Sunteți pe pagina 1din 169

Prefa

n plan tiinific, progresele din ultimele decenii n descoperirea i utilizarea unor


metode moderne de investigare n domeniul biologiei (microscopia electronic, utilizarea
anticorpilor monoclonali, difracia cu raze X, tehnici de secveniere i amplificare a ADN,
utilizarea culturilor de celule, imunoelectroforeze, etc.) a determinat diversificarea
cunotinelor de biologie molecular i apariia unor noi ramuri noi: genomica, proteomica,
transcriptomica, bioinformatica. Astfel, biologia din tiin fundamental se divide,
dobndind noi discipline.
Scopul prezentei lucrri intitulat Biologie celular i molecular este acela ca
bazndu-se pe aspectele fundamentale ale biologiei s integreze, armonios, noile descoperiri
tiinifice din diversele domenii, astfel nct nelegerea diverselor procese biologice care se
desfoar n structurile celulare i subcelulare s fie pe de o parte facil, iar pe de alta s
permit corelarea interrelaiilor: structur celular-subcelular, funcie, interaciune cu mediul.
Lucrarea prezent se plaseaz la grania manual universitar-tratat deoarece se
adreseaz att studenilor ct i medicilor, biologilor i chimitilor preocupai de cunoaterea
i nelegerea unor aspecte moderne precum: structura molecular i funciile componentelor
celulare, aspectele semnalizrii i diferenierii celulare, ciclul celular, senescena i apoptoza
celular, sau proliferarea tumoral.
Editarea unei astfel de cri care prezint noiuni de fiziologie, dar i de patologie
celular, poate fi dublu justificat: vine n sprijinul ideii c viitorul va aparine unui nou
concept-medicina molecular, iar prin coninutul su este furnizor de reale competene,
deoarece prezint unele date recente referitoare la importana diagnosticului molecular i
implicarea biologiei moleculare n etio-patogenia i terapia unor afeciuni. Manualul-tratat,
dei cu caracterul cercetrilor fundamentale, dobndete i un specific de multidisciplinaritate
i intersectorialitate, secant altor discipline. Aceast ultim particularitate este susinut
inclusiv de materialul ilustrativ inclus, bogat reprezentat, dei poate prea dens, dar de real
folos n realizarea obiectivului propus: nelegerea biologiei celulare i moleculare ca tiin
fundamental, n continu dinamic, cu profunde i multiple implicaii n domeniul altor
discipline medicale precum genetica, fiziologia, fiziopatologia, farmacologia, medicina
intern etc., de la care utilizeaz achiziii tiinifice, dar pe care le ajut.
Sursele bibliografice utilizate sunt atent selecionate, incluznd att date tiinifice
considerate deja clasice, ct i achiziiile de dat recent, ceea ce situeaz acest curs n zona
de noutate n domeniu.
Importana editorial a unei astfel de apariii este pe deplin atins, ntruct ca manual
universitar, prin parcurgerea acestor pagini, deschide pentru studeni porile unui univers
pasionant, denumit ,,celul, nc plin de necunoscute ce se ateapt descoperite i nelese.
Pentru practicieni, tratatul reamintete datele fundamentale de biologie celular i permite
fundamentarea tiinific a unora dintre activitiile medicale, fr a omite necunoscutele
de moment din domeniu.

Prof.dr. Elena Lucia Moldoveanu

Cuprins

Capitolul1. Noiuni introductive.8


Capitolul 2. Constituienii chimici ai celulei..11
Capitolul 3. Membrana celular.
Structura molecular i funciile membranelor celulare.15
3.1.Structura molecular a memmbranelor biologice......... 15
3.1.1. Dublul strat lipidic al membranelor biologice... 15
3.1.2. Lipidele majore ale membranelor celulare. 16
3.1.2.1. Fosfolipidele membranare.. 16
3.1.2.2. Colesterolul..18
3.1.2.3. Glicolipidele membranare....18
3.1.3. Proteinele membranelor celulare..20
3.1.3.1.Proteinele integrale.........20
3.1.4. Carbohidraii membranelor celulare.22
3.1.5. Mobilitatea proteinelor i lipidelor..................................................... 22
3.1.6. Asimetria distribuiei componentelor membranare.........22
3.2. Funcia de transport a membranelor celulare........23
3.2.1. Transportul pasiv..................................................................................23
3.2.1.1. Difuzia simpl...23
3.2.1.2. Difuzia facilitat a moleculelor i ionilor.......... ...24
3.2.2. Transportul activ29
3.2.2.1. Transportul activ propriu-zis29
3.2.2.2. Sistemele de cotransport32
3.2.3. Transportul macromoleculelor i particulelor ...35

3.3.Funcia de adeziune celular...42


3.3.1. Jonciunile de ancorare. 42
3.3.1.1. Jonciunile de adeziune intercelular..43
3.3.1.2. Jonciunile de adeziune celul-matrice extracelular.44
3.3.1.3.Dezmosomii.45
3.3.1.4. Hemidesmozomii45
3.3.2. Jonciunile de ocluzie.47
3.3.3. Jonciunile de comunicare.48
3.3.4. Adeziunea mediat de selectine... 49
3.3.5.Matricea extracelular....52
3.3.5.1. Componentele matricii extracelulare...52
3.3.5.1.1. Glicozaminoglicanii 52
3.3.5.1.2. Proteinele fibrilare 53
Capitolul 4. Organizarea structural a citoplasmei.
Hialoplasma i citoscheletul..56
4.1. Hialoplasma, matricea citoplasmatic,
substana fundamental sau citosolul56
4.2.Microtubulii.. 57
4.2.1. Funciile microtubulilor .. 59
4.2.1.1. Micarea organitelor i transportul axonal 59
4.2.1.2. Micarea flagelar (ciliar).60
4.2.1.3. Fusul mitotic din diviziunea celular 61
4.3 Microfilamentele... 63
4.3.1. Mecanismul molecular al contraciei musculare66
4.3.2. Particulariti de reglare a contraciei n
celulele musculare netede68
4.3.3. Actina i miozina n celulele nemusculare... 68
3

4.4. Filamentele intermediare.. 71


4.4.1. Tipuri de filament intermediare
i semnificaia lor funcional.71
Capitolul 5. Nucleul celular.73
5.1. nveliul nuclear...73
5.2. Nucleolul......75
5.3. Nucleoplasma...76
5.4. Cromatina nuclear........77
5.4.1. Structura cromatinei... 77
5.4.2. Replicarea ADN...79
5.4.3. Genele..82
5.4.4. Sinteza ARN83
5.4.5. Procesarea ARN.89
Capitolul 6. Ribosomii. Translaia proteinelor. ..92
6.1. Caracteristicile ribosomilor..92
6.2. Funcia ribosomilor...93
6.2.1. Iniierea sintezei proteice.. 93
6.2.2. Elongarea lanului polipeptidic. 94
6.2.3. Terminarea sintezei lanului polipeptidic.. 95
6.2.4. Reglarea translaiei.96
Capitolul 7. Reticulul endoplasmic. 97
7.1. Structura reticulului endoplasmic.. .97
7.2. Reticulul endoplasmic rugos... 97
7.2.1. Funciile RER..100
7.2.2. Sortarea proteinelor specifice n RER..102
7.3. Reticulul endoplasmic neted.102
7.4. Reticulul sarcoplasmic..104
4

Capitolul 8. Aparatul Golgi 106


8.1. Caracteristici generale..106
8.2.Funciile aparatului Golgi.106
8.2.1. Rolul aparatului Golgi n transportul vesicular al proteinelor...106
8.2.2. Modificrile macromoleculelor la nivelul aparatului Golgi.......108
8.2.2.1. Glicozilarea la azot a proteinelor108
8.2.2.2. Glicozilarea la oxigen i asamblarea proteoglicanilor. ..109
8.2.2.3. Sulfatarea proteoglicanilor, glicoproteinelor
i glicolipidelor.110
8.2.2.4. Modificri proteolitice..110
8.2.2.5. Agregarea proteinelor n TGN..110
8.2.2.6. Sinteza glicolipidelor i sfingomielinei.111
Capitolul 9. Lizosomii. .112
9.1. Structura lizosomilor..112
9.2. Biogeneza lizosomilor.113
Capitolul 10. Peroxisomii..115
10.1. Structura i caracteristicile generale ale peroxisomilor...115
10.2. Funciile peroxisomilor115
10.3. Importul proteinelor n peroxisomi. .118
10.3.1. Mecanismul importului peroxisomal... 119
10.4. Biogeneza peroxisomilor 120
10.5. Proliferarea peroxisomal.... ...120
10.5.1. Efectele biologice ale PPAR n celulele umane...... 122
Capitolul 11. Mitocondria. ....124
11.1. Caracteristici generale i structur. . 124
11.2. Funciile mitocondriilor.125
11.2.1. Sinteza ATP.125
11.2.1.1. Transportorii de electroni....127
5

11.2.1.2. Structura lanului transportor de electroni..128


11.2.2. Producerea de cldur... 130
11.2.3. Funcia de depozitare a calciului... 130
11.3. Replicarea mitocondriilor. 130
11.4. Relaia cu procesul de mbtrnire... 130
Capitolul 12. Semnalizarea celular.. 131
12.1. Tipuri de semnalizare celular..... 131
12.2. Semnalizarea prin receptori de suprafa celular 131
12.2.1. Receptori cuplai cu proteine G... 131
12.2.1.1. Receptori cuplai cu proteine G
care au ca efector adenililciclaza........ 132
12.2.1.2. Receptori cuplai cu proteine G
care regleaz canale ionice. 134
12.2.1.3. Receptori cuplai cu proteina G
care au ca efector fosfolipaza C 135
12.2.2. Receptori cu activitate enzimatic asociat
sau intrinsec. 136
12.2.3. Ci care implic clivare proteolitic indus de semnal.. 140
Capitolul 13. Ciclul celular... 143
13.1. Etapele ciclului celular. 143
13.2. Reglarea ciclului celular... 144
13.3. Moleculele specifice implicate n reglarea ciclului celular...... 145
13.4. Puncte de control n reglarea ciclului celular... 146
Capitolul 14. Apoptoza. 147
14.1. Caracteristici i cauze.. 147
14.2. Importana apoptozei... 147
14.3. Mecanismul apoptozei. 147
6

14.3.1. Reglarea apoptozei prin mecanism mitochondrial.. 148


14.3.2. Transducia direct a semnalelor proapoptotice
( mecanisme directe de iniiere a apoptozei)... 148
14.4. Ci apoptotice defective.. 149
Capitolul 15. Proliferarea i diferenierea celular 151
15.1. Celulele-stem.151
15.2. Diferenierea celular... 152
15.3. Mecanismele diferenierii celulare... 153
15.3.1. Metilarea ADN 154
15.3.2. Modificrile chimice ale histonelor 155
15.3.3. Interferena ARN 157
15.4. Ci particulare de reglare a diferenierii celulare....... 157
15.5. Proliferarea tumoral160
List de abrevieri.. 163
Bibliografie165

1. Introducere

Biologia celular i molecular este disciplina care studiaz structurile celulare i


proprietile fiziologice ale celulelor, interaciunea cu mediul, ciclul celular, diviziunea i
moartea celular, la nivel microscopic i molecular. Celula este cea mai mic unitate
structural i funcional a organismelor vii. Unele organisme sunt unicelulare, altele sunt
multicelulare cum este organismul uman care cuprinde 100 trilioane sau 1014 celule.
Teoria celular elaborat n 1839 de Matthias Jakob Schleiden i Theodor Schwann se
bazeaz pe conceptul c toate organismele sunt formate din una sau mai multe celule vii;
n 1855, Rudolf Virchow completeaz teoria celular cu conceptul conform cruia toate
celulele organismelor vii provin din celule preexistente: "Omnis cellula e celula". Deci, nu
exist creaie spontan a celulelor din materie nevie. Aceast idee a fost demonstrat
experimental de Louis Pasteur n 1862. Teoria celular postuleaz c funciile vitale ale unui
organism au sediul n interiorul celulelor i c toate celulele conin informaia ereditar
necesar pentru a controla funciile celulare i pentru transmiterea acestor funcii n
urmtoarea generaie de celule. n 1880 August Weissman impune ideea c toate celulele vii
existente provin dintr-o celul ancestral, un strmo comun.
Cuvntul ,,celul" provine din latinescul ,,cellulae", care este diminutivul cuvntului
,,cella", care semnific ,,cmru". Termenul descriptiv al celei mai mici structuri biologice
viabile a fost atribuit de medicul englez Robert Hooke n cartea sa ,,Micrographia" publicat
n 1665, ns n mod eronat, el a considerat celule cmruele delimitate de pereii celulozici
observai la microscop ntr-o seciune fin prin esut vegetal. "These pores or cells, were not
very deep, but consisted of a great many little boxes, separated out of one continued long
pore, by certain diaphragms."
Biologia celular i molecular este tiina care s-a desprins din citologia clasic,
atunci cnd instrumentele i tehnicile achiziionate au permis acumularea de date
experimentale privind arhitectura molecular i fiziologia celulei. Aceste acumulri de date
noi continu intens, fiind susinute de metode de cercetare bazate pe o tehnologie a crei
dezvoltare este uimitoare. Ca tiin, biologia celular i molecular pornete de la ideea c
nu poi nelege ntregul nainte de a-i descifra prile, de la ideea c minunile i misterul
vieii conduc la curiozitatea dar pn la urm i la necesitatea de a descifra mecanismele de
funcionare ale viului. Ce este viaa? Progresele actuale din biologia molecular ne dau
speran c ne vom apropia de unele rspunsuri i ne vor oferi soluii mcar pentru
mbuntirea vieii. Diagnosticul molecular este deja de actualitate, mecanismele moleculare
ale multor maladii sunt descifrate, genomica i proteomica sunt domenii n plin expansiune.
Dei universul nostru pare a fi format pe principiul ,,lumi n interiorul altor lumi, spiritul
uman are caliti care ne dau sperana c le vom cunoate i nelege.
Prin parcurgerea celor scrise n paginile de mai jos, sper ca studenii i nu numai ei s
gseasc informaii care s i ajute s treac de prima poart a cunoaterii n domeniul
biologiei celulei i moleculare i s doreasc s deschid urmtoarele pori.
Exist dou clase fundamentale de celule: celulele procariote i celulele eucariote.
8

Caracteristicile celulelor sunt prezentate n tabelul de mai jos:

Procariote

Eucariote

Organisme specifice bacterii, archaea

protiste, fungi, plante, animale

Dimensiuni
specifice

~ 110 m

~ 10100 m

Tipul de nucleu

Regiunea
nucleoidului;
Nucleu tipic cu dubl membran
fr nucleu tipic

DNA

Mai ales circular

Molecule liniare
proteine histonice

Sinteza
ARN/Proteinelor

Cuplate n citoplasm

Sinteza
ARN
n
nucleu,
sinteza proteinelor n citoplasm

Ribosomii

50S+30S

60S+40S

Structura
citoplasmei

Structurat, cu citoschelet, nalt structurat prin endomembrane i


dar mai puin complex
citoschelet mai complex

Micarea celular

flageli
flagelin

Mitocondrii

fr

Una pn la mai multe mii

Cloroplaste

fr

n alge i plante

Organizarea

Unicelulare

O singur celul, colonii, organisme


multicelulare
evoluate
cu
celule
specializate

Diviziunea celular

Fisiune binar

Mitoz; Meioz

formai

(cromozomi)

cu

din Flageli i cili care conin microtubuli;


lamelipodii i filopodii care conin actin

Tabelul 1. Caracteristicile celulelor procariote i eucariote


Celulele eucariote au evoluat dintr-o comunitate simbiotic de celule procariote. Este
aproape sigur c organite purttoare de ADN propriu cum este mitocondria sau cloroplastul
sunt ceea ce a mai rmas dintr-o proteobacterie sau cianobacterie strveche simbiont
capabil de respiraie aerob, n timp ce restul componentelor celulelor eucariote actuale par
s derive dintr-o celul procariot ancestral de tip archaea, conform teoriei endosimbiozei.
Cartea este structurat n capitole care prezint caracteristicile celulelor eucariote, cu
referire predominant la celula uman. Aceste celule n interfaz prezint nucleu cu nucleoli,
citoplasm alctuit din ecto- i endoplasm, plasmalema sau membrana celular. Apariia
microscopiei electronice a permis studierea plasmalemei, jonciunilor intercelulare, a
prelungirilor: microvili, cili, flageli, caracterizarea membranei duble a nucleului, cu pori i
foia extern care se continu cu membrana RER, unde are loc biosinteza, modificarea,
mpachetarea i exportul unor proteine de secreie sau membranare, caracterizarea nucleolilor
9

n care are loc biogeneza ribozomilor. Au fost studiate organitele celulare: lizosomii se
desprind din aparatul Golgi i conin hidrolaze cu rol n digestia celular, peroxisomii n
detoxifierea celular, aparatul Golgi n procesarea lipidelor i proteinelor sintetizate de
celul, mitocondriile genereaz energia necesar celulei, capabile de autoreplicare,
centrozomul cu doi centrioli, este centrul de organizare microtubular, vacuolele care sunt
organite de depozitare. Cartea parcurge n mod foarte selectiv toate aceste aspecte, inevitabil
pentru un domeniu att de vast i n continu expansiune cum este biologia celular i
molecular.

