Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Cuprins
1. Introducere
Procariote
Eucariote
Dimensiuni
specifice
~ 110 m
~ 10100 m
Tipul de nucleu
Regiunea
nucleoidului;
Nucleu tipic cu dubl membran
fr nucleu tipic
DNA
Molecule liniare
proteine histonice
Sinteza
ARN/Proteinelor
Cuplate n citoplasm
Sinteza
ARN
n
nucleu,
sinteza proteinelor n citoplasm
Ribosomii
50S+30S
60S+40S
Structura
citoplasmei
Micarea celular
flageli
flagelin
Mitocondrii
fr
Cloroplaste
fr
n alge i plante
Organizarea
Unicelulare
Diviziunea celular
Fisiune binar
Mitoz; Meioz
formai
(cromozomi)
cu
n care are loc biogeneza ribozomilor. Au fost studiate organitele celulare: lizosomii se
desprind din aparatul Golgi i conin hidrolaze cu rol n digestia celular, peroxisomii n
detoxifierea celular, aparatul Golgi n procesarea lipidelor i proteinelor sintetizate de
celul, mitocondriile genereaz energia necesar celulei, capabile de autoreplicare,
centrozomul cu doi centrioli, este centrul de organizare microtubular, vacuolele care sunt
organite de depozitare. Cartea parcurge n mod foarte selectiv toate aceste aspecte, inevitabil
pentru un domeniu att de vast i n continu expansiune cum este biologia celular i
molecular.
10
Celula este compus dintr-un set restrns de elemente chimice, dintre care
patru: C, N, O, H alctuiesc structuri care reprezint aproximativ 99% din greutatea unei
celule vii. Cea mai abundent substan chimic din celulele vii este apa, care reprezint 70%
din greutatea acestora i este mediul n care se desfoar majoritatea reaciilor intracelulare,
n dependen de proprietile speciale ale moleculelor de ap: caracterul polar, capacitatea de
a forma legturi de hidrogen i tensiunea superficial mare.
n celule predomin elementele chimice uoare, solubile n ap. Atomul de carbon
predomin n structura chimic a celulelor, are o mas atomic mic (12), dar formeaz patru
legturi covalente puternice cu ali atomi, genernd un numr infinit de mare de molecule
simple pn la extrem de complexe (pot conine pn la 30 de atomi de C) . N, O, H au de
asemenea mas atomic mic (14, 16, 1) i sunt capabili de a forma legturi covalente
puternice. Viaa este posibil datorit combinaiei dintre stabilitatea legturilor covalente n
condiiile fiziologice i capacitatea catalizatorilor biologici (denumii enzime) de a rupe i
reface aceste legturi covalente n mod controlat, specific n anumite molecule. Setul de
molecule cu funcia biologic specific fiecreia dintre ele, odat stabilit n celula ancestral,
s-a conservat, cu variaii, de-a lungul bilioanelor de ani de evoluie celular.
Cteva combinaii simple de atomi cum este gruparea metil, hidroxil, carboxil i
amino sunt larg rspndite n moleculele biologice. Aceste grupri au proprieti fizice i
chimice care determin caracteristicile moleculelor din care fac parte, determinante pentru
funciile moleculare din celul. Unele dintre aceste molecule sunt molecule mici, libere n
soluie, n mediul intracelular, unde o parte din ele formeaz o categorie de intermediari din
care are loc sinteza macromoleculelor, altele sunt intermediari eseniali n cile metabolice
sau compui de nmagazinare a energiei. Aceste molecule organice mici reprezint o zecime
din totalul moleculelor organice din celul, dar sunt foarte multe, de ordinul a o mie de tipuri
diferite, ns fiind sintetizate din i degradate n compui comuni, avnd caracteristici chimice
comune, pot fi clasificate n patru clase de molecule organice mici: monozaharide, acizi grai,
aminoacizi i nucleotide. Cele mai simple glucide, monozaharidele, sunt compui cu formula
(CH2O)n, unde n=3-7. Glucoza, de exemplu are formula C6H12O6. Monozaharidele exist sub
form liniar, dar n soluii monozaharidele cu 5 sau 6 atomi de carbon pot forma un inel
heterociclic tip furan-pentaciclu sau piran-hexaciclu. n forma liniar, poate aprea
interaciunea gruprii aldehidice sau cetonice cu o grupare hidroxil a aceleiai molecule,
pentru a forma heterociclul. Carbonul gruprii aldehidice sau cetonice poate lega un carbon
ce poart o grupare hidroxil a altui monozaharid, formnd un dizaharid. Adiia mai multor
monozaharide n acelai mod conduce la formarea macromoleculelor polizaharidice.
Pentozele, monozaharide cu 5 atomi de C cuprind ribozele, componentele ribonucleotidelor i
acizilor ribonucleici i dezoxiribozele, componente ale dezoxiribonucleotidelor i acidului
dezoxiribonucleic. Hexozele sunt monozaharide cu 6 atomi de carbon i ar fi de menionat
glucoza, care n form liber este o surs vital de energie, energia i caracterul reductor
sunt nmagazinate apoi sub form de compui intermediari (ATP i respectiv, NADH).
11
Proteinele sunt compui macromoleculari, formai din mai multe lanuri polipeptidice,
fiecare lan polipeptidic fiind alctuit din cteva zeci pn la cteva sute de AA. Proteinele
reprezint 55-85% din greutatea uscat a celulei, pot fi clasificate dup structura chimic,
funcia biologic, solubilitate, forma i mpachetarea molecular, numrul catenelor
polipeptidice. Dup structura chimic, sunt proteine simple (holoproteine), care cuprind
scleroproteinele- colageni, elastine, keratine, sferoproteine- albumine, globuline, protamine,
histone, gliadine, gluteline i heteroproteine sau proteine conjugate- metaloproteine (conin
fier, cupru, zinc, mangan, cobalt, molibden, magneziu, cu rol de depozitare sau de transport al
acestor metale sau enzime), fosfoproteine, lipoproteine cu grupare prostetic AG, gliceride,
fosfolipide, colesterol, nucleoproteinele, cromoproteinele porfirinice (hemoglobina,
citocromii, citocromoxidaza, catalaza, peroxidaza), neporfirinice (rodopsina, flavoproteinele)
i glicoproteinele care au ca grupare prostetic glucide (monozaharide, acidul glucuronic,
aminoglucide- glucozamina, galactozamina, derivai ai monozaharidelor- acidul neuraminic,
sialic). Glicoproteinele acide, cu vscozitate mare, sunt componente eseniale ale esutului
conjunctiv: mucoproteinele cu acid mucoitinsulfuric, condroproteinele cu acid
condroitinsulfuric, hialoproteinele cu acid hialuronic, sialoproteinele cu acid sialic.
Glicoproteinele neutre se gsesc n plasma sanguin (haptoglobina, factorii grupelor
sanguine, orosomucoidul), n tractul intestinal - factorul intrinsec cu rol n absorbia
vitaminei B12, n constituia unor enzime (transferaze), n constituia unor hormoni (LH, FSH,
TSH). Proteinele ndeplinesc urmtoarele funcii biologice: formeaz structuri de rezistencolagen, keratina, sunt proteine contractile- actina, miozina cu rol n contracia muscular,
catalizeaz reacii biochimice- enzimele, transport oxigenul- pigmenii respiratori
(hemoglobina, mioglobina), transport informaie- hormonii proteici, recepioneaz
informaie- receptorii membranari, intervin n mecanismul imun- imunoglobulinele, sistemul
complement, regleaz expresia genic- represorii, activatorii, factorii de reglare, histone, pot
fi substane toxice- toxinele bacteriene.
Nucleotidele sunt unitile structurale fundamentale ale acizilor nucleici, fiind
alctuite dintr-o baz azotat purinic sau pirimidinic, o pentoz (riboza- constituent al ARN
i dezoxiriboza- constituient al ADN) i acid fosforic.
Nucleotidele ndeplinesc urmtoarele funcii biologice: rol n metabolismul energetic,
ATP fiind cea mai important form de nmagazinare a energiei, accesibil direct celulei. Ali
compui macroergici sunt: GTP, CTP, UTP, etc.; sunt mediatori fiziologici, AMP ciclic este
,,al doilea mesager" n mecanismul de aciune al hormonilor nesteroizi, rol de ,,al doilea
mesager" are i GMP ciclic, ADP este mediator n agregarea plachetelor sanguine, adenozina
produce dilatarea vaselor coronariene, reglnd circulaia sanguin cardiac; prin
policondensarea nucleotidelor se formeaz acizii nucleici; intr n structura unor coenzime:
NAD(P), FAD, CoA, etc.; intr n alctuirea unor intermediari activai n metabolismul
celular: UDP-glucoza (biosinteza glicogenului), UDP-galactoza (biosinteza glicoproteinelor),
CDP-colina i CDP-colamina (biosinteza lipidelor); sunt efectori alosterici, regleaz
activitatea unor enzime.
Acizii nucleici sunt macromolecule cu structur liniar (polinucleotide), formate prin
policondensarea mononucleotidelor, legtura dintre nucleotide fiind format prin esterificarea
gruprii hidroxi din poziia 3 a pentozei cu restul fosforic din poziia 5 a nucleotidului
urmtor. n funcie de natura pentozei, acizii nucleici se clasific n acid ribonucleici care
13
conin riboz i acid dezoxiribonucleici, care conin dezoxiriboz. Bazele azotate ale ADN
sunt: adenina, citozina, guanina i timina, iar ARN conine: adenina, citozina, guanina i
uracilul.
ADN este purttorul informaiei ereditare, alctuiete genomul tuturor organismelor
procariote i eucariote, precum i al dezoxivirusurilor. Cantitatea de ADN din celulele unei
specii este constant. La procariote, ADN este localizat n cromozomul bacterian dar i
extracromozomal, n episomi i plasmide. La eucariote, ADN se gasete preponderent n
nucleu, este ADN cromozomial i n cantiti mici n mitocondrii. Cu ct organismele sunt
mai evoluate, cantitatea de ADN este mai mare: la dezoxiribovirusuri 5x10-6 pg/ celul, la
mamifere 6pg/ celul. Lungimea extins a moleculei de ADN la virusurile tumorigene este de
1,5 m, iar la mamifere lungimea este de 2m. Cele 6 miliarde de nucleotide din celula
mamiferelor corespund la peste 1 milion de gene, din care doar 10% codific proteine i doar
cteva mii sunt transcrise. Structura unui cromozom conine o molecul de ADN dublu helix,
ADN monocatenar fiind prezent n structura unor dezoxiribovirusuri.
ARN sunt clasificai n trei tipuri majore: ARN mesager (2-4% din totalul de ARN
celular), ARN de transfer (16-18%), ARN ribozomal (80%), la care se adaug ARN nuclear
heterogen, ARN viral i ARN viroidal. ARNm reprezint o copie a catenei codogene a ADN,
ARNt este localizat cu precdere n citosol i are rolul de a transporta aminoacizii din citosol
la ribozom n cursul biosintezei proteinelor. Exist peste 60 de specii moleculare de ARNt ,
fiecrui AA din cei 20 corespunzndu-i cel puin unul sau mai multe tipuri de ARNt. ARN
ribozomal este reprezentat la eucariote de ARNr 5S, ARNr 5,8S, ARNr 28S n subunitatea
ribozomal mare i de ARNr de 18S n subunitatea ribozomal mic. ARN nuclear heterogen
este reprezentat de un ansamblu format din ARN premesageri, ARN ribozomali imaturi, alte
specii de ARN. Moleculele mici de ARN nuclear i nucleolar formate din 100-180
nucleotide, particip la reglarea fenomenului de transcripie. ARN viral este o molecul
monocatenar liniar sau circular sau dublu catenar liniar.
n celule se gsesc i alte elemente chimice puin abundente (0,02-0,1%): P, S, Cl, Na,
K, Ca, Mg i oligoelemente (<0,02%): Fe, Cu, Zn, Se, ns lipsa acestor elemente este
puternic resimit de organism, determinnd afeciuni severe. Substanele minerale se gsesc
n organism sub form disociat (cationii de exemplu Na+, K+, Mg2+, Ca2+ i anionii cum sunt
Cl-, HCO3-, NO32-, SO42-, PO43- de care depinde presiunea osmotic, echilibrul acido-bazic i
interaciunea enzimatic) sau n combinaii cu proteine.
14
15
Figura 2. Bistrat fosfolipidic n care atomii unei molecule fosfolipidice sunt reprezentate ca
sfere (imagine prelucrat din http://courses.washington.edu/conj/membrane/bilayer.htm)
Cele mai numeroase fosfolipide membranare sunt fosfogliceridele. Ele sunt formate
dintr-un schelet de glicerin, prin esterificarea a dou grupri hidroxil din structura glicerinei
cu doi acizi grai i a celei de-a treia cu acid fosforic. Gruparea fosfat la rndul ei, leag
diferite tipuri de molecule, formndu-se regiunea cap hidrofil a diferitelor tipuri de
fosfogliceride: fosfatidiletanolamine, fosfatidilserina, fosfatidilcolina, fosfatidilgicerol,
16
Figura 4. Structura general a unui sfingolipid. Structura specific a unei molecule depinde
de tipul gruprii R2 i de lungimea lanului hidrofob al acidului gras R1. (imagine prelucrat din
http://www.britannica.com)
17
3.1.2.2.Colesterolul
Raportul molecular colesterol:fosfolipide n membranele celulare este de 1:1.
Molecula de colesterol se insereaz ntre fosfolipidele membranare, orientndu-se cu
gruparea hidroxil n vecintatea capului polar al fosfolipidelor. Inelul steroidic este o
structur rigid, plan, care interacioneaz cu lanul hidrocarbonat adiacent capului polar,
lsnd restul cozilor hidrofobe ale acizilor grai libere, flexibile. Colesterolul moduleaz
proprietile bistratului lipidic, intensificnd proprietatea de barier impermeabil fa de
moleculele mici solubile n ap, influeneaz fluiditatea membranei, previne interaciunea
lanurilor hidrocarbonate ale acizilor grai din structura lipidelor membranare.
3.1.2.3.Glicolipidele membranare
Glicolipidele membranelor celulare sunt specifice pentru specie, sunt de asemenea
tisular-specifice i reprezint 5% din moleculele lipidice ale monostratului extern. Conin un
cap polar format din unul sau mai multe resturi glucidice, ataate la o structur ceramidic.
De exemplu, n structura galactocerebrozidelor, sfingozina mpreun cu acizii grai formeaz
o structur ceramidic de care sunt ataate resturi de galactoz, iar gangliozidele conin unul
sau mai multe resturi de acid sialic (acid N-acetilneuraminic) care imprim acestor molecule
ncrctur negativ. n consecin, gangliozidele particip la construcia molecular a
canalelor ionofore i la mecanismul de transmitere a informaiei de la suprafaa celulei
(semnalizarea celular).
Clasele de lipide membranare, datorit structurii i proprietilor lor imprim
membranelor anumite caracteristici:
18
coninutul n lipide neutre, iar cu capetele hidrofile spre mediul apos intracelular. Aceast
organizare este ntlnit n special n adipocite.
Figura 6. Tipuri de proteine ale membranei celulare (imagine prelucrat din ,,The Cell,
Geoffrey M. Cooper)
21
se leag doar de celule care prezint gangliozide GM1 pe suprafaa celular (celulele
epiteliului intestinal).
Se remarc localizarea proteinelor membranare, mai precis orientarea strict, specific
pe faa exoplasmic sau citosolic a unor domenii ale moleculelor proteice. De exemplu,
glicoproteinele au lanurile oligozaharidice orientate pe faa extern a membranelor celulare
i pe faa citosolic a membranelor reticului endoplasmic i aparatului Golgi.
Localizarea asimetric a lipidelor i proteinelor determin delimitarea specific a unor
domenii structural-funcionale ale membranelor celulare: un exemplu ilustrativ este domeniul
apical, respectiv laterobazal al membranei celulelor epiteliului intestinal.
3.2. Funcia de transport a membranelor celulare
Existena celulelor depinde de o permanent comunicare cu mediul nconjurtor, iar
un rol fundamental n aceast comunicare o are proprietatea de permeabilitate selectiv a
membranelor celulare. Consecina este meninerea homeostaziei celulare, adic asigurarea
concentraiilor intracelulare relativ constante ale substanelor organice, ionilor, metaboliilor,
meninerea unei activiti metabolice stabile i reglarea volumului celular. Permeabilitatea
selectiv este influenat de metabolismul celular, condiiile din mediul extracelular i tipul
de esut.
Transportul diferitelor substane prin membran depinde de caracteristicile substanei
transportate (greutatea molecular, forma, dimensiunile, gradul de ionizare, gradul de
hidratare) i de compoziia chimic a membranelor, clasificndu-se n:
Transport de ioni i molecule mici prin mecanisme de difuzie sau mecanisme n care
sunt implicate proteine membranare.
Transport de macromolecule i particule prin vezicule delimitate de membrane.
Dup consumul de energie metabolic nmagazinat n ATP, transportul prin
membranele celulare se clasific n transport pasiv i
transport activ.
3.2.1. Transportul pasiv
Transportul moleculelor i ionilor prin membrana celular n sensul gradientului de
concentraie sau electrochimic se numete transport pasiv. Decurge fr consum de energie
inmagazinat n ATP, cteodat chiar cu pierdere de energie liber.
23
Figura 8. Transportul pasiv prin difuzie facilitat de proteinele canal sau de permeaze
(imagine prelucrat din http://www.brooklyn.cuny.edu)
Figura 9. Proteinele canal ionice cu poart (imagine prelucrat din ,,Molecular Biology of the
Cell, Bruce Alberts et al.)
26
Figura 10. Modul de aciune al filtrului ion-selectiv care permite trecerea selectiv a ionilor n
funcie de dimensiunea lor: distana dintre ionul de potasiu i oxigenii carbonil ai filtrului este
aceeai cu distana dintre ionul de potasiu i atomii de oxigen ai apei care nconjur ionii cnd
acetia sunt n mediul apos (nainte de intrarea n filtru).Ionii de sodiu sunt de dimensiuni mai mici,
distana dintre aceti ioni i oxigenul carbonil al filtrului este mai mare dect distana dintre ionii de
sodiu i atomii de oxigen ai apei, deci ei nu pot interaciona cu oxigenii carbonil ai filtrului, rmn n
soluie apoas nefiind preluai de proteina canal cu filtru selectiv pentru potasiu.(imagine prelucrat
din http://www.aquaporins.org/aquaporins/ion.htm)
sunt impermeabile pentru ionii de hidrogen. Cei mai muli H+ sunt prezeni n celul sub
form de H3O+, ruperea i desfacerea legturilor de H dintre moleculele de ap decurgnd
extrem de rapid. Aquaporinele au resturi de asparagin plasate strategic, care se leag de
atomul de oxigen al moleculei de ap. Doarece ambele valene ale atomului de oxigen sunt
ocupate, ele nu mai sunt disponibile pentru a lega protoni. Au fost identificate 13 tipuri de
aquaporine n membranele celulelor umane, membri ai unei familii de proteine majore
intrinseci de membran, care transport apa n i din celul, prevenind trecerea ionilor i altor
substane. Prima aquaporin descoperit a fost AQP1 din membrana eritrocitului, a crei
existen a fost raportat de profesor dr. Gheorghe Benga de la Universitatea de Medicin i
Farmacie ,,Iuliu Haieganu din Cluj-Napoca, n 1986. ncercrile de izolare ale antigenului
Rh, evideniau constant o protein asociat de 28 kDa, necunoscut, cu funcie nedeterminat,
dar cu prezen constant n membrana hematiilor i n membranele celulelor tubilor renali.
Peter Agre este cel care izoleaz i caracterizeaz aceast protein cu funcie de transport al
apei, dup ce mult timp a fost suspectat un mecanism adiional de transport al apei care ar
explica permeabilitatea mare pentru ap a membranelor unor tipuri de celule, permeabilitate
care nu poate fi explicat prin simpla osmoz. Pentru activitatea sa de caracterizare i
demonstarare a existenei aquaporinelor, Peter Agre primete premiul Nobel n 2003.
Aquaporinele sunt formate din 6 domenii -helix transmembranare care determin 5 bucle
interhelicale (A-E) care formeaz domeniile extracelulare i citosolice ale proteinei. Buclele
B i E sunt buclele hidrofobe care conin un motiv nalt conservat Asn-Pro-Ala (NPA) care
prin suprapunere n poriunea central hidrofob a bistratului lipidic, formeaz una din cele
dou constricii ale aquaporinei n form de clepsidr. Cealalt constricie, mai ngust, este
filtrul selectiv ar/R (aromatic/Arg), care slbete legturile de H dintre moleculele de ap,
permind acestora s traverseze porul ngust al aquaporinelor i s interacioneze cu resturile
de arginin ncrcate pozitiv datorit valenei negative a oxigenului. n acelai timp este
oprit trecerea protonilor prin aceast protein-canal ( ionii hidroniu H3O+ sunt ncrcai
pozitiv).
AQP1 se gsete n membrana bazolateral i apical a celulelor epiteliale din tubii
contori proximali, ansa lui Henle i vasa recta, n membranele hematiilor, endoteliilor
vasculare i tractului gastrointestinal. AQP2 se gsete n ductul colector principal al
rinichilor i este controlat de vasopresin, mutaii n gena AQP2 determin diabetul insipid.
AQP2 apare n membrane intracelulare. Tipurile 3 i 4 sunt rspunztoare de reabsorbia apei
la nivelul ductelor colectoare medulare din rinichi. Tipurile 3, 7, 9 i 10 sunt
aquagliceroporine, canale care transport glicerol i ap. Dac aquaporinele au un rol crucial
n meninerea homeostaziei apei, rolul lor fiziologic i patologic ca transportori ai glicerolului
nu este elucidat deplin. Adipocitele sunt sursa major de glicerol, substrat pentru
gluconeogeneza hepatic. Aquaporinele 7 i 9 (AQP7, AQP9) sunt canale pentru glicerol n
adipocite i hepatocite, care menin balana optim ntre eliberarea glicerolului din adipocite
i preluarea acestuia n hepatocite.
28
29
Figura 13. Reglarea concentraiei intracelulare de Ca++ prin activitatea Ca++ ATPazelor din membrana
celular i sarcolem (imagine prelucrat din http://www.rpi.edu/dept/bcbp/molbiochem)
30
Figura 14. Comparaie structural a ATPazelor de tip V i F. V-ATPazele hidrolizeaz ATP prin
domeniul periferic V1 i realizeaz transportul de protoni prin domeniul transmembranar
integral V0. F-ATPazele (sau ATP sintetazele) funcioneaz n sensul sintezei de ATP, prin cuplarea
micrii protonilor n direcie opus prin F0 cu sinteza ATP in F1. Ambele enzime opereaz prin
mecanism rotaional.
