaza; b) anafaza; c) prometafaza; d) metafaza; e) profaza
V. 3.5. Doi centrozomi sunt aranjai la polii opui ai celulei
V. 3.6.Centriolii ncep sa se deplaseze de o parte ntr-o celul animal
V. 3.7. Este una dintre cele mai lungi etape ale mitozei
V. 3.8. Centromerii necuplai, cromatidele surori separate i cei doi noi cromozomi
se deplaseaz la polii opui ai celulei
V. 3.9. Definii metafaza

V. 3.10. n momentul definitivrii metafazei din mitoz, o celula cu 92 de cromatide
va produce doi nuclei care conin un numr de cromozomi?
a) 12; b) 16; c) 23; d) 46; e) 92
V. 3.11. Faza S poate fi delimitat prin:
a) contorizarea numrului de celule; b) determinarea cantitii de ADN la nceputul
i sfritul acesteia; c) sinteza versus distrugerea proteinei S; d) sinteza cromozomului S;
e) stoparea G1
V. 3.12. Unde se poziioneaz microtubulii fusului de diviziune n timpul mitozei, att
n celulele plantelor ct i n celulele animale?
a) centromer; b) centrozom; c) centriol; d) cromatida; e) kinetocor
V. 3.13. n timpul mitozei au loc urmtoarele evenimente, cu excepia:
a) condensarea cromozomilor; b) necuplarea cromatidelor la centromer; c)
formarea fusului de diviziune; d) sinteza ADN; e) dispariia nucleolului
V. 3.14. Dac ntr-o celul sunt 20 de centromeri, ci cromozomi exist acolo:
a) 10; b) 20; c) 30; d) 40; e) 80
V. 3.15. Dac analizm comparativ celulele fiice la sfritul mitozei i citocinezei cu
celula parental n momentul n care se afl n faza G1 a ciclului celular constatm c:
a) celulele fiice au jumtate din cantitatea de citoplasma i jumtate din cantitatea
de ADN;
b) celulele fiice au jumtate din numrul de cromozomi i jumtate din cantitatea de
ADN;
c) celulele fiice au acelai numr de cromozomi i jumtate din cantitatea de ADN;
d) celulele fiice au acelai numr de cromozomi i aceiai cantitate de ADN;
e) celulele fiice au acelai numr de cromozomi i de dou ori mai mult ADN
V. 3.16. Care dintre urmtoarele afirmaii despre cromozomul bacterian nu este
adevrat?
a) este constituit dintr-o singur molecul de ADN circular; b) replicarea ADN
ncepe la originea replicrii; c) centromerii si sunt necuplai n timpul replicrii; d) este
foarte mpachetat n interiorul celulei; e) are gene care controleaz fuziunea binar.

V. 3.17.Modificarea ritmic a concentraiei ciclinei n ciclul celular este determinat

de:
a) o cretere a sintezei, odat ce punctul de restricie este depit; b) cascada de
cretere a sintezei odat ce proteina sa este fosforilat de Cdk; c) rata modificat a
citoplasmei din genom; d) distrugerea sa de ctre o enzima fosforilat; e) legarea PDGF la
receptori pe suprafaa celular
V 3.18. Identificai denumirea enzimelor care controleaz activitile altor proteine
prin fosforilarea acestora?
a) ATP-aze; b) kinaze; c) cicline; d) cromatina; e)protein fosfataze
V. 3.19. Suntei de acord s admitem c centrozomul are rol important pentru a
determina viteza de alungire sau scurtare a microtubulilor ntr-o celula animal? De ce?
V. 3.20. O grupare de celule este testat pentru coninutul su n ADN imediat dup
mitoz i se determin o medie de 8 picograme de ADN per nucleu. La sfritul fazei S,
toate celulele vor avea .picograme i la sfritul fazei G2..picograme.
a) 88; b) 816; c) 168; d) 1616; e)1216.
V. 3.20. Absena .. va avea drept rezultat formarea unei singure celule cu
doi nuclei:
a) interfazei; b) profazei; c) anafazei; d) prometafazei; e) citocinezei
V 3.21. O celula sanguina roie (eritrocit) are timpul de njumtire de 120 de zile.
Dac un adult de vrsta medie are 5 L (5.000 cm3) de snge i fiecare milimetru cubic
conine 5 milioane eritrocite, cte noi celule pot fi produse la fiecare secund pentru a
nlocui ntreaga populaie de eritrocite?
a) 30.000; b) 2.400; c) 2.400.000; d) 18.000; e) 30.000.000
V. 3.22. n timpul crei faze a meiozei are loc crossing-over-ul?
a) profaza I; b) anafaza I; c) telofaza I; d) profaza II; e) metafaza II
n continuare vor fi utilizate urmtoarele afirmaii cheie pentru a rspunde

urmtoarelor ntrebri. Fiecare rspuns poate fi folosit o dat, de mai multe ori sau deloc.
a) Afirmaia este valabila numai pentru mitoz;
b) Afirmaia este valabila numai pentru meioza I;
c) Afirmaia este valabila numai pentru meioza II;
d) Afirmaia este valabila pentru mitoza i meioza I;
e) Afirmaia este valabila pentru mitoza i meioza II.
V.3.23. Aceasta are loc cnd o celula se divide pentru a forma doi nuclei care
genetic sunt identici
V. 3. 24. Au loc procese de crossing-over i sinapse cromozomiale omologe
V. 3.25. Centromerii sunt necuplai i cromatidele sunt separate unele de altele.
V. 3.26. Are loc sortarea independenta a cromozomilor.
V. 3.27. Evenimentele care au loc n timpul acestui proces cauzeaz majoritatea

recombinrilor genetice
V. 3.28. Procesul (este) sau procesele sunt precedate de replicarea ADN
V. 3.29. Care dintre urmtoarele procese au loc numai n meioza dac comparm
profaza I din meioz cu profaza din mitoz?

a) condensarea cromozomilor; b) formarea tetradelor; c) dezasamblarea nveliului

nuclear; d) formarea unui fus de diviziune; e) fiecare cromozom este alctuit din dou
cromatide.
V. 3.30. Meioza II este similar mitozei prin faptul c:
a) are loc formarea de sinapse la nivelul cromozomilor omologi; b) ADN se replic
nainte de diviziune; c) celulele fiice sunt diploide; d) cromatidele surori se separ n timpul
anafazei; e) numrul cromozomilor este redus.

3.8. Bibliografie
Masson,, Paris 1997, Chapitre 3: Cycle et division de la cellule
Book Contents
10. Biologie Molculaire et Cellulaire, Exercices et corriges, Nathan Universit, 1994
11. Biochimie, gntique, Biologie molculaire, J Etienne, 3eme dition, Masson, 1996
Elsevier, 2004, Chapitres 43-48: Cycle cellulaire
edition, ASM Press, 2004, Chapter 14: The cell cycle
Boeck Universit, 1998, Chapitre 14 : La reproduction cellulaire
Roberts, P. Walter, Garland Publishing Inc, 2004, Chapter 17: Cell division
Edition, Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 12 and 13: The cell cycle;
Meiosis and sexual Life cycles
Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 12 and 13: The cell cycle; Meiosis and
sexual Life cycles
Science, 4th edition, 2002
Darnell, 4th edition, 2000, Freeman and Company, Chapter 22: Cell Birth, Lineage and
Death
cellulaire
Biology Book:
biologie : Biologie cellulaire, Cycle cellulaire

Organizarea i funcionarea celulei
ORGANIZAREA I FUNCIONAREA CELULEI
pag
Cuprins 124
Introducere 125
4. 1. Structura membranelor 128
4.1.1. Arhitectura membranar 128
4.1.1.1. Dublul strat lipidic 128
4.1.1.2. Proteinele membranare 132
4.1.1.3. Glucidele 134
4. 2. Schimburile cu mediul nconjurtor 135
4.2.1. Transporturi membranare 135
4.2.1.1. Transportul pasiv 137
4.2.1.2. Transportul activ 138
4.2.1.3. Meninerea concentraiilor ionice 139
4.2.1.4. Transportul nutrienilor 141
4.2.1.5. Transportul cu ajutorul veziculelor 142
4.3. Comunicarea intercelular 145
4.4. Traficul intracelular al proteinelor 147
4.4.1. Rolul reticulului endoplasmatic 148
4.4.2. Sinteza proteinelor de ctre ribozomii de la suprafaa RER 149
4.4.3. Glicozilarea proteinelor n RE 150
4.4.4. Biogeneza membranelor n RER 150
4.4.5. Rolul aparatului Golgi 151
4.4.6. Trierea proteinelor 153
4.5 Mitocondrii i cloroplaste (conversia energiei) 155
4.5.1. Mitocondrii 155
4.5.1.1. Organizarea mitocondriei 156
4.5.1.2. Genomul mitocondrial 157
4.5.1.3. Biogeneza mitocondriilor 158
4.5.1.4. Funciile mitocondriei 159
4.5.1.5. Producerea de ATP 159
4.5.2. Cloroplaste 163
4.6. Nucleul i funciile sale 166
4.6.1. nveliul nuclear 167
4.6.1.1. Structura i funcia complexului porilor nucleari 169
4.6.1.2. Traficul nucleu-citoplasma 169
4.6.2. Nucleul este un organit organizat 171
4.6.2.1. Cromozomii 171
4.6.3. mpachetarea genomului eucariot 176
4.6.3.1. Nucleozomii - primul nivel de organizare al cromozomului 179
4.6.3.2. Nivelurile structurale superioare ale cromatinei 182
4.6.4. Eucromatina i heterocromatina 185
4.7. Rspunsuri i comentarii la testele de autoevaluare unitatea 4 187

Introducere
Celula este o unitate vie cu via proprie, care are propria

homeostazie (biochimie), dar n acelai timp trebuie s rspund la necesitile
organismului, adic s fie receptiv la mediu.
Celula are un diametru de 5-100 m i conine aproximativ un

miliard de molecule proteice, constituind aprox. 60% din masa uscat. Se
crede c exist aproximativ 10 000 de tipuri diferite de proteine ntr-o celul.
Pentru o bun funcionare, celulele au individualizat procesele biochimice din
citoplasm, o parte din acestea dezvoltndu-se n organitele celulare.
Organitele au propria lor anatomie funcional i procese

biochimice. Dup funcia lor principal, organitele intervin n procese de
sintez sau degradare metabolic. Aceast distincie arbitrar arat
dinamismul metabolismului celular. Constituenii sunt supui unei rennoiri
permanente care permite celulei s rspund mai bine solicitrilor fiziologice:
Pentru sinteza:
Nucleul, localizarea i replicarea informaiei genetice (ADN), sinteza

ARNm, ARNt i ARNr (ultimul fiind sintetizat ntr-o structura nuclear
distinct, nucleolul)
Mitocondria, metabolismul oxigenului i sinteza ATP (surs de energie)
i NAD(P)H (potenial reductor);
Reticulul endoplasmatic, sinteza (glico)proteinelor (RE rugos) i lipidelor
(RE neted);
Aparatul Golgi, maturarea (glico)proteinelor i formarea veziculelor de
secreie.
Pentru degradare:
Endozomul, reciclarea membranelor i proteinelor de suprafa;

Lizozomii, degradarea proteinelor, lipidelor i polizaharidelor;
Peroxizomii, detoxifierea moleculelor potenial periculoase.
Pentru structur:
Citoscheletul, forma celulei, contracie, micare, diviziune celular. n

general, toate celulele au aceleai organite, dar n funcie de rolul lor n
organism (specializare), sunt mai mult sau mai puin dezvoltate.

Obiective generale
Clarificarea conceptelor de structur i funcionare celular;
Explicarea proceselor de comunicare intra- i intercelular;
Identificarea proceselor i structurilor responsabile de

asigurarea energeticii celulare i transferului de informaie genetic
Obiective specifice:
La terminarea studiului acestei uniti trebuie s fii capabili s:
Identificai:
i) elementele structurale ale membranelor;

ii) modalitile de comunicare intercelular;
iii) organitele implicate n traficul intracelular al proteinelor;
iv) organitele implicate n conversia de energie;
v) modalitile de transmitere a informaiei genetice.
Cunoatei:
i) arhitectura membranar i diferitele modaliti de transport

bidirecional al metaboliilor prin membrane;
ii) tipurile de schimburi care se realizeaz ntre celul i mediu;
iii) structura i organizarea organitelor implicate n biosinteza

elementelor celulare structurale i funcionale;
iv) structura i organizarea mitocondriilor i cloroplastelor;
v) organizarea i funcionarea nucleului;
vi) compactarea materialului genetic i nivelurile de organizarea ale

acestuia.


prezentate.
corect.
unei probleme sau scrierea unor scurte eseuri prin care s v
exprimai prerea asupra anumitor aspecte.
testului v recomandm s reluai ntregul material i apoi s
rspunsul lor fiind evident. Alte teste necesit o bun integrare a
cunotinelor obinute i necesit parcurgerea ntregii uniti.
Enunurile testelor au i ele rolul lor n fixarea cunotinelor i n
formarea unei viziuni de ansamblu asupra materiei.

Gradul de nelegere a conceptelor i noiunilor prezentate n
aceast unitate de nvare va fi cuantificat pe baza notei obinute la
Lucrarea de verificare Nr.4 care conine 25 de probleme.
parcurs. Cele 25 de ntrebri sunt echivalente i vor fi notate cu 4
Testele din lucrarea final sunt de acelai tip cu testele de
autoevaluarea pe care le vei rezolva pe parcursul parcurgerii
materialului unitii 4.
Materialul conine 37 de figuri care prezint informaii menite
s ntregeasc i s clarifice noiunile prezentate. Un rezultat bun la
responsabilitate a testelor de autoevaluare i de nelegerea
figurilor.

4. 1. Structura Membranele nconjoar celula i organitele. Ele asigur mai

membranelor multe funcii: i) separare; ii) schimb molecular ntre compartimente;
iii) recunoaterea compuilor biologici i a altor celule. Multitudinea
acestor funcii ne face s nelegem variabilitatea compoziiei
membranelor.
4.1.1. Arhitectura
membranar Constituite n esen dintr-un bistrat fosfolipidic, membranele
biologice conin o mare diversitate de proteine care le confer
specificitate. Raportul proteine/lipide este corelat cu activitatea
membranelor. De exemplu el este 3,2 pentru membrana
mitocondrial intern care este sediul fosforilrii oxidative i 1,1
pentru membrana extern a aceluiai organit.
n structura membranei, lipidele i proteinele membranare
constituie un mozaic fluid n care diferitele componente
moleculare se deplaseaz i sunt permanent rennoite.
4.1.1.1. Dublul strat Lipidele reprezint aproximativ 50% din masa membranar.
lipidic Trei tipuri principale de lipide intr n compoziia unei membrane:
fosfolipidele, cele mai abundente, colesterolul i glicolipidele.
Toate aceste molecule sunt amfifile fiind caracterizate de

prezena unui domeniu hidrofil i a unuia hidrofob. Caracterul amfifil
le confer proprietatea de agregare pentru a forma spontan fie
micele, fie vezicule lamelare n dublu strat. n membranele
biologice, lipidele sunt organizate n strat dublu i prin aranjarea lor
dau fluiditate membranei. Fluiditatea depinde de mai muli
parametri i este diminuat de: i) scderea temperaturii; ii) prezena
lipidelor care conin acizi grai cu catena scurt; iii) absena
legturilor duble n catenele acizilor grai; iv) cantitate mare de
colesterol.
Lipidele formeaz un strat dublu (5-6 nm grosime) relativ

impermeabil la trecerea celor mai multe molecule hidrosolubile
(proteine, hormoni, ioni) (Figura 4.1). Membrana este o bariera
eficace, dar poate fi strbtut uor de moleculele hidrofobe ca
alcooli, steroizi i anestezice generale. Moleculele mici de tipul
glucozei sau adrenalinei au nevoie de un timp considerabil pentru a
trece.
Proprietile unui dublu strat lipidic artificial fr proteine sunt
prezentate n figura 4.1.
Structura de dublu strat se datoreaz proprietilor amfifile
ale moleculelor lipidice. Acestea posed o extremitate hidrofil
(polar) i una hidrofob (apolar) (Figura 4.2).

Figura 4.1. Proprietile unui dublu strat lipidic artificial fr proteine (prelucrat dup
Exist o mare variabilitate a lipidelor membranare. Cele mai

abundente sunt fosfolipidele compuse dintr-un cap polar care
conine o grupare fosfat i dou brae hidrocarbonate formate din
acizi grai. ntr-un mediu apos, capetele polare se orienteaz ctre
exterior i braele apolare ctre interiorul membranei. Dublul strat
lipidic este fluid datorit dublei mobiliti: lateral i de rotaie, a
lipidelor (Figura 4.2).
Figura 4.2. Structura unui lipid amfifil (fosfolipid)

(prelucrat dup http://www.infobiogen.fr/deambulum/index.php)

Schimbul de lipide ntre cele dou straturi este redus

(micri verticale sau flip-flop), ceea ce permite o distribuie
asimetric a diferitelor lipide i astfel confer funcii diferite
straturilor membranare orientate ctre exterior sau ctre citosol. De
exemplu, n membrana hematiilor umane toate lipidele care conin
colin, fosfatidilcolin, sfingomielin i glicolipidele se gsesc la
exterior, n timp ce, pentru cea mai mare parte,
fosfatidiletanolamina i fosfatidilserina sunt prezente n interior. ntr-
un mediu apos, lipidele membranare pot adopta alte dou
configuraii: miceliu sau asocierea cu o protein. Asimetria unei
membrane are semnificaie fiziologic deoarece bulversarea ei are
mai multe consecine ca, de exemplu, recunoaterea eritrocitului de
ctre macrofag i eliminarea sa din circulaia sangvin.
Lipidele sunt sintetizate n RE neted i aici este stabilit i

asimetria straturilor. Asimetria lipidic este important pe plan
funcional, mai ales n localizarea proteinelor asociate membranei i
care intervin n transmiterea semnalelor.
Anumite molecule lipidice, numite glicolipide sunt glicozilate

(Figura 4.3). Resturile glucidice de tipul galactozei, glucozei i mai
ales acidul sialic sunt adugate n aparatul Golgi. Glicolipidele sunt
mereu asociate cu stratul extern i aparin glicocalixului.
Glicocalixul este zona periferic celular bogat n glucide.
Deoarece resturile glucidice legate cu proteinele sunt adesea
implicate n interaciile celulei cu mediul, este posibil ca glicolipidele
s aib un rol analog.
TA 4.1. Care este compoziia chimic i structura membranei plasmatice?
TA 4.2. Urmtoarele molecule sunt parte a membranei celulare cu excepia:

a) lipidelor; b) acizilor nucleici; c) proteinelor; d) gruprilor fosfat; e) steroizilor.
TA 4.3. Prezena colesterolului n membrana plasmatic a unor animale:

a) permite membranei s stea fluid mai uor cnd temperatura celulei scade;
b) permite animalelor s ndeprteze atomii de hidrogen din fosfolipidele

saturate;
c) permite animalelor s adauge atomi de hidrogen la fosfolipidele nesaturate;
d) face membrana mai puin flexibil, astfel nct poate susine o presiune mai
mare n cadrul celulei;
e) face ca animalele s fie mult mai susceptibile la boli ale sistemului

circulator.

Figura 4.3. Structura glicolipidelor (prelucrat dup

Colesterolul este un lipid structural distinct. Are rol particular

n membran, fcnd-o mai puin deformabil (mai rigid) i
diminueaz permeabilitatea moleculelor mici hidrosolubile
Figura 4.4. Structura

colesterolului (prelucrat dup
http://www.infobiogen.fr/deambulum/ind
ex.php)
TA 4.4. Una dintre functiile colesterolului n membranele celulelor animale

este de a:
a) facilita transportul de ioni; b) stoca energia;
c) menine fluiditatea membranar; d) difuza accelarat; e) fosforila ADP

4.1.1.2. Proteinele Cu toate c structura de baza a membranei plasmatice este

membranare determinat de dublul strat lipidic, majoritatea funciilor specifice le
au proteinele. n consecina, ntre diferitele tipuri celulare, cantitatea
i tipurile de proteine din membrana plasmatic sunt extrem de
variabile. Exist diferene structurale i funcionale i ntre
membrana plasmatic i membranele intracelulare ale organitelor.
Proteinele membranare se mpart n dou clase:
i) proteine intrinseci sau integrale (70% din proteinele

membranare) care se afund n dublul strat lipidic. Au caracter
amfifil i posed una sau mai multe regiuni care interacioneaz cu
lanurile hidrocarbonate ale lipidelor membranare. Regiunile lor
hidrofobe sunt compuse din aminoacizi cu catene laterale apolare.
Aceste regiuni traverseaz membrana sub forma de -helix sau -
sheet;
ii) proteine extrinseci sau periferice, nu sunt ancorate n

partea hidrofob a membranei, dar sunt meninute prin legturi
necovalente pe una din feele membranei (Figura 4.5).
Figura 4.5. Structura membranei plasmatice cu evidenierea diferitelor tipuri de

proteine (prelucrat dup http://www.infobiogen.fr/deambulum/index.php)
TA 4.5. n acord cu modelul membranar care dintre urmtoarele

componente ale membranei unei celule animale va prezenta o expunere direct pe
suprafaa extracelular:
a) fosfolipide; b) proteine periferice; c) glucide membranare; d) a i c; e) a, b i c

Difuzia proteinelor i lipidelor este limitat la domenii

particulare ale membranei. De exemplu, n celulele epiteliale ale
intestinului i tubulilor renali, anumite tipuri de proteine membranare
sunt prezente doar la polul apical al celulei, n timp ce alte proteine
sunt localizate doar la nivelul suprafeelor lateral i bazal. n
aceste regiuni membranare, compoziia lipidic difer mai ales la
nivelul stratului extern. Segregarea constituenilor membranari i
meninerea se realizeaz graie barierelor formate de jonciunile
intercelulare nguste. Totui, celulele au mijloace pentru a limita
difuzia proteinelor n domeniile specifice ale membranei, genernd
astfel o polaritate celular funcional. Exist trei mijloace de a
restrnge mobilitatea proteinelor specifice membranei plasmatice:
i) legarea proteinelor membranare la citoschelet sau alte
proteine intracelulare;
ii) legarea proteinelor membranare la complexe proteice
extracelulare (celule adiacente sau matrice);
iii) asamblarea proteinelor membranare n complexe
macromoleculare de exemplu, subuniti ale receptorilor)
Fenomenul de polarizare funcional este bine ilustrat de

celulele epiteliale n care s-a identificat un pol apical, un pol bazal i
dou fee laterale. Anumite proteine sunt strict localizate pe partea
apical (transportorii Na/glucoza), altele se gsesc lateral
(ocludinele jonciunilor nguste) i altele la polul bazal (integrine,
Figura 4.6).
Figura 4.6. Polarizarea funcional a proteinelor n celulele epitelial . (prelucrat

TA 4.6. Ce tipuri de molecule trec cel mai uor printr-o membran celular:
a) mari i hidrofobe; b) mici i hidrofobe; c) molecule polare mari; d) molecule
ionice; e) monozaharide, de tipul glucozei

Funciile principalelor proteine membranare sunt :

i) schimb selectiv de materie (transportori membranari,
canale ionice i proteine implicate n exocitoz i endocitoz);
ii) aderena la matricea extracelular i la celulele adiacente
(integrine i caderine);
iii) conexiune cu citoscheletul (vinculina asociat cu
integrinele i membrana plasmatic;
iv) recepia semnalelor extracelulare (receptori ai factorului
de cretere EGF Epithelial Growth Factor);
v) transducerea semnalului prin molecule efectoare (proteina
G);
vi) suport pentru activitatea enzimatic.
TA 4.7. n acord cu modelul de mozaic fluid al membranelor celulare, care

dintre urmtoarele afirmaii despre fosfolipidele membranare este adevarat?
a) se pot mica lateral de-a lungul suprafeei membranei;
b) pot executa micarea de flip-flop dintr-o parte n alta a membranei.
c) exist ntr-un bistrat nentrerupt, cu proteinele membranare restricionate
la suprafaa membranei;
d) sunt libere s se deplaseze din membran i s se dizolve n soluiile din
mprejurimi;
d) au prelungiri hidrofilice n interiorul membranei
4.1.1.3. Glucidele Glucidele sunt prezente pe faa extern a membranei

plasmatice, legate covalent, sub form de catene oligozaharidice, la
proteinele membranare (glicoproteine) i lipide (glicolipide).
Monozaharidele constituente (galactoza, N-acetilglucozamina,
fucoza, acid sialic) sunt legate ntre ele prin diferite legturi ozidice
n sau , ceea ce crete diversitatea i specificitatea
oligozaharidelor. Glicoproteinele i glicolipidele se gsesc
ntotdeauna n jumtatea extern a dublului strat lipidic i aparin
glicocalixului. Aceasta zon pericelular bogat n glucide are rol n
procesul de recunoatere celular i protejeaz celula de
agresiunea mecanic (flux sangvin), chimic (aciditatea gastric) i
enzimatic (proteaze).
TA 4.8. Care dintre urmatoarele substane ar putea s se deplaseze mult

mai rapid n cadrul bistratului lipidic al unei membrane plasmatice?
a) CO2; b) un aminoacid; c) glucoza; d) K+; e) amidon.

4.2. Schimburile Caracterul hidrofob al dublului strat lipidic permite celulei s

cu mediul extern menin concentraiile diferiilor solui de o parte i de alta a
membranei, adic ntre citoplasma i mediul extracelular n fiecare
compartiment celular (mitocondrie, lizozom, RE, etc.). Separarea
compartimentelor definite de membran nu trebuie s fie total i
schimburile moleculare sunt necesare vieii celulare. Astfel, celulele
au dezvoltat sisteme de transport ionic i al macromoleculelor cu
ajutorul proteinelor membranare: transportori, pompe sau canale.
Celulele au nevoie de aceste proteine membranare de

transport pentru:
i) aport de metabolii;
ii) eliminarea deeurilor metabolice;
iii) meninerea concentraiilor ionice.
4.2.1. Transporturi Pasajul moleculelor prin membran implic lipidele i
membranare proteinele. Cu ajutorul lipozomilor (vezicule lipidice artificiale), s-a
demonstrat c orice molecul poate difuza printr-o membran i c
mrimea i coeficientul de partiie (solubilitatea n lipide/solubilitatea
n ap) condiioneaz viteza de difuzie. O substan va traversa
mai uor o membran cu ct diferena de concentraie de o parte i
de alta va fi important (gradient de concentraie). n general,
molecula se deplaseaz din compartimentul cu concentraie mai
mare ctre cel cu concentraie mai mic. Pentru moleculele
insolubile n lipide, transportul se realizeaz graie proteinelor
transmembranare, proteinelor purttoare sau permeazelor specifice
unei molecule sau familii de molecule cu structur apropiat.
Transportul poate fi de tip uniport, implic doar un solut,
vehiculat de pe o parte pe alta a membranei. Poate exista i un
cotransport de tip simport (transportul a doi solui n acelai sens)
sau de tip antiport (transportul a doi solui n sens opus). Dac
solutul nu este ncrcat, transportul su depinde doar de gradientul
de concentraie. Dac solutul are o sarcina net, transportul su
depinde de gradientul de concentraie i de diferena de potenial
electric al membranei. Aceste dou componente constituie
gradientul electrochimic contra cruia trebuie s se deplaseze
solutul. Celulele dispun de proteine, capabile s realizeze un astfel
de transport, numit activ, prin consum de energie furnizat de ATP.
TA 4.9. Care dintre urmatoarele afirmaii descrie o caracteristic a unei

proteine carrier dintr-o membran plasmatic?
a) este o protein membranar periferic; b) expune o specificitate pentru
un tip particular de molecula; c) necesit energie pentru a funciona; d) lucreaz
mpotriva difuziei; e) are aminoacizi hidrofobi puini sau deloc.

Traversarea membranei prin difuzie simpl

Nu intervin proteine membranare. Este limitat la gaze (N2,
O2, CO2, NO), molecule lipofile (hormoni steroizi i tiroidieni, uree,
etanol, etc.) i n anumite limite ap (Figura 4.7).
Transport membranar cu proteine de transport

Difuzia printr-un transportor crete viteza i selectivitatea
transportului n raport cu difuzia simpl. Transportorul pentru
glucoza (permeaz GLUT1) ilustreaz bine cele dou aspecte.
Dac se compar difuzia pasiv cu cea facilitat, se observ o
diferen clar de eficacitate a transportului membranar.
Figura 4.7. Comparaie ntre difuzia pasiv i transportul facilitat (prelucrat dup
Difuzia printr-un transportor permite transportul soluilor

mpotriva gradientului chimic (concentraie) i electric (diferena de
potenial membranar). Transportul realizat contra gradientului
electric sau chimic consum energie i este un transport activ.
Permite meninerea concentraiilor diferiilor solui de o parte i de
alta a membranei (Figura 4.7).
TA 4.10. Dintre activitile de mai jos una singur nu necesit energie

ATP:
a) deplasarea O2 n celul; b) sinteza proteic; c) deplasarea ionilor Na+ n
afara celulei; d) flux citoplasmatic; e) exocitoza.

4.2.1.1. Transportul Exist trei clase principale de proteine membranare de

transport:
pasiv
i) canale, pori care permit micarea pasiv a ionilor (canale
ionice) sau molecule mici (apa, glucide, aminoacizi, nucleotide) cu
o capacitate de 107-108 molecule/s.
ii) pompe, cu o capacitate de transport activ de aproximativ
2 3
10 -10 ioni/s. Sunt proteine care hidrolizeaz ATP, deci ATP-aze.
Procesul este un transport activ primar.
iii) transportori care asigur o trecere pasiv (uniport) sau
activ (simport i antiport) cu o capacitate de transport de 102-104
molecule/s. Transportul activ necesit apariia prealabil a unui
gradient ionic (controlat de ctre o pomp) i se mai numete
transport activ secundar.
Se realizeaz graie canalelor proteice, care las s treac

liber solutul prin difuzie simpl, sau permeazelor care fixeaz un
solut i l transport prin membran. Acest ultim proces, numit
difuzie facilitat, necesit schimbri conformaionale ale
transportorului. n timp ce difuzia este condiionat doar de
diferena de concentraie a unui solut de o parte i de alta a
membranei, transportul facilitat depinde, n plus, de numrul de
transportori, i deci de gradul lor de saturaie (Figura 4.8).
Figura 4.8. Transportul facilitat al glucidelor n funcie de concentraie (prelucrat

TA 4.11. Care dintre urmatoarele afirmatii despre difuzie este corect?

a) este foarte rapid la distane mari; b) necesit un consum energetic
pentru celul; c) este un proces pasiv n care moleculele se deplaseaz dintr-o
regiune de concentraie mare ntr-o regiune de concentraie mic; d) este un
proces activ n care moleculele se deplaseaz dintr-o regiune de concentratie
mic ntr-o regiune de concentraie mare; e) necesit proteine integrale n
membrana celular.

4.2.1.2. Transportul Transportorii acioneaz ca pompe pentru a antrena soluii

activ contra gradientului lor electrochimic. Energia necesar transportului
activ poate fi furnizat:
i) direct de la ATP, cum este cazul pompei de Na+-K+ n
cazul transportului activ primar;
ii) graie energiei rezultate din gradientul ionic stabilit de
transportul activ primar ca n cazul schimbului glucoza - Na. Exist
mai multe ATP-aze care cupleaz utilizarea ATP cu transportul
activ al diverilor ioni. n principal, ele sunt localizate n membrana
plasmatic, membrana intern mitocondrial i membrana
lizozomal.
Transportorii i pompele
Transportorii i pompele sunt adesea formai din mai multe
subuniti proteice dintre care unele traverseaz membrana de mai
multe ori. Pasajul necesit o schimbare major a configuraiei
proteinelor. Dac se realizeaz trecerea unei singur tip de molecul
transportul este de tip uniport (Figura 4.9) n general, transportul
activ funcioneaz cu ajutorul unui gradient ionic. n sistemele co-
transport, transferul unui solut depinde de transferul simultan al
unui solut secundar. n funcie de direcia de deplasarea a celor doi
solui se disting urmtoarele tipuri de transport:
i) simport cnd cei doi solui merg n aceeai direcie;
ii) antiport, dac direciile de deplasare a soluilor sunt opuse
(Figura 4.9).
Figura 4.9. Tipuri de sisteme transport (prelucrat dup


Na+/K+ ATP-aze sau pompe Na+/K+

4.2.1.3. Meninerea
concentraiilor
Concentraia de K+ este de 10 - 20 de ori mai mare n
ionice
interiorul celulelor dect la exterior, n timp ce pentru Na+ este
invers. Aceste diferene sunt determinate i meninute de o ATP-
aza din membrana plasmatic care se comport ca o pomp care
expulzeaz activ 3 ioni Na+ ctre exterior i import 2 ioni K+ n
interior (Figura 4.10). Na+/K+ ATP-aza este electrogenic i
implicat n producerea unui potenial electric membranar deoarece
diminueaz concentraia intracelular de ioni pozitivi. Transportul
de Na+ i K+ este strns cuplat cu hidroliza ATP pentru transferul
celor doi ioni contra gradientului lor electrochimic (transport activ
primar) (Figura 4.10). Gradientul de Na+/K+ generat de o parte i de
alta a membranei este esenial pentru funcionarea celulei i este
implicat n diverse funcii:
i) reglarea pH;
ii) reglarea volumului celular;
iii) transportul nutrienilor de tip glucoz i aminoacizii;
iv) transmiterea semnalelor n sistemul nervos (potenial de
aciune)
Figura 4.10. Pompa de Na+/K+ (prelucrat dup


Cadru 4.1. Diferena de potenial membranar
Diferena de potenial transmembranar al unei celule animale este

aproximativ 70 mV, faa citoplasmatic fiind ncrcat negativ n raport cu cea
extern. Potenialul de membrana este rezultatul micrilor ionice
transmembranare. Micrile sunt consecina unei distribuii inegale de o parte i
de alta a membranei a ionilor i macromoleculelor ncrcate (glucide, complexe,
nucleotide i proteine) (Figura 4.11).
Ca2+ ATP-aza sau pompa Ca2+
Celulele animale menin concentraii intracelulare foarte mici

de Ca2+. Ionii de calciu sunt implicai n cile de semnalizare ale
contraciei musculare, exocitoz i activarea diverselor tipuri
celulare ca rspuns la un stimul exterior. Ca2+ ATP-azele sunt
situate n membrana plasmatic, dar i n membrana RE (reticul
sarcoplasmic pentru celulele musculare unde Ca2+ ATP-azele
reprezint 90% din proteinele membranare). n interiorul RE,
concentraia Ca2+ liber este tamponat de calcireticulina, o proteina
care fixeaz 20 de ioni Ca2+ pe fiecare molecul. n ce privete
structura/funcia, aceast ATP-az seamn mult cu Na+/K+ ATP-
aza, cu specificaia c este selectiv la calciu.
Pompele sunt definite ca proteine de transport care

utilizeaz hidroliza ATP ca surs de energie. Este posibil ca
transportorii s transfere solutul suferind o modificare a
conformaiei reversibil care expune alternativ situsul de legare al
solutului pe o faa a membranei i apoi pe cealalt (Figura 4.10).
Figura 4.11. Comparaie transport pasiv i transport activ (prelucrat dup


4.2.1.4. Transportul Transportul glucozei

nutrienilor
Celula poate transporta glucoza n dou moduri:
i) un transport activ efectuat prin simportul Na+- glucoz.
Acest transportor este abundent n epiteliul tubului digestiv i tubulii
renali i utilizeaz puternicul gradient transmembranar al Na+
pentru a permite intrarea specific a glucozei n celul n raport de
o molecul de glucoza pentru un ion Na+;
ii) un transport pasiv uniport efectuat de permeazele pentru
glucide (GLUT-1 la GLUT-5). GLUT-2 poate transporta fructoza i
galactoza, nu doar glucoza, iar GLUT-5 transport specific fructoza.
Aceste dou tipuri de transportori ai glucozei se asociaz n
funcia fiziologic de transport a glucozei prin epiteliul tubului
digestiv: glucoza intestinal este transportat activ n interiorul
enterocitelor de ctre transportorii Na+-glucoza (simport) localizai
n regiunea apical a membranei. Creterea concentraiei
intracelulare de glucoz determin ieirea ei la polul bazal graie
unei permeaze specific pentru glucoza (GLUT-1). Localizarea
selectiv a celor dou tipuri de transportori, la cei doi poli
membranari ai enterocitelor, este esenial transportului orientat i
constituie un excelent exemplu de polaritate structural i
funcional a celulei.
TA 4.12. Cum ilustreaz Na+-K+ ATP-aza faptul c membrana plasmatic

are dou fee?
TA 4.13. Care este rolul gradientului de Na+/K+ generat de o parte i de
alta a membranei de ctre aciunea Na+-K+ ATP-azei?
TA 4.14. Dac ar trebui s injectai ntr-un axon gigant de calmar o soluie
0,1M de NaCl i 0,1M de KCl, ionii Na+ i K+ fiind marcai radioactiv, care dintre
aceti ioni marcai v-ai atepta s apar cel mai rapid n apa din mediu, dac
axonul ar fi n repaus? Dar cnd neuronul este stimulat s produc un anumit
numr de poteniale de aciune?
TA 4.15. Dac, canalele de Na+ s-ar putea redeschide imediat dup
nchiderea lor n timpul unui potenial de aciune, care ar fi consecina pentru
conducerea unui influx?
TA 4.16. Glucoza difuzeaz ncet prin bistraturile fosfolipidice artificiale. ,
Totui, celulele care cptuesc intestinul subire deplaseaz rapid cantiti mari
de glucoz din alimentele bogate n glucoz n citoplasma lor deficitar n
glucoz. Utiliznd aceast informaie, indicai care mecanism de transport este
mult mai probabil s funcioneze n celulele intestinale?
a) difuzia simpl; b) fagocitoza; c) pompe de transport activ; d) exocitoza;
e) difuzia facilitat
TA 4.17. Transportul de potasiu ntr-o celula animal sau n afara ei,
necesit:
a) concentraii celulare mici de sodiu; b) concentraii celulare mari de potasiu;
c) o sursa de energie (ATP) sau un gradient de protoni; d) glucoza pentru legarea
sau eliberarea ionilor; e) hormoni ai plantelor inserai n membrana celular.

Transportorii aminoacizilor
n enterocite, trecerea aminoacizilor prin membrana

plasmatic utilizeaz un simport funcionnd pe baza unui gradient
de sodiu. Este exemplul transportorului Na+/L-leucina.
Transportorii ABC
Aceti transportori constituie o mare familie de ATP-aze

(cam 500 de membri) cu localizare ubiquitar i transport
aminoacizi, glucide, polizaharide, acizi grai, peptide i ioni.
Transportul este susinut de hidroliza ATP.
TA 4.18. Pompa de sodiu-potasiu este numit pomp electrogenic,

deoarece:
a) pompeaz cantiti egale de Na+ i K+ prin membran; b) pompeaz ioni
de hidrogen n celul; c) contribuie la potenialul membranar; d) ionizeaz sodiu i
potasiu; e) pompeaz ioni de hidrogen n celul.
TA 4.19. Co-transportul proteic care permite ca dou substane diferite s

traverseze o membrana n aceeai direcie este:
a) de obicei un uniport; b) de obicei un biport; c) de obicei asociat cu o
pomp de protoni; d) insensibil la temperatur; e) de obicei asociat cu un antiport.
TA 4.20. Care dintre urmatoarele procese le includ pe toate celelalte?

a) osmoza; b) difuzia unui solut printr-o membran; c) difuzia facilitat; d)
transport pasiv; e) transportul unui ion n funcie de gradientul su electrochimic.
4.2.1.5. Transportul Transportorii transmembranari nu pot vehicula

cu ajutorul macromolecule de tipul proteinelor, sau particule ca bacteriile sau
veziculelor resturile celulare. Mecanismele folosite de celula implic formarea
de vezicule. Transportul ctre citoplasma se numete endocitoz,
n timp ce transportul de la citoplasm ctre mediul extracelular se
numete exocitoz. n interiorul celulei, un flux de vezicule permite
transportul macromoleculelor ntre diferite compartimente. Pornind
de la fiecare organit, mecanisme specifice permit mpachetarea
selectiv, n vezicule, a proteinelor i lipidelor destinate altui
compartiment. O ipotez adevrat ar fi c vezicula de transport
posed la suprafaa sa dou categorii de proteine:
i) una capabil s recunoasc moleculele transportate de
vezicul;
ii) cealalt pentru recunoaterea organitului int.
Formarea veziculei este asigurat prin asamblarea clatrinei.
Procesul se numete endocitoz dependent de clatrin i
presupune organizarea acestei proteine sub forma unei reele
poliedrice.