10

2. Constituienii chimici ai celulei

Celula este compus dintr-un set restrns de elemente chimice, dintre care
patru: C, N, O, H alctuiesc structuri care reprezint aproximativ 99% din greutatea unei
celule vii. Cea mai abundent substan chimic din celulele vii este apa, care reprezint 70%
din greutatea acestora i este mediul n care se desfoar majoritatea reaciilor intracelulare,
n dependen de proprietile speciale ale moleculelor de ap: caracterul polar, capacitatea de
a forma legturi de hidrogen i tensiunea superficial mare.
n celule predomin elementele chimice uoare, solubile n ap. Atomul de carbon
predomin n structura chimic a celulelor, are o mas atomic mic (12), dar formeaz patru
legturi covalente puternice cu ali atomi, genernd un numr infinit de mare de molecule
simple pn la extrem de complexe (pot conine pn la 30 de atomi de C) . N, O, H au de
asemenea mas atomic mic (14, 16, 1) i sunt capabili de a forma legturi covalente
puternice. Viaa este posibil datorit combinaiei dintre stabilitatea legturilor covalente n
condiiile fiziologice i capacitatea catalizatorilor biologici (denumii enzime) de a rupe i
reface aceste legturi covalente n mod controlat, specific n anumite molecule. Setul de
molecule cu funcia biologic specific fiecreia dintre ele, odat stabilit n celula ancestral,
s-a conservat, cu variaii, de-a lungul bilioanelor de ani de evoluie celular.
Cteva combinaii simple de atomi cum este gruparea metil, hidroxil, carboxil i
amino sunt larg rspndite n moleculele biologice. Aceste grupri au proprieti fizice i
chimice care determin caracteristicile moleculelor din care fac parte, determinante pentru
funciile moleculare din celul. Unele dintre aceste molecule sunt molecule mici, libere n
soluie, n mediul intracelular, unde o parte din ele formeaz o categorie de intermediari din
care are loc sinteza macromoleculelor, altele sunt intermediari eseniali n cile metabolice
sau compui de nmagazinare a energiei. Aceste molecule organice mici reprezint o zecime
din totalul moleculelor organice din celul, dar sunt foarte multe, de ordinul a o mie de tipuri
diferite, ns fiind sintetizate din i degradate n compui comuni, avnd caracteristici chimice
comune, pot fi clasificate n patru clase de molecule organice mici: monozaharide, acizi grai,
aminoacizi i nucleotide. Cele mai simple glucide, monozaharidele, sunt compui cu formula
(CH2O)n, unde n=3-7. Glucoza, de exemplu are formula C6H12O6. Monozaharidele exist sub
form liniar, dar n soluii monozaharidele cu 5 sau 6 atomi de carbon pot forma un inel
heterociclic tip furan-pentaciclu sau piran-hexaciclu. n forma liniar, poate aprea
interaciunea gruprii aldehidice sau cetonice cu o grupare hidroxil a aceleiai molecule,
pentru a forma heterociclul. Carbonul gruprii aldehidice sau cetonice poate lega un carbon
ce poart o grupare hidroxil a altui monozaharid, formnd un dizaharid. Adiia mai multor
monozaharide n acelai mod conduce la formarea macromoleculelor polizaharidice.
Pentozele, monozaharide cu 5 atomi de C cuprind ribozele, componentele ribonucleotidelor i
acizilor ribonucleici i dezoxiribozele, componente ale dezoxiribonucleotidelor i acidului
dezoxiribonucleic. Hexozele sunt monozaharide cu 6 atomi de carbon i ar fi de menionat
glucoza, care n form liber este o surs vital de energie, energia i caracterul reductor
sunt nmagazinate apoi sub form de compui intermediari (ATP i respectiv, NADH).
11

Glicoliza este o cale amfibolic, avnd semnificaie funcional energetic preponderent n


esutul muscular n contracie, esutul nervos i eritrocite i o semnificaie biosintetic prin
compuii intermediari pe care i genereaz. Manoza, o alt hexoz, intr n constituia
glicoproteinelor sanguine umane. Poliglucidele pot fi omogene, constituite dintr-un singur tip
de oze, cum este glicogenul, format numai din resturi de glucoz, unica form de depozitare a
glucidelor n lumea animal n hepatocite, celulele musculare i n cantitate mai mic i n
alte celule. Heteropoliglucidele dau prin hidroliz amestecuri de monozaharide i/sau derivai
ai lor, la care se pot aduga proteine sau lipide. Cuprind glicozaminoglicanii, numii i
mucopolizaharide ntlnii n special n structura esutului conjunctiv (acidul hialuronicsubstana fundamental a esutului conjunctiv i cartilaginos, n corpul vitros i n lichidul
sinovial, acizii condroitinsulfurici, keratansulfatul, heparina), iar glicozaminoglicanii legai
covalent de proteine formeaz proteoglicanii numii i mucoproteine din substana
fundamental a esutului conjunctiv sau din mucoase i lipopolizaharidele de pe suprafaa
extern a peretelui celular al bacteriilor Gram-negative (endotoxine). Lanuri mai scurte, dar
complexe constituite din uniti monozaharidice sunt aadar legate de proteine formnd
glicoproteine sau de lipide, formnd glicolipide.
Lipidele au trei componente: lipidele simple- acizii grai, lipidele complexefosfolipide i glicolipide i lipidele de rezerv- trigliceridele. Acizii grai au roluri
fundamentale n celule: energetic, biosintetic, structural. Acizii grai sunt catabolizai n
celule prin -oxidarea mitocondrial, proces cu rol predominant energetic, cu randament
dublu fa de al glicolizei. Acizii grai sunt eliberai prin degradarea trigliceridelor, proces
intensificat de factori hormonali, inaniie, frig sau compui toxici. Prin generarea de acetilCoA, intermediar n procese biosintetice, rolul lor devine dublu, dar cel mai important rol
este cel structural, prin sinteza pornind de la acizi grai a fosfolipidelor membranare.
Fosfogliceridele sunt formate din glicerol esterificat cu 2 molecule de AG, i o molecul de
acid fosforic. n consecin, fiecare molecul de fosfolipid are o coad hidrofob constituit
din lanurile de AG i un cap hidrofil polar, format din restul de acid fosforic, structur care
st la baza arhitecturii de bistrat lipidic al membranelor biologice. Prostaglandinele,
modulatori ai aciunilor hormonale, ai transmisiei nervoase i ai schimburilor ionice celulare
se formeaz din acizi grai nesaturai. Sterolii au ca reprezentant principal colesterolul,
component structural fundamental al celulelor animale, n special la nivelul membranelor.
Hormonii steroidici (sexuali, corticosteroizi) au precursor comun colesterolul. Vitaminele D
sunt compui de origine steroid.
Exist 20 de aminoacizi universal rspndii, care intr curent n structura proteinelor.
Exist AA care nu intr n structura proteinelor, au rol metabolic sau structural important, de
exemplu acidul -aminobutiric (GABA) este mediator la nivelul SNC, 5-hidroxitriptofanul
este precursor al serotoninei, ornitina i citrulina sunt intermediari n sinteza ureei, etc.
Caracteristica comun a acestei clase de constituieni chimici ai celulei este prezena unui
grup carboxil i a unui grup amino, ambele grupri fiind legate de acelai atom de carbon
denumit . Sunt subuniti ale moleculelor proteice care sunt polimeri lungi, liniari,
constitutii din aminoacizi legai prin legturi peptidice ntre gruparea carboxil a unui AA i
gruparea amino a AA urmtor. Aminoacizii pe care organismul uman nu i poate sinteza din
lipsa unor echipamente enzimatice corespunztoare sau a lipsei unor precursori disponibili,
poart denumirea de AA eseniali.
12

Proteinele sunt compui macromoleculari, formai din mai multe lanuri polipeptidice,
fiecare lan polipeptidic fiind alctuit din cteva zeci pn la cteva sute de AA. Proteinele
reprezint 55-85% din greutatea uscat a celulei, pot fi clasificate dup structura chimic,
funcia biologic, solubilitate, forma i mpachetarea molecular, numrul catenelor
polipeptidice. Dup structura chimic, sunt proteine simple (holoproteine), care cuprind
scleroproteinele- colageni, elastine, keratine, sferoproteine- albumine, globuline, protamine,
histone, gliadine, gluteline i heteroproteine sau proteine conjugate- metaloproteine (conin
fier, cupru, zinc, mangan, cobalt, molibden, magneziu, cu rol de depozitare sau de transport al
acestor metale sau enzime), fosfoproteine, lipoproteine cu grupare prostetic AG, gliceride,
fosfolipide, colesterol, nucleoproteinele, cromoproteinele porfirinice (hemoglobina,
citocromii, citocromoxidaza, catalaza, peroxidaza), neporfirinice (rodopsina, flavoproteinele)
i glicoproteinele care au ca grupare prostetic glucide (monozaharide, acidul glucuronic,
aminoglucide- glucozamina, galactozamina, derivai ai monozaharidelor- acidul neuraminic,
sialic). Glicoproteinele acide, cu vscozitate mare, sunt componente eseniale ale esutului
conjunctiv: mucoproteinele cu acid mucoitinsulfuric, condroproteinele cu acid
condroitinsulfuric, hialoproteinele cu acid hialuronic, sialoproteinele cu acid sialic.
Glicoproteinele neutre se gsesc n plasma sanguin (haptoglobina, factorii grupelor
sanguine, orosomucoidul), n tractul intestinal - factorul intrinsec cu rol n absorbia
vitaminei B12, n constituia unor enzime (transferaze), n constituia unor hormoni (LH, FSH,
TSH). Proteinele ndeplinesc urmtoarele funcii biologice: formeaz structuri de rezistencolagen, keratina, sunt proteine contractile- actina, miozina cu rol n contracia muscular,
catalizeaz reacii biochimice- enzimele, transport oxigenul- pigmenii respiratori
(hemoglobina, mioglobina), transport informaie- hormonii proteici, recepioneaz
informaie- receptorii membranari, intervin n mecanismul imun- imunoglobulinele, sistemul
complement, regleaz expresia genic- represorii, activatorii, factorii de reglare, histone, pot
fi substane toxice- toxinele bacteriene.
Nucleotidele sunt unitile structurale fundamentale ale acizilor nucleici, fiind
alctuite dintr-o baz azotat purinic sau pirimidinic, o pentoz (riboza- constituent al ARN
i dezoxiriboza- constituient al ADN) i acid fosforic.
Nucleotidele ndeplinesc urmtoarele funcii biologice: rol n metabolismul energetic,
ATP fiind cea mai important form de nmagazinare a energiei, accesibil direct celulei. Ali
compui macroergici sunt: GTP, CTP, UTP, etc.; sunt mediatori fiziologici, AMP ciclic este
,,al doilea mesager" n mecanismul de aciune al hormonilor nesteroizi, rol de ,,al doilea
mesager" are i GMP ciclic, ADP este mediator n agregarea plachetelor sanguine, adenozina
produce dilatarea vaselor coronariene, reglnd circulaia sanguin cardiac; prin
policondensarea nucleotidelor se formeaz acizii nucleici; intr n structura unor coenzime:
NAD(P), FAD, CoA, etc.; intr n alctuirea unor intermediari activai n metabolismul
celular: UDP-glucoza (biosinteza glicogenului), UDP-galactoza (biosinteza glicoproteinelor),
CDP-colina i CDP-colamina (biosinteza lipidelor); sunt efectori alosterici, regleaz
activitatea unor enzime.
Acizii nucleici sunt macromolecule cu structur liniar (polinucleotide), formate prin
policondensarea mononucleotidelor, legtura dintre nucleotide fiind format prin esterificarea
gruprii hidroxi din poziia 3 a pentozei cu restul fosforic din poziia 5 a nucleotidului
urmtor. n funcie de natura pentozei, acizii nucleici se clasific n acid ribonucleici care
13

conin riboz i acid dezoxiribonucleici, care conin dezoxiriboz. Bazele azotate ale ADN
sunt: adenina, citozina, guanina i timina, iar ARN conine: adenina, citozina, guanina i
uracilul.
ADN este purttorul informaiei ereditare, alctuiete genomul tuturor organismelor
procariote i eucariote, precum i al dezoxivirusurilor. Cantitatea de ADN din celulele unei
specii este constant. La procariote, ADN este localizat n cromozomul bacterian dar i
extracromozomal, n episomi i plasmide. La eucariote, ADN se gasete preponderent n
nucleu, este ADN cromozomial i n cantiti mici n mitocondrii. Cu ct organismele sunt
mai evoluate, cantitatea de ADN este mai mare: la dezoxiribovirusuri 5x10-6 pg/ celul, la
mamifere 6pg/ celul. Lungimea extins a moleculei de ADN la virusurile tumorigene este de
1,5 m, iar la mamifere lungimea este de 2m. Cele 6 miliarde de nucleotide din celula
mamiferelor corespund la peste 1 milion de gene, din care doar 10% codific proteine i doar
cteva mii sunt transcrise. Structura unui cromozom conine o molecul de ADN dublu helix,
ADN monocatenar fiind prezent n structura unor dezoxiribovirusuri.
ARN sunt clasificai n trei tipuri majore: ARN mesager (2-4% din totalul de ARN
celular), ARN de transfer (16-18%), ARN ribozomal (80%), la care se adaug ARN nuclear
heterogen, ARN viral i ARN viroidal. ARNm reprezint o copie a catenei codogene a ADN,
ARNt este localizat cu precdere n citosol i are rolul de a transporta aminoacizii din citosol
la ribozom n cursul biosintezei proteinelor. Exist peste 60 de specii moleculare de ARNt ,
fiecrui AA din cei 20 corespunzndu-i cel puin unul sau mai multe tipuri de ARNt. ARN
ribozomal este reprezentat la eucariote de ARNr 5S, ARNr 5,8S, ARNr 28S n subunitatea
ribozomal mare i de ARNr de 18S n subunitatea ribozomal mic. ARN nuclear heterogen
este reprezentat de un ansamblu format din ARN premesageri, ARN ribozomali imaturi, alte
specii de ARN. Moleculele mici de ARN nuclear i nucleolar formate din 100-180
nucleotide, particip la reglarea fenomenului de transcripie. ARN viral este o molecul
monocatenar liniar sau circular sau dublu catenar liniar.
n celule se gsesc i alte elemente chimice puin abundente (0,02-0,1%): P, S, Cl, Na,
K, Ca, Mg i oligoelemente (<0,02%): Fe, Cu, Zn, Se, ns lipsa acestor elemente este
puternic resimit de organism, determinnd afeciuni severe. Substanele minerale se gsesc
n organism sub form disociat (cationii de exemplu Na+, K+, Mg2+, Ca2+ i anionii cum sunt
Cl-, HCO3-, NO32-, SO42-, PO43- de care depinde presiunea osmotic, echilibrul acido-bazic i
interaciunea enzimatic) sau n combinaii cu proteine.

14

3.Membrana celular. Structura molecular i funciile membranelor celulare.

Membrana celular delimiteaz coninutul celular, confer individualitate celulei i


menine diferenele eseniale ntre citosol i mediul extracelular. Realizeaz transportul
molecular i ionic, conexiunile intercelulare i ancorarea celulelor n matricea extracelular,
este sediul reaciilor enzimatice asociate structurilor membranare, are rol n semnalizarea
celular, recunoaterea, legarea i transmiterea moleculelor semnal care nmagazineaz
informaie, precum i n imunitate.
3.1. Structura molecular a membranelor biologice
Membranele biologice au o structur general identic, de ,,mozaic fluid" lipidoproteic, cu o grosime de 6-10 nm grosime. Este un fluid structural alctuit din bistrat lipidic
penetrat total sau parial de molecule proteice; ntre lipidele i proteinele membranare exist
mai ales legturi necovalente.
3.1.1.Dublul strat lipidic ( bistratul lipidic) al membranelor biologice
Este o component fundamental de 5nm grosime, observabil n microscopie
electronic. Are structur fluid, confer membranelor proprietatea de membran
impermeabil pentru moleculele hidrosolubile. Structura de bistrat este atribuit proprietilor
speciale ale lipidelor membranare, care se asociaz spontan sub form de bistrat i n condiii
artificiale.