Clasa ATPazelor de tip ABC se remarc printr-un numr mare de molecule ce aparin
acestei clase, implicate n mecanisme cu semnificaie n domeniul clinic. Dac ABC
ATPazele bacteriene realizeaz importul de ioni, aminoacizi, peptide, proteine, mono- i
polizaharide necesare acestor celule, ATPazele ABC ale eucariotelor sunt specializate pentru
export. O astfel de ATPaz este proteina de multirezisten la medicamente (,,multidrug
resistance protein" MDR ) care este supraexprimat n celulele tumorale umane, determinnd
rezisten simultan la o varietate de medicamente citotoxice larg utilizate n chemoterapie,
40% din cancerele umane avnd rezisten multimedicamentoas. ABCATPazele din
membrana reticulului endoplasmic transport n lumen peptide provenite din degradarea
citosolic a proteinelor virale sau microbiene. Aceste peptide ajung din lumenul RE pe
suprafaa celular fiind recunoscute de limfocitele T citotoxice, care n acest mod suprim
celulele infectate.Un alt reprezentant al acestei clase este proteina CTFR (,,cystic fibrosis
transmembrane conductance regulator"), care este un transportor al ionilor de clor prin
31
Figura
15.
Simportul
http://www.biochem.arizona.edu)
Na+-glucoz/aminoacizi
(imagine
prelucrat
din
Micarea Na+ din mediul extracelular n celule este determinat de dou fore:
gradientul de concentraie (concentraia Na+ este sczut n mediul intracelular fa de cel
extracelular) i de potenialul de membran (faa citoplasmic a membranelor celulare fiind
ncrcat negativ n raport cu faa exoplasmic). Pentru fiecare doi ioni de sodiu transportai
32
Figura 16. Ca++ este transportat n celul prin canalele pentru Ca++ (1) sau prin
antiportul Na+-Ca++(2), iar scderea concentraiei intracelulare a calciului se realizeaz prin
Ca++ATPaza din membrana plasmatic (3) i antiport Na+-Ca++ (2), dar i prin sechestrarea Ca++ n
reticulul sarcoplasmic, nucleu i mitocondrie sau de ctre proteine din citosol-calmodulina,
calsequestrina. Reticulul sarcolasmic, ca i nveliul nuclear posed Ca++ATPaz, iar transportul Ca++ n
mitocondrie are loc prin transportor de tip uniport (imagine prelucrat din http://ehp.niehs.nih.gov)
dependent doar de gradienii de concentraie ai celor doi anioni pe cele dou fee ale
membranei. CO2 eliberat din celule ajunge n sngele capilar, difuzeaz prin membrana
eritrocitului i este transformat n bicarbonat solubil n ap (anionul HCO3-), reacie catalizat
de anhidraza carbonic:
Figura 17. Transportul CO2 de la esuturi la plmni mediat de antiportul Cl/HCO3 (imagine
prelucrat din ,,Mollecular Cell Biology", H.Lodish et al.)
La nivelul capilarelor pulmonare, procesul este invers. CO2 difuzeaz din eritrocite,
scderea concentraiei citosolice a CO2 determin activarea anhidrazei carbonice care
34
35
Figura 18. Complex de fuziune ntre membrana veziculei de exocitoz i membrana-int (imagine
prelucrat dup autorul Danko Dimchev Georgiev, M.D.)
b. Pinocitoza sau endocitoza de faz fluid este un proces constitutiv, comun tuturor
celulelor, prin care ptrund n celule molecule n soluie, procesul fiind direct proporional cu
concentraia moleculelor n fluidul extracelular. Veziculele de pinocitoz fuzioneaz cu alte
vezicule: endosomi i lizosomi.
Calea endocitozei const din compartimente distincte care internalizeaz molecule i
le recicleaz spre membrana plasmatic (endosomii timpurii i endosomii de reciclare) sau le
sorteaz spre a fi degradate (endosomii trzii i lizozomii). Endosomii timpurii sunt localizai
la periferia celulei i recepioneaz veziculele internalizate din membrana celular.
Au structur tubulo-vezicular i pH acid, datorit pompelor de H+ din structura membranelor
lor. Sunt organite de sortare n care receptorii disociaz de liganzi n mediu acid, receptorii
fiind reciclai n membrana celular via tubulii endosomali, sau de sortare spre calea
transcitozei i spre endosomii trzii. Endosomii trzii preiau particule sau molecule de la
endosomii timpurii ai cii endocitozei, de la reeaua trans-Golgi n calea biosintetic sau de la
fagosomi n calea fagocitozei, reprezentnd ultima etap n procesul de sortare nainte de a
ceda coninutul lizosomilor. Lizosomii sunt ultimul compartiment al cii de endocitoz, fiind
principalul compartiment hidrolitic al celulei cu un pH acid (4,8) i coninut ridicat de enzime
hidrolitice.
38
Figura 20. Calea endocitozei: EV- vezicul de endocitoz, EE- endosom timpuriu, de sortare
(,,early endosome), LE- endosom trziu (,,late endosome), PA- preautofagosom, EA-autofagosom
timpuriu, autofagosom trziu, LY-lizosom, G-reeaua transGolgi. (imagine prelucrat din
http://www.cell-research.com)
39
40
41
42
3.3.1.1. Jonciunile de adeziune intercelular sunt structuri la nivelul crora sunt ancorate
filamente de actin dispuse n mnunchiuri. O jonciune de aderen este definit ca o
jonciune celular a crei fa citoplasmic este ataat citoscheletului de actin. Aceste
jonciuni formeaz o band de adeziune continu (,,zonulae adherens"), caracteristice
celulelor epiteliale. Astfel de structuri joncionale se gsesc i n celule non-epiteliale, dar ele
nu formeaz benzi de adeziune continu, de exemplu n cardiomiocite. Filamentele de actin
interacioneaz cu structurile joncionale prin intermediul unor proteine de ataare: vinculina
i -actinina. Regiunea ,,cap" a vinculinei se leag de E-caderin prin intermediul -, - i
-cateninelor. Regiunea ,,coad" a vinculinei leag lipidele membranare i filamentele de
actin. Domeniul extracelular al caderinelor interacioneaz cu domeniile extracelulare ale
glicoproteinelor omoloage din membranele celulelor nvecinate.
Jonciunile de aderen sunt compuse din urmtoarele proteine:
Caderinele, proteine transmembranare care formeaz homodimeri n manier
Ca-dependent cu moleculele de caderin ale celulelor adiacente.
Proteinele p120 denumite delta-catenine leag regiunea juxtamembranar a caderinei.
-catenina sau -catenina (plakoglobina) leag caderina la nivelul regiunii ce conine
situsul specific de legare al cateninei.
- catenina leag caderina indirect, prin -catenin sau plakoglobin.
Figura 23. Principalele interaciuni ntre proteinele structurale ale jonciunilor de aderen.
Filamentele de actin sunt ataate prin -actinine i la membranele celulare prin vinculin.
Domeniile ,,cap ale vinculinei sunt asociate cu E-caderinele prin , , -catenine. Domeniul ,,coad
al vinculinei se leag la lipidele membranare i la filamentele de actin. (imagine prelucrat din
http://herkules.oulu.fi)
E-caderina (epitelial) cea mai bine studiat, este alctuit din 5 domenii repetitive
(EC1 ~ EC5) n domeniul extracelular, un domeniu transmembranar i domeniul intracelular
care leag p120 catenina i beta-catenina. Domeniul intracelular conine o regiune nalt
fosforilat care leag beta-catenina, care la rndul su leag alfa-catenina, cu rol n reglarea
citoscheletului de actin. E-caderina este exprimat i fosforilat n celule n cursul
43
44
Figura 25. Domeniul extracelular a desmosomului se numete Domeniu central extracelular (ECD)
sau Desmoglea n care desmogleina(Dsg) interacioneaz cu desmocolina(Dsc). Pe faa citoplasmic
se afl Placa dens extern (ODP) i Placa dens intern (IDP), strbtute de moleculele de
desmoplachin. La nivelul ODP, domeniul citoplasmic al celor 2 caderine desmosomale
interacioneaz cu desmoplachina (Dp) prin intermediul plakoglobinei (Pg) i plakofilinei (Pkp). La
nivelul IDP, desmoplachina interacioneaz cu filamentele intermediare ale celulei.(imagine
prelucrat din http://www.uchsc.edu)
Figura 26. Structura unui complex HD de ancorare: filamentele de keratin sunt strns asociate plcii
interne a hemidesmosomului care este paralel cu placa extern de pe membrana celular. Sub
placa extern, filamente de ancorare traverseaz lamina lucida spre lamina densa.(imagine
prelucrat din www.nature.com)
46
3.3.2. Jonciunile de ocluzie sau ,,zonulae occludens" , mai sunt denumite jonciuni strnse
sau impermeabile (,,tight junctions") sunt prezente la nivelul polului apical al celulelor
epiteliale ce delimiteaz lumenul unor caviti. Sunt evideniate n M.E. ca puncte de contact
sau de sudur ale membranelor celulelor adiacente. Sunt formate dintr-o reea ramificat de
catene strnse, fiecare caten fiind independent. Eficiena acestor jonciuni n a preveni
difuzia ionilor crete exponenial cu numrul de catene componente. Fiecare caten este
format dintr-un ir de proteine transmembranare, care interacioneaz direct la nivelul
domeniilor extracelulare. Speciile proteice majore sunt claudina i ocludina, asociate cu
proteine membranare periferice localizate pe faa citoplasmic a membaranei plasmatice, care
ancoreaz aceste catene proteice de citoscheletul de actin, unind n acest fel citoscheletul de
actin al celulelor adiacente.
Figura
28.
Structura
cellbiology.med.unsw.edu.au)
jonciunilor
de
ocluzie.
(imagine
preluat
din:
Jonciunile formate din dou hemicanale identice sunt denumite homotipice, iar cele
formate din hemicanale diferite sunt heterotipice. Hemicanalele formate din conexine
identice sunt homodimerice, cele formate din conexine diferite sunt heterodimerice.
Compoziia chimic influeneaz funciile acestor canale, care sunt:
de comunicare electric ntre celule, diferitele subuniti de conexin pot mprti
diferite conductane electrice
de comunicare chimic ntre celule, prin transportul moleculelor mici, cum sunt
mesagerii secundari (IP3, Ca2+), diferitele subuniti de conexin pot prezenta selectivitate
diferit pentru anumite molecule mici. Dei diferitele conexine determin dimensiuni diferite
48
ale porilor, cu selectivitate electric diferit, toate aceste canale permit n general trecerea
moleculelor mai mici sau egale cu 1000 Da. Nu este permis trecerea macromoleculelor:
proteine, acizi nucleici.
asigur controlul transportului moleculelor prin spaiul intercelular, confer
caracter ordonat, nltur posibilitatea ,,scurgerii" de molecule n acest apaiu.
Funciile menionate asigur cuplarea electric i metabolic a celulelor prin schimburi
electrice i chimice prin hemicanale i are implicaii n homeostazie.
Potenialul de aciune este rspndit n miocard de la celul la celul determinnd contracia
ritmic a cordului. La nivelul anumitor sinapse din creier, jonciunile de comunicare permit
transmiterea potenialului de aciune, ntr-un interval mai scurt de timp dect cel necesar
neurotransmitorilor. Defecte ale conexinelor ce compun jonciunile la nivelul esutului
nervos duc la degenerri ale substanei albe n manier caracteristic unor afeciuni cum este
boala Pelizaeus-Merzbacher i scleroza multipl. Neuronii din retin sunt cuplai prin
jonciuni permeabile care apar ntre aceleai tipuri de celule dar i ntre celule diferite.
n timpul travaliului, jonciunile permeabile dintre celulele musculaturii netede a uterului
permit contracii coordonate, puternice necesare expulziei fetale.
Funcia de transport este dublat de o funcie de adeziune a celulelor adiacente n timpul
dezvoltrii embrionare, cu implicaii n difereniere, ex.: migrarea neuronal n neocortex.
Defectele genetice ale proteinelor structurale ale jonciunilor permeabile sunt implicate n
boli ale pielii, deoarece acest tip de jonciuni sunt puternic implicate n procesele de
difereniere i proliferare ale acestor esuturi.
sunt supresori ai oncogenelor, s-a constatat exprimarea sczut sau lipsa total a
acestor proteine n celule tumorale cu pierderea controlului proliferrii. Defecte ale
conexinelor sunt implicate n cancerul mamar, renal, esofagian, etc.
Conexinele sunt exprimate n toate tipurile tisulare cu excepia unor celule mobile
cum sunt hematiile i spermatozoizii
3.3.4. O alt categorie este adeziunea mediat de selectine ,,selected lectins", proteine de
adeziune celular care leag carbohidrai. n timpul rspunsului inflamator, stimuli ca
histamina i trombina determin mobilizarea P-selectinelor din interiorul celulelor, pe
suprafaa lor. n plus, citokinele ca TNF-alpha stimuleaz exprimarea E-selectinelor i
P-selectinelor adiionale, cteva ore mai trziu. Domeniul distal ,,lectin-like" al selectinelor
leag grupuri carbohidrat prezente n molecula glicoproteinelor cum este glicoproteina
PSGL-1 din membrana leucocitelor, care favorizeaz ptrunderea acestor celule la situsul
infeciei. Neutrofilele i eozinofilele se leag de E-selectine.
49
1.IgSF(superfamilia imunoglobulinelor)
- Ca2+independente
50
VCAM-1
,,Vascular
cell
adhesion
molecules"
PE-CAM molecule de adeziune plachetare/
endoteliale
L1-CAM molecule de adeziune din neuroni,
intervin n diferenierea i dezv. SN
CD2 de pe suprafaa LT sau NK intervin n
interaciunea cu alte molecule de adeziune
(LFA3/CD58) de pe suprafaa Mf
SIGLEC ,,sialic acid binding Ig-like lectins"
de pe suprafaa Mf., LB
Familia CTX ex.: JAM ,,junctional adhesion
molecule B" n jonciunile impermeabile ale
cel. endoteliale
ESAM ,,endothelial cell selective adhesion
molecules"
Integrina -2( CD18) este subunitatea a 3
structuri:
1.LFA-1 ,,Lymphocyte function-associated
antigen"-molecule de adeziune ale LT , LB ,
Mf, neutrofilelor la cel. prezentatoare de Ag,
are loc recrutarea lor la situsul infeciei.
2.Integrina alphaXbeta2- receptor de
complement.
3.Antigenul 1 al macrofagelor- receptor de
pe suprafaa Mf care recunosc componenta
C3b a complementului legat de suprafaa cel.
strine, declaneaz fagocitarea acestor cel.
VLA1-6 molecule de adeziune celul-celul
i de integrare a EMC cu citoscheletul
Glicoproteina IIb/IIIa sunt receptori pentru
fibrinogen ai plachetelor, intervin n activarea
plachetar
51
osteoartritei.
Cheratan sulfatul nu conine acid uronic, se gsete n cornee, cartilaje, esut osos i
n SNC unde are rol att n dezvoltare, ct i n procesul de cicatrizare a esutului nervos.
Principala component care intervine n cicatrizare este astrocitul reactiv. Astrocitele se
ataeaz de membrana bazal i mpreun cu moleculele componente ale membranei bazale,
din care fac parte i moleculele de perlecan ce conin cheratan sulfat, formeaz un nveli n
jurul esutului nervos afectat i n jurul vaselor de snge din zon, n acest fel debutnd
procesul de vindecare.
Acidul hialuronic este un polizaharid anionic nonproteoglicanic (nu formeaz
proteoglicani) lung, alctuit din mii de resturi de acid D-glucuronic i N-acetilglucozamin,
lipsite de grupri sulfat. Se gsete n esuturi epiteliale, conjunctive i n esutul nervos.
Component major al ECM al acestor esuturi, intervine n procesele de proliferare i migrare,
n cursul dezvoltrii embrionare, dar i n proliferarea celulelor tumorale fiind mediator al
tranziiei epiteliu-mezenchim al acestor celule, deoarece particip la interaciunea cu
numeroi receptori de suprafa celular de pe suprafaa celulelor care migreaz (CD44,
RHAMM i ICAM-1) mpiedicnd procesele de adeziune intercelular i intervenind n
activitatea kinazelor implicate n motilitatea celular, favoriznd deplasarea liber a celulelor.
Intervine n procesele de vindecare, n etapele de inflamaie, n formarea esuturilor de
granulaie, reepitelizare i remodelare, evenimente n care particip celulele i matricea
extracelular. Intervine n mecanismul inflamaiei, prin legarea de receptorul su specific
CD44, determin activarea limfocitelor, iar produii de degradare ai acidului hialuronic sunt
molecule care prin receptori specifici de tip ,,toll-like receptors" activeaz macrofagele i
celulele dendritice. Fibroblastele, n prezena unei concentraii crescute de HA, cresc sinteza
de citokine proinflamatorii TNF i Il8 prin mecanism mediat de HA-CD44. n esuturile de
granulaie, faciliteaz migrarea celular i organizarea matricii acestor esuturi. Este
component al lichidului sinovial, avnd rol n lubrifierea articulaiilor, i al esutului
cartilaginos, unde formeaz un nveli n jurul condrocitelor (agregate moleculare cu
agrecanul), cu rol de hidratare a structurii cartilajului, care imprim rezisten la compresie.
3.3.5.1.2.Proteinele fibrilare
Colagenul este cea mai abundent component a ECM, este i cea mai abundent
component proteic a corpului uman. Confer suport structural celulelor rezidente.
Colagenul este exportat prin exocitoz n ECM sub forma unui precursor procolagen care nu
se poate asambla n fibre n interiorul celulei. Procolagenul este clivat n matrice de o
proteaz, formndu-se moleculele de tropocolagen care se asambleaz n fibrile de colagen.
Tropocolagenul, unitatea structural a colagenului este o molecul proteic cu o lungime de
300nm i un diametru de 1,5nm, alctuit din trei lanuri polipeptidice de tip helix , cu
orientare spre stnga, nfurate unul n jurul celuilalt, formnd o structur triplu helix cu
orientare spre dreapta. Fiecare rotaie complet a triplului-helix conine trei aminoacizi,
fiecare al treilea aminoacid, orientat spre interiorul helixului, este glicina. Molecula de
colagen este bogat n prolin i lizin, n general sub form hidroxilat, gruparea hidroxil a
prolinei participnd la formarea legturilor de hidrogen care stabilizeaz acest triplu-helix, iar
gruparea hidroxil a lizinei confer moleculei capacitatea de autoasamblare n matricea
extracelular. Tropocolagenul de tip I,II,III se autoasambleaz spontan, fiecare triplu-helix
particip la formarea unei structuri suprarsucite care poart denumirea de microfibrile de
53
Figura 30. Structura fibrei de colagen: (a), (b), (c)- triplul helix de tropocolagen cu resturile de
glicin orientate spre interior; (d), (e)- zonele de ,,overlap i ,,gap; (f)- fibre de colagen n ME
54
55
Figura 31. Reeaua tridimensional a citoscheletului (electronomicrografie preluat din Svitkina et al,
1995).
56
57
Figura 33. Protofilamentele sunt constituite din subuniti dimerice de - tubulin, dispuse
dup un model helical i care polimerizeaz ordonat definind n felul aceste polaritatea
microtubulilor (capetele microtubulilor nu sunt echivalente). Imagine preluat din vbaulin.front.ru.
prin intermediul unor proteine ce alctuiesc structuri de acoperire sintetizate n cursul unor
evenimente celulare distincte, care controleaz n acest fel stabilitatea i localizarea
microtubulilor n celul. Att polaritatea celular ct i planul diviziunii celulare sunt
stabilite n acest fel. Un rol important l au proteinele asociate microtubulilor MAP cu rolul
de protejare al microtubulilor fa de dezasamblare i de a media interaciunea lor cu alte
componente celulare. Au fost izolate dou MAP n esutul nervos:
Tipul I (proteinele HMW ,,high molecular proteins) cum sunt MAP1A i MAP1B
care interconecteaz microtubulii adiaceni ai axonilor, leag microtubulii de filamentele
intermediare sau de membrana celular, controlnd aranjarea lor spaial.
Tipul II (MAP 2, 4 sau proteinele tau) care conecteaz microtubulii cu filamentele
intermediare, cu membrana plasmatic sau cu ali microtubuli. Au rol n stabilizarea
microtubulilor n timpul ntregului ciclu celular. Proteinele tau organizeaz microtubulii n
mnunchiuri, iar MAP 4 sunt importante n timpul diviziunii celulare.
4.2.1.Funciile microtubulilor sunt:
4.2.1.1. Micarea organitelor i transportul axonal. Prin microscopie optic de contrast de
faz s-a demonstrat c citoplasma celulelor vii este n micare continu, n timp de cteva
minute organitele i schimb poziia n citosol, executnd micri direcionate ce nu pot fi
confundate cu micarea brownian. Microscopul electronic a demonstrat c membranele
organitelor sunt conectate la microtubuli i c microtubulii au, alturi de microfilamentele de
actin un rol important n micrile pe care le efectueaz organitele celulare. Un exemplu de
micri rapide de-a lungul microtubulilor este transportul granulelor de pigment n celulele
melanofore.
Transportul axonal are loc de la corpul celular spre sinapsele axonice denumit
anterograd (transport de proteine i alte molecule sintetizate la nivelul corpului celular) i n
direcie opus, retrograd (veziculele conin membrane mbtrnite i proteine destinate
degradrii n lizosomii corpului celular). Mecanismul transportului axonal este explicat prin
existena unei proteine cu activitate ATP-azic, denumit kinesina, care are n structur
2 lanuri grele- situsuri de legare pentru ATP i pentru microtubuli i 2 lanuri uoare
situsuri pentru structurile delimitate de membrane(vezicule). n prezena ATP, kinesina se
mic de-a lungul microtubulului de la captul minus spre captul plus, realiznd transportul
anterograd. Explicaia const n modificrile conformaionale, alosterice ale acestor
proteine motor, cauzate de cicluri succesive de fosforilare defosforilare: legarea ATP de
protein, nsoit de trecerea de la o conformaie (1) la alta (2) a proteinei, hidroliza ATP-ului
legat cu eliberare de ADP i Pi , iar eliberarea ADP i Pi determin rentoarcerea proteinei la
conformaia sa iniial(1), procesul fiind ireversibil, ceea ce duce la transport unidirecional.
O alt protein asociat microtubulilor, denumit MAP1C sau dineina citoplasmic (cu
structur i funcie asemntoare dineinei flagelare) este responsabil de transportul in
direcia capetelor minus, deci retrograd.
59
60
Figura 35. Seciune transversal prin axonema flagelar. (Imagine preluat din www.uic.edu)
mitotic poate fi considerat ca fiind format din dou jumti numite semifusuri n care
microtubulii au o polariate bine definit: capetele minus sunt orientate spre poli, iar capetele
plus sunt orientate spre cromozomi.Microtubulii cinetocorici sunt mai stabili dect cei astrali
deoarece capetele lor plus sunt capturate i stabilizate la nivelul cinetocorilor, iar microtubulii
polari sunt i ei stabili datorit interaciunilor dintre capetele lor plus la nivelul
interdigitaiilor ecuatoriale. Numrul microtubulilor ataai de cinetocor este varibil, la om
cinetocorii au ataai 20-40 de microtubuli, n timp ce la microorganisme exist cte unul.,
care este suficient pentru a realiza micarea cromozomului.