Endocitoza
Desemneaz formarea veziculelor prin includerea
membranei plasmatice care nconjoar o particul sau lichid
extracelular. Se disting trei forme de endocitoz care difer prin
mrimea veziculelor i specificitatea pentru moleculele transportate
(Figura 4.12).
Pinocitoza, cu vezicule care nu depesc 150 nm n
diametru, nglobeaz lichid extracelular i eventual molecule mici.
Fagocitoza corespunde mecanismelor de ingestie a
microorganismelor i resturilor celulare, graie veziculelor de
mrime mare, peste 250 nm, fagozomii. La vertebrate, ea se
limiteaz la celule specializate cum sunt granulocitele i
macrofagele.
Endocitoza mediat de receptori este un proces specific.
Intervin proteine membranare care recunosc i fixeaz liganzii
determinai specific. Legturile ligand-receptor induc o regrupare
localizat a complexului i formarea unei invaginri a membranei
tapetat pe faa sa citoplasmatic cu proteine fibroase care
formeaz o manta n jurul veziculei. Cele mai bine caracterizate
dintre proteinele mantalei sunt clatrina i adaptina. Dup interaciile
dintre receptori i adaptine, clatrinele se fixeaz progresiv la
adaptine. Rearanjamentele ntre clatrina i adaptine duc la
deformarea membranei i la formarea ulterioar a unei vezicule
acoperit de o manta de clatrin. Vezicula pierde rapid proteinele
din manta i migreaz ctre destinaia sa. Un astfel de mecanism
de endocitoz este cunoscut pentru internalizarea colesterolului
sub forma lipoproteinelor de densitate mic, LDL, i pentru
transferul fierului fixat de transferin. Pentru c endocitoza este un
proces permanent i induce dispariia receptorilor de la suprafaa
membranei, o reciclare a receptorilor este realizat de vezicule
nencrcate permind compensarea pierderii de componente de
pe suprafaa membranar provocat de endocitoz.
Exocitoza
Veziculele de transport conduc ctre membrana plasmatic a
celulelor eucariote molecule care, dup natura lor, sunt fie integrate
n membran pentru a asigura rennoirea, fie sunt eliberate n
mediul extracelular (hormoni, enzime, nutrieni, deeuri celulare,
etc.). Modificrile structurale i trierea proteinelor nainte de ieirea
lor se efectueaz n aparatul Golgi. Faza de migrare care conduce
vezicula ctre membrana, este sub dependena microfilamentelor
citoscheletului i microtubulilor. Membranele se unesc prin fuziunea
stratului extern al veziculei cu stratul intern al membranei
plasmatice. O deplasare lateral a proteinelor intramembranare din
zona de fuziune provoac deschiderea veziculei i excreia.
Exocitoza necesit prezena ATP i Ca2+ (Figura 4.12).

Figura 4.12. Transport cu ajutorul veziculelor i sintez de proteine (prelucrat dup

Se disting dou ci de exocitoz:

i) calea constitutiv care funcioneaz n toate celulele.
Veziculele de transport duc n mod continuu moleculele nou
sintetizate ctre membrana plasmatic (Figura 4.12);
ii) calea reglat care funcioneaz n celulele specializate doar
ca rspuns la un stimul, de exemplu un mesager chimic care se
fixeaz la suprafaa membranei plasmatice.
TA 4.21. Care sunt mecanismele prin care se pot vehicula macromolecule

de tipul proteinelor, sau particule ca bacteriile sau resturile celulare;
TA 4.22. Descriei procesul de endocitoz mediat de receptori;
TA 4.23. Unele dintre urmtoarele proteine sunt implicate n transportul cu

ajutorul veziculelor:
a) receptorii nucleari; b) clatrina; c) albuminele; d) adaptinele; e) b i d.
TA 4.24. Definii principalele dou ci de exocitoz

4.3. Comunicarea ntre celule se face prin intermediul

Comunicarea diferenierilor morfologice ale membranei plasmatice sau pe calea
semnalelor. Diferenierile morfologice cresc suprafaa membranei i
intercelular
permit celulei s mreasc schimburile cu mediul exterior i s
stabileasc jonciuni cu alte celule.
Creterea suprafeei
La nivelul polului apical, celulele dezvolt evaginri tubulare
sau microviloziti. O parte din acestea sunt foarte distanate unele
de altele, de form neregulat i de dimensiuni inegale. Altele sunt
sub forma unei margini n perie, platou striat (enterocite, tubi
proximali renali), sau stereocili (epiteliu epididimar). Numrul lor
foarte crescut, pn la 3000 n enterocite n ileon, mrete de peste
1000 de ori suprafaa de schimb.
Forma microvilozitilor este dat de microfilamentele de
actin, n numr de 10 - 50, grupate n fascicule rigide i meninute
mpreun de ctre proteine (vilina i fimbrina). O protein de legare
i calmodulina particip la ataarea fasciculului de membrana
plasmatica.
La nivelul polului bazal, membrana plasmatic a celulelor
epiteliale (tubul distal al nefronului), implicat n transportul activ al
substanelor, prezint invaginri mai mult sau mai puin importante
n citoplasm. Ele delimiteaz compartimente n care mitocondriile
asigur sinteza ATP necesar transportului activ.
Jonciuni intercelulare
ntr-un esut, celulele nu sunt n contact pe toat suprafaa
membranar. Ele sunt separate de un spaiu intercelular care
conine o reea de macromolecule (colagen, fibronectin, etc.) care
constituie matricea extracelular. Contactele ntre dou celule
vecine sunt asigurate de diverse jonciuni.
Jonciunile etane sau impermeabile (tight) corespund
regiunilor unde membranele plasmatice i unesc straturile externe.
Servesc ca bariere, blocnd trecerea moleculelor n spaiul
intercelular i mpiedic difuzia lateral a proteinelor n afara ariei
lor funcionale.
Jonciunile de ancorare sunt jonciuni foarte solide frecvente
n esuturile supuse la tensiuni mecanice puternice (muchiul
cardiac, de exemplu). Ele asociaz elementele citoscheletice a
dou celule vecine i contribuie la regruparea celulelor care
formeaz o unitate structural. Jonciunile de ancorare includ
jonciunile de aderena, desmozomii i hemidesmozomii.
Jonciunile de comunicare (gap) sunt cele mai rspndite.
Ele asigur pasajul moleculelor mici hidrosolubile (ioni, aminoacizi,
AMPc, etc.) ntre dou celule adiacente (Figura 4.13). Canalele se
stabilesc graie proteinelor transmembranare, conexinele, care se
asociaz n hexameri i formeaz o structur numit conexon.

Conexonii prezeni n membranele a dou celule vecine se

plaseaz vis-a vis, se unesc ntre ei i formeaz o jonciune
strbtut de un por care leag citoplasmele celor dou celule
contigue (Figura 4.13). Prin aceste canale celulele schimb ioni i
metabolii. Jonciunile gap oscileaz ntre o stare deschis i una
nchis, dar mecanismele care controleaz micrile nu sunt nc
elucidate.
Figura 4.13. Jonciunile de comunicare (gap) (prelucrat dup

TA 4.25. Ionii pot circula direct dinspre citoplasma unei celule animale
ctre citoplasma unei celule adiacente:
a) plasmodesma; b) filamente intermediare; c) jonciunile de ocluzie; d)
desmozomii; e) jonciunile gap.
TA 4.26. Enumerai tipurile de jonciuni implicate n procesul de

comunicare intercelular;

4.4. Traficul Toate celulele sintetizeaz proteine diverse al cror destin

intracelular al este variabil:
proteinelor i) anumite proteine vor rmne n membrana plasmatic sau
n membranele interne;
ii) altele merg n lumenul unor organite;
iii) altele sunt destinate secreiei.
Tehnicile de marcare i de revelare a proteinelor
(autoradiografie) au artat c proteinele circul prin mai multe
compartimente celulare nainte s ajung la destinaia final. De
exemplu, o protein destinat secreiei i va ncepe destinul n
nucleul celulei graie transcrierii unei gene n ARNm. Proteina va fi
sintetizat n citoplasm, la nivelul RER, i apoi transferat n
lumenul acestui compartiment. Ulterior va fi mpachetat ntr-o
vezicul care o transport ctre compartimentele succesive ale
aparatului Golgi (Figura 4.14). Unele proteine sunt reinute naintea
etapei de eliberare pentru a fi descrcate n exteriorul celulei prin
exocitoz.
Figura 4.14. Structura aparatului Golgi i a reticulului endoplasmatic (prelucrat dup

Reticulul endoplasmatic (RE), aparatul Golgi (AG),

endozomii, lizozomii i veziculele de secreie comunic ntre ele,
dar i cu exteriorul celulei (prin endocitoz i exocitoz). Deci,
coninutul lor poate fi disimulat n mediul extracelular.
Putem considera c trecerea unei proteine din citosol ctre
lumenul sistemului vezicular este echivalent cu o ieire din celul.
Astfel, n afar de procesele de proteosinteza, membrana de la
nivelul reticulului endoplasmatic rugos (RER) are rolul de a
determin destinaia unei proteine. Transportorul prezent n
membrana RE se numete canal de translocare a proteinelor.
Canalul este constituit din mai multe proteine transmembranare
care formeaz un por care permite trecerea catenei proteice n curs
de sintez, de la ribozom ctre lumenul RER. Porul poate funciona
i n direcie opus (transport retrograd) n momentul eliminrii
proteinelor nou sintetizate dar cu defecte.

4.4.1. Rolul RE este un ansamblu de membrane interne care particip la

reticulului numeroase procese biochimice vitale. Intervine mai ales n
endoplasmatic biosinteza i maturarea post-traductional a diverselor proteine
destinate diferitelor compartimente celulare (membrana plasmatica,
lizozomal) sau secreiei. ntinderea acestui sistem membranar
este variabil n funcie de tipul celular. Este abundent mai ales n
celulele cu sintez crescut i secreie de proteine i glicoproteine.
RE este de dou tipuri: rugos, cnd sunt prezeni ribozomi pe
suprafaa sa (RER) sau neted (REN). RER este lipsit de ribozomi n
diferite puncte care stau la originea veziculelor de transport a
proteinelor ctre alte destinaii, veziculele de tranziie (Figura 4.15).
n general, RER se gsete n jurul nucleului, membrana sa este o
prelungire a membranei nucleare externe, n timp ce REN este
adesea mai ndeprtat de nucleu. REN particip la sinteza lipidelor
i mai ales la reacii de detoxifiere al cror scop este de a
transforma medicamentele i alte substane toxice n produi
netoxici. REN conine pompe de calciu care transport i
concentreaz calciul. Aceasta rezerv este, n parte, eliberat n
citosol ca rspuns la semnalele externe.
Figura 4.15. Maturarea post-traducional a diferitelor proteine n RER i AG

(prelucrat dup http://www.cbc.umn.edu/~mwd/courses.html)
TA 4.27. Citai organitele care compun calea de biosintez i cele din calea
de endocitoz.
TA 4.28. Care sunt principalele diferene morfologice ntre RER i REN?

Dar principalele diferene funcionale?
TA 4.29. Care este destinaia proteinelor sintetizate de celule.

4.4.2. Sinteza Moleculele de ARNm matur produse n nucleu ajung n

proteinelor de ctre citosol trecnd prin porii nucleari. Ele sunt traduse n proteine graie
ribozomii de la ribozomilor i numeroaselor proteine asociate acestora . Cu toate
suprafaa RER c din punct de vedere structural sunt identici, anumii ribozomii
sunt liberi n timp ce alii sunt ataai de reticul. La nivelul
ribozomilor ataai de RER sunt sintetizate proteinele destinate
lizozomilor i secreiei, ca i proteinele integrale ale membranelor
biologice. Natura ARNm determin locul traducerii: fie n citosol, fie
n reticul. Locul traducerii ARNm este determinat de o secvena
nucleotidic care codific o peptid semnal, situat ntre codonul
start al traducerii (AUG) i secvena proteinei mature. Peptida
semnal este indispensabil pentru transferul ribozomilor liberi
angajai n traducere ctre membrana reticulului. Aceasta peptid
este ulterior eliminat de o enzim specific.
Sunt cunoscute mai multe zeci de secvene semnal ale
proteinelor. Ele conin ntre 13 i 36 de aminoacizi, din care:
i) unul sau civa aminoacizi ncrcai pozitiv la extremitatea
N-terminal; ii) o secven de 10 - 15 resturi hidrofobe; iii) o mic
secven de aminoacizi polari cu caten lateral scurt.
Proteinele care urmeaz a fi secretate ncep s fie traduse
de ribozomii liberi. Dup ce peptida semnal, situat la extremitatea
N-terminal a pre-proteinei, este sintetizat, ea este recunoscut de
o ribonucleoprotein care interacioneaz cu peptida semnal i cu
ribozomul pentru a opri traducerea. Complexul format migreaz
ctre membrana RE unde, n prezenta GTP, recunoate i
interacioneaz cu un receptor. Ribozomul se ataeaz la
translocon, structur care devine situsul de translocare n lumenul
RE a proteinei n curs de sintez. Traducerea se reia i peptida
semnal poate s difuzeze prin membran pentru a fi excizat i
degradat n lumenul RE de ctre o enzima specific numit
semnal peptidaza. Proteina n curs de sintez continu s intre n
membran meninnd mereu ribozomul la suprafaa RE. n afar de
excizia secvenei semnal, proteina poate suferi i alte modificri
post-translaionale, de exemplu glicozilare. Cnd traducerea este
terminat, proteina este eliberat n lumenul RE, unde va rmne
pn la transferul ctre veziculele de transport (Figura 4.15).
Transportul proteinei prin membrana este co-traducional pentru c
se face n cursul sintezei proteinei.
Translocarea proteinelor prin membrana RE necesit
prezena tranzitorie a unui por. Ribozomul care asigur traducerea
proteinei pare s se ataeze foarte puternic la situsul membranar al
translocrii astfel nct menine caracterul impermeabil al
membranei.
TA 4.30. Sub forma unui eseu de maxim 300 de cuvinte, descriei etapele
dintre momentul n care un ribozom se ataeaz la un ARNm care codific o
protein de secreie i momentul n care proteina prsete RER.

4.4.3. Glicozilarea n lumenul RER, proteinele ncep s sufere modificri post-

proteinelor n RE traducionale care se manifest prin eliminarea peptidei semnal i
formarea punilor disulfurice. Majoritatea proteinelor care
tranziteaz RE sunt glicoproteine (proteine cuplate cu glucide).
Anumite glucide sunt adugate proteinei n RE, n timp ce altele n
aparatul Golgi. Glicozilarea din RE nu este selectiv. Are loc prin
adugarea unui oligozaharid de 14 resturi glucidice la gruparea
amino a unui rest de asparagin (Asn) din tripeptida Asn-X-Ser/Thr.
Oligozaharidul, constituit din glucoz, manoz i N-
acetilglucozamin, este iniial purtat de o molecul lipidic din
membran numit dolicol pirofosfat (Figura 4.16). Transferul
oligozaharidului este realizat de o clas de enzime, numite
glicoziltransferaze, localizate pe faa luminal a membranei RE.
Figura 4.16. Glicozilarea proteinelor n RE (prelucrat dup Molecular Cell Biology, Lodish,
et all. 4th edition, 2000)
4.4.4. Biogeneza Rennoirea membranelor necesit i sinteza de noi molecule

membranelor n lipidice. La eucariote, fosfolipidele, cu excepia a dou lipide
RER mitocondriale, sunt sintetizate i integrate n membrana RE.
Sinteza se face n mai multe etape catalizate de enzime
membranare. Lipidele sunt apoi distribuite endomembranelor i
membranei plasmatice pe calea transportului vezicular.

4.4.5. Rolul Aparatul Golgi este un alt sistem endomembranar cu rol

aparatului Golgi central n elaborarea numeroaselor proteine i trierea lor n funcie
de destinaia final. Se prezint sub forma unei reele sau saci
arcuii care constituie dictiozomii. Fiecare dictiozom prezint o fata
convex, de formare sau cis, n relaie topografic strns cu RER,
i o fa concav, de maturare, sau faa trans. Ansamblul
dictiozomilor unei celule constituie aparatul Golgi (Figurile 4.14 i
4.15)
Proteinele concentrate n RER sufer un proces de
glicozilare nespecific. Motivul glicozidic specific este adugat n
aparatul Golgi. Transformrile finale ale glicozilrii depind de
destinaia proteinelor. Proteinele lizozomale sufer doar modificri
minore, n timp ce proteinele de secreie sufer transformri
complexe i variate. Din catena oligozaharidic achiziionat n
RER sunt eliminate unele resturi glucidice, n timp ce altele sunt
adugate ntr-o ordine minuios aleas. Fiecare adugare sau
eliminare furnizeaz un produs care va fi substratul specific al unei
alte enzime care va produce o alta modificare. Astfel se obin mai
multe oligozaharide. Ele sunt subdivizate n doua tipuri diferite: i)
oligozaharide bogate n manoz provenite din mrirea catenei
achiziionat n RE sub aciunea glucozidazelor i manozidazelor
din Golgi. Oligozaharidele complexe rezult din eliminarea glucozei
i manozei i nlocuirea lor cu alte resturi glucidice al cror numr i
natur determin diversitatea glicoproteinelor. Adugarea
secvenial a acestor resturi este determinat de natura enzimelor
numite glicoziltransferaze i localizarea lor n dictiozomi (Figura
4.17).
n principiu, rennoirea membranelor golgiene se face graie
transferului de proteine i lipide de la RE. Transferul se realizeaz
pe calea veziculelor netede ctre partea cea mai apropiat a feei
de formare. ntr-o etap ulterioar, alte vezicule transfer o parte a
materialului ctre regiuni din ce n ce mai apropiate de faa de
maturare.
TA 4.31. Microzomii sunt vezicule membranare sferice care prezint pe

suprafaa lor ribozomi. n cursul unei centrifugri n gradient de densitate ele nu
sedimenteaz dect n ultimele faze ale preparrii sub aciunea unor fore
centrifuge foarte mari. Acetia nu pot fi observai n imagini de microscopie
electronic. Care este prerea dumneavoastr despre proveniena lor ?
TA 4.32. Prin ce difer procesele de glicozilare din complexul Golgi i RER
TA 4.33. De ce gruprile glucidice ale glicoproteinelor sunt ntotdeauna

expuse la suprafaa celulei.
TA 4.34. Alegei formularea care caracterizeaz corect legarea
ribozomilor:
a) ribozomii legai sunt nchii n propria lor membrana; b) ribozomii legai
sunt diferii structural de ribozomii liberi; c) ribozomii legai sintetizeaz n general
proteinele membranare i proteinele secretorii; d) cea mai comuna localizare
pentru ribozomii legai este suprafaa citoplasmatic a membranei plasmatice; e)
ribozomii legai sunt concentrai n spaiul dintre cisternele RER.

Figura 4.17. Glicozilarea proteinelor n AG (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J. B.

th

4.4.6. Trierea Trierea proteinelor destinate mediului extracelular sau

proteinelor organitelor intracelulare este una din funciile aparatului Golgi. Se
realizeaz prin veziculele care se formeaz de pe faa de maturare
a dictiozomilor. Aceste vezicule au pe faa lor luminal receptori
pentru recunoaterea proteinelor de transportat i pe fata extern
proteine pentru ghidarea ctre destinaia lor (Figura 4.18)
Figura 4.18. Eliberarea proteinelor destinate mediului extracelular

(prelucrat dup http://www.cbc.umn.edu/~mwd/courses.html)
Lizozomii sunt organite intracelulare care conin enzime care

provoac liza (fosfataze, proteaze, lipaze, glicozidaze, nucleaze,
etc.). Acestea sunt hidrolaze acide capabile s degradeze toate
tipurile de macromolecule. Echipamentul enzimatic le permite
lizozomilor s asigure numeroase funcii, mai ales digestia
produilor nutritivi ingerai de celul. Prezeni n celule specializate
ca macrofagele, ei particip la aprarea fa de microorganismele
strine (Figura 4.19). Impermeabilitatea membranei lizozomale
protejeaz celula fa de propriile sale enzime.
Enzimele lizozomale sunt glicozilate i sunt elaborate dup
un proces similar altor glicoproteine. n cursul sintezei lor de ctre
ribozomi, secvenele peptidice sunt transferate n RER unde vor
suferi primele glicozilri. Dup migrarea n Golgi cis, ele
achiziioneaz specificitatea glucidic. Mai nti are loc
ndeprtarea resturilor terminale, mai ales glucoza, apoi fosforilarea
unuia sau mai multor resturi de manoz prin dou reacii succesive:
legarea N-acetilglucozaminei fosfat la C6 din manoz i eliminarea
gruprii N-acetilglucozamin de ctre o fosfodiesteraz.

Manoza-6-fosfat astfel format este caracteristic proteinelor

lizozomale.
Proteinele lizozomale sunt apoi transferate n
compartimentul trans. Graie markerului lor, manoz-6-fosfat, ele se
fixeaz la receptorii situai pe faa luminal a cavitilor golgiene.
Una din etapele cheie ale transportului proteinelor lizozomale,
pornind de la Golgi, este separarea de toate celelalte proteine i
segregarea lor n vezicule de transport (Figura 4.19). Astfel
veziculele care conin numai enzime lizozomale se detaeaz de
aparatul Golgi. Acestea sunt acoperite de clatrin. pH acid al
veziculelor de transport al proteinelor lizozomale favorizeaz
separarea proteinelor lizozomale de receptorii lor. O etap de
defosforilare a resturilor de manoz este efectuat adesea pentru
prevenirea unei eventuale reasocieri a proteinelor cu receptorii lor.
Veziculele de transport pierd nveliurile de clatrina i vor constitui
dou compartimente eseniale: unul va recicla receptorii liberi i
altul, care conine proteinele lizozomale, va fuziona cu lizozomii.
Figura 4.19. Interconectarea RER, AG i lizozomi cu evidenierea proceselor de

transport vezicular i fagocitoz (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece, William
Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6 Edition, 2002)
th
TA 4.35. Credei c membranele Golgi situate pe faa cisternelor se

aseamn mai mult cu partea extracelular a membranei plasmatice sau cu partea
citoplasmatic? De ce?
TA 4.36. Care sunt rolurile reticulului endoplasmatic neted (REN)

n aceast subunitate ne vom focaliza asupra mitocondriei i

cloroplastului pentru a studia morfologia, membranele i rolul lor
4.5. Conversia primordial n producia de ATP necesar derulrii funciilor celulare
energiei: (furnizor universal de energie).
mitocondrii i
cloroplaste Pentru producerea ATP de ctre mitocondrie este necesar
o aprovizionare susinut cu metabolii de tipul glucozei i acizilor
grai. Metaboliii vor fi convertii n NADH i FADH2 (plus CO2) n
procese ca glicoliza, -oxidarea i ciclul acizilor tricarboxilici (ciclul
Krebs), pentru a alimenta n final catena respiratorie i a determina
producerea de ATP. Procesele se desfoar la nivelul unor
situsuri bine definite i trecerea metaboliilor de la un situs la altul
este asigurat de numeroi transportori. Pe lng rolul de
productor de energie, mitocondria intervine i n sinteza steroizilor,
moarte celular programat (apoptoz) i homeostazia celular a
calciului.
Informaii suplimentare despre producerea de

energie v poate furniza cursul opional Introducere n
Biochimie
Mitocondria a luat natere prin fuziunea (acum cteva

miliarde de ani) a dou bacterii, o archeobacterie anaerob (gazd)
4.5.1. Mitocondrii i o protobacterie aerob (simbiont) pentru a da un eucariot
primitiv din care au derivat toate eucariotele actuale. O astfel de
ipotez despre originea mitocondriei a fost sugerat n urma
evidenierii, n 1963, a diferenelor ntre ADN mitocondrial (ADNmt
de 16 kb la mamifere) i ADN nuclear.
Cuvntul mitocondrie deriv din grecescul mitos, filament,

i chondros, smn datorit aspectului acestui organit n
microscopie (optic i electronic). De exemplu, n celulele care
elaboreaz hormoni steroidieni (corticosuprarenale i gonade)
mitocondriile sunt filamentoase, n timp ce n hepatocite (ficat) sunt
granulare. Mitocondriile au un diametru de aproximativ 1 m.
Celulele conin numeroase mitocondrii (n hepatocitul de obolan
aproximativ 1000). Mitocondriile nu sunt organite statice. Ele se
scindeaz sau pot fuziona, aceste procese explicnd polimorfismul
evideniat n aceeai celul (Figura 4.20).
TA 4.37. Ce molecul important pentru celul este produs n urma intrrii

metaboliilor n ciclului acizilor tricarboxilici (Ciclul Krebs) i funcionarea catenei
respiratoare.

Figura 4.20. Forma i structura mitocondriei (prelucrat dup

4.5.1.1. Organizarea Mitocondria este delimitat de un nveli format din dou

mitocondriei membrane: membrana extern i membrana intern (Figura 4.20).
Sunt foarte diferite n compoziie i funcii. Membrana intern
delimiteaz spaiul matricial.
Membrana extern este permeabil pentru orice molecul de

5 KDa sau mai puin datorit porinelor. De asemenea conine i
translocaze, transportori proteici, implicai n importul proteinelor
(exemplu, translocaza membranei externe, TOM).
Membrana intern se repliaz pentru a forma numeroase

criste i are drept consecin creterea suprafeei totale. Cristele au
diferite forme: tubulare, saculare, laminare i triunghiulare, pot
coexista n aceeai mitocondrie i pot evolua n timp. Baza unei
criste este adesea constituit dintr-o structur tubular ngust
numit tubul de jonciune al crestei care stabilete o comunicare
ntre spaial interior al cristei i spaiul intermembranar periferic al
mitocondriei (Figura 4.20). Compoziia lipidic a membranei interne
este particular deoarece conine majoritar fosfatidilcolin i
cardiolipin. n aceast membran se gsete catena respiratorie a
transportorilor de electroni, ATP sintaza i numeroi transportori
care asigura pasajul elementelor ca: piruvat, acizi grai, ATP, ADP
i AMP, compui necesari producerii ATP. Membrana interna
conine i translocaze (Translocaze ale membranei interne, TIM),
implicate n importul de proteine (Figura 4.21). TIM i TOM nu sunt
tratate n aceasta lucrare.

Figura 4.21. Compartimentele mitocondriale i principalii lor constitueni (prelucrat

dup http://www.infobiogen.fr/deambulum/index.php)
n spaiul matricial se afl un amestec foarte concentrat de

numeroase enzime necesare oxidrii piruvatului, acizilor grai i
ciclului acidului citric. De asemenea, conine mai multe copii identice
de ADN (genom mitocondrial) i proteine necesare transcrierii sale i
apoi traducerii ARNm n proteine. Proteosinteza mitocondrial este
relativ restrns fiind sintetizate aproximativ 13 proteine, marea
majoritate a proteinelor mitocondriale (n jur de 300 proteine diferite)
fiind importate din citoplasm.
4.5.1.2. Genomul ADN mitocondrial este o molecul bicatenar circular. Este un

mitocondrial ADN bogat n citozin i guanin, adesea prezent n mai multe copii n
aceeai mitocondrie. La om, mrimea materialului genetic este de
16569 pb, secvena nucleotidic fiind cunoscut n totalitate. Codific
ARNr, ARNt i cteva proteine.
n mitocondriile umane au fost descoperite 37 de gene din care
22 codific pentru ARNt, 2 codific ARNr i 13 codific subunitile
polipeptidice care intr n constituia proteinelor catenei respiratorii
mitocondriale. Astfel citocrom C oxidaza (complexul IV din catena
respiratorie) este constituit din 7 subuniti, din care 3 de origine
mitocondrial. ATP-aza are 9 catene polipeptidice din care 2 de
origine mitocondrial. Aproximativ 5-10% din proteinele mitocondriale
sunt sintetizate in situ. Altele sunt codificate de genomul nuclear i
sintetizate n citosol. Astfel, cele dou genomuri, mitocondrial i
nuclear, intervin pentru biosinteza proteinelor mitocondriale active.
Codul genetic utilizat de mitocondrie, n timpul traducerii, este diferit
de codul genetic universal (Tabelul din Figura 4.22). Codonul de
iniiere codific pentru N-formil metionina, ca la bacterii.

Codon Cod Cod Cod

universal mitocondrial la mitocondrial
mamifere la plante
UGA STOP Trp STOP
AGA, Arg STOP Arg
AGG Ile Met Ile
AUA Leu Leu (Trp la Leu
CUA drojdii)
Figura 4.22. Cteva diferene ntre codul genetic universal i codurile genetice
mitocondriale, la mamifere i plante
TA 4.38. Care sunt cele dou proprieti ale membranei mitocondriale

interne care permit realizarea unei activiti metabolice crescute?
TA 4.39. Care este originea primar a ADN din mitocondriile voastre:

matern sau patern? Reflectai asupra eventualelor consecine ereditare ale unei
anomalii n mitocondriile unuia dintre prini.
TA 4.40. Dac inem seama de faptul c mitocondriile nu au aceeai

capacitate agresiv de autoliz ca lizozomii, care ar putea fi semnificaia unei
structuri membranare att de complexe. De asemenea, reticulul endoplasmatic i
membrana plasmatic au o crescut capacitate potenial de a gzdui enzimele pe
care le regsim n membranele mitocondriale.
TA 4.41. n conformitate cu regulile generale ale sintezei proteice, sinteza

proteinelor citosolice necesit un minim de 30 tipuri molecule de ARNt. Cum se
descurc mitocondria uman pentru a traduce moleculele de ARNm mitocondriale
cu numai 22 de specii de ARNt?
TA 4.42. Care dintre urmtoarele caracteristici sunt comune att

mitocondriilor ct i cloroplastelor?
a) producerea de ATP; b) prezena ADN; c) prezena ribozomilor; d) numai
b i c sunt corecte; e) a, b i c sunt corecte.
4.5.1.3. Biogeneza ntr-o celul, mitocondriile sunt rennoite adesea pentru a

mitocondriilor compensa eliminarea mitocondriilor mai btrne de ctre lizozomi,
fenomen cunoscut sub numele de autofagie. Noile mitocondrii deriv
din mitocondriile preexistente prin diviziune. Materialul genetic este
duplicat i se sintetizeaz noi constitueni (proteine i lipide). Numai
cteva proteine sunt sintetizate graie informaiei genetice
mitocondriale. Restul sintezei proteice are loc n citosol prin expresia
genelor nucleare.
Proteinele mitocondriale sintetizate n citosol sunt produse sub
forma de precursori avnd o secven peptidic adiional, peptida
semnal, situat la extremitatea N-terminal care le permite
recunoaterea i direcionarea ctre mitocondrie. Peptida semnal are
15-30 aminoacizi majoritar hidroxilai.

Proteinele mitocondriale sunt importate n stare ne pliat. Ele

recunosc receptori situai n membrana extern i integreaz
compartimentul final al destinaiei lor (membrana extern sau
intern, spaiul intermembranar sau matricea) prin transfer post-
traducional. Cu excepia proteinelor membranei externe, toate
celelalte transporturi de proteine consuma energie. Integrarea n
diferite compartimente mitocondriale se face la nivelul regiunilor de
contact ntre membrana extern i intern, numite situsuri de
adeziune. n timpul transportului, proteinele pierd secvena semnal
datorit interveniei unei semnal peptidaze specifice.
Lipidele sunt importate din RER de ctre mitocondrie graie
proteinelor de transfer. n mitocondrie este sintetizat numai
cardiolipidul numit difosfatidilglicerol care se obine prin conversia
precursorului su, fosfatidilglicerolul.
4.5.1.4. Funciile Mitocondriile au mai multe funcii:

mitocondriei i) producerea ATP i NADH;
ii) sinteza de hormoni steroizi;
iii) turnover-ul monoaminelor (neurotransmitori);
iv) sechestrarea Ca 2+;
v) moartea celular programat (apoptoz) prin eliberarea
citocromului c n citoplasma;
vi) furnizarea de energie la nou nscui.
4.5.1.5. Producerea ATP - furnizor universal de energie

ATP Mitocondriile constituie centrala energetic a celulei. Le
putem considera i organitele n care energia coninut n legturile
moleculare ale metaboliilor provenii din alimentele ingerate, este
convertit n ATP. n subunitile alocate transportului membranar
i citoscheletului s-a evocat rolul capital al ATP a crei hidroliza n
ADP i Pi (HPO42)- este necesar unui numr mare de procese
celulare cum sunt:
i) transportul activ de ioni prin membran (ATP-aze);
ii) deplasarea proteinelor motoare i polimerizarea
filamentelor de actin;
iii) rol esenial n producerea altor nucleotide i n derularea
numeroaselor procese metabolice;
iv) intervenia n reglarea cascadelor de semnalizare
intracelular.
Pentru a estima importana acestor procese se poate spune
c n fiecare zi un adult utilizeaz (i recicleaz) o cantitate de ATP
echivalent cu 75% din greutatea sa. Se estimeaz c, n repaus, o
treime aceast energie este utilizat pentru funcionarea pompelor
membranare ca Na+/K+ ATP-aza. n repaus, organele cele mai
consumatoare sunt inima i ficatul.
Un procent mic din energia celular provine din glicoliz.
Pentru o molecula de glucoza, glicoliza produce 2 molecule de
ATP, n citosol, n absena oxigenului.

n mitocondrii, n prezena oxigenului se obin 36 de
molecule de ATP. Energia moleculei de ATP este coninut n
legturile macroergice dintre fosfaii i i furnizeaz 7,3 kcal/mol
(Figura 4.23). ntr-o celul, proteinele, glucidele i lipidele, provenite
din alimente, particip la producerea de energie n mitocondrii. n
citosol, au loc primele etape ale degradrii lor n uniti glucidice,
aminoacizi i acizi grai care stau la originea producerii unei
molecule strategice numit acid piruvic. Ulterior este generat un
produs comun prin transformarea tuturor monomerilor precursori n
acetil coenzima A (acetil CoA), o molecula care ocup un rol central
n producerea de energie n mitocondrie.
Acetil-CoA este obinut prin dou ci majore:
i) decarboxilarea acidului piruvic n prezena coenzimei A i
NAD+ (Niacinamid Adenin Dinucleotid oxidat) graie, aciunii
complexului enzimatic al piruvat dehidrogenazei;
ii) oxidarea acizilor grai dup un ciclu de reacii cunoscut
sub numele de ciclul Lynen.
Figura 4.23. Molecula de ATP
n matricea mitocondrial, acetil-CoA sufer o serie de

transformri, prin decarboxilare i dehidrogenare enzimatic n
prezena de coenzime oxido-reductoare, definind ciclul acidului
citric sau ciclul Krebs. Derularea complet a unui ciclu conduce la
reducerea coenzimelor NAD+ i FAD (Flavin Adenin Dinucleotid
forma oxidat):
NAD+ + 2H+ + 2e- -> NADH + H+

FAD + 2H+ + 2e- -> FADH2
Coenzimele reduse (NADH i FADH2) se reoxideaz cednd

electronii transportorilor membranei interne mitocondriale organizai
n complexe polipeptidice i regrupai sub numele de catena
respiratorie. Este un ansamblu de proteine n care are loc transferul
de electroni, ntr-o ordine precis, cu eliberare de energie la fiecare
etap de trecere ntre doi transportori consecutivi (Figura 4.24).

Complexul I, NADH dehidrogenaza, conine peste 25 de

polipeptide. Situsul de legare al NADH este orientat ctre matrice.
Acceptorul final al acestui complex este ubiquinona oxidat (UQ)
care se reduce la ubiquinol dup reacia urmtoare:
NADH + H+ + UQ -> NAD+ + UQH2
Complexul II, succinat dehidrogenaza, este constituit din cel

puin 4 polipeptide. Transfer electronii de la succinat la ubiquinon
prin intermediul FAD.
Complexul III, ubiquinol-citocrom c oxidoreductaza, este
compus din 10 subuniti. Ubiquinolul produs de complexele I i II
difuzeaz n membrane pn la complexul III cruia i va ceda
electronii pentru a ajunge n forma sa oxidat. Transferul de electroni
duce la reducerea citocromului c.
Ultimul complex care conduce electronii pn la oxigen este
complexul IV, citocrom c oxidaza. El transfer electronii acceptorului
final, oxigenul, care se reduce la ap.
Energia furnizat prin transferul de electroni este utilizat
pentru expulzarea protonilor prin membrana intern i creeaz un
gradient electrochimic de protoni, numit for motrice protonic. Faa
matricial a membranei devine ncrcat negativ, n timp ce faa
citosolic are o sarcin net pozitiv.
ATP sintetaza (ATP-aza) sau complexul V, numit i complexul
F0-F1 utilizeaz un gradient electrochimic de protoni pentru a
cataliza reacia de fosforilare a ADP n ATP. Conform teoriei
chimiosmotice acestea sunt reacii cuplate trecerii inverse a
protonilor prin ATP sintetaza. Fosforilarea este oxidativ pentru c
este cuplat cu reaciile de oxidare ale transportorilor catenei
respiratoare. Energia electrochimic poate fi utilizat pentru a
ndeplini alte procese celulare. Transportul fosfatului i ADP
utilizeaz gradientul electrochimic de protoni ca sursa de energie.
TA 4.43. Care dintre urmtoarele procese care se desfoar n celulele

eucariote are loc att n prezena ct i n absena O2?
a) transportul de electroni; b) glicoliza; c) ciclul Krebs; d) fosforilarea
oxidativ; e) fermentaia;
TA 4.44. Din care proces procur respiraia celular cea mai mare parte a
energiei chimice?
a) fosforilarea la nivel de substrat; b) formarea lactatului din piruvat; c)
transformarea oxigenului n ATP, d) transferul electronilor de la moleculele
organice la oxigen; e) generarea de bioxid de carbon i oxigen n lanul
transportor de electroni;
TA 4.45. Credei c importul de substane cum sunt ADP sau Pi ar putea

duce la scderea forei protono-motrice? De ce?

i
Figura 4.24 Componentele catenei respiratorii
TA 4.46. Care dintre urmtorii metabolii intermediari intr n ciclul Krebs i

se formeaz, parial, prin ndeprtarea CO2 dintr-o molecul de acid piruvic?
a) lactat; b) gliceraldehid-fosfat; c) oxaloacetat; d) acetil-CoA; e) acid citric
TA 4.47. Unul dintre procesele metabolice de mai jos este cel mai intim
asociat cu membranele intracelulare:
a) fosforilarea la nivel de substrat; b) fosforilarea oxidativ; c) ciclul Krebs;
d) glicoliza; e) fermentaia alcoolic;
TA 4.48. n timpul respiraiei aerobe, gradientul de protoni mitocondrial va fi
generat de ________________ i folosit n primul rnd pentru _________:
a) catena transportoare de electroni ATP;
b) catena transportoare de electroni.fosforilarea la nivel de substrat
c) glicolizaproducerea de H2O;
d) fermentarea.reducerea NAD
e) difuzia protonilor..sinteza ATP;
TA 4.49. Cnd ionii de hidrogen sunt pompai din matricea mitocondrial
prin membrana intern n spaiul intermembranar, rezultatul este:
a) formarea ATP; b) reducerea NAD+; c) restaurarea echilibrului Na+/K+ de o
parte i de alta a membranei; d) crearea unui gradient de protoni; e) scderea pH
n matricea mitocondrial
TA 4.50. Care dintre urmtoarele afirmaii fac o distincie clar ntre glicoliz
i respiraia celular:
a) numai respiraia oxideaz glucoza; b) NADH este oxidat de ctre catena
transportoare de electroni numai n procesul respirator; c) glicoliza, dar nu i
respiraia, reprezint un exemplu de cale catabolic; d) fosforilarea la nivel de
substrat este un proces unic caracteristic glicolizei; e) NAD+ funcioneaz ca agent
oxidant numai n procesul respirator.