Figura1. Structura membranei celulare (imagine preluat din cellbiology.med.unsw.edu.au)

15

3.1.2.Lipidele majore ale membranelor celulare


Lipidele majore ale membranelor celulare reprezint 50% din greutatea acestora i
sunt reprezentate de trei clase majore: fosfolipidele, colesterolul, glicolipidele. Exist 5001000 de tipuri diferite de lipide n funcie gruprile din capul polar, lungimea i gradul de
desaturare al acizilor grai componeni, n care sunt incluse i lipidele minore, de exemplu
fosfatidilinozitolul. Bistratul lipidic conine 5x106 molecule lipidice/ m2.
3.1.2.1.Fosfolipidele membranare
Clasa fosfolipidelor cuprinde fosfogliceridele i sfingolipidele i reprezint peste 50%
din fosfolipidele membranare. Fosfolipidele au caracter amfipatic deoarece sunt formate
dintr-o regiune hidrofil polar sau cap polar i o regiune hidrofob nepolar sau cozi
hidrofobe. Regiunea hidrofob este format din dou cozi hidrofobe alctuite fiecare din cte
un acid gras cu 14-24 atomi de carbon, unul fiind acid gras saturat, iar cellalt nesaturat, cu
una sau mai multe legturi duble de tip ,,cis". Diferenele n lungimea lanului de atomi de
carbon ai acizilor grai i n gradul lor de nesaturare influeneaz mpachetarea moleculelor
lipidice i fluiditatea bistratului. Prezena dublelor legturi de tip ,,cis" introduce un punct de
inflexiune n catene acidului gras nesaturat.

Figura 2. Bistrat fosfolipidic n care atomii unei molecule fosfolipidice sunt reprezentate ca
sfere (imagine prelucrat din http://courses.washington.edu/conj/membrane/bilayer.htm)

Cele mai numeroase fosfolipide membranare sunt fosfogliceridele. Ele sunt formate
dintr-un schelet de glicerin, prin esterificarea a dou grupri hidroxil din structura glicerinei
cu doi acizi grai i a celei de-a treia cu acid fosforic. Gruparea fosfat la rndul ei, leag
diferite tipuri de molecule, formndu-se regiunea cap hidrofil a diferitelor tipuri de
fosfogliceride: fosfatidiletanolamine, fosfatidilserina, fosfatidilcolina, fosfatidilgicerol,

16

difosfatidilglicerol (cardiolipina), fosfatidilinozitol. n acidul fosfatidic gruparea fosfat nu


este legat la o alt molecul polar.

Figura 3. Fosfogliceride membranare ( imagine prelucrat dup John M. Owens, Ph.D


http://www.agen.ufl.edu)

Sfingolipidele conin sfingozin (un aminoalcool) n loc de glicerol. Sfingozina este


format dintr-un lan lung nesaturat, cu o grupare amino care leag un acid gras prin legtur
amidic, rezultnd structura ceramidic i dou grupri hidroxil, dintre care gruparea hidroxil
terminal a sfingozinei leag prin legtur fosfodiesteric gruparea polar. Sfingolipidul
major este sfingomielina.

Figura 4. Structura general a unui sfingolipid. Structura specific a unei molecule depinde
de tipul gruprii R2 i de lungimea lanului hidrofob al acidului gras R1. (imagine prelucrat din
http://www.britannica.com)

17

3.1.2.2.Colesterolul
Raportul molecular colesterol:fosfolipide n membranele celulare este de 1:1.
Molecula de colesterol se insereaz ntre fosfolipidele membranare, orientndu-se cu
gruparea hidroxil n vecintatea capului polar al fosfolipidelor. Inelul steroidic este o
structur rigid, plan, care interacioneaz cu lanul hidrocarbonat adiacent capului polar,
lsnd restul cozilor hidrofobe ale acizilor grai libere, flexibile. Colesterolul moduleaz
proprietile bistratului lipidic, intensificnd proprietatea de barier impermeabil fa de
moleculele mici solubile n ap, influeneaz fluiditatea membranei, previne interaciunea
lanurilor hidrocarbonate ale acizilor grai din structura lipidelor membranare.

Figura 5. Interaciunea colesterolului cu fosfolipidele n bistratul lipidic (imagine prelucrat


din http://www.yellowtang.org/chemistry.php)

3.1.2.3.Glicolipidele membranare
Glicolipidele membranelor celulare sunt specifice pentru specie, sunt de asemenea
tisular-specifice i reprezint 5% din moleculele lipidice ale monostratului extern. Conin un
cap polar format din unul sau mai multe resturi glucidice, ataate la o structur ceramidic.
De exemplu, n structura galactocerebrozidelor, sfingozina mpreun cu acizii grai formeaz
o structur ceramidic de care sunt ataate resturi de galactoz, iar gangliozidele conin unul
sau mai multe resturi de acid sialic (acid N-acetilneuraminic) care imprim acestor molecule
ncrctur negativ. n consecin, gangliozidele particip la construcia molecular a
canalelor ionofore i la mecanismul de transmitere a informaiei de la suprafaa celulei
(semnalizarea celular).
Clasele de lipide membranare, datorit structurii i proprietilor lor imprim
membranelor anumite caracteristici:
18

1. Fosfolipidele formeaz spontan bistratul, deoarece au o regiune hidrofil sau polar


care este capabil de interaciuni electrostatice sau prin legturi de hidrogen cu moleculele de
ap. Regiunile hidrofobe sunt insolubile n ap deoarece nu pot forma interaciuni energetic
favorabile cu moleculele de ap. Ca urmare, moleculele de ap nconjoar moleculele
hidrofobe formnd structuri asemntoare unor ,,cuti", n care moleculele de ap se prezint
ntr-un aranjament mult mai ordonat dect n apa care constituie mediul nconjurtor. Costul
energetic este minimalizat dac moleculele hidrofobe se acumuleaz ct mai strns, astfel
nct un numr ct mai mic de molecule de ap s fie implicate n nconjurarea lor. Introduse
n mediu apos, moleculele cu caracter amfipatic ale lipidelor membranare agreg spontan n
aa mod nct adpostesc regiunile (cozile) hidrofobe n interiorul structurilor sferice
denumite micelii sau plane denumite bistrat lipidic, fiind expuse apei regiunile cap hidrofile.
2. Fosfolipidele se rearanjeaz spontan, refac bistratul atunci cnd apar bree n
acesta.
3. Un alt caracter este fluiditatea care st la baza caracterului dinamic al membranelor
celulare. La o anumit valoare de temperatur denumit temperatur critic, are loc tranziia
de faz, adic trecerea bistratului din stare fluid n stare de gel, datorit scderii mobilitii
legturilor C-C din lanuri hidrocarbonat ale acizilor grai din structura fosfolipidelor. Are loc
trecerea de la o conformaie randomic la o conformaie cu grad superior de ordonare.
Valoarea de temperatur la care are loc tranziia de faz depinde de lungimea i caracterul
nesaturat al lanurilor hidrocarbonate ale fosfolipidelor. Lanurile hidrocarbonate mai scurte
i prezena legturilor duble favorizeaz organizarea randomic datorit scderii numrului
de legturi van der Waals dintre regiunile hidrofobe.
Fluiditatea depinde i de coninutul de colesterol al membranelor, concentraiile mari
de colesterol scad fluiditatea bistratului. Aceast scdere a fluiditii are efecte aupra
funciilor membranei celuare, prin scderea permeabilitii pentru ap i molecule hidrofile i
creterea rezistenei mecanice a acestora. Prezena glicolipidelor influeneaz fluiditatea:
gangliozidele se caracterizeaz prin capacitatea de a participa la formarea legturilor de
hidrogen care determin creterea gradului de ordonare molecular i scderea fluiditii.
4. Bistratul lipidic este format din domenii cu compoziie diferit: forele van der
Waals (fore de atracie ntre lanurile hidrocarbonate ale lipidelor membranare adiacente) nu
sunt suficient de selective pentru a ine mpreun grupurile de molecule fosfolipidice, n
consecin apar domenii specializate denumite ,,bacuri de lipide". Un exemplu de astfel de
domenii sunt caveolele implicate n endocitoz, bogate n colesterol i sfingolipide, mpreun
cu proteine specifice cu rol stabilizator al acestor domenii. Un alt exemplu este cel al unor
domenii care conin o proporie ridicat de sfingolipide care, avnd lanuri hidrocarbonate
mai lungi, determin la acest nivel o grosime crescut a bistratului, intervenind n organizarea
moleculelor proteice pentru a-i ndeplini funciile: de transport, de semnalizare celular.
5. Organizarea sub form de monostrat a lipidelor (n loc de bistrat) este caracteristic
picturilor lipidice cu rol n depozitarea trigliceridelor i colesterolului esterificat, fiind surs
de precursori lipidici pentru sinteza membranelor sau surs de substrate pentru metabolismul
energetic. Monostratul lipidic conine mari cantiti de proteine, unele cu funcie n
metabolismul lipidelor, altele cu funcie necunoscut. Lipidele neutre din aceste picturi
lipidice sunt molecule hidrofobe care n mediul apos intracelular agreg n picturi
tridimensionale nconjurate de monostratul lipidic, cu cozile hidrofobe orientate spre
19

coninutul n lipide neutre, iar cu capetele hidrofile spre mediul apos intracelular. Aceast
organizare este ntlnit n special n adipocite.

3.1.3. Proteinele membranelor celulare


Proteinele membranare sunt moleculele implicate n funciile majore ale membranelor
celulare. Reprezint 50% din greutatea membranelor celulare i 75% din greutatea
membranelor mitocondriale, cu o intens activitate metabolic.
Clasificarea acestor proteine s-a fcut dup criteriul topografic, dar i dup aspectul
interaciunilor cu moleculele lipidice ale bistratului n dou clase: proteine integrale ale
membranelor i proteine periferice (de suprafa).

Figura 6. Tipuri de proteine ale membranei celulare (imagine prelucrat din ,,The Cell,
Geoffrey M. Cooper)

3.1.3.1. Proteinele integrale


Pot penetra membrana n ntregime datorit caracterului lor amfipatic: regiunea
central localizat n interiorul membranei are caracter hidrofob i interacioneaz cu lanurile
hidrocarbonate ale fosfolipidelor, fiind alctuit din aminoacizi cu caracter nepolar.
Legturile dintre aminoacizi sunt legturi peptidice care sunt legturi polare i pentru c apa
este absent n compartimentul hidrofob al membranelor, aceste legturi peptidice vor forma
puni de hidrogen ntre ele. Domeniile hidrofile ale moleculelor proteice vor fi expuse pe faa
extracelular i citosolic a membranelor, n contact cu gruprile polare ale moleculelor
lipidice. Lanurile polipeptidice ale acestor proteine transmembranare pot realiza unul sau
mai multe pasaje prin bistratul lipidic, prezentnd conformaie de -helix: un pasaj prin
bistrat- un -helix ( ,,singlepass"), mai multe pasaje prin bistrat- mai multe -helixuri
(,,multipass"). Conformaia de -helix nu este unica conformaie a proteinelor
transmembranare. Aceste proteine pot prezenta conformaie a lanului polipeptidic de -foaie
pliat, care poate fi mpachetat sau rulat n continuare n conformaie de ,,-barrel",
multiplele segmente transmembranare putnd satisface n acest caz necesitatea de legturi de
20

hidrogen. -helixurile proteinelor transmembranare au funcie de ancorare n bistratul lipidic


prin compoziia n aminoacizi hidrofobi. Multe proteine transmembranare care realizeaz un
singur pasaj prin bistrat formeaz homodimeri datorit interaciunilor dintre domeniile
-helix adiacente, cruciale pentru structura i funcia proteinelor-canal i proteinelor
transportor. Proteinele transmembranare care realizeaz mai multe pasaje sunt formate din
mai multe -helixuri, toate constituite din aminoacizi hidrofobi, deoarece dup sinteza lor n
citosol, acestea sunt iniial integrate n bistratul lipidic de o protein-translocaz, fiind
nconjurate de molecule lipidice. mpachetarea moleculei proteice apare ulterior i apr o
parte din -helixuri de contactul cu lipidele membranare, unele interaciuni proteine-lipide
fiind nlocuite cu interaciuni proteine-proteine i -helix--helix, facilitnd astfel apariia
unor structuri canal pentru transportul moleculelor hidrofile mici prin membrana hidrofob .
Unele proteine integrale strbat parial membrana i sunt integrate n bistrat n moduri
diferite:
1. Proteinele prezente pe faa citoplasmatic, cum este familia de proteine Src kinaze
care convertesc semnale extracelulare n semnale intracelulare, conin acid miristic adugat la
gruparea aminoterminal a proteinei n timpul sintezei n ribozomi- se stabilete o legtur
amidic. Acidul miristic reprezint o prim ancor, care se inser n monostratul citoplasmic
al bistratului, ns este o ancor slab. Apariia unei molecule-semnal din mediul extracelular
determin adugarea acidului palmitic la un rest de cistein al lanului polipeptidic pentru a
ancora mai ferm proteinele Src. Oprirea semnalelor extracelulare conduce la desprinderea
acidului palmitic i desprinderea kinazelor din membrana celular, urmat de eliberarea lor n
citosol i, firete, de inactivarea cii de semnalizare celular. Inserarea unor proteine cum
sunt proteinele p21ras se poate realiza prin legarea unui rest farnezil la un rest de cistein prin
legtur tioesteric, la captul C-terminal al proteinei.
2. Proteinele situate pe faa exoplasmic a membranelor celulare se ancoreaz de
monostratul lipidic prin intermediul unui fosfolipid glicozilat care conine resturi glucidice
inozitol i N-acetilglucozamina.

Figura 7. Proteinele integrale de pe faa citoplasmic i exoplasmic a membranei celulare


(imagine prelucrat din ,,The Cell, Geoffrey M. Cooper)