Figura 36. Fusul mitotic alctuit din micotubuli astrali, cinetocorici i polari.
n timpul prometafazei, cromozomii sunt dispui ntmpltor ntre cei doi poli, aa
cum au rezultat n urma condensrii cromatinei i ruperii nveliului nuclear. Capetele plus
ale microtubulilor sunt captate treptat, ntmpltor i din direcii diferite, astfel nct
cromozomii execut micri de rotaie i de oscilaie ntre cei doi poli. Asocierea dintre
microtubuli i cinetocori este ntmpltoare i st la baza segregrii ntmpltoare a
cromatidelor n celulele-fiice. Deplasarea cromozomilor spre planul ecuatorial al celulei este
determinat de polimerizarea fibrelor cinetocorice. Aceste fibre au captul minus inserat n
centrozom i captul plus legat de cinetocor i stabilizat prin proteine asociate.
Experienele au evideniat faptul c cinetocorii pot transloca rapid microtubuli n
direcia capetelor minus i mai ncet spre capetele plus. Procesele de translocare sunt
dependente de starea de fosforilare a structurilor cinetocorilor, pentru c sunt dependente de
prezena proteinelor-motor, capabile de activitate ATP-azic. Cea mai cunoscut dintre aceste
proteine-motor este cea responsabil de micarea cinetocorului spre captul minus,
identificat ca o molecul de dinein, localizat att la nivelul cinetocorilor, ct i a coroanei
fibroase a cinetocorului. ns micarea direcionat spre captul plus care s-a ncercat s se
pun pe seama kinezinei, nu a putut fi demonstrat experimental, rezultatele fiind
contradictorii .
n anafaza A , ndeprtarea cromatidelorsurori devenite libere spre polii fusului de
62
63
Figura 38. Organizarea filamentelor de actin conectate prin fimbrin (marcat cu rou ) sub form
de teancuri- imaginea din stnga (dup autor: D.Hanein) i sub form de reea, n care proteina
asociat este filamina, o protein lung, cu situsuri de legare ale actinei situate la distan n lanul
polipeptidic, ceea ce determin flexibilitatea ancorrii i formarea reelei-imaginea din dreapta
(dup autor: J.Hartwig). Imagini preluate din Lodish et al. ,,Molecular Cell Biology fifth ed.)
modificarea concentraiei unor molecule semnal (PIP2) sau a ionilor de calciu n cursul
activrii unor ci de semnalizare celular. Migrarea celular prin modificarea citoscheletului
actinic este rezultatul unor semnale extracelulare.
Miozina din celulele musculare este miozina II alctuit dintr-o regiune globular prin
care se asociaz cu actina i un segment fibros. O astfel de molecul este constituit din 2
lanuri polipeptidice grele, identice, i dou perechi de lanuri uoare. Fiecare lan greu const
dintr-un cap N-terminal globular i o coad -helix sub forma unei baghete, aceasta
coninnd i captul C-terminal. Cozile -helix se rsucesc una n jurul celeilalte formnd o
coad rigid, cu dou articulaii, una ntre cap i coad i una la nivelul cozii. n celulele
musculare, 300-400 de dimeri miozinici se asociaz pentru a forma un agregat bipolar
denumit filament gros de miozin. Miozina are activitate ATP-azic, care este de 200 de ori
mai mare n prezena microfilamentelor de actin.
Figura 40. Structura unui sarcomer. Interaciunea filamentelor groase de miozin cu filamentele
subiri de actin n banda A. Imagine preluat din http://respiratory-research.com.
Filamentele de actin sunt ancorate prin capetele (+) la discurile Z, interaciunea fiind
stabilizat prin proteine asociate. Astfel, -actinina este concentrat n regiunea discurilor Z
i interconecteaz filamentele de actin. Filamentele de miozin sunt meninute ntr-un
aranjament hexagonal regulat prin proteine asociate. Exist n miocite proteine cu molecule
extrem de mari, titina i nebulina, care formeaz o reea de fibre proteice asociate
filamentelor de actin i miozin. Moleculele titinei se extind de la discurile Z la filamentele
groase de miozin, stabiliznd poziia central a miozinelor, fiecare filament de miozin fiind
nconjurat de filamentele de actin n zona de suprapunere. Moleculele de nebulin sunt
asociate filamentelor de actin i se extind de la un capt al filamentelor de actin la cellalt
capt. Miofibrilele sunt interconectate prin reea de filamente intermediare denumite desmin
i ancorate la membrana celular prin proteine flexibile, cum este proteina care leag actina,
denumit distrofin.
4.3.1. Mecanismul molecular al contraciei musculare. Contracia muscular presupune
scurtarea muchiului i a elementelor contractile prin alunecarea filamentelor de actin peste
filamentele de miozin. Limea benzii A rmne constant n timp ce discurile Z se apropie
cnd muchiul se contract. Deci, banda I devine mai ngust.
Contracia muscular este rezultatul interaciunii dintre capetele de miozin i
66
filamentele adiacente de actin: ntr-o prim etap (A) miozina leag ATP, n prezena ionilor
de calciu, cu slbirea legturii dintre miozin i actin i punerea n libertate a capului
miozinei. n etapa a doua (B), are loc hidroliza ATP la ADP i Pi, care rmn legai de
miozin, ceea ce determin o modificare mic a energiei libere, n schimb este generat o
stare energizat a miozinei, al crui cap se rotete prin regiunea de articulaie, devenind
perpendicular pe filamentul de actin. n etapa a treia (C), capul miozinei, n prezena ionilor
de calciu, elibereaz Pi i se leag de filamentul adiacent de actin. n etapa a patra (D), capul
miozinei pivoteaz la nivelul articulaiei, micnd filamentul de actin fa de miozin, ceea
ce are ca efect contracia. n timpul acestei etape, unghiul de ataare al capului miozinei se
schimb de la 90 la 45 , iar ADP este eliberat. Eliberrile de ADP i Pi sunt etape puternic
exergonice care poteneaz pivotarea capului miozinic. Cu fiecare ciclu care decurge cu
hidroliza unei molecule ce ATP per cap de miozin, filamentul de actin este micat pe o
distan de aproximativ 7 nm, are loc o pire a capetelor de miozin n aceeai direcie,
spre captul plus al filamentelor de actin.
Fiecare filament gros are aproximativ 500 capete de miozin, iar ciclul descris mai sus
se repet de 5 ori /sec. n contracia rapid pentru fiecare cap, rezultnd o vitez de alunecare
de 15 m/sec. a filamentelor de actin pe filamentul gros de miozin. Legarea de actin a
complexului miozin ATP este declanat de creterea concentraiei citosolice a Ca++ de la
10-7 la 10-6 moli, prin activarea canalelor pentru calciu din membrana cisternelor reticulului
sarcoplasmic ce nconjoar benzile A, sub efectul depolarizrii membranelor tubulilor
transversali T, invaginri delicate ale membranei plasmatice. Medierea efectelor Ca++ asupra
filamentelor de actin este realizat de tropomiozin, care polimerizeaz tot dup modelul
cap-coad i are situsuri de legare de actin, astfel nct formeaz filamente ce se dispun n
anurile helixului actinei. Tropomiozina are i situsuri specifice de legare a troponinei T,
care la rndul ei leag troponinele I (inhibitorie) i C (leag Ca2+) la tropomiozin. Troponina
I legat la tropomiozin determin o modificare conformaional a actinei, care se poate lega
de capetele de miozin, dar nu le poate activa regiunea ATP-azic. Troponina C, are structur
67
n poziie central. La polul bazal, reeaua terminal alctuit din filamente scurte de actin i
proteine asociate cum este fodrina, interconecteaz filamentele de actin n mnunchi i
interconecteaz mnunchiurile ntre ele.
Figura 42. Structura microvililor. Imagine preluat din: Ross ,,Histology: A Text and Atlas, 4th ed.
exploreaz suprafeele i direcioneaz creterea axonului spre o int celular, astfel nct
viitorul neuron s-i poat ndeplini funcia de interconectare specific, prin intermediul
lamelipodiilor i filopodiilor. Lamelipodiile sunt emisii citoplasmatice la nivelul crora
citoplasma se disperseaz deasupra substratului. Filopodiile, denumite i microspie, sunt
prelungiri alungite i subiri care conin filamente de actin, pot fi extinse i retrase, orientnd
creterea spre o anumit direcie. Aceste micri sunt determinate de minimiozine. Creterea
axonal i dendritic propriu-zis se desfoar prin polimerizarea microtubulilor.
e. Activarea plcuelor sangvine. Plcuele sangvine provin din megacariocitele din
mduva osoas, nu sunt nucleate, dar au mici vezicule interne. Plcuele se ataeaz la nivelul
leziunii endoteliului, formnd un dop, apoi se activeaz, i schimb forma producnd
filopodii lungi. Procesul este declanat de fuzionarea membranelor veziculelor interne cu
membrana plasmatic. Apar astfel pe suprafaa plachetelor molecule proteice de suprafa
noi, care mresc capacitatea de aderare. n plcuele activate, monomerii de actin profilin
polimerizeaz n microfilamente de actin, care determin schimbarea formei plcuelor.
Figura 43. Activarea plcuelor sangvine. Imagine preluat din Alberts et al, ,,Molecular Biology of
the Cell, fourth ed.
70
4.4. Filamentele intermediare au un diametru intermediar (8-12nm), sunt mai groase dect
filamentele de actin i mai subiri dect microtubulii. Ca i celelalte elemente constitutive
ale citoscheletului, sunt rezultatul polimerizrii subunitilor proteice, dar aceste subuniti
proteice sunt specifice unui anumit tip celular.
Figura 44. Model de construcie a filamentelor intermediare. Imagine preluat din Alberts et al.
,,Molecular Biology of the Cell, fourth ed.
72
5.Nucleul celular
Este cel mai mare organit din celul. Conine genomul, baza de date a celulei,
informaia genetic codificat n molecula de ADN. Nucleul este delimitat de nveliul
nuclear compus din dou membrane separate prin spaiul perinuclear. Nucleul conine
nucleolii, nucleoplasma i cromatina.
Figura 45. Structura nucleului celular i continuitatea membranei externe a nveliului nuclear cu
reticulul endoplasmic rugos. Imagine preluat din http://www.cytochemistry.net/cell-biology
5.1. nveliul nuclear este format din dou membrane care fuzioneaz la anumite
intervale formnd porii care delimiteaz cisternele perinucleare.
Membrana extern are 6nm grosime, faa citoplasmic prezint continuitate structuralfuncional cu RER, posed ribosomi care sintetizeaz proteinele al cror lan polipeptidic pe
msur ce este elongat, intr n cisternele perinucleare. Faa citoplasmic a membranei
externe a nveliului nuclear este n contatct cu o reea de filamente intermediare de
vimentin.
Membrana intern are 6nm grosime i este structura nveliului orientat spre
materialul nuclear, dar separat de acesta prin lamina nuclear, o structur fibroas, de 80300nm grosime, format din lamininele A,B,C, filamente intermediare care ajut la
organizarea nveliului nuclear i cromatinei perinucleare, avnd rol de susinere. Lamininele
au un rol important n diviziunea celular, n asamblarea i dezasamblarea nveliului nuclear:
fosforilarea lamininelor determin dezasamblarea, iar defosforilarea determin reasamblarea
nveliului nuclear.
73
Figura 46. nveliul nuclear n microscopie electronic (sursa: Martin Goldberg, imagine preluat din
http://www.lucasbrouwers.nl/blog/2009/10/unpopular-genes)
A.
B.
C.
Figura 47. Complexul porului nuclear. A. Reconstituire a structurii porului nuclear (de sus n jos):
inelul citoplasmic, inelul central i inelul nucleoplasmic cu coul nuclear central; B.imagine n
microscopie electronic a inelului nucleoplasmic cu coul nuclear central; C. imagine n microscopie
electronic a inelului citoplasmic. Imagini preluate din http://www.nature.com.
Funciile NPC: este implicat n transportul pasiv prin difuzie, avnd canale deschise
cu diametrul de 9-11nm; este rspunztor de transportul activ al proteinelor prin mecanism
mediat de receptori, proteinele transportate avnd o secven de aminoacizi denumit
secven-semnal de localizare nuclear (NLS). Importul i exportul macromoleculelor
74
5.2. Nucleolul este o zon dens din nucleu, nedelimitat de o membran, prezent n
celule cu sintez proteic activ. Pot exista unul sau mai muli nucleoli, detectabili cnd
celula este n interfaz. Nucleolii conin ARNr i proteine, puin ADN. Se formeaz n jurul
unor loci genetici specifici alctuii din ADN repetitiv ,,n tandem" care conin genele ARNr,
denumii regiuni de organizare nucleolar (NOR): poriuni ale cromozomilor umani
13,14,15,21,22, unde sunt localizate genele care sunt transcrise n ARNr. Aceste regiuni sunt
implicate n reconstituirea nucleolului n faza G1 a ciclului celular.
Nucleolul are 4 regiuni distincte:
1. Un centru fibrilar care conine ADN inactiv (care nu este transcris) i NOR; 2. Pars
fibrosa, o regiune fibrilar dens alctuit din fibrile de 5nm care nconjur centrul fibrilar i
conine ADN activ i preARNr. 3. Pars granulosa, o component granular care conine
particule precursori ale ribosomilor cu dimensiuni de 15nm. 4. Matricea nucleolar
75
Figura 49. Electronomicrografii ale nucleului celular cu nucleolul (Nu), eucromatina (E) i
heterocromatina (H), raportul cu reticulul endoplasmic rugos i structura nucleolului: centri fibrilari
(fc), pars fibrosa (dfc), pars granulosa (gc). Imagine preluat din: http://www.bio.miami.edu
Funciile nucleolului:
1. sinteza ARNr i asamblarea n precursori ai ribosomilor
2. conine proteine nucleolare care funcioneaz ca proteine semnal ale punctelor
critice de control ale ciclului celular.
Iniial, prin transcrierea ADN care codific ARNr de ctre ARNpolimeraza I, se
formeaz un preARNr de 45S care este procesat prin metilare i activitatea endo i
exonucleazelor, cu formarea ARNr matur de 28S, 5,8S i 18S gata de utilizat n biogeneza
ribosomilor. Pentru biogenez este necesar i un ARNr de 5S care este transcris de pe o gen
aflat n afara NOR, n nucleoplasm. Proteinele ribosomale sunt transcrise n citoplasm.
ARNm este exportat din nucleu, are loc sinteza de proteine n ribosomii RER, apoi proteinele
sunt importate n nucleu, ajung la nucleol unde are loc biogeneza ribosomilor.
5.3. Nucleoplasma este format din: matricea nuclear i diferite tipuri de particule.
Matricea nuclear are funcia de suport pentru organizarea nucleoplasmei i conine:
- componeni structurali: elemente fibrilare, pori nucleari, complexe nucleare laminare,
nucleoli reziduali, o reea rezidual de riboproteine
- componeni funcionali pentru transcripia i procesarea ARNm i ARNr, situsuri de legare
ale receptorilor steroidici, situsuri de legare ale carcinogenilor, proteine de oc termic,
dezoxoribovirusuri, proteine virale.
Particulele nucleare sunt:
- granule de heterocromatin, grupri de particule dispuse dezordonat, cu diametru de
20-25nm, alctuite din ribonucleoproteine i enzime.
- granule de pericromatin, granule izolate, dense, cu diametrul de 30-50nm, nconjurate de
un halou dens, localizate la periferia heterocromatinei, cu o substructur alctuit din fibrile
76
compacte de 3nm. Sunt alctuite din ARN 4,7S i dou peptide similare celor aflate n
hnRNP (ribonucleoproteine nucleare heterogene). Pot fi hnRNP alctuite din preARNm i
proteine implicate n procesarea ARNm. Cresc ca numr n celulele hepatice expuse la
carcinogeni sau la temperaturi mai mari de 37C.
5.4.Cromatina nuclear este format din ADN dublu-catenar complexat cu histone i
proteine acide. Cromatina este constituit din heterocromatin, cromatin condensat
inactiv, localizat la periferia nucleului i n jurul nucleolilor sau mprtiat prin
nucleoplasm i eucromatin activ transcripional, cu rol n sinteza ARN i diviziunea
celular. (vezi figura 49.)
5.4.1.Structura cromatinei. Cromatina este un complex alctuit din ADN dubluhelical i un tip special de proteine denumite histone, octamere formate din 4 tipuri de
histone: H2A, H2B, H3, H4, n jurul crora ADN se nfoar strns, formnd o structur
compact. Elementul structural repetitiv de baz al cromatinei este nucleosomul. Nucleosomii
sunt interconectai prin ADN linker (de legtur). n adiie fa de histonele din miezul
octameric al nucleosomului, exist o alt histon H1, de legtur, care se afl n contact cu
ADN care iese i intr n nucleosom. Nucleosomul mpreun cu histona H1 formeaz
cromatosomul.
Figura 50. Nucleosomul (octamerul histonic i ADN) care mpreun cu H1 formeaz cromatosomul.
77
Figura 51. Structura solenoid a cromatinei i imaginile n microscopie electronic ale fibrei de 11nm
i structurii solenoid de 30nm. Imagine preluat din http://kc.njnu.edu.cn.
78
53.A.
53.B.
Figura 53. Condensarea cromatinei sub form de cromozom n metafaz
Imaginea 53 A este preluat din http://kc.njnu.edu.cn; Imaginea 53 B este preluat din
http://www.cytochemistry.net/cell-biology
80
Figura 54. Modelul recent al replicrii ADN. RPA sunt proteine de stabilizare a monocatenei de ADN
rezultat n urma despiralizrii sub aciunea helicazei; ADN polimeraza sintetizeaz primerul ARN;
RFC disloc polimeraza i leag PCNA pe ADN. ADN polimeraza se asociaz pe PCNA
(,,Proliferating Cell Nuclear Antigen) pentru a forma holoenzima ADN polimeraza activ,
procesiv, care extinde catena de ADN prin adugarea de noi nucleotide. n catena ,,n avans
sinteza ADN este continu, n timp ce n catena ,,n ntrziere sinteza ADN continu numai pn
cnd ADN polimeraza ntlnete primerul anterior. Maturarea catenei ,,n ntrziere necesit
activitatea a dou enzime: nlturarea primerului ARN prin activitatea exonucleazic a RNazei H, iar
ultimul ribonucleotid i parte din ADN-ul adiacent sunt nlturate prin activitatea exonucleazei
Fen-1. O a treia enzim, ADN ligaza, repar breele i realizeaz continuitatea catenelor nousitetizate (http://herkules.oulu.fi)
81
Figura
55. Structura unei gene funcionale de tip Poli II i sinteza ARN mesager corespunztor genei.
Imagine preluat din http://nitro.biosci.arizona.edu
82
Transcripia este realizat de ARN polimeraze, care sunt de mai multe tipuri, n
funcie de tipul de ARN pe care l sintetizeaz.
Figura 58. Formarea complexului de iniiere activ pe TATA box prin interaciunea factorilor de
transcripie cu ARN polimeraza II. Imagine preluat din Scott F. Gilbert ,,Developmental Biology,
eighth edition.
86
87
Figura 59.a.Fosforilarea mediat de TFIIH n domeniul C-terminal al ARN polimerazei II (Pol II) poate
interveni n timpul formrii complexului de preiniiere. ,,DRB sensitivity-inducing factor (DSIF) i
,,Negative Elongation Factor (NELF) faciliteaz probabil blocarea ARN polimerazei ntr-o regiune
proximal promotorului i TFIIS se asociaz cu polimeraza blocat. TFIIS stimuleaz activitatea
intrinsec de clivare a ARN de ctre Pol II cu formarea unui nou capt 3'-OH n situsul activ al Pol II.
Se formeaz un capt 5 metilat al ARN prin adiia de guanozin metilat prin activitatea polimerazei
i a ARN(guanin-7) metiltransferazei. b. Factorul pozitiv de elongare-b (P-TEFb) mediaz fosforilarea
DSIF, NELF i Pol II CTD determinnd elongare productiv. TFIIS faciliteaz eliberarea eficient a Pol II
de pe situsul de pauz n care se afla blocat. NELF disociaz de pe complexul de transcripie i DSIF,
TFIIS, P-TEFb sunt transportate mpreun cu Pol II de-a lungul genei. TFIIF, ELL i elongina care
stimuleaz activitatea de elongare a Pol II, sunt de asemenea asociate la complexul de elongare.
Imagine preluat din Nature Reviews Molecular Cell Biology 7, 557-567 (August 2006) Abbie
Saunders, Leighton J. Core & John T. Lis ,,Breaking barriers to transcription elongation
CoTC este o secven de ARN cu activitate autocatalitic, care intr rapid n autoclivaj.
CoTC prezint un capt ARN 5 liber, care este recunoscut de exonucleaza 53Xrn2.
Degradarea produsului de clivaj din aval de Xrn2 declaneaz terminarea transcripiei.
Exonucleaza se mic de-a lungul catenei ADN matri mpreun cu ARN polimeraza, ca un
,,torpedou ghidat, dar are acces la ARN nascent dup un clivaj endonucleotidic la situsul
poliA sau la un situs de clivaj cotranscripional (CoTC), ajutnd la disocierea complexului de
elongare al ARN polimerazei.
5.4.5. Procesarea ARN are sediul n nucleu i genereaz ARN mesager matur, ARNt
i ARNr funcionali, pornind de la transcriptele ARN primare formate n procesul de
transcripie. Procesarea ARN cuprinde maturarea urmtorilor pecursori ARN:
preARN mesageri, preARN ribosomali i preARN de transfer.
Procesarea preARN mesager implic urmtorii pai:
1. Adugarea unui ,,cap 7-metilguanilat la captul 5 are loc imediat dup
nceperea transcripiei, prin formarea unei legturi speciale de tip 5-5trifosfat.
2. Poliadenilarea, adugarea unei ,,cozi poliA la captul 3care conine
aproximativ 250 resturi A.
3. Clivarea ARN sau ,,ARN splicing, semnificnd ndepartarea intronilor i
unirea exonilor.
Clivarea implic formarea unui complex de clivare activ denumit spliceosom, prin
asamblarea ordonat a particulelor discrete de snRNP ( ribonucleoproteine nucleare mici) pe
substratul de ARNhn (ARN heterogen). Spliceosomul este un complex alctuit din proteine
i ARN de tip special, care ndeprteaz intronii din pre-ARN mesager (ARNhn). Procesul
89
este cunoscut sub denumirea de ,,splicing sau clivarea intronilor. Spliceosomii conin
5 snRNP : U1,U2, U4,U5, U6 bogate n uridin. Prima etap este recunoaterea ARNhn de
ctre U1snRNP i a altor factori asociai non-snRNP, care se leag la situsul de clivare situat
la captul 5 a ARNhn. Se formeaz complexul de angajare E care este ATP independent i
care angajeaz ARNhn pe calea clivrii. U2snRNP este recrutat prin interaciune cu un
factor asociat denumit factor auxiliar U2snRNP i cu U1snRNP, formndu-se complexul A n
manier ATP-dependent. U2snRNP este ataat puternic n complexul A de o secven de
ramificare denumit ,,branch point sequence (BPS). Prezena unei pseudouridine n
U2snRNP opus situsului de ramificare, determin alterarea conformaiei duplexului ARNARN, cu ieirea n afar a adenozinei din BPS. Structura alterat a duplexului, plaseaz
gruparea 2OH a adenozinei din ,,umfltura produs ntr-o poziie favorabil pentru pentru
primul pas al clivrii. TriU4/U5/U6snRNP este recrutat la spliceosom pentru a forma
complexul B, care dup cteva rearanjri, formeaz complexul C, adic spliceosomul activ
catalitic pentru clivarea intronului. Recrutarea triU4/U5/U6snRNP s-ar prea c are loc prin
interaciuni protein-protein i interaciuni datorate complementaritii bazelor azotate ntre
U2snRNP i U6snRNP. Dup recrutarea triUsnRNP, au loc rearanjamente ARN-ARN care
preced prima etap catalitic i au loc rearanjamente moleculare la nivelul spliceosomului
activ catalitic. Primul proces de rearanjare implic probabil desprinderea U1snRNP de la
situsul de clivare 5 i interaciunea cu U6snRNP, U1snRNP avnd aciune inhibitorie asupra
interaciunii U6- situs de clivare 5. Legarea U2snRNP la BPS este un exemplu de
interaciune ARN-ARN care nltur o interaciune ARN-protein, fiind concret nlturat
proteina SF1 de pe BPS. n spliceosomul activ, conformaia bucl stem II este favorizat. Nu
este clar cum este nlturat U4 de pe U6snARN, ARN fiind implicat n asamblarea
spliceosomului, poate avea funcia de desprindere a U4 de U6 i de promovarea a
interaciunii U2/U6snARN. Buclele stem I i II ale interaciunii U4/U6 disociaz i poriunea
bucl stem II a U6 se autonfoar pentru a forma o bucl stem intramolecular, U4
nemaifiind necesar pentru asamblarea spliceosomului. Bucla stem I a U6 formeaz un helix
U2/U6 mpreun cu U2snARN.