4.5.2. Cloroplaste n celulele eucariote fotosintetice, energia celular poate s

provin i din activitatea cloroplastelor. Sunt organite delimitate, ca
i mitocondriile, de doua membrane (extern i intern). n stroma
intern, structuri membranare n form de saci, numii tilacoizi, sunt
ancorate i formeaz agregate. Membrana tilacoid are
echipamentul enzimatic responsabil de transferul electronilor
dinspre stroma ctre lumenul tilacoid. O ATP sintetaz, numita
CF0-CF1 ATP-aza, este prezent n membran i cupleaz returul
protonilor ctre strom cu sinteza de ATP (Figura 4.25).
Figura 4.25. Structura cloroplastelor
n cursul fotosintezei se produc numeroase reacii, clasificate

n dou categorii:
A. Reacii de transfer de electronii, numite i reacii la

lumin. Energia luminoas activeaz un electron al unui fotosistem
n care particip clorofila. Electronul este transmis unei catene de
transport de electroni din membrana tilacoid. Principiul de transfer
este similar celui din catena respiratoare mitocondrial. Duce la
conversia NADP+ (Niacinamid Adenin Dinucleotid Fosfat forma
oxidat) n NADPH (Niacinamid Adenin Dinucleotid Fosfat forma
redus). Acest proces pompeaz protoni prin membrana tilacoid
crend un gradient electrochimic de protoni. Aceast for protono-
motrice este responsabil de sinteza ATP, n strom, de ctre ATP
sintetaza, CF0-CF1-ATP-aza;
B. Reacii de fixare ale carbonului, numite i reacii la

ntuneric. n cursul acestor reacii, ATP i NADPH, produi cu
ocazia transferului de electroni, servesc ca sursa de energie i
agent reductor pentru a favoriza, printr-un mecanism ciclic,
transformarea CO2 n glucide.
TA 4.51. ATP sintaza const n dou complexe formate din mai multe
subuniti: Fo i F1. Unde este localizat fiecare dintre acestea n mitocondrii i n
cloroplaste i care este funcia lor;

4.5.2.1. Transferul n cursul fotosintezei producerea ATP i NADPH utilizeaz

de electroni lumina solar ca energie iniial. Cnd o molecul de clorofil este
excitat de ctre un foton, un electron este deplasat de pe un
orbital molecular pe altul cu energie mai mare. O astfel de molecul
excitat este instabil i va avea tendina s revin la starea iniial
cednd un electron cu energie mare unei alte molecule acceptoare
de electroni. n acelai timp va preleva un electron cu energie
sczut de la o alta molecul donoare de electroni cum este apa.
Cele dou fotosisteme (PSII i PSI) funcioneaz simultan pentru a
produce ATP i NADPH utiliznd energie luminoas.
Fosforilarea ADP la ATP se numete fotofosforilare.
Fotosistemul II (PSII) ia electroni de la ap pentru a umple golurile
create de lumin (fotoni) ntr-o molecul de clorofila din centrul
reactiv P680 (centru care are o molecula de clorofila ce absoarbe
lumina la 680 nm). Electronii cu energie mare din P680 excitat sunt
recuperai de moleculele de quinona care i transmit unei pompe de
protoni, complexul b6f. Acest complex transporta protonii n
lumenul tilacoid i creeaz un gradient electrochimic care
favorizeaz sinteza ATP de ctre ATP sintetaza. Fotosistemul I
accept electronul pentru a umple golul lsat n propria molecula de
clorofil din centrul reactiv P700 excitat de ctre ali fotoni. Fiecare
electron care intr n fotosistemul I este adus la un nivel de energie
foarte crescut care i permite s fie transmis ferredoxinei, i apoi
NADP+ pentru a produce NADPH (Figura 4.25).
Fotofosforilarea este neciclic cnd cele dou fotosisteme
sunt implicate n transferul unui electron de la ap la NADP+.
Cloroplastele anumitor specii vegetale pot face s funcioneze
fotosistemul I n mod ciclic, fotofosforilare ciclic. Electronii cu
energie mare provenii din ferredoxin sunt cedai complexului b6-f
n locul NADP+ i deci reciclai n fotosistemul I. Rezultatul acestui
mod de funcionare este acumularea de protoni n lumenul tilacoid
i n consecin disponibilitatea energiei necesare sintezei ATP.
Fotofosforilarea neciclic utilizeaz cele dou fotosisteme i
produce oxigen, ATP i NADPH, n timp ce fotofosforilarea ciclic
utilizeaz doar fotosistemul I i genereaz ATP fr a forma nici
NADPH, nici oxigen.
TA 4.52. n celulele plantelor, ATP se formeaz ca rspuns la expunerea

lor la lumin. Este implicat o caten transportoare de electroni localizat n:
a) membranele tilacoide ale cloroplastelor; b) stroma cloroplastelor; c)
membrana intern a mitocondriei; d) matricea mitocondriei; e) citoplasm.
TA 4.53. Care este funcia principal a reaciilor de lumin ale
fotosintezei?
a) s produc o form a glucozei bogat n energie pornind de la CO2 i
ap; b) s produc ATP i NADPH; c) pentru a produce NADPH folosit n
respiraie; d) s transforme energia chimic n gliceraldehdifosfat; e) s
foloseasc ATP n sinteza glucozei.

Figura 4.25. Complexele transferului de electroni din membrana

cloroplastului(prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, et all, Ed, International Edition, Benjamin
Cummings, 6 Ed, 2002)
th
4.5.2.2. Fixarea
carbonului Reacia principal de fixare a carbonului este cea dintre CO2
provenit din atmosfer, ribulozo 1,5-bifosfat i ap cu formare a
dou molecule de 3-fosfoglicerat. Reacia este catalizat n strom
de ctre o enzima abundent, ribulozo bifosfat carboxilaza.
Producerea de ribulozo 1,5-bifosfat necesit o serie de reacii care
consum NADPH i ATP. n ciclul de fixare a carbonului (ciclul
Calvin-Benson), 3 molecule de ATP i 2 molecule de NADPH sunt
consumate pentru fiecare molecul de CO2 transformat. n strom,
acest ciclu duce la formarea de gliceraldehid-3-fosfat. Acesta se va
acumula n strom sau va fi exportat n citosol pentru a fi
transformat ntr-un dizaharid numit zaharoz, care reprezint
principala form de transport a glucidelor n celulele vegetale.
4.5.2.3. Genomul Este un ADN circular, cu mrime de 120-200 kpb. Codific

cloroplastului molecule de ARNr, 30 molecule de ARNt, aproximativ 20 de
proteine ribozomale cloroplastice, subuniti ale ARN polimerazei,
mai multe proteine ale fotosistemelor I i II, subuniti ale ATP
sintetazei i subunitatea mare a ribulozo difosfat carboxilazei. Ca i
mitocondria, cloroplastul nu este niciodat sintetizat de novo.
Provine mereu din cloroplaste preexistente. Multe subuniti
proteice sunt produse n citosol (sunt proteine codificate de
genomul nuclear) i importate n diferite compartimente
cloroplastice.
TA 4.54, Care dintre urmtorii produi ai reaciilor de lumin din

fotosintez sunt utilizai n ciclul Calvin?
a) CO2 i glucoza; b) H2O i O2; c) ADP, Pi i NADP+; d) Electronii i H+; e)
ATP i NADPH

4.6. Nucleul i n ciuda diferenelor evidente de form i de funcie, diferitele

funciile sale tipuri celulare care compun un organism multicelular, fie c este
vorba de o ciuperc sau de un mamifer, conin un lot complet de
gene. Vzut din exterior o celul din constituia unui cartilaj i un
neuron nu se aseamn deloc. Cu toate acestea cele dou tipuri
celulare conin acelai complement de gene.
Informaia genetic, nmagazinat n structura moleculelor
de ADN (acid deoxiribonucleic), prezent ntr-o celul eucariot
specializat, se poate compara cu o carte care conine toate
indicaiile necesare construciei unei cldiri cu utiliti multiple. n
cursul realizrii construciei, sunt probabil necesare toate planurile
dar numai o mic parte a informaiei va trebui consultat n timpul
activitii de construcie a unui etaj sau a unei singure camere.
Aceast abordare este adevrat i pentru un ovul fecundat, care
conine ansamblul instruciunilor genetice, i care este fidel replicat,
informaia fiind distribuit tuturor celulelor organismului n
dezvoltare. n consecin, celulele poart mult mai mult informaie
genetic dect pot utiliza vreodat. Acestea posed mecanisme
care le permit s exprime informaia genetic, n mod selectiv,
urmnd numai instruciunile care privesc numai o singur celul
ntr-un moment particular al existenei acesteia. n acest subcapitol,
o s analizm modalitile care le permit celulelor eucariote s
structureze totalitatea materialului genetic pe care l conin, n
condiiile controlului coordonat al expresiei genelor menite s
asigure numai sinteza anumitor proteine. Mai nti vom descrie
structura i proprietile nucleului celulei eucariote, care conine
majoritatea informaiei genetice i mecanismele de reglare a
acesteia.
Nucleul conine cea mai mare parte a materialului genetic
(ADN) al unei celule, o mic parte fiind coninut n mitocondrii i
cloroplaste. Astfel, acesta condiioneaz sinteza tuturor tipurilor de
ARN: ARNm care va fi tradus n proteine, ARNr care intr n
constituia ribozomilor i ARNt, indispensabil pentru biosinteza
proteinelor.
n ciuda importanei sale pentru stocarea i utilizarea
informaiei genetice, nucleul celulei eucariote posed o morfologie
destul de comun (Figura 4.25). Coninutul nuclear reprezint o
mas vscoas amorf de materie nchis ntr-un nveli nuclear
complex. n nucleul unei celule tipice, n interfaz, se evideniaz: i)
cromozomii, prezeni sub forma unor fibre nucleoproteice foarte
alungite, cromatina; ii) matricea nuclear care este format dintr-o
reea fibrilar care conine proteine; iii) unul sau mai muli nucleoli,
structuri amorfe, opace n microscopie electronic care sunt sediul
sintezei ARN ribozomal i al asamblrii ribozomilor; iv)
nucleoplasma, substan lichid care conine toate componentele i
elementele nucleului eucariot

n figura 4.26 sunt ilustrate schematic diferitele elemente ale

nucleului eucariot.
Figura 4.26. Structura nucleului celulei eucariote (prelucrat dup Biology, N. A.

th
Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6 Edition,
2002)
n general, celula eucariot conine un singur nucleu, cu

excepia anumitor celule ca eritrocitele umane care l pierd n cursul
diferenierii lor sau ca hepatocitele i osteoclastele care sunt
plurinucleare. Nucleul, frecvent sferic, poate avea o forma similar
cu cea a celulei: alungit pentru celulele fuziforme, discoidal n
celulele pavimentoase. Poziia sa geometric central i mrimea
variaz i este caracteristic unui tip celular.
4.6.1. nveliul n opoziie cu termenul de membran nuclear, nveliul

nuclear nuclear desemneaz structura complex care se afl la frontiera
dintre nucleul i citoplasma unei celule eucariote. ntr-o celul,
separarea materialului genetic i a citoplasmei care l nconjoar
este poate caracteristica cea mai important care distinge
eucariotele de procariote. Apariia nveliului nuclear este cu
siguran un punct de reper n evoluia biologic. nveliul nuclear
const n mai multe elemente distincte (Figura 4.26).

Continuitatea nveliului care delimiteaz nucleul este

asigurat de dou membrane concentrice separate de un spaiu
intermembranar de 10 la 50 nm. Cele dou membrane sunt
fuzionate din loc n loc i formeaz pori circulari care sunt compui
dintr-un ansamblu complex de proteine. Densitatea porilor nucleari
variaz de la aproximativ 2 la 4 pe m2 n nveliul nuclear al
eritrocitelor de pasre, relativ inactiv din punct de vedere metabolic,
la mai mult de 60 m2 n cel al ovocitelor care se pregtesc s
rspund nevoilor viitoare ale dezvoltrii embrionare.
O celul de mamifere, de mrime medie, posed aproximativ
3 000 de pori nucleari. Membrana extern este n general presrat
cu ribozomi i adesea n continuitate cu membrana reticulului
endoplasmatic (Figura 4.26).
Suprafaa intern a nveliului nuclear este bordat de o
plas fibrilar dens, numit lamina nuclear. n anumite celule,
cum este ovocitul de amfibian, aceast lamin formeaz un strat
destul de continuu, n timp ce n altele pare mult mai fragmentat.
Considerm c lamina nuclear reprezint un suport structural
pentru nveliul nuclear i servete la fixarea fibrelor de cromatin
la periferia nucleului (Figura 4.26).
Fibrilele laminei nucleare au un diametru de aproximativ 10
nm i sunt compuse din polipeptide numite lamine, care aparin
aceleiai superfamilii de polipeptide care compun filamentele
intermediare ale citoscheletului. Ca i pentru componentele
intermediare ale citoplasmei, integritatea laminei nucleare este
controlat de ctre procesul de fosforilare/defosforilare.
Dezasamblarea laminei nucleare, nainte de mitoz, este indus de
ctre fosforilarea laminelor de ctre o kinaz specific.
TA 4.55. Care sunt principalele elemente ale nucleului unei celule

eucariote care pot fi evideniate prin tehnici microscopice?
TA 4.56. Enumerai principalele trei roluri ale ADN.
TA 4.57. Care sunt cele dou roluri pe care laminele le au n structura i

funcia nucleului
TA 4.58. Care dintre urmtoarele perechi este greit?

a) nucleol RNA ribozomal; b) nucleu cromozomi; d) lizozomi sinteza
proteic; d) membrana celulara bistrat lipidic; e) citoschelet microtubuli
TA 4.59. Sub forma unui eseu de maxim 200 de cuvinte discutai diferena
major care exist ntre o celul procariot i una eucariot din punctul de vedere
al structurrii informaiei genetice.
TA 4.60. Noiunea de nveli nuclear desemneaz: a) membrana intern;
b) structura complex care se afl la frontiera dintre nucleul i citoplasma unei
celule eucariote; c) membrana extern pe suprafa creia exist pori; d) spaiul
intermembranar nuclear; e) totalitatea fibrelor de cromatin.

4.6.1.1. Structura i nveliul nuclear este o barier care separ dou din cele
funcia complexului mai importante compartimente ale celulei, nucleul i citoplasma,
porilor nucleari porii fiind pori n aceast barier. Contrar membranei plasmatice,
care mpiedic trecerea macromoleculelor ntre citoplasm i
spaiul extracelular, anvelopa nuclear este un centru activ pentru
ARN i proteinele care se deplaseaz n cele dou sensuri, ntre
compartimentele pe care aceasta le separ. Replicarea i
transcripia materialului genetic, n nucleu, necesit participarea
unui mare numr de proteine care se sintetizeaz n citoplasm i
sunt transportate prin nveliul nuclear. Invers, moleculele de
ARNm, ARNt i subunitile ribozomilor care sunt fabricate n
nucleu trebuie s fie transportate prin membrana nuclear, n sens
invers.
Anumite elemente, cum sunt moleculele ARNsn (ARN small
nuclear), se deplaseaz n cele dou direcii. Ele sunt sintetizate n
nucleu, se asambleaz n particule ribonucleoproteice (RNP), n
citoplasm, i sunt reimportate n nucleu unde intervin n maturarea
ARNm. Acest trafic intens se realizeaz prin porii nucleari. innd
seama c particule materiale, de talia subunitilor ribozomale, pot
s treac prin porii nucleari, putem presupune c acetia sunt
canale deschise dar, de fapt, este exact contrar. Porii nucleari
conin un aparat complex, n form de co, numit Complexul Porului
Nuclear (CPN) care obtureaz porul ca un dop i care se reliefeaz
n afar n citoplasm i n nucleoplasm. Structura CPN este
prezentat n modelul schematic din figura 4.27.
CPN este un enorm complex molecular cu simetrie
octogonal care se estimeaz c are n structur 100 la 200
polipeptide. Masa CPN este cam de 30 ori mai mare dect masa
unui ribozom. Structura molecular a complexului CPN a fost
determinat de-a lungul timpului graie tehnicilor de microscopie
electronic i de analiz de imagini din ce n ce mai performante.
Dac sunt injectate soluii, ale moleculelor cu mas molecular
mic, n citoplasma unei celule acestea pot penetra rapid n porii
nucleari prin simpl difuzie. Experimentul sugereaz c aceste
substane sunt capabile s treac printre fantele existente ntre
razele coului.
Capacitatea moleculelor mai mari (proteine i

4.6.1.2. Traficul nucleoproteine) de a trece din citoplasm n nucleu depinde de
nucleu-citoplasm sediul lor obinuit de reziden, n nucleu sau n afara acestuia. De
exemplu, dac o protein citoplasmatic, cum este albumina seric
bovin, este marcat radioactiv i injectat n citoplasm, ea are
tendina de a rmne acolo. Din contr, dac injectarea este
realizat cu o protein cu localizare nuclear, nucleoplasmina,
proteina marcat va fi regsit imediat n nucleu.

Figura 4.27. Structura porului nuclear (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J.

th
B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6 Edition,
2002)
Importul proteinelor n nucleu trece prin mai multe etape:

i) proteina care trebuie importat se cupleaz cu un receptor
pentru SLN (Semnal de Localizare Nuclear) care pare a fi localizat
la suprafaa filamentelor deprtate de inelul extern al porului ctre
citoplasm;
ii) interacia ntre proteina nuclear i receptorul pentru SLN
permite acostarea proteinei pe faa citoplasmatic a complexului
porului nuclear prin formarea unui complex de transport;
iii) deplasarea complexului de transport prin por necesit
energie eliberat din hidroliza ATP. Aceasta implic o modificare a
conformaiei transportorului, structur mare n form de dop (inel
intern) situat n centrul complexului porului nuclear (Figura 4.27).
Modificarea de conformaie deschide un canal n centrul
transportorului i permite moleculelor situate n proximitatea
acestuia s ptrund n nucleoplasm. Dup acelai principiu,
substanele care trec din nucleu n citoplasm declaneaz,
probabil, deschiderea transportorului n sens invers.
Un por nuclear individual este capabil s importe proteine i

s exporte ARN i ribonucleoproteine. Acest transport bidirecional
poate fi vizualizat prin microscopie electronic. De asemenea,
tendina de acumulare n unul dintre cele dou compartimente
celulare a unor proteine purttoare de semnale de localizare n
citoplasm sau n nucleu poate fi vizualizat prin microscopie de
fluorescen sau confocal.

4.6.2. Nucleul este Specialitii n biologie celular se bazeaz mult pe studiile

un organit biochimice pentru a nelege activitile nucleului. Cu toate c
organizat acestea furnizeaz un numr mare de informaii, distrug toate
structurile moleculare organizate care pot exista n nucleu i dau
impresia c acesta nu este dect un sac de elemente repartizate
la ntmplare. n acelai timp, o serie de studii de microscopie ne
fac s realizm c nucleul este n realitate un compartiment foarte
organizat. De exemplu, fibrele de cromatin, care compun un
cromozom interfazic, nu sunt dispersate n tot nucleul, cum am
putea crede, ele sunt concentrate ntr-un domeniu specific care nu
se suprapune deloc cu domeniile altor cromozomi.
Interaciunile ntre extremitile cromozomilor i anvelopa
nuclear reprezint un alt mod de organizare a cromozomilor n
nucleu. Aceast asociere este evident mai ales n meioz, cnd
cromozomii pot s se ndeprteze de anvelopa nuclear i s
formeze un buchet.
De mai bine de treizeci de ani se tie c ARN ribozomal este
sintetizat n nucleol, dar se consider c celelalte molecule de
ARN, i mai ales ARNm se asambleaz n tot nucleul. Cercetrile
ultimilor zece ani au demonstrat clar c moleculele de ARNm sunt
sintetizate ntr-un numr limitat de situsuri discrete situate n
ntregul nucleu. Dac sunt identificate cu ajutorul unor sonde
marcate fluorescent, situsurile de sintez i de maturare a
moleculelor de pre-ARNm apar sub forma unor pete strlucitoare
n nucleoplasma nemarcat. Fiecare din cele 20 la 50 de pete
observate ntr-un anumit nucleu reprezint situsul sintezei mai
multor molecule de ARNm diferite. Diferitele elemente ale nucleului
sunt organizate n acest compartiment printr-o reea interactiv
complex de filamente care compun matricea nuclear.
4.6.2.1. Cromozomii Matricea nuclear nu este numai un schelet care menine

forma nucleului sau un eafodaj pe care se organizeaz buclele de
cromatin; ea servete i de fixare pentru mecanismele care
intervin n diferite activiti ale nucleului, cum sunt transcripia,
maturarea ARN i replicarea. De exemplu, dac celulele sunt
incubate n prezen de precursori radioactivi ai ARN sau ADN n
timpul unei scurte perioade, gsim c aproape toi acizii nucleici
sintetizai sunt asociai fibrilelor matricei nucleare.
Cromozomii se individualizeaz structural la nceputul

mitozei i par s dispar din nou la sfritul acesteia. Acetia sunt
constituii dintr-un complex de ADN i proteine numit cromatin.
Cromatina exist n diverse stri n diferite faze ale ciclului celular.
Cromozomii sunt mult mai scuri dect lungimea moleculelor de
ADN pe care le conin.

n medie, un cromozom uman conine o molecul de ADN de

aproximativ 5 cm. Compactarea acestui material genetic, n
structura cromozomului, presupune existena unui sistem organizat
de mpachetare care s permit totui funcionarea genomului i
exprimarea genelor. Observate la microscopul electronic, cea mai
mare parte a organitelor intracelulare prezint o structur care ne
ofer informaii interesante despre funcia lor. Totui, micrografiile
electronice ale preparatelor fine ale nucleului ofer destul de puine
informaii privind natura cromozomilor n interfaz. n aceast
etap, cromozomii sunt mult mai puin vizibili deoarece cromatina
se afl ntr-o stare mai relaxat (Figura 4.28).
Figura 4.28. Micrografii electronice care prezint starea cromatinei n

interfaz (a) i n mitoz (b) (prelucrat dup Molecular Cell Biology Lodish H., et. al., 2000)
Structura cromozomului mitotic

Dispersarea cromatinei n celulele n interfaz face mult mai
uoar replicarea i transcripia ADN. Din contr, cromatina
celulelor mitotice este sub forma cea mai condensat, care
uureaz livrarea unui pachet intact de ADN fiecrei celule fiice.
Cromozomii mitotici sunt foarte utili, att pentru biologi ct i pentru
medici, deoarece ei conin un lot complet de material genetic
celular i pot fi pui n eviden prin tehnici simple (Figura 4.28 b).
Cnd un cromozom se condenseaz n timpul profazei mitotice, el
adopt o form distinct i constant determinat, n principal, de
lungimea moleculei de ADN i de poziia centromerului. Se pot
evidenia cromozomii mitotici ai unei celule n diviziune prin tehnica
descris n figura 4.29. n aceast tehnic, celulele sunt sparte
dup oprirea diviziunii celulare n mitoz n urma folosirii colchicinei.
Cromozomii mitotici sunt fixai la suprafaa unei lame unde ocup o
suprafa foarte mic i colorai cu diferite tipuri de reactivi (Tabelul
din figura 4.30). De exemplu, tehnica n care se realizeaz o
proteoliz limitat i colorarea cu reactiv Giemsa poart numele de
bandare G. Prin aceasta
se evideniaz prin benzi nchise la culoare regiunile bogate n AT
i prin benzi pale cele bogate n GC

Dup fotografiere cromozomii individuali sunt decupai i

aranjai n perechi. Se realizeaz un cariotip n care cromozomii
omologi sunt dispui n ordinea descresctoare a mrimii aa cum
se prezint n figura 4.29b. Celulele somatice de la om conin 46
cromozomi care pot fi grupai n 22 de perechi omologe i
cromozomii sexuali care sunt XX la femei i XY la brbai. Studiul
cariotipului este o tehnic de baz pentru citogeneticieni. Cu
colorantul Giemsa se obin ntre 400 i 800 benzi pentru un set
haploid de cromozomi. Preparatele de cromozomi mitotici sunt
curent realizate pornind de la culturi de celule sanguine pentru a
identifica indivizii purttori de anomalii cromozomale. Exist
posibilitatea determinrii cromozomilor suplimentari, absena lor
sau o serie de alte modificri vizibile la microscopul optic.
Braul scurt al cromozomului este desemnat cu litera p
(petit), iar braul lung cu litera q (urmtoarea liter din alfabet). n
tehnicile de bandare, fiecare bra al cromozomului este mprit n
dou sau mai multe regiuni prin benzi mari. Regiunile sunt
numerotate cu 1, 2, 3 pornind de la centromeri ctre capete.
Fiecare regiune este divizat n benzi i subdiviziuni ale benzilor.
De exemplu, Xp21.2 se refer la segmentul cromozomial localizat
pe braul scurt al cromozomului X, n regiunea 2, banda 1 i sub-
banda 2.
Centromerii
Se poate remarca c toi cromozomii reprezentai n figurile
4.28 i 4.29 posed o regiune unde suprafaa lor exterioar este
net rscroit. Aceast scobitur care este vizibil foarte bine n
figura 4.28 b reprezint centromerul cromozomului. Poziia
centromerului este variabil, mprind cromozomul (cromatida) n
dou regiuni inegale. n general, centromerii conin heterocromatin
constitutiv. Centromerii cromozomilor umani conin secvene lungi
de aproximativ 170 nucleotide (ADN satelit ) dispuse n tandem i
repetate de la 2 000 la 30 000 ori pentru fiecare centromer. ADN
centromeric fixeaz proteine specifice, printre care i cele care
servesc drept situs de fixare a microtubulilor n procesul de
separare a cromozomilor n timpul diviziunii mitotice. Centromerii
mpart fiecare cromatid n dou cromatide inegale numite brae.
Telomerii
Cele dou extremiti ale moleculei de ADN, de la nivelul
fiecrui cromozom, posed segmente particulare de secvene
repetitive numite telomeri, care formeaz un coif la fiecare capt.
La om telomerii posed motivul repetitiv TTAGGG/AATCCC care
se repet de o mie de ori i permite replicarea normal a capetelor
cromozomilor (Figura 4.31a).
Contrar celor mai multe tipuri de secvene repetitive, care
variaz mult ntre specii, chiar dac ele sunt nrudite i apropiate
evolutiv, n cazul telomerilor de la om i de la marea
majoritate a vertebratele studiate pn n prezent, gsim aceeai
secven telomeric.

La alte organisme, cum sunt protozoarele i drojdiile,

telomerii au secvene diferite. Totui, asemeni situaiei de la
vertebrate, una dintre catene este ntotdeauna bogat n resturi
de guanozin iar complementara sa n resturi de citozin.
Catena bogat n G este orientat n sensul 5-3 ctre
extremitatea cromozomului i depete cu 12 la 15 nucleotide
extremitatea catenei bogat n C. Datorit existenei acestui
dezechilibru catena bogat n G formeaz o coad scurt,
monocatenar, la cele dou extremiti ale cromozomului.
Aceast dispoziie persist de la o generaie celular la alta
datorit unei enzime speciale, telomeraza, care poate aduga
noi uniti repetitive la extremitatea 3 a catenei bogate n G
(Figura 4.31 b).
Figura 4.29 Cariotipul cromozomilor mitotici de la om: a) tehnic folosit pentru

obinerea de preparate de cromozomi mitotici din leucocitele sngelui periferic; b)
cariotip uman (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Ed,
International Edition, Benjamin Cummings, 6 Edition, 2002)
th

Tehnic Procedeu Tipul benzilor

Bandarea G Proteoliz limitat, Benzi ntunecate bogate n
colorare Giemsa AT;
Benzi pale bogate n GC
Bandarea R Denaturare prin cldur, Benzi ntunecate bogate n
colorare Giemsa GC
Benzi pale bogate n AT
Bandare Q Colorare cu quinacrin Benzi ntunecate bogate n
AT
Benzi pale bogate n GC
Bandare C Denaturare cu hidroxid Evidenierea de benzi
de bariu, colorare ntunecate de
Giemsa heterocromatin
Figura 4.30. Tehnici de colorare folosite pentru bandarea cromozomilor
Telomeraza, ale crei proprieti au fost bine studiate de

ctre Elisabeth Blackburn i colegii si de la Universitatea din
California, San Francisco, este o transcriptaz invers care
asambleaz fragmente de ADN folosind o caten ARN drept
matri. Este o enzim foarte neobinuit deoarece fragmentul de
ARN care servete drept model (matri) face parte din structur.
Telomerii au roluri importante n celul :

i) sunt necesari replicrii complete a cromozomului;
ii) protejeaz cromozomii de nucleaze i de alte influene
destabilizatoare;
iii) mpiedic fuziunea dintre extremitile cromozomilor n
procesele de recombinare;
iv) faciliteaz interaciile dintre extremitile cromozomilor i
anvelopa nuclear n anumite tipuri celulare.
De asemenea, telomerii i activitatea telomerazei par s fie unii
dintre principalii actori implicai n procesul de mbtrnire. Celulele
normale, n cultur, nu sunt capabile s se divid dect de un
numr limitat de ori nainte de a da semne de mbtrnire i de a
muri n final.
Telomerii se scurteaz deoarece cea mai mare parte a

celulelor umane par s fie lipsite de telomeraze. Contrar celulelor
normale, celulele canceroase nu nceteaz s creasc n cultur i
devin nemuritoare. Unul dintre factorii care ar putea contribui la
imortalizarea celulelor maligne este reactivarea telomerazei, care
conserv lungimea telomerilor de-a lungul generaiilor. De fapt,
cercetrile realizate n acest sens au demonstrat clar c celulele
canceroase posed o activitate telomerazic care nu poate fi
evideniat n celulele normale. Aceast descoperire a declanat
stimularea cercetrilor privind inhibitorii specifici ai acestei enzime
n sperana c acetia vor avea efect benefic n tratamentul
anumitor tipuri de cancer.

Figura 4.31. Completarea capetelor ADN de ctre telomeraz: a) procesul de

replicare i evidenierea formrii capetelor incomplete ale cromozomilor pentru
catena ntrziat; b) mecanismul de aciune al telomerazei cu evidenierea
motivelor repetitive de la capetele cromozomilor (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell,
J. B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6 Edition, 2002)
th
TA 4.61. Credei c un cromozom poate avea mai muli centromeri?

TA 4.62. La ce servesc telomerii?
TA 4.63. Ce este un cariotip?
a) fenotipul unui individ; b) genotipul unui individ; c) o combinaie unic de
cromozomi ntlnii ntr-un gamet; d) un sistem de clasificare al acizilor nucleici; e)
o dispunere a cromozomilor omologi ntr-o celul organizat n relaie cu numrul,
mrimea i tipul lor.
TA 4.64. O celula eucariot care pierde telomeraza va:
a) avea o mare probabilitate de a deveni canceroasa; b) produce fragmente
Okazaki; c) avea o replicare ntrziat; d) suferi o reducere a lungimii
cromozomilor; e) fi foarte sensibil la lumina solar.
Dup cum am artat mai sus, o celul uman normal

4.6.3. mpachetarea conine aproximativ 6 miliarde de perechi de baze repartizate ntre
genomului eucariot 46 de cromozomi (cantitatea prezent n numrul diploid de
cromozomi ne-replicai). Fiecare cromozom conine o singur
molecul continu de ADN. Deoarece fiecare pereche de baze
ocup aproximativ 0,34 nm, 6 miliarde de perechi de baze
corespund unei molecule lungi de 2 metri. De asemenea, n celul,
ADN este hidratat cu cantiti importante de ap (aproximativ 6
molecule de ap pentru fiecare pereche de baze), care i acestea
duc la creterea volumului.

Problema cheie a fost identificarea modalitilor prin care

este posibil localizarea a 2m de ADN hidratat ntr-un nucleu al
crui diametru nu depete 10 m, asigurnd n acelai timp,
accesul proteinelor i enzimelor implicate n procesele de reglare.
O alt problem, la fel de important, se refer la modul n care
molecula de ADN, dintr-un cromozom, este organizat pentru a nu
se nnoda cu moleculele altor cromozomi. Rspunsurile la toate
aceste probleme l gsim n modul remarcabil de mpachetare al
moleculei de ADN.
Se cunoate de mult timp c fibrele care formeaz

cromatina, i intr n structura cromozomilor, sunt formate din ADN
n asociere cu proteine. Proteinele din structura cromatinei sunt
mprite n dou grupe principale: histonele i proteinele
cromozomiale nehistonice. Histonele reprezint o colecie de mici
proteine bazice bine definite, n timp ce proteinele nehistonice sunt
compuse dintr-un numr mare de proteine diferite cu rol structural,
enzimatic i reglator. Cromatina mai conine i un procentaj sczut
de ARN compus, n principal, din catene de ARNhn (heterogen
nuclear) n diferite stadii de maturare i din ARNsn (small
nuclear) care intervine n procesul de maturare (splicing) al
ARNm.
n celulele eucariote, unitatea de baz a organizrii
cromatinei este nucleozomul. Acesta reprezint o entitate n care
146 pb sunt rsucite n dou ture de super-elice stng n jurul unui
octamer de histone care conine cte dou exemplare din
moleculele H2A, H2B, H3 i H4. Nucleozomii sunt organizai n
filamente de 10 nm n diametru prin interaciuni cu histona H1, care
se leg la ADN care intr i iese din nucleozom. Un al treilea nivel
de organizare este obinut prin rsucirea unui filament de 10 nm
ntr-o elice care conine 6 nucleotide pe tur, cu formarea unui
solenoid cu un diametru de 30 nm. Structuri mai complexe ale
cromatinei sunt realizate prin condensarea filamentelor de 30 nm,
dar detaliile privind aceste structuri sunt mai puin cunoscute
(Figura 5.15).
Microscopia electronic a furnizat dovezi decisive privind
organizarea cromatinei n regiuni, bucle i domenii distincte de 30
la 300 kpb, fixate fiecare pe o matrice bogat n proteine. Fiecare
bucl pare s aib doar o singur origine de replicare i s se
comporte ca o unitate de replicare.
Buclele, sunt uniti de suprarsucire independente,
structura topologic a fiecreia fiind independent de starea
celorlalte. Se pare c acest lucru este posibil datorit fixrii
extremitilor buclelor n matrice. Cu toate c fiecare bucl conine
mai multe uniti de transcripie, activitatea ntregii regiuni poate fi
coordonat pentru a fi reprimat sau potenial activat (Figura
4.32).

TA 4.65. ntr-un nucleozom, ADN este spiralat n jurul:

a) moleculelor polimerazice; b) ribozomilor; c) histonelor; d) nucleolului; e)
ADN satelit.
TA 4.66. Fcnd apel i la cunotinele dobndite n urma parcurgerii
unitilor 1 i 4 realizai un eseu privind consecinele compactrii materialului
genetic n evoluia lumii vii
Figura 4.32. Schema general a organizrii cromatinei cu evidenierea

principalelor nivele cunoscute de organizare (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J. B.
th

4.6.3.1. Nucleozomii mpachetarea precis a ADN de la eucariote depinde de

- primul nivel de histone, grup remarcabil de proteine bazice care se mparte n cinci
organizare al subgrupe, n principal n funcie de coninutul lor n lizin i arginin
cromozomului care reprezint aproximativ din totalul aminoacizilor (Tabelul din
Figura 4.33). La pH fiziologic, aceste proteine sunt ncrcate
pozitiv. Aminoacizii bazici din structur sufer modificri post-
traducionale (acetilare, metilare, fosforilare) reversibile enzimatic.
Studiile comparative de secven i de structur tridimensional au
condus la divizarea familiei histonelor n dou grupuri: H2A, H2B,
H3 i H4 pe de o parte i H1 pe de alt parte. Aceast
eterogenitate este subliniat i de poziia lor n nucleozom.
De fapt, histonele H4 i H3, i ntr-un grad mai mic H2A i
H2B, sunt proteine foarte conservate evolutiv. Exemplul cel mai
frapant este al histonei H4 de la bovine i de la mazre, care au
acelai numr de aminoacizi (102) i ale cror secvene primare nu
difer dect prin doi aminoacizi: o lizin n locul unei arginine i o
leucin n locul unei valine. Aceste diferene minore sunt prezente
n condiiile n care divergena dintre animal i plant s-a produs
acum un miliard de ani. Structura histonei H1 este mult mai
variabil de la o specie la alta. Aceast conservare extrem
sugereaz c toi aminoacizii au un rol bine definit n funcionarea
proteinei.
Structura teriar a histonelor din primul grup demonstreaz
existena a dou domenii: un domeniu central globular, hidrofob i
un domeniu N-terminal, hidrofil, ncrcat pozitiv i flexibil. Histona
H1, mai lung, posed un al treilea domeniu la nivelul captului C-
terminal, hidrofil i flexibil.
La nceputul anilor 1970, s-a putut observa c n urma
tratamentului cromatinei, cu nucleaze nespecifice, cea mai mare
parte a ADN era transformat n fragmente de aproximativ 200
perechi de baze sau n multipli ai acestora.
Din contr, acelai tratament aplicat moleculelor de ADN
nud determin obinerea unei populaii de fragmente de mrimi
aleatoare. Aceast descoperire i-a fcut pe cercettori s considere
c fragmentele uniforme de ADN cromozomial erau protejate de
atac enzimatic probabil prin asocierea lor periodic cu o protein.
Histone Nr. Masa % % PUE*

aminoacizi kDa Arg Lys (10-6
ani)
H1 215 23,0 1 29 8
H2A 129 14,0 9 11 60
H2B 125 13,8 6 16 60
H3 135 15,3 13 10 330
H4 102 11,3 14 11 600
Figura 4.33. Caracteristicile histonelor din timus de vac
* PUE = Perioad unitar de evoluie: durat de timp necesar pentru o
schimbare cu 1% a secvenei de aminoacizi a unei proteine dup separarea
a dou specii

n 1974, Roger Kornberg, de la Universitatea Harvard, a

propus un nou tip de structur secundar pentru cromatin
bazndu-se pe rezultatele digestiei cu nucleaze asupra cromatinei
din diferite surse. Astzi, se cunoate c nucleozomii conin o
particul care constituie nucleul nucleozomului, compus din 146
perechi de baze de ADN suprarsucit, care face aproape dou
spire n jurul unui miez proteic central care conine 8 molecule din
patru histone: H2A, H2B, H3 i H4 (Figura 4.34d).
Particulele de nucleozomi sunt unite unele de altele printr-un

segment de ADN de legtur, de lungime variabil (aproximativ 60
de perechi de baze). ADN din structura unui nucleozom i din braul
de legtur reprezint aproximativ 200 de perechi de baze, ceea ce
corespunde valorii fragmentelor gsite n cursul primelor experiene
cu nucleaze (Figura 4.33a i b). Nucleele nucleozomilor, care au un
diametru de aproximativ 10 nm, i ADN de legtur, cu un diametru
de 2 nm, apar pe micrografiile electronice asemeni unui irag de
mtnii (Figura 4.34). Pentru fiecare nucleozom, o molecul de
histon H1 este poziionat n exteriorul nucleului fiind asociat la
cele dou extremiti ale ADN care intr i ies de pe suprafaa
complexului proteic. (Figura 4.34d). Dac se realizeaz eliminarea
selectiv a moleculelor de histone H1, printr-un tratament al fibrelor
cu soluii saline de concentraie sczut, cromatina capt un
aspect mult mai dezorganizat.
n general, resturile de aminoacizi bazici ale histonelor
nucleului sunt grupate la extremitile moleculei, restul structurii
pstrnd un caracter relativ hidrofob. Aceast separare convine
perfect organizrii nucleozomului. Regiunile nencrcate i
hidrofobe ale histonelor ocup centrul particulei i favorizeaz
agregarea ntr-un nucleu strns. Poriunile polare, bazice, ale
moleculelor din nucleu formeaz cozi flexibile orientate ctre
exteriorul particulei, unde resturile ncrcate pozitiv pot stabili
interacii ionice cu gruprile fosfat negative din structura scheletului
ADN. Cu toate c, molecula de ADN este strns asociat nucleului
format din histone prin suprafaa intern a fibrei elicoidale,
suprafaa sa extern rmne expus i poate interaciona cu
moleculele de reglare.
Studii de cristalografie cu raze X au demonstrat c resturile
ncrcate pozitiv sunt reunite sub form de perechi la suprafaa
octamerului histonic. Situsurile pereche formeaz un fel de spiral
pe drumul pe care se presupune c l urmeaz elicea ADN care
nconjoar nucleul nucleozomului. Acestea servesc drept puncte
de fixare pentru cele dou catene ale helixului.
Dac pentru spiralizarea a 200 de perechi de baze de ADN
sunt necesare aproximativ nou molecule de histone, o celul
uman care conine 6 miliarde de perechi de baze de ADN, poate
conine aproximativ 300 milioane de histone necesare mpachetrii
primare a materialului genetic.