21

3.1.4. Carbohidraii membranelor celulare


Reprezint 2-10% din greutatea componentelor membranare. Oligo- i polizaharidele
se leag covalent de proteinele sau lipidele membranare formnd glicoproteine i respectiv,
glicolipide: majoritatea proteinelor de suprafa ale membranelor sunt glicoproteine i una
din zece molecule lipidice membranare sunt glicozilate. Proteoglicanii sunt constituii dintr-o
component proteic n bistratul lipidic i o component polizaharidic. Lanul polizaharidic
rmne n exteriorul celulei, fiind o component a matricei extracelulare.
3.1.5. Mobilitatea proteinelor i lipidelor n membrana celular
Mobilitatea proteinelor i lipidelor n monostratul lipidic se realizeaz prin difuzie
lateral. Un alt mecanism este difuzia rotaional, care semnific micarea de rotaie a unei
biomolecule n jurul unei axe perpendiculare pe planul membranei. Att difuzia lateral ct i
cea rotaional sunt favorizate energetic, deoarece regiunile nepolare ale moleculelor proteice
i lipidice nu prsesc interiorul hidrofob. Difuzia transversal denumit i inversiune sau
,,flip-flop" se realizeaz prin deplasarea moleculelor ntre cele dou monostraturi ale
bistratului lipidic. Mobilitatea lipidelor i proteinelor membranare mpreun cu fluiditatea
bistratului determin caracterul dinamic al membranelor celulare.
3.1.6. Asimetria distribuiei componentelor membranare
Este o caracteristic cu rol esenial n realizarea funciilor celulare. Distribuia
asimetric a moleculelor lipidice pe cele dou fee ale bistratului poate fi exemplificat prin
structura membranei hematiilor care conine n monostratul lipidic extern predominant
fosfatidilcolin i sfingomielin, iar n monostratul intern fosfatidiletanolamin i
fosfatidilserin. Consecinele sunt multiple: diferenele gradului de nesaturare ale lanurilor
hidrocarbonate ale lipidelor i natura diferit a gruprilor polare determin diferene n
fluiditatea celor dou monostraturi, apare de asemenea i o distribuie diferit a sarcinilor
electrice, fosfatidilserina fiind singurul fosfolipid cu sarcin negativ.
Importana funcional a asimetriei de distribuie a componentelor membranare poate
fi exemplificat astfel:
a. Activitatea enzimatic a proteinelor asociate membranei este dependent de
sarcina electric a fosfolipidelor, proteinkinazele necesitnd prezena
fosfatidilserinei cu sarcin electric negativ.
b. n timpul apoptozei, fosfatidilserina este translocat n monostratul exoplasmic al
bistratului lipidic i expus astfel pe suprafaa celular, semnalizeaz macrofagelor
prezena unei celule moarte, acesta fiind semnalul pentru fagocitare. Translocarea
fosfatidilserinei n monostratul extern se produce prin inactivarea translocazei care
realizeaz translocri din monostratul extern n cel intern i activarea scramblazei
care transfer fosfolipide nespecific ntre monostraturile lipidice.
Localizarea glicolipidelor n monostratul extern este implicat funcional n
mecanisme de semnalizare celular, ele funcionnd ca receptori. De exemplu, toxina holeric
22

se leag doar de celule care prezint gangliozide GM1 pe suprafaa celular (celulele
epiteliului intestinal).
Se remarc localizarea proteinelor membranare, mai precis orientarea strict, specific
pe faa exoplasmic sau citosolic a unor domenii ale moleculelor proteice. De exemplu,
glicoproteinele au lanurile oligozaharidice orientate pe faa extern a membranelor celulare
i pe faa citosolic a membranelor reticului endoplasmic i aparatului Golgi.
Localizarea asimetric a lipidelor i proteinelor determin delimitarea specific a unor
domenii structural-funcionale ale membranelor celulare: un exemplu ilustrativ este domeniul
apical, respectiv laterobazal al membranei celulelor epiteliului intestinal.
3.2. Funcia de transport a membranelor celulare
Existena celulelor depinde de o permanent comunicare cu mediul nconjurtor, iar
un rol fundamental n aceast comunicare o are proprietatea de permeabilitate selectiv a
membranelor celulare. Consecina este meninerea homeostaziei celulare, adic asigurarea
concentraiilor intracelulare relativ constante ale substanelor organice, ionilor, metaboliilor,
meninerea unei activiti metabolice stabile i reglarea volumului celular. Permeabilitatea
selectiv este influenat de metabolismul celular, condiiile din mediul extracelular i tipul
de esut.
Transportul diferitelor substane prin membran depinde de caracteristicile substanei
transportate (greutatea molecular, forma, dimensiunile, gradul de ionizare, gradul de
hidratare) i de compoziia chimic a membranelor, clasificndu-se n:
Transport de ioni i molecule mici prin mecanisme de difuzie sau mecanisme n care
sunt implicate proteine membranare.
Transport de macromolecule i particule prin vezicule delimitate de membrane.
Dup consumul de energie metabolic nmagazinat n ATP, transportul prin
membranele celulare se clasific n transport pasiv i
transport activ.
3.2.1. Transportul pasiv
Transportul moleculelor i ionilor prin membrana celular n sensul gradientului de
concentraie sau electrochimic se numete transport pasiv. Decurge fr consum de energie
inmagazinat n ATP, cteodat chiar cu pierdere de energie liber.

3.2.1.1. Difuzia simpl


Caracterizeaz moleculele mici cu caracter hidrofob i gazele: CO2, O2. Este cel mai
simplu tip de transport pasiv, difuzia simpl fiind determinat de gradientul de concentraie
i/sau electric al particulelor transportate, de o parte i de alta a membranei. Moleculele nu
sunt modificate chimic sau asociate altor molecule n cursul trecerii prin membran. Difuzia
simpl se desfoar n urmtoarele etape:

23

1. Trecerea moleculelor din mediul extracelular sau intracelular apos n interiorul


hidrofob al membranei
2. Traversarea bistratului lipidic
3. Deplasarea moleculelor din membran n mediul apos intracelular sau
extracelular
Viteza cu care se desfoar etapa 1 depinde de coeficientul de partiie (K) al
moleculei, care msoar afinitatea relativ a moleculei pentru mediul lipidic n raport cu apa,
altfel spus, ilustreaz gradul de hidrofobicitate al moleculei. Cu ct valoarea acestui
coeficient este mai mare, molecula este mai hidrofob (liposolubil) i ptrunde mai repede n
celul. Coeficientul de partiie este direct proporional cu constanta de permeabilitate a
membranelor celulare (P).
Viteza de difuzie a moleculelor prin membran este mult mai mic n mediu apos,
deci etapa 2 limiteaz viteza transportului. Difuzia simpl se desfoar conform legii lui
Fick dac avem gradient de concentraie pe cele dou fee ale membranei:
(dn/dt) = P x S (C1aq C2aq)
adic, viteza de difuzie este direct proporional cu diferena de concentraie, suprafaa i
coeficientul de permeabilitate al membranelor.
3.2.1.2.

Difuzia facilitat a moleculelor i ionilor

Figura 8. Transportul pasiv prin difuzie facilitat de proteinele canal sau de permeaze
(imagine prelucrat din http://www.brooklyn.cuny.edu)

A. n difuzia facilitat transportul pasiv este mediat de proteine membranare


denumite permeaze care au specificitate fa de molecula transportat, proces cu cinetic de
tip enzimatic. Permeaza leag reversibil la un situs activ pe o fa a membranei o singur
specie molecular sau molecule ce aparin unei singure familii: se formeaz complexul
permeaz-molecul care traverseaz bistratul, disociindu-se pe cealalt fa a membranei, cu
eliberarea moleculei transportate. Viteza cu care are loc difuzia facilitat n funcie de
concentraia moleculei transportate a evideniat existena unei relaii de tip Michaelis-Menten
pentru reacii enzimatice cu un singur substrat. Viteza atinge o valoare maxim atunci cnd
devine independent de concentraia substratului: la vitez maxim apare fenomenul de
24

saturare, toate permeazele fiind ,,ocupate", implicate n complexe de tip permeaz-molecul


de transportat. O alt caracteristic comun ntre difuzia facilitat i reaciile enzimatice este
inhibiia specific competitiv prin molecule similare sau necompetitiv, de exemplu prin
ioni ai metalelor grele sau 2,4 dinitrofluorobenzen.
Modelul propus: modelul transportorilor crui care execut o micare de rotaie n
bistratul lipidic care are drept rezultat trecerea moleculelor de pe o fa pe alta a membranelor
celulare. Un exemplu este transportul unor ioni de polipeptide antibiotic (valinomicina
transport n acest mod ionul de potasiu). Un alt model este cel n care permeaza sufer o
modificare conformaional n urma legrii moleculei de transportat, consecina fiind o
modificare conformaional, formarea unui ,,canal" prin care moleculele pot traversa
membrana. Modificarea conformaional ar determina de fapt orientarea aminoacizilor
hidrofili ai permeazei spre interiorul moleculei, care ar delimita ,,canalul" prin care pot trece
moleculele hidrofile.
B.Difuzia mediat de proteinele canal, proteine transmembranare strbtute de un
canal delimitat de aminoacizi hidrofili care formeaz pori membranari:
1. proteinele canal ionice prin care ionii difuzeaz cu diferite viteze n sensul
gradientului de concentraie. Sunt de mai multe tipuri n funcie de modul cum are loc
deschiderea lor care este un rspuns celular la stimuli mecanici, sau pot fi canale dependente
de voltaj ( potenialul de membran) sau de liganzi. Ligandul poate fi un mediator
extracelular (neurotransmitor) sau intracelular (ion, nucleotid, protein de legare a GTP).

Figura 9. Proteinele canal ionice cu poart (imagine prelucrat din ,,Molecular Biology of the
Cell, Bruce Alberts et al.)

Canalele cu poart comandat de voltaj


Celulele excitabile (neuronul i celulele musculare) sufer modificri controlate ale valorilor
potenialului de membran, asigurndu-se conducerea impulsului electric de-a lungul
membranei plasmatice. Celulele aflate n stare de repaus se caracterizeaz prin potenial de
membran denumit potenial de repaus. n prezena unui stimul, se produce o excitaie
electric rapid, autopropagabil, cu caracter tranzitoriu denumit potenial de aciune care
25

genereaz un ciclu de depolarizare a membranei, hiperpolarizare, revenire la starea de repaus,


asociate creterii tranzitorii a permeabilitii membranei celulare pentru ionii de Na i K,
datorit conformaiilor moleculare alternative ale proteinelor canal n funcie de diferena de
potenial. Depolarizarea este determinat de creterea permeabilitii pentru Na+, n
consecin ionii de Na ptrund n celule datorit gradientului de concentraie ionic i
potenialului de repaus. Se deschid i proteinele canal pentru K+, se produce efluxul ionilor de
potasiu. Exist dou opiuni n acest moment: anularea generrii potenialului de aciune sau
dezvoltarea potenialului de aciune, n funcie de permeabilitatea pentru Na/K. Dac
permeabilitatea pentru ionii de sodiu este mai mare dect permeabilitatea pentru ionii de
potasiu, influxul de Na este mai mare dect efluxul de K: se produce accentuarea
depolarizrii locale a membranei i apare potenialul de aciune. La un prag de +35 mV
canalele de Na+ sunt nchise-inactive i membrana fiind refractar la noi stimuli, este posibil
restabilirea potenialului de repaus. Proteinele canal pentru Na+ sunt formate din patru
domenii transmembranare, fiecare alctuit din cte ase -helixuri. Al 4-lea -helix din
fiecare domeniu este alctuit din aminoacizi ncrcai pozitiv ( arginin, lizin), cu rol de
senzor voltaic.
Canalele cu poart comandat de liganzi.
Structurile joncionale specializate n transmiterea semnalelor de la neuroni la celule-int:
neuroni sau celule musculare, poart denumirea de sinapse, care pot fi electrice sau chimice.
Sinapsele chimice implic eliberarea de ctre neuroni a neurotransmitorilor care acioneaz
asupra celulelor-int, mpachetai sub form de vezicule sinaptice n terminaia axonal a
neuronului presinaptic. Eliberarea neurotransmitorului n placa sinaptic determin
creterea concentraiei de Ca++ n celula presinaptic, ca urmare a deschiderii canalelor pentru
Ca++ cu poart comandat de voltaj, n momentul apariiei potenialului de aciune. Legarea
neurotransmitorilor de receptorii membranari ai celulei postsinaptice determin modificarea
conformaiei acelui receptor, deschiderea canalului ionic, adic modificarea permeabilitii
locale a membranelor urmat de depolarizare i propagarea potenialului de aciune. De
exemplu, legarea acetilcolinei la receptorul nicotinic crete local permeabilitatea membranei
postsinaptice pentru Na+ i K+ , apare depolarizarea membranei i este generat potenialul de
aciune. La rndul su, propagarea potenialului de aciune determin deschiderea proteinelor
canal pentru Na+ (comandate de voltaj) din sarcolem, depolarizarea membranei reticulului
sarcoplasmic i eliberarea Ca++ n citosol. Creterea concentraiei intracelulare a calciului
determin contracia muscular.
2. proteinele canal ionice de repaus, dintre care cel mai reprezentativ este
canalul de K a crui existen explic permeabilitatea mare a membranelor celulare pentru
ionii de potasiu i rolul major al K+ n meninerea potenialului de membran. Exist peste
100 de tipuri de canale pentru ioni. Canalul de K+ este dotat cu aminoacizi ncrcai
electronegativ care atrag cationii i cu un filtru ion-selectiv alctuit de atomii de oxigen ai
gruprilor carbonil.
+

26

Figura 10. Modul de aciune al filtrului ion-selectiv care permite trecerea selectiv a ionilor n
funcie de dimensiunea lor: distana dintre ionul de potasiu i oxigenii carbonil ai filtrului este
aceeai cu distana dintre ionul de potasiu i atomii de oxigen ai apei care nconjur ionii cnd
acetia sunt n mediul apos (nainte de intrarea n filtru).Ionii de sodiu sunt de dimensiuni mai mici,
distana dintre aceti ioni i oxigenul carbonil al filtrului este mai mare dect distana dintre ionii de
sodiu i atomii de oxigen ai apei, deci ei nu pot interaciona cu oxigenii carbonil ai filtrului, rmn n
soluie apoas nefiind preluai de proteina canal cu filtru selectiv pentru potasiu.(imagine prelucrat
din http://www.aquaporins.org/aquaporins/ion.htm)

Datorit transportului selectiv al ionilor prin membrana plasmatic i a diferenelor de


compoziie ionic dintre citosol i mediul extracelular, cele dou fee ale membranei sunt
diferite din punctul de vedere al ncrcturii electrice: faa citoplasmic este ncrcat negativ
n raport cu faa exoplasmic, deci exist o diferen de potenial electric denumit potenial
de membran. Transportul unei specii ionice prin aceste proteine canal depinde de gradientul
de concentraie ionic i valoarea potenialului de membran, care mpreun formeaz
gradientul electrochimic. Meninerea stabilitii potenialului de membran se realizeaz prin
mecanisme n care proteinele canal pentru K+ au un rol central. Pomparea ionilor de Na n
spaiul extracelular prin activitatea Na+/K+ ATPazei conduce la creterea numrului sarcinilor
electrice pozitive pe faa exoplasmic a membranelor i la apariia unui exces de sarcini
electrice negative pe faa citoplasmatic datorit anionilor organici intracelulari. Restabilirea
echilibrului se produce datorit influxului de K+ prin funcionarea Na+/K+ ATPazei, dar i
prin difuzia lor liber prin canalele de K+. Influxul de potasiu are loc mpotriva gradientului
de concentraie, sub aciunea forelor de atracie electrostatic determinate de sarcinile
electrice negative din celul.
3. canalele de transport pentru ap (aquaporinele)
Sunt impermeabile pentru ioni: Na+, K+, Ca++, Cl , H+, deoarece sunt prevzute cu
canale nguste care permit moleculelor de ap s treac urmnd calea oxigenului carbonil i
aminoacizilor hidrofobi care flancheaz constriciile aquaporinelor. Porul este prea ngust
pentru a permite ionilor hidratai s traverseze, iar dehidratarea ionilor implic consum
energetic foarte ridicat care nu poate fi compensat deoarece peretele de aminoacizi hidrofobi
nu poate interaciona cu ionul dehidratat pentru a compensa pierderea apei. Aquaporinele
27

sunt impermeabile pentru ionii de hidrogen. Cei mai muli H+ sunt prezeni n celul sub
form de H3O+, ruperea i desfacerea legturilor de H dintre moleculele de ap decurgnd
extrem de rapid. Aquaporinele au resturi de asparagin plasate strategic, care se leag de
atomul de oxigen al moleculei de ap. Doarece ambele valene ale atomului de oxigen sunt
ocupate, ele nu mai sunt disponibile pentru a lega protoni. Au fost identificate 13 tipuri de
aquaporine n membranele celulelor umane, membri ai unei familii de proteine majore
intrinseci de membran, care transport apa n i din celul, prevenind trecerea ionilor i altor
substane. Prima aquaporin descoperit a fost AQP1 din membrana eritrocitului, a crei
existen a fost raportat de profesor dr. Gheorghe Benga de la Universitatea de Medicin i
Farmacie ,,Iuliu Haieganu din Cluj-Napoca, n 1986. ncercrile de izolare ale antigenului
Rh, evideniau constant o protein asociat de 28 kDa, necunoscut, cu funcie nedeterminat,
dar cu prezen constant n membrana hematiilor i n membranele celulelor tubilor renali.
Peter Agre este cel care izoleaz i caracterizeaz aceast protein cu funcie de transport al
apei, dup ce mult timp a fost suspectat un mecanism adiional de transport al apei care ar
explica permeabilitatea mare pentru ap a membranelor unor tipuri de celule, permeabilitate
care nu poate fi explicat prin simpla osmoz. Pentru activitatea sa de caracterizare i
demonstarare a existenei aquaporinelor, Peter Agre primete premiul Nobel n 2003.
Aquaporinele sunt formate din 6 domenii -helix transmembranare care determin 5 bucle
interhelicale (A-E) care formeaz domeniile extracelulare i citosolice ale proteinei. Buclele
B i E sunt buclele hidrofobe care conin un motiv nalt conservat Asn-Pro-Ala (NPA) care
prin suprapunere n poriunea central hidrofob a bistratului lipidic, formeaz una din cele
dou constricii ale aquaporinei n form de clepsidr. Cealalt constricie, mai ngust, este
filtrul selectiv ar/R (aromatic/Arg), care slbete legturile de H dintre moleculele de ap,
permind acestora s traverseze porul ngust al aquaporinelor i s interacioneze cu resturile
de arginin ncrcate pozitiv datorit valenei negative a oxigenului. n acelai timp este
oprit trecerea protonilor prin aceast protein-canal ( ionii hidroniu H3O+ sunt ncrcai
pozitiv).
AQP1 se gsete n membrana bazolateral i apical a celulelor epiteliale din tubii
contori proximali, ansa lui Henle i vasa recta, n membranele hematiilor, endoteliilor
vasculare i tractului gastrointestinal. AQP2 se gsete n ductul colector principal al
rinichilor i este controlat de vasopresin, mutaii n gena AQP2 determin diabetul insipid.
AQP2 apare n membrane intracelulare. Tipurile 3 i 4 sunt rspunztoare de reabsorbia apei
la nivelul ductelor colectoare medulare din rinichi. Tipurile 3, 7, 9 i 10 sunt
aquagliceroporine, canale care transport glicerol i ap. Dac aquaporinele au un rol crucial
n meninerea homeostaziei apei, rolul lor fiziologic i patologic ca transportori ai glicerolului
nu este elucidat deplin. Adipocitele sunt sursa major de glicerol, substrat pentru
gluconeogeneza hepatic. Aquaporinele 7 i 9 (AQP7, AQP9) sunt canale pentru glicerol n
adipocite i hepatocite, care menin balana optim ntre eliberarea glicerolului din adipocite
i preluarea acestuia n hepatocite.