La intronii din grupa I, reacia de splicing ncepe la o nucleotid guaninic, iar la
intronii din grupa II, la o nucleotid adeninic. Reacia de splicing const n dou reacii
consecutive de transesterificare (transfer de grupri fosfat):
1. O adenin din secvena intronului, poziionat n BPS, aproape de situsul de
clivare 3, n bucla format prin modificarea conformaional determinat de prezena
pseudouridinei n U2snRNP ataat la spliceosom, realizeaz un atac nucleofil prin gruparea
2-OH de la riboz, la nivelul unei guanozine din situsului de clivare 5, determinnd
formarea unei legturi 2 5 fosfodiesterice (lariat intermediar).
2. Captul 3OH liber al primului exon exercit un atac nucleofil asupra
situsului de clivare 5, cu eliberarea intermediarului lariat i unirea exonilor. n acest mod
sunt eliminai intronii i se formeaz ARN mesager care este exportat din nucleu i utilizat
pentru sinteza proteinelor funcionale.
90
Figura 61. Mecanismul de aciune al spliceosomului (clivarea intronilor). Imagine preluat din Bruce
Alberts et al. ,,Molecular Biology of the Cell, fifth ed.
91
Imagine
preluat
din
folosit n sinteza proteic. Hidroliza GTP este deosebit de important pentru acurateea
sintezei proteice, datorit timpului pe care l furnizeaz desfurrii mecanismului de
,,proofreading al mperecherii codon-anticodon, nainte ca legtura peptidic s se fi format.
Urmtorul pas n elongare, dup formarea peptidil-ARNt n locusul aminoacil, este
translocarea, care necesit prezena factorului de elongare eEF-2 i hidroliz de GTP.
Translocarea const n micarea ribosomului de-a lungul ARN mesager cu trei nucleotide,
poziionnd urmtorul codon n locusul A rmas gol dup translocarea peptidil-ARNt din
locusul A n locusul P i a ARNt liber din locusul P n locusul E. Urmeaz legarea unui nou
aminoacil-ARNt pe locusul aminoacil care induce eliberarea ARNt liber de pe locusul E,
ribosomul fiind apt s insereze urmtorul aminoacid n lanul polipeptidic n aflat n elongare.
Figura
65.
Elongarea
catenei
polipeptidice.
Imagine
preluat
http://www.ncbi.nlm.nih.gov: Griffiths, A.J.F. et al. ,,An Introduction to Genetic Analysis
din
Fiecare etap de legare a unui nou aminoacid n catena polipeptidic implic resinteza
GTP din GDP legat de eEF-1. Aceast reacie necesit un al treilea factor proteic de
elongare denumit eEF-1 care determin nlocuirea GDP de pe eEF-1 cu GTP. Refacerea
eEF-1-GTP semnific redobndirea capacitii acestui factor de elongare ca, n form legat
de GTP, s duc un alt aminoacil-ARNt n situsul aminoacil al ribosomului.
6.2.3. Terminarea sintezei lanului polipeptidic. Elongarea continu pn cnd este
translocat un codon stop (UAA, UAG, UGA) n dreptul situsului aminoacil al ribosomului.
Celulele nu dein ARNt cu secvene anticodon complementare acestor codoni stop, dar
posed un factor de eliberare RF (,,Release Factor) care recunosc codonii stop ca semnale de
terminare a sintezei proteice. Acest factor de eliberare eRF-1 recunoate toi cei trei codoni
stop i acioneaz mpreun cu un alt factor proteic de eliberare eRF-3. Aceti factori de
eliberare se leag la codonul stop din dreptul locusului A i activeaz hidroliza legturii
dintre lanul polipeptidic i ARNt din locusul peptidil, cu eliberarea lanului polipeptidic
complet sintetizat din ribosom i a ARNt. Matria ARN mesager, ca i subunitile
ribosomale disociaz.
95
din
7. Reticulul endoplasmic
Figura 67. Structuri ale reticulului endoplasmic: reticulul endoplasmic rugos ,,rough ER i reticulul
endoplasmic neted ,,smooth ER.
hidrofobi. Cnd sinteza proteic ncepe n ribosomii liberi din citosol, aceast secvensemnal din proteina nascent direcioneaz ribosomul spre membrana RE i iniiaz
translocarea n lumenul RE. Mecanismul implic o particul de recunoatere a semnalului
(PRS), care este o particul ribonucleoproteic citosolic, capabil de a se lega simultan la
secvena-semnal din proteina nascent, la subunitatea ribosomal mare i la un receptor al
particulei PRS, care este o protein integral din membrana RE. PRS este format din
6 polipeptide i o molecul de ARN format din 300 de nucleotide, una din proteinele PRS
denumit P54 leag de fapt secvena-semnal din structura lanului polipeptidic aflat n curs
de elongare. Numai dup ce complexul PRS/protein nascent/subunitate ribosomal mare se
leag la receptorul PRS din membrana RE, PRS elibereaz lanul polipeptidic nascent i
elongarea acestuia continu la o rat normal de vitez. Fidelitatea procesului este asigurat
de o hidroliz asociat a GTP, energia obinut fiind utilizat pentru eliberarea proteinelor
nascente care nu au secven-semnal de pe PRS i din complexul legat la receptorul pentru
PRS. Interaciunea complexului PRS/lan polipeptidic nascent/ribozom cu receptorul PRS
este declanat cnd GTP se leag de subunitatea P54 a PRS i subunitatea a receptorului
PRS. Transferul consecutiv al ribosomului cu lanul polipeptidic n curs de elongare la un
situs al membranei RE unde poate avea loc translocarea permite hidroliza GTP. Dup
disociere, PRS i receptorul pentru PRS elibereaz GDP n citosol unde este reciclat.
Prin legarea particulei semnal de recunoatere de receptorul propriu din membrana
RE, este ataat i ribosomul cu proteina n curs de elongare care conine secvena semnal de
recunoatere, care va intra n lumenul RER, proces denumit translocare cotranslaional.
Figura 69. Semnal peptidaza asociat transloconului din membrana reticulului endoplasmic.
Imagine preluat din http://www.mun.ca
Proteina, odat intrat n lumenul RER, este supus unor modificri care n confer
structura potrivit pentru ndeplinirea unor funcii specifice i pentru localizarea strict n
celul. Gruprile care confer proteinelor direcia de localizare se numesc semnale de dirijare
i sunt adugate posttranslaional n RER i aparatul Golgi. Membrana RER este continu cu
membrana nuclear extern, dar nu prezint continuitate cu membranele aparatului Golgi,
astfel nct proteinele vor fi exportate n aparatul Golgi prin transport vezicular. Veziculele
de transport prezint proteine de suprafa denumite COPI i COPII. COPII orienteaz
99
veziculele ctre aparatul Golgi, iar COPI determin aducerea veziculelor cu proteine napoi
la RER. n acest mod, RER acioneaz concertat cu aparatul Golgi pentru a orienta proteinele
nou sintetizate spre destinaia potrivit. Exist i o a doua cale de export din RE, prin situsuri
de contact ntre membranele RE i membranele altor organite, care permit transferul unor
molecule mici.
7.2.1. Funciile RER
Proteinele solubile de secreie i proteinele de membran sintetizate la nivelul
reticulului endoplasmic rugos sunt supuse urmtoarelor 4 tipuri de modificri: 1. formarea
legturilor disulfidice; 2. plierea moleculelor i formarea proteinelor oligomerice; 3. adiia i
modificarea resturilor oligoglucidice; 4.clivajul proteolitic specific.
1. Legtura disulfidic ntre dou resturi de cistein este implicat n stabilizarea
structurii teriare i cuaternare a proteinelor. Asemenea legturi disulfidice sunt ntlnite n
structura proteinelor de secreie i n domeniul exoplasmic al proteinelor de membran
(proteinele citosolice i ale organitelor care sunt sintetizate n ribosomii liberi sunt lipsite de
legturi disulfidice). Sunt eseniale pentru structura normal i activitatea enzimatic sau
hormonal a proteinelor de secreie. Formarea legturilor disulfidice este dependent de
prezena n lumenul RE a proteindisulfidizomerazei (PDI), abundent n RE al celulelor
secretorii din organe cum sunt ficatul sau pancreasul. Legtura disulfid din situsul activ al
PDI este transferat unei proteine prin dou reacii secveniale de transfer tiol-disulfid. Este
generat PDI redus, care se transform n PDI oxidat prin aciunea unei proteine din
lumenul RE denumit Ero1, care poart o legtur disulfid care este transferat PDI.
2. Plierea moleculelor i formarea proteinelor oligomerice. Unele proteine sunt
constituite din mai multe lanuri polipeptidice. Imunoglobulinele, de exemplu, sunt proteine
oligomerice, alctuite din dou lanuri polipeptidice H(heavy) i dou L(light), legate prin
legturi disulfidice datorit activitii PDI. PDI contribuie i la plierea corect a lanurilor
polipeptidice, stabilizat prin punile disulfidice. Plierea n conformaie corect are loc n RE
n decursul a cteva minute de la sintez. Rapida pliere depinde de activitatea unor proteine
din lumenul RE, proteinele chaperone care includ proteindisulfidizomeraza (PDI), ERp29,
Grp78, membru al familiei Hsp70, calnexina, calreticulina, peptidilpropil izomerazele.
Proteine lumenale omoloage lectinelor, calnexina i calreticulina, se leag selectiv la
oligozaharide legate la azot (N-linkate) din lanurile polipeptidice nascente nepliate,
prevenind agregarea segmentelor adiacente ale lanului polipeptidic, pe msur ce acesta este
elongat (previn o pliere prematur, incorect a proteinelor nou-sintetizate). Alte proteine
implicate n plierea proteinelor sintetizate n RER sunt peptidilprolil izomerazele, o familie
de enzime care accelereaz rotaia legturilor peptidil-prolil din secvene nepliate ale
proteinelor, aceast izomerizare de tip cis-trans fiind o etap limitant de vitez a procesului
plierii. Proteinele nu pot prsi lumenul RE dac nu sunt pliate corect. Orice mutaie care
determin o pliere incorect sau incomplet a unei proteine mpiedic transferul ei din
membrana sau lumenul RE n aparatul Golgi. Aceste proteine incorect pliate se gsesc legate
permanent la proteine ale RE denumite chaperone, cum este calnexina. Celulele rspund la
prezena proteinelor nepliate prin intensificarea transcripiei genelor care codific
chaperonele din RE i ali catalizatori ai plierii, datorit proteolizei unei proteine
transmembranare a RE denumit ATF6. Eliberarea prin proteoliz a domeniului citosolic al
100
ATF6 este urmat de importul n nucleu al acestui domeniu proteic, unde exercit funcia de
activare a transcripiei genelor care codific chaperonele RE.
Proteinele de secreie sau cele de membran i subunitile neasamblate ale
proteinelor oligomerice sunt degradate n citosol ntr-un interval de 1-2 ore de la sintez.
Aceste molecule sunt transportate n sens invers prin translocon, ajung n citosol unde sunt
degradate perin calea proteolizei mediat de ubiquitine. Enzimele de ubiquitilare sunt
localizate pe faa citosolic a RE i, prin activitatea lor, determin adiia de ubiquitin la
proteinele incorect pliate, reacie cuplat cu hidroliza ATP. Polipeptidele poliubiquitinilate
rezultate sunt rapid degradate n proteosomi.
4.Glicozilarea (adiia i modificarea resturilor oligozaharidice). n reticulul
endoplasmic rugos se produce adiia unui precursor oligozaharid preformat din 14 resturi
monoglucidice: trei resturi de glucoz, nou resturi de manoz i dou resturi de
N-acelilglucozamin. Acest precursor este modificat n RE i aparatul Golgi, dar 5 dintre cele
14 resturi monoglucidice sunt conservate n structura tuturor oligozaharidelor N-linkate ale
glicoproteinelor de secreie sau de membran. Precursorul oligozaharidic este legat printr-un
rest pirofosforil la dolicol, un lan lung poliizoprenic ferm ancorat n membrana RE.
Oligozaharidul dolicol pirofosforil este format pe membrana RE, printr-un set de reacii
catalizate de enzime ataate de faa citosolic sau lumenal a membranei RE, astfel nct
poriunea oligozaharidic s proemine pe faa lumenal a RE. Urmeaz etapa de transfer a
precursorului format din 14 resturi monoglucidice de pe dolicol, la o asparagin din lanul
polipeptidic nascent care ptrunde n lumenul RE, deoarece numai resturile de asparagin
dintr-un tripeptid Asn-X-Thr sau Asn-X-Ser pot constitui substratele enzimei
oligozahariltransferaza, care leag resturile oligozaharidice la atomul de azot al grupului
aminic al asparaginei.
Dou din cele trei subuniti ale oligozaharidtransferazei sunt proteine integrale ale
membranei RE, ale cror domenii citosolice se leag la ribosom, orientnd a treia subunitate,
care este subunitatea catalitic, lng lanul polipeptidic n curs de elongare. Dup transferul
precursorului oligozaharidic pe polipeptidul nascent, trei enzime diferite ndeprteaz cele
trei resturi de glucoz i un rest particular de manoz, prin activitatea glicozidazelor I i II.
101
103
104
A.
B.
Figura 72.A. Ultrastructura sarcoplasmei muchiului scheletic cu reticulul sarcoplasmic i mitocondrii.
(www.bu.edu/histology) B. Eliberarea Ca++ din reticulul sarcoplasmic i declanarea contraciei
musculare. Imagine preluat din: www.biozentrum.uni-wuerzburg.de.
105
8. Aparatul Golgi
8.1. Caracterisici generale. Aparatul Golgi, complexul Golgi sau dictiozomul este
un organit celular caracteristic tuturor celulelor eucariote, situat n centrul celulei, aproape de
nucleu. A fost evideniat n 1898 de ctre doctorul italian Camillo Golgi prin colorarea
neuronilor cu nitrat de argint. Aparatul Golgi este o parte a sistemului endomembranar al
celulei, constituit din mai multe compartimente distincte funcional. Dalton i Felix au stabilit
prin microscopie electronic n 1954 c aceste compartimente ale aparatului Golgi sunt
formate din nite sculei aplatizai suprapui(cisterne), n numr de 4-8/celul, delimitai de
o membran simpl, dilatai la capete i nconjurai de micro i macrovezicule, generate din
aceste cisterne. Forma dictiozomilor variaz de la o celul la alta (n strile patologice au un
aspect granulos). Morfologic, biochimic i funcional, este un organit format din
compartimente cu polaritate distinct: cis Golgi, Golgi median i trans Golgi.
Figura 73. Ultrastructura complexului Golgi: faa cis, compartimentul median, faa
trans.Imagine preluat din www.uic.edu.
proteinele rezidente ale aparatului Golgi sunt reciclate: dup ce sunt mutate progresiv odat
cu cisternele, n direcie cis-trans, ele sunt transportate retrograd, de data aceasta prin
mecanism vezicular, fiind din nou localizate n situsul firesc din cisternele cis, mediane sau
trans Golgi. n schimb, proteinele cii secretorii, care au alte destinaii (nu sunt proteine
structurale sau enzime ale RE sau ale aparatului Golgi), ajung ntr-o reea complex de
membrane i vezicule denumit reeaua trans Golgi (TGN). De aici, proteinele pot fi preluate
n cel puin trei tipuri de vezicule:
1. primul tip de vezicule, dup ce nmugurete din TGN, se deplaseaz i fuzioneaz
cu membrana plasmatic, elibernd coninutul prin exocitoz n mediul extracelular, proces
denumit secreie continu sau constitutiv. Exemple: secreia de anticorpi din limfocitele B,
secreia de proteine serice din hepatocite.
2. Un alt tip de vezicule care provin din TGN sunt veziculele secretorii care sunt
meninute n celul pn cnd apare un semnal care declaneaz procesul de exocitoz, n
acest caz, secreia proteinelor este reglat. Exemple: secreia hormonilor proteici din celulele
endocrine (insulina, glucagonul, ACTH), eliberarea neurotransmitorilor sau secreia
precursorilor enzimelor digestive.
3. A treia categorie de vezicule provenit din TGN are ca destinaie final lizosomul,
fiind mai nti transportate n compartimentul endolizosomal sau endosomal trziu. n acest
mod sunt livrate enzimele lizosomale (proteaze, glicozidaze, fosfataze) i proteine de
membran lizosomale cum sunt H+ ATPazele (pompe din clasa V care asigur pH-ul acid al
compartimentului lizosomal).
Dac transportul de la RE la Golgi are loc prin vezicule mbrcate cu COP II,
transportul retrograd are loc prin vezicule mbrcate cu COP I. Veziculele mbrcate cu
clatrin i proteine AP transport proteinele de la TGN sau de la membrana plasmatic la
compartimentul endosomal trziu, ns proteina care cptuete veziculele care transport
proteinele pentru secreie constitutiv sau reglat nu este nc cunoscut.
Figura 74. Transportul anterograd i retrograd mediat de proteine COP I i II n complexul Golgi.
107
109
aceeai proprietate: sortarea lor n vezicule de secreie reglat este controlat de agregarea
proteic selectiv. Veziculele imature ale cii de secreie reglat, n momentul n care
nmuguresc din TGN, conin deja agregate proteice. Unele studii au artat c celulele
secretorii ale mamiferelor conin trei proteine: cromogranina A, cromogranina B i
secretogranina II, care formeaz agregate n condiiile de concentraie ionic i pH din
reeaua trans Golgi, dar nu agreg n condiiile din lumenul RE. Agregarea selectiv a
proteinelor de secreie cu cromogranina A, cromogranina B i secretogranina II, ar putea fi
mecanismul pe care se bazeaz sortarea acestor proteine n veziculele de transport specifice
cii.
8.2.2.6. Sinteza glicolipidelor i sfingomielinei. Aparatul Golgi are funcii n
metabolismul lipidic, n sinteza glicolipidelor i sfingomielinei. Sinteza fosfolipidelor,
colesterolului i ceramidelor are sediul n reticulul endoplasmic neted, ns sfingomielina i
glicolipidele sunt mai apoi sintetizate din ceramide n aparatul Golgi.
Sfingomielina este unicul fosfolipid din membranele celulare non-glicerol, sinteza sa pornind
de la transferul unui grup fosforilcolin de pe fosfatidilcolin pe ceramid. Sfingomielina este
sintetizat pe faa lumenal a cisternelor Golgi. n sinteza glicolipidelor adiia de resturi de
glucoz la ceramide are loc pe faa citosolic a cisternelor Golgi, iar adiia de alte resturi
monoglucidice are loc pe faa lumenal. Dup sintez ele sunt localizate n foia lumenal a
bistratului membranei Golgi i, dup transport vezicular, n foia extern a bistratului
membranar, cu grupurile lor polare proeminnd la suprafaa celulei. Lanurile oligozaharidice
ale glicolipidelor sunt markeri de suprafa importani n recunoaterea intercelular.
111
9. Lizosomii
la pH-ul neutru al lumenului TGN, dar nu i la pH-ul acid din organitele de sortare. n
consecin, din organitele de sortare (endosomii trzii) nmuguresc vezicule care recicleaz
receptorul eliberat napoi n TGN precum i vezicule care conin numai enzimele lizosomale,
prin care aceste enzime ajung la destinaia lor final, lizosomii. Veziculele care recicleaz
receptorii hidrolazelor acide nu sunt mbrcate de clatrin, sunt vezicule cu retromer, un
nveli care se asambleaz n endosomi numai cnd: 1.se poate lega de domeniul citoplasmic
al receptorilor cargo; 2. poate interaciona direct cu un bistrat fosfolipidic curbat; 3. se poate
lega la un fosfatidilinozitol fosforilat (fosfoinozitid) care acioneaz ca marker endosomal.
Toate aceste trei condiii trebuie ndeplinite simultan, retromerul este un ,,detector de
coinciden care se asambleaz la locul i momentul potrivit.
Lizosomii sunt organite cu heterogenitate structural, fiind diferite din punct de
vedere morfologic, dar sunt definite de o funcie comun: degradarea intracelular a
macromoleculelor.
organite care este un mediu acid. Formarea lizosomului matur presupune pierderea unor
componente membranare endosomale trimise ctre membrana plasmatic sau TGN i
scderea pH-ului pn la valoarea optim necesar activitii enzimelor lizosomale. Formarea
lizosomilor pe aceast cale presupune interaciunea ntre calea secretorie prin care sunt
procesate proteinele lizosomale i calea endocitozei prin care substratele hidrolazelor acide
sunt preluate de la exteriorul celulei, prin vezicule mbrcate de clatrin. Exist dou teorii
privind biogeneza lizosomilor pe aceast cale: formarea lizosomilor prin fragmentarea
endosomilor trzii sau formarea unui organit hibrid ntre endosomi trzii i lizosomi, urmat
de condensarea coninutului acestui organit i reciclarea selectiv a constituienilor
membranari.
O alt cale de biogenez a lizosomilor este cea care implic preluarea particulelor
internalizate prin fagocitoz. Celule specializate cum sunt macrofagele i neutrofilele preiau
particule mari cum sunt bacteriile, resturi celulare i celule mbtrnite. Aceste particule,
dup preluare formeaz vacuole de fagocitoz (fagosomi) care fuzioneaz cu lizosomi, n
acest mod coninutul lor este digerat. Fagolizosomii formai pot fi mari i heterogeni,
dimensiunile i forma lor fiind dependent de coninut.