Astfel se explic, necesitatea unui numr mare de
exemplare de gene care codific pentru histone n celulele care se
divid rapid
Figura 4.34: Structura i dimensiunile nucleozomilor: a) sedimentarea

nucleozomilor n gradient de sucroz duce la obinerea unei serii de picuri care
corespund formelor monomere, dimere, trimere, etc., ale nucleozomilor; b) ADN
extras din fraciile individuale este supus electroforezei mpreun cu un martor
ADN digerat cu nucleaze; c) micrografie electronic a cromatinei eliberat dintr-
un nucleu al unei celule de Drosophila. Se observ c fibrele de cromatin sunt
formate din nucleozomi conectai ntre ei prin segmente scurte de ADN; d)
schem care demonstreaz structura unei particule nucleozomale cu o molecul
de histon H1 asociat; e) electroforez n SDS a unui amestec de histone H3 i
H4 din timus de viel. Se observ toate benzile corespunztoare componentelor
tetramerului (H3)2(H4)2 (prelucrat dup Lewin B., Genes VII,2000).

4.6.3.2. Nivelurile
Cel mai redus nivel de organizare al cromatinei l reprezint
structurale
rsucirea moleculei de ADN n jurul inimii nucleozomului i are un
superioare ale
diametru de 10 nm. Totui, cromatina nu se gsete n celul sub
cromatinei
aceast form relativ rsucit de irag de mtnii. Micrografiile
electronice ale seciunilor de nucleu relev un numr de pete
minuscule cu un diametru de aproximativ 30 nm care reprezint
seciuni transversale la nivelul fibrelor de cromatin. Dac se
separ cromatina din nucleu, n prezena ionilor divaleni, se
observ prezena unor filamente de aceeai grosime (Figura 4.35).
Structura acestui filament de 30 nm rmne nc un subiect
discutabil. n figura 4.35 este prezentat modelul solenoid de
suprarsucire a filamentului subire al nucleozomilor (10 nm) pentru
a forma un filament de ordin superior, mai gros. Se presupune c,
fibrele condensate se formeaz prin mpachetarea nucleozomilor
ntr-o structur spiralat (aranjament solenoid) care conine ase
nucleozomi pentru fiecare tur de rsucire. Acest nivel suplimentar
de organizare al cromatinei crete de ase ori raportul de
condensare. Filamentul de 30 nm este conservat prin interaciunea
ntre moleculele de histon H1 ale nucleozomilor vecini (Figura
4.35b).
Dac sunt extrase selectiv moleculele H1, filamentele groase
de cromatin se deruleaz i se transform n mrgele (mtnii)
mai subiri i mai nguste. Readugarea histonei H1 restabilete
structura de ordin superior. Studii recente de microscopie
electronic sugereaz c fibrele de 30 nm sunt mai puin uniforme
dect modelul solenoid imaginat. Cromatina condensat poate fi de
fapt foarte dinamic fiind format din structuri parial depliate care
se pot replia rapid n structuri solenoide ocazionale.
Cromatina din regiunile cromozomiale care nu sunt
transcrise frecvent este predominant n forma condensat de 30
nm, n timp ce regiunile transcrise activ se consider c adopt
forma relaxat de irag de mtnii (Figura 4.35a)
TA 4.67. Care dintre urmtoarele afirmaii reprezint succesiunea corect

a nivelurilor de organizare?
a) nucleozom, fibre de cromatin de 30-nm, domenii buclate; b) domeniul
bucl, 30-nm fibre de cromatin, nucleozom; c) domeniul bucl, nucleozom, 30-
nm fibre de cromatin; d) nucleozom, domeniul bucla, 30-nm fibre de cromatin;
e) 30-nm fibre de cromatin, nucleozom, domeniu bucl
TA 4.68. Nucleozomii sunt organizai n filamente de _____n diametru prin
interaciuni cu _____
a) 80 nm/ histona H4; b) 10 nm/histona H1; c) 30 nm/ histona H2; d) 300
/cicline; e) 15 nm/polimeraze

Urmtoarea etap de condensare a ADN n nucleu o

reprezint organizarea filamentelor de 30 nm ntr-o serie de bucle
mari suprarsucite. Se estimeaz c fiecare bucl conine ntre 10
i 150 kilobaze ADN. Se pare c acestea sunt fixate la baza cu
proteine specifice printre care i o topoizomeraz de tip II care
intervine pentru a controla gradul de spiralizare al ADN la nivelul
buclei. Topoizomeraza elibereaz moleculele de ADN dac o bucl
se ncurc. Buclele de ADN ar putea mpri genomul n domenii,
fiecare coninnd un lot mic de gene care sunt exprimate printr-un
mecanism comun de reglare.
Figura 4.35. Modelul solenoid de organizare a fibrelor de cromatin condensat de 30

nm: a) micrografia i modul de organizare a nucleozomilor din structur; b) micrografie
prezentnd fibrele de 30 nm i modelul de mpachetare solenoid cu caracteristicile sale
structurale (prelucrat dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th edition, 2000)
Normal, buclele de cromatin sunt etalate la interiorul

nucleului i nu sunt vizibile, dar prezena lor poate fi evideniat n
anumite circumstane. De exemplu, dac tratm cromozomii mitotici
izolai cu reactivi care extrag histonele, putem observa c ADN
eliberat de histone se pliaz sub form de bucle plecnd de la
eafodaj proteic, format din proteine nehistonice (Figura 4.32).
Micrografia electronic din figura 4.36b evideniaz buclele
lungi de ADN ancorate la un schelet cromozomial compus din
proteine nehistonice obinut prin ndeprtarea histonelor din
structura cromozomilor din celule HeLa, n metafaz.

Acest eafodaj flexibil are forma cromozomului metafazic i

persist chiar i atunci cnd ADN este digerat cu nucleaze (Figura
4.32c).
O serie de experimente de hibridizare in situ, realizate pe

celule umane n interfaz, utiliznd diferite sonde fluorescente, au
dus la imaginarea modelului prezentat n figura 4.36a. Astfel, s-a
evideniat c o serie de sonde (A la H) care recunoteau secvene
situate la milioane de perechi de baze distan, n structura ADN
linear, erau poziionate foarte aproape unele de altele n structura
cromozomului interfazic.
Se consider c apropierea dintre aceste situsuri este
posibil datorit asocierii lor la scheletul cromozomului.
Figura 4.36. Nivelurile structurale superioare ale cromatinei: a) model de

structurare a buclelor fibrelor de cromatin de 30 nm imaginat n urma
experienelor de hibridare in situ cu sonde (A la H) situate la distane variabile pe
ADN liniar; b) micrografie electronic a unui cromozom metafazic din celule
HeLa, lipsit de histone ca urmare a unui tratament moderat cu detergeni (prelucrat
dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th edition, 2000).
Cromozomul mitotic reprezint etap ultim de condensare a

cromatinei (Figurile 4.28 i 4.32d). De obicei, un m de cromozom
mitotic conine un cm de ADN. Aceast condensare, realizat ca
urmare a unui proces nc puin cunoscut, este nsoit de
fosforilarea practic a tuturor moleculelor de histone H1 la nivelul
celor cinci resturi de serin din molecul.
O imagine general a diferitelor niveluri de organizare ale
cromatinei de la filamentele nucleozomale pn la cromozomii
mitotici este prezentat n figura 4.32.
TA 4.69. Compactarea cromozomilor observat n mitoz este datorat:

a) spiralizrii ADN n jurul histonelor; b) rsucirii cromatinei; c) domeniilor bucla;
d) rsucirii, buclrii i mpachetrii ADN; e) unitilor repetitive ADN n tandem.

4.6.4. Eucromatina Dup terminarea mitozei, cea mai mare parte a cromatinei
i heterocromatina care compune cromozomii mitotici foarte condensai se
disperseaz i revine la starea sa interfazic difuz. Totui, n cea
mai mare parte a celulelor, aproximativ 10% din materialul
cromozomial i pstreaz forma condensat compact pe tot
parcursul interfazei, cromatina condensat putnd fi evideniat la
periferia nucleului. Termenul de heterocromatin desemneaz
cromatina care rmne condensat n timpul interfazei pentru a o
distinge de eucromatina care desemneaz starea dispersat.
Cercetrile din ultimii ani demonstreaz clar posibilitatea trecerii
reversibile dintr-o form n alta, aceast clasificare fiind mai
degrab didactic.
Numeroase gene de la eucariotele multicelulare nu sunt exprimate
dect n anumite momente ale dezvoltrii i/sau n anumite esuturi.
n consecin, celulele trebuie s posede modaliti eficace

pentru a reprima expresia tuturor genelor care nu sunt
caracteristice unui anumit tip de celul ntr-o anumit etap a
dezvoltrii sale. Represia unor blocuri mari de gene, prin limitarea
disponibilitii factoriilor de transcripie, este un mecanism destul de
puin probabil pentru o astfel de reglare. Este general admis c
aceast represie este rezultatul sechestrrii genelor silenioase n
complexe de cromatin superior structurate care le fac inaccesibile
mainriei de transcripie.
n absena informaiei privind organizarea acestei structuri a
cromatinei, este imposibil de descris starea de tranziie care separ
cromatinele reprimate i exprimate. Genele de meninere,
exprimate n permanen n toate celulele sunt replicate n prima
jumtate a fazei S. n acelai context, genele neexprimate tind s
fie replicate mai trziu. De asemenea, replicarea genelor este
precoce n esuturile n care ele sunt exprimate i trzie n esuturile
n care acestea sunt silenioase". De exemplu, la mamifere
cromozomul X inactiv este replicat dup cromozomul X activ.
Aceste corelaii sugereaz c replicarea precoce creeaz o stare
mai accesibil mainriei de transcripie crescnd eficiena fixrii
factorilor de transcripie.
Heterocromatina poate fi divizat n dou categorii:

constitutiv i facultativ, n funcie de permanena strii
condensate. Heterocromatina constitutiv rmne condensat tot
timpul i reprezint regiunile din structura ADN care rmn
silenioase permanent. n celulele de mamifere, cea mai mare parte
a heterocromatinei constitutive se gsete n apropierea
centromerului tuturor cromozomilor i n alte cteva regiuni
particulare, cum este braul distal al cromozomului Y la masculi. La
multe plante, extremitile cromozomului (telomerii) sunt i ele
formate din heterocromatin constitutiv.

n principal, ADN din structura heterocromatinei constitutive este format

din secvene nalt repetitive i se presupune c este lipsit de gene care
codific pentru proteine. Se consider c, heterocromatina conine
elemente a cror influen se face simit la o anumit distan i poate
afecta starea fiziologic a genelor nvecinate. Astfel, dac unele gene
active, care i-au schimbat poziia ca urmare a unei transpoziii sau a
unei translocri, se afl poziionate n apropierea heterocromatinei, ele
prezint tendina de a deveni inactive.
Contrar formei constitutive, heterocromatina facultativ este inactivat
specific n cursul anumitor stadii de via ale organismului. Un exemplu
tipic de heterocromatin facultativ este furnizat de inactivarea unui
cromozom X n celulele femele de la mamifere.
Celulele mascule au un mic cromozom Y i un cromozom X mult mai
mare. Cromozomii X i Y au puine gene n comun astfel nct brbaii
nu posed dect un exemplar al genelor situate pe cromozomii sexuali.
Dei, celulele de la femele conin doi cromozomi X, unul singur este
funcional n procesul de transcripie. Cellalt cromozom rmne
condensat sub forma unei mase de heterocromatin (Figura 4.37) numit
corpuscul Barr, dup numele cercettorului care l-a descoperit n anul
1949. Se consider c, producerea corpusculului Barr este un
mecanism normal, graie cruia celulele femele i mascule dispun de
acelai numr de cromozomi X activi i sintetizeaz cantiti echivalente
de produi codificai de genele situate pe cromozomul X.
Figura 4.37: Evidenierea heterocromatinei: a) micrografie electronic a unei celule stem din mduva
spinrii. Regiunile nchise de la periferia nucleului i din afara nucleolului reprezint heterocromatin; b)
prezena cromozomului X inactivat sub forma corpusculului Barr ntr-o celul de femeie (prelucrat dup Molecular
Cell Biology, Lodish, et all. 4th edition, 2000)
.
TA 4.70. Cromozomii X i Y sunt numii cromozomi sexuali, deoarece:

a) numrul cromozomilor Y determina sexul unui individ; b) femelele au
cromozomi X i masculii cromozomi Y; c) acetia sunt prezeni numai cnd celulele
sufer meioza; d) genele localizate pe aceti cromozomi joac un rol n
determinarea sexului unui individ; e) acetia sunt formai numai ca rezultat al
fertilizrii.

4.7. Rspunsuri i comentarii la testele de autoevaluare unitatea 4
R TA 4.1. Membrana plasmatic este constituit dintr-un dublu strat lipidic (40 la
70%) format n principal din fosfolipide i colesterol. Numeroase proteine (aproximativ
30%) sunt ancorate n membran. La suprafaa extern a membranei plasmatice, pe
structura proteinelor sunt ancorate grupri glucidice. Membrana simetric este asimetric.
R TA 4.2: b; R TA 4.3:a; R TA 4.4: c; R TA 4.5: d; R TA 4.6: b; R TA 4.7: a; R TA
4.8: a ; R TA 4.9: b; RTA 4.10: a; RTA 4.11: c;
RTA 4.12. Concentraia de K+ este de 10-20 de ori mai mare n interiorul celulelor
dect la exterior, n timp ce pentru Na+ este invers. Aceste diferene sunt determinate i
meninute de o ATP-az din membrana plasmatic care se comport ca o pomp care
expulzeaz activ 3 ioni Na+ ctre exterior i import 2 ioni K+ ctre interior;
RTA 4.13. Na+/K+ ATP-aza este electrogenic i implicat n producerea unui
potenial electric membranar deoarece diminueaz concentraia intracelular de ioni
pozitivi. Transportul de Na+ i K+ este strns cuplat cu hidroliza ATP pentru transferul celor
doi ioni contra gradientului lor electrochimic (transport activ primar). Gradientul de Na+/K+
generat de o parte i de alta a membranei este esenial pentru funcionarea celulei i este
implicat n diverse funcii: i) reglarea pH; ii) reglarea volumului celular; iii) transportul
nutrienilor de tip glucoz i aminoacizi; iv) transmiterea semnalelor n sistemul nervos
(potenial de aciune);
RTA 4.14. Ar fi de ateptat ca cei doi ioni s ias n mediu cnd axonul este n
repaus; K+ va difuza prin canalele de ieire, n timp ce Na+ va fi pompat prin transport
activ. Declanarea unui potenial de aciune va fi nsoit de o ieire a K+ n faza de
repolarizare.
RTA 4.15. De exemplu, potenialele de aciune ar putea merge n ambele direcii n
lungul axonului.
R TA 4.16: e; R TA 4.17: c; R TA 4.18: c; RTA 4.19:c; R TA 4.20: d;
R TA 4.21. Transportorii transmembranari nu pot vehicula macromolecule de tipul
proteinelor, sau particule ca bacteriile sau resturile celulare. Mecanismele folosite de
celul implic formarea veziculelor. Transportul ctre citoplasm se numete endocitoza,
n timp ce transportul ctre mediul extracelular se numete exocitoza. n interiorul celulei,
un flux de vezicule permite transportul macromoleculelor ntre diferite compartimente.
R TA 4.22. Endocitoza mediat prin receptori este un proces specific. Intervin
proteine membranare care recunosc i fixeaz liganzii specificii. Legturile ligand-receptor
induc o regrupare localizat a complexului i formarea unei invaginri a membranei
tapetat pe faa sa citoplasmatic cu proteine fibroase care formeaz o manta n jurul
veziculei.
R TA 4.23: e; R TA 4.24: Se disting dou ci de exocitoz:
i) calea constitutiv care funcioneaz n toate celulele. Veziculele de transport duc n
mod continuu moleculele nou sintetizate ctre membrana plasmatic;
ii) calea reglat care funcioneaz n celulele specializate doar ca rspuns la un stimul,
de exemplu un mesager chimic care se fixeaz la suprafaa membranei plasmatice.
R TA 4.25: e; R TA 4.26: Jonciuni intercelulare implicate n comunicarea
intercelular sunt: jonciunile etane sau impermeabile, Jonciunile de ancorare i .
Jonciunile de comunicare (gap).
R TA 4.27: n calea biosintetic sunt implicate reticulul endoplasmatic (RE) i
aparatul Golgi (AG). Reticulul endoplasmatic (RE), aparatul Golgi (AG), endozomii,
lizozomii i veziculele de secreie comunic ntre ele, dar i cu exteriorul celulei (prin
endocitoz i exocitoz). Coninutul lor poate fi deci disimulat n mediul extracelular.
Trecerea unei proteine din citosol ctre lumenul sistemului vezicular este echivalent cu o
ieire din celul. Astfel, n afar de procesele de proteosintez, destinaia extracelular
este determinat de trecerea prin membrana la nivelul reticulului endoplasmatic rugos

(RER).
R TA 4.28: RE este un ansamblu de membrane interne care particip la numeroase
procese biochimice vitale. ntinderea acestui sistem membranar este variabil n funcie de
tipul celular. Este abundent mai ales n celulele cu sintez puternic i secreie de proteine
i glicoproteine. RE poate fi de dou tipuri. Este fie rugos, cnd sunt prezeni ribozomi pe
suprafaa sa (RER), fie neted (REN). RER se gsete, n general, n jurul nucleului,
membrana sa este o prelungire a membranei nucleare externe, n timp ce REN este
adesea mai ndeprtat de nucleu. RER intervine mai ales n biosinteza i maturarea post-
traductional a diverselor proteine destinate diferitelor compartimente celulare (membrana
plasmatic, lizozomal) sau secreiei. REN particip la sinteza lipidelor i mai ales la
reacii de detoxifiere al cror scop este de a transforma medicamentele i alte substane
toxice n produi netoxici. REN conine pompe de calciu care transport i concentreaz
calciul. Aceasta rezerv este, n parte, eliberat n citosol ca rspuns la un semnal
exterior.
R TA 4.29: Proteinele sintetizate de celule pot avea urmtoarele destinaii: a) unele
proteine merg n membrana plasmatic sau n membranele interne; ii) altele sunt
distribuite n lumenul unor organite; iii) altele sunt destinate secreiei.
R TA 4.30. Moleculele de ARNm mature produse n nucleu ajung n citosol trecnd
prin porii nucleari i sunt traduse n proteine graie ribozomilor i proteinelor asociate.
Natura ARNm determin locul traducerii: fie n citosol, fie n reticul. O secvena
nucleotidic, care codific o peptid semnal, ntre codonul start al traducerii (AUG) i
secvena proteinei mature, determin locul traducerii ARNm. Peptida semnal este
indispensabil pentru transferul ribozomilor liberi angajai n traducere ctre membrana
reticulului. Aceasta peptid este ulterior eliminat de o enzima specific.
Proteinele de secreie ncep sa fie traduse de ribozomii liberi. Dup ce peptida
semnal, situat la extremitatea N-terminal a pre-proteinei, este sintetizat, ea este
recunoscut de o ribonucleoprotein care interacioneaz cu peptida semnal i cu
ribozomul, i oprete traducerea.
Complexul migreaz ctre membrana RE unde recunoate i interacioneaz, cu un
receptor n prezena GTP. Ribozomul se ataeaz la translocon, care devine situsul de
translocare n lumenul RE a proteinei n curs de sintez. Traducerea se reia i peptida
semnal poate s difuzeze prin membrana unde va fi excizat i degradat n lumenul RE
de ctre o enzima specific, semnal peptidaza. Proteina n curs de sintez continu s
intre n membran, ceea ce menine mereu ribozomul la suprafaa RE. n afar de excizia
secvenei semnal, proteina poate suferi i alte modificri, de exemplu glicozilare. Cnd
traducerea este terminat, proteina este eliberat n lumenul RE, unde va rmne pn la
transferul de ctre veziculele de transport. Transportul proteinei prin membrana este co-
traducional pentru c se face n cursul sintezei proteinei.
R TA 4.31: Acestea sunt fragmente de reticul endoplasmatic rugos, adic buci de
bistrat lipidic mpreun cu ribozomii ataai de acetia care se transform n vezicule
sferice. Aceasta se produce n timpul omogenizrii realizat pentru a prepara eantioanele
i datorit faptului c bistraturile lipidice au tendina de a se resuda spontan.
R TA 4.32: Procesul de glicozilare care are loc n RER este nespecific n timp ce n
aparatul Golgi se adaug un motiv glicozidic specific. Din catena oligozaharidic
achiziionat n RER sunt eliminate unele resturi glucidice, n timp ce altele sunt adugate
ntr-o ordine bine determinat.
R TA 4.33. Gruprile glucidice sunt adugate n interiorul lumenului reticulului
endoplasmatic i aparatului Golgi, care sunt topologic echivalente cu exteriorul celulei.
R TA 4.34: c;

R TA 4.35. Cu partea extracelular. Partea Golgi orientat ctre cisterne devine

faa intern a veziculelor de secreie i, dup exocitoz, devine faa extern a membranei
plasmatice.
R TA 4.36. REN concentreaz calciul formnd rezerve de calciu intracelular. n
celulele endocrine ale gonadelor i cortexului suprarenal particip la sinteza steroizilor. n
celulele ficatului, particip la detoxifierea barbituricelor i a etanolului. De asemenea este
implicat n sinteza anumitor proteine.
R TA 4.37. Este produs compusul macroergic numit acid adenozin trifosforic (ATP).
R TA 4.38. Aria suprafeei membranei mitocondriale interne este mare datorit
formrii de criste. De asemenea, coninutul proteic al membranei este neobinuit de mare
(> 70%) i include numeroase enzime i transportori de electroni.
R TA 4.39. a) mama; b) dac exist o anomalie ntr-o gen mitocondrial, ntreaga
descenden a femelei purttoare va purta acest defect. Un exemplu l pot constitui
anumite forme de mitocondriopatii.
R TA 4.40. De fapt bacteriile nu posed mitocondrii dar anumite tipuri prezint
invaginri membranare n citoplasm mai mult sau mai puin complexe. Funcia acestora
este similar cu a membranei interne mitocondriale. Motivul pentru care mitocondriile se
disting de alte structuri membranare din celulele eucariote se poate considera c ine de
originea evolutiv: ele au putut fi iniial simbioni intracelulari; separarea spaial a funciilor
permite un control mai avantajos (n termenii seleciei naturale) al diferitelor procese
metabolice.
R TA 4.41. Proteosinteza mitocondrial este relativ restrns fiind sintetizate
aproximativ 13 proteine, marea majoritate a proteinelor mitocondriale (n jur de 300
proteine diferite) fiind importate din citoplasm. Aproximativ 5-10% din proteinele
mitocondriale sunt sintetizate in situ. Altele sunt codificate de genomul nuclear i
sintetizate n citosol. Astfel, cele dou genoame, mitocondrial i nuclear, intervin pentru
biosinteza proteinelor mitocondriale active.
R TA 4.42: e; R TA 4.43:b; R TA 4.44: d; R TA 4.46: d; R TA 4.47: b; R TA 4.48:a;
R TA 4.45. Da, deoarece acesta se realizeaz fie cu ajutorul diferenei de potenial
(n cazul schimburilor ADP-ATP), fie cu al gradientului protonic (n cazul importului de Pi).
R TA 4.49: d; R TA 4.50: b;
R TA 4.51: Fo traverseaz membrana mitocondrial i membrana tilacoid a
cloroplastului, F1 reprezint tulpina i partea inferioar care se extinde de la Fo la
matricea mitocondriei i n stroma cloroplastelor. Complexul Fo furnizeaz canalul prin
care protonii se vor ntoarce ctre matri sau strom. Cuplarea mecanic prin intermediul
tulpinii coordoneaz o rotaie n interiorul complexului F1 ceea ce determin sinteza ATP.
R TA 4.52:a; R TA 4.53:b; R TA 4.54: e;
R TA 4.55: n nucleul unei celule eucariote tipice, n interfaz, se evideniaz: a)
cromozomii, prezeni sub forma unor fibre nucleoproteice foarte alungite, cromatina; b)
matricea nuclear care este format dintr-o reea fibrilar care conine proteine; c) unul
sau mai muli nucleoli, structuri amorfe; d) nucleoplasma, substan lichid care conine
toate componentele i elementele nucleului eucariot.
R TA 4.56. Cele mai importante roluri ale ADN sunt: a) codificare i stocarea
informaiei genetice; b) autoreplicare i ereditate; c) expresia mesajului genetic i sinteza
de proteine;
R TA 4.57. Lamina nuclear reprezint un suport structural pentru nveliul nuclear
i servete la fixarea fibrelor de cromatin la periferia nucleului. Lamina nuclear se
dezasambleaz i se asambleaz pe parcursul ciclului celular (vezi unitatea 3)
R TA 4.58:c; R TA 4.59: vezi unitatea 1; R TA 4.60: b; R TA 4.63: e; R TA 4.64: d;
R TA 4.61: Centromerii mpart fiecare cromatid n dou cromatide inegale numite
brae. n general, centromerii conin heterocromatin constitutiv.

R TA 4.62: Telomerii au roluri importante n celul: a) sunt necesari replicrii complete a

cromozomului; b) protejeaz cromozomii de nucleaze i de alte influene destabilizatoare;
c) mpiedic fuziunea dintre extremitile cromozomilor n procesele de recombinare; d)
faciliteaz interaciile dintre extremitile cromozomilor i anvelopa nuclear n anumite
tipuri celulare. De asemenea, telomerii i activitatea telomerazei par s fie unii dintre
principalii actori implicai n procesul de mbtrnire.
R TA 4.65: c; R TA 4.66: eseu de maxim 300 de cuvinte; R TA 4.67: a; R TA 4.68:b;
R TA 4.69: d; R TA 4.70: d;

V 4.1. Enumerai funciile membranelor importante pentru viaa unei celule

eucariote.
V 4.2. Descriei structura i proprietile unui bistrat lipidic.
V 4.3. Descriei asimetria membranei plasmatice n relaie cu componentele sale
majore: proteine, lipide i glucide.
V 4.4. De ce este important fluiditatea membranar pentru o celul?
V 4.5. Cum pot avea cele doua fee ale bistratului lipidic o sarcin ionic diferit?
V 4.6. Cum sunt proteinele aranjate ntr-o membran? Care este diferena ntre o
protein transmembranar i o protein periferic:
V 4.7. Comparai i artai diferenele ntre cele patru ci fundamentale diferite pe
care le poate urma o substan pentru a traversa membrana plasmatic.
V 4.8. Descriei dou ci care utilizeaz energie pentru a deplasa ioni i solui
contra unui gradient de concentraie.
V 4.9. Care dintre urmtoarele direcii este calea cea mai probabil pentru drumul
unei vezicule n sistemul endomembranar?
a) Golgi lizozomiREmembrana plasmatic; b) tonoplast membrana
plasmaticnveli nuclearRE neted; c) nveli nuclearlizozomiGolgimembrana
plasmatic; d) RE rugosveziculeGolgimembrana plasmatic; e)
REcloroplastemitocondriemembrana plasmatic.
V 4.10. n celulele animale, enzimele hidrolitice sunt mpachetate pentru a preveni
distrugerea general a componentelor celulare. Care dintre urmtoarele organite sunt
implicate n aceast compartimentare?
a) cloroplast; b) lizozom; c) vacuola central; d) peroxizom; e) glioxizom
V 4. 11. Care sunt rolurile reticulului endoplasmatic?
V 4.12. Care dintre urmtoarele structuri nu este un component a sistemului
endomembranar?
a) reticulul endoplasmatic; b) vezicule de transport; c) mitocondria; d) nveliul nuclear;
e) aparatul Golgi.
V 4.13. Care tip celular ar putea asigura cea mai bun oportunitate de a studia
lizozomii?
a) celulele musculare; b) celulele nervoase; c) celule albe fagocitare; d) celulele
frunzelor unei plante; e) celulele bacteriene.
V 4.14. Unde este localizat ATP sintaza ntr-o celula vegetal?
a) membrana tilacoid; b) membrana plasmatic; c) membrana mitocondrial
intern; d) A i C; e) A, B i C
V 4.15. Care dintre urmtoarele afirmaii descriu cel mai bine relaiile dintre
fotosinteza i respiraie?
a) respiraia este opusul cii biochimice a fotosintezei; b) fotosinteza stocheaz
energia n molecule organice complexe, n timp ce respiraia le elibereaz; c) Fotosinteza
are loc numai la plante, n timp ce respiraia are loc numai la animale; d) moleculele de
ATP sunt produse n fotosintez i utilizate n respiraie; e) Respiraia este un proces
anabolic, iar fotosinteza un proces catabolic.
V 4.16. Care dintre urmtoarele perechi este greit?
a) nucleol ARN ribozomal; b) nucleu replicarea ADN; c) lizozomi sinteza
proteica; d) membrana celulara bistrat lipidic; e) citoschelet microtubuli
V 4.17. n ce etap a mitozei sunt fotografiai cromozomii pentru prepararea unui
cariotip ?
a) profaza; b) metafaza; c) anafaza; d) telofaza; e) interfaza
V 4.18. O celula eucariot care pierde telomeraza va:
a) fi incapabil de a prelua ADN din mediu de cultur; b) fi incapabil de a identifica
i corecta nucleotidele greite n catenele de ADN fiice; c) expune o reducere gradual a
lungimi cromozomiale cu fiecare ciclu de replicare; d) are un potenial crescut de a deveni
canceroas; e) ncorporeaz o nucleotid extern pentru fiecare fragment Okazaki
adugat.
V 4.19. Ce se poate ntmpla dac o celul este incapabil s produc proteine
histonice:
a) acolo va fi o cantitate crescut de ADN satelit produs n timpul centrifugrii; b)
ADN celular nu poate fi mpachetat n nucleii si; c) fibrele fusului de diviziune nu se vor
forma n timpul profazei; d) amplificarea altor gene proteice va compensa scderea
cantitii proteice n celul; e) pseudogenele vor fi transcrise pentru a compensa scderea
cantitii proteice n celul.
V 4.20. Care este diferena dintre un centromer i un kinetocor
V 4.21. Multe organisme eucariote au un genom mai mare dect o necesit
complexitatea sa. Cum explicai acest paradox?
V 4.22. Dac numrul haploid de cromozomi la om este 23 i cantitatea haploid de
ADN este 1C, cai cromozomi exist n urmtoarele stadii: metafaza mitotic, profaza I i
anafaza I a meiozei, profaza II i anafaza II a meiozei? Cte cromatide exist n fiecare
dintre aceste stadii? Dar cantitatea de ADN?
V 4.23. Unitatea de baz a condensrii cromatinei este:
a) fibra de cromatin de 30 nm b) niveluri succesive de ADN suprarsucit; c) mai
multe filamente suprarsucite; d) nucleozomul, entitate structural n care ADN este
rsucit n jurul unui octamer de histone; e) domeniul buclat.
V 4.24. Care din urmtoarele afirmaii este adevrat?
a) heterocromatina este compus din ADN, n timp ce eucromatina este format din
ADN i ARN; b) heterocromatina i eucromatina sunt ntlnite n nucleu; c)
heterocromatina este format din cromatin nalt condensat, n timp ce eucromatina este
reprezentat din cromatin mai puin compact; d) eucromatina nu este transcris, n timp
ce heterocromatina este transcris; e) numai eucromatina este vizibil la microscopul
optic.
V 4.25. care sunt consecinele compactrii materialului genetic pentru evoluia lumii
vii?

4.9. Bibliografie
Masson, Paris 1997, Chapitre 4:Membrane et fonctionnement de la cellule
Book Contents
Elsevier, 2004, Chapitres 17-24: Biogense, changes et fonctions des systmes
membranaires cellulaires
edition, ASM Press, 2004, Part III: Cell structure and function
Boeck Universit, 1998, Chapitre 8: Les systmes membranaires du cytoplasme:
structure, fonction et circulation dans les membranes
Roberts, P. Walter, Garland Publishing Inc, 2004, Chapter 11, 12,13, 14: Membrane
structure, transport, energy generation in mitochondria and chloroplast, intracellular
compartments and transport
Edition, Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 8,9: Membrane structure and
function; Cellular respiration: Harvesting Chemical Energy
Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 8,9: Membrane structure and function;
Cellular respiration: Harvesting Chemical Energy
Darnell, 4th ed, 2000, Freeman and Company, Chapter 5: Biomembranes and Cell
Architecture
24. http://www.cu.lu/labext/rcms/cppe/cellfr.html, CPPE Module S2: Biologie cellulaire
28. www.emc.maricopa.edu/faculty/farabee/BIOBK/BioBook, On-Line Biology Book:
biologie : Biologie cellulaire, Cycle cellulaire
Comunicare celular i semnalizare
COMUNICARE CELULAR I SEMNALIZARE
pag
Cuprins 194
Introducere 195
5.1. Moleculele implicate n semnalizare 197
5.1.1. Liganzi i receptori 199
5.1.2. Clasificare hormoni 200
5.1.3. Mesageri secundari 202
5.2. Receptorii membranei plasmatice 204
5.2.1. Receptori cuplai cu proteinele G 205
5.2.1.1 Proteinele G 205
5.2.1.2. Adenilat ciclaza 208
5.2.1.3. Fosfolipaza C 209
5.2.2. Receptorii care formeaz canale de sodiu i potasiu 210
5.2.3. Receptorii cu activitate enzimatic intrinsec 211
5.3. Receptorii citoplasmici i nucleari 212
5. 4. Rspunsuri i comentarii la testele de autoevaluare 215

Introducere
n acestei uniti este examinat modul n care celulele comunic prin

intermediul moleculelor de semnalizarea extracelular. Aceste substane sunt
sintetizate, eliberate de ctre celule semnalizatoare i produc un rspuns specific doar
la nivelul celulelor int care prezint receptori pentru moleculele de semnalizare. Un
numr mare de substane chimice, inclusiv molecule mici (derivai ai aminoacizilor,
acetilcoline, etc), peptide i proteine sunt utilizate n acest tip de comunicare celul-
celul. Produii extracelulari sintetizai de ctre celulele de semnalizare pot difuza la
distan sau pot fi transportai n snge, permind celulelor s comunice chiar dac
ele se afl la distane mai mari.
Capitolul ncepe cu o discuie general privind moleculele de semnalizare,
receptorii de suprafa celular i rolul moleculelor intracelulare n transducerea
semnalului, adic procesul de convertire a semnalelor extracelulare n rspunsuri
celulare. Ulterior sunt examinate detaliile privind unele ci de traducere a semnalului,
ci implicate n reglarea diferitelor aspecte ale metabolismului, funciei i dezvoltrii
celulare. Anumite semnale genereaz modificri la nivelul expresiei genice,
morfologiei celulare i micrii celulei prin modelarea activitii diferiilor factori de
transcriere, prin afectarea diferitelor contacte ntre celule i ntre celule i matrixul
extracelular, i prin remodelarea citoscheletului.
Obiective generale
Dezvoltarea capacitii de identificarea a principalelor molecule

implicate n semnalizare la nivel celular i intercelular
nelegerea noiunii de receptor celular
Obiective specifice
9 Cunoatei tipurile de molecule implicate n semnalizare;
9 Identificai tipurile de semnalizare i s caracterizai tipurile de

mesageri implicate n realizarea fiecruia (hormoni, mesageri
secundari, etc.)
9 Difereniai noiunile de ligand i receptor
9 Identificai, clasificai i caracterizai tipurile de receptori (receptori din

membrana plasmatic i receptori citoplasmatici i nucleari)


prezentate.
corect.
testului v recomandm s reluai ntregul material si apoi s
rspunsul lor fiind evident. Alte teste necesit o bun integrare a
cunotinelor obinute i necesit parcurgerea ntregii uniti.
Enunurile testelor au i ele rolul lor n fixarea cunotinelor i n
formarea unei viziuni de ansamblu asupra materiei.

Gradul de dobndire a conceptelor i procedurilor prezentate
din lucrarea final sunt de acelai tip ca i testele de autoevaluare
pe care le vei rezolva pe parcursul parcurgerii materialului unitii 5.
parcurs. Cele 20 de ntrebri sunt echivalente i vor fi notat cu 2,5
acumula 50 de puncte
Materialul conine 2 cadre suplimentare i 13 figuri care nu
sunt opionale i prezint informaii menite s ntregeasc sau s
clarifice noiunile tiinifice prezentate. Un rezultat bun la lucrarea de
verificare este clar condiionat de parcurgerea cu responsabilitate a
testelor de autoevaluare, cadrelor i de nelegerea figurilor.

5.1. Moleculele Nici o celul nu supravieuiete izolat. n toate organismele

implicate n multicelulare supravieuirea depinde de o complex reea de
semnalizare comunicare intercelular, care coordoneaz creterea, diferenierea
i metabolismul numrului mare de celule din diferitele esuturi i
organe.
Comunicarea fizic este asigurat de ctre membranele
plasmatice adiacente sub forma diverselor jonciuni. Cu ajutorul lor,
celulele fac schimburi diverse de molecule, adopt forme bine
definite i menin coeziunea tisular. Celulele comunic mai ales
prin molecule extracelulare, de semnalizare. Aceste molecule
specifice sunt produse de celule specializate i dup eliberarea lor
recunosc i se fixeaz la celulele int unde induc un rspuns
precis.
Comunicarea celular prin semnalizare are mai multe etape:
i) sinteza i eliberarea de ctre celulele secretoare a
moleculelor semnal;
ii) transportul semnalului pn la celula int;
iii) recunoaterea i fixarea semnalului la un receptor al
celulei int;
iv) transmiterea semnalului de ctre receptor la efectorii
citoplasmatici i uneori nucleari;
v) oprirea semnalului i rspunsului celular la semnal.
n multe microorganisme eucariote (drojdii, mucegaiuri i
protozoare), o serie de molecule secretate coordoneaz agregarea
organismelor unicelulare pentru mperechere sexual sau
difereniere n anumite condiii de mediu. Substanele chimice
eliberate de un organism, care pot influena comportamentul sau
expresia genic a altor organisme aparinnd aceleiai specii se
numesc feromoni.
La animale i plante sunt mult mai importante moleculele de
semnalizare extracelular, care controleaz procesele metabolice
de la nivelul celulelor, creterea esuturilor, sinteza i secreia
proteinelor, i compoziia fluidelor intra- i extracelulare. Aceast
unitate trateaz n special semnalizarea celul-celul, n cazul
eucariotelor unicelulare precum i la o varietate de eucariote
superioare, n special mamifere.
Transmiterea semnalelor este ndeplinit ntre o celul

secretoare i una receptoare, distana ntre ele fiind foarte variabil.
Se disting urmtoarele tipuri de semnalizare:
Semnalizarea endocrin. La animale, celulele endocrine,
specializate, care constituie o gland, secret hormoni, transportai
pe cale sangvin pn la celulele int (Figura 5.1a).
Semnalizarea paracrin. Celulele secret mediatori chimici,
att de repede degradai sau captai nct raza lor de aciune se
limiteaz numai la celulele nvecinate. Cel mai cunoscut exemplu
este cel al transmiterii influxului nervos de ctre neurotransmitori
ntre dou celule nervoase sau ntre o celula nervoas i o celul
muscular (Figura 5.1b).