28

Figura 11. Structura aquaporinelor, constricia cu resturi NPA i interaciunea moleculelor de


ap cu resturile de asparagin (imagine prelucrat din
www.klockgiesser.com/bio/aquaporine/aquaporine.htlm)

3.2.2. Transportul activ


Pentru a menine constant concentraia ionic a mediului intracelular, celula i-a
creat mecanisme de transport activ, capabile s deplaseze moleculele i ionii n sens invers
gradientelor de concentraie i electrochimice, datorit consumului de energie metabolic.

3.2.2.1. Transportul activ propriu-zis


n acest tip de transport, proteina-transportor are i funcie ATPazic i utilizeaz
energia eliberat prin hidroliza ATP n procesul de transport. Aceste proteine transportoare
sunt clasificate n:
Clasa ATPazelor de tip P care au ca reprezentant major Na+-K+ ATPaza rspunztoare
de eliminarea activ din celul a ionilor de sodiu concomitent cu acumularea intracelular a
ionilor de potasiu. Meninerea constant a concentraiei intracelulare de K+ prin funcia
acestei pompe asigur condiii pentru desfurarea biosintezei proteinelor, activitii unor
enzime i meninerii potenialului de membran.

29

Figura 12. Na+-K+ ATPaza (imagine prelucrat din http://www.bio.miami.edu)


Un alt reprezentant este Ca2+ATPaza care este situat la nivelul membranei celulare i
are rolul de a scoate ionii de calciu din celule, pentru meninerea unei concentraii
intracelulare potrivite desfurrii proceselor de semnalizare celular. Pe de alt parte,
Ca2+ ATPaza localizat n membrana reticulului sarcoplasmic din celulele musculare, scade
concentraia intracelular de Ca2+ prin transportul activ al acestor ioni n lumenul reticulului
n timpul relaxrii musculare.

Figura 13. Reglarea concentraiei intracelulare de Ca++ prin activitatea Ca++ ATPazelor din membrana
celular i sarcolem (imagine prelucrat din http://www.rpi.edu/dept/bcbp/molbiochem)

Clasa ATPazelor de tip V cuprind pompele de protoni (H+ATPazele) care au funcia


de a pompa protoni prin membrana celular a unor tipuri de celule (renale, osteoclaste,
macrofage, neutrofile, spermatozoizi, celule tumorale, fiind implicate n procese ca
homeostazia, resorbia osoas, transportul cuplat prin membran, fecundarea ovulului de
spermatozoid, metastazarea tumoral. H+ATPazele localizate la nivelul membranelor

30

endosomale i lizosomale determin scderea pH-ului din interiorul acestor organite.


Clasa ATPazelor de tip F din membrana mitocondriilor utilizeaz gradientul protonic
pentru a sintetiza ATP (cupleaz sinteza ATP cu transportul H+ de la concentraii ridicate la
concentraii sczute).

Figura 14. Comparaie structural a ATPazelor de tip V i F. V-ATPazele hidrolizeaz ATP prin
domeniul periferic V1 i realizeaz transportul de protoni prin domeniul transmembranar
integral V0. F-ATPazele (sau ATP sintetazele) funcioneaz n sensul sintezei de ATP, prin cuplarea
micrii protonilor n direcie opus prin F0 cu sinteza ATP in F1. Ambele enzime opereaz prin
mecanism rotaional.

Clasa ATPazelor de tip ABC se remarc printr-un numr mare de molecule ce aparin
acestei clase, implicate n mecanisme cu semnificaie n domeniul clinic. Dac ABC
ATPazele bacteriene realizeaz importul de ioni, aminoacizi, peptide, proteine, mono- i
polizaharide necesare acestor celule, ATPazele ABC ale eucariotelor sunt specializate pentru
export. O astfel de ATPaz este proteina de multirezisten la medicamente (,,multidrug
resistance protein" MDR ) care este supraexprimat n celulele tumorale umane, determinnd
rezisten simultan la o varietate de medicamente citotoxice larg utilizate n chemoterapie,
40% din cancerele umane avnd rezisten multimedicamentoas. ABCATPazele din
membrana reticulului endoplasmic transport n lumen peptide provenite din degradarea
citosolic a proteinelor virale sau microbiene. Aceste peptide ajung din lumenul RE pe
suprafaa celular fiind recunoscute de limfocitele T citotoxice, care n acest mod suprim
celulele infectate.Un alt reprezentant al acestei clase este proteina CTFR (,,cystic fibrosis
transmembrane conductance regulator"), care este un transportor al ionilor de clor prin
31

membranele celulelor productoare de mucus, saliv, transpiraie, lacrimi sau enzime


digestive. Transportul clorului prin membranele celulare are rol n reglarea transportului de
ap pentru meninerea fluiditii secreiilor i mucusului, dar i n reglarea transportului
membranar de sodiu. Deleia unui aminoacid din poziia 508 a proteinei CTFR determin un
blocaj al transportului de ap i sare (NaCl) prin membrane, cu producerea de ctre celulele
care cptuesc cile respiratorii sau canalele secretorii ale pancreasului a unui mucus vscos
ce obstrueaz aceste ci. Mucusul cu aceste caracteristici defavorizeaz funcia ciliar i
favorizeaz infecii bacteriene cronice.

3.2.2.2. Sistemele de cotransport


Proteinele transportor de tip ATPazic nu sunt singurele rspunztoare de transportul
activ prin membranele celulare. Celulele au o clas secundar de proteine care import sau
export ioni i molecule mici cum sunt glucoza sau aminoacizii mpotriva gradientului lor de
concentraie, fr consum de energie provenit din hidroliz de ATP. Proteinele care
realizeaz cotransport utilizeaz energia gradientului electrochimic al Na+ sau H+ pentru a
transporta simultan o alt substan, proces denumit cotransport. Cnd molecula/ionul
transportat i ionul cotransportat trec prin membran n aceeai direcie, procesul se numete
simport, iar cnd trec n direcii opuse, procesul este antiport.
Un exemplu de cotransport este importul glucozei sau aminoacizilor n celulele
epiteliului intestinal sau al tubilor renali mpotriva gradientului lor de concentraie prin
cuplarea cu transportul n celul al ionilor de Na.

Figura
15.
Simportul
http://www.biochem.arizona.edu)

Na+-glucoz/aminoacizi

(imagine

prelucrat

din

Micarea Na+ din mediul extracelular n celule este determinat de dou fore:
gradientul de concentraie (concentraia Na+ este sczut n mediul intracelular fa de cel
extracelular) i de potenialul de membran (faa citoplasmic a membranelor celulare fiind
ncrcat negativ n raport cu faa exoplasmic). Pentru fiecare doi ioni de sodiu transportai
32

n celul se produce cotransportul unei molecule de glucoz. n aceelai timp, activitatea


Na+-K+ATPazei asigur meninerea gradientului de concentraie al Na+ i simportul continuu
al Na+-glucozei/AA n celulele epiteliale. Transportul transcelular al glucozei i
aminoacizilor din lumenul intestinal sau tubii renali n snge este condiionat de polaritatea
celulelor epiteliale: membrana apical conine proteina simport Na+- glucoz/aminoacizi, iar
membrana latero-bazal deine pompe de tip Na+-K+ATPaz i proteine (permeaze) care
mediaz difuzia facilitat a glucozei i aminoacizilor n circulaie.
Celulele miocardice au o protein membranar denumit sistem antiport Na+-Ca2+
care are un rol mai important n meninerea unei concentraii intracelulare sczute de Ca2+ n
aceste celule, importul a trei ioni de sodiu fiind nsoit de exportul unui ion de calciu
mpotriva gradientului su de concentraie (concentraia extracelular de Ca2+ este de 10000
de ori mai mare dect cea intracelular). Creterea concentraiei intracelulare de calciu
determin contracia, iar activitatea antiportului Na+-Ca++ care scade concentraia
intracelular de calciu reduce fora contraciilor inimii. Gradientul de Na+ necesar funcionrii
acestui antiport este furnizat prin activitatea Na+-K+ATPazei. Ouabaina i digoxina cresc
contraciile musculaturii cardiace n insuficien cardiac congestiv, prin inhibarea
Na+-K+ATPazei, ceea ce determin creterea concentraiei intracelulare de Na+ i reducerea
activitii sistemului antiport Na+-Ca2+, cu creterea concentraiei intracelulare de ioni de
calciu, consecina fiind creterea forei de contracie a miocardului.

Figura 16. Ca++ este transportat n celul prin canalele pentru Ca++ (1) sau prin
antiportul Na+-Ca++(2), iar scderea concentraiei intracelulare a calciului se realizeaz prin
Ca++ATPaza din membrana plasmatic (3) i antiport Na+-Ca++ (2), dar i prin sechestrarea Ca++ n
reticulul sarcoplasmic, nucleu i mitocondrie sau de ctre proteine din citosol-calmodulina,
calsequestrina. Reticulul sarcolasmic, ca i nveliul nuclear posed Ca++ATPaz, iar transportul Ca++ n
mitocondrie are loc prin transportor de tip uniport (imagine prelucrat din http://ehp.niehs.nih.gov)

Proteina antiport Cl /HCO3 denumit proteina AE1 este proteina integral de


membran predominant n eritrocitele mamiferelor. Schimbul unui anion de clor contra unui
anion bicarbonat nu implic modificri ale ncrcturii electrice a membranei, antiportul fiind
33

dependent doar de gradienii de concentraie ai celor doi anioni pe cele dou fee ale
membranei. CO2 eliberat din celule ajunge n sngele capilar, difuzeaz prin membrana
eritrocitului i este transformat n bicarbonat solubil n ap (anionul HCO3-), reacie catalizat
de anhidraza carbonic:

Eliberarea O2 din oxihemoglobin induce o schimbare conformaional n polipeptidul


globin, care permite unei histidine s lege protonul produs n reacia catalizat de anhidraza
carbonic cu formare de hemoglobinat acid. HCO3 format este transportat din eritrocit prin
acivitatea antiportului Cl /HCO3 , la schimb cu Cl , care ptrunde n eritrocit.

Figura 17. Transportul CO2 de la esuturi la plmni mediat de antiportul Cl/HCO3 (imagine
prelucrat din ,,Mollecular Cell Biology", H.Lodish et al.)

La nivelul capilarelor pulmonare, procesul este invers. CO2 difuzeaz din eritrocite,
scderea concentraiei citosolice a CO2 determin activarea anhidrazei carbonice care
34

catalizeaz reacia de la dreapta la stnga, n sensul formrii CO2 i OH . Prin legarea


oxigenului la hemoglobin, este eliberat protonul, care formeaz cu OH molecula de ap.
Scderea concentraiei intracelulare a HCO3 datorit activitii anhidrazei carbonice
determin ptrunderea HCO3 n celul, la schimb cu Cl . Dac schimbul anionic prin
proteina AE1 nu ar avea loc, HCO3 s-ar acumula n eritrocite i ar genera mult CO2,
modificnd pH-ul citosolic eritrocitar, care devine alcalin. Aproximativ 80% din CO2 din
snge este transportat prin mecanismul de generare al bicarbonatului n eritrocite. Sistemul
antiport Cl /HCO3 permite transportul unor mari volume de CO2 de la esuturi spre plmni,
schimbul HCO3 cu Cl menine pH-ul citosolic neutru.
n reglarea pH-ului celular, un rol esenial au proteinele cotransportor Na+HCO3/Cl
i antiportul Na+/H+. Metabolismul anaerob al glucozei produce acid lactic, iar metabolismul
aerob produce mari cantiti de CO2, care este hidratat de anhidraza carbonic la acid
carbonic. Acest acid slab disociaz, crescnd concentraia intracelular de protoni, pH-ul
celular devine acid, afectnd metabolismul celulelor. Proteina antiport Na+HCO3/Cl
import un ion de sodiu n sensul gradientului su de concentraie, mpreun cu ionul
bicarbonat i export la schimb un ion de clor mpotriva gradientului de concentraie.
HCO3 importat se combin cu protonii, genernd CO2, care difuzeaz din celule.
Antiportul Na+/H+ import un ion de sodiu n sensul gradientului de concentraie i
export la schimb un proton.
Aceste sisteme de export de protoni sunt activate de scderea pH-ului intracelular,
care stimuleaz antiportul Cl/HCO3, determin intensificarea importului de HCO3 i
normalizarea pH-ului citosolic la valori de 7,4. Meninerea pH-ului fiziologic creeaz
condiiile desfurrii normale a proceselor de sintez de ADN, ARN, de biosintez a
proteinelor (creterea i diviziunea celular) i activitatea enzimelor implicate n desfurarea
altor ci metabolice celulare.

3.2.3. Transportul macromoleculelor i particulelor prin membrana celular


particulelor
prin
Transportul proteinelor, polinucleotidelor, polizaharidelor i
membrana celular se desfoar prin mecanisme de transport mediate de vezicule.
Transportul mediat de vezicule cuprinde:
1.Exocitoza prin care molecule sintetizate n celul sunt secretate n spaiul
extracelular
2.Endocitoza prin care are loc transportul n celul al unor molecule sau particule din
fluidul interstiial
3.Fagocitoza care reprezint ingerarea de ctre celule specializate a unor particule de
ordinul micrometrilor: bacterii, debriuri celulare
4.Transcitoza este procesul prin care moleculele sau particulele ptrunse n celul prin
endocitoz strbat spaiul celular fiind exportate din nou printr-o alt regiune membranar
dect cea prin care au ptruns.
Caracterele comune ale acestor tipuri de transport mediat de vezicule sunt:
sechestrarea moleculelor sau particulelor n vezicule, transportul strict direcionat, procesele
de fuziune ale veziculelor cu membrane.