Lizosomii sunt responsabili de autofagie, turn-over-ul gradual al componentelor
celulare. Procesul pare s nceap prin nconjurarea organitului care urmeaz s fie degradat,
de o membran dubl a crei provenien nu este cunoscut. Procesul este reglat ntr-un
anumit mod, organitele sunt selectate precis pentru degradare n lizosomi n scopul
remodelrii celulare (de exemplu, mitocondrii sau peroxisomi senesceni sau membrane ale
REN care au proliferat pentru a-i ndeplini funcia de detoxifiere, iar dup ndeprtarea
xenobioticului sunt i ele nlturate din celulele hepatice). Autofagia este procesul care
ndeprteaz pri nedorite ale celulelor difereniate intervenind n dezvoltarea i sntatea
celular, inclusiv ca adjuvant n mecanismele de aprare mpotriva virusurilor i bacteriilor.
Prin autofagie pot fi ndeprtate agregate proteice mari i chiar organite, situaii n care
capacitatea de aciune a proteazelor celulare este depit.
Modul de reglare al procesului de autofagie i de selectare a organitelor-int este
puin cunoscut, dar sunt implicate mai mult de 25 de proteine diferite n realizarea autofagiei,
care include urmtoarele etape: nucleaia i extensia unei membrane care nconjur o poriune
selectat a citoplasmei, formarea autofagosomului delimitat de o membran dubl, fuziunea
cu lizosomul i digerarea membranei interne a autofagosomului mpreun cu coninutul su.
Sistemul de membrane din care provin veziculele care formeaz nveliul autofagosomilor,
precum i mecanismul de selectare precis a organitelor-int supuse autofagiei trebuie
elucidate.
10.Peroxisomii
10.1. Structura i caracteristicile generale ale peroxisomilor. Peroxisomii sunt
organite delimitate de o singur membran, cu dimensiuni de 0,2-1m, care conin catalaz i
una sau mai multe oxidaze generatoare de H2O2, fiind implicate n metabolismul peroxidului
de hidrogen n celulele eucariote. Au fost descoperite n TEM de Rhodin n anul 1951 i
denumite microcorpuri, iar denumirea de peroxisomi a fost atribuit dup descoperirea
coninutului de uratoxidaz, D-aminoacidoxidaz i catalaz de ctre Christian de Duve n
1967. La om lipsete acid uric oxidaza, ceea ce explic acumulrile de acid uric n gut.
Peroxisomii mamiferelor conin peste 50 de enzime, ficatul i rinichiul fiind organele n care
peroxisomii sunt cei mai abundeni. Sub efectul unor ageni de proliferare, volumul lor n
celul poate s creasc de 7-10 ori. n fibroblaste i amniocite, peroxisomii sunt mult mai
mici, cu diametrul de 0,1-0,25m i sunt mai puin abundeni. n celulele capabile de secreie
steroidic (celulele corticosuprarenalei), n celulele adipoase i n celulele gliale care produc
mielin, peroxisomii nu exist ca entiti distincte, ci sub forma unui reticul peroxisomal
format prin interconectarea peroxisomilor. n celulele n care are loc proliferarea
peroxisomal, exist o reea de peroxisomi, format prin diviziunea activ a acestora.
Descoperiri recente au artat c celulele mutante cu numr mic de peroxisomi i pot reface
numrul caracteristic de peroxisomi, dup introducerea genei ,,wild type n celulele
respective.
10.2. Funciile peroxisomilor. Datorit echipamentului enzimatic obligatoriu,
oxidaze-catalaz, peroxisomii sunt sediul unor transformri metabolice de tip respirator:
respiraia peroxisomal. Oxidarea substratelor n prezena O2 se realizeaz prin intermediul
unor compui peroxidici toxici. Substratul RH2 este oxidat n prezena O2, procesul fiind
catalizat de o oxidaz flavin-dependent:
115
Catalaza utilizeaz H2O2 pentru a oxida substratele proprii: fenoli, acid formic, formaldehida
i alcoolii:
n acest mod fiind ndeprtat peroxidul de hidrogen toxic. Aceast reacie este important n
ficat i rinichi, peroxisomii din celulele acestor organe au rol n detoxifiere. Aproximativ
25% din etanolul consumat este oxidat la acetaldehid prin reacia de mai sus. Atunci cnd se
acumuleaz n celule un exces de H2O2, catalaza convertete peroxidul de hidrogen la ap
prin reacia de mai jos:
O funcie major a peroxisomilor este oxidarea acizilor grai cu lan lung, proces
denumit -oxidare, prin care din molecula AG se ndeprteaz succesiv cte doi atomi de C,
sub form de acetil-CoA, transportat n citosol, unde este utilizat n diferite ci metabolice.
Reacia necesit acil-CoA oxidaz localizat n peroxisomi dar i n mitocondrii, unde are loc
de asemenea -oxidarea AG.
Peroxisomii i mitocondriile reprezint situsurile celulare majore de utilizare a O2, dar
spre deosebire de mitocondrii, unde procesele respiratorii au ca finalitate producerea i
conservarea energiei sub form de ATP, procesele oxidative peroxisomale au ca rezultat
disiparea energiei eliberate n cele dou etape, oxidazic i catalazic, sub form caloric.
-oxidarea peroxisomal are loc n matricea peroxisomului i const n patru reacii
consecutive: oxidarea primar (desaturarea acil-CoA la 2-trans-enoil-CoA), hidratarea
intermediarului nesaturat la L-3-hidroxiacil-CoA, o a doua reacie de oxidare cu formarea
3-cetoacil-CoA i a patra reacie este una de clivaj tiolitic, cu eliberarea acetil-CoA i
acil-CoA, cu 2 atomi de carbon mai scurt dect lanul iniial:
Reaciile prezentate mai sus sunt aceleai att n mitocondrie ct i n peroxisomi, dar
enzimele care le catalizeaz sunt diferite. Prima reacie a -oxidrii peroxisomale este
catalizat de o oxidaz flavin-dependent, care transfer electronii direct oxigenului
molecular, peroxidul de hidrogen produs fiind descompus prin aciunea catalazei.
Acil-CoA
oxidaza
flavin-dependent
Enoil-CoA
Figura 83. Oxidarea FAD dependent- prima etap n -oxidarea mitocondrial este urmat
de transferul electronilor n lanul transportor de electroni i are ca finalitate producereea de
energie nmagazinat n molecula ATP. Imagine preluat din Grisham C.M, Garrett R.H.
,,Biochemistry, second edition.
Urmtoarele dou reacii ale -oxidrii sunt catalizate de o enzim cu funcie de hidrataz i
dehidrogenaz, care are i funcie enoil-CoA-izomerazic (de 3, 2-enoil-CoA izomeraz
care transfer dubla legtur de pe C3 pe C2), permind -oxidarea AG nesaturai. Reacia
final a -oxidrii peroxisomale este catalizat de o tiolaz. Energia provenit din prima
reacie de oxidare din care rezult H2O2 este disipat sub form caloric, n timp ce a doua
reacie de oxidare, care decurge cu reducerea NAD+, permite conservarea energiei prin
electronii de energie nalt ai NADH2, care difuzeaz liber n citosol, membrana
peroxisomilor fiind permeabil pentru aceste molecule (-oxidarea peroxisomal este
eficient doar pe jumtate n ceea ce privete conservarea energiei). Spre deosebire de
117
118
Figura 84. Structura importomerului, complexul E2 de reciclare a receptorilor PTS i ATPazele AAA.
Imagine preluat din http://biology.ucsd.edu/labs/subramani/research.htm.
119
de larg utilizare cum este aspirina, substane comune n alimente ( acidul fitic constituient al
clorofilei, AG din uleiul de pete, etc.). Hormonii steroizi i tiroidieni, precum i acidul
retinoic pot fi considerai proliferatori peroxisomali de natur endogen. Proliferatorii
peroxisomali nu au efect genotoxic, nu au activitate mutagen, deci nu afecteaz integritatea
i structura ADN.
Cu toate c peroxisomii sunt prezeni la majoritatea celulelor eucariote, proliferarea
peroxisomal este limitat la un numr redus de organisme, n primul rnd la mamifere, fiind
remarcabil la roztoarele de laborator (oareci i obolani), dar este slab sau nul la om,
chiar dup expunere prelungit la agenii proliferatori. La organismele n care se manifest,
este un proces specific esutului hepatic, provocnd inclusiv hepatomegalie i creterea
activitii enzimelor implicate n calea -oxidrii AG , la nivel renal proliferarea fiind
atenuat att n ceea ce privete numrul i volumul celular al peroxisomilor, ct i n privina
amplificrii masei relative i a activitii enzimelor.
Agenii de proliferare produc o proliferare profund a peroxisomilor n hepatocitele
roztoarelor i primatelor i creteri marcate ale activitii enzimelor -oxidrii acizilor grai:
acil-CoA oxidaze (ACOX), enoil-CoA hidrataza/3-hidroxiacil-CoAdehidrogenaza (enzima
bi/trifuncional PBE), 3-cetoacil-CoA tiolaza, datorit activrii rapide i coordonate a
transcripiei genelor care codific aceste enzime. Proliferatorii peroxisomali induc la aceste
animale carcinoame hepatocelulare dup expunere ndelungat, datorit rspunsului pleiotrop
tisular-specific indus de aceti ageni. Mai precis, n celulele hepatice cu cretere masiv a
volumului peroxisomilor determinat de proliferatorii peroxisomali, se modific reglarea
transcripiei genelor care codific catalaza i enzimele productoare de H2O2, cum este
ACOX, astfel nct se dubleaz activitatea enzimatic a catalazei, dar crete activitatea
ACOX de aproximativ 20 de ori, ceea ce determin acumulri de H2O2 i ali radicali reactivi
ai oxigenului n celul, urmate de transformri neoplazice celulare.
esuturile umane care nu au un grad semnificativ de rspuns la proliferatorii
peroxisomali, este puin probabil s dezvolte tumori, chiar dup expunere cronic la
proliferatorii peroxisomali. Mecanismele prin care hepatocitele umane sunt protejate de
rspunsul pleiotrop declanat de proliferatorii peroxisomali nu este elucidat. S-au propus mai
multe explicaii care implic: doza de agent de proliferare peroxisomal, farmacocinetica,
biodisponibilitatea acestora, afinitatea agenilor fa de situsurile-int din celulele umane,
distribuia izoformelor PPAR (receptorii activai de proliferatorii peroxisomali) n celuleleint, natura elementului de rspuns la PPAR din structura genelor-int (PPRE).
Activarea transcripiei genelor-int care rspund la agenii proliferatori peroxisomali
este mediat de PPAR , / i care sunt un grup de receptori proteici nucleari care
funcioneaz ca factori de transcripie i regleaz exprimarea genelor. Sunt codificai de gene
diferite i au distribuie tisular specific: PPAR sunt exprimai n ficat, rinichi, inim,
muchi, esut adipos; PPAR/ sunt exprimai marcat n creier, esut adipos i piele; PPAR1
n toate esuturile, PPAR2 mai ales n esutul adipos, iar PPAR3 este exprimat n
macrofage, intestin gros i esut adipos. Descoperirea PPAR a facilitat identificarea PPRE n
amonte (upstream) de gena ACOX de la obolan. PPRE sunt formate din dou secvene direct
repetate AGG(A/T)CA, separate printr-un nucleotid, aa-numitul motiv DR1 care leag cu
mare afinitate heterodimeri PPAR/RXR (heterodimeri ai receptorului activat de proliferatorii
peroxisomali cu receptorul retinoidic X). Formarea acestor heterodimeri este expresia
convergenei cii de proliferare peroxisomal cu calea de semnalizare prin acid retinoic. S-a
descoperit existena PPRE n promotorul genei ACOX umane sub forma unui motiv DR1,
diferena este poziionarea fa de situsul de iniiere a transcripiei, care la obolan este situat
ntre -570 i -558, iar la om, PPRE are urmtoarea secven: AGGTCACTGGTCA i este
situat n amonte de situsul de iniere al transcripiei ntre -1918 i -1906.
Inducia ACOX este markerul pentru aprecierea intensitii rspunsului pleiotrop indus de
121
proliferatorii peroxisomali.
10.5.1. Efectele biologice ale PPAR n celulele umane. Dei n hepatocitele umane
exist PPAR i enzimele -oxidrii peroxisomale i a fost evideniat elementul de rspuns la
PPAR funcional n gena ACOX i alte gene implicate n metabolismul lipidic, i mai mult,
heterodimerii PPAR/RXR de la obolan se leag cu mare afinitate de PPRE de tip DR1
din hepatocitele umane, rspunsul nu include proliferare peroxisomal. Agenii de proliferare
peroxisomal, ca i alte molecule lipofile (steroizii, acidul retinoic, hormonii tiroidieni,
vitamina D3) funcioneaz prin interaciunea cu factorii de transcripie care conin receptori ai
superfamiliei de receptori nucleari.
Figura 86. Rolul PPAR n organismul uman. Dup activarea n citoplasm i formarea heterodimerilor
PPAR-RXR/RAR (receptor retinoidic X /receptor acid retinoic), complexul heterodimeric este
transportat n nucleu i leag specific PPRE (,,peroxisome proliferator response element) localizat n
promotorul genei-int: http:// www.jpp.krakow.pl/journal/archive/0605/articles/01_article.html
123
11. Mitocondria
11.1. Caracteristici generale i structur. Mitocondriile sunt organite ntlnite n cele mai
multe celule eucariote, cu diametru de 0,5-10 m, care genereaz cea mai mare parte din
ATPul necesar celulei ca surs de energie. n afara funciei de furnizor de energie,
mitocondria este implicat n procese celulare ca: semnalizare, difereniere celular,
apoptoz, creterea celular i controlul ciclului celular, senescena celular. Numrul de
mitocondrii dintr-o celul variaz n funcie de tipul tisular, n unele tipuri de celule cu
activitate intens, numrul lor poate ajunge pn la cteva mii n funcie de necesarul de
energie (un hepatocit conine 1000-2000 de mitocondrii, care reprezint 1/5 din volumul
celular). Sunt organite proximale miofibrilelor n miocite i nconjoar componentele
structurale ale flagelului spermatozoidului. Sunt asociate citoscheletului celular, un rol
important n stabilirea acestei asocieri avnd vimentina. Mitocondriile formeaz, mpreun cu
citoscheletul, o reea tridimensional ramificat, care influeneaz forma i funciile
mitocondriilor. Mitocondriile sunt delimitate de o membran extern i o membran intern
ntre care exist un spaiu intermembranar. Membrana intern formeaz invaginri denumite
criste care proemin n matricea mitocondrial. Mitocondriile dein genom propriu, genele
mitocondriale codific o parte din proteinele coninute de acest organit, mitocondriile din
miocard fiind constituite din 615 tipuri distincte de proteine cu rol structural i funcional.
Figura 87. Structura mitocondriei: membrana extern, membrana intern cu cristele i matricea
mitocondrial cu ADN i ribosomi. Imagine preluat din Lehninger,D. L. Nelson & M. M. Cox:
Principles of Biochemistry, 3rd edition, 2000
5000 Da sau mai mici s difuzeze prin membran. Proteine cu molecula mai mare pot s fie
transportate prin membrana mitocondrial extern dac au o secven-semnal de int
mitocondrial situat la captul N-terminal, care se leag specific de o translocaz din
membrana extern, care le transport activ prin membran. Leziuni ale membranei
mitocondriale externe determin difuzia proteinelor n citosol, declannd apoptoza.
Membrana mitocondrial extern se poate asocia cu membrana RE, formnd o structur
denumit MAM (mitocondrie asociat membranei RE), cu implicare n semnalizarea prin
calciu i n transferul de lipide ntre RE i mitocondrie.
Spaiul intermembranar este delimitat ntre membrana mitocondrial extern i cea
intern. Datorit permeabilitii membranei externe pentru molecule mici i ioni, concentraia
acestora n spaiul intermembranar este aceeai ca i n citosol.
Membrana mitocondrial intern formeaz numeroase expansiuni denumite criste,
care i mresc suprafaa funcional, inclusiv activitatea ATP-sintetazic. n mitocondriile
hepatocitelor, datorit cristelor, suprafaa membranei interne este de cinci ori mai mare dect
a membranei externe, iar n mitocondriile celulelor musculare care necesit mai mult consum
de energie furnizat de ATP, membrana intern formeaz mai multe criste. Membrana
mitocondrial intern conine proteine care ndeplinesc urmtoarele funcii: reaciile redox
din fosforilarea oxidativ, generarea de ATP (ATP sintetaza), transportul metaboliilor n i
din matrice, importul proteic mitocondrial, fuziunea i fisiunea mitocondrial. Raportul
proteine: fosfolipide este mai mare n greutate molecular dect cel al membranei externe
mitocondriale, de 3:1, adic 1 molecul proteic la 15 molecule de fosfolipide. Membrana
mitocondrial intern conine un fosfolipid de tip special denumit cardiolipin, care are patru
AG n molecul, contribuind la proprietatea membranei interne mitocondriale de a fi
impermeabil, alturi de o alt caracteristic structural: lipsa porinelor. n consecin,
proteinele sunt transportate prin membrana mitocondrial intern datorit unor complexe
translocaz (TIM) sau datorit Oxa1. Exist un potenial de membran de-a lungul
membranei mitocondriale interne, datorat activitii enzimelor lanului transportor de
electroni.
Matricea mitocondrial este spaiul delimitat de membrana intern, implicat n
producerea ATP de ctre ATP sintetaza localizat n membrana mitocondrial intern.
Matricea conine sute de enzime, cele mai importante fiind cele ale oxidrii piruvatului i
-oxidrii AG, precum i enzimele ciclului acizilor tricarboxilici (Krebs). n matrice se
gsesc ribosomii mitocondriali, ARNt, i cteva copii ale ADN genomic mitocondrial.
ADNul uman mitocondrial este o molecul circular, ca la procariote, format din
16.569 pb, conine 37 de gene care codific 22 ARNt, 2 ARNr i 13 molecule proteice
integrate n membrana mitocondrial intern, alturi de proteine codificate de gene din
nucleul celular. O mitocondrie conine 2-10 copii de ADN mitocondrial. Mitocondriile dein
propriul aparat de sintez proteic, n mitocondrie asamblndu-se ribosomi 70 S, ca n
celulele procariote i nu 80S, cum sunt cei asamblai n celul, prin sintez n nucleol.
11.2. Funciile mitocondriilor.
11.2.1. Sinteza ATP prin fosforilarea ADP este funcia major a
mitocondriilor, reflectat prin numrul mare de proteine din membrana mitocondrial intern,
implicate n aceast funcie. Prin glicoliz, n citosol se formeaz piruvat, care este transportat
activ prin membrana mitocondrial intern n matrice, unde este oxidat, cu formare de CO2,
acetil-CoA i NADH. Acetil-CoA este substrat pentru ciclul acidului citric denumit i ciclul
acizilor tricarboxilici sau ciclul Krebs. Enzimele ciclului Krebs sunt localizate n matricea
mitocondrial, cu excepia succinat dehidrogenazei, care este legat la membrana
mitocondrial intern. n ciclul Krebs, acetil-CoA este oxidat la CO2 i sunt produi
cofactori redui (trei molecule de NADH i o molecul de FADH2), care reprezint sursa de
125
electroni din lanul transportor de electroni. Energia redox de la NADH i FADH2 este
transferat oxigenului molecular n mai multe etape din lanul transportor de electroni.
NADH i FADH2 sunt produse i n citosol, n cursul glicolizei, i sunt importai prin
antiportul malat-aspartat sau prin sistemul glicerolfosfat. Lanul transportor de electroni
cupleaz reacia chimic dintre un donor de electroni (NADH,FADH2) i un acceptor de
electroni (O2) cu transferul de protoni prin membrana mitocondrial intern printr-un set de
reacii biochimice intermediare.
Figura 88. Funcia major a mitocondriei este de a utiliza NAD redus i FAD redus rezultai din
glicoliz sau -oxidarea AG pentru producerea de energie nmagazinat n moleculele ATP. Imagine
preluat din http://campus.queens.edu/faculty/jannr/index.htm
126
Figura 88. Sinteza de ATP, producerea de radicali superoxid prin inhibarea transportului de electroni
la nivelul complexului III i producerea de cldur. Imagine preluat din: Brownlee, M. ,,Biochemistry
and molecular cell biology of diabetic complications Nature 414 (2001), p.813-820
hemului este legat la doi liganzi axiali, situai deasupra i dedesubtul planului hem.
Citocromii sunt proteine cu grup prostetic hem, care absorb lumina la lungimi de und
caracteristice. Schimbrile de absorban n cursul proceselor de oxidoreducere ale fierului
din hem furnizeaz o baz pentru monitorizarea statutului redox al hemului. Citocromul c
este o molecul proteic mic, hidrosolubil, cu un singur grup hem, n timp ce
citocromii a i a3 sunt de fapt grupuri hem simple, neataate unui polipeptid. Citocromul c
posed resturi de lizin n jurul gruprii hem, care pot interaciona cu resturi anionice din
structura membranei, atand citocromul c la membran atunci cnd cedeaz sau accept
electroni. Centrii fier-sulf (Fe-S) sunt grupri prostetice care conin 2,3,4 sau 8 atomi de fier
complexai cu S elementar sau cu S provenit din cistein. Un asemenea centru cu 4 Fe poate
alterna ciclic ntre strile redox Fe+++ (oxidat) + 1 e- Fe++ (redus). Proteinele cu funcie
de transfer de electroni pot conine mai muli centri Fe-S. Aceti centri Fe-S transfer doar un
electron chiar dac conin unul sau mai muli atomi de fier, datorit strnsei proximiti a
atomilor de fier. Cei mai muli constituieni ai lanului respirator sunt ancorai n membrana
mitocondrial intern, iar invaginrile n matrice denumite criste cresc suprafaa membranei.
11.2.1.2. Structura lanului transportor de electroni. Lanul transportor de
electroni este format din 4 complexe, n interiorul fiecrui complex electronii trec secvenial
prin mai muli transportori de electroni. Altfel spus, electronii sunt transferai de la NADH la
O2 prin mai multe complexe moleculare din interiorul membranei mitocondriale:
complexul I, III i IV plus CoQ i citocromul c. Exist situsuri de legare pentru CoQ n
interiorul complexelor cu care aceasta interacioneaz, CoQ fiind un cru mobil, care
difuzeaz liber n membrana mitocondrial. Citocromul c este rezident n spaiul
intermembranar i se leag alternativ la complexele III i IV n cursul transferului de
electroni. Nu exist dovezi ale existenei unor agregate supramoleculare stabile care s
conin mai multe complexe. Complexele individuale ale lanului respirator mitocondrial
au fost de altfel izolate i compoziia lor a fost determinat. Inhibitorii lanului respirator
includ: rotenona care blocheaz complexul I, antimicina A care blocheaz transferul de
electroni n complexul III, CN- & CO inhib complexul IV.
Complexul I (NADH dehidrogenaza sau NADH ubiquinon oxidoreductaza)
catalizeaz oxidarea NADH i reducerea CoQ, cu transferul de pe NADH a 2 electroni i
formarea produsului redus, ubiquinol:
NADH + H+ + Q NAD+ + QH2
Complexul I mut 4 protoni prin membran, producnd gradient protonic.