Semnalizarea autocrin. Moleculele sintetizate i eliberate

de ctre celul acioneaz chiar pe receptorii si (Figura 5.1c).
Astfel acioneaz o serie de factori de cretere. Acest tip de
semnalizare se ntlnete mai ales la celule tumorale, deoarece n
multe dintre ele are loc o supraproducie i eliberare a factorilor de
cretere care stimuleaz proliferarea neadecvat i necontrolat
att a lor ct i a celulelor netumorale adiacente. Acest proces
poate conduce la formarea masei tumorale.
Figura 5.1. Tipuri de semnalizare (prelucrat dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th
edition, 2000)
Cadru 5.1. De reinut

1. Anumite molecule de semnalizare pot aciona
dup mai multe tipuri de semnalizare n acelai timp;
2. Unele molecule nu sunt eliberate de celulele
productoare. Ele acioneaz de la nivelul membranei
plasmatice, unde sunt prezente, printr-un contact direct
ntre celule;
3. Datorit variabilitii chimice a moleculelor de
semnalizare se folosete termenul de ligand.
TA 5.1. Care sunt etapele comunicrii celulare prin semnalizare?
TA 5.2. Semnalizarea paracrin: a) implic celule secretoare care acioneaz

asupra celulelor din proximitatea lor prin eliberarea unor mediatori chimici eliberai
n fluidul extracelular; b) necesit celule nervoase care s elibereze
neurotransmitori n interiorul sinapselor; c) apare numai la celule de drojdii
paracrine; d) s-a evideniat la plante dar nu i la animale; implic factorii de
complementare care se ataeaz la celulele int determinnd producerea de noi
celule paracrine.
TA 5.3. Care sunt principalele modaliti cunoscute de transmitere a

semnalelor?

5.1.1. Liganzi i Unii compui pot aciona prin 2 sau chiar 3 tipuri de
receptori semnalizare celul-celul (Figura 5.1d). O serie de derivai ai
aminoacizilor, precum epinefrina, funcioneaz att ca
neurotransmitori (semnalizare paracrin), ct i ca hormoni
sistemici (semnalizare endocrin). Unii hormoni proteici, precum
factorul de cretere epidermic (Epidermal Growth Factor EGF),
sunt sintetizai ca parte extracelular a unei proteine de membran;
EGF membranar se poate lega i trimite semnalul la o celul
adiacent prin contact direct. Dac se realizeaz proteoliza i
eliberarea lui EGF secretat, acesta poate aciona asupra celulelor
aflate la distan, prin intermediul semnalizrii endocrine.
Liganzii pot fi proteine, peptide, molecule mici derivate de la

aminoacizi sau hormoni lipofili cum sunt steroizii.
Ligandul poate fi hidrofob, capabil s traverseze membrana
plasmatic i s recunoasc inte moleculare citoplasmatice sau
receptori. Liganzii hidrofili acioneaz numai prin interacie cu
receptorii membranei plasmatice.
Rspunsul celular la un semnal extern depinde de fixarea
ligandului la receptorul membranar sau nuclear al celulei int.
Receptorul membranar are trei domenii: extern, transmembranar i
citoplasmatic. Fixarea ligandului la partea extern induce o
schimbare de conformaie care se propag prin domeniul
transmembranar pn la domeniul intern citoplasmatic unde va fi
catalizat o cascad de reacii care determin obinerea unui
rspuns celular la semnal i care poart numele de transducerea
semnalului.
Acelai ligand poate provoca rspunsuri diferite dac se
leag la receptori diferii din aceeai familie. Astfel, acetilcolina
crete contracia celulei musculare striate, scade contracia celulei
miocardice i antreneaz secreia enzimelor digestive din celulele
pancreatice. Invers, doi liganzi diferii care interacioneaz cu
receptori diferii pot declana acelai rspuns. Adrenalina i
glucagonul prin fixarea la receptorii lor hepatici induc degradarea
glicogenului la glucoza. Aceasta demonstreaz ca rspunsul celular
la un semnal este definit nu doar de interacia ligand-receptor, dar
i de efectorul care va fi modificat la final. Fiecare tip celular posed
propriile caracteristici de combinare ligand-receptor care definesc
gradul de sensibilitate, i deci rspunsul.
Uneori ligandul are numai funcia de a se fixa la receptor, i
de a-i modifica conformaia astfel nct s i manifeste prezena
intracelular.
Localizarea receptorilor depinde de natura ligandului. Cnd
ligandul este hidrofil (hormoni peptidici), receptorul este o protein
din membrana plasmatic. Dac este hidrofob (hormoni steroizi)
difuzeaz prin membrana plasmatica i acioneaz pe receptori
localizai

5.1.2. Clasificare Majoritatea hormonilor intr n una din cele trei mari
hormoni categorii: i) molecule lipofile de dimensiuni mici, care difuzeaz prin
membrana plasmatic i interacioneaz cu receptorii intracelulari;
ii) molecule hidrofile; iii) molecule lipofile, care se leag la receptorii
suprafeei celulare (Figura 5.2). Recent s-a demonstrat c oxidul
nitric este un reglator cheie ce controleaz multe rspunsuri
celulare.
Hormoni lipofili cu receptori intracelulari. Muli hormoni
solubili n lipide difuzeaz prin membrana plasmatic i
interacioneaz cu receptori de la nivelul citosolului sau nucleului.
Complexele hormon-receptor care rezult se leag la regiunile de
control ale transcripiei afectnd astfel expresia anumitor gene
(Figura 5.2a). Hormonii de acest tip includ: steroizii (cortizol,
progesteron, estradiol i testosteron), tiroxina i acidul retinoic.
Figura 5.2. Clasificarea hormonilor n funcie de solubilitate i de localizarea

receptorilor (prelucrat dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th edition, 2000)
TA 5.4. O molecul mic care se leag specific la una mai mare poate fi
definit ca: a) transductor de semnal; b) ligand; c) polimer; d) compus implicat n
semnalizarea hormonal; e) marcator al terminrii recepiei unui semnal.

Toi steroizi sunt sintetizai pornind de la colesterol i au

schelet chimic similar. Dup ce trec de membrana plasmatic
hormonii steroizi interacioneaz cu receptorii intracelulari, formnd
complexe care pot crete sau descrete rata de transcriere a
anumitor gene prin intermediul activrii factorilor de transcripie. De
asemenea, aceste complexe receptor-hormon steroid pot afecta i
stabilitatea anumitor molecule de ARNm. Steroizii i pstreaz
aciunea timp de ore sau zile i influeneaz creterea i
diferenierea anumitor esuturi. La mamifere estrogenii stimuleaz
creterea peretelui uterin n procesul de pregtire pentru
implantarea embrionului.
Tiroxina (tetraiodotironina) i triiodotironina principalii
compui iodai ai organismului sunt formai la nivelul tiroidei n
urma proteolizei intracelulare a tirogobulinei proteice iodate i
ulterior sunt eliberai imediat n snge. Aceti doi hormoni tiroidieni
stimuleaz expresia multor enzime citosolice, care catalizeaz
catabolismul glucozei, grsimilor i proteinelor, de asemenea crete
expresia enzimelor mitocondriale, care catalizeaz fosforilarea
oxidativ.
Retinoizii sunt lipide poliizoprenoidice, derivate de la retinol
(vitamina A). Ei prezint o serie de funcii reglatorii n diverse
procese celulare. Retinoizii regleaz proliferarea, diferenierea i
moartea celular i au numeroase aplicaii clinice. n timpul
dezvoltrii, retinoizii acioneaz ca mediatori locali ai interaciei
celul-celul.
Hormonii solubili n ap cu receptori de suprafa celular.
Deoarece moleculele solubile n ap nu pot difuza prin membrana
plasmatic, ele se leag la receptorii de suprafa celular. Aceast
clas mare de compui este format din dou grupuri:
1) hormoni peptidici, precum insulina, factori de cretere i
glucagon, care au dimensiuni de la civa aminoacizi pn la
structuri proteice mai complicate;
2) molecule de dimensiuni mici ncrcate cu sarcin
electric, precum epinefrina i histamina, derivai din aminoacizi i
care funcioneaz ca hormoni i neurotransmitori. Muli hormoni
solubili n ap induc o modificare n activitatea uneia sau mai multor
enzime prezente le nivelul celulei int. n acest caz efectele
hormonilor legai la suprafa sunt de obicei imediate, ns persist
pentru o perioad scurt de timp. Aceste semnale pot induce
modificri ale expresiei genice, care pot persista pentru cteva ore
sau zile. n alte cazuri, de exemplu diferenierea celular,
moleculele de semnalizare solubile n ap pot determina modificri
ireversibile.
Hormoni lipofili cu receptori de suprafa celular. Printre
acetia se numr i prostaglandinele. Exist cel puin 16
prostaglandine diferite, care sunt clasificate n 9 clase distincte,
denumite de la PGA la PGI.

Prostaglandinele fac parte dintr-o familie mare de hormoni

cu 20 de atomi de carbon, numii eicosanoide. Pe lng
prostaglandine aceast familie include i prostacicline, tromboxani
i leucotriene.
Eicosanoidele sunt sintetizate dintr-un precursor comun,
care este acidul arahidonic.
Multe prostaglandine acioneaz ca mediatori ai semnalizrii
autocrine sau paracrine i sunt degradate n apropierea situsului lor
de sintez. Ele moduleaz rspunsurile diferiilor hormoni i pot
avea efecte profunde asupra multor procese celulare. Anumite
prostaglandine determin agregarea plachetelor sangvine i
aderarea lor la pereii vaselor de snge. Deoarece plachetele au un
rol foarte important n formarea cheagului de snge,
prostaglandinele influeneaz evoluia bolilor vasculare i
vindecarea rnilor. Aspirina inhib ireversibil sinteza acestor
molecule. Alte prostaglandine iniiaz contracia celulelor musculare
netede; ele se acumuleaz la nivelul uterului n perioada de natere
a copilului, avnd un rol important n inducerea contraciilor uterine.
Studiile recente demonstreaz c o familie de steroizi
vegetali, numii brassinosteroizi regleaz multe aspecte ale
dezvoltrii. Aceti compui lipofili acioneaz prin intermediul
receptorilor de suprafa celular, asemntor prostaglandinelor.
5.1.3. Mesageri Interacia ligand-receptor induce producerea de molecule

secundari intracelulare care transport mesajul pn la efectorul final.
Legarea liganzilor la muli dintre receptorii de suprafa celular
duce la creterea sau descreterea pe termen scurt a concentraiei
moleculelor de semnalizare intracelulare, denumite mesageri
secundari: AMPc (Adenozin monofosfat ciclic), GMPc (Guanozin
monofosfat ciclic), 1,2 diacil glicerol (DAG), inozitol 1,4,5 trifosfat
(IP3) i ionii de calciu (Figura 5.3). Concentraia variabil a uneia
sau a mai multor componente de acest tip afecteaz rapid sau/i
puternic (pozitiv sau negativ) funcionarea proteinelor int.
Moleculele hidrofile produc efecte foarte rapide pentru c
acioneaz prin modificarea activitii uneia sau mai multor enzime
preexistente. Liganzii hidrofobi au rspunsuri celulare mai lente
pentru ca au drept int expresia unei gene i deci producerea unei
proteine. De asemenea, modific funcii celulare cum sunt secreia
de proteine sau proliferarea i diferenierea celular. n
transducerea semnalului, receptorul de suprafa se comport ca
amplificator de semnal. O singura molecul de ligand fixat
produce sute de molecule de mesageri intracelulari. Funciile
metabolice controlate de mesagerii secundari indui de hormoni
includ preluarea i utilizarea glucozei, stocarea i mobilizarea
grsimilor i secreia produilor celulari.

Aceste molecule intracelulare pot controla proliferarea,

diferenierea i supravieuirea celulelor, n special prin reglarea
transcrierii genelor specifice. ndeprtarea (sau degradarea)
ligandului sau mesagerului secundar sau inactivarea receptorului
de legare a ligandului poate determina terminarea rspunsului
celular ca urmare a unui semnal extracelular.
Figura 5.3. Mesageri secundari receptorilor (prelucrat dup Molecular Cell Biology,
TA 5.5. Testosteronul funcioneaz n interiorul unei celule prin:

a) activnd un receptor semnal care activeaz proteinele care formeaz
canale ionice; b) legndu-se la o protein receptoare care intr n nucleu i
activeaz gene specifice; c) acionnd ca un receptor de semnal steroid care
activeaz proteinele care formeaz canale ionice; d) devenind mesager secundar
care inhib adenilat ciclaza; e) coordonnd o cascad de fosforilare care
determin creterea metabolismului colesterolului.
TA 5.6. De obicei procesul de transducere a semnalului ncepe n momentul
n care: a) un semnal chimic este eliberat de o celul alfa; b) o molecul semnal
modific un receptor proteic ntr-un anume mod; c) celulele int se divid; d) al
treilea stagiu de semnalizare celular este realizat; e) hormonul este eliberat din
gland n snge.
TA 5.7. Care dintre urmtorii compui este utilizat ca mesager secundar:
a) ionii de calciu; b) AMPc; c) oxidul de azot; d) a i b) e) a, b i c.
TA 5.8. Factorii de transcripie: a) regleaz sinteza ADN la rspuns la un
semnal; b) transcriu ATP n AMPc; c) iniiaz rspunsul epinefrinei n celulele
animale; d) controleaz care gene vor fi transcrise n molecule de ARNm; e) sunt
necesari pentru reglarea procesului de sintez a proteinelor n citoplasm.
TA 5.9. Majoritatea moleculelor semnal: a) se leag la situsuri specifice ale
receptorilor proteici membranari; b) sunt solubili n ap; c) sunt capabili s treac
prin membrana plasmatic prin transport activ; d) a i b; e) a, b i c.

Mecanismele de transducere a semnalului sunt clasificate n

patru categorii n funcie de receptorii membranari. Anumii
receptori sunt cuplai cu proteinele G, unii formeaz canale ionice i
alii posed activitate enzimatic intrinsec.
Legarea ligandului la unii dintre aceti receptori determin
formarea mesagerului secundar, n timp ce legarea ligandului la ali
receptori nu implic acest fenomen. Prin convenie aceti receptori
au fost mprii n patru clase:
5.2. Receptorii i) receptori cuplai cu proteine G: n urma legrii ligandului
este activat o protein G, care la rndul ei activeaz sau inhib o
membranei
enzim care genereaz un anumit mesager secundar sau
plasmatice moduleaz un canal ionic, determinnd o modificare a potenialului
de membran. Exemplu: receptorii pentru epinefrin, serotonin
sau glucagon;
ii) receptori canal ionic: legarea ligandului induce modificarea
conformaional a receptorului, determinnd intrarea n celul a
diferiilor ioni; rezultatul acestui flux afecteaz potenialul electric
de-a lungul membranei celulare. Exemplu: receptorul acetilcolinei
de la nivelul jonciunii nerv muchi;
iii) receptorii legai cu tirozin kinaze: acestora le lipsete
activitatea catalitic intrinsec, dar legarea ligandului stimuleaz
formarea unui receptor dimer, care ulterior interacioneaz i
activeaz una sau mai multe protein-tirozin kinaze citosolice. n
aceast categorie intr receptorii multor citochine, a interferonilor
sau ai factorilor de cretere.
iv) receptori cu activitate enzimatic intrinsec: o serie de
tipuri de receptori prezint activitate catalitic intrinsec, care este
activat n urma legrii ligandului. De exemplu, unii receptori
activai catalizeaz conversia GTP la GMPc, ali acioneaz ca
protein fosfataze, ndeprtnd gruprile fosfat de la nivelul resturilor
de fosfotirozin ale substratelor proteice i astfel, modificndu-le
activitatea. Aici se ncadreaz receptorii pentru insulin i pentru
unii factori de cretere. n majoritatea cazurilor ligandul se leag
sub form de dimer determinnd dimerizarea receptorului i
activarea funciei sale kinazice. Aceti receptori adesea numii
receptori serin/treonin kinazici sau receptori tirozin kinazici i
autofosforileaz resturile de aminoacizi din domeniul citosolic i de
asemenea, pot fosforila diferite substrate proteice.
TA 5.10. Mecanismele de semnalizare folosite de ctre hormonii steroizi i

receptorii care formeaz canale ionice sunt ambele foarte simple i au puine
componente. Pot acestea s determine amplificarea semnalului iniial. Dac da,
dai rspunsul sub forma unui eseu de maxim 100 de cuvinte.

5.2.1. Receptori Interacia liganzilor cu anumii receptori de la suprafaa

cuplai cu celulei activeaz proteine de transducere a semnalului, proteine G,
proteinele G care la rndul lor activeaz enzime care produc mesageri
secundari. Mai muli receptori diferii transmit semnalul prin
intermediul proteinelor G (Figura 5.4). Aceti receptori au
caracteristici comune:
i) 7domenii transmembranare organizate n -helix;
ii) o extremitate N-terminal extracelular i una C-terminal
intracelular;
iii) o bucl intracelular reprezentat de segmentele
transmembranare 5 i 6 care interacioneaz cu proteinele G.
Figura 5.4. Receptori cuplai cu proteinele G (prelucrat dup Molecular Cell Biology,
5.2.1.1 Proteinele Proteinele G (Guanine nucleotide-binding proteins) sunt

G proteine care pot s lege GDP i GTP i GTP-aze capabile s
degradeze GTP la GDP. Aceast proprietate le confer capacitatea
de a regla diverse procese ca sinteza proteic, asamblarea
citoscheletului i transducerea semnalelor. Proteinele G implicate n
transducerea semnalului au o subunitate (G), care fixeaz GDP
sau GTP, i alte dou subuniti G i G ale cror funcii sunt mai
puin cunoscute. Activarea unui receptor, prin legarea unui ligand
specific, provoac eliberarea GDP, fixarea GTP i disocierea
subunitii G-GTP de celelalte. G-GTP se separ de receptor i
se va fixa i activa alte proteine responsabile de producerea
mesagerilor secundari. Legarea GTP este efemer, GTP este rapid
hidrolizat la GDP care inactiveaz subunitatea G-GTP. Aceasta se
va reforma cu subunitile i din proteina G iniial asociat cu
receptorul cu apte domenii transmembranare (Figura 5.5).
Proteinele G au rol important n amplificarea semnalului. Un
singur complex ligand-receptor produce mai multe zeci de G-GTP.
Celelalte reacii n cascada particip n grade diferite la amplificarea
semnalului transmis de un receptor.
Proteinele G sunt puternic implicate i n terminarea
semnalului care trebuie s se produc cnd concentraia ligandului
scade. Cnd subunitatea G fixeaz GTP, este favorizat
disocierea ligand-receptor. G-GTP nu fixeaz GTP dect dac
receptorul a fixat ligandul.

Orice diminuare a concentraiei ligandului va avea drept

consecin diminuarea transduciei semnalului (Figura 5.6).
Figura 5.5. Subunitile proteinelor G i activarea acestora(prelucrat dup

Figura 5.6. Sistemul proteinelor G prelucrat dup

http://www.cbc.umn.edu/~mwd/courses.html
TA 5.11. Receptorii cuplai cu proteinele G, activeaz aceste proteine prin

reducerea puterii de legare a GDP, care este apoi nlocuit cu GTP, care este
prezent n citosol n concentraii mult mai mari dect GDP. Ce consecine poate
avea o mutaie la nivelul subunitii alfa a proteinelor G care are drept efect
reducerea drastic a afinitii pentru GDP fr efecte asupra celei fa de GTP?

Cadru 5.2. AMPc, mesager secundar

Adenozin 3,5 monofosfat ciclic (AMPc) este una din moleculele utilizate
ca mesageri secundari n transducerea semnalelor. Ea rezult din transformarea
poziiei 3 a ribozei din a doua legatur ester fosfat a ATP de ctre o enzima
membranar, adenilat ciclaza (Figura 5.7). Domeniul catalitic al acestei enzime
este citosolic. El devine funcional prin cuplarea cu subunitatea a proteinei G,
activat prin legarea GTP (G-GTP). O singur molecul de G-GTP cuplat cu
adenilat ciclaza duce la sinteza a numeroase molecule de AMPc.
AMPc se poate lega la proteine specifice i le activeaz funcia de

fosforilare (kinazele). De exemplu, protein kinaza A (protein kinaza dependent
de AMPc) este activat alosteric prin legarea AMPc. Fixarea AMPc pe cele dou
subuniti de reglare ale enzimei duce le eliberarea celor dou subuniti
catalitice, care devin astfel active. Enzima devine acum capabil s fosforileze
alte proteine cum este cazul cascadei de metabolizare a glicogenului la glucoz
(Figura 5.8).
AMPc are o durat scurt de via, este rapid degradat de o
fosfodiesteraz la AMP (Adenozin monofosfat), molecul care nu este mesager
secundar. Degradarea rapid a AMPc asigur o terminare rapid a transducerii
semnalului cnd ligandul nu mai este fixat pe receptorul su (Figura 5.7).
TA 5.12. Explicai de ce AMPc trebuie s fie degradat rapid ntr-o celul

pentru a permite o semnalizare rapid?
TA 5.13. Receptorii membranari care fosforileaz anumii aminoacizi
specifici din propria structur i din proteine substrat sunt:
a) receptori care nu sunt prezeni la om; b) receptori tirozin-kinazici; c) o
clas de receptori de semnalizare GTP-G; d) asociai cu diferite boli provocate
de bacterii la oameni; e) importani pentru factorii de conjugare la drojdii care
conin aminoacizi.
TA 5.14. Amplificarea unui semnal chimic apare n momentul n care: a)
un receptor din membrana plasmatic activeaz diferite molecule de proteine G
pe toat durata legrii unei molecule semnal la acesta; b) moleculele de AMPc
activeaz o molecul de protein kinaz nainte de a fi transformat n AMP; c)
activitile fosforilazice i fosfatazice sunt echilibrate; d) numeroi ioni de calciu
trec prin canalul format n urma legrii ligandului; e) a i d sunt adevrate.

5.2.1.2. Adenilat n unul din mecanismele de transducere a semnalului,

ciclaza complexul receptor-ligand activeaz, prin intermediul proteinei G, o
adenilat ciclaz care formeaz mesagerul secundar AMPc pornind
de la ATP. Acesta activeaz n cascad mai multe alte proteine i
produce rspunsul celular la ligand. Aciunea AMPc se face prin
intermediul protein kinazelor care modific, la rndul lor, activitatea
a numeroase alte enzime, prin fosforilare. Fosforilarea proteinelor
se face n cascad, fiecare etap fiind asigurat de produsul etapei
precedente. Finalul semnalului este asigurat de o fosfodiesteraz
care convertete AMPc n AMP. Anumite celule moduleaz efectul
semnalului prin secreia AMPc n mediul extracelular.
Un exemplu l constituie adrenalina care se fixeaz la
receptorul su hepatic i induce o degradare a glicogenului la
glucoz (Figura 5.8). n alte esuturi, interacia adrenalin-receptor
provoac rspunsuri celulare ca: creterea contraciei celulelor
miocardice i relaxarea celulelor musculare netede. Toate aceste
rspunsuri au o origine comun i anume creterea concentraiei
intracelulare de AMPc.
Figura 5.8. Cascada de degradare a glicogenului indus de proteine G, adenilat

ciclaza i AMPc (prelucrat dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th ed., 2000)
TA 5.15. Enzima glicogen fosforilaza este direct activat de: a) AMPc; b)

GTP; c) IP3; d) ionii de calciu; e) protein kinaze.

5.2.1.3. Alt mecanism de transducere a semnalului are loc prin

Fosfolipaza C intermediul receptorilor cuplai cu fosfolipaza C i proteine G.
Interacia ligand-receptor activeaz proteina G, care la rndul ei
activeaz o enzim membranar, fosfolipaza C. Enzima
hidrolizeaz un fosfolipid, fosfatidilinozitol 4,5 bifosfat (PIP2) n doi
mesageri secundari, DAG, membranar, i IP3 (Inozitol trifosfat),
citosolic. Acesta difuzeaz n citoplasm i se fixeaz la receptorul
su de pe suprafaa membranei RE. Receptorul este o proteina cu
care odat cu fixarea ligandului, IP3, se organizeaz ntr-un canal
de calciu. Calciul astfel eliberat din RE contribuie la creterea
concentraiei sale citosolice. Aceast modificare are ca efect o
intrare masiv a calciului extracelular prin numeroase canale ale
membranei plasmatice. Fenomenul este numit intrarea calciului
capacitiv (Figura 5.9). Oprirea eliberrii calciului n citoplasma este
asigurat de o hidroliz rapid i masiv de IP3 n inozitol 1,4
bifosfat. Calciul citosolic se fixeaz la o protein mic, calmodulina
i prelungete, sub aceast form, semnalul prin modificarea
activitii a numeroase enzime. Creterea concentraiei de calciu
provoac secreia insulinei din celulele pancreatice, contracia
celulelor musculare striate i degradarea glicogenului n celulele
hepatice
DAG, provenit din hidroliza PIP2, activeaz o familie de
kinaze numit protein kinaze C (PKC). Aceste proteine, citosolice,
se ataeaz pe faa citoplasmatic a membranei cnd concentraia
calciului intracelular crete. n contact cu DAG, prezent permanent
n membran, este posibil activarea PKC. Proteinele active
fosforileaz numeroase alte proteine ducnd la rspunsuri celulare
variate.
Figura 5.9. Mecanism de transducere a semnalului prin proteine G, fosfolipaza

C, calciu i AMPc (prelucrat dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th ed., 2000

5.2.2. Receptorii Exemplul cel mai cunoscut este cel al receptorului

care formeaz acetilcolinei de la nivelul sinapsei (jonciune ntre doi neuroni). Este
canale de sodiu i un canal ionic cu 5 subuniti proteice, fiecare cu 4 domenii
potasiu transmembranare. Cnd un semnal electric de la neuronul
presinaptic ajunge la sinaps, el induce eliberarea unui
neurotransmitor, acetilcolina (Figura 5.10).
Fixarea acetilcolinei la receptorul post-sinaptic produce
modificri conformaionale ale acestuia care se comport acum ca
un canal ionic care permite afluxul rapid de sodiu n celul, ceea ce
depolarizeaz membrana. Depolarizarea iniiaz un semnal
electric, potenial de aciune, care va fi propagat rapid pn la
sinapsa urmtoare unde fenomenul se va repeta.
Figura 5.10. Receptorul acetilcolinei de la nivelul sinapsei (prelucrat dup

TA 5.16. De ce credei c celulele utilizeaz rezervele de calciu intracelular

chiar dac concentraia calciului extracelular este nelimitat?
TA 5.17: Care dintre urmtoarele afirmaii sunt corecte? Explicai rspunsul

dumneavoastr.
a) moleculele semnal de acetilcolin au efecte diferite pe diferite tipuri
celulare ntr-un organism animal i se leag la diferii receptori din diferite tipuri
celulare;
b) dup eliberare din celul acetilcolina are o durat de via mare
deoarece trebuie s ajung la celule int din ntreg organismul;
c) IP3 este produs direct din PIP2, inozitol fosfolipidul din care este derivat,
fr adugarea unei alte grupri fosfat;
d) calmodulina regleaz concentraia intracelular a Ca2+;

5.2.3. Receptorii cu Toi receptorii din aceast categorie au un situs extracelular

activitate pentru legarea unui ligand, un singur domeniu transmembranar -
enzimatic helix, i un domeniu citosolic, de mrime variabil, cu activitate
intrinsec enzimatic intrinsec stimulat de fixarea ligandului. Receptorii
factorilor de cretere au un domeniu citoplasmatic cu funcie protein
tirozin kinazic specific. Fixarea ligandului la domeniul extracelular
duce la dimerizare. Domeniul catalitic al fiecrui monomer va
fosforila resturi de tirozina particulare din domeniul citosolic al
celuilalt monomer, autofosforilare. Fosfotirozinele receptorului
activat au rol primordial n transducerea semnalului ctre efectorii
citoplasmatici (Figura 5.11). Anumii receptori sunt deja sub forma
dimer, dar nu se autofosforileaz dect dup legarea ligandului. O
dat fosforilat, receptorul este capabil s fosforileze, la rndul lui,
proteine cheie din metabolismul celular.
ANP (ANP = Atrial Natriuretic Peptide), un hormon care
controleaz volumul sangvin, are un receptor al crui domeniu
citoplasmatic are activitate guanilat ciclazic. Acesta hidrolizeaz
GTP la GMPc imediat dup fixarea ligandului.
Anumii receptori au un domeniu catalitic cu activitate
fosfatazic specific iar alii sunt protein kinaze specifice pentru
resturile Serin/Treonin (Ser/Thr).
Figura 5.11. Transducerea semnalului prin intermediul activitii tirozin

kinazice a receptorului (prelucrat dup http://www.infobiogen.fr/deambulum/index.php)

5.3. Receptorii O serie de rspunsuri celulare induse de ctre hormoni

citoplasmatici i rezult din efectele acestora asupra expresiei genelor. Hormonii
nucleari steroizi se leag la receptorii intracelulari i constituie cel mai
simplu exemplu de reglare a expresiei genice de ctre hormoni
extracelulari. O serie de hormoni solubili n ap, factori de cretere
i neurotransmitori, se leag la receptorii de suprafa celular i
determin de asemenea schimbri pe termen lung ale
comportamentului celular ceea ce presupune n mod clar modificri
ale expresiei genice.
Mecanismele prin care legarea unui ligand la receptorul
suprafeei celulare induce modificri ale expresiei genice au fost
studiate folosind o serie de sisteme model. n cele mai multe din
cazuri asocierea ligandului cu receptorul su stimuleaz protein
kinaze care fosforileaz, direct sau indirect, resturile de serin,
treonin sau tirozin de la nivelul anumitor factori de transcriere.
Cele mai utilizate abordri experimentale n studiul acestor
ci de semnalizare constau n identificarea genei a crei expresie
este indus (sau represat), elucidarea secvenelor ADN reglatoare
care acioneaz n cis la nivelul genei respective i identificarea i
clonarea proteinelor nrudite care se leag specific la aceste
secvene de ADN.
O cale de semnalizare (suprafa celular-nucleu) elucidat
prin aceast abordare o reprezint legarea interferonului la
receptorii si de la suprafaa celular. Aceasta induce activarea
unei protein tirozin-kinaze citosolice, JAK (din englez Just
Another Kinase). JAK activat fosforileaz Stat1, un membru al
familiei STAT de factori de transcriere (din englez signal
transducers and activators of transcription). Ca urmare a
fosforilrii, Stat 1 dimerizeaz i este translocat la nivelul genelor
int din nucleu. n mod similar, factorii de transcriere citosolici
Smad (mobili) sunt activai de ctre receptori Ser/Thr kinazici care
leag factori de cretere ce aparin superfamiliei TGF (din englez
Transforming Growth Factor ).
n alte cazuri, cum sunt cile MAP kinazelor (protein kinaze
activate de mitogene), kinaze citosolice activate i translocate n
nucleu modific direct factorii de transcriere. Kinazele citosolice
activate regleaz stabilitatea i localizarea subcelular a factorilor
de transcriere.
Cel mai cunoscut exemplu este cel al steroizilor, hormoni

care se fixeaz direct la receptori proteici citoplasmatici. Datorit
caracterului hidrofob, aceste molecule sunt adesea transportate de
la un esut la altul de ctre proteinele serice. n contact cu celula
int, hormonul difuzeaz prin membrana plasmatic pentru a se
fixa la receptorul nuclear.

Complexul ligand-receptor migreaz ctre o regiune

specific a ADN, controleaz transcripia i regleaz expresia uneia
sau mai multor gene. Capacitatea genelor de a rspunde la un
semnal este asigurat de secvene scurte din structura ADN numite
HRE (HRE, Hormone Response Elements).
Figura 5.12. Mecanisme de transducie a semnalului prin intermediul liganzilor

hidrofobi (prelucrat dup http://www.infobiogen.fr/deambulum/index.php)
Compararea secvenei n aminoacizi a receptorilor mai

multor hormoni care acioneaz prin intermediul HRE relev
existena unor regiuni peptidice nalt conservate. De exemplu,
unele dintre aceste regiuni au o structur particular cu 8 cisteine
(8 Cys) care definesc situsuri de legare pentru Zinc, formnd
structuri particulare numite degete Zn (n englez Zn fingers).
Asupra expresiei genelor pot s acioneze chiar i liganzii care
recunosc receptori de la suprafaa celulei. AMPc, mesager
secundar produs de activarea adenilat ciclazei, activeaz, prin
protein kinaza A, anumite gene graie secvenelor ADN numite CRE
(AMPc Response Elements) care sunt situsuri de fixare ale
factorilor transcripionali.
CREB coreleaz semnalizarea prin AMPc cu transcrierea

n celulele mamiferelor, o cretere a nivelului citosolic de
AMPc stimuleaz expresia mai multor gene. De exemplu, o
concentraie crescut de AMPc induce producerea somatostatinei,
o peptid care inhib eliberarea diferiilor hormoni n anumite celule
endocrine i a unui numr de enzime implicate n convertirea
compuilor cu trei atomi de carbon n glucoz (gluconeogenez) la
nivelul celulelor hepatice. Toate genele reglate de AMPc conin o
secven ADN care acioneaz n cis, numit element de rspuns la
AMPc (cAMP-response element CRE). La aceast secven se
leag forma fosforilat a factorului de transcriere numit CREB
(CRE binding protein).

Legarea diferiilor neurotransmitori i hormoni la receptorii

cuplai cu proteina G activeaz adenilat ciclaza, ceea ce conduce la
creterea nivelului de AMPc i activarea ulterioar a subunitii
catalitice a protein kinazei dependente de AMPc (cAPK).
Subunitatea catalitic va fi translocat la nivelul nucleului, unde va
fosforila proteine CREB n poziia serina-133.
Proteina CREB fosforilat se leag la genele int care conin
elementul CRE i interacioneaz i cu un coactivator, numit
CBP/P300. Acesta leag proteina CREB de factorii de transcriere
bazali, i permit stimularea transcrierii (Figura 5.13).
Figura 5.13. CREB coreleaz semnalizarea prin AMPc cu transcrierea
TA 5.18. Activarea receptorilor tirozin kinazici este caracterizat de:

a) agregare i fosforilare; b) legarea IP3; c) formarea calmodulinei; d)
hidroliza GTP; e) modificarea conformaiei proteinelor canal.
TA 5.19. Moleculele semnal liposolubile, cum este hormonul numit
testosteron, traverseaz membrana tuturor celulelor dar afecteaz numai
activitatea celulelor int deoarece: a) numai celulele int rein fragmente
adecvate de ADN; b) receptorii intracelulari sunt prezeni numai n celulele int; c)
majoritii celulelor le lipsete cromozomul Y necesar procesului; d) numai celulele
int posed enzime citosolice care realizeaz transducerea testosteronului; e)
numai celulele int sun capabile ca sub aciunea testosteronului s iniieze
cascada de fosforilare care conduce la activarea factorilor de transcripie.
TA 5.20. Care dintre urmtoarele afirmaii privind receptorii citoplasmatici i
nucleari este fals: a) hormonii steroizi se leag la receptorii intracelulari i
constituie cel mai simplu exemplu de reglare a expresiei genice de ctre hormoni
extracelulari; b) asocierea ligandului cu receptorul su stimuleaz protein kinaze
care fosforileaz, direct sau indirect, resturile de serin, treonin sau tirozin de la
nivelul anumitor factori de transcriere; c) fixarea acetilcolinei la receptorul post-
sinaptic produce modificri conformaionale care determin deschiderea unui
canal ionic care permite afluxul rapid de sodiu n celul i depolarizeaz
membrana; d) AMPc activeaz, prin protein kinaza A, anumite gene datorit
prezenei secvenelor CRE din structura ADN, care sunt situsuri de fixare ale
factorilor transcripionali.

5. Rspunsuri i comentarii la testele de autoevaluare
R TA 5.1. Comunicarea celular prin semnalizare are urmtoarele etape principale:

i) sinteza i eliberarea de ctre celulele secretoare a moleculelor semnal; ii) transportul
semnalului pn la celula int; iii) recunoaterea i fixarea semnalului la un receptor al
celulei int; iv) transmiterea semnalului de ctre receptor la efectorii citoplasmatici i
uneori nucleari; v) oprirea semnalului i rspunsului celular la semnal.
R TA 5.2: a);
R TA 5.3. Principalele modaliti de semnalizare sunt: endocrin, paracrin i
autocrin
R TA 5.5: b; R TA 5.6:b; R TA 5.7: d; R TA 5.8: d; R TA 5.9: d;
R TA 5.10. n cazul receptorului pentru steroizi, se formeaz un complex steroid-
receptor care se leag la ADN i activeaz transcripia. n acest caz nu poate fi vorba de
amplificare ntre legarea ligandului i activarea transcripiei. Activarea se produce mai
trziu deoarece n urma transcripiei se vor forma mai multe copii de ARNm care fiecare
este tradus n proteine. Pentru receptorii care formeaz canale ionice, un singur canal
ionic permite ptrunderea a mii de ioni n timpul deschiderii sale. Este etap de amplificare
n acest tip de sistem de semnalizare.
R TA 5.11. O protein G mutant va putea fi aproape constitutiv activat
(permanent activat) deoarece GDP disociaz spontan i permite GTP s se lege chiar i
n absena unui receptor cuplat cu proteine G activat.
RTA 5.12. Rapida scindare a AMPc menine nivele sczute ale acestui compus. Cu
ct nivelul AMPc este mai sczut, cu att crete activitatea adenilat ciclazei care produce
noi molecule de AMPc i implicit transmiterea semnalului este mai rapid.
R TA 5.13: b; R TA 5.14: a; R TA 5.15: e;
R TA 5.16. S ne reamintim c membrana plasmatic reprezint numai o mic
suprafa n comparaie cu suprafaa membranelor organitelor celulare. Reticulul
endoplasmatic este mult mai abundent i bine reprezentat n ntreaga celul sub forma
unei reele membranare. Aceast distribuie permite eliberarea omogen a ionilor de calciu
n celul. Procesul este important deoarece eliberarea rapid a ionilor de calciu din citosol
de ctre pompele de calciu, mpiedic difuzia calciului pe distane semnificative n citosol.
R TA 5.17: a) adevrat. De exemplu, acetilcolina descrete btile inimii prin
legarea la receptorii celulari cuplai cu proteinele G din structura muchiului cardiac i
stimuleaz contraciile celulelor muchiului scheletic prin legarea la un receptor pentru
acetilcolin diferit, care determin deschiderea unor canale ionice; b) fals. Acetilcolina are
o durat de via foarte scurt i i exercit efectele local. Este adevrat c consecinele
prelungirii duratei sale de via sunt dezastruoase. Compuii care inhib enzima acetilcolin
esteraza, care n mod normal scindeaz acetilcolina la nivelul sinapselor nerv-muchi
sunt extrem de toxici; c) adevrat: PIP2 conine trei grupri fosfat iar IP3 este generat
printr-o simpl reacie de hidroliz; d) fals. Calmodulina sesizeaz dar nu regleaz nivelele
intracelulare de Ca2+.
R TA 5.18: a; R TA 5.19: b; R TA 5.20: c.