35

1.Exocitoza este procesul pe care se bazeaz secreia celular a componenilor structurali


membranari i extracelulari i a unor proteine solubile cum sunt moleculele-semnal
(hormonii, neurotransmitorii), enzimele. Proteinele de export sunt sintetizate n ribozomii
ataai reticulului enpoplasmic rugos, sunt procesate i sortate n aparatul Golgi, de unde se
desprind veziculele care conin proteinele de secreie, vezicule care traverseaz spaiul
celular, fuzioneaz cu membrana celular i deverseaz coninutul n spaiul extracelular.
Componentele lipidice i proteice ale membranelor veziculelor sunt ncorporate n membrana
celular i apoi recuperate prin endocitoz i reutilizate la nivelul aparatului Golgi, de unde se
desprind noi vezicule. Exocitoza este de dou tipuri: Ca2+ dependent non-constitutiv i
Ca2+ independent constitutiv. Exocitoza la nivelul sinapselor chimice neuronale este un
exemplu de exocitoz Ca2+ dependent i are ca finalitate semnalizarea interneuronal.
Exocitoza constitutiv este caracteristic tuturor celulelor i are ca finalitate eliberarea
componenilor matricii extracelulare i a proteinelor structurale de membran care vor fi
ncorporate n membrana plasmatic dup fuziunea veziculelor cu aceasta. Transportul
intracelular al veziculelor de exocitoz implic activitatea proteinelor-motor asociate
citoscheletului actinic i tubulinic. Urmeaz captarea veziculelor de ctre membrana-int cu
care va avea loc fuziunea. Captarea implic legturi care limiteaz mobilitatea veziculelor,
dar nu sunt foarte rigide i au o lungime >25 nm. Ancorarea veziculelor la membrana
plasmatic se realizeaz prin interaciunea stabil a celor dou membrane, la distana de
5-10nm, care implic rearanjri moleculare i apariia unor structuri ncolcite extinse. O alt
etap este condiionarea care ns este caracteristic doar exocitozelor Ca2+ dependente
neconstitutive, este etapa care include modificrile moleculare ale proteinelor ATPdependente i ale lipidelor, astfel nct infuzia de ioni de calciu s declaneze secreia, de
exemplu a neurotransmitorilor.
Fuziunea membranei plasmatice cu membrana veziculelor este mediat de proteinele
SNARE, fiind finalizat fie prin eliberarea coninutului veziculei (enzime, hormoni,
neurotransmitori, toxine) n spaiul extracelular, fie de ncorporarea unor componente ale
membranei veziculare (proteine, lipide) n membrana int (de exemplu membrana celular).
Ultimul proces e important pentru meninerea compoziiei/dimensiunilor membranei celulare,
sau dimpotriv, pentru schimbarea rapid a acestora ca rspuns la semnale exterioare.
Mai mult, n acest fel se asigur modificarea suprafeei membranei n timpul creterii celulei.
Proteinele SNARE (,,Soluble NSF Attachment Protein Receptors") mediaz fuziunea
veziculelor cu membrana plasmatic sau cu membranele lizosomale. Proteinele v-SNARE
sunt localizate n membranele veziculelor, iar t-SNARE sunt localizate n membranele-int.
Cele mai bine studiate sunt cele implicate n fuziunea veziculelor sinaptice cu membrana
presinaptic, fiind inta neurotoxinelor bacteriene care produc tetanosul i botulismul.
Domeniul citoplasmic al acestor proteine, motivul SNARE alctuit din 60-70 de aminoacizi
este capabil de asamblare reversibil n complexe strnse alctuite din teancuri de cte
4 -helixuri, denumite complexe trans- SNARE. Moleculele proteice implicate n formarea
complexelor de fuziune sunt: sintaxina1 (1 -helix) i SNAP-25 (2 -helixuri) din membrana
celular i sinaptobrevina (1 -helix) din membrana vezicular. Complexul trans-SNARE
este format din proteine SNARE ancorate n membrane ,,trans" aflate n opoziie nainte de
fuziune. Dup unirea membranelor, proteinele SNARE formeaz un complex ,,cis" fiind
localizate n membrana unic, rezultat n urma fuziunii. Influxul de calciu completeaz
36

fuziunea, prin interaciunea senzorului pentru calciu denumit sinaptotagmin cu lipidele


membranare i complexul trans-SNARE. Energia eliberat n cursul asamblrii complexului
SNARE este utilizat pentru a contracara forele de respingere dintre membrane.

Figura 18. Complex de fuziune ntre membrana veziculei de exocitoz i membrana-int (imagine
prelucrat dup autorul Danko Dimchev Georgiev, M.D.)

2.Endocitoza este un proces de importan vital pentru celule, intervenind n


preluarea nutrienilor din mediul extracelular, n adeziunea i migrarea celular, semnalizarea
celular prin receptori, neurotransmisia, prezentarea antigenelor, polaritatea celular,
diviziunea, creterea i diferenierea celular i importul unor medicamente n celule. n
funcie de mecanism, se cunosc mai multe tipuri de endocitoz:
a.endocitoz mediat de receptor, un mecanism de transport specific, deoarece
receptorul membranar recunoate i leag macromolecule care intr n celul sub form de
complex receptor-ligand. Implic existena unor regiuni specializate ale membranei celulare,
care au aspectul unor depresiuni i pe a cror fa citoplasmic se afl o reea proteic.
Componentul major al acestei reele proteice este clatrina, alctuit din ase lanuri
polipeptidice care formeaz o structur caracteristic de stea cu 3 brae (,,triskelion").
Prin asamblarea moleculelor de clatrin se formeaz o reea polihedral care d veziculelor
de endocitoz aspectul de vezicule ,,mbrcate". Dup formarea veziculelor, reeaua
polihedral se destram, clatrina i celelalte proteine ale reelei sunt reciclate, ajungnd din
nou n membran formnd noi regiuni specializate pentru endocitoz. Depresiunile
membranare ,,mbrcate" pot concentra i internaliza numeroase tipuri de molecule deoarece
conin receptori responsabili pentru endocitoza mediat a acestor liganzi, cum sunt:
LDLcolesterolul, transferina, factori de cretere, anticorpi, etc. Endocitoza mediat de
receptor are loc i prin vezicule de endocitoz fr nveli de clatrin. Regiunile specializate
ale membranei fr clatrin dein o protein denumit caveolin care leag colesterolul i au
un bistrat lipidic bogat n colesterol i glicolipide. Sunt abundente n celulele musculaturii
netede, pneumocite, fibroblaste, adipocite i celule endoteliale, au form tipic de grot, de
unde i denumirea lor.
37

Figura 19. Mecanismul endocitozei mediate de receptor prin vezicule ,,mbrcate de


clatrin. Proteinele adaptor AP leag membrana plasmatic prin situsuri fosfatidilinozitol
(4,5)bifosfat, recunosc i leag o secven de aminoacizi hidrofobi din molecula receptorilor. Clatrina
stabilizeaz interaciunea AP cu membrana plasmatic i activeaz prin fosforilare o subunitate a AP,
ceea ce permite recunoaterea i legarea receptorilor. (imagine preluat din:
http://www.abcam.com)

b. Pinocitoza sau endocitoza de faz fluid este un proces constitutiv, comun tuturor
celulelor, prin care ptrund n celule molecule n soluie, procesul fiind direct proporional cu
concentraia moleculelor n fluidul extracelular. Veziculele de pinocitoz fuzioneaz cu alte
vezicule: endosomi i lizosomi.
Calea endocitozei const din compartimente distincte care internalizeaz molecule i
le recicleaz spre membrana plasmatic (endosomii timpurii i endosomii de reciclare) sau le
sorteaz spre a fi degradate (endosomii trzii i lizozomii). Endosomii timpurii sunt localizai
la periferia celulei i recepioneaz veziculele internalizate din membrana celular.
Au structur tubulo-vezicular i pH acid, datorit pompelor de H+ din structura membranelor
lor. Sunt organite de sortare n care receptorii disociaz de liganzi n mediu acid, receptorii
fiind reciclai n membrana celular via tubulii endosomali, sau de sortare spre calea
transcitozei i spre endosomii trzii. Endosomii trzii preiau particule sau molecule de la
endosomii timpurii ai cii endocitozei, de la reeaua trans-Golgi n calea biosintetic sau de la
fagosomi n calea fagocitozei, reprezentnd ultima etap n procesul de sortare nainte de a
ceda coninutul lizosomilor. Lizosomii sunt ultimul compartiment al cii de endocitoz, fiind
principalul compartiment hidrolitic al celulei cu un pH acid (4,8) i coninut ridicat de enzime
hidrolitice.

38

Figura 20. Calea endocitozei: EV- vezicul de endocitoz, EE- endosom timpuriu, de sortare
(,,early endosome), LE- endosom trziu (,,late endosome), PA- preautofagosom, EA-autofagosom
timpuriu, autofagosom trziu, LY-lizosom, G-reeaua transGolgi. (imagine prelucrat din
http://www.cell-research.com)

3. Fagocitoza este un proces de aprare fa de substane strine, microorganisme,


celule mbtrnite sau tumorale, resturi celulare, etc. caracteristic unor celule specializate:
monocitele care se difereniaz n esuturi n macrofage i neutrofilele. Procesul de fagocitoz
este influenat de compoziia chimic i proprietile suprafeei particulei ingerate i se
desfoar n urmtoarele etape:
a. legarea particulei de fagocit prin receptorii membranari ai fagocitului care recunosc
i leag specific liganzii de pe suprafaa particulei-int. De exemplu, fagocitarea bacteriilor
este precedat de opsonizarea lor (acoperirea cu anticorpi i/sau componente ale
complementului). Regiunea FC a anticorpului este expus spre exterior fiind recunoscut i
legat de receptorii FC din membrana fagocitului. Formarea complexului receptor- ligand FC
declaneaz semnalul intracelular pentru internalizarea bacteriei.
b. internalizarea bacteriei prin emiterea pseudopodelor care nchid particula ntr-o
vezicul care se numete fagosom. Acesta fuzioneaz cu vezicule din compartimentul
lizosomal formnd fagolizosomul unde se desfoar aciunea enzimelor hidrolitice i a
enzimelor care catalizeaz reacii din care rezult substane toxice: peroxid de hidrogen,
anion superoxid, care suprim bacteriile.

39

Figura 21. Fagocitoza mediat de receptori i prezentarea antigenelor pe suprafaa celulei


fagocitare.

40

Figura 22. Cile de semnalizare activate consecutiv fagocitozei i rspunsul celular

4. Transcitoza se caracterizeaz prin internalizarea veziculelor de endocitoz, dup


care urmeaz sortarea la nivel endozomal, care presupune existena unei secvene-semnal de
recunoatere, complexul receptor-ligand fiind sustras aciunii enzimelor lizosomale i
transportat prin vezicule spre membrana celular, unde are loc externalizarea moleculei n
spaiul extracelular.

41

3.3. Funcia de adeziune celular


Adeziunea celular creeaz ci de comunicare, permite celulelor s schimbe semnale prin
care este coordonat comportamentul lor i este reglat expresia genic. Adeziunea celulcelul sau adeziunea la matricea extracelular controleaz structura intern a fiecrei celule
deoarece desfacerea i refacerea adeziunii i modelarea matricii guverneaz modul n care
celulele sunt orientate n timpul creterii, dezvoltrii i proceselor reparatorii. Jonciunile
eseniale
pentru
celulare, mecanismul adeziunii celulare i matricea extracelular sunt
organizarea, dinamica i funcia structurilor multicelulare. Semnalele sunt transmise n
structurile multicelulare prin 2 strategii:
prin matricea extracelular
prin citoscheletul celular i adeziunea celul-celul care leag citoscheletul
celulelor adiacente.
n esuturi contactul dintre celule se realizeaz prin structuri specializate care poart
denumirea de jonciuni intercelulare. Un rol important l are matricea extracelular, ancorarea
celulelor n matrice are loc prin jonciuni celul-matrice care sunt regiuni specializate ale
membranei celulare. n esutul epitelial matricea este subire, alctuiete lamina sau
membrana bazal, rezistena esutului epitelial fiind conferit de elementele citoscheletului
care interacioneaz cu membrana plasmatic la nivelul jonciunilor specializate, cu suprafaa
altor celule sau cu matricea extracelular. n esutul conjunctiv celulele sunt dispersate n
matricea extracelular, elementele matricei asigurnd n acest caz stabilitatea esutului.
Aparatul de jonciune este alctuit din urmtoarele tipuri :
1. Jonciunile de ancorare, realizeaz adeziunea celul-celul i celule-matrice
extracelular;
2. Jonciunile de ocluzie, sudeaz membranele plasmatice ale celulelor epiteliale
conferindu-le proprieti de barier impermeabil sau selectiv permeabil;
3.Jonciunile de comunicare formeaz canale, creeaz pasaje care unesc citoplasma
celulelor adiacente, realiznd cuplarea metabolic a celulelor care ndeplinesc aceeai funcie;
4.Jonciuni de retransmitere a semnalelor de la celul la celul prin membranele
plasmatice, la situsurile de contact celul-celul (sinapsele interneuronale sau sinapsele
imunologice n care limfocitele T interacioneaz cu celulele prezentatoare de antigen i alte
exemple ilustreaz faptul c membranele celulare trebuie s fie n contact pentru a avea loc
interaciunea ligandului cu receptorul)
3.3.1. Jonciunile de ancorare realizeaz adeziunea celul-celul i celul-matrice
extracelular. Sunt alctuite din proteine de ataare intracelular care leag elemente ale
citoscheletului de structurile joncionale i din glicoproteine transmembranare de legare care
interacioneaz prin domeniul lor citoplasmic cu proteinele de ataare i prin domeniul
extracelular cu glicoproteinele transmembranare ale celulelor adiacente.
Jonciunile de ancorare se clasific n jonciuni de adeziune i structuri dezmosomale.

42

3.3.1.1. Jonciunile de adeziune intercelular sunt structuri la nivelul crora sunt ancorate
filamente de actin dispuse n mnunchiuri. O jonciune de aderen este definit ca o
jonciune celular a crei fa citoplasmic este ataat citoscheletului de actin. Aceste
jonciuni formeaz o band de adeziune continu (,,zonulae adherens"), caracteristice
celulelor epiteliale. Astfel de structuri joncionale se gsesc i n celule non-epiteliale, dar ele
nu formeaz benzi de adeziune continu, de exemplu n cardiomiocite. Filamentele de actin
interacioneaz cu structurile joncionale prin intermediul unor proteine de ataare: vinculina
i -actinina. Regiunea ,,cap" a vinculinei se leag de E-caderin prin intermediul -, - i
-cateninelor. Regiunea ,,coad" a vinculinei leag lipidele membranare i filamentele de
actin. Domeniul extracelular al caderinelor interacioneaz cu domeniile extracelulare ale
glicoproteinelor omoloage din membranele celulelor nvecinate.
Jonciunile de aderen sunt compuse din urmtoarele proteine:
Caderinele, proteine transmembranare care formeaz homodimeri n manier
Ca-dependent cu moleculele de caderin ale celulelor adiacente.
Proteinele p120 denumite delta-catenine leag regiunea juxtamembranar a caderinei.
-catenina sau -catenina (plakoglobina) leag caderina la nivelul regiunii ce conine
situsul specific de legare al cateninei.
- catenina leag caderina indirect, prin -catenin sau plakoglobin.

Figura 23. Principalele interaciuni ntre proteinele structurale ale jonciunilor de aderen.
Filamentele de actin sunt ataate prin -actinine i la membranele celulare prin vinculin.
Domeniile ,,cap ale vinculinei sunt asociate cu E-caderinele prin , , -catenine. Domeniul ,,coad
al vinculinei se leag la lipidele membranare i la filamentele de actin. (imagine prelucrat din
http://herkules.oulu.fi)

E-caderina (epitelial) cea mai bine studiat, este alctuit din 5 domenii repetitive
(EC1 ~ EC5) n domeniul extracelular, un domeniu transmembranar i domeniul intracelular
care leag p120 catenina i beta-catenina. Domeniul intracelular conine o regiune nalt
fosforilat care leag beta-catenina, care la rndul su leag alfa-catenina, cu rol n reglarea
citoscheletului de actin. E-caderina este exprimat i fosforilat n celule n cursul
43

diferenierii. n esuturile adulte, E-caderina este exprimat n esuturile epiteliale, cu un timp


de njumtire de 5ore. Pierderea funciei E-caderinei sau lipsa exprimrii acestei
glicoproteine membranare este implicat n dezvoltarea tumorii canceroase i n metastazare,
deoarece n asemenea condiii descrete rigiditatea i stabilitatea tisular i crete motilitatea
celulelor, ceea ce permite celulelor tumorale s penetreze membrana bazal i s invadeze
esuturile din jur.
Jonciunile intercelulare prin legarea homofilic a caderinelor au un rol esenial n
segregarea tisular. Apariia i dispariia caderinelor specifice este corelat cu etapele
dezvoltrii embrionare cnd celulele se grupeaz i i modific contactele pentru a forma noi
structuri tisulare. n timpul formrii tubului neural din ectoderm, celulele pierd E-caderina i
sintetizeaz N-caderin, n timp ce celelalte celule din ectoderm continu s sintetizeze
E-caderina. Cnd celulele crestei neurale migreaz din tubul neural, caderinele menionate
sunt greu detectabile, n schimb sunt exprimate n aceste celule caderine-7 care menin sub
form de grupri celulele migrate prin adeziune intercelular. n final, cnd aceste celule
agreg pentru a forma un ganglion nervos, ele exprim N-caderinele.
Dac ntr-o cultur de celule exist celule care exprim diferite tipuri moleculare de
caderine, ele vor fi sortate i vor agrega separat n funcie de tipul de caderin exprimat,
caderinele legndu-se preferenial de propriul lor tip molecular.
Asamblarea celulelor n epitelii poate fi reversibil. Exprimarea E-caderinelor
determin adeziunea celulelor neataate, dispersate denumite celule mezenchimale, care pot
astfel forma un epiteliu. Invers, celulele epiteliale se pot detaa, se disperseaz i i pot
schimba caracterele migrnd din epiteliul parental. Aceast tranziie epiteliu-mezenchim are
un rol important n dezvoltarea embrionar normal, dar are un rol important n procese
patologice la adult, n cancer, multe tipuri de tumori maligne avnd originea n epitelii.
3.3.1.2. Jonciunile de adeziune celul-matrice extracelular conecteaz filamentele de
actin cu elementele componente ale matricei extracelulare. Adeziunea celul-matrice se
realizeaz prin regiuni specializate ale membranei plasmatice, prin structuri joncionale
denumite contacte focale sau plci de adeziune.