Complexul I nu este numai situsul de intrare a electronilor n lanul respirator, este i situsul
de producere a radicalilor liberi superoxid. Complexul I al mamiferelor are forma literei L,
include 46 de proteine, grupul prostetic FMN i centre Fe-S. Domeniul periferic care conine
FMN i accept 2e- de la NADH proemin n matricea mitocondrial. Centrii Fe-S sunt
localizai n domeniul periferic hidrofil, unde formeaz o cale de transfer al e- de la FMN la
coenzima Q. Situsul de legare al CoQ este aproape de interfaa dintre domeniul periferic i
cel intramembranar. Transferul iniial de electroni este:
NADH + H+ + FMN NAD+ + FMNH2
FMNH2 + (Fe-S)ox FMNH + (Fe-S)red + H+
Apoi FMN este reoxidat prin transferul electronului pe urmtorul centru fier-sulf :
FMNH + (Fe-S)ox FMN + (Fe-S)red + H+
128
Electronii trec printr-o serie de centri fier-sulf i sunt transferai coenzimei Q, care accept
2 e- i preia 2 H+ cu formarea coenzimei Q reduse (QH2).
Complexul II. FAD, acceptorul iniial de e-, este redus la FADH2 concomitent cu
oxidarea succinatului la fumarat. FADH2 este apoi reoxidat prin transferul electronilor
coenzimei Q, printr-o serie de trei centri fier-sulf, cu formarea QH2. Coenzima Q redus este
reoxidat via complex III, furniznd o cale de transfer a electronilor de la succinat n lanul
respirator. Succinatdehidrogenaza ciclului Krebs mai este denumit complex II sau succinatCoQ reductaz.
FAD FeScentru 1 FeScentru 2 FeScentru 3 CoQ
Complexul III (complex citocrom bc1) accept electroni de la coenzima QH2 care este
generat prin transferul electronilor n complexele I & II. QH2 transfer secvenial electronii
ctre 2 molecule de citocrom c, cu transformarea quinolului n quinon. Prin oxidarea
quinolului se formeaz un gradient protonic: n total 6 protoni- 2 protoni reduc quinona la
quinol i 4 protoni sunt eliberai de pe 2 molecule de quinol. Complexul bc1 nu acioneaz ca
o pomp de protoni, gradientul de protoni se formeaz prin absorbie/eliberare asimetric a
protonilor. Citocromul c1, un grup prostetic din complexul III reduce citocromul c, care este
donorul de electroni ctre complexul IV.
Complexul IV (citocrom c oxidaza) preia 4 electroni de la 4 molecule de citocrom c i i
transfer pe oxigenul molecular (O2), cu producerea a dou molecule de ap. n acelai timp,
mut 4 protoni prin membran, producnd gradient protonic. Citocrom c oxidaza este format
din domenii transmembranare de tip -helix i este sediul urmtoarei reacii:
O2 + 4 H+ + 4 e- 2 H2O
Cei 4 electroni sunt transferai n complex de pe citocromul c simultan. Complexul IV
conine hem a & hem a3, CuA (2 atomi de Cu adiaceni) & CuB. O2 reacioneaz la un centru
binuclear constnd din hemul a3 i CuB. Electronii intr n complexul IV deodat, din
citocromul c fiind transferai la CuA. Apoi trec via hem spre centrul binuclear:
cit c CuA hem a hem a3/CuB
O2 se leag la hemul a3, adiacent CuB i are loc transferul electronilor pe O2.
O2 + 4 H+ + 4 e- 2 H2O
130
tipuri de receptori, aparinnd diferitelor tipuri celulare, ceea ce are ca rezultat activarea unor
ci diferite de traducere a semnalului i, n consecin rspunsuri celulare diferite.
De exemplu, acetilcolina se leag de receptorul specific de pe suprafaa celulei
musculare striate i are ca efect declanarea contraciei prin activarea unui canal ionic cu
poart dependent de ligand. Eliberarea acetilcolinei n apropierea unei celule musculare
cardiace ncetinete ritmul contraciei prin activarea unui receptor cuplat cu proteina G, iar
legarea acetilcolinei pe receptorul unei celule din acinii pancreatici declaneaz exocitoza cu
eliberarea granulelor secretorii care conin enzimele digestive. Deci, receptorii proteici de
suprafa celular se caracterizeaz prin specificitate de legare a unui anumit ligand,
complexul receptor-ligand rezultat prezint o specificitate efectoare pentru c mediaz un
rspuns celular specific.
Exist receptori de suprafa care dei leag diferii liganzi, declaneaz acelai
rspuns celular: epinefrina, glucagonul, ACTH se leag de membrii diferii ai familiei de
receptori cuplai cu proteina G de pe suprafaa hepatocitului, dar iniiaz aceeai cale de
semnalizare intracelular, sinteza AMP ciclic. Acest mesager secundar regleaz diferite ci
metabolice, deci cei trei hormoni au acelai efect asupra celulei hepatice.
Rspunsul celular la moleculele-semnal depinde de numrul de receptori de pe
suprafaa unei celule, de afinitatea acestora fa de anumii liganzi i de concentraia
ligandului n proximitatea celulei-int. Reglarea numrului de receptori specifici pentru o
anumit molecul-semnal influeneaz sensibilitatea celulei la un anumit semnal i
influeneaz funciile i dezvoltarea celulei. Endocitoza poate reduce semnificativ numrul de
receptori expui pe suprafaa unei celule, determinnd reducerea rspunsului celular n
condiiile unei concentraii constante de molecule-semnal.
Legarea moleculelor-semnal extracelulare denumite ,,primul mesager de receptorii
specifici membranari conduce la o cretere sau la o descretere a concentraiei unor moleculesemnal intracelulare, cu greutate molecular mic denumite ,,mesageri secundari:
3,5AMPciclic (cAMP), 3,5GMPciclic (cGMP), 1,2 diacilglicerol (DAG),
inozitol 1,4,5trifosfat (IP3), Ca2+, inozitolfosfolipidele membranare. Activarea receptorului
prin legarea semnalului extracelular declaneaz transducia, calea de semnalizare
intracelular cu modificarea concentraiei intracelulare a mesagerului secundar care va
determina alterarea structurii i funciei unor proteine (enzime sau proteine cu alte funcii).
12.2.1. Receptorii cuplai cu proteine G
12.2.1.1. Receptorii cuplai cu proteine G care au ca efector adenililciclaza.
Proteinele G traductoare de semnal sunt trimeri constituii din trei subuniti: , i .
Subunitatea G este o GTPaz care alterneaz ntre forma activ legat de GTP i forma
inactiv legat de GDP. Activarea receptorului prin legarea moleculei-semnal determin
activarea proteinei G, care la rndul ei regleaz activitatea unei alte proteine denumit
protein efectoare. Astfel de proteine efectoare sunt canale ionice din membrana celular sau
enzime care catalizeaz formarea mesagerilor secundari: cAMP, DAG, IP3, etc.
Heterogenitatea cii de semnalizare avnd ca traductor proteina G se explic prin faptul c
genomul uman conine gene care codific 27 G, 5 G i 13 G, care prin combinare n
trimeri formeaz clasa proteinelor G. n stare de repaus, cnd receptorul este liber,
subunitatea G este legat de GDP i complexat cu G. Formarea complexului receptorligand determin schimbul de nucleotide i GGTP disociaz de pe G, dar subunitile
rmn ancorate la membran. Activarea proteinei G determin modificarea activitii
proteinei efector, ns activarea dureaz doar cteva secunde, ntruct activitatea unei GTPaze
determin hidroliza GTP legat de G i inactivarea proteinei G.
Epinefrina mediaz rspunsul organismului la frig sau efort intens, cnd esuturile au
o nevoie crescut de a cataboliza glucoz i acizi grai pentru a produce ATP. Eliberarea
glucozei prin glicoliz i a acizilor grai prin lipoliz este declanat prin legarea epinefrinei
132
plasmatice.
Rodopsina, un receptor cuplat la proteina G care este activat de lumin, este localizat
la nivelul discurilor membranare din segmentul extern al celulelor cu bastonae. Proteina G
cuplat la acest receptor este denumit transducin Gt , o celul cu bastona uman avnd
4x107 molecule de rodopsin , format din proteina opsin i pigmentul 11-cis-retinal.
Dup absorbia luminii, 11-cis retinalul este rapid convertit la izomerul trans, ceea ce
determin o modificare conformaional a opsinei i activarea acesteia (metarodopsin sau
opsin activat). Acest receptor activat interacioneaz i activeaz proteina Gt.
La ntuneric, potenialul de membran al celulelor cu bastona este de -30 mV, mult
mai mic dect potenialul de repaus al altor celule excitabile, cum este neuronul: -60-90 mV.
Ca o consecin a acestei depolarizrii, celulele cu bastona secret continuu
neurotransmitori, iar neuronii bipolari cu care sunt legate prin sinapse sunt stimulai
continuu. Depolarizarea determin n fapt existena unor canale ionice neselective deschise,
care permit trecerea ionilor de Na+, K+ i Ca2+. Absorbia luminii determin nchiderea
acestor canale, potenialul devine i mai negativ i sunt eliberai din ce n ce mai puini
neurotransmitori. Aceast modificare este perceput la nivelul creierului ca lumin.
Proteina care realizeaz conexiunea opsinei activate cu canalele cationice din
membrana plasmatic a celulelor cu bastona este GMP ciclic, care este sintetizat continuu
din GTP printr-o reacie catalizat de guanilatciclaza, care nu este afectat de lumin. De
fapt, absorbia luminii de ctre rodopsin induce activarea cGMP fosfodiesterazei, care
hidrolizeaz cGMP la GMP liniar, cu scderea concentraiei intracelulare de cGMP n cursul
expunerii la lumin. Nivelul intracelular crescut de cGMP la ntuneric menine canalele
ionice cu poart dependent de cGMP deschise, iar lumina induce descreterea nivelului
intracelular de cGMP i nchiderea canalelor ionice, hiperpolarizarea membranei i reducerea
secreiei de neurotransmitori. Trei sau patru molecule de cGMP trebuie s se lege de
canalul ionic pentru a-l deschide, aceast interaciune alosteric fiind foarte sensibil la
modificri mici de concentraie intracelular a cGMP.
12.2.1.3. Receptori cuplai la proteine G care au ca efector fosfolipaza C. Exist
ci de semnalizare celular care au ca mesager secundar molecule derivate din
fosfatidilinozitol. Fosfoinozitidele (PI4,5 bifosfat) sunt clivate de enzime asociate membranei
plasmatice denumite fosfolipaze C, cu formarea 1,2-diacilglicerolului (DAG), o molecul
lipofil care rmne asociat membranei, i inozitol 1,4,5 trifosfat (IP3) care difuzeaz n
citosol. Hormonii care se leag de receptori specifici cuplai la proteina Go sau Gq induc
activarea fosfolipazei C.
Concentraia intracelular de Ca2+ este meninut constant, sub 0,2, prin mai
multe mecanisme. Pompele Ca2+ATPazice pompeaz ionii de calciu din citosol n mediul
extracelular sau n lumenul unor compartimente celulare, deoarece o modificare mic a
concentraiei intracelulare a Ca2+ determin o varietate de rspunsuri celulare. Legarea unor
hormoni la receptorii lor de pe suprafaa hepatocitelor, adipocitelor i altor celule determin o
cretere a concentraiei intracelulare a ionilor de calciu, chiar i atunci cnd acest ion lipsete
din mediul extracelular, datorit eliberrii din lumenul RE prin deschiderea canalelor pentru
Ca2+ cu poart dependent de IP3 din membrana RE. Aceast protein-canal este format din
4 subuniti identice, fiecare dintre ele posed un situs de legare al IP3 n domeniul citosolic
N-terminal. Aceast cretere a concentraiei intracelulare a Ca2+, mediat de IP3, este
tranzitorie, deoarece Ca2+ATPazele localizate n membrana plasmatic i n membrana RE
pompeaz activ ionii de calciu din citosol la exteriorul celulei i n lumenul RE. n plus, o
grupare fosfat a IP3 este hidrolizat, cu formare de inozitol 1,4 difosfat care nu poate
declana eliberarea ionilor de calciu din lumenul RE. A fost evideniat existena n
membrana plasmatic a unui canal pentru Ca2+ denumit canal TRP care se deschide ca
rspuns la depleia depozitelor de ioni de calciu din lumenul RE. Aceast depleie determin
135
TGF induce exprimarea unor molecule ale adeziunii celulare i ale ECM. Legarea
TGF de receptorii celulari specifici stimuleaz celulele s sintetizeze i s secrete factori de
cretere care balanseaz efectul de inhibare a creterii exercitat de semnalele TGF, de aceea
TGF au fost considerai iniial ei nii factori de cretere. Receptorii TGF, odat activai
fosforileaz i activeaz un tip particular de factor de transcripie, rezultatul acestei activri,
adic rspunsul celular depinde de ali factori de transcripie existeni n celula respectiv.
Exist trei tipuri de receptori TGF: RI, RII i RIII. Cel mai abundent este RIII, un
proteoglican de suprafa celular denumit glican. RI i RII sunt proteine transmembranare
dimerice care au domenii citosolice cu activitate serin/treoninkinazic. RII este o kinaz care
se autofosforileaz n lipsa TGF. Legarea TGF induce formarea complexelor care conin
cte dou copii de RI i RI, ca urmare RII fosforileaz resturi de serin i treonin din RI
adiacent feei citosolice a membranei plasmatice, n acest mod RI kinaza devenind la rndul
ei activ. Receptorii activai TGF i exercit activitatea catalitic asupra unor factori de
transcripie denumii proteine Smad, care sunt de trei tipuri: Smad reglate de receptor
(R-Smad), co-Smad i Smad antagoniste sau inhibitoare (I-Smad). R-Smad conine dou
domenii MH1 i MH2 , iar domeniul N-terminal MH1 conine situsul specific de legare la
ADN i o secven semnal de localizare nuclear (NLS) necesar pentru importul nuclear al
proteinei. n forma inactiv, nefosforilat a R-Smad, NLS este mascat i domeniile MH1 i
MH2 sunt asociate n aa manier nct proteina nu se poate lega la ADN sau la co-Smad.
Fosforilarea R-Smad de ctre RI separ domeniile i permite legarea importinei la NLS. Se
formeaz complexul R-Smad cu co-Smad i importina mediaz translocarea complexului n
nucleu. Dup disocierea importinei, complexele Smad coopereaz cu ali factori de
transcripie pentru a activa transcripia genelor-int.
Toate celulele mamiferelor secret cel puin o izoform TGF i cele mai multe au
receptori TGF pe suprafaa lor, ns datorit faptului c proteinele Smad activate
interacioneaz cu seturi diferite de factori transcripionali n diferite tipuri de celule,
rspunsurile celulare obinute variaz n funcie de tipul celular. Semnalizarea celular prin
Smad este reglat de proteine denumite SnoN i Ski, identificate ca oncoproteine, deoarece
determin proliferare celular anormal dup supraexprimare n fibroblaste. SnoN i Ski se
leag la complexele Smad, blocnd activarea transcripiei i determinnd rezistena celulelor
la aciunea de inhibare a creterii prin TGF. Dup stimulri ndelungate ale celulei cu TGF
este posibil s apar nivele crescute de SnoN i Ski, ca i I-Smad, mai ales Smad7, care
blocheaz capacitatea RI de a activa prin fosforilare proteinele R-Smad.
Multe tumori umane sunt determinate de mutaii care produc alterri ale receptorilor
TGF i ale proteinelor Smad, celulele tumorale fiind rezistente la inhibarea creterii indus
de TGF: cancerele pancreatice umane sunt determinate de o deleie a unei gene care codific
un tip de Smad; retinoblastomul, cancerul de colon, gastric i hepatic, proliferrile maligne
ale celulelor T i B se datoreaz unor alterri ale receptorilor TGF de tip I sau II.
O alt clas de receptori cu activitate enzimatic asociat sunt receptorii citokinelor,
asociai la nivelul domeniului lor citosolic cu un membru al familiei de proteintirozinkinaze
denumit familia JAK kinazelor. Receptorii tirozinkinazici (RTK) au activitate enzimatic
intrinsec, proteintirozinkinazic, la nivelul domeniului citosolic. Liganzi ca interferoni,
eritropoietina, hormonul de cretere, interleukine (IL-2, IL-4) se leag pe receptorii
citokinelor i liganzi ca insulina, factorul de cretere epitelial (EGF), factorul de cretere al
fibroblastelor (FGF), neurotrofina i ali factori de cretere se leag pe receptorii
tirozinkinazici i declaneaz formarea receptorilor dimerici, activi, prin modificarea
conformaiei monomerilor preexisteni. Receptorii dimerici sunt deci formai prin asocierea a
dou kinaze, care se fosforileaz reciproc la nivelul unui rest de tirozin din situsul de
activare. Ca urmare a fosforilrii, acest situs se mic spre exterior, permind ATP i
moleculelor substratului proteic s se lege la aceste kinaze. Kinazele activate fosforileaz n
137
continuare alte resturi de tirozin din domeniul citosolic al receptorului, fosfotirozinele fiind
situsuri de ancorare ale domeniilor SH2 sau PTB caracteristice multor proteine ale cii de
transducie intracelular a semnalului. Prin ancorare, aceste proteine sunt la rndul lor
activate prin fosforilare de ctre kinazele asociate sau intrinseci ale acestor receptori i aduse
n apropierea moleculelor substratului, activnd calea de semnalizare intracelular. Sunt
ancorate astfel mai multe proteine formndu-se complexele de multiancorare cu rol n
traducerea semnalului.
Citokinele sunt o familie de proteine mici care controleaz aspecte ale creterii i
diferenierii tipurilor celulare specifice. De exemplu, interleukina 2 este esenial pentru
proliferarea celulelor T ale sistemului imun. Interleukina 4 este esenial pentru formarea
celulelor mature B productoare de anticorpi. Factorul de stimulare al coloniilor de
granulocite (G-CSF) induce diferenierea unui tip particular de celul stem pluripotent din
mduva osoas n granulocite. Trombopoietina induce diferenierea megacariocitelor, din
care prin fragmentare se formeaz plachetele sangvine, cu rol n hemostaz.
Eritropoietina este o citokin care induce diferenierea celulelor roii ale sngelui,
sintetizat de celule renale prin activarea factorului de transcripie HIF 1, sensibil la nivelul
de oxigen din snge. Eritropoietina se leag la receptorul specific EpoR, al crui domeniu
citosolic este asociat kinazei JAK2. Eritropoietina leag monomerii EpoR, pe care i aduce
aproape unul de cellalt declannd fosforilarea lor reciproc la tirozina din situsul de
activare. Se produce activarea kinazei. Resturile de fosfotirozin servesc ca situsuri de legare
pentru un grup de factori de transcripie denumii STAT. Bineneles, toate aceste proteine
STAT au un domeniu N-terminal SH2 care leag fosfotirozine, un domeniu central care
conine situsul de legare la ADN i un domeniu C-terminal cu un rest de tirozin care va fi
fosforilat de JAK kinaze, conducnd la activarea STAT i disocierea de pe receptor. STAT
disociate formeaz un dimer prin interaciunea fosfotirozinelor din domeniile lor SH2,
dimerizarea expunnd situsul NLS. Dimerul STAT importat n nucleu, se leag la o secven
ADN denumit enhancer, fiind un activator al transcripiei genei int. n eritroblaste,
stimularea prin eritropoietin induce transcripia genei care codific Bcl-xL. Aceast protein
previne moartea celular programat (apoptoza), permind eritroblastelor s prolifereze i s
se diferenieze n eritrocite.
Receptorii tirozinkinazici (RTK) leag factori de cretere i insulina. Dup
interaciunea cu ligandul, se produce activarea receptorului, a activitii tirozinkinazice, care
stimuleaz consecutiv calea Ras-MAP kinazelor i alte ci de traducere a semnalului, cu
implicare n supravieuire, proliferare, difereniere celular i reglarea metabolismului celular.
Alterri ale structurii RTK datorate unor mutaii n genele care codific aceti receptori au
fost asociate cu diferite forme de cancer. RTK mutante trimit celulei semnale de activare a
proliferrii n lipsa factorilor de cretere. Supraproducia receptorului EGF n anumite forme
de cancer mamar explic proliferarea tumoral n condiiile unor nivele normale de EGF.
RTK sunt monomeri i interaciunea cu ligandul determin formarea dimerilor RTK.
Receptorul insulinei formeaz dimeri prin legturi disulfidice n absena ligandului, ns
interaciunea cu insulina determin modificri conformaionale care activeaz receptorul. n
receptorul dimeric, kinaza unei subuniti fosforileaz unul sau mai multe resturi de tirozin
din situsul de activare al celeilalte subuniti, acest situs de activare fiind n proximitatea
situsului catalitic al celuilalt monomer. Se produce modificarea conformaional care permite
legarea ATP sau a substratelor proteice la receptorul activat. Este intensificat activitatea
kinazic a domeniului citosolic al receptorului, iar fosfotirozinele sunt situsuri de ancorare
pentru proteine adaptor, care au domenii SH2, SH3 sau PTB, care leag componente proteice
ale cilor de traducere cum sunt cele care activeaz Ras.
Proteinele Ras sunt proteine care leag GTP, alternnd ntre starea activ i starea
inactiv care este RasGDP. Activarea Ras este accelerat de un factor de conversie al
138
RTK i receptorii citokinelor pot iniia i cile de semnalizare IP3/DAG prin activarea
unei izoforme a fosfolipazei C (PLC). Domeniile SH2 ale izoformei a PLC se leag de
fosfotirozine din receptorii activai, n acest mod fosfolipaza C fiind poziionat aproape de
substratul su, PIP2 legat la membran. n acelai timp, activitatea kinazic a receptorului
determin fosforilarea resturilor de tirozin din PLC legat la membran, intensificnd
activitatea hidrolazic a acesteia.
Anumii receptori ai citokinelor sau RTK activai pot iniia o alt cale de traducere a
semnalului denumit calea fosfatidilinozitol-3 kinazei, prin recrutarea acestei enzime la
membran. PI-3 kinaza are un rol important n ci de semnalizare eseniale n proliferarea
celular i prevenirea apoptozei. Una dintre cele nou izoforme ale PI-3 kinazelor codificate
de gene umane a fost bine studiat i s-a constatat c are o subunitate p110 cu activitate
catalitic i o subunitate 85 cu un domeniu SH2 care se leag la resturi de fosfotirozin din
domeniul citosolic al RTK sau receptorilor citokinazici activai. PI-3 kinaza este poziionat
lng substratul fosfoinozitidic i catalizeaz formarea PI-3,4difosfatului sau
PI3,4,5 trifosfatului care acioneaz ca situsuri de ancorare pentru proteine implicate n ci
importante de traducere a semnalului. O astfel de protein este proteinkinaza B, o
serin/treoninkinaz. Pe lng domeniul catalitic, PKB conine un domeniu PH care se leag la
fosfatul din poziia 3 a PI3,4 difosfatului sau a PI3,4,5 trifosfatului, n acest mod PKB fiind
localizat la nivelul membranei plasmatice, iar situsul catalitic al PKB este demascat
devenind activ. Dup activarea complet a PKB prin interaciunea n planul membranei cu o
alt kinaz PDK1 care produce o fosforilare a PKB, PKB fosforileaz direct numeroase
proteine cu diferite funcii celulare. Astfel de proteine sunt proteinele pro-apoptotice Bad, a
cror activare previne apoptoza. PKB activat promoveaz supravieuirea celulelor prin
fosforilarea factorului Forkhead-1. n absena factorilor de cretere, Forkhead-1 este
nefosforilat i localizat n nucleu, unde activeaz transcripia unor gene care codific proteine
proapoptotice. Cnd celulele sunt stimulate de factori de cretere, PKB devin active i
fosforileaz Forkhead-1, care leag n aceast stare proteine 14-3-3, fiind sechestrat n
citosol. Inactivarea PKB favorizeaz apoptoza, iar mutaii care altereaz proteina Forkhead-1,
astfel nct sunt afectate serinele care sunt situsurile de fosforilare prin activitatea PKB,
iniiaz apoptoza i n prezena PKB activ. Fosforilarea prin PI-3 kinaz este reversibil.