V 5.1. Cum difer modalitile de semnalizare paracrin de semnalizarea

endocrin?
V 5.2. Cum difer semnalizarea prin molecule semnal hidrofobe de tipul hormonilor
steroizi de semnalizarea prin molecule semnal hidrofile de tipul hormonilor proteici?
V 5.3. Explicai cum creterea AMPc n celule poate activa expresia genic.
V 5.4. Ce se poate ntmpla cu celulele int dintr-un organism animal care sunt
lipsite de receptori pentru substanele reglatoare locale:
a) pot compensa deficiena prin primirea de nutrieni prin intermediul unui factor; b)
pot dezvolta n schimb rspunsuri normale la neurotransmitori; c) se pot divide dar nu
vor ajunge niciodat la mrimea normal; d) ne putem atepta s nu se multiplice ca
rspuns la factorii de cretere eliberai de celelalte celule nconjurtoare; e) hormonii nu
vor fi capabili s interacioneze cu celulele int.
V 5.5. Din perspectiva celulelor care primesc mesajul, cele trei stadii ale
semnalizrii sunt:
a) paracrin, local i sinaptic; b) recepionarea semnalului, transducerea semnalului
i rspunsul celular; c) recepionarea semnalului, dezintegrarea nucleului, i generarea de
noi celule; d) alfa, beta i gama; e) recepionarea semnalului, rspunsul celular, i
diviziunea celular
V 5.6. Receptorii de tip canal ionic:
a) sunt importani n sistemul nervos; b) determin schimbri ale concentraiilor
celulare de sodiu i calciu; c) se deschid i se nchid ca rspuns la un semnal chimic; d) a
i b sunt corecte; e) a, b i c sunt corecte.
V. 5.7. Care dintre urmtoarele sisteme semnal folosesc receptorii legai cu
proteine G?
a) epinefrina; b) neurotransmitorii; c) adrenalina; d) a i c; e) a, b i c.
V. 5.8. Sistemul de semnalizare al unei celule animale lipsite de capacitatea de a
produce GTP:
a) nu va fi capabil s activeze i s inactiveze proteinele G de pe faa
citoplasmatic a membranei plasmatice; b) poate activa numai sistemul epinefrinei; c) a
fost descoperit de ctre Sutherland, care a ctigat premiul Nobel pentru aceast
cercetare; d) va fi capabil s realizeze recepia i transducia dar nu va putea rspunde la
semnal.
V 5.9. Denumirea general a unei enzime care transfer grupri fosfat de pe ATP
pe o protein este:
a) fosforilaz; b) fosfataz; c) protein kinaz; d) ATP-az; e) proteaz
V 5.10. Receptorii de pe membrana plasmatic pentru factorii de cretere sunt cel
mai adesea:
a) canale ionice determinate de fixarea ligandului; b) receptori cuplai cu proteine G;
c) AMPc; d) receptori tirozin-kinazici; e) neurotransmitori.
V. 5.11. n general, un semnal transmis prin intermediul fosforilrii unor serii de
proteine:
a) determin modificri conformaionale pentru fiecare dintre aceste proteine; b)
necesit legarea unui hormon la un receptor citosolic; c) nu poate s se produc la drojdii
deoarece acestora le lipsesc protein-fosfatazele; d) au ntotdeauna drept rezultat activarea
enzimelor din celula int; e) permit celulelor int s i modifice forma i n consecin i
activitatea.
V. 5.12. Calea de transducere a semnalului care la animale folosete epinefrin:
a) implic activarea scindrii glicogenului n celulele ficatului i ale muchilor
scheletici; b) este un exemplu clasic al semnalizrii sinaptice; c) este un exemplu clasic al
semnalizrii paracrine; d) opereaz independent de receptorii hormonali n celulele int;

e) nici una dintre aceste afirmaii nu este caracteristic sistemului epinefrinei.
V. 5.13. Care dintre urmtorii compui nu este considerat un mesager secundar?
a) AMPc; b) GTP; c) ionii de calciu; d) diacilglicerolul; e) inozitoltrifosfatul.
V 5.14. Toate afirmaiile de mai jos sunt adevrate cu excepia:
a) semnalizarea celular a fost un eveniment timpuriu n evoluia vieii; b)
majoritatea receptorilor de semnalizare sunt legai de membrana extern a anvelopei
nucleare; c) fosforilarea proteinelor este un mecanism major al transduciei semnalului; d)
ca rspuns la un semnal, celula i poate altera activitile prin modificri la nivelul
activitii citosolice sau a transcripiei ARN.
V 5.15. Proteinele G sunt activate cnd ________ se ataeaz la ele.
a) AMPc; b) ATP; c) GDP; d) protein kinaza; e) GTP.
V 5.16. ATP este transformat n AMPc sub directa aciune a:
a) protein kinazei; b) proteinei G; c) fosfolipazei C; d) moleculelor receptor tirozin-
kinazice; e) adenilat ciclazei.
V 5.17. La ce tip de receptor, legarea unei molecule semnal determin o modificare
a potenialului membranar:
a) receptorul tirozin-kinazic; b) receptorii cuplai cu proteinele G; c) dimerul tirozin-
kinazic fosforilat; d) receptori care formeaz canale ionice la cuplarea cu ligandul;
receptorii intracelulari.
V. 5.18. Care dintre urmtoarele afirmaii privind receptorii cu activitate enzimatic
intrinsec este fals:
a) toi receptorii din aceast categorie au un situs extracelular pentru legarea unui
ligand, un singur domeniu transmembranar -helix, i un domeniu citosolic, de mrime
variabil, cu activitate enzimatic intrinsec stimulat de fixarea ligandului;
b) fixarea acetilcolinei la receptorul post-sinaptic produce modificri conformaionale
care determin deschiderea unui canal ionic care permite afluxul rapid de sodiu n celul i
depolarizeaz membrana;
c) fixarea ligandului la domeniul extracelular duce la dimerizare;
d) prin procesul de autofosforilare, domeniul catalitic al fiecrui monomer va
fosforila resturi de tirozin particulare din domeniul citosolic al celuilalt monomer;
e) anumii receptori au un domeniu catalitic cu activitate fosfatazic specific iar alii
sunt protein kinaze specifice pentru resturile Serin/Treonin (Ser/Thr).
V. 5.19. Care dintre urmtoarele afirmaii privind receptorii citoplasmatici i nucleari
este adevrat:
a) receptorii membranari i intracelulari sunt prezeni numai pe i n celulele int; b)
hormonii steroizi se leag la receptorii intracelulari i constituie cel mai simplu exemplu de
reglare a expresiei genice; c) numai n celulele int hormonii de tipul testosteronului
iniiaz cascade de fosforilare care determin activarea factorilor de transcripie; d) n
contact cu celula int, hormonul difuzeaz prin membrana plasmatic pentru a se fixa la
receptor nuclear; e) a, b i d sunt corecte.
V 5.20. Cascadele de fosforilare care implic participarea unei serii de protein
kinaze sunt necesare pentru transducerea semnalului deoarece:
a) sunt specie specifici; b) conduc ntotdeauna la acelai rspuns celular; c)
amplific semnalul iniial de mai multe ori; d) determin efecte deosebite asupra
fosfatazelor; e) numrul de molecule folosite este mic i fix.

5.6. Bibliografie

Masson, Paris 1997, Chapitre 5: Communication cellulaire et signaux
Book Contents
12: Biologie cellulaire, Thomas D. Pollard, William C. Earnshaw, edition francaise, Elsevier,
2004, Chapitre 25, 26, 27, 28, 29: Reception et transduction des informations environnementales
edition, ASM Press, 2004, Chapter 13: Cell Signaling
Boeck Universit, 1998, Chapitre 15 : La transmission cellulaire : communication entre les
cellules et leur environnment
Roberts, P. Walter, Garland Publishing Inc, 2004, Chapter 15: Cell communication.
Edition, Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 11: Cell communication
Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 11: Cell communication
Darnell, 4th ed, 2000, Freeman and Company, Chapter 13: Signaling at the Cell Surface
cellulaire
Biology Book:
30. www.med.univ-angers.fr, Licence de Biologie Cellulaire Signalisation
Intracellulaire et Adressage des Protines

De la celul la organism
DE LA CELUL LA ORGANISM
pag
Cuprins 219
Introducere 220
6.1. Adeziunea i mobilitatea celular 223
6.1.1. Caderinele 226
6.1.2.2. CAM din superfamilia imunoglobulinelor 227
6.1.3. Rolul moleculelor de adeziune n coeziunea tisular 228
6.1.3.1. Jonciunile nguste 229
6.1.3.2. Jonciunile de ancorare i desmozomii 229
6.1.3.3. Jonciunile de comunicare (gap) 230
6.1.3.4. Bazele moleculare ale mobilitii celulare 231
6.1.4. Adeziune celul-matrice 231
6.1.4.1. Colagenul i elastina 233
6.1.4.2. Proteoglicanii 235
6.1.4.3. Glicoproteinele extracelulare de adeziune 235
6.2. Celulele primelor stadii embrionare 238
6.2.1. Fecundarea 238
6.2.2. Segmentarea i reorganizarea celulelor embrionare 243
6.3. Bazele moleculare ale diferenierii celulare 244
6.3.1. Organizarea tipic a unei gene eucariote 244
6.3.2. Promotori, stimulatori, inhibitori 246
6.3.3. Diferenierea rezult din expresia n cascada a genelor 248
6.3.4. Morfogeneza 248
6.3.5. Organogeneza 249
6.4. Evenimente celulare specializate 251
6.4.1. Celule stem 251
6.4.2. Celulele imunitare 253
6.4.3. Neuronii i sistemul nervos 256
6.4.4. Celule tumorale i cancer 258
6. 7. Bibliografie 267
BIBLIOGRAFIE MINIMAL 268

Introducere
n cadrul acestui uniti de studiu vei putea explora conceptele care

privesc ntelegerea formrii unui organism i definirea procesului de
dezvoltare.
Prin mitoze succesive, toate celulele unui organism sunt formate

dintr-o celula unic, adesea numit ou sau zigot, rezultat din fuziunea
(fecundarea) a dou celule specializate, gameii, produi de cei doi prini.
Se formeaz un embrion, care trece prin diferite stadii de dezvoltare i care
dup natere se dezvolt i este supus unor procese de modificare
permanente care nu se opresc dect la moartea organismului.
Diversitatea i complexitatea morfologic a plantelor i animalelelor

sunt exemple ale faptului c organismul ca ntreg este mai important dect
suma prilor individuale. Formarea diferitelor tipuri celulare ale unui
organism constituie diferenierea i mecanismele care conduc celulele la
organizarea lor pentru a da natere esuturilor i organelor se numesc
morfogenez i cretere. Aceste procese asigur funciile majore ale tuturor
organismelor vii, i permit la maturitate reproducerea noilor indivizi ai
speciei.
Aceast unitate de studiu stabilete i clarific noiunile privind

interacia celula-mediu, i trece n revist moleculele de aderen implicate
n interaciile celul-celul, celul-matrice extracelular i componentele
matricei extracelulare.
De asemenea sunt descrise celulele primelor stadii embrionare,

diferenele care exist ntre linia somatic i cea germinal cu accent pe
bazele moleculare ale diferenierii celulare.
O atenie deosebit se acord i evenimentelor celulare specializate

care determin formarea celulelor imunitare i ale sistemului nervos.
Unitatea se ncheie cu prezentarea ctorva aspecte interesante privind
procesele de tumorigenez.

Obiective generale
Utilizarea noiunilor privind structura i funcia diferitelor

compartimente celulare n nelegerea complexitii structurale i
funcionale a organismelor;
Formarea capacitii de nelegere a morfogenezei individuale

pe baza conceptelor diferenierii celulare;
nelegerea individualitii funcionale a organismelor ca

urmare a derulrii evenimentelor celulare specializate;
Obiective specifice

9 Identificai moleculele implicate n procesele de adeziune i mobilitate
celular;
9 Cunoatei importana interaciilor celul-celul i celul-matrice n: i)

migrarea celulelor imunitare; ii) cursul asamblrii esuturilor; iii) n
meninerea integritii tisulare.
9 Utilizai cunotinele privind bazele moleculare ale diferenierii celulare

pentru nelegerea proceselor de morfogenez i organogenez.
9 Integrai importana evenimentelor celulare specializate pentru

funcionarea normal a organismelor i pentru interaciile acestora cu
mediul nconjurtor


prezentate.
corect.
Dac nu reuii s rezolvai cu succes testele de autoevaluare
n momentul ntlnirii lor pe parcursul parcurgerii testului v
recomandm s reluai ntregul material si apoi s revenii asupra
rezolvrii testelor. Unele dintre testele de autoevaluare sunt foarte
simple i direct corelate cu textul parcurs, rspunsul lor fiind evident.
Alte teste necesit o bun integrare a cunotinelor obinute i
necesit parcurgerea ntregii uniti. Enunurile testelor au i ele
rolul lor n fixarea cunotinelor i n formarea unei viziuni de
ansamblu asupra materiei.

Gradul de de nelegere a conceptelor i noiunilor prezentate
din lucrarea final sunt de acelai tip cu testele de autoevaluarea pe
care le vei rezolva pe parcursul parcurgerii materialului unitii 6.
parcurs. Cele 40 de ntrebri sunt echivalente i vor fi notate cu 2,5
Materialul conine patru cadre suplimentare i 21 de figuri
care nu sunt opionale i prezint informaii menite s ntregeasc
sau s clarifice noiunile tiinifice prezentate. Un rezultat bun la
nelegerea figurilor.

6.1. Adeziunea i Majoritatea celulele animalelor pluricelulare sunt organizate

mobilitatea n structuri cooperative numite esuturi, care la rndul lor se
asociaz n diverse combinaii n uniti funcionale de dimensiuni
celular
mari numite organe.
Frecvent, celule aparinnd unui anumit tip celular se agreg

i formeaz un esut, pentru a coopera n ndeplinirea unei funcii
comune: muchii se contract; esutul nervos conduce un impuls
electric; esutul xilem n plante transport ap. Diferite esuturi se
pot organiza n formarea unui organ n scopul realizrii unor funcii
specifice. De exemplu, muchii, valvele i vasele sangvine ale inimii
funcioneaz corelat pentru a pompa sngele prin organism.
Funciile coordonate ale multor tipuri de celule din esuturi, ct i a
multiplelor esuturi specializate, permit organismului s: i)
funcioneze ca un tot unitar; ii) se mite; iii) metabolizeze hrana; iv)
se reproduc; v) desfoare alte activiti eseniale.
Diversitatea i complexitatea morfologic a plantelor i
animalelor sunt exemple ale faptului c organismul ca ntreg este
mai important dect suma prilor individuale. De exemplu, la
plante, organizarea rdcin tulpin - frunze le permite obinerea
simultan de energie (de la lumina solar) i carbon (din CO2), din
aerul atmosferic, ap i din nutrienii din sol. Proprietile mecanice
distincte ale oaselor tari, ncheieturilor flexibile, i ale muchilor
contractili permit vertebratelor s se mite eficient i s prezinte
dimensiuni substaniale. Straturi de celule epiteliale ataate foarte
compact, pot aciona ca bariere reglabile, cu permeabilitate
selectiv, care permit generarea unor compartimente distincte
chimic i funcional n structura unui organism (exemplu stomacul,
circuitul sangvin). Din acest motiv, ntr-un organism se pot
desfura simultan funcii complementare cum sunt digestia i
sinteza.
De asemenea, compartimentalizarea permite o reglare mai
sofisticat a diverselor funcii biologice. n multe privine, rolul
esuturilor complexe i al organelor ntr-un organism, este analog
cu cel al organitelor i al membranelor ntr-o celul individual.
Asamblarea esuturilor distincte i organizarea lor n organe
este determinat de interacii moleculare, la nivel celular, i nu ar fi
posibile fr expresia, reglat temporal i spaial, a unui panel larg
de molecule de adeziune.
De obicei, celulele esuturilor sunt n contact cu o reea
complex de macromolecule extracelulare secretate: matricea
extracelular. Moleculele de adeziune sunt proteine membranare
specializate crora li se datoreaz aceste interacii. Ele au rol foarte
important n dezvoltarea i integrarea anatomic a esuturilor.

Aceast subunitate de nvare se ocup de definirea

interaciilor celul-mediu i prezint moleculele de adeziune
implicate n conexiunile celul-celul i celul-matrice extracelular.
De asemenea sunt descrise unele dintre componentele matricei
extracelulare.
Celulele dintr-un esut pot adera direct una de cealalt

(adeziune celul-celul) prin intermediul unor proteine membranare
specializate numite molecule de adeziune celular (CAMs Celular
Adhesion Molecules), care adesea se organizeaz sun forma unor
jonciuni celulare specializate (Figura 6.1). Celulele din esuturile
animale ader indirect (adeziune celula-matrix) i la componente
ale matrixului extracelular prin intermediul unor receptori de
adeziune din membrana plasmatic. Aceste dou tipuri de interacii
mediaz agregarea i organizarea celulelor n esuturi distincte i
susin transferul bidirecional al informaiei ntre exteriorul i
interiorul celulei.
Figura 6.1. Model de adeziune celul-celul (prelucrat dup Molecular Cell Biology,
O parte a moleculelor CAM pot fi clasificate n patru mari

familii: caderinele, superfamilia imunoglobulinelor (Ig), integrinele, i
selectinele. n figura 6.2 este prezentat structura schematica a
unora dintre moleculele CAM. Ele sunt formate prin mbinarea mai
multor domenii distincte, unele dintre aceste domenii aparinnd
mai multor tipuri de CAM. O caracteristic a unora dintre aceste
proteine sunt domeniile repetate deoarece se gsesc n mai multe
exemplare n aceeai molecul. Unele din aceste molecule sunt
responsabile de specificitatea de legare caracteristic anumitor
proteine. Mai exist i alte tipuri de proteine implicate n procesul
de adeziune celular n anumite esuturi dar care nu aparin nici
unei clase majore de CAM.

Figura 6.2. Familii majore de molecule de adeziune celular (CAM) i

receptori de adeziune (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece, William Barstow,
Edition, 2002)
th
Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6
Moleculele de adeziune pot fi considerate un fel de receptori,

adic proteine transmembranare capabile s fixeze un ligand. n
general, liganzii care interacioneaz cu moleculele de adeziune
sunt insolubili.
Prin intermediul domeniilor extracelulare, moleculele CAM
mediaz interacii de adeziune ntre celule de acelai tip (adeziune
homotipic) sau ntre celule diferite (adeziune heterotipic). O
molecul CAM poate s se lege de acelai tip de molecul
aparinnd unei celule adiacente (interacie homofilic), sau se
poate lega de o alt clas de molecule CAM (interacie heterofilic).
Moleculele CAM pot fi localizate la nivelul regiunilor membranei
plasmatice care vin n contact cu alte celule, sau pot fi comasate n
regiuni discrete numite jonciuni celulare.
De asemenea, adeziunile celul-celul pot fi strnse i de
durat sau slabe i temporare. De exemplu, adeziunile dintre
celulele nervoase din mduva spinrii sau dintre celulele hepatice
implicate n metabolism sunt foarte strnse. n contrast, ntre
celulele sistemului imunitar din snge se pot manifesta doar
interacii slabe i de scurt durat, permind alunecarea i
trecerea acestora prin peretele vaselor de snge, n timpul unui
rspuns imun.
TA 6.1. Celulele intr n constituia esuturilor i esuturile intr n constituia:

a) organelor; b) membranelor; c) sisteme de organe; d) organite; e) organisme.

Caderinele sunt molecule cheie n procesul de adeziune i

6.1.1. Caderinele
semnalizare celular, i joac un rol critic n diferenierea tisular.
Sunt glicoproteine care leag calciul i asigur o separare spaial
a celulelor dnd form organismului. Exist mai multe tipuri de
caderine. Unele dintre acestea asigur jonciunile de aderen i
situsurile punctiforme de contact dintre celulele bogate n molecule
de aderen. La mamifere, se disting trei tipuri majore de caderine:
i) caderina epitelial (E-caderina);
ii) caderina placentara (P-caderina);
iii) caderina neural (N-caderina) (Tabelul din figura 6.3).
Celulele care posed aceleai caderine pot adera unele la
altele, dar nu ncruciat.
Caderinele au rol important n recunoaterea selectiv a

celulelor embrionare i stabilesc polaritatea lor celular. Sunt
molecule de adeziune a cror catena peptidic traverseaz
membrana o singura dat. Molecula unei caderine are trei pri. n
regiunea proximal (captul amino al proteinei) are un situs de
legare homofilic adic recunoate un situs identic al unei alte
caderine care asigura contactul ntre celule (Figura 6.2). Domeniul
transmembranar este continuat cu cel terminal citoplasmatic care
interacioneaz cu alte tipuri de proteine (cateninele) care asigur
jonciunea ntre reeaua citoplasmatic a microfilamentelor de
actina. n interiorul celulei, caderinele sunt conectate cu
citoscheletul prin doi intermediari: -catenina i dimerul de -actin.
Fixarea la citoschelet consolideaz legarea celula-celul.
Molecula Distribuie celular predominant

Caderina E Preimplantare embrionar, esut ne-neural
Caderina P Trofoblast
Caderina N Sistem nervos, cardiac, muchi scheletic, retin
Figura 6.3. Localizarea moleculelor de caderine majore n esuturile
mamiferelor
Caderinele clasice E, P, N sunt cele mai larg exprimate, n

special n diferenierea timpurie. Straturi de celule epiteliale
polarizate, asemntoare celor care cptuesc intestinul subire i
tubulii renali, conin E-caderina pe suprafaa lor lateral. Dei
E-caderina este concentrat n jonciunile aderente, ea este
prezent pe toat suprafaa lateral se asociaz cu membranele
celulelor adiacente. Creierul exprim cel mai mare numar de
caderine, probabil datorit nevoii de a forma numeroase contacte
specifice celul-celul necesare stabilirii reelei complexe de
conexiuni.

6.1.2.2. CAM din Moleculele de adeziune stau la baza proceselor care permit
circulaia celulelor sistemului imunitar n ansamblul organelor.
superfamilia
Fenomenul de inflamaie localizat la locul lezrii sau infeciei
imunoglobulinelor atrage celulele imunitare competente (monocite, limfocite i
granulocite) necesare declanrii reparaiei tisulare i luptei contra
agenilor patogeni. La nivelul situsului inflamat, leucocitele prsesc
circulaia sangvin i se infiltreaz n esutul inflamat.
Acest proces debuteaz cu o legare slab ntre leucocite i

celulele endoteliale vasculare, legare n care intervin selectinele (E-
i P-selectine) i motive glucidice cu rol de liganzi (Figura 6.2). n
situaii normale, aceast interacie slab, combinat cu fluxul
sangvin, determin o micare de rostogolire a leucocitelor la
suprafaa endoteliului.
La locul inflamaiei, celulele endoteliale elibereaz

chemokine. Aceste molecule au rolul de a imobiliza leucocitele care
se rostogolesc i favorizeaz trecerea lor prin endoteliu. De
asemenea, sunt activate i integrinele (Figura 6.2), alte molecule de
aderen prezente la suprafaa leucocitelor. Integrinele activate se
fixeaz pe alte molecule de adeziune (I-CAM) puternic exprimate
pe endoteliu la situsul inflamaiei i provoac o imobilizare total a
leucocitelor. Prin modificarea formei acestea migreaz ctre
esuturi trecnd prin celulele endoteliale. Ajunse n esut,
leucocitele asigur dou roluri:
1) reconstrucia esutului vtmat;
2) eliminarea agenilor patogeni n caz de leziune aseptic.
Acumularea leucocitelor este rezultatul a dou fenomene:
i) supraexprimarea selectinelor i I-CAM pe celulele
endoteliale;
ii) eliberarea chemokinelor de ctre aceste celule doar la
nivelul situsului inflamat.
Integrinele formeaz o mare familie de molecule de

aderen. Se gsesc sub forma de heterodimeri compui din
subuniti alfa i beta care prezint mai multe tipuri susceptibile de
a forma diverse combinaii. Pe leucocite, dar mai ales pe plachetele
circulante din snge, integrinele se gsesc n stare inactiv (nu sunt
recunoscute de ligand). Activarea lor ar necesit prezena
chemokinelor. n cazul celulelor asamblate n esut, integrinele sunt
mereu ntr-o stare activ i permit o bun ancorare celular.
TA 6.2. Caderinele au rol important n: a) asigurarea funcionalitii celulare prin

transport de ioni; b) recunoaterea selectiv a celulelor embrionare i stabilirea
polaritii lor celulare; c) derularea ciclului celular; d) n asigurarea energiei vitale;
e) activarea chemokinelor.

6.1.3. Rolul Structura tisular este activ susinut de afinitatea dintre

moleculelor de celule. Moleculele de adeziune formeaz baza acestei afiniti
adeziune n specifice. esutul conjunctiv i cel epitelial reprezint dou extreme
coeziunea tisular n care matricea i sistemele de adeziune intercelular au roluri
structurale complet diferite.
n esuturile conjunctive, matricea extracelular este

abundent i suport cea mai mare parte a tensiunilor la care sunt
supuse esuturile. Interaciile ntre celule sunt limitate. n epiteliile
care cptuesc toate cavitile i suprafeele externe ale corpului,
celule sunt strns asociate n straturi. Matricea extracelular este
puin abundent, formnd un strat fin, membrana bazal,
subiacent celulelor. Cea mai mare parte a tensiunilor este
suportat de ctre celule. Graie jonciunilor celulare specializate,
epiteliul i endoteliul sunt suficient de rezistente pentru a constitui o
barier capabil s separe dou compartimente.
TA 6.3. Sub forma unui eseu de 200 de cuvinte realizai o prezentare succint
a moleculelor de adeziune celular prezentate n curs trecnd n revist principalele
roluri ale acestora.
TA 6.4. Care sunt moleculele care sunt eliberate la locul inflamaiei de ctre
celulele endoteliale: a) integrinele; b) caderinele; c) chemokinele; d) selectinele; e)
imunoglobulinele.
TA 6.5. Cte tipuri majore de caderine exist la mamifere i care sunt rolurile
acestora.
Jonciunile intercelulare ale celulelor epiteliale pot fi

clasificate n trei grupuri (dup ultrastructur i funcie):
i) jonciunile nguste sau dense (zonula occludens)
capabile s limiteze permeabilitatea epiteliului (sau endoteliului);
ii) jonciunile de ancorare sau aderente (zonula adherens)
i desmozomii, care permit ataarea mecanic a celulelor ntre ele;
iii) jonciunile de comunicare sau jonciuni gap, care permit
pasajul semnalelor chimice sau electrice ntre celule.
Dintre cele trei tipuri de jonciuni prezente n celulele

epiteliale, dou participa la adeziunea celul-celul, i a treia la
adeziunea celul-matrice. Jonciunile aderente, care conecteaz
membranele laterale ale celulelor epiteliale adiacente, sunt
localizate aproape de suprafaa apical, imediat sub jonciunile
dense. O centur circumfereniar de filamente de actin i
miozin, n complex cu jonciunile aderente, funcioneaz ca un
cablu de tensiune care controleaz forma celulei.

6.1.3.1. Jonciunile Etaneitatea epiteliului i endoteliului este asigurat de

nguste jonciunile nguste sau etane (n englez tight). Ele realizeaz
o apropiere strns i localizat a membranelor celor dou celule
vecine care limiteaz considerabil trecerea soluilor prin spaiul
intercelular (barier paracelular). Aceast barier oblig solutul s
tranziteze stratul celular prin intermediul transportorilor membranari
selectivi (transport transcelular). Jonciunile nu sunt n totalitate
etane. n funcie de tipul de esut, anumii solui pot sau nu s o
traverseze. Jonciunile se formeaz datorit interaciilor homofile
care implic participarea mai multor molecule de adeziune.
Numeroasele posibiliti de combinare ale acestor molecule pot
explica diferenele de permeabilitate ale jonciunilor nguste din
diferite esuturi.
Jonciunile de ancorare sau aderente permit grupurilor de

6.1.3.2. Jonciunile celule s acioneze ca uniti structurale solide n asociere cu
de ancorare i elementele citoscheletului la nivelul anumitor celule. La nivelul
desmozomii jonciunilor de aderare sau zonula adherens sunt situsuri de
legare pentru filamentele de actina. Desmozomii sunt situsuri de
legare pentru filamentele intermediare (de exemplu keratina din
celulele epiteliale). Cele dou tipuri de jonciuni sunt conectate cu
citoscheletul i formeaz centura de aderen circumfereniar n
stratul epitelial (Figura 6.4).
Principalele molecule CAM din jonciunile de ancorare i
dezmozomi aparin familiei caderinelor. La vertebrate i
nevertebrate aceast familie care cuprinde mai mult de 100 de
membri, conine cel puin ase subfamilii.
Celulele epiteliale i alte tipuri, precum celule musculare

netede, sunt legate strns mpreun prin intermediul desmozomilor
punctiformi. Hemidesmozomii, poziionai de obicei pe faa bazal a
celulelor epiteliale, ancoreaz epiteliul la componentele matricei
extracelulare adiacente. Forma i rigiditatea celulei dar i ntregului
epiteliu sunt conferite de mnunchiuri de filamente intermediare,
dispuse paralel cu suprafaa celular sau care strpung i
interconecteaz desmozomii punctiformi i hemidesmozomii.
Aceste jonciuni sunt foarte importante n meninerea integritii
epiteliului pielii.
Cadru 6.2. Importana complexelor de jonciune conectate cu

citoscheletul
n tumorile epiteliale, caderinele i pierd funcia i, celulele care nu mai
conin jonciuni intercelulare solide, sunt mai sensibile la semnalele de
proliferare (formarea de polipi) i devin susceptibile la migrare i deci
invadeaz mai uor alte esuturi (procese metastatice).

Figura 6.4. Jonciunile de ancorare i desmozomii (prelucrat dup

n unele regiuni intercelulare membranele plasmatice sunt

6.1.3.3. Jonciunile conectate punctiform prin canale de comunicare realizate prin
de comunicare cuplarea fizic a mai multor celule. Pot trece ioni i molecule mici
(gap) de tipul metaboliilor (glucide, aminoacizi, nucleotide). Jonciunile
de acest tip sunt importante pentru comunicarea intercelular.
Celulele din esuturi excitabile, cum este muchiul cardiac, sunt
cuplate printr-un flux rapid de ioni care traverseaz jonciunile i
care asigur un rspuns rapid i sincron la stimuli. Jonciunile de
comunicare sunt eseniale i pentru hrnirea celulelor situate la
distan de vasele de snge cum sunt cele din cristalin i din os.
Figura 6.5. Jonciuni de comunicare (prelucrat dup

De asemenea, canalele de comunicare sunt importante n

dezvoltare i difereniere. Capacitatea numai a anumitor celule de a
forma jonciuni de comunicare ntre ele i nu cu alte celule duce la
formarea ansamblurilor celulare cu proprieti fiziologice omogene.
Aceast proprietate este important n coordonarea dezvoltrii
embrionului.

6.1.3.4. Bazele n timpul formrii embrionului, diversele rearanjamente

moleculare ale celulare urmeaz mecanisme de migrare care pun n joc fenomene
mobilitii celulare fizico-chimice bazate pe existena gradientului de concentraie al
moleculelor active i ionilor.
Celulele pot percepe o molecul de interes prin difuzie i se
pot deplasa ctre regiunea unde aceasta prezint un maxim de
concentraie (chimiotactism). Dac molecula de interes este ataat
la o matrice pe care se deplaseaz celula, aceasta folosind
molecula ca punct de ancorare, atunci sensul deplasrii va fi
orientat de ctre concentraia de suprafa. Prin existena
gradientului de ioni se creeaz diferene de potenial care
genereaz cureni electrici. La rndul lor acetia orienteaz
deplasrile celulare. Topografia terenului pe care migreaz
celulele, ghideaz i ea micarea prin formarea prelungirilor
celulare care asigur contactele de aderen care propulseaz
celula nainte printr-un proces de ataare/detaare.
Dac se stabilete contactul cu o alt celul, din aceeai
linie, se produce o oprire a micrii, cel puin n direcia urmat
(inhibiie de contact). Cnd contactul se stabilete n toate direciile,
se observ o oprire complet.
TA 6.6. Cte tipuri de jonciuni pot fi evideniate la nivelul celulelor

epiteliale? Descriei pe scurt rolul fiecrui tip n funcionarea celular.
6.1.4. Adeziune Spaiul extracelular conine un amestec complex de

celul-matrice macromolecule care constituie matricea extracelular. Anumite
celule sunt specializate n producerea matricei extracelulare. De
exemplu, fibroblastele sunt implicate n construcia esuturilor
conjunctive, condroblastele elaboreaz cartilajul hialin,
osteoblastele produc osul i sinoviocitele sunt responsabile de
producerea lichidului sinovial n articulaii.
La animale matricea extracelular susine organizarea
celulelor n esuturi i coordoneaz funciile lor celulare, prin
activarea cilor de semnalizare care controleaz creterea celular,
proliferarea i expresia genic. Multe din funciile matricei necesit
receptori de adeziune transmembranar, care se leag direct de
componentele complexului matricial i care interacioneaz i cu
citoscheletul prin intermediul proteinelor adaptor. Principala clas
de receptori de adeziune care mediaz adeziunea celul-matrice
sunt integrinele. n anumite esuturi non-epiteliale exist i alte tipuri
de molecule care, de asemenea, funcioneaz ca receptori de
adeziune importani. Matricea extracelular este compus dintr-un
ansamblu de polizaharide i proteine.

Polizaharidele sunt glicozaminoglicani (GAG) conectai cu o

protein pentru a forma proteoglicani.
n structura proteic a matricei se disting urmtoarele
componente:
i) o prima grup, constituit din colagen i elastin,
responsabile esenial de structura matricei;
ii) o a doua grup, mai puin abundent , constituit din
fibronectin i laminin. Aceasta este implicat mai ales n
organizarea structurii i adeziunea celul-matrice.
Constituenii se asambleaz ntr-o reea, membrana bazal,
care poate fi lax, reticulat (ca o plas), dac e bogat n colagen,
sau suficient de dens, cu aspectul unui film continuu, dac este
bogat n glicoproteine de aderen.
La animale, epiteliul i majoritatea grupurilor organizate de
celule sunt susinute sau nconjurate de lamina bazal care este
organizat diferit n funcie de esut. n epiteliul columnar sau alt tip
(epiteliul intestinal, piele), lamina bazal este un fundament pe care
st doar o fa a suprafeei celulelor. n alte tipuri tisulare, cum ar fi
muchi sau esutul adipos, lamina bazal nconjoar fiecare celul.
Lamina bazal joac un rol important n regenerarea esuturilor
deteriorate ct i n dezvoltarea embrionar. De exemplu, lamina
bazal ajut aderarea celulelor embrionare n embrionii timpurii
(embrioni de patru pana la opt celule). Astfel, lamina bazal este
important pentru: i) organizarea celulelor n esuturi; ii) procesul de
reparare tisular; iii) ghidarea migrrii celulelor n timpul formrii
esuturilor (Figura 6.6).
Figura 6.6. Lamina bazal este structurat diferit n diferite esuturi (prelucrat dup
Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th edition, 2000)

6.1.4.1. Colagenul i Colagenul

elastina Toate tipurile de colagen reprezint o familie de glicoproteine
bogate n glicin i prolin, organizate n fibrile. Reprezint
aproximativ 50% din proteinele organismului i sunt prezente, n
principal, n matricea pielii, tendoane, oase i vase sangvine.
Colagenul este proteina structural major care formeaz
armturile, conferind rezisten tendoanelor, pielii i organelor
interne. n oase i dini, colagenul formeaz un material structural
mpreun cu srurile minerale (calciu si fosfat).
Dei difer prin anumite caracteristici structurale ct i prin
distribuie tisular, toate tipurile de colagen sunt proteine trimere
formate din trei lanuri polipeptidice, numite lanuri alfa. Toate cele
trei lanuri alfa pot fi identice (homotrimer) sau diferite
(heterotrimer). O molecul trimer de colagen conine unul sau mai
multe segmente trimere, fiecare cu o structur similar de elice
tripl (Figura 6.7). Fiecare catena reprezentat de un lan alfa, este
rsucit ntr-un helix de stnga, iar trei astfel de catene
reprezentate de trei lanuri alfa sunt rsucite mpreun pentru a
forma un triplu helix de dreapta.
Proprietile care individualizeaz fiecare tip de colagen se
refer, n principal, la diferene privind:
i) numrul i lungimea segmentelor triplu helicale;
ii) segmentele care flancheaz sau ntrerup segmentele
triplu helicale, i duc la formarea altor tipuri de structuri
tridimensionale;
iii) modificrile covalente ale lanurilor alfa (ex. hidroxilare,
glicozilare, oxidare, cross-linking).
Figura 6.7. Unitatea structural de baz a colagenului este tripla elice (prelucrat
dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th edition, 2000)

Fibrele de colagen fac membranele bazale solidare cu

esutul conjunctiv subiacent. n matricea cartilajului, colagenul este
prezent (cu acidul hialuronic i condroitin sulfat) i are rolul de a
asigura rezistena la forele de tensiune care se exercit n
articulaii.
Elastina
Buna funcionare a pielii, vaselor sangvine, plmnilor i
tendoanelor, este strns legat de elasticitatea lor, pe lng
rezistena la tensiune. Elasticitatea este asigurat de o reea de
fibre elastice din matricea extracelular. Principalele componente
ale fibrelor elastice sunt elastina i fibrilina. Elastina este o protein
foarte hidrofob. Fibrele sale sunt compuse esenial din segmente
scurte care se asociaz prin puni de lizina la nivelul domeniului
elicoidal al proteinei bogat n acest aminoacid.
TA 6.7. Care dintre urmtoarele afirmaii se coreleaz mai bine cu prezentarea

esuturilor conjunctive? Un esut conjunctiv conine: a) o matrice extracelular care
conine fibre; b) un material suport de tipul condroitin-sulfatului;
c) celule de origine epitelial; d) relativ puine celule i o cantitate mare de matrice
extracelular; e) att a ct i b.
6.1.4.2. Sunt glicoproteine mai particulare n care partea glucidic

Proteoglicanii depete cantitativ partea proteic. Proteoglicanii sunt un subset
de glicoproteine, i conin lanuri de polizarahide specializate,
legate covalent, numite glicozaminoglicani (GAG), care sunt
reprezentate de polimeri lineari, lungi formai din dizaharide
specifice repetitive. Astfel fiecare lan GAG prezint mai multe
sarcini negative. GAG sunt clasificate n mai multe tipuri majore, n
funcie de natura unitii repetitive dizaharidice: heparan sulfat,
condroitin sulfat, dermatan sulfat, keratan sulfat i hialuronan.
Heparin, forma hipersulfatat a heparan sulfatului, produs n
principal de mastocite, joac un rol esenial n reaciile alergice. De
asemenea, este utilizat n medicin ca anticoagulant, datorit
capacitii acesteia de a scinda antitrombina III, un inhibitor natural
al coagulrii.
Biosinteza proteoglicanilor: cu excepia hialuronanului,

majoritatea GAG se gsesc n mod natural n compoziia
proteoglicanilor. Asemntor altor glicoproteine transmembranare,
proteinele centrale din proteoglicani sunt sintetizate n reticulul
endoplasmatic. Lanurile de GAG sunt asamblate, pe miezul
proteic, n aparatul Golgi.