Figura 24. Structura plcilor de adeziune (imagine prelucrat din herkules.oulu.fi)

44

La nivelul acestor structuri se stabilesc interaciuni ntre mnunchiurile de filamente


de actin i elemente ale matricei, prin intermediul unei glicoproteine membranare ce
aparine familiei integrinelor. Interaciunea filamentelor de actin cu integrina este mediat de
4 proteine diferite: o protein de legare a capului filamentelor de actin, vinculina, -actinina,
talina.
3.3.1.3. Dezmosomii sunt structuri de adeziune celular la nivelul crora se realizeaz
contactul ntre filamentele intermediare ale celulelor adiacente. n celulele epiteliale
structurilor dezmosomale le sunt asociate filamente de cheratin, n miocite filamente de
desmin care sunt o cale de transmitere a forei de contracie, n celulele mezenchimale
filamente de vimentin. Electronomicroscopic, dezmosomii apar formai din dou discuri
dense de 15-20 nm grosime situate pe faa citoplasmic a membranelor a dou celule
adiacente, alctuite din molecule proteice denumite desmoplachine care interacioneaz cu
filamentele intermediare, dar i cu glicoproteine transmembranare denumit desmogleina i
desmocolina. Domeniile extracelulare ale desmogleinelor i desmocolinelor interacioneaz
homofilic printr-un mecanism Ca-dependent, conectnd desmosomii celulelor adiacente.
Desmogleina i desmocolina sunt membre ale familiei de molecule de adeziune celular
denumit caderine.

Figura 25. Domeniul extracelular a desmosomului se numete Domeniu central extracelular (ECD)
sau Desmoglea n care desmogleina(Dsg) interacioneaz cu desmocolina(Dsc). Pe faa citoplasmic
se afl Placa dens extern (ODP) i Placa dens intern (IDP), strbtute de moleculele de
desmoplachin. La nivelul ODP, domeniul citoplasmic al celor 2 caderine desmosomale
interacioneaz cu desmoplachina (Dp) prin intermediul plakoglobinei (Pg) i plakofilinei (Pkp). La
nivelul IDP, desmoplachina interacioneaz cu filamentele intermediare ale celulei.(imagine
prelucrat din http://www.uchsc.edu)

3.3.1.4. Hemidesmozomii sunt structuri de ancorare a filamentelor de cheratin din celulele


epiteliale de membrana plasmatic i de lamina bazal a epiteliului prin intermediul unor
glicoproteine transmembranare. HD conin 2 plci asemntoare unor nituri (placa intern i
45

placa extern), mpreun cu fibrile de ancorare i filamente de ancorare care alctuiesc


mpreun complexul HD de adeziune stabil sau complexul filamentos HD de ancorare.

Figura 26. Structura unui complex HD de ancorare: filamentele de keratin sunt strns asociate plcii
interne a hemidesmosomului care este paralel cu placa extern de pe membrana celular. Sub
placa extern, filamente de ancorare traverseaz lamina lucida spre lamina densa.(imagine
prelucrat din www.nature.com)

Acest complex formeaz o structur continu de legtur ntre filamentele


intermediare de keratin i membrana bazal mpreun cu componente ale dermei i este
alctuit din peste 10 molecule componente. Hemidesmosomul este alctuit din keratina
citosolic legat noncovalent de o plac citosolic de plectin care interacioneaz cu
molecule de adeziune transmembranare: integrinele 64. Integrinele interacioneaz apoi cu
una dintre numeroasele proteine multiadezive cum este laminina din matricea extracelular,
n acest fel formndu-se una dintre multele adeziuni dintre celule i matrice.

Figura 27.Complexul multiproteic al hemidesmosomului. (imagine prelucrat din: www.oulu.fi)

46

3.3.2. Jonciunile de ocluzie sau ,,zonulae occludens" , mai sunt denumite jonciuni strnse
sau impermeabile (,,tight junctions") sunt prezente la nivelul polului apical al celulelor
epiteliale ce delimiteaz lumenul unor caviti. Sunt evideniate n M.E. ca puncte de contact
sau de sudur ale membranelor celulelor adiacente. Sunt formate dintr-o reea ramificat de
catene strnse, fiecare caten fiind independent. Eficiena acestor jonciuni n a preveni
difuzia ionilor crete exponenial cu numrul de catene componente. Fiecare caten este
format dintr-un ir de proteine transmembranare, care interacioneaz direct la nivelul
domeniilor extracelulare. Speciile proteice majore sunt claudina i ocludina, asociate cu
proteine membranare periferice localizate pe faa citoplasmic a membaranei plasmatice, care
ancoreaz aceste catene proteice de citoscheletul de actin, unind n acest fel citoscheletul de
actin al celulelor adiacente.

Figura
28.
Structura
cellbiology.med.unsw.edu.au)

jonciunilor

de

ocluzie.

(imagine

preluat

din:

Funciile jonciunilor de ocluzie descoperite de M.G. Farquhar i G.E. Palade n 1963


sunt: meninerea adeziunii intercelulare, meninerea polaritii celulelor prin prevenirea
difuziei laterale a proteinelor integrale de membran ntre zona apical i cea bazal sau
zonele laterale, permind meninerea funciilor specifice ale fiecrei suprafee celulare: de
47

exemplu endocitoza mediat de receptor pe suprafaa apical i exocitoza pe suprafaa


bazolateral (transportul transcelular) sau antiportul Na/ glucoz la nivelul celulelor
epiteliului intestinal. O alt funcie este de prevenire a trecerii moleculelor sau ionilor prin
spaiile intercelulare. Ionii sau moleculele trebuie s ptrund doar n celule prin difuzie sau
transport activ. Aceast funcie exercit control asupra transportului selectiv al particulelor,
fiind nepermisiv pentru unele, ca n cazul barierei hemato-encefalice, ns mecanismul de
control nu este cunoscut, poate s se datoreze unor bree aprute prin mici discontinuiti
structurale sau prin pori multipli. n funcie de permisivitatea fa de moleculele de ap i
soluii, epiteliile care conin astfel de jonciuni se clasific n epitelii impermeabile sau
permeabile.
3.3.3. Jonciunile de comunicare se mai numesc i jonciuni permeabile (,,gap jonctions").
Conecteaz direct citoplasma a dou celule i permit trecerea ionilor i moleculelor ntre
celule. O astfel de jonciune este format din 2 conexoni sau hemicanale care strbat spaiul
intercelular. Conexonii sunt formai din homo sau heterodimeri de conexin- proteina
constitutiv. La nivelul jonciunilor de comunicare, spaiul intercelular este de 4 nm i
unitile conexonilor aparinnd celor 2 celule adiacente sunt aliniate.

Figura 29. Structura jonciunilor permeabile. (imagine preluat din: https://wiki.brown.edu)

Jonciunile formate din dou hemicanale identice sunt denumite homotipice, iar cele
formate din hemicanale diferite sunt heterotipice. Hemicanalele formate din conexine
identice sunt homodimerice, cele formate din conexine diferite sunt heterodimerice.
Compoziia chimic influeneaz funciile acestor canale, care sunt:
de comunicare electric ntre celule, diferitele subuniti de conexin pot mprti
diferite conductane electrice
de comunicare chimic ntre celule, prin transportul moleculelor mici, cum sunt
mesagerii secundari (IP3, Ca2+), diferitele subuniti de conexin pot prezenta selectivitate
diferit pentru anumite molecule mici. Dei diferitele conexine determin dimensiuni diferite
48

ale porilor, cu selectivitate electric diferit, toate aceste canale permit n general trecerea
moleculelor mai mici sau egale cu 1000 Da. Nu este permis trecerea macromoleculelor:
proteine, acizi nucleici.
asigur controlul transportului moleculelor prin spaiul intercelular, confer
caracter ordonat, nltur posibilitatea ,,scurgerii" de molecule n acest apaiu.
Funciile menionate asigur cuplarea electric i metabolic a celulelor prin schimburi
electrice i chimice prin hemicanale i are implicaii n homeostazie.
Potenialul de aciune este rspndit n miocard de la celul la celul determinnd contracia
ritmic a cordului. La nivelul anumitor sinapse din creier, jonciunile de comunicare permit
transmiterea potenialului de aciune, ntr-un interval mai scurt de timp dect cel necesar
neurotransmitorilor. Defecte ale conexinelor ce compun jonciunile la nivelul esutului
nervos duc la degenerri ale substanei albe n manier caracteristic unor afeciuni cum este
boala Pelizaeus-Merzbacher i scleroza multipl. Neuronii din retin sunt cuplai prin
jonciuni permeabile care apar ntre aceleai tipuri de celule dar i ntre celule diferite.
n timpul travaliului, jonciunile permeabile dintre celulele musculaturii netede a uterului
permit contracii coordonate, puternice necesare expulziei fetale.
Funcia de transport este dublat de o funcie de adeziune a celulelor adiacente n timpul
dezvoltrii embrionare, cu implicaii n difereniere, ex.: migrarea neuronal n neocortex.
Defectele genetice ale proteinelor structurale ale jonciunilor permeabile sunt implicate n
boli ale pielii, deoarece acest tip de jonciuni sunt puternic implicate n procesele de
difereniere i proliferare ale acestor esuturi.
sunt supresori ai oncogenelor, s-a constatat exprimarea sczut sau lipsa total a
acestor proteine n celule tumorale cu pierderea controlului proliferrii. Defecte ale
conexinelor sunt implicate n cancerul mamar, renal, esofagian, etc.
Conexinele sunt exprimate n toate tipurile tisulare cu excepia unor celule mobile
cum sunt hematiile i spermatozoizii
3.3.4. O alt categorie este adeziunea mediat de selectine ,,selected lectins", proteine de
adeziune celular care leag carbohidrai. n timpul rspunsului inflamator, stimuli ca
histamina i trombina determin mobilizarea P-selectinelor din interiorul celulelor, pe
suprafaa lor. n plus, citokinele ca TNF-alpha stimuleaz exprimarea E-selectinelor i
P-selectinelor adiionale, cteva ore mai trziu. Domeniul distal ,,lectin-like" al selectinelor
leag grupuri carbohidrat prezente n molecula glicoproteinelor cum este glicoproteina
PSGL-1 din membrana leucocitelor, care favorizeaz ptrunderea acestor celule la situsul
infeciei. Neutrofilele i eozinofilele se leag de E-selectine.

49

Tabelul 2. Molecule de adeziune Ca++ independente:

1.IgSF(superfamilia imunoglobulinelor)
- Ca2+independente

2. Integrinele sunt receptori care mediaz


adeziunea dintre o celul i alte celule sau
matricea extracelular aparinnd esuturilor
din jurul ei. Au rol important n semnalizarea
celular i definesc forma celulelor,
mobilitatea, regleaz ciclul celular
2+
Ca independente

50

N-CAM ,,Neural Cell Adhesion Molecule"


sau proteina zero a mielinei
ICAM1,5 ,,Intercellular adhesion molecules"

VCAM-1
,,Vascular
cell
adhesion
molecules"
PE-CAM molecule de adeziune plachetare/
endoteliale
L1-CAM molecule de adeziune din neuroni,
intervin n diferenierea i dezv. SN
CD2 de pe suprafaa LT sau NK intervin n
interaciunea cu alte molecule de adeziune
(LFA3/CD58) de pe suprafaa Mf
SIGLEC ,,sialic acid binding Ig-like lectins"
de pe suprafaa Mf., LB
Familia CTX ex.: JAM ,,junctional adhesion
molecule B" n jonciunile impermeabile ale
cel. endoteliale
ESAM ,,endothelial cell selective adhesion
molecules"
Integrina -2( CD18) este subunitatea a 3
structuri:
1.LFA-1 ,,Lymphocyte function-associated
antigen"-molecule de adeziune ale LT , LB ,
Mf, neutrofilelor la cel. prezentatoare de Ag,
are loc recrutarea lor la situsul infeciei.
2.Integrina alphaXbeta2- receptor de
complement.
3.Antigenul 1 al macrofagelor- receptor de
pe suprafaa Mf care recunosc componenta
C3b a complementului legat de suprafaa cel.
strine, declaneaz fagocitarea acestor cel.
VLA1-6 molecule de adeziune celul-celul
i de integrare a EMC cu citoscheletul
Glicoproteina IIb/IIIa sunt receptori pentru
fibrinogen ai plachetelor, intervin n activarea
plachetar

Tabelul 3. Molecule de adeziune dependente de Ca++ :

1. Caderinele sunt o clas major de proteine


de membran cu rol proeminent n adeziunea
celular,reglarea organizrii tisulare i
morfogenez. Mediaz adeziunea monotipic
celul-celul dar i adeziunea heterotipic
ntre diferite tipuri de caderine este posibil.
Acioneaz att ca receptor ct i ca ligand.
Sunt responsabile pentru adeziunea selectiv
celul-celul care este necesar pentru a
repartiza diferitele tipuri celulare n poziia
corect n timpul dezvoltrii. Caderinele tind
s se concentreze pe suprafaa celular la
nivelul jonciunilor celul-celul, fiind
structural asociate filamentelor de actin.
Domeniul citoplasmic este asociat cu proteine
citoplasmice denumite catenine. Deleia
domeniului citoplasmic distruge aceste
interaciuni i funcia caderinelor. Funcia
caderinelor ca receptori membranari este de a
recepiona semnale externe i de a le traduce
n semnale interne prin activarea GTPazelor i
cii beta-catenin/Wnt rezultnd o reorganizare
dinamic a citoscheletului i schimbri
fenotipice.

Desmogleina (DSG1, DSG2, DSG3, DSG4) au


rol n formarea desmosomilor
Desmocolina (DSC1, DSC2, DSC3)
T-caderina
Protocaderina
CDH1 E-caderina (epitelial)
CDH2 N-caderina (neural)
CDH3 P-caderina (din placent)
CDH4 R-caderina (din retin)
CDH5 VE-caderina (vascular endotelial)
CDH6 K-caderina (renal)
CDH8 CDH9(T1) CDH10(T2)
CDH11 OB-Caderina (osteoblastic) CDH12
CDH13 T-caderin - H-caderinA (inima)
CDH15 - M-caderina (miotubuli)
CDH16 - KSP-caderina
CDH17 - LI caderina (ficat-intestin)
CDH18 - caderina 18, tip 2
CDH19 - caderina 19, tip 2
CDH20 - caderina 20, tip 2
CDH23 - caderina 23 (epitelii neurosenzoriale)

2. Selectinele sunt o familie de molecule de E-selectina (endotelial)


adeziune heterofile care leag carbohidrai L-selectina (leucocitar)
fucozilai, de exemplu mucine. Cel mai bine P-selectina (plachetar)
reprezentat ligand pentru cele trei selectine
este P-selectin glicoprotein ligand-1(PSGL-1),
care este o glicoprotein tip mucin exprimat
n toate celulele albe ale sngelui.