PTEN fosfataza poate nltura gruprile fosfat ataate la resturi de serin, treonin i tirozin,
are capacitatea de a nltura gruprile fosfat din poziia 3 a PI 3,4,5 trifosfatului, ceea ce are
ca efect declanarea apoptozei.
Receptorul insulinic este un receptor dimeric tirozinkinazic care poate iniia calea
Ras-MAP kinazelor, conducnd la modificri n exprimarea genelor. Insulina poate stimula
inierea cii PI-3 kinazelor, cu activarea PKB. n hepatocitele, celulele musculare sau
adipocitele stimulate de insulin, PKB activat determin scderea glicemiei prin importul
glucozei n celule i stimularea glicogenogenezei. Mecanismul prin care PKB activ
determin transportul glucozei n celule nu este pe deplin elucidat, dar s-ar prea c este
determinat de mutarea transportorului GLUT4 al glucozei din membrane intracelulare n
membrana plasmatic. Att n ficat ct i n musculatur, stimularea prin glucoz activeaz
glicogen sintetaza (GS) care catalizeaz sinteza glicogenului din UDP-glucoz. n celulele n
repaus, n absena insulinei, glicogensintetazkinaza 3 este activ i fosforileaz
glicogensintetaza blocndu-i activitatea. PKB activ fosforileaz i inactiveaz GSK 3, astfel
GS este activ i catalizeaz sinteza glicogenului.
12.2.3. Ci care implic clivare proteolitic indus de semnal.
Aceste ci de semnalizare sunt ireversibile deoarece un component este clivat
proteolitic.
Una dintre aceste ci este calea NF-kB care permite celulelor s rspund rapid la
condiii determinante de stres. Mecanismul specific const n fosforilare urmat de degradare
140
ubiquitin-mediat a unei proteine inhibitor, cum este factorul de transcripie NF-kB, care este
principalul reglator transcripional din celulele sistemului imun. NF-kB este rapid activat n
celulele imune ca rspuns la infecii, inflamaii, la citokinele proinflamatorii cum este TNF
i interleukina-1 secretate de celule adiacente ca rspuns la infecie i la ali factori de stres,
cum sunt radiaiile ionizante. Cele dou subuniti ale heterodimerului NF-kB mprtesc
aceleai regiuni omoloage n domeniul N-terminal care permit dimerizarea lor i legarea de
ADN. n celulele n repaus NF-kB este sechestrat n citosol n form inactiv, fiecare
monomer fiind legat de o molecul inhibitoare care mascheaz i secvenele de localizare
nuclear. Dup stimulare, n cteva minute, este activat o kinaz care fosforileaz dou
resturi de serin din proteina inhibitoare a NF-kB. O ubiquitin-ligaz se leag apoi de aceste
fosfoserine ale inhibitorului, declannd degradarea proteolitic de ctre proteasom.
Degradarea inhibitorului expune i secvena de localizare nuclear a NF-kB, care este
importat n nucleu unde activeaz transcripia unei multitudini de gene-int (mai mult de 150
de gene), printre care i a celor care codific citokine i chemokine cu funcia de atragere a
altor celule imune i fibroblati la situsul infeciei, ca i a genelor receptorilor care leag
proteinele ce permit neutrofilelor s migreze din fluxul sangvin n esuturi. NF-Kb stimuleaz
exprimarea genei iNOS, enzima inductibil care produce oxid nitric, care este toxic pentru
celulele bacteriene i exprimarea genelor unor proteine antiapoptotice care previn moartea
celulelor imune. Acest factor de transcripional activeaz expresia unor gene fie ca rspuns
direct la patogeni/stres, fie ca rspuns indirect la aciunea moleculelor semnal eliberate de
celule infectate sau lezate (citokine sau interleukine).
Una dintre genele a crei exprimare este activat de NF-kB este gena inhibitorului
NF-kB, care leag NF-kB n nucleu i l transport n citosol, inactivndu-l prin feedback
negativ. NF-kB este implicat n rpunsul inflamator i imunitate, dar i n dezvoltarea
normal datorit faptului c stimuleaz exprimarea unor proteine antiapoptotice, evitndu-se
apoptozele excesive care ar determina degenerare de organe, prin moartea unor celule care n
mod normal, trebuie s supravieuiasc.
O alt cale de semnalizare care implic proteoliza unui component este calea NotchDelta. Receptorul Notch i ligandul su Delta sunt proteine transmembranare, cu numeroase
secvene repetitive de tip EGF n domeniul extracelular. Au rol n mecanisme de difereniere
celular de tipul inhibiiei laterale, prin care celule adiacente, echivalente din punct de vedere
al potenialului de difereniere, devin capabile s urmeze ci de difereniere total diferite. Se
previne astfel de exemplu, formarea a prea multor precursori ai celulelor nervoase din stratul
de celule nedifereniate. Proteina Notch este sintetizat ca protein monomer membranar n
RER, unde leag presenilina1, o protein membranar cu mai multe domenii
transmembranare. Complexul format ajunge n aparatul Golgi unde are loc o clivare
proteolitic care genereaz o subunitate extracelular i o subunitate transmembranarcitosolic, care rmn asociate prin legturi slabe, non-covalente, n absena interaciunii cu
ligandul Delta din alt celul. Legarea Delta declaneaz o prim clivare proteolitic, o a
doua clivare n regiunea hidrofob transmembranar a receptorului Notch este catalizat de
presenilina1 i are ca rezultat eliberarea domeniului citosolic al Notch, care este translocat n
nucleu. Presenilina 1 este o protein a crei gen prezint mutaii la pacienii cu form
autozomal dominant a maladiei Alzheimer. Modificarea patologic major este acumularea
plcilor de amiloid n creier. Aceste plci de amiloid conin agregate de peptide mici alctuite
din 42 de aminoacizi denumite A42, care deriv din clivarea precursorului amiloidului, o
protein de suprafa specific neuronilor. Clivarea precursorului amiloidului este catalizat
de sau secretaze. secretazele catalizeaz o a doua clivare, care implic aceeai
metaloproteaz denumit TACE ce cliveaz i Notch, genernd peptide alctuite din 26 de
aminoacizi care nu au efecte nocive. Clivarea iniiat de secretaze determin apariia
peptidelor patologice A42, clivarea fiind intensificat de presenilina1 mutant de la
141
142
13.1. Etapele ciclului celular. Ciclul celular are 4 faze majore: faza G1 n care are loc
sinteza ARN i a proteinelor, este o faz de pregtire pentru faza S n care se desfoar
sinteza de ADN i replicarea cromozomilor, urmeaz faza G2 i faza M (mitoza).
Cromozomii sunt structuri condensate ale cromatinei, vizibile n microscopia optic,
formate din dou molecule de ADN rezultate din replicare, care mpreun cu histonele i alte
proteine ale cromatinei, alctuiesc cele dou cromatide-surori, unite la nivelul centromerului.
n interfaz, membrana nucleului este continu, n relaie structural-funcional cu RE.
n profaz, nveliul nuclear se dezintegreaz, se retrage n RE i aparatul Golgi, care
formeaz vezicule. Microtubulii formeaz fusul de diviziune i capteaz cromozomii prin
intermediul cinetocorului. n metafaz, cromozomii migreaz n placa metafazic, la centrul
fusului de diviziune. Anafaza se caracterizeaz prin separarea cromatidelor-surori i migrarea
cromozomilor unicromatidici spre cei doi poli ai fusului de diviziune. n telofaz microtubulii
fusului de diviziune se dezasambleaz, cromozomii se decondenseaz, se formeaz nveliul
nucleului celor dou celule-fiice, la fel i sistemul de endomembrane dup citokinez
(diviziunea fizic a citoplasmei, cu formarea celor 2 celule-fiice). Celulele rezultate n urma
mitozei intr n faza G1, au un numr diploid de cromozomi, motenit de la celula parental.
Ciclul celular al celulelor umane este parcurs n intervalul de 24 de ore, din care mitoza se
desfoar n 30 de minute, faza G1 dureaz aproximativ 9 ore, faza S n jur de 10 ore, iar
faza G2 aproximativ 4-5 ore. Celulele difereniate ies din ciclul celular n timpul fazei G1,
intr n faza G0 unde supravieuiesc zile, sptmni sau toat viaa fr a se divide din nou
(neuronii). Anumite celule aflate n faza G0 se pot rentoarce n ciclul celular, pe care l
parcurg i se divid , procesul fiind strict reglat prin mecanisme de control ale proliferrii
celulare. Fibroblatii i limfocitele pot fi stimulate s reintre n ciclul celular i s se divid
din nou.
143
Celula este stimulat s parcurg ciclul celular i s se divid prin exprimarea unor
complexe G1 ciclin-CDK, care fosforileaz i activeaz factorii de transcripie ai genelor care
codific enzimele implicate n replicarea ADN. Este activat i transcripia genelor care
codific S-ciclin-CDK. n faza G1 trzie, G1ciclin-CDK declaneaz prin fosforilri
degradarea inhibitorilor fazei S, care sunt poliubiquitinilai i clivai de proteasom.
Ciclin-CDK caracteristice fazei S devin, n consecin active, activeaz enzimele
replisomului, care i ncep activitatea la situsurile de origine ale replicrii. n faza S sunt
sintetizate complexele M ciclin-CDK, care ns sunt meninute inactive, inhibate prin
fosforilarea unor situsuri specific din molecule, astfel nct replicarea ADN s fie complet,
iar mecanismele reparatorii ale erorilor din replicarea ADN s aib la dispoziie timpul
necesar pentru a-i ndeplini rolul. Prin defosforilarea ulterioar, M ciclin-CDK devin active
144
146
14. Apoptoza
celule. Unele gene virale codific proteine omoloage unor inhibitori ai apoptozei: omologi ai
Bcl-2 (virusul Epstein-Barr), omologi ai inhibitorilor activrii caspazelor sau determin
blocarea TNF i Fas sau inhibarea p53 (virusul hepatitei B). Infecia cu HIV (virusul
imunodeficienei umane) determin depleia limfocitelor T helper CD4+. Un mecanism de
depleie const n declanarea apoptozei prin enzime sintetizate de HIV care dezactiveaz
proteina antiapoptotic Bcl-2 sau prin interferena cu mecanismul proapoptotic mediat de Fas.
Proteinele HIV determin scderea expunerii glicoproteinelor CD4 pe suprafaa lfT helper
(markeri membranari ai lfT helper). Celulele CD4+ infectate pot primi semnale apoptotice de
la limfocite T citotoxice.
150
Cele mai multe celule-stem adulte sunt multipotente, se difereniaz n celule identice cu
esutul de origine, de exemplu celulele-stem mezenchimale, adipoase, endoteliale, etc.
Celulele-stem se caracterizeaz prin dou tipuri de diviziune: diviziune simetric din
care rezulta dou celule-stem identice cu celula-mam i diviziune asimetric din care rezult
o celul stem i o celul progenitor cu capacitate redus de autorennoire datorit segregrii
diferite a unor receptori celulari i a altor proteine cu funcii importante. Celulele progenitor
sunt cele care se difereniaz n celule specializate.
15.2. Diferenierea celular. Este procesul prin care o celul formeaz o alt celul
cu grad mai mare de specializare. Din zigotul format prin fecundarea ovulului cu
spermatozoidul se formeaz datorit proceselor de difereniere organismul multicelular
alctuit din mai multe tipuri de celule i esuturi specializate. Organismul adult este format
din 1014 celule care conin o copie proprie a genomului i, cu excepia hematiilor adulte, sunt
celule cu numr diploid de cromozomi, somatice, difereniate, specializate pentru diferite
funcii. Organismul adult conine i celule germinale (gameii) precum i celulele-stem
adulte. Celulele-stem ale organismului adult se divid i formeaz celule-fiice difereniate n
cursul reparrii esuturilor i procesului normal de turn-over celular. Diferenierea const n
modificri ale formei i dimensiunii celulelor, ale potenialului de membran, modificri
metabolice i ale semnalizarii celulare datorit modificrii exprimrii genelor, dar nu i a
secvenei primare a ADN. Se produc modificri celulare fizice i fiziologice, dar genomul
rmne acelai.
n cursul embriogenezei au loc diviziuni celulare coordonate, specializri celulare,
procese de migrare celular i apoptoze. Primele diviziuni ale zigotului denumite clivri se
caracterizeaz prin lipsa creterii celulare, citoplasma se reduce la jumtate n celulele-fiice,
genomul devine activ i controleaz dezvoltarea embrionar ulterioar. Clivrile au loc n
interiorul zonei pellucida, o membran ferm cu important coninut glicoproteic, care
a nconjurat de la nceput ovulul i a fost penetrat de spermatozoid. La 1 or de la
fecundare, zigotul se divide n dou celule identice, n a 8-a etap de diviziuni celulare grupul
de celule format devine compact prin interconectare datorit unor jonciuni de tip permeabil
(,,gap junctions), n care conexinele delimiteaz porul ce permite schimbul de ioni i
molecule mici ntre celule. Dup compactare se formeaz stadiul embrionar denumit morula,
al crei strat extern de celule prezint polaritate (un pol al unei celule difer de cellalt pol).
n a 5-a zi de dezvoltare embrionar, datorit exprimrii difereniate a unor gene n celulele
morulei, are loc cavitaia (se formeaz o cavitate plin cu lichid denumit blastocel), apare un
nou stadiu embrionar, blastocistul i ncepe specializarea celular. Dispare zona pellucida,
ceea ce va permite creterea embrionului. Se ncheie astfel faza de preimplantare din
dezvoltarea embrionar. Blastocistul este format dintr-un strat extern de celule denumit
trofoblast, provenit din stratul extern de celule cu polaritate al morulei, i o mas intern de
celule (ICM), provenite din celulele apolare ale stratului intern al morulei. Sursa primar de
energie n primele etape de diviziune ale embriogenez denumite clivri sunt piruvatul,
lactatul i aminoacizii, n timp ce celulele blastocistului uman dein transportorul membranar
al glucozei denumit GLUT8 i receptori membranari pentru factorul de cretere IGF-1
(,,insulin like growth factor).
Zigotul i celulele aprute prin clivrile din embriogeneza timpurie (faza de
preimplantare) sunt celule-stem totipotente, celule care se pot diferenia n toate tipurile de
152
celule. Pierderea unor celule n aceast etap, care sunt prelevate din embrionul obinut prin
FIV, n scopul obinerii unui diagnostic genetic preimplantare, poate fi compensat de
celelalte celule-stem embrionare. Celulele masei interne a blastocistului au proprietate de
pluripoten, din ele se vor forma toate esuturile embrionului i esuturi extraembrionare. n
ziua a 8-9 dup fecundare, blastocitul este implantat n uter . Trofoblastul se difereniaz n
dou straturi: unul intern denumit citotrofoblast i cellalt extern denumit sinciiotrofoblast,
care va realiza implantarea blastocistului n endometru prin formarea unor proiecii
digitiforme denumite vili corionici i a unor spaii denumite lacune care conin snge matern.
ICM se difereniaz n hipoblast i epiblast, din hipoblast prin difereniere se formeaz
endodermul extraembrionar, care va da natere la sacul vitelin, iar epiblastul formeaz
ectodermul primitiv sau embrionar i ectodermul amniotic. Procesele de difereniere
menionate determin formarea gastrulei (ziua a 14-a dup fecundare). ntre ziua a 14-a i a
16-a a dezvoltrii embrionare, apare anul primitiv. Ectodermul primitiv se difereniaz n
straturi germinale: n ectoderm embrionar i datorit anului primitiv sunt delimitate
endodermul embrionar i mezodermul embrionar (i mezodermul extraembrionar).
Celulele endodermului se vor diferenia n celulele epiteliale ale tubului digestiv, cu
excepia epiteliilor cavittii bucale, faringelui i prii terminale a rectului, n celule epiteliale
ale glandelor digestive, inclusiv cele ale ficatului i pancreasului, n epiteliile urechii externe
i cavitii timpanului, n celulele traheei, bronhiilor, alveolelor pulmonare, n celulele vezicii
urinare i parial ale uretrei; prin difereniere din celulele-stem ale endodermului se formeaz
celulele foliculilor tiroidieni i celule ale timusului.
Mezodermul formeaz prin difereniere celular miocitele din musculatura scheletic,
celulele scheletului, celulele dermului, celulele esuturilor conjunctive, ale sistemului
urogenital, celulele miocardului, ale splinei i elementele figurate ale sngelui.
Ectodermul formeaz sistemul nervos central, cristalinul, analizorii, ganglionii i
nervii, celulele pigmentare, epiderma, foliculii piloi i glandele mamare.
Celulele primordiale germinale se desprind din regiunea proximal a epiblastului i
migreaz n mezodermul extraembrionic, evitnd anumite evenimente care ar conduce aceste
celule pe calea diferenierii n celule somatice. Mecanismele de evitare a diferenierii n
celule somatice sunt mecanisme epigenetice.
15.3. Mecanismele diferenierii celulare. Celulele specializate exprim un subset al
genelor care alctuiesc genomul speciei, fiecrui tip celular fiindu-i caracteristic un anumit
model (pattern) de reglare a expresiei genice. Diferenierea implic trecerea de la un mod de
reglare a expresiei genice la un alt mod. Rolul central n difereniere revine unor procese
moleculare aparinnd unor ci de semnalizare, diferenierea fiind declanat de anumite
molecule-semnal cum sunt factorii de cretere. Activarea n etapa final a unui factor de
transcripie sau a unei proteine asociate citoscheletului declaneaz diferenierea.
Diviziunea celular asimetric conduce la formarea unor celule-fiice cu soart
distinct n ceea ce privete diferenierea: celulele progenitor totipotente. Celulele-progenitor
rezult n urma citokinezei datorit distribuiei neuniforme a unor molecule cu rol reglator
provenite din celula-mam pluripotent. Celulele progenitor motenesc un set diferit de
proteine fa de cel al celulei-stem din care provin, i un patern diferit de difereniere.
Exprimarea unor gene stimuleaz proliferarea celulelor ICM i/sau epiblastului,
menine pluripotena i caracterul de celule nedifereniate ale acestora. Exist mecanisme de
153
reglare genetic care, dimpotriv, orienteaz celula spre o anumit cale de difereniere sau
determin implantarea embrionului n uter.
Decizia ntre a prolifera i a se diferenia este o decizie critic pe care o celul trebuie
s o ia de cteva ori n cursul dezvoltrii i un rol central au mecanismele epigenetice de
reglare a diferenierii. Epigenetica se refer la modificri ale expresiei genice care nu
altereaz secvena primar a ADN. Majoritatea schimbrilor epigenetice se produc pe
parcursul vieii, dar unele se transmit de la o generaie la alta. Printre procesele specifice
epigenetice se numr: paramutaia, bookmarking-ul (memoria celular, transmiterea
patternului expresiei genice n timpul mitozei celulelor-fiice), amprentarea genomic,
reprimarea expresiei genice, inactivarea cromozomului X, reglarea modificrilor histonice,
metilarea ADN. Epigenetica studiaz fenomenele biochimice care permit acidului
dezoxiribonucleic s se exprime ntr-o manier diferit, datorit activrii sau reprimrii
anumitor gene, dar fr a provoca schimbri la nivelul secvenei genice. Celulele unui
organism multicelular sunt omogene din punct de vedere genetic, dar heterogene din punct de
vedere structural i funcional, datorit exprimrii diferite a genelor. Multe din aceste
modificri n expresia genic apar n cursul dezvoltrii, dar sunt ,,reinute, memorate n
cursul mitozelor.
15.3.1. Metilarea ADN este o modificare post-replicare predominant n citozinele
secvenelor de dinucleotide CpG (citozin5metilcitozin). Se produce iniial un val de
demetilri n timpul clivrilor, urmat de metilare genomic de novo dup implantarea
embrionului. Metilarea este un proces intens n gastrul, dar descrete pe msur ce au loc
diferenieri, n celulele specializate. Metilarea ADN este un eveniment rar n dezvoltarea
postgastrulaie, dar des ntlnit n stabilirea de linii celulare in vitro sau n celulele tumorale.
Dinucleotidele CpG reprezint 1% din genomul uman, 80% fiind metilate. CpG nemetilate
sunt grupate n ,,insule de CpG care sunt situate n regiunile reglatorii 5 ale genelor. n
anumite procese cum este cancerul, insulele CpG din promotorii unor gene achiziioneaz o
hipermetilare neobinuit, care determin inactivarea transcrierii genelor n celulele
respective, dar i n generaiile descendente de celule (,,heritable transcriptional silencing).
De fapt, metilarea ADN poate influena expresia genic n dou moduri: blocarea fizic a
interaciunii cu gena a proteinelor implicate n reglarea transcripiei, fiind astfel blocat
transcrierea genei sau, al doilea mecanism probabil mai important, const n legarea la ADN
metilat a unor proteine cunoscute sub denumirea de proteine de legare a domeniului metilCpG, urmat de recrutarea unor proteine adionale n acest locus, cum ar fi histondeacetilazele sau alte proteine de remodelare a cromatinei care contribuie la formarea
cromatinei compacte, inactiv transcripional. Acest proces are un rol central n dezvoltare, n
cursul diferenierii celulare. Pe de alt parte, pierderea unei astfel de proteine de legare a
domeniului metil-CpG denumit MeCP2 (,,Methyl-CpG-binding Protein 2) este implicat n
sindromul Rett, iar MBD2 (Methyl-CpG binding domain protein 2) mediaz inactivarea
transcripional a genelor hipermetilate n celulele tumorale, cum sunt genele supresoare ale
tumorilor. La om, procesul de metilare al ADN este catalizat de trei enzime,
ADN metil transferazele 1, 3a i 3b (DNMT1, DNMT3a, DNMT3b). DNMT3a i DNMT3b
sunt metiltransferazele care catalizeaz metilarea de novo, stabilind pattern-urile de metilare
ale ADN n dezvoltarea embrionar timpurie. DNMT1 este metiltransferaza care copiaz
pattern-ul de metilare al ADN n catenele-fiice n cursul replicrii ADN.
154
Figura 92. a) histon acetiltransferazele (HAT) genereaz pattern-uri de acetilare (Ac) recunoscute de ali reglatori
ai transcripiei, cum sunt bromodomeniile care conin factorii TAFII250, PCAF i GCN5 cu rol n ,,deschiderea
cromatinei i activarea genelor. b) histona H3 metilat, legat de proteinele HP1/Swi6 ale cromodomeniului
asociat heterocromatinei, stabilete un domeniu de cromatin inactiv transcripional. Imagine prelucrat dup
Patrick A. Grant. ,,A tale of histone modifications.