Diversitatea proteoglicanilor. Proteoglicanii constituie un

grup remarcabil de molecule, abundente n matricea extracelular a
tuturor esuturilor, dar sunt exprimai i la nivelul suprafeei celulare.
Secvena i lungimea miezului proteic al proteoglicanilor variaz
considerabil, iar numrul lanurilor GAG ataate variaz de la un
numr redus la peste o sut. Chiar mai mult, un miez proteic poate
fi legat la dou tipuri diferite de lanuri GAG (exemplu, heparan
sulfat i condroitin sulfat), genernd un proteoglican hibrid. Astfel,
greutatea molecular i sarcina electric a unei populaii de
proteoglicani poate fi exprimat doar ca o medie deoarece
compoziia i secvena moleculelor individuale poate varia
considerabil.
Un rol special al proteoglicanilor este s fixeze anumite

citokine (factori de cretere implicai n mitoz) i, prin concentrare
local, s favorizeze interaciile cu receptorii celulelor int. Astfel,
GAG au rol esenial n migrarea celular n timpul morfogenezei i
cicatrizrii tisulare. n cazul unei rni, dup coagularea sngelui,
primul produs care intr n leziune este acidul hialuronic. Acesta
formeaz un schelet care va servi ca suport pentru leucocite i
fibroblaste n reconstruirea unui esut nou.
TA 6.8. n componena matricei extracelulare se disting urmtoarele

componente proteice: a) colagen i elastina, responsabile de structura matricei; b)
fibronectin i laminin implicate n organizarea structurii i adeziunea celul-
matrice; c) albumine i globuline; d) a i b; e) b i c.
6.1.4.3. Sunt molecule mari cu rol important in aranjamentul spaial

Glicoproteinele al celulelor. Se disting fibronectina i laminina.
extracelulare de Fibronectina este una din moleculele de baza n adeziunea
adeziune i mobilitatea celular care contribuie la organizarea matricei
extracelulare. Fibronectina, constituit din dou subuniti i
reunite printr-o punte disulfuric, formeaz o reea fibrilar care
conecteaz celulele la colagen i proteoglicani. Dup sintez,
proteina este eliberat n mediul extracelular sub form globular
solubil. Contactul cu integrinele liniarizeaz molecula, care se
poate asocia, cu omologii si i cu ali compui ai matricei
extracelulare.
Fibronectina are rol important n ghidarea celulelor n
migrarea embrionar la vertebrate n toate stadiile embriogenezei.
La adult, fibronectina are rol central n procesele de cicatrizare.

Laminina este constituentul esenial al membranelor bazale.

Este responsabil de densitatea membranei bazale (formarea unui
film). Ca i fibronectina, conecteaz celulele la colagen i
proteoglicani i are rol n asamblarea matricelor, adeziune i
mobilitate.
Receptorii celulari de adeziune sunt prezeni n membrana

plasmatic a celulelor i asigur fixarea celulei la componentele
matricei extracelulare. Cei mai cunoscui sunt receptorii pentru
fibronectina i glicoziltransferazele.
Receptorii fibronectinei fixeaz la exterior fibronectina i n

interior se leag la proteinele citoscheletice, realiznd un fel de
punte ntre cele dou tipuri de reele moleculare. Sunt numii i
integrine datorit capacitii lor de a forma legturi ntre matricea
extracelular i citoschelet. Fiecare molecul de integrin are dou
subuniti i care se combin diferit pentru a se lega, cu afiniti
variabile, la colagen, laminin i fibronectin. Cuplarea integrinelor
cu liganzii lor este dependent de cationii bivaleni extracelulari
(Mn2+ sau Ca2+).
Glicoziltransferazele: sunt enzime prezente pe membrana

plasmatic ca urmare a unui proces de export care implic RE i
mai ales aparatul Golgi. Aceste enzime ancorate n membranele
golgiene au situsul catalitic orientat ctre lumenul aparatului Golgi.
Sunt implicate n transferul glucidelor activate (UDP-glucoza, GDP-
fucoza, CMP-acid sialic, etc.) pe proteine n curs de modificare
post-translaional (viitoare glicoproteine). Ulterior, acestea pot fi
apoi exportate prin exocitoza veziculelor golgiene la suprafaa
celulei, unde sunt implicate n procesele de recunoatere celular i
adeziune la matricea extracelular. Prin proteoliz, pot fi detaate
de membran i eliberate n mediu unde se comport ca lectine
(proteine care recunosc situsuri glucidice).
S-a constatat c adugarea glucidelor activate n primele

stadii de dezvoltare ar putea perturba profund embriogeneza
normal. De asemenea, studiile au artat c celulele care se
deplaseaz las n urm substrate glicozilate, dovad a rolului
glicoziltransferazelor n mobilitatea celular.
Traficul limfocitelor circulante prin organism, depozitarea lor

ganglionar sau extravazarea ctre focarele de infecie sunt alt
exemplu al rolului glicoziltransferazelor (n acest caz,
fucoziltransferaze) n adeziunea i mobilitatea celular.

Un alt aspect al adeziunii i mobilitii celulare, este rolul

enzimelor numite metaloproteinaze de degradare a matricelor.
Aceste proteaze (colagenaze, gelatinaze, stromelizine, etc.) sunt
secretate de celule i acioneaz direct asupra componenilor
matricei extracelulare pe care o degradeaz parial. Astfel, se
creeaz pasaje pentru naintarea celulelor n micare, sau
detaeaz pri ale esuturilor devenite inutile. n cursul dezvoltrii,
genele acestor enzime i inhibitorilor lor sunt activate ciclic, ceea ce
asigur un control permanent al formrii i degradrii matricelor
extracelulare.
TA 6.9. Ce tipuri de compui secret fibroblastele? a) grsimi; b) condroitin

sulfai; c) fluide interstiiale; d) fosfat de calciu pentru oase; e) proteine pentru
structurarea esutului conjunctiv.
TA 6.10. Pentru care tip de esut animal poate fi caracteristic descrierea

de stratificat columnar? a) conjunctiv; b) muchi striat; c) nervos; d) epitelial; e)
osos.
TA 6.11. Care dintre urmtoarele fibre sunt responsabile pentru rezistena

structural a tendoanelor? a) fibrele de elastin; b) fibrele de fibrin; c) fibrele de
colagen; d) fibrele reticulare; e) fibrele fusului de diviziune.
TA 6.12. Dac v tragei de lobul urechii acesta nu va suferi alungire

deoarece n structura sa sunt prezente: a) fibre de colagen; b) fibre de elastin; c)
fibre reticulare; d) esut adipos; e) proteine fibroase de tipul keratinei.
TA 6.13. Anumite jonciuni intercelulare au forma unor centuri, n timp ce

altele implic zone limitate. Care este relaia ntre aceste dou tipuri de dispunere
celular i funciile acestor jonciuni.
TA 6.14. Prin ce se aseamn din punct de vedere structural matricele

extracelulare din structura esuturilor animale i din peretele celular al plantelor?
TA 6.15. Evideniai diferenele care exist ntre rolul colagenului,

proteoglicanilor i fibronectinei n spaiul extracelular.
TA 6.16. Realizai un eseu privind modalitile prin care o protein de la

suprafaa celulei poate fi implicat n adeziunea dintre celule i n transmiterea de
semnale intermembranare. Putei utiliza i materiale de documentare suplimentare
cursului.

6.2. Celulele Studiul celulei i cunoaterea procesului de dezvoltare sunt

primelor stadii eseniale pentru nelegerea formrii unui organism. Prin mitoze
embrionare succesive, toate celulele unui organism provin dintr-o celula unic,
adesea numit ou sau zigot, rezultat din fuziunea (fecundarea) a
dou celule specializate, gameii, produi de cei doi prini. Se
formeaz un embrion, care trece prin diferite stadii de dezvoltare i
care, dup natere, se dezvolt i este supus unor procese de
modificare permanente care nu se opresc dect la moartea
organismului.
Formarea diferitelor tipuri celulare ale unui organism
constituie procesul de difereniere iar mecanismele care conduc
celulele la organizare n esuturi i organe se numesc morfogenez
i cretere. Aceste procese asigur o funcie major pentru orice
organism viu, aceea de a permite la maturitate reproducerea noilor
indivizi ai speciei. Acest lucru este posibil pentru c n noul
organism se izoleaz o linie celular particular care st la originea
gameilor, linie germinal, diferit de toate celelalte linii celulare,
care stau la originea esuturilor i organelor, desemnate colectiv
prin termenul de linie somatic. Este vorba de o difereniere
celular major n dezvoltarea organismului. Procesul se realizeaz
foarte timpuriu, de la primele diviziuni embrionare ale organismului
i este rezultatul a trei faze care urmeaz fecundrii:
1) faza de segmentare: plecnd de la zigot se formeaz, prin
diviziuni succesive, primele celule embrionare, blastomere,
organizate ntr-o psuedosfer, blastula, care, adesea, are o cavitate
intern sau blastocel;
2) faza de gastrulare: prin rearanjamente i micri diverse,
blastomerele se organizeaz n trei regiuni, foiele germinative sau
esuturile primordiale: ectoderm, mezoderm i endoderm.
3) organogeneza: prin interacii celulare complexe i noi
rearanjamente se formeaz diversele organe.
6.2.1. Fecundarea Prin fuziunea a doi gamei, mascul i femel, fecundarea

asigur combinarea genelor parentale i formarea unui nou
organism. Se disting urmtoarele etape:
i) stabilirea contactului ntre cele dou celule (ovul i
spermatozoid);
ii) ptrunderea spermatozoidului n ovul (ovocit);
iii) fuziunea celor dou cromatide;
iv) stimularea metabolismului zigotului, prealabil dezvoltrii
TA 6.17. Dintre urmtoarele caracteristici una este unic pentru

organismele animale: a) gastrularea; b) structura multicelular; c) reproducerea
sexual; d) sperma flagelat; e) nutriia heterotrof.

Spermatogeneza, producerea de celule spermale este un

proces continuu i prolific care are loc n masculul adult.
Spermatogeneza apare n tubulii seminiferi din testicule. n figura
6.8 este descris procesul n detaliu. Celulele stem care dau natere
la sperm, spermatogoniile, sunt localizate la periferia fiecrui tubul
seminifer. Dezvoltarea celulelor spermale se deplaseaz ctre
lumenul tubulului unde sufer meioz i difereniere. Cele patru
celule rezultate din meioz se transform n celule mature spermale
(Figura 6.8).
Figura 6.8. Spermatogeneza (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece, William

Edition, 2002)
th
Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6
Spermatozoidul posed un nucleu cu n cromozomi, un

sistem de locomoie care asigur deplasarea celulei (flagel) i o
vezicula acrozomial care conine enzime litice (proteaze i
glicozidaze) care diger nveliul extern al ovocitului. Citoplasma sa
redus la extrem conine nc mitocondrii care asigur producerea
energiei necesare deplasrii (Figura 6.9).
Partea motrice a flagelului, axonema este compus din

microtubuli constituii din filamente de tubulin. Acestea sunt
aranjate n nou dublete de microtubuli periferici plus dou centrale
i legate ntre ele printr-o protein de tip histon H1 (nexina).

O alta protein, ataat dubletelor, dineina, este capabil s

converteasc energia chimic a ATP n energie mecanic pentru
deplasare.
Figura 6.9. Structura unei celule spermatice umane (prelucrat dup Biology,
th
N. A. Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6
Edition, 2002)
Ovogeneza reprezint dezvoltarea ovocitelor mature, care

sunt celule ou nefertilizate. Procesul de dezvoltare are loc n ovar
(Figura 6.10). n timpul dezvoltrii embrionului femel, celulele stem
dau natere unui numr mare de ovule care intr n meioz, dar
procesul se oprete n profaza I. Celulele n acest stadiu se numesc
ovocite primare, care rmn n stare staionar n interiorul
foliculelor mici pn la pubertate cnd sunt reactivate de ctre
hormoni. FSH (pentru Follicle stimulating hormone) stimuleaz
periodic un folicul s creasc i s determine ovocitele primare s
definitiveze meioza I i s porneasc meioza II. Meioza se oprete
din nou dnd natere ovocitelor secundare care sunt eliberate n
timpul ovulaiei. La oameni, penetrarea celulei ou de ctre
spermatozoid determin completarea meiozei, ovogeneza fiind
complet numai n acest moment.
ntre ovogenez i spermatogenez exist urmtoarele
diferene majore:
i) n timpul diviziunii meiotice a ovogenezei, citocineza este
inegal, cu aproape toat citoplasma monopolizat de o singur
celul fiic, ovocitul secundar. Aceast celul mare va da natere
ovulului; produii meiozei, celule mai mici numite corpi polari
degenereaz. Aceasta contrasteaz cu spermatogeneza, cnd toi
cei patru produi ai meiozei se dezvolt n spermatozoizi maturi
(Figura 6.10);
ii) n timp ce, celulele din care se formeaz sperma continu
s se divid prin mitoz n timpul vieii masculului, nu la fel se
ntmpl i n cazul ovogenezei femele. La natere un ovar conine
deja toate ovocitele primare pe care le va poseda acel organism;

iii) ovogeneza prezint perioade lungi de ateptare n timp

ce spermatogeneza, care produce sperma matur din celule
precursoare, este un proces continuu.
Figura 6.10. Etapele ovogenezei (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J. B.

Edition, 2002)
th
Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6
Ovulul este mult mai mare dect spermatozoidul

(aproximativ de 10000 de ori) pentru c i conserv citoplasma
unde pstreaz, n rezerv, toi constituenii necesari primelor stadii
de dezvoltare, chiar dac (ca i spermatozoidul) are doar n
cromozomi, ca urmare a reducerii cromatinei n meioz II. La
vertebrate acest proces intervine dup intrarea spermatozoidului n
ovul (Figura 6.10).
n jurul membranei plasmatice se gsesc nveliuri
protectoare: membrana sau zona pellucida (ZP) la mamifere i
cteodat celule hrnitoare (celule cumulus).
TA 6.18. La animale, celulele somatice rezult n urma mitozei i _________

rezult n urma meiozei.
a) gameii; b) clonele; c) zigoii; d) sporii; e) celulele diploide

Uniunea celor dou celule

La mamifere, pentru eliberarea genomului su haploid,
spermatozoidul trebuie s depeasc o prim barier, celulele
hrnitoare, apoi s se ataeze i s depeasc cele dou bariere
proprii ovulului: zona pellucida (ZP) i membrana plasmatic.
Pentru acest proces sunt necesare ase etape (Figura 6.11):
1) ataarea acrozomului la ZP;
2) producerea reaciei acrozomiale, care presupune o
exocitoz prin fuziunea membranelor acrozomului i
spermatozoidului cu eliberarea coninutului enzimatic pentru a
asigura penetrarea ZP;
3) penetrarea ZP;
4) ataarea de membrana ovulului;
5) fuziunea cu membrana ovulului.
6) aceste ultime etape activeaz ovulul ctre dezvoltare i l
fac refractar la orice alt nou intrare a unui spermatozoid.
Figura 6.11. Etapele unirii spermatozoidului cu ovulul (prelucrat dup

Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin
Edition, 2002)
th
Cummings, 6
Adeziunea la zona pellucida: este specie specific, i rezult

din aciunea unei glicoproteine numit ZP3, care este recunoscut
de proteine specifice ale spermatozoidului. Trei proteine ale
spermatozoidului sunt candidate pentru a realiza aceast interacie
cu ZP3. Aceast cuplare a uneia sau mai multor proteine la ZP3
activeaz o cale de semnalizare care controleaz intrarea calciului,
indispensabil reaciei acrozomiale.
TA 6.19. Enumerai etapele necesare procesului de unire a ovulului cu

spermatozoidul

Reacia acrozomial: este obligatorie pentru transformarea

spermatozoidului ntr-o celul apt s fuzioneze. n afar de
eliberarea enzimelor litice indispensabile penetrrii zonei pellucida
de ctre spermatozoid, reacia acrozomial remodeleaz suprafaa
spermatozoidului, proteinele membranare i modific aranjarea i
activitatea astfel nct s menin aderena i s favorizeze
fuziunea. Aceast reacie este caracterizat de intrarea masiv a
calciului extracelular n celul. Mecanismele exacte ale semnalizrii
care provoac i acompaniaz intrarea sunt numeroase i pentru
moment ipotetice.
Fuziunea gameilor: la mamifere, mai multe proteine de la

suprafaa spermatozoidului sunt implicate n fixarea i fuziunea la
membrana plasmatic a ovulului. Cel mai bine este caracterizat
complexul numit fertilina. Aceasta se fixeaz la o integrin a
membranei plasmatice i, asemeni fixrii la zona pellucida, la
proces vor participa proteine adiionale transmembranare cu un
domeniu metaloproteinazic care s asigure fixarea i fuziunea cu
membrana plasmatic.
n final, fuziunea spermatozoidului cu ovulul provoac
emiterea unui semnal care activeaz dezvoltarea. Se observ: i) o
creterea a calciului intracelular; ii) o exocitoz a granulelor
corticale, urmarea meiozei, oprit n ovulul nefecundat; iii)
mobilizarea ARNm materni prezeni n citoplasm; iv) demararea
unui ciclu celular mitotic. Prin schimbarea rapid a potenialului
electric membranar, ovulul fecundat blocheaz toate posibilitile de
polispermie. Acest blocaj este urmat de o exocitoz a granulelor
corticale care, prin eliberarea diverselor enzime, provoac o
modificare a spermatozoizilor i i face inapi de funcionare.
6.2.2. Segmentarea Dezvoltarea ncepe cu segmentarea, o suit de diviziuni

mitotice, graie crora citoplasma ovulului se divide ntr-un numr
i reorganizarea
mare de celule, mai mici i nucleate, numite blastomere. Nu exist
celulelor faz de cretere celular ntre diviziuni, astfel nct, embrionul care
se formeaz treptat, are o talie care evolueaz puin.
embrionare
La majoritatea speciilor animale (cu excepia mamiferelor),
aceste prime stadii sunt dirijate de proteine i ARNm produi de
celulele hrnitoare i acumulai n ovocit, n timp ce genele din
nucleul zigotic rmn silenioase. n cursul segmentrii, raportul
volumelor citoplasmei i nucleului se reduce pn n momentul n
care genele zigotice ncep s fie transcrise. Blastomerele devin
capabile de deplasare i reorganizarea celulelor poate ncepe.
Au fost descrise numeroase tipuri de segmentare cu planuri
de diviziune paralele, perpendiculare sau chiar oblice la ariciul de
mare, molute i batracieni.

n numeroase cazuri celulele adopt aranjarea cea mai

stabil termodinamic. La mamifere, se observa un fenomen unic
numit compactare care le difereniaz de alte animale.
Blastomerele n stadiu de opt celule se strng puternic una lng
alta, suprafeele de contact se intersecteaz iar celulele externe
izoleaz progresiv celulele interne care vor forma un agregat
celular i o cavitate, numit blastocel.
Formarea a trei esuturi primordiale: ectoderm, mezoderm,

endoderm este rezultatul unei organizri spectaculare a celulelor
embrionare care achiziioneaz noi poziii pentru a defini planul
unui organism cu mai multe straturi celulare. Celule din interiorul
embrionului formeaz endodermul i mezodermul iar cele care
rmn la exterior vor forma ectodermul care va da natere la piele
i sistemul nervos. Deci, cele trei foie primordiale ectoderm
(extern), mezoderm (intermediar) i endoderm (intern) vor lua
natere n cursul acestei faze, numit gastrulare.
Toate aceste rezulta n urma combinrii mai multor tipuri de
micri celulare: epibolie (micare coordonat de ncercuire),
invaginare (ptrunderea unei regiuni celulare n alta), involuie
(micare celular ctre interior totul rmnnd ataat la faa intern
a celulelor externe), ingresiune (migrri individuale ctre interior),
delaminare (separarea foielor celulare).
6.3. Bazele Cu toate c genomii lor sunt identici (provenind toi prin
moleculare ale mitoza zigotului), celulele somatice se difereniaz n cursul
diferenierii celulare dezvoltrii sub aciunea genelor particulare, a cror stimulare (care
duce la formarea de proteine diferite) exercit un control diferenial
la mai multe niveluri: i) alegerea genelor transcrise; ii) traficul i
localizarea ARNm; iii) intervalul de timp care se stabilete pentru
fiecare ARNm ntre formarea i traducerea sa n proteine (stocare
temporar); iv) prin modificarea (degradarea) proteinelor, singurele
care acioneaz efectiv n celul
6.3.1. Organizarea Mrimea i complexitatea genomilor la eucariote este

tipic a unei gene formidabil. Secvena nucleotidic a unei gene i a segmentelor
eucariote care o flancheaz nu ne furnizeaz informaii privind: i) modul de
aciune al genei; ii) modului de reglare a expresiei sale n timpul
dezvoltrii i diferenierii celulare i nici n cazul adaptrii la
modificrile de mediu; iii) modul n care expresia genelor este
coordonat pentru a asigura echilibrul fiziologic caracteristic al
celulelor i organismelor sntoase; iv) cum apariia unui produs al
genei sau variaia vitezei de expresie a unei gene pot afecta
funcionarea normal sau pot determina maladii.

Chiar nainte de cunoaterea structurii genelor eucariote i

procariote, se tia c sistemele genetice procariote i eucariote
posed proprieti fundamentale comune. n cele dou cazuri
materialul genetic este ADN, replicarea este semiconservativ,
fluxul de informaie genetic este direcionat de la ADN ctre ARN
i proteine i codul genetic este universal. Pare rezonabil s
considerm c organismele eucariote, mai ales cele multicelulare,
conin mai multe gene dect procariotele i c posed mecanisme
de control suplimentare care permit reglarea proceselor de
dezvoltare pentru a realiza integrarea diferitelor lor funciuni.
Fa de procariote, la eucariote, ntre regiunile de ADN care
codific proteinele (exoni) se gsesc secvene intercalare (introni)
fr semnificaie pentru proteina final (Figura 6.12). Din aceast
structur ntrerupt a genei (gene mozaic) decurg modaliti
particulare de expresie (transcriere, traducere i reglarea tuturor
acestor procese). n figura 6.12 se realizeaz o prezentare
comparativ a structurii unitilor de transcripie ale genelor
procariote si eucariote:
a) Operonul Trp la E. Coli conine 5 gene (A-E) care codific
enzime necesare sintezei triptofanului. Regiunea de control este
localizat lng situsul de iniiere a transcripiei ntregului operon,
care conduce la formarea unui ARNm policistronic. O mutaie n
interiorul regiunii de control a transcripiei (a) poate preveni
expresia tuturor proteinelor codificate de operonul trp. n contrast, o
mutaie n una dintre genele operonului afecteaz, n general,
numai una din proteinele operonului;
b) O unitate de transcripie simpl de la eucariote include o
regiune care codific o protein ncepnd de la captul 5 ctre
coada poli(A) 3, avnd asociate regiuni de control. Secvenele
intronice situate ntre exoni sunt nlturate n timpul maturrii
transcriptului primar, nefiind prezeni n ARNm monocistronic matur.
Mutaii la nivelul regiunii de control a transcripiei pot reduce sau
mpiedica transcripia, reducnd sau eliminnd sinteza proteinei
codificate. O mutaie la nivelul regiunii exonice (c) poate determina
obinerea unei proteine anormale cu activitate sczut. O mutaie n
interiorul unui intron poate determina inducerea unui nou site de
splicing care s determine obinerea unei proteine nefuncionale.
La eucariote maturarea unui transcript ARNm implic i procesul de
adugarea a unei guanine la captului 5 i a unei cozi poli A
variabil (200-300 nucleotide) la captul 3.
TA 7.20.Procesarea unui transcript ARN implic: a) nlturarea intronilor i

sudarea mpreun a exonilor; b) nlturarea exonilor i sudarea mpreun a intronilor;
c) adugarea unei guanine cap i a cozii poli A; d) ataarea intronilor la ARN
ribozomal; e) att a ct i c.

Figura 6.12. Comparaie ntre structura genelor procariote i eucariote (prelucrat

dup Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th edition, 2000)
Analizele de structur i funcie ale genelor eucariote au

6.3.2. Promotori, evideniat c acestea difer puternic de genele procariote n
stimulatori, complexitatea secvenelor scurte (motive) responsabile de reglarea
inhibitori transcripiei
Genele procariote prezint trei tipuri de motive:
i) secvenele care determin debutul transcripiei (E. Coli -
promotorii sunt definii prin dou regiuni prezente la 10 i 35 pb n
amonte de situsul de iniiere a transcripiei);
ii) elementele care marcheaz terminarea genei sau a unui
grup de gene i favorizeaz terminarea transcripiei;
iii) secvene de ADN adiacente sau suprapuse n raport cu
promotorii, care sunt recunoscute de efectori specifici cum sunt
represorii, activatorii i terminatorii care moduleaz transcripia.
Secvenele de reglare specific depind de interaciunile pe
care le au cu proteinele specifice i pot influena expresia
secvenelor codante nvecinate.
La eucariote se evideniaz:
i) secvenele reglatoare cu localizri variabile care sunt
situate la distane variabile i au orientri diverse n raport cu situsul
de demarare i de oprire a transcripiei;

ii) trei polimeraze diferite, I, II i III care transcriu trei

clase de gene distincte fiecare asociat cu semnale specifice de
control a transcripiei i terminrii acesteia;
Secvenele reglatoare sunt o suit complex de motive de

ADN relativ scurte. Fiecare motiv reprezint situsul de fixare al unei
proteine specifice, de exemplu un factor de transcripie.
Funcia unui promotor este adesea determinant pentru
desemnarea genei transcrise, a celulelor n care are loc procesul i
momentul precis al dezvoltrii cnd va avea loc transcrierea.
Promotorul nu se reduce doar la secvena de ADN unde se
va fixa ARN polimeraza, ci conine i alte regiuni amplificatoare sau
inhibitoare. Aceste elemente oligonucleotidice specifice fixeaz
proteine specifice (DNA binding proteins) prin interacii care implic
motive peptidice particulare
Cadru 6.3 Reglarea transcripiei la procariote

Reglarea transcripiei fiecrei gene reflect cooperarea particular
(asortarea) i aranjamentul anumitor motive, prezena factorilor de transcripie
adecvai i modul n care aceti factori influeneaz iniierea transcripiei.
Fixarea mai multor factori de transcripie n regiunea de reglare faciliteaz fie
asamblarea ARN polimerazei ntr-un complex de transcripie, fie activarea acestui
complex, fie ambele. O caracteristic extraordinar a acestor mecanisme o
reprezint universalitatea lor.
Remarcabil este faptul c mecanisme cu origini foarte diverse (drojdii,
Drosofila, celule de mamifere) sunt interschimbabile ceea ce dovedete o
conservare evolutiv cert a acestor structuri.
Mecanismul de terminare a transcripiei este diferit pentru cele trei ADN
polimeraze. Motivele interacioneaz cu proteine adecvate, factorii de terminare.
Reglarea terminrii este consecina aranjamentului motivelor ADN i formarea unui
ansamblu multiproteic care faciliteaz terminarea i modificarea extremitii ARN.
Expresia anumitor gene este afectat de schimbri epigenetice care
altereaz capacitatea unei gene de a se exprima fr a fi afectat secvena sa
nucleotidic.
O form de modificare epigenetic identificat este asociat cu gradul de
metilare a citozinelor la nivelul secvenelor 5-CG care flancheaz regiunea 5 a unei
gene: a) creterea metilrii este corelat cu o reducere sau chiar cu o absen a
expresiei genei sau genelor vecine; b) reducerea metilrii se traduce printr-o
expresie crescut.
Modificrile de structur intrinsec a cromatinei (acetilare, fosforilare) pot
influena nivelul expresiei genelor apropiate.
Nivel crescut de expresie exist numai n regiunile decondensate ale
cromatinei.

6.3.3. Diferenierea Adesea, proteinele reglatoare sau factori de transcripie au

rezult din expresia roluri eseniale n definirea teritoriilor celulare care formeaz
n cascad a embrionul i viitorul organism adult. Genele care se exprim
genelor furnizeaz i factorii de transcripie care controleaz expresia n
aval a celorlalte gene (expresia genelor care acioneaz ulterior).
Primele sunt gene reglatoare, iar cele situate cel mai n aval sunt
gene efectoare. O astfel de cascad genic este tipic diferenierii
celulare. Cu ct procesul este mai avansat cu att diferenierea
unei celule embrionare, la origine totipotent, este mai naintat.
Aceasta se transform ntr-o celul specializat, specific unui
esut particular, evoluia fiind considerat ireversibil. Excepie fac
doar celulele tumorale care par s aib capacitatea de a se de-
diferenia i de a forma noi tumori care se pot localiza n esuturi
foarte variate, deja difereniate.
Morfogeneza are drept rezultat stabilirea identitii unei

6.3.4. Morfogeneza
celule n organism. Procesul de morfogenez este numit gastrulaie
i reprezint o rearanjare dramatic a celulelor blastulei. Gastrulaia
difer n detaliu de la un grup de animale la altul, dar un set comun
de modificri celulare coordoneaz acest rearanjament spaial ntr-
un embrion. Mecanismele celulare generale sunt reprezentate de
modificri ale formei i mobilitii celulare, ale capacitii de aderare
celul-celul i celul-matrice extracelular. n urma gastrulaiei are
loc diferenierea a trei straturi celulare embrionare numite i straturi
germinale embrionare: ectoderm, endoderm i mezoderm. Fiecare
dintre aceste sunt precursori ai diferitelor esuturi i organe ale
organismului adult. De exemplu, sistemul nervos i epiderma deriv
din ectoderm, tractul digestiv i organele asociate din endoderm iar
esuturile i organele de tipul muchilor, rinichiul, inima i stratul
intern al pielii (derma) se dezvolt din mezoderm.
Pe msur ce diviziunile celulare progreseaz i apar noi

celule n cursul dezvoltrii, acestea vor fi informate asupra poziiei
lor n embrion si asupra modului n care se vor diferenia ntr-un
anumit tip celular. Responsabilitatea acestui proces o poart
existena unui gradient de substane morfogenetice (morfogeni)
care difuzeaz din locul unde sunt produse stabilind o gam
continu de concentraii pn la locul unde vor disprea prin
degradare.
Celulele posed captatori ai msurii concentraiilor,

reprezentai de secvenele de ADN (promotori, stimulatori,
inhibitori) care leag proteinele cu activitate morfogen cu afiniti
variabile. Astfel, se realizeaz o interpretare a gradientului n
funcie de poziia n embrion.

Intersectarea diferitelor gradiente de morfogeni duce, n

dezvoltarea timpurie a embrionului, la definirea unor regiuni
celulare delimitate care sunt invitate s se diferenieze n esutul
sau organul adecvat. Expresia n cascad a genelor reglatoare
capabile s rspund acestor gradieni i a genelor efectoare are
drept rezultat stabilirea unei forme n care fiecare celul embrionar
i achiziioneaz progresiv o identitate, i n final se definete
destinul su n organismul adult. Diferenierea unei celule n
organism este rezultanta poziionrii sale spaio-temporale.
6.3.5.
Diferitele regiuni ale celor trei straturi germinale se dezvolt
Organogeneza
n organe rudimentare n timpul procesului de organogenez
(Tabelul din Figura 6.13). Trei tipuri de modificri morfogenetice:
plieri, sciziuni i condensri celulare sunt primele dovezi ale formrii
noilor organe. De exemplu, primele organe care iau natere la
broate i alte cordate sunt tubul neural i notocordul, structura
scheletic caracteristic tuturor embrionilor de la cordate (Figura
6.14).
Strat germinativ Organe i esuturi n organismul

adult
Ectoderm Epiderma pielii i derivaii si (glandele din piele,
unghiile), epiteliile care cptuesc gura i rectul;
receptorii senzitivi din epiderm; cornea i
cristalinul ochiului; sistemul nervos; medula
adrenalei; emailul dinilor; epiteliul glandelor
pituitar i pineal
Endoderm Epiteliul care cptuete: tractul digestiv (cu
excepia gurii i rectului); sistemul respirator;
ficatul; pancreasul; tiroida; paratiroidele;
timusul; ureterele; vezica urinar i sistemul
reproductor
Mezoderm Notocordul; sistemul scheletic; sistemul
muscular; sistemele circulator i limfatic;
sistemul reproductor (exceptnd celulele
germinale care ncep s se diferenieze n
timpul scindrii); derma din piele; cortexul
adrenal
Figura 6.13. Organele i esuturile care deriv din cele trei straturi germinale la
vertebrate
n timpul gestaiei de la om, organogeneza se produce n

primul trimestru de via al embrionului.
Odat ce organogeneza progreseaz, morfogeneza i
diferenierea celular continu s mbunteasc structura
organelor care iau natere din cele trei straturi germinale (Figura
6.14). n mod unic, la embrionii vertebratelor se dezvolt o band
de celule numit creast neural, de-a lungul limitei la care tubul
neural iese din ectoderm. Celulele crestei neurale migreaz ulterior
n diferite regiuni ale embrionului formnd celulele pigmentare ale
pielii, unele din oasele i muchii craniului, dinii, glandele medulare
i adrenale i componentele periferice ale sistemului nervos.

Dezvoltarea embrionar la broate conduce la un stadiu

larvar. Mai trziu, n urma procesului de metamorfoz aceast
form se transform n organismul adult (Figura 6.14).
Figura 6.14. Stadiile dezvoltrii la broasc cu evidenierea principalelor etape:

gametogenez, fertilizare, clivare, gastrulaie, organogenez, maturare i
cretere i adultul matur sexual (prelucrat dup
TA 6.21. n urma gastrulaiei are loc diferenierea a trei straturi celulare

embrionare numite i straturi germinale embrionare. esutul nervos i epiderma
deriv din: a) endoderm; b) ectoderm; c) mezoderm; d) direct din ovul; e) a i b sunt
adevrate.
TA 6.22. Care dintre urmtoarele afirmaii privind mecanismele de control n

organismele eucariote este adevrat:
a) metilarea ADN poate determina inactivarea parial sau total a
cromozomilor;
b) influenele inductive ale citoplasmei pot aciona prin modificarea produsului
genelor particulare;
c) genele eucariote sunt organizate sub forma unor operoni mari;
d) transcripia activ a genelor este un proces caracteristic regiunilor de
heterocromatin nuclear;
e) cromozomii n perie sunt regiuni active pentru sinteza ARNt
TA 6.23. Reglarea genelor att la procariote ct i la eucariote se realizeaz

prin controlul procesului de: a) translaie; b) suprarsucirea histonelor; c) transcripia;
d) diferenierea celular; e) eliminarea intronilor i sudarea exonilor

6.4. Evenimente Anumite celule au durata de viaa la fel de lung ca i

organismul din care fac parte. Altele se nnoiesc constant plecnd
celulare de la celule stem. O celul stem poate forma alte celule stem sau
specializate poate da o descendena de celule noi difereniate. Exist celule
stem practic n toate esuturile, dar sunt mai uor de studiat n
snge.
6.4.1. Celule stem O celul stem este o celul embrionar, fetal sau adult
care are, n anumite condiii, capacitatea de a se auto-reproduce
pentru lungi perioade de timp sau, n cazul celulelor stem adulte,
pentru ntreaga via a organismului. Acestea pot duce la formarea
unor celule specializate care fac parte din esuturile i organele
corpului.
Celulele stem pluripotente. O celul stem pluripotent are
capacitatea de a da noi tipuri celulare care se dezvolt din cele trei
foie germinale (mezoderm, endoderm i ectoderm) din care iau
natere toate celulele corpului. Singura surs cunoscut de celule
stem umane pluripotente este cultura de celule stem izolat din
embrioni timpurii i din esut fetal care a fost difereniat pentru a
forma gonadele.
Celulele stem embrionare. O celul stem embrionar este
derivat dintr-un grup de celule numit mas intern celular, care
este o parte din embrionul timpuriu de 4 - 5 zile numit blastocist.
Odat prelevate din blastocist celulele masei celulare interne pot fi
cultivate sub form de celule stem embrionare. Aceste celule stem
embrionare nu sunt embrioni. De fapt, studiile au evideniat c
celulele nu se transform n embrioni, deoarece n laborator,
condiiile n care se dezvolt sunt diferite de cele n care se
dezvolt embrionii.
Celulele germinale embrionare. O celul germinal
embrionar este derivat din esut fetal. Specific, acestea sunt
izolate din celule germinale primordiale izolate din creasta gonadal
a fetuilor de 5-10 sptmni. Mai trziu n dezvoltare, creasta
gonadal dezvolt testiculele i ovarele iar celulele germinale
primordiale vor da natere ovulelor i spermei.
Celulele stem embrionare i celulele germinale embrionare
sunt pluripotente, dar nu sunt identice din punct de vedere al
proprietilor i caracteristicilor.
Diferenierea este procesul prin care o celul nespecializat

(cum este o celul stem) devine specializat n una sau mai multe
celule care ntr n constituia corpului. n timpul diferenierii,
anumite gene sunt activate i altele devin inactive dup o
modalitate de reglare intrinsec. Drept rezultat, o celul difereniat
dezvolt structuri specifice i realizeaz anumite funcii. n
laborator, o celul stem poate fi manipulat pentru a deveni un tip
celular specializat sau parial specializat (ex, muchi cardiac, nerv
sau celul pancreatic).

Celulele stem adulte: reprezint celulele nedifereniate

(nespecializate) care apar ntr-un esut difereniat (specializat), care
se autorenoiete, i devin specializate pentru a forma toate tipurile
de celule care aparin esutului din care face parte. Celulele stem
adulte sunt capabile s realizeze copii identice cu ele nsele de-a
lungul ntregii viei a organismului. Aceast proprietate se numete
auto-renoire. De obicei, celulele stem adulte se divid pentru a
genera celule progenitoare sau precursoare care apoi se
difereniaz i dezvolt trsturi caracteristice i funcii
specializate, cum ar fi contracia celulei musculare sau
semnalizarea nervoas celular (Figura 6.15). Sursele de celule
stem adulte sunt reprezentate de mduva osoas, sngele,
corneea i retina, creierul, muchiul scheletic, pulpa dintelui, ficatul,
pielea i pancreasul.
Figura 6.15. Plasticitatea celulelor stem adulte la om (prelucrat dup Biology, N. A.

th
Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6 Edition,
2002)
TA 6.24. ncercai s analizai comparativ caracteristicile tuturor tipurilor de

celulele stem prezentate mai sus. Prezint acestea aceeai localizare n
organism?

Globulele albe specializate, leucocitele, sunt responsabile de

6.4.2. Celulele
rspunsurile imune specifice induse de ntlnirea diferitelor
imunitare
antigene (bacterii, virusuri, ciuperci, macromolecule). Sunt celule
mici rotunde care pot prsi circulaia sangvin prin extravazare i
intr n sistemul limfatic constituit din ganglioni conectai prin vase
limfatice.
Exist dou tipuri de limfocite, celulele B i T. Celulele B
sintetizeaz anticorpii, iar celulele T sunt responsabile pentru
imunitatea mediat celular. n acest ultim caz, la suprafaa celulelor
se gsesc proteine membranare, receptorii celulelor T, analogi
imunoglobulinelor care interacioneaz cu antigenele. Celulele B i
T provin din precursori comuni, celule stem din mduva osoas
(Figura 6.16). Celulele T migreaz rapid n timus, i apoi, cnd cele
dou tipuri celulare au atins un stadiu avansat de difereniere,
migreaz din mduva osoas i timus ctre organele limfoide
secundare (amigdale, pancreas, plci Peyer, esut particular din
intestin).
Figura 6.16. Dezvoltarea limfocitelor (prelucrat dup Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece,

William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin Cummings, 6 ed, 2002)
th
n afar de limfocite, exist i alte tipuri celulare implicate n

rspunsul imun: macrofage, monocite, celule Langerhans.
Macrofagele asigur o funcie esenial deoarece, prin endocitoz,
acumuleaz antigenele, le diger i le poziioneaz la suprafaa
propriilor celule. Aceast operaie de prezentare a materialelor
ingerate este indispensabil pentru recunoaterea antigenelor de
ctre limfocite i pentru reacia acestora.

Caracteristica fundamental a celulelor rspunsului imun

provine din faptul ca fiecare limfocit B produce molecule de anticorpi
(imunoglobuline) cu o singura specificitate i fiecare celula T are un
singur tip de receptor. nainte de diferenierea limfocitelor B n
plasmocite (celule care secret anticorpi), anticorpii sunt ataai la
suprafaa celular, unde servesc ca receptori pentru antigene, ca i
n celulele T. Fixarea antigenului la imunoglobulina de suprafa,
acompaniat de interacii celulare cooperative, declaneaz un
proces intracelular (transducerea semnalului) a crui consecina este
proliferarea i maturarea celulelor B. Numeroase plasmocite, care
secret anticorpi cu aceeai specificitate cu imunoglobulina purtat
la nceput de limfocitul B imatur, vor fi activate. Anticorpii secretai se
vor complexa cu antigenele strine i ansamblul va fi fagocitat i
eliminat de diverse celule specializate, cum sunt macrofagele (Figura
6.17).
Ca rspuns la prezena unui antigen, este selecionat o
celula B, care va constitui o clona printr-o proliferare preferenial.
Aceast selecie clonal se aplica i celulelor T.
Ea ine cont i de memoria imunitar. La prima ntlnire cu
antigenul, rspunsul este lent pentru c un numr mic de celule
posed anticorpul potrivit. La urmtoarea ntlnire cu acelai
antigen, rspunsul este mult mai rapid i mai intens. Celulele T i B
cunosc deja antigenul care este stimulat i gata de divizare. Sunt
celule cu memorie care se difereniaz pentru a produce celule B i
T funcionale.
La un om exist aprox. 106-108 tipuri limfocitare specifice,
susceptibile s constituie sau constituie deja clone (1-106 celule),
ceea ce pentru corpul uman reprezint aproximativ 1012 celule B i
T.
Figura 6.17. Producerea de anticorpi rezultatul cooperrii celulare (prelucrat dup

Biology, N. A. Campbell, J. B. Reece, William Barstow, Ed, International Edition, Benjamin
Cummings, 6 ed, 2002)
th
TA 6.25. Care dintre urmtoarele afirmaii privind celulele T i B sunt

adevrate: a) produc celule efectoare fa de patogeni specifici; b) sunt produse
de celule stem i de mduva osoas; c) pot s atace i s distrug patogenii care
invadeaz organismul; d) att a ct i b; e) a, b i c sunt adevrate.

Cadru 6. 4. Producerea de anticorpi rezultatul cooperrii

celulare
Rspunsul imun mobilizeaz o reea de celule, dup un mecanism

foarte complex. Se disting mai multe etape.
Celulele accesorii (macrofagele) sechestreaz antigenul, l ingereaz i
apoi l pregtesc pentru expunerea la suprafa. Aici sunt recunoscute un tip
particular de celule T care posed receptori pentru antigen (celule particulare
Th sau helper sau auxiliare pentru a le distinge de celelalte celule T care
atac direct antigenul). Celulele T vd antigenul la suprafaa celulelor int
doar dac recunosc simultan i alte proteine normale la suprafaa celulei.
Aceti determinani antigenici normali sunt proteine ale complexului major de
histocompatibilitate (CMH). La om, acest sistem de proteine poart numele de
sistemul HLA, i este implicat n discriminare structurilor proprii (sau self) de
structurile strine (sau non self).
Astfel activat, celula T va stimula o celula B care posed un anticorp de
suprafa capabil s recunoasc acelai antigen. Celula B prezint antigenul la
suprafa folosindu-se de proteinele CMH. Comunicarea ntre celulele B i T se
face prin intermediul unor factori de cretere, citokinele. Citokinele, clas de
proteine din care fac parte i interleukinele, stimuleaz diviziunea i acioneaz
prin legarea la receptorii membranari specifici. Fixarea antigenului la receptorii
celulari produce activarea cilor de semnalizare intracelulare caracterizate de
cascade de reacii, n care mecanismele de fosforilare i defosforilare, ca i
ionii de calciu, au roluri cruciale.
Cele dou procese activatoare, antigen-receptor i citokinele mpreun
cu receptorii lor, sunt conectate i acioneaz unul asupra celuilalt pentru a
stimula, n final, multiplicarea celulelor T i B (Figura 6.17).
Exista mai multe tipuri de celule T:
i) Celule T citotoxice (Tc) care atac direct antigenul strin distrugnd
celula care l poart, dac de exemplu celula este infectat de un virus. Sunt
responsabile de rejecia grefelor ntre indivizi. Au aceleai funcii ca i anticorpii
secretai de celulele B, numai c aici anticorpii rmn ataai la suprafaa
celulelor T;
ii) Celule T helper (Th) care ajut celulele B s se diferenieze n
plasmocite. Ajut la maturarea celulelor T citotoxice;
iii) Celule T supresoare (Ts) care blocheaz rspunsurile celulelor T i B.
Toate proteinele descrise mai sus (anticorpi, anumii receptori de

suprafa, proteinele sistemului HLA) sunt proteine multimere (constituite din
mai multe lanuri polipeptidice) ale cror gene sunt asamblate prin procese de
recombinare. Nici o gen care codific pentru anticorpi nu este motenit ca
atare. Diversitatea att de mare a anticorpilor poate fi explicat prin
asamblarea genelor responsabile pentru producerea rspunsului imun n
celulele somatice ale organismului pornind de la numeroase fragmente de
ADN.

Celulele stem ale sistemului nervos central (SNC) trebuie s

6.4.3. Neuronii i
se poat diferenia n neuroni i celule suport (astrocite i
sistemul nervos oligodendrocite). Trebuie s fie capabile s se rennoiasc nainte
de a furniza un numr de celule adecvate pentru constituirea
creierului. Au fost identificate celule stem prezente i n creierul
matur. Pot fi cultivate i pot prolifera. Totul ncepe n embrionul
foarte tnr, cnd stratul plat de celule ectodermice se transform
ntr-un tub neural de la care se formeaz creierul i mduva
spinrii. Aici se difereniaz celulele neuroepiteliale care dau
natere la diferite tipuri de neuroni (Figura 6.18) i celule suport
(celule gliale). n partea cea mai dorsal a tubului neural se
formeaz celulele crestei neurale. Ele migreaz pe distane lungi i
formeaz un numr impresionant de tipuri celulare difereniate
printre care se gsesc neuronii i celulele gliale ale sistemului
nervos senzorial, simpatic si parasimpatic (Figura 6.18).
Figura 6.18. Tipuri de neuroni i regiunile specializate ale acestora ((prelucrat dup
Molecular Cell Biology, Lodish, et all. 4th ed., 2000)
Creierul uman are 1011 neuroni asociai cu peste 1012 celule

gliale suport. n aceste dou categorii exist o foarte mare
varietate. Prelungirile fine, dendritele, sunt utilizate de neuron
pentru a capta impulsurile electrice.
n primul an dup natere, fiecare neuron al cortexului
stabilete aproximativ 105 conexiuni (sinapse) cu ali neuroni. Se
dezvolta axonul, extensie a corpului celular care poate atinge 1m
pentru un neuron senzorial periferic. Aceasta extensie se formeaz
dintr-o regiune de cretere graie filopodelor, un fel de organite
senzoriale care se ntind i se retrag prin alungirea microtubulilor i
schimbarea formei microfilamentelor.

Oligodendrocite (tip particular de celule gliale) se ruleaz la

intervale regulate n jurul axonului i formeaz o membran (teaca
de mielin) bogat ntr-o proteina bazic caracteristic (Figura
6.18).
n sistemul nervos periferic, celulele gliale care sunt
responsabile de mielinizare se numesc celule Schwann. Teaca de
mielin, adevrat izolator electric este esenial n funcionarea
neuronului. n final, axonul se specializeaz n secretarea unui
neurotransmitor specific care poate fi acetilcolina (neuroni
colinergici), epinefrina, norepinefrina (neuroni adrenergici),
octopamina, serotonina, acidul -aminobutiric, dopamina (neuroni
dopaminergici), etc. Pentru a se matura, un neuron sufer o
difereniere structural i o specializare molecular.
TA 6.26. Complexul major de histocompatibilitate (CMH) este important n:

a) distincia dintre celulele self i nonself; b) recunoaterea paraziilor
patogeni; c) identificarea paraziilor bacterieni; d) identificarea celulelor anormale;
e) att a ct i d sunt corecte.
TA 6.27. Care dintre urmtoarele afirmaii este un exemplu de feedback

pozitiv pentru sistemul imun:
a) celulele cu memorie prolifereaz i produc anticorpi; b) celulele
citotoxice elibereaz substane care atrag macrofagele; c) celulele elibereaz
citokine care la rndul lor le stimuleaz diviziunea i eliberarea unei cantiti i
mai mari de citokine; d) antigenele mari cu muli determinani antigenici repetitivi
pot stimula celulele B fr ajutorul celulelor T; e) att a ct i b sunt exemple de
feedback pozitiv n sistemul imun.
TA 6.28. Dac mduva spinrii unei persoane este distrus de radiaii,

care dintre urmtoarele tipuri de celule nu va fi produs?
a) celule B; b) celule T; c) eritrocite; d) neutrofile; e) nu vor fi produse toate
tipurile prezentate la punctele a-d.
TA 6.29. Neuronii se formeaz ca urmare a diferenierii:

a) celulelor din mduva spinrii; b) celulelor stem ale sistemului nervos; c)
celulelor gliale; d) liniei albe de celule ale sngelui; e) celulelor suport (astrocite
i oligodendrocite).
TA 6.30. Teaca de mielin sintetizat de celulele Schwann are un rol

important n:
a) structurarea sistemului nervos; b) proliferarea acestui tip celular; c)
funcionarea neuronului deoarece are rol de izolator electric; d) diferenierea
dendritelor; e) a i d sunt adevrate.
TA 6.31. Analizai comparativ componentele neuronilor prezentai n figura

6.18. Prezentai concluzia la care ai ajuns.

6.4.4. Celule Orice dereglare n coordonarea celular este catastrofal.

tumorale i cancer Creterea i multiplicarea dezordonat a unei singure celule care
competiioneaz cu vecinii si pentru spaiu i nutrieni va
determina dezorganizarea i eventual distrugerea ntregului
organism. Termenul utilizat pentru a descrie aceast stare este
cancer
O tumor se poate forma atunci cnd o celul nceteaz s

mai respecte instruciunile celulelor vecine si organismului ntreg, i
urmeaz cicluri de diviziune neregulate pentru rennoire i reparare.
O astfel de proliferare necontrolat apare n cazul tumorilor
benigne. Celulele din structura acestora conserv capacitatea de a
constitui o structur tisular apropiat de cea normal i respect
frontierele esutului sau organului. Apariia unui cancer adevrat,
sau tumor malign, corespunde unei devieri mai accentuate a
celulei proliferante, caracterizat de invazia esuturilor vecine.
Adesea, la celulele tumorale apare capacitatea de migrare, prin
circulaia limfatic i sangvin, care duce la formarea metastazelor,
la situsuri mai mult sau mai puin distanate de tumora iniial
(Figura 6.19). Celulele tumorale invazive, care pot migra dintr-o
tumor iniial, au un comportament asemntor unor celule
embrionare responsabile de morfogeneza esuturilor.
Figura 6.19. Cancerul este o dereglare a organizrii celulare. a) structura

normal a unui vas de snge; b), o singur clon celular a pierdut capacitatea
de coordonare a creterii celulei nconjurtoare i a nceput s competiioneze
pentru spaiu; (c) expansiunea continu a clonei a determinat ieirea sa n afara
vasului distrugnd membrana bazal (invazie); d) transport prin vasele limfatice
n snge i instalarea n alte organe a cror structur o pot distruge (metastaz).

Celulele normale, n cultur, necesit factori de cretere

exogeni pentru a prolifera i au o via limitat nainte de
senescen i moarte. Ele manifest fenomenul de inhibiie de
contact. Odat ce suprafaa de cultur a fost acoperit cu un
monostrat proliferarea lor nceteaz. n contrast, celulele
canceroase n cultur au urmtoarele caracteristici:
i) reducerea necesarului de factori de cretere;
ii) pierderea inhibiiei de contact, astfel nct celulele au
tendina de suprapunere i de formare de aglomerri;
iii) capacitate de diviziune nedefinit, deci sunt nemuritoare;
iv) au o cretere care nu necesit ancorare (fixare),
demonstrat de obicei prin capacitatea de cretere n agar moale
(Figura 6.20).
Figura 6.20. Celule normale i tumorale n cultur
Dovada bazei genetice a cancerului este furnizat de trei

tipuri de observaii:
1) carcinogenii determin mutaii la nivelul ADN;
2) tumorile posed anomalii cromozomiale specifice
(pierdere sau ctigare de cromozomi, translocaii sau amplificri);
3) anumite tipuri de cancer manifest o predispoziie de
dezvoltare motenit. Studiile de genetic molecular au
demonstrat corelaii ntre fenomenul mutaional i cancer
identificnd genele int ale mutaiilor care sunt implicate n
transformarea malign. Aceste gene pot fi mprite n dou clase
operaionale: oncogene i gene supresoare tumorale (tumor
suppresor genes). Oncogenele sunt predominant componente ale
cilor care activeaz diviziunea celular ca rspuns la stimularea
factorilor de cretere. Transformarea malign poate fi o consecin
a mutaiilor care determin o cretere a activitii lor de expresie
(gain of function mutations). Funciile acestor efectori pozitivi sunt
n contrast cu activitatea celei de a doua clase, genele supresoare
tumorale. Mutaiile care inactiveaz genele supresoare tumorale
(loss of function mutations) sunt n mod normal evideniate n
probele tumorale prelevate de la om. Rolul acestor gene este de a
codifica proteine care mpiedic proliferarea, n unele cazuri prin
interacie direct cu membrii familiei oncogenelor.

Descoperirea c anumite virusuri induc tumori cnd sunt

injectate la animale a simplificat ideea de cancer. Virusurile
tumorigene (ADN sau ARN de tip adenovirusuri, papilomavirusuri i
SV40) au elemente genetice discrete, oncogene, care le confer
capacitatea de a transforma celulele i care sunt echivalente
structural cu proto-oncogenele umane. Oncogenele codific
proteine, adesea numite oncoproteine, cu roluri n ciclul de
multiplicare al virusului. n urma infeciei, virusurile oblig celula s
replice propriul ADN i o determin s se divid fr ncetare pn
formeaz o tumor.
O caracteristic fundamental a cancerului este ca
diviziunea unei celule canceroase da natere la doua celule fiice cu
aceleai proprieti. Studiile epidemiologice demonstreaz c la
oameni i animalele de laborator cancerele apar dup parcurgerea
unui numr de etape. Sunt necesare patru sau cinci evenimente
mutaionale nainte ca celula s devin complet malign. Astfel, o
mutaie primar se produce i face celula s creasc mai repede
dect vecinele sale, sau s triasc mai mult dect durata sa de
via normal. Astfel, rezult o populaie, sau o clon, care
multiplic mutaia. Unele celule din clona ajuns la maturitate au o
ans semnificativ s suporte o a doua mutaie, care s le confere
mai departe avantaje n cretere i supravieuire. Celula purttoare
a dou modificri (double hit) se va dezvolta mult mai repede ca
prima clon. n acest fel, o tumor poate acumula continuu, cu
trecerea timpului, un numr din ce n ce mai mare de mutaii care
stimuleaz creterea (Figura 6.21).
Figura 6.21. Dezvoltarea tumoral determinat de mutaii somatice

secveniale i de o cretere a proliferrii celulare

Deci ntr-o celul normal exista gene capabile s

modifice celula i s omoare organismul ntreg, perturbnd
considerabil creterea celular. Majoritatea proto-oncogenelor
codific proteine care intervin n cile de transducere a
semnalelor transmise de la exteriorul celulei ctre echipamentul
de reglare. Versiunea oncogenic (viral) a acestor proteine
este capabil s transmit un ordin de cretere sau diviziune
chiar dac acesta nu a fost dat.
Proto-oncogenele pot codifica factori de cretere sau

receptorii lor. Civa dintre ei sunt factori transcripionali. Genele
celulare normale supresoare de tumori inhib creterea i
multiplicarea celular i se mai numesc i antioncogene. Dac
sufer mutaii, ele pierd funcia supresiv. Exemplul cel mai
cunoscut este cel al proteinei p53 care este considerat
gardianul genomilor i care conine mutaii n peste 50% din
cazurile de cancer. n aceste situaii anti-oncogenele mutate
devin veritabile oncogene.
TA 6.32. Care dintre urmtoarele afirmaii privind proto-oncogenele este

fals:
a) codific pentru proteine asociate cu creterea celular; b) sunt similare
cu oncogenele prezente n retrovirusuri; c) sunt produse de ctre mutaii n
celulele somatice induse de ctre substane carcinogene; d) sunt implicate n
producerea proteinelor pentru adeziunea celular; e) sunt gene care codific
pentru proteine implicate n diviziunea celular
TA 6.33. Incidena cancerului crete dramatic cu naintarea n vrst

deoarece:
a) este foarte probabil ca proteina Ras s devin hiperactiv dup vrsta
de aizeci de ani; b) proteozomii devin mult mai activi cu vrsta; c) cu ct
mbtrnim cu att inhibitorii diviziunii celulare funcioneaz mai ncet; d) cu ct
trim mai mult cu att acumulm mai multe mutaii; e) genele supresoare
tumorale nu mai sunt capabile s repare ADN modificat;
TA 6.34. Care dintre urmtoarele evenimente sunt necesare pentru

producerea unei celule maligne:
a) activarea unei oncogene ntr-o celul; inactivarea unei gene supresoare
tumorale ntr-o celul; b) prezena substanelor mutagene n mediul de via al
celulelor; c) prezena retrovirusurilor n celul; d) att a ct i b sunt necesare.
TA 6.35. Leucemia care reprezint o form de cancer care apare ca

urmare a mutaiilor care determin o excesiv producie de celule albe prezint
o declanare mult mai timpurie dect alte forme de cancer. Dai o explicaie
pentru acest fenomen.

R TA 6.1: a; R TA 6.2: b; R TA 6.4: c; R TA 6.7:d; R TA 6.8:d; R TA 6.9: e; R TA 6.10:

d;
R TA 6.3: n adeziunea celular sunt implicate proteine membranare specializate
numite molecule de adeziune celular (CAMs Celular Adhesion Molecules). Celulele din
esuturile animale ader indirect (adeziune celula-matrix) i de componente ale matricei
extracelular prin intermediul unor receptori de adeziune din membrana plasmatic. Aceste
dou tipuri de interacii nu mediaz doar agregarea i organizarea celulelor n esuturi
distincte dar de asemenea susin transferul bidirecional al informaiei ntre exteriorul i
interiorul celulei. O parte a moleculelor CAM pot fi clasificate n patru mari familii:
caderinele, superfamilia imunoglobulinelor (Ig), integrinele, i selectinele. Unele din aceste
molecule confer specificitatea de legare care caracterizeaz o anumita protein. Exist i
alte tipuri de proteine, care nu aparin nici unei clase majore de CAM i care sunt implicate
n procesul de adeziune celular n anumite esuturi.
Moleculele de aderena pot fi considerate un fel de receptori, adic proteine
transmembranare capabile s fixeze un ligand. Caderinele sunt molecule cheie n procesul
de adeziune i semnalizare celular, i joac un rol critic n diferenierea tisular.
Moleculele de aderen stau la baza proceselor care permit circulaia celulelor sistemului
imunitar n ansamblul organelor.
R TA 6.5: La mamifere, se disting trei tipuri majore de caderine: i) caderina
epiteliala (E-caderina); ii) caderina placentara (P-caderina); iii) caderina neural (N-
caderina). Caderinele au rol important n recunoaterea selectiv a celulelor embrionare i
stabilesc polaritatea lor celular. Sunt molecule de aderena a cror catena peptidic
traverseaz membrana o singura dat.
R TA 6.6: Dac nu reuii s rspundei la o prim ncercare va rugm s
aprofundai informaiile de la paginile 231 la 233
R TA 6.11: c); R TA 6.12: b; R TA 6.17: a; R TA 6.18: a; R TA 6.21: b;
R TA 6.13. La nivelul jonciunilor etane, contactul ntre celule este circular, fiind
vorba de o apropiere compact de forma unui nur; acesta mpiedic trecerea soluilor
ntre celule. Jonciunile care nu sunt continue las posibilitatea apariiei unor deschideri
ntre celule. Dezmozomii i jonciunile lacunare, permit aderena dar i comunicarea ntre
celule.
R TA 6.14. Ambele conin structuri fibroase pentru a rezista la forele de traciune i
o matrice amorf care le permite s reziste la compresie.
R TA 6.15. Dac nu reuii s rspundei din prima ncercare va rugm s
aprofundai informaiile de la paginile 235 la 238.
R TA 6.16. Dac avei dificulti n realizarea eseului v rog s consultai materiale
suplimentare i s revedei informaiile de la paginile 238 i 239.
R TA 6.19: Pentru unirea spermatozoidului cu ovulul sunt necesare urmtoarele
etape: i) ataarea acrozomului la Zonei Pelucida (ZP); ii) producerea reaciei acrozomiale;
iii) care presupune o exocitoz prin fuziunea membranelor acrozomului i
spermatozoidului cu eliberarea coninutului enzimatic, ceea ce asigura penetrarea ZP; iv)
ataarea; v) fuziunea cu membrana ovulului; vi) aceste ultime etape activeaz ovulul ctre
dezvoltare i l fac refractar la orice alt nou intrare a unui spermatozoid.
R TA 7.20: e; Dac avei probleme n nelegerea procesului analizai cu atenie
figura 6.12.
R TA 6.22: a; R TA 6.23: c; R TA 6.25: d; R TA 6.26: e; RTA 6.27: c; R TA 6.29: b;
R TA 6.24. Informaiile sunt prezentate n subcapitolul 6.41. Deoarece este un
subiect amplu i cu real impact tiinific v recomandm i consultarea unor materiale
bibliografice suplimentare.
R TA 6.30: c; RTA 6.31. Test cu posibilitate de comentariu liber a figurii analizate;

R TA 6.32: c; R TA 6.33:d; R TA 6.34:e;
R TA 6.35. Celulele albe ale sngelui circul n ntreg organismul i migreaz n

interiorul i exteriorul esuturilor pentru a apra organismul mpotriva infeciilor. Deci,
acestea sunt n mod natural invazive. Odat ce o mutaie s-a produs n sistemul de control
normal al producerii acestor celule, nu mai este nevoie de mutaii suplimentare care s
confere celulelor capacitatea de a se dispersa n ntreg organismul. n acest fel numrul de
mutaii necesare pentru apariia leucemiei este mult mai redus dect n cazul altor tipuri de
cancer.


V 6.1. Ce sunt caderinele, cte tipuri exist la mamifere i care sunt rolurile lor.
V 6.2. Enumerai tipurile de jonciuni prezente la nivelul celulelor epiteliale? i
descriei rolul acestora n funcionarea celular.
V 6.3. Jonciunile Gap sunt structuri dinamice care, asemenea canalelor ionice
convenionale, pot fi deschise i nchise: ele pot fi nchise prin modificri conformaionale
reversibile care se produc ca urmare a modificrilor celulare. Permeabilitatea jonciunilor
gap descrete n secunde, de exemplu cnd concentraia de calciu intracelular crete.
Speculai de ce o astfel de form de reglare poate fi important pentru sntatea unui
esut.
V 6.4. Prin intermediul schimbului de ioni, jonciunile gap realizeaz cuplarea
metabolic i electric dintre celule. Avnd aceast informaiei ai putea explica de ce
neuronii comunic n primul rnd prin sinapse i secundar prin jonciuni gap.
V 6.5. Gelatina este n principal format din colagen, care este responsabil de
remarcabil putere de extensie a esutului conjunctiv. Gelatina este principalul ingredient
din jeleu. Aa cum probabil tii cnd consumm jeleu de fructe, acesta nu prezint nici o
putere de extensie. De ce?
V 6.6. Proteoglicanii sunt: a) lipoproteine; b) proteine plasmatice; c) glicoproteine; d)
proteine nucleare; e) keratine
V 6.7. Proteoglicanii se caracterizeaz printr-o abunden de sarcini negative la
nivelul gruprilor glucidice din structura lor. Ar fi diferite proprietile acestor compui dac
sarcinile negative nu ar fi aa de abundente?
V 6.8. Din grupul glicoproteinelor extracelulare de aderen fac parte: a)
fibronectina; b) colagenul; c) laminina; d) keratina; e) a i c
V 6.9. Cartilajul este un exemplu de esut: a) conjunctiv; b) reproductiv; c) nervos;
d) epitelial; e) adipos.
V 6.10. Care dintre urmtoarele celule sunt diploide? a) spermatiile; b)
spermatogoniile; c) celulele spermatice mature; d) numai a i b; a, b i c.
V 6.11. O celul uman care conine 22 autozomi i un cromozom Y este:
a) o celul somatic masculin; b) un zigot; c) o celul somatic feminin; d) o
celul spermatic; e) un ovul
V 6.12. La animalele vertebrate, spermatogeneza i ovogeneza difer prin:
a) oogeneza se declaneaz la nceputul maturitii sexuale; b) oogeneza produce
patru celule haploide, n timp ce spermatogeneza produce numai un spermatozoid
funcional; c) oogeneza produce numai un ovul funcional, n timp ce spermatogeneza
produce patru spermatozoizi funcionali; d) spermatogeneza ncepe nainte de natere; e)
spermatogeneza nu este complet pn cnd apare fertilizarea.
V 6.13. Care parte a spermatozoidului intr pentru prima dat n contact cu
membrana plasmatic a ovulului?
a) membrana plasmatica anterioar; b) membrana plasmatic posterioar; c)
membrana acrozomal anterioar; d) membrana acrozomal posterioar; e) membrana de
fertilizare.
V 6.14. Ce nume este dat procesului care reface numrul diploid de cromozomi?
a) fertilizare; b) reproducere asexuat; c) meioz; d) mitoz; e) ciclu celular

V 6.15. Care secven de dezvoltare este corect?
a) clivare, blastul, gastrul i morul; b) clivare, gastrul, morul i blastul; c)
clivare, morul, blastul i gastrul; d) gastrul; morul, blastul i clivare; e) morul,
clivare, gastrul i blastul.
V 6.16. La vertebrate, dup gastrulaie distribuia secvenei esuturilor de la exterior
la interior este urmtoarea:
a) endoderm, ectoderm, mezoderm; b) mezoderm, endoderm, ectoderm; c)

ectoderm, mezoderm, endoderm; d) ectoderm, endoderm, mezoderm; e) endoderm,
mezoderm, ectoderm.
V 6.17. n timpul gestaiei umane, organogeneza apare:
a) n primul trimestru; b) n al doilea trimestru; c) n al treilea trimestru; d) n timp ce
embrionul este n oviduct; e) n timpul stadiului de blastocit.
V 6.18. Ce desemnm prin termenul de transcript primar n cazul genelor
eucariote: a) ARNhn; b) ARNt; c) ARNr; d) ARNm; e) ADN.
V 6.19. Odat transcris ARNm de la eucariote sufer, n majoritatea cazurilor;
modificri care includ: a) eliminarea intronilor; b) fuziunea n forme circulare numite
plasmide; c) legarea la molecule de histone; d) legarea la ribozomi; e) fuziunea cu alte
molecule nou transcrise.
V 6.20. ARN polimeraza se leag la urmtoarele secvene din structura ADN : a)
atenuator; b) activator; c) operon; d) promotor.
V 6.21. Care dintre urmtoarele afirmaii definete controlul transcripional al
expresiei genice?
a) ARNm este stocat n citoplasm i necesit un semnal de control pentru a iniia
translaia; b) ARNm exist un anumit timp nainte de a fi degradat; c) exist o amplificare
genic n cazul ARNr; d) procesarea ARN apare nainte ca ARNm s fie eliberat din
nucleu; e) factorii transcripionali se leag la regiunile activatoare i promotoare.
V 6.22. Prima dovad a diferenierii este: a) diviziunea celular; b) sinteza de
ARNm necesar producerii de proteine specifice pentru un anumit tip de esut; c)
determinarea sintezei; d) modificri n mrimea i forma celulei; e) modificri rezultate din
inducere.
V 6.23. Specializarea n structur i funcie este o definiie a: a) morfogenezei; b)
dezvoltrii; c) inducerii; d) diferenierii; e) formarea modelului.
V 6.24. Care dintre urmtoarele procese este implicat n dezvoltarea embrionar: a)
diviziunea celular; b) diferenierea celular; c) morfogeneza; d) a i b; e) a, b i c.
V 6.25. n timpul vieii au loc n corpul omenesc aproximativ 1016 diviziuni celulare,
n timp ce corpul unui adult conine aproximativ 1013 la 1014 celule. De ce este acest
numr diferit?
V 6.26. Ce este o celul stem?
V 6.27. Dac discutm despre aprarea mpotriva invadatorilor patogeni la
mamifere, toate sistemele descrise mai jos sunt considerate nespecifice cu excepia:
a) sistemului imun; b) pielea; c) membranele mucoase; d) rspunsul inflamator; e)
proteinele antimicrobiene.
V 6.28. Ce sunt antigenele?
a) proteine prezente n snge care determin celulele de snge strine s se
aglutineze; b) proteinele din structura membranelor celulelor B; c) proteinele care constau
n dou lanuri polipeptidice uoare i dou lanuri grele; d) macromolecule care determin
sinteza de anticorpi; e) att a ct i c sunt corecte.
V 6.29. Imunitatea mediat celular este principala funcie a:
a) celulelor T; b) celulelor B; c) eritrocitelor; d) celulelor complementului; e) celulelor
citotoxice.

V 6.30. Ce sunt plasmocitele sau celulele plasmatice?
a) forme imature ale celulelor T; b) celule care produc puini anticorpi; c) celule
efectoare ale imunitii umorale; d) celule care sunt responsabile de memoria imunologic;
e) celule care sunt responsabile pentru fagocitoza organismelor strine.
V 6.31. Care dintre aceste celule secret anticorpi?
a) celulele T helper; b) macrofagele; c) celulele bacteriene; d) celulele plasmatice;
e) celulele T citotoxice.
V 6.32. Ce atrag celulele T helper ctre macrofage?
a) limfotoxinele; b) anticorpii; c) interferonii; d) interleukinele; e) antigenele
V 6.33. Care dintre urmtoarele afirmaii descrie cel mai bine diferena dintre modul
n care celulele B i celulele T citotoxice rspund la invadatori?
a) celulele B confer imunitate activ; celulele T confer imunitate pasiv; b)
celulele B omoar virusurile direct; celulele T citotoxice omoar celulele infectate cu virus;
c) celulele B secret anticorpi mpotriva virusurilor; celulele T citotoxice omoar celulele
infectate cu virus; d) celulele B realizeaz imunitatea mediat celular; celulele T citotoxice
asigur imunitatea mediat umoral; e) celulele B rspund prima dat cnd invadatorii sunt
prezeni; celulele T citotoxice rspund n etapele ulterioare.
V 6.34. Unitatea funcional a esutului nervos este:
a) corpul celular; b) neuronul; c) axonul; d) dendrita; e) creierul
V 6.35. Neuronii comunic prin jonciuni numite: a) jonciuni nguste; b) desmozomi;
c) jonciuni gap; d) sinapse; e) discuri intercalare.
V 6.36. Ce este cancerul i cum difer acesta de o tumor benign?
V 6.37. Adenovirusurile, papilomavirusurile i SV40 acioneaz toate asupra
acelorai gene sau produi genici pentru a induce transformri. Care sunt acestea?
V 6.38. Toate celulele noastre conin proto-oncogene, care se pot transforma n
oncogene care determin apariia cancerului. Care dintre urmtoarele afirmaii reprezint
cea mai bun explicaie pentru prezena acestor poteniale bombe n celulele noastre?
a) proto-oncogenele provin din infeciile virale; b) proto-oncogenele sunt n mod
normal implicate n reglarea procesului de diviziune celular; c) proto-oncogenele sunt
deeu genetic; d) proto-oncogenele sunt versiuni mutante ale genelor normale; e)
celulele produc proto-oncogene ca rezultat al procesului de mbtrnire.
V 6.39. Fumtorii nrii sau muncitorii care lucreaz n medii industriale poluate cu
cancerigeni chimici care induc mutaii la nivelul ADN pot dezvolta cancere caracteristice
obiceiurilor lor sau ocupaiei dup 10, 20 sau chiar mai muli ani dup expunere. Sugerai
o explicaie pentru acest interval lung.
V 6.40. Care dintre urmtoarele afirmaii privind proto-oncogenele este fals:
a) codific pentru proteine asociate cu creterea celular; b) sunt similare cu
oncogenele evideniate la retrovirusuri; c) sunt produse prin mutaii somatice induse de
substane carcinogene; d) sunt implicate n producerea de proteine pentru adeziunea
celular; e) sunt gene care codific pentru proteine implicate n diviziunea celular.

6.7. Bibliografie

Masson, Paris 1997, Chapitre 6: De la cellule a lorganisme
Book Contents
Elsevier, 2004, Chapitre 30, 31, 32, 33, 34: Interactions cellulaires et matrice extracellulaire
edition, ASM Press, 2004, Chapter 15: Cancer
Boeck Universit, 1998, Chapitre 16 : Le cancer
Roberts, P. Walter, Garland Publishing Inc, 2004, Chapter 19: Tissues
Edition, Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 34, 40, 43, 47, 48
Benjamin Cummings, sixth Edition, 2002, Chapter 34, 40, 43, 47, 48
21. Molecular Biology, Lodish, Chapter 6: Integrating Cells into Tissues
cellulaire
Biology Book:

Bibliografie minimal recomandat cursanilor
Cantar Liliana, Radu Dana, Bereneant Ana, Pivoda Carmen-Ana, Citologie si

biologie celulara, Editura Universitatii Aurel Vlaicu, Arad, 2002, ISBN 973-9361-95-1
Costache Marieta, Anca Dinschiotu, Metode de analiz Biochimic, Vol I,
Electroforeza, , ed. Ars Docendi, 2004, ISBN 973-558-137-X,
Costache Marieta, Anca Dinischiotu, Biochimie General, vol II, Acizi nucleici:
Structur i organizare Ed. Ars Docendi, 2004, ,ISBN 973-558-134-5; 973-558-135-3
Cotru Constantin, Manual de lucrri practice de biologie celular, Chiinu, Editura
Tehnica, 1994, ISBN 5-85268-314-0
Cotru Carmen Elena, Cotru Constantin, Ionescu Cezar Radu, Cell and molecular
biology, Apollonia, Iai, 1998, ISBN 973-9333-00-1,
Crciun Constantin, Florea Adrian, Drago Nicolae, Introduction to cell and
molecular biology, Cluj University Press, 1999, ISBN 973-9354-91-2
Cruce Mihai, Mixich Francisc, Zaharia Cornelia, Citoscheletul i motilitatea celular,
Aius Craiova, Colecia Hipocrate, 1998, ISBN 973-9251-56-0,
Cruce Mihai, Biologie celular i molecular, Aius Craiova, Colecia Hipocrate,
1999, ISBN 973-9251-87-0,
Dinischiotu Anca, Marieta Costache, Biochimie Generala, vol I, Proteine, Glucide i
Lipide, , Ed. Ars Docendi, 2004, ISBN 973-558-134-5; 973-558-133-7,
Dumitrescu Gabi, Biologie celulara, Mirton Cantar Liliana, Radu Dana, Bereneant
Ana, Pivoda Carmen-Ana, Citologie si biologie celulara, Editura Universitii Aurel Vlaicu,
Arad, 2002, ISBN 973-9361-95-1
Gherman Ion, Teste i sinteze de biologie celulara i molecular, All, Seria
Medicina uman, Bucureti, 1995, ISBN 973-571-045-5
Moldoveanu Elena, Popescu L.M., Apoptoza - Mecanisme moleculare, Editura
Universitar Carol Davila, Bucureti, 1999, ISBN 973-98145-4-7
Neacu Ion, Cimpeanu Cristian Sorin, Biologie celular-lucrri practice, 1999,
Editura Universitatii Al. I. Cuza, Iai
Nechifor Marina, Biologie i Patologie celular, vol 1, 2002, Ars Docendi, Bucureti,
ISBN 973-558-036-5
Puiu Liliana, Voiculet Nicolae, Biologia molecular a celulei, 1997, All Educaional
Bucureti, ISBN 973-571-198-2
Reut-Dirlea Auruta, Citologie i biologie celular, 2000, Solness Timioara, curs
universitar, ISBN 973-8145-21-X,
Sincai Mariana, Biologie Celular, Mirton Timioara, 1998, curs universitar, ISBN
973-578-617-6
Teuan Vasile, Biologie celular animal, Editura Ion Ionescu de la Brad, Iai,
2000, ISBN 973-8014-20-4,
Verde Doina, Muntean Ioana, Belengeanu Alina, Tosici Aftina, Biologie celular i
Molecular, Eurobit Timioara, 1997, curs universitar, ISBN 973-585-254-3
Verde Doina, Mitocondria, Mirton Timioara, 2000, curs universitar, ISBN 973-585-
036-2,
Zamfirescu Stela, Biologie celular i molecular, Ovidius University Press,
Constana 1999, ISBN 973-9367-73-9

Biologie Celulara PDF

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Biologie Celulara PDF

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

Program postuniversitar de conversie profesional

pentru cadrele didactice din mediul rural

Forma de nvmnt ID - semestrul I

Nici o parte a acestei lucrri

Unitatea de nvare 1: CELULE PROCARIOTE I EUCARIOTE

1.1. Concepte generale de structur i funcionare 4

Unitatea de nvare 2: TEHNICI DE EXPLORARE CELULAR

Proiectul pentru nvamntul Rural i

2.3.2.1. Cromatografie pe hrtie 46

Unitatea de nvare 3: Ciclul i Diviziunea Celular

ii Proiectul pentru nvamntul Rural

3.3.2. Derularea meiozei 105

3.4. .mbtrnirea celular 108

Unitatea de nvare 4: ORGANIZAREA I FUNCIONAREA CELULEI

Cuprins unitatea 4 124

Proiectul pentru nvamntul Rural iii

4.5 Mitocondrii i cloroplaste (conversia energiei) 155

4.6. Nucleul i funciile sale 166

Unitatea de nvare 5: COMUNICARE CELULAR I SEMNALIZARE

iv Proiectul pentru nvamntul Rural

Unitatea de nvare 6: DE LA CELUL LA ORGANISM

6.1.4. Adeziunea celul-matrice 232

Bibliografie minimal recomandat cursanilor 268

Proiectul pentru nvamntul Rural v

Cursul de BIOLOGIE CELULAR - celula unitatea de baz a

Cursul dezvolt competene specifice i. este gndit conform

Proiectul pentru nvmntul rural a aprut din necesitatea

Modulul Biologie celular celula unitatea de baz a lumii vii

Cursul este astfel structurat nct ofer o imagine clar i

Modulul de Biologie celular este una dintre componentele

de nvare interactiv i acordarea posibilitilor de autoverificare i

Obiectivele generale i specifice ale modulului, n termenii

n conformitate cu cerinele Programului de Educaie la Distan

Modulul Biologie celular celula unitatea de baz a lumii vii

Proiectul pentru nvmntul Rural vii

care au rolul de elemente de lucru active care s asigure

Unitatea 1: Celule procariote i eucariote i propune

Unitatea 2: Tehnici de explorare celular v va permite

Unitatea 3: Ciclul i diviziunea celular. n cadrul unitii de

Unitatea 4: Organizarea i funcionarea celulei este capitolul

Unitatea 5: Comunicare celular i semnalizare v va fi

viii Proiectul pentru nvmntul Rural

Parcurgerea i analiza acestora v va fi foarte util n nelegerea

Unitatea 6: De la celul la organism este foarte important

Criterii de Evaluare: nivelul de cunoatere a coninutului i

n educaia la distan o importan deosebit o au sistemele

MODALITI Fiecare unitate conine la sfrit bibliografia general care a

Proiectul pentru nvmntul Rural ix

x Proiectul pentru nvmntul Rural

Proiectul pentru nvmnt Rural 1

n cadrul acestei uniti de studiu vei putea explora conceptele care

Materialul este presrat cu teste de autoevaluare pe care v recomandm

La terminarea studiului acestei uniti de studiu, trebuie s fii capabili s:

9 Prezentai succint i clar componentele structurale ale celulei;

9 Identificai, clasificai i s caracterizai tipurile celulare (procariote,

9 Precizai conceptele generale de origine i evoluie a vieii;

9 Definii principalele funcii ale organitelor celulare.

9 Contientizai c celulele prezint grade diferite de complexitate n

9 Integrai c formarea unui organism pluricelular este rezultatul unei

2 Proiectul pentru nvmnt Rural

Evaluarea pe parcurs - Testele de autoevaluare (TA)

Proiectul pentru nvmnt Rural 3

1.1. Concepte Obiectivul biologiei celulare este de a nelege derularea