Acetilarea i deacetilarea gruprilor -amino din resturile de lizin ale histonelor sunt implicate
n activitatea de transcripie: histonele acetilate sunt asociate cu cromatina activ transcripional,
iar histonele deacetilate, cu cromatina inactiv transcripional. Acetilarea histonelor este asociat
replicrii ADN, asamblrii nucleosomilor i mpachetrii cromatinei, precum i interaciunilor
proteinelor non-histonice cu nucleosomii. Histona H3 este nalt conservat n evoluie, iar
gruprile amino ale lizinelor din poziia 9, 14, 18 i 23 din H3 i ale lizinelor din poziia 5, 8,12
i 16 din histonele H4, sunt frecvent modificate. Neutralizarea sarcinilor electrice pozitive din
partea amino-terminal a acestor histone prin acetilare, reduce afinitatea de legare a ADN
155
156
c-Jun i c-Fos favorizeaz activarea acestor gene. Acelai mecanism de fosforilare mediaz
alterarea structurii condensate a cromatinei, favoriznd accesul proteinelor implicate n
mecanismele reparatorii ale leziunilor ADN. Metilarea histonelor este implicat n activarea
transcripiei. Metilarea are loc preferenial la lizinele din poziiile 4, 9 i 27 ale histonelor H3 i
la lizinele din poziia 20 ale histonelor H4, lizinele pot fi mono-, di- sau trimetilate. Proteina
uman SUV39h1 metileaz selectiv lizina din poziia 9 a histonei H3. Supraexprimarea
SUV39H1 induce formarea de heterocromatin n locaii normal eucromatinice, probabil
metilarea favorizeaz legarea proteinelor specifice ale heterocromatinei. Proteina specific
heterocromatinei HP1 leag cu mare afinitate H3 care au fost metilate la lizine din poziia 9 de
ctre SUV39H1 i este inactivat transcripia. Regiunile de tip cromodomeniu ale HP1 mediaz
aceste intraciuni cu metillizinele. Metilarea lizinelor din poziia 9 interfer cu fosforilarea
serinei adiacente din poziia 10 catalizat de Ip11/kinaza aurora i este inhibat de acetilarea
anterioar a lizinelor din poziia 9. Cozile histonice nemodificate favorizeaz metilarea mediat
de SUV39H1 i rspndirea heterocromatinei.
15.3.3. Interferena ARN (RNAi). Este un proces de inactivare genic (,,gene
silencing) controlat de RISC (,,RNA-induced silencing complex) i iniiat de molecule dublucatenare de ARN care interacioneaz cu componentul catalitic al RISC, endonucleaze denumite
argonaut. ARN dublu catenar poate fi de origine exogen, achiziionat de celule prin infecii cu
ribovirusuri (ARN viral) sau prin infectarea n timpul manipulrilor n laborator, este importat
n citoplasm i clivat n fragmente scurte. Clivarea ARN este catalizat de enzima Dicer, se
formeaz fragmente scurte, alctuite din 21-25 perechi de baze i cteva baze excedentare
nemperecheate la ambele capete ale fragmentelor. Aceste specii moleculare mici de ARN de
origine endogen se numesc siARN (,,small interference ARN). siARN sunt complementare
unui singur ARN mesager int, induc clivarea unui singur ARN mesager specific.
ARN dublu catenar de origine endogen este sintetizat ca pre-microARN, prin transcripia
genelor care i codific, genomul avnd gene care nu codific proteine, ci diferite specii de
ARN. Dup sintez, pre-microARN este exportat din nucleu i clivat n citoplasm de enzima
Dicer. miARN au complementaritate parial cu ARN mesager int, recunoate i leag mai
multe tipuri de ARN mesager cu secven similar i inhib translaia. miARN are deci efect
represor al translaiei, probabil prin inhibarea interaciunii factorilor de iniiere a translaiei cu
coada poliA a ARN mesager. miARN intervine n acest mod n dezvoltare, n morfogenez i n
meninerea statutului de celule nedifereniate sau incomplet difereniate al celulelor-stem.
miARN sunt implicai n formarea tumorilor prin intervenie n mecanismele de reglare ale
ciclului celular, dar intervin i n mecanismele de supresie tumoral. RNAi poate declana
activarea unor gene, siARN i miARN care sunt complementare promotorilor unor gene pot
intensifica transcripia acelor gene.
15.4. Ci particulare de reglare a diferenierii celulare.
Proteina Shp2, codificat de gena PTPN11, este o proteintirozinfosfataz cu rol n
reglarea creterii i diferenierii celulare. Intervine n transformarea oncogen. Are rol reglator
n semnalizarea celular prin reglarea fin a puterii semnalului din diferite ci de semnalizare,
ceea ce are ca finalitate reglarea transcripiei unor gene implicate n difereniere i n migrarea
157
semnalului avnd ca efect mobilizarea proteinelor din familia SMAD cu rol n dezvoltarea
cordului, SNC, cartilajului, oaselor i patternului embrionar. BMP4 i inhibitorii si regleaz
polaritatea embrionului. BMP4 regleaz diferenierea celulelor mezenchimale derivate din
mezoderm, activeaz gene n celulele epiblastului, ca urmare acestea migreaz i formeaz
anul primitiv. SMAD activate de BMP induc exprimarea proteinelor Id care acioneaz ca
inhibitori ai diferenierii. Id au rol important n angiogenez, neurogenez i osteogenez,
reglnd rspunsul celular la BMP i TGF-.
Wnt sunt molecule-semnal care dup legarea de receptorul lor specific determin
activarea cii de semnalizare care duce la creterea nivelului intracelular de -catenin, prin
inhibarea complexului axin-GSK-3-APC care degradeaz proteolitic -catenina. -catenina
care se acumuleaz intracelular ptrunde n nucleu, interacioneaz cu anumii factori de
transcripie (TCF/LEF) care activeaz exprimarea specific a unor gene implicate n
difereniere. De exemplu, dup interaciunea cu TCF3, acest factor de transcripie scade
exprimarea Nanog care menine pluripotena celulelor-stem. Wnt sunt factori de cretere ai
celulelor-stem, promoveaz proliferarea i diferenierea acestora n celule progenitor
multipotente din mezoderm i endoderm, stimuleaz gastrulaia, formarea anului primitiv,
stimuleaz diferenierea celulelor mezodermale cu potenial hematopoietic (Wnt1i3),
proliferarea celulelor-stem neuronale (Wnt1) n regenerarea celulelor sistemului nervos.
FGF (,,fibroblast growth factor) sunt ageni mitogeni, au efecte reglatoare i
morfologice, au rol esenial n dezvoltarea embrionar prin proliferarea celulelor endoteliale i
organizarea lor fizic n structuri tubulare; promoveaz angiogeneza, repararea esuturilor i
mucoaselor lezate (formarea esuturilor de granulaie) prin proliferarea, diferenierea i
migrarea celulelor epiteliale. n dezvoltarea embrionar stimuleaz deci proliferarea i
diferenierea celular, au rol regulator n migrarea celuleor i apoptoz. n organismele adulte
au rol esenial n repararea tisular. Receptorii acestor factori de cretere fac parte din clasa
receptorilor tirozinkinazici.
Calea LIF-STAT3: STAT3 regleaz direct exprimarea factorilor de transcripie Myc.
Activarea receptorului citokinei LIF (LIF-R), este urmat de recrutarea STAT3 la complexul
receptor, unde este activat de Jak (Janus kinaze), se produce dimerizarea STAT3, translocarea
n nucleu i activarea genelor-int prin exprimarea crora este meninut pluripotena i
capacitatea de autorennoire a celulelor-stem murine. LIF i Wnt promoveaz pluripotena prin
activarea unor ci separate de semnalizare celular, care ns converg, avnd un efector
comun, factorul de transcripie Myc. La om ns, celulele-stem embrionare se difereniaz n
prezena familiei de citokine Il-6 (din care face parte i LIF) i se pierd markerii pluripotenei:
Nanog, Oct4, TRA-1-60, deci nu poate fi prevenit diferenierea. Celulele-stem mezenchimale
adulte au un potenial de difereniere n mai multe linii celulare. Expresia Il-6 este crescut n
celulele-stem mezenchimale comparativ cu nivelul de exprimare din derivaii lor condrogeni,
osteogeni, adipogeni. Celulele mduvei spinrii secret mari cantiti de Il-6 care scad
dramatic n cursul diferenierii osteogene. Il-6 este necesar pentru proliferarea celulelor MS,
protecia fa de apoptoz, inhib diferenierea adipogen i condrogen.
Calea Il-6 ERK1/2 menine pluripotena i inhib diferenierea celular. Il-6 activeaz
STAT3 i ERK1/2 (MAPK) n celulele-stem cardiace. Stimularea prin LIF determin inducia
genelor specifice celulelor endoteliale (VE-caderine, CD31, Flk-1, GATA-4, GATA-6). Il-6
induce diferenierea celulelor-stem neurale n neuroni glutamat responsivi i celule astrogliale.
Activarea cii MAPK/CREB (,,mitogen activated protein kinase/cAMP response element
159
binding protein) prin Il-6 stimuleaz neurogeneza, iar activarea STAT3 promoveaz
gliogeneza.
ERK5 (kinaza 5 reglat de semnale extracelulare), care este membru al proteinkinazelor
activate de mitogeni, la fel ca ERK1/2 exercit roluri importante n diferenierea i proliferarea
celular i n migrarea celular n cursul dezvoltrii sistemului cardiovascular i diferenierii
neurale. ERK activate fosforileaz factori de transcripie ca c-Myc sau Elk1 i proteinkinaze,
ceea ce are ca efect inducia unor gene-int ca c-Fos care contribuie la proliferarea celular.
Proteinele REST (,,RE1-silencing transcription factor) blocheaz exprimarea miRNA
prin inactivarea genelor corespunztoare ( REST controleaz transcripia a 11 tipuri de
miRNA). Nivelul intracelular crescut de REST din celulele-stem conduce la inactivarea genelor
miRNA-21, scderea exprimrii miRNA-21 care inactiveaz ARNm corespunztor markerilor
pluripotenei: Oct4, Nanog, Sox2, c-Myc etc. ceea ce determin meninerea statutului de celule
pluripotente, nedifereniate. Scderea nivelului REST favorizeaz exprimarea miRNA care
degradeaz ARNm al markerilor de nedifereniere, reduce capacitatea de proliferare,
favoriznd diferenierea.
Inducia genelor FGF/MAPK i a genelor PI3K favorizeaz diferenierea celulelor
hepatice i ale intestinului din masa de celule multipotente ale endodermului.
Factori de transcripie care regleaz exprimarea genelor implicate n difereniere,
dezvoltare embrionar i semnalizare sunt membrii Forkheadbox (FOX). Unul dintre membrii
acestei familii de factori de transcripie, FOXA1 leag stabil nucleosomi i distruge structura
nalt organizat a cromatinei i mpreun cu alte proteine reglatoare intermediare ntre H1
linker i factorii de transcripie tradiionali, creeaz o regiune expus a cromatinei care permite
legarea altor factori de transcripie.
Proteinele ,,Groucho-related Gro/Tlc/Grg sunt corepresori care regleaz segmentarea
embrionului, pattern-ul dorsoventral, neurogeneza i cile de semnalizare Notch i Wnt.
Groucho se leag de situsurile reglatoare ale genelor-int i determin dizlocarea complexelor
activatoare ale transcripiei acestor gene i recrutarea proteinelor represoare de tip histondeacetilaze. Celulele nedifereniate ale endodermului exprim Grg1 i Grg 3. n timpul
diferenierii n celule specializate ale ficatului i pancreasului, nivelul intracelular de Grg
scade, ceea ce permite activarea exprimrii setului de gene ale celulei specializate. FOXA1
recruteaz Grg la nivelul situsurilor de reglare ale genelor, prevenind exprimarea lor
nepotrivit, dar scderea Grg permite activarea rapid a transcrierii genelor i specializarea
celular.
15.5. Proliferarea tumoral. Cancerele sunt o clas de boli n care anumite celule
prezint cretere necontrolat i diviziuni peste limita normal ( se depete limita Hayflick),
urmate de invazie i distrugerea esuturilor adiacente i cteodat i metastaze (rspndire n
organism prin snge i limf). Sunt determinate de anomalii ale materialului genetic induse de
carcinogeni sau de erori aprute n cursul replicrii ADN asociate cu mecanisme deficitare de
reparare ale acestor leziuni. Apariia cancerului implic de multe ori cauze ereditare.
Anomaliile genetice afecteaz dou clase de gene:
1. oncogenele care odat activate, confer noi proprieti celulelor (cretere
hiperactiv i diviziuni peste limita normal, protecie fa de apoptoz, capacitatea de a se
stabili n diverse medii tisulare). 2. inactivarea genelor supresoare ale tumorilor.
160
tumorale).
Genele supresoare ale tumorilor inhib diviziunea celular i favorizeaz supravieuirea,
iar defectele acestor gene favorizeaz proliferarea tumoral.
Mutaiile la scar mare care determin transformare malign sunt:
amplificarea genomic- mai multe copii ale unui locus cromozomial care conine
oncogene
translocarea- dou locususuri cromozomiale separate devin anormal fuzionate ( ntre
cromozom din perechea 9 i din perechea 22, urmat de exprimarea unei proteine de fuziune
denumit proteina BCR-abl care este o tirozinkinaz oncogen)
Proliferarea tumoral poate fi declanat de mutaiile la scar mic:
n promotorul unei gene, afectnd exprimarea genei
n secvena codificatoare, consecina este sinteza unei proteine cu funcie sau stabilitate
alterat
integrarea materialului genetic viral care influeneaz exprimarea oncogenelor celuleigazd.
162
List de abrevieri
AA- aminoacizi
GAG- glicozaminoglicani
Gly- glicin
Ala- alanin
GTP- guanozintrifosfat
Il- interleukin
Arg- arginin
Asn- asparagin
NAD(P)H- nicotinadenindinucleotid(fosfat)
redus
ATP- adenozintrifosfat
PIP2- fosfoinozitolfosfat
ADP- adenozindifosfat
Pro- prolin
AMP- adenozinmonofosfat
PSGL-1-
RHAMM-
CDP- citozindifosfat
Ser- serin
CoA- coenzima A
CTP- citozintrifosfat
Tn- troponine
DAG- diacilglicerol
UDP- uridindifosfat
UTP- uridintrifosfat
163
Cod din
trei litere
Cod din
o liter
glicina
Gly
alanina
Ala
valina
Val
leucina
Leu
izoleucina
Ile
metionina*
Met
fenilalanina
Phe
triptofan
Trp
prolina
Pro
serina*
Ser
treonina*
Thr
cisteina*
Cys
tirozina*
Tyr
asparagina
Asn
glutamina
Gln
164
Asp
acid glutamic
Glu
lizina
Lys
arginina
Arg
histidina
His
165
Bibliografie selectiv
1. Agger K., Cloos P.A.C., Christensen J., Pasini D., Rose s., Rappsilber J., Issaeva I.,
Canaani E., Salcini A.E., Helin K. ,,UTX and JMJD3 are histone H3K27 demethylases
involved in HOX gene regulation and development, Nature 449(2007): p.731-734
2. Alberts B., Johnson A., Lewis J., Raff M., Roberts K., Walter P. ,,Molecular Biology
of the Cell, fifth edition, Garland Publishing Inc., 2007
3. Alberts B., Bray D., Hopkin K., Johnson A., Lewis J., Raff M., Roberts K.,
Walter P. ,,Essential Cell Biology, third edition, Garland Publishing Inc., 2009
4. Anderson G.J., Darshan D. ,, Small-molecule dissection of BMP signaling, Nature
Chemical Biology 4(2008): p.108-115
5. Avruch J., Khokhlatchev A., Kyriakis J.M.,,Ras activation of the Raf kinase: tyrosine
kinase recruitment of the MAP kinase cascade. Recent Progress in Hormone
Research 56: p.127155
6. Becker W.M., Kleinsmith L.J., Hardin J., Bertoni G.P. ,,World of the Cell, seventh
edition, Benjamin Cummings/Prentice Hall, 2008
7. Benga Gh. ,,Introducere n Biologie Celular i Molecular, Ed. Medical
Universitar, Cluj-Napoca, 2005
8. Berger J., Moller D.E. ,,The mechanisms of action of PPARs Annual Review of
Medicine 53(2002): p.409435
9. Bttcher R.T., Niehrs C. (2005),, Fibroblast Growth Factor Signaling during Early
Vertebrate Development, Endocrine Reviews 26 (1): p.63-77
10. Brasier A.R. ,,The NF-B regulatory network Cardiovasc. Toxicol.(2006) 6 (2):
p.111130
11. Brouwers N., Sleegers K., Van Broeckhoven C. (2008). ,,Molecular genetics of
Alzheimer's disease: an update Annals of Medicine 40 (8): p.562583
12. Brownlee, M. ,,Biochemistry and molecular cell biology of diabetic complications,
Nature 414(2001): p.813-820
13. Cartwright P., McLean C., Sheppard A., Rivett D., Jones K., Dalton S.(2005)
,,LIF/STAT3 controls ES cell self-renewal and pluripotency by a Myc-dependent
mechanism, Development 132(5): p.885-96
14. Citron M., Westaway D., Xia W., Carlson G., Diehl T., Levesque G., Johnson-Wood
K., Lee M., Seubert P., Davis A., Kholodenko D., Motter R., Sherrington R., Perry B.,
Yao H., Strome R., Lieberburg I., Rommens J., Kim S., Schenk D., Fraser P., St
George Hyslop P., Selkoe D.J. (1997) ,,Mutant presenilins of Alzheimer's disease
increase production of 42-residue amyloid beta-protein in both transfected cells and
transgenic mice. Nature Medicine 3 (1): p.6772
15. Cooper G.M., Hausman R.E. ,,The Cell: A Molecular Approach, fifth edition, ASM
Press& Sinauer Associates, 2009.
16. Dance M., Montagner A., Salles J.P., Yart A., Raynal P. ,, Ras/Mitogen-activated
protein kinase (ERK1/2) pathway Cellular Signaling 2008 20(3):P.453-459
17. Erdmann R., Schliebs W., ,,Peroxisomal matrix protein import: the transient pore
model , Nat. Rev., Mol. Cell Biol. 6 (2005), p.738742.
18. Garrett R. H., Grisham C. M. ,, Biochemistry , Thomson Brooks/Cole, Cengage
Learning, 2008
166
167
40. Moore M.J., Query C.C., Sharp P.A. ,,Splicing of precursors to messenger RNAs by
the spliceosome, The RNA World. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor
Laboratory Press, 1993:p.303357.
41. Moore M.J., Query C.C., Sharp P.A. ,,Splicing of precursors to messenger RNAs by
the spliceosome, The RNA World. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor
Laboratory Press, 1993:p.303357.
42. Morgan D.O. ,,The Cell Cycle: Principles of Control, New Science Press, 2007
43. Morris K.V. ,,Epigenetic Regulation of Gene Expression- ,, RNA and the Regulation
of Gene Expression: A Hidden Layer of Complexity, Caister Academic Press ,2008
44. Moustakas A. ,,Smad signalling network, Journal of Cell Science 115: p.33553356
45. Murray R.K., Bender D.A., Botham K.M., Kennelly P.J., Rodwell V.W., Weil P.A.
,,Harpers Illustrated Biochemistry, 28th edition, The McGraw-Hill Companies, 2009
46. Nelson D.L., Cox M.M. ,, Lehninger Principles of Biochemistry, third edition,
W.H.Freeman, 2000
47. Niwa H., Miyazaki J., Smith A.G. (2000),,Quantitative expression of Oct-3/4 defines
differentiation, dedifferentiation or self-renewal of ES cells, Nature Genetics 24 (4):
p.372376
48. Petrescu I. ,,Biochimie vol.1 ,,Constituienii chimici ai celulei, Presa Universitar
Clujean, 1998
49. Petrescu I. ,,Biochimie vol.2 ,,Reacii chimice n celula vie, Presa Universitar
Clujean, 1998
50. Platta H., Erdmann R. ,,The peroxisomal protein import machinery
FEBS Letters 581:p.2811-2819
51. Rodda D.J., Chew J.L., Lim L.H. (2005). ,,Transcriptional regulation of nanog by
OCT4 and SOX2 The Journal of Biological Chemistry 280 (26): p.2473124737
52. Robertson K.D., Uzyolgi E., Lian G. et al. (1999). ,,The human DNA
methyltransferases (DNMTs) 1, 3a, 3b: Coordinate mRNA expression in normal
tissues and overexpression in tumors, Oxford Journals: Nucleic Acids Research 27
(11): p.22912298
53. Rodriguez C., Noe V., Cabrero A., Ciudad C.J., Laguna J.C. ,,Differences in the
Formation of PPARa-RXR/acoPPREComplexes between Responsive and
Nonresponsive Species upon Fibrate Administration, Molecular Pharmacology
58(2000): p.185-193
54. Ross M.H., Kaye G.I., Pawlina W. ,,Histology: A Text and Atlas, fourth edition,
Lippincott Williams & Wilkins, 2002
55. Saunders A., Core L.J., Lis J.T. ,,Breaking barriers to transcription elongation Nature
Reviews Molecular Cell Biology 7, (August 2006), p.557-567
56. Scott F.G. ,,Developmental Biology, eighth edition, Sinauer Associates Inc:
Massachusetts, 2006
57. Schuettengruber B., Chourrout D., Vervoort M., Leblanc B., Caval G. ,,Genome
Regulation by Polycomb and Trithorax Proteins, Cell 128(4)2007: p.735-745
58. Tarba C. ,,Biomembrane, transport i energetic celular, Editura Academiei
Romne, 1996
59. Tsuchiya S., Okuno Y., Tsujimoto G. ,,MicroRNA: Biogenetic and Functional
Mechanisms and Involvements Journal of Pharmacological Sciences 101(2006), p.
267 270 (2006)
60. Zhang S.Q., Yang W., Kontaridis M.I., Bivona T.G., Wen G., Araki T., Luo J.,
Thompson J.A., Schraven B.L., Philips M.R., Neel B.G. ,, Shp2 regulates SRC family
kinase activity and Ras/Erk activation by controlling Csk recruitment, Mollecular
Cell. 2004 13(3): p.341-355
168
61. Zwaka T.P. ,,Ronin and Caspases in Embryonic Stem Cells: A New Perspective on
Regulation of the Pluripotent State Cold Spring Harbour Symposia on Quantitative
Biology 2008; 73: p.163-169;
62. Wobus A.M., Boheler K.R. ,,Stem Cells Handbook of Experimental Pharmacology
Volume 174, 2006
63. Wu J., XieX.(2006) ,,Comparative sequence analysis reveals an intricate network
among REST, CREB and miRNA in mediating neuronal gene expression, Genome
Biology 7(9): R.85
64. Ying Q-L., Nichols J., Chambers J., Smith A. ,, BMP Induction of Id Proteins
Suppresses Differentiation and Sustains Embryonic Stem Cell Self-Renewal in
Collaboration with STAT3, Cell 115 (3)2003: p.281-292
65. http://www.cytochemistry.net/cell-biology
66. http://www.bu.edu/histology
67. http://iam2be.net/cancer
68. http://stemcells.nih.gov/info/stem cells reports (AppendixA: Early Development)
169