51

3.3.5. Matricea extracelular


Matricea extracelular este produs de celule i secretat n mediul interstiial din
jurul celulelor. Este un amestec complex de carbohidrai i proteine, dar i minerale n esutul
osos. Arhitectura, elementele structurale i rolul ECM difer n funcie de tipul tisular.
Complexitatea structural a ECM este dat nu numai de componentele sale ci i de
organizarea diferit n esuturile organismului, spre exemplu, la interfaa dintre esutul
epitelial sau endotelial i esutul conjunctiv subadiacent, se afl o structur specializat a
matricei extranucleare denumit lamina bazal, care la rndul ei poate avea un aspect diferit
n funcie de esut: poate nconjura celule individuale sau se poate afla ntre straturi
unicelulare (n alveolele pulmonare i glomerulii renali). n esutul conjunctiv, matricea este
bine reprezentat, avnd rolul de a conferi rezisten mecanic, dar i elasticitate acestor
esuturi. ECM este o structur dinamic cu funcie complex n susinerea i ancorarea
celulelor, regleaz comunicarea celulelor cu mediul i cu alte celule, fiind un filtru structural
implicat n dezvoltarea, migrarea, proliferarea, forma i metabolismul celular. Este depozitul
unor factori de cretere celular, eliberai n momentul aciunii proteazelor asupra ECM, ceea
ce determin activarea rapid a funciilor celulare mediate de aceti factori de cretere.
Invazia tumoral, metastazarea implic distrugerea ECM de ctre proteaze sintetizate de
celulele tumorale.
3.3.5.1.Componentele matricii extracelulare sunt sintetizate de celulele aflate n
ECM care aparin clasei fibroblastelor i sunt exportate prin exocitoz. Matricea extracelular
este format din proteine fibrilare dispuse ntr-o reea, care confer rezisten mecanic
matricei, imersat n gelul polizaharidic al glicozaminoglicanilor (GAG), a doua component
structural a matricei, care permite difuzia moleculelor i ionilor. GAG sunt lanuri
poliglucidice liniare formate prin polimerizarea unor uniti diglucidice alctuite de obicei
dintr-un aminoglucid (N-acetilglucozamina) i acid uronic. Datorit gruprilor sulfat i
gruprii carboxil a acidului uronic, GAG sunt molecule ncrcate electronegativ, care leag
cationi osmotic activi, ceea ce are ca efect atragerea apei n ECM, meninnd matricea i
celulele rezidente n stare hidratat, cu efect de rezisten fa de forele de compresie ce se
exercit asupra matricii. Glicozaminoglicanii sunt ataai de proteine ale ECM cu formare de
proteoglicani, cu excepia acidului hialuronic.
3.3.5.1.1. Glicozaminoglicanii
n funcie de tipul de resturile monoglucidice ce alctuiesc unitile dizaharidice ale
GAG i n funcie de compoziia n grupri sulfat, se disting urmtoarele clase de
glicozaminoglicani:
Heparan sulfatul este caracteristic tuturor tipurilor de esuturi, formeaz
proteoglicani n care dou sau trei lanuri poliglucidice de heparansulfat se leag de proteine
de suprafa celular sau din matricea extracelular, n special din membrana bazal
(perlecanul, agrina, colagenul XVIII sunt proteoglicani care conin heparansulfat). Intervin n
reglarea unor procese de cretere celular, n angiogenez, coagulare, i metastazare
tumoral.
Condroitin sulfatul intervine n rezistena la tensiunile aplicate asupra cartilajelor,
tendoanelor, ligamentelor i pereilor aortici i n neuroplasticitate (capacitatea de formare, de
desfacere i refacere a conexiunilor interneuronale n cursul dezvoltrii i n cursul proceselor
de nvare i de adiie a noi celule neuronale, proces care include i naintarea conului de
cretere al neuroblastelor). Este larg utilizat ca supliment alimentar, n tratamentul
52

osteoartritei.
Cheratan sulfatul nu conine acid uronic, se gsete n cornee, cartilaje, esut osos i
n SNC unde are rol att n dezvoltare, ct i n procesul de cicatrizare a esutului nervos.
Principala component care intervine n cicatrizare este astrocitul reactiv. Astrocitele se
ataeaz de membrana bazal i mpreun cu moleculele componente ale membranei bazale,
din care fac parte i moleculele de perlecan ce conin cheratan sulfat, formeaz un nveli n
jurul esutului nervos afectat i n jurul vaselor de snge din zon, n acest fel debutnd
procesul de vindecare.
Acidul hialuronic este un polizaharid anionic nonproteoglicanic (nu formeaz
proteoglicani) lung, alctuit din mii de resturi de acid D-glucuronic i N-acetilglucozamin,
lipsite de grupri sulfat. Se gsete n esuturi epiteliale, conjunctive i n esutul nervos.
Component major al ECM al acestor esuturi, intervine n procesele de proliferare i migrare,
n cursul dezvoltrii embrionare, dar i n proliferarea celulelor tumorale fiind mediator al
tranziiei epiteliu-mezenchim al acestor celule, deoarece particip la interaciunea cu
numeroi receptori de suprafa celular de pe suprafaa celulelor care migreaz (CD44,
RHAMM i ICAM-1) mpiedicnd procesele de adeziune intercelular i intervenind n
activitatea kinazelor implicate n motilitatea celular, favoriznd deplasarea liber a celulelor.
Intervine n procesele de vindecare, n etapele de inflamaie, n formarea esuturilor de
granulaie, reepitelizare i remodelare, evenimente n care particip celulele i matricea
extracelular. Intervine n mecanismul inflamaiei, prin legarea de receptorul su specific
CD44, determin activarea limfocitelor, iar produii de degradare ai acidului hialuronic sunt
molecule care prin receptori specifici de tip ,,toll-like receptors" activeaz macrofagele i
celulele dendritice. Fibroblastele, n prezena unei concentraii crescute de HA, cresc sinteza
de citokine proinflamatorii TNF i Il8 prin mecanism mediat de HA-CD44. n esuturile de
granulaie, faciliteaz migrarea celular i organizarea matricii acestor esuturi. Este
component al lichidului sinovial, avnd rol n lubrifierea articulaiilor, i al esutului
cartilaginos, unde formeaz un nveli n jurul condrocitelor (agregate moleculare cu
agrecanul), cu rol de hidratare a structurii cartilajului, care imprim rezisten la compresie.

3.3.5.1.2.Proteinele fibrilare
Colagenul este cea mai abundent component a ECM, este i cea mai abundent
component proteic a corpului uman. Confer suport structural celulelor rezidente.
Colagenul este exportat prin exocitoz n ECM sub forma unui precursor procolagen care nu
se poate asambla n fibre n interiorul celulei. Procolagenul este clivat n matrice de o
proteaz, formndu-se moleculele de tropocolagen care se asambleaz n fibrile de colagen.
Tropocolagenul, unitatea structural a colagenului este o molecul proteic cu o lungime de
300nm i un diametru de 1,5nm, alctuit din trei lanuri polipeptidice de tip helix , cu
orientare spre stnga, nfurate unul n jurul celuilalt, formnd o structur triplu helix cu
orientare spre dreapta. Fiecare rotaie complet a triplului-helix conine trei aminoacizi,
fiecare al treilea aminoacid, orientat spre interiorul helixului, este glicina. Molecula de
colagen este bogat n prolin i lizin, n general sub form hidroxilat, gruparea hidroxil a
prolinei participnd la formarea legturilor de hidrogen care stabilizeaz acest triplu-helix, iar
gruparea hidroxil a lizinei confer moleculei capacitatea de autoasamblare n matricea
extracelular. Tropocolagenul de tip I,II,III se autoasambleaz spontan, fiecare triplu-helix
particip la formarea unei structuri suprarsucite care poart denumirea de microfibrile de
53

colagen, cu un diametru de 50nm instabile ca structuri individuale, dar stabilizate n fibrele de


colagen. Moleculele de tropocolagen sunt dispuse n iruri longitudinale, ntre moleculele din
acelai ir exist o distan de 35nm, iar moleculele de tropocolagen din iruri adiacente sunt
deplasate una fa de alta cu 67nm, fiecare molecul de tropocolagen fiind n avans fa de
cea adiacent cu 67nm, pn la irul al cincilea. Urmtoarea molecul este aliniat din nou cu
cea din primul ir. Se creeaz astfel zone de suprapunere (,,overlap") alctuite din cinci
molecule de tropocolagen aparinnd la cinci iruri adiacente, defazate cu cte 67 nm una fa
de alta i zone ,,gap" alctuite din cte patru molecule adiacente. Aceast structur confer
maximum de elasticitate. Regiunile amino- i carboxiterminale ale colagenului nu au
conformaie de triplu-helix, resturile de lizin i hidroxilizin din capetele moleculei particip
la legturi covalente ntre gruparea carboxil a unei molecule i grupri amino a moleculei din
irul adiacent, cu stabilizarea structurii fibrilelor de colagen.

Figura 30. Structura fibrei de colagen: (a), (b), (c)- triplul helix de tropocolagen cu resturile de
glicin orientate spre interior; (d), (e)- zonele de ,,overlap i ,,gap; (f)- fibre de colagen n ME

Fibrilele sunt agregate semicristaline de colagen, dispuse diferit n diverse esuturi,


mnunchiurile de fibrile formnd fibrele de colagen. n funcie de structura pe care o
formeaz, colagenul poate fi mprit n urmtoarele familii: fibrilar (tipurile I,II,III,V,XI),
facit (tipurile IX,XII,XIV), lanuri scurte (tipurile VIII,X), din membrana bazal (tip IV),
altele (tipurile VI,VII, XIII).
Peste 90% din colagenul organismului este reprezentat de tipurile I,II,III i IV. Fibrele
de colagen se gsesc n urmtoarele esuturi:

54

Colagen I: piele, tendoane, perei vasculari, ligamente, oase


Colagen II: cartilaj
Colagen III: asociat cu tipul 1, n esutul reticulat
Colagen IV: n membrana bazal
Colagen V: suprafee celulare, pr i placent
Elastina spre deosebire de colagen, d elasticitate esuturilor, se gsete n vasele
sangvine, plmni, piele. Elastinele sunt sintetizate de fibroblaste i celulele musculaturii
netede ale pereilor arteriali. Sunt molecule insolubile, secretate n interiorul unei chaperone,
care elibereaz precursorul n contact cu o fibr de elastin, dup care urmeaz o deaminare
pentru ca tropoelastina s fie ncorporat n fibra de elastin. Fibrele de elastin sunt formate
din microfibrile, alctuite la rndul lor din molecule de elastin, elaunin, oxitalan dar i din
proteine asociate microfibrilelor: glicoproteine ca fibrilina esenial pentru formarea fibrelor
de elastin n esuturile conjunctive, fibulina care se leag n matricea extracelular nu numai
de tropoelastin, dar i de fibronectin, proteoglicani, laminine i receptorul pentru elastin.
Scheletul de microfibrile organizeaz dispunerea elastinei amorfe format din tropoelastin
solubil care devine insolubil i legat n reea prin activitatea liziloxidazei, care produce
deaminarea oxidativ a resturilor de lizin cu formare de aldehide i alizin. Aceste aldehide
i alizine reacioneaz cu resturi de lizin i alizin, cu formare de desmozine i
izodesmozine, prin legturi covalente ncruciate, care formeaz reele ce nconjoar
moleculele de elastin, intervenind n formarea reelei de fibre de elastin.
Fibronectinele sunt proteine care conecteaz fibrele de colagen cu integrinele din
membranele celulare, determinnd o reorganizare a citoscheletului celular i micarea
celulelor. Fibronectinele au rol important n meninerea formei celulelor, iar pe parcursul
embriogenezei, n migrarea i diferenierea celular. Sunt ntlnite n snge i alte fluide sub
form de dimeri solubili care favorizeaz fagocitoza, migrarea celulelor imune, aderarea
plachetar la endotelii lezate, sub form de oligomeri de fibronectin ataate de receptorul lor
din clasa integrinelor sau sub form de fibre insolubile n ECM. Molecula de fibronectin
conine o secven specific ( Arg-Gly-Asp-Ser) RGDS comun mai multor proteine de
adeziune celular, care permite recunoaterea i legarea lor de ctre integrine, care mediaz
interaciunea fibronectinelor cu citoscheletul celular actinic.
Lamininele sunt proteine situate n lamina bazal (pe faa dinspre membrana bazal a
laminei densa) care delimiteaz suprafaa bazal a celulelor epiteliale i endoteliale, pe care le
separ de esutul conjunctiv adiacent. Lamininele formeaz reele independente i sunt
asociate cu colagenul de tip IV prin entactine i cu perlecanii. Se leag de membranele
celulare prin receptori din clasa integrinelor i de alte proteine ale membranei celulare (de
exemplu de distroglican, care n miocite conecteaz lamininele cu distrofina din citoschelet,
care este n contact cu filamentele de actin) . Prin aceste interaciuni, intervine n adeziunea
celular, mediaz legarea laminei bazale de suprafaa celular, intervine n diferenierea
celular, meninerea formei celulelor, micarea celulelor, meninerea fenotipului esuturilor.

55

4. Organizarea structural a citoplasmei. Hialoplasma i citoscheletul


4.1. Hialoplasma, matricea citoplasmatic, substana fundamental a citoplasmei
sau citosolul sunt denumiri sinonime care exprim aceeai realitate biologic, definesc o
component structural-funcional prezent n toate celulele eucariote, localizat n spaiul
celular, n afara compartimentelor delimitate de membranele intracelulare.
Studiile clasice de microscopie optic au prezentat hialoplasma ca o mas omogen
optic, mai refringent dect apa, dar nestructurat, lipsit de structur specific, ceea ce
explic i denumirea dat.
Progresele microscopiei electronice au dus la evidenierea n citoplasm a mai multor
diferenieri structurale: poliribosomi, microtuburi, granule de glicogen, picturi lipidice, etc.
S-a constatat c microtubulii, microfilamentele i filamentele intermediare constituie o
structur denumit citoschelet care este o reea tridimensional ce strbate ntreaga
hialoplasm , cu implicaii funcionale complexe n viaa celulei: transportul intracelular de
particule, vezicule de transport, organite celulare; translocarea cromozomilor n timpul
diviziunii celulare; desfurarea citokinezei; motilitatea celular prin cili i flageli; locomoia
de tip ameboidal; contracia muscular; rol structural n meninerea formei celulei, stabilitii
esuturilor i poziiei organitelor n celule.

Figura 31. Reeaua tridimensional a citoscheletului (electronomicrografie preluat din Svitkina et al,
1995).

Citoscheletul este constituit din 3 elemente structurale:


microtubulii, microfilamentele i filamentele intermediare.

56

Figura 32. Componentele citoscheletului (imagine preluat din David E. Metzler


,,BiochemistryHarcourt/Academic Press, 2001)

4.2. Microtubulii se gsesc n citoplasma tuturor celulelor eucariote cu excepii rare


cum este cazul hematiilor mamiferelor. Formeaz structuri diverse, n funcie de tipul de
esut, i s-au acumulat dovezi care susin c diferitele tipuri de celule conin tipuri diferite de
tubuline alfa i beta (izotipuri codificate de gene diferite ), cum este -tubulina din banda
marginal a eritrocitelor i plachetelor sangvine mamaliene, dar este frapant uniformitatea
lor constitutiv la eucariote. Microtubulii au un diametru de 24nm, n timp ce lungimea
variaz de la fraciuni de micrometru pn la zeci de micrometri. Peretele microtubulilor este
constituit din proteine globulare, monomeri de i -tubulin, de 4-5m n diametru, cu
aceeai greutate molecular (50 000) i care sunt aranjate n 13 iruri longitudinale, numite
protofilamente, paralele cu axa microtubulului i care delimiteaz lumenul microtubular.

57

Figura 33. Protofilamentele sunt constituite din subuniti dimerice de - tubulin, dispuse
dup un model helical i care polimerizeaz ordonat definind n felul aceste polaritatea
microtubulilor (capetele microtubulilor nu sunt echivalente). Imagine preluat din vbaulin.front.ru.

Microtubulii depolimerizeaz n subuniti - stabile. Polimerizarea este favorizat de


prezena n mediu a unor fragmente microtubulare cu rol de amorse, iar adugarea dimerilor
la amors apare ca un proces preferenial datorit polaritii intrinseci a microtubulilor, cele
dou capete nefiind funcional echivalente, unul din capete, denumit capt plus se alungete
de 2-3 ori mai rapid dect captul minus. Dezasamblarea are loc de asemenea mai rapid la
captul plus. n cili, flageli i n axoni capetele cele mai ndeprtate de centrul celular sunt
ntotdeauna capetele plus. Asamblarea tubulinei n microtubuli este nsoit de o hidroliz
ntrziat a unei molecule de GTP ataat tubulinei. Energia furnizat de aceast hidroliz nu
este necesar polimerizrii, hidroliza GTP are loc dup ce subunitatea a fost ataat
microtubulului. Moleculele de tubulin ataate GTP polimerizeaz cu o afinitate mult mai
mare, iar viteza polimerizrii este mai mare dect viteza cu care are loc hidroliza: se formeaz
la captul plus un cap de tubulin-GTP care favorizeaz polimerizarea. Un microtubul care
i-a pierdut capul GTP ca urmare a unei rate prea mici de polimerizare, va ncepe s piard
uniti, s depolimerizeze. Subunitile tubulin-GDP au afinitate mai mic i vor
depolimeriza mai uor. Toate aceste caracteristici sunt cunoscute sub denumirea de labilitate
sau instabilitate dinamic a microtubulilor. Capetele minus sunt legate de centri de
organizare microtubular care controleaz polimerizarea-depolimerizarea la acest nivel.
Capetele plus libere pot trece rapid de la o polimerizare lent la polimerizare rapid sau la
depolimerizare rapid. n anumite condiii de concentraie ionic exist o anumit
concentraie de tubulin liber, denumit concentraie critic, care determin apariia strii
staionare, adugarea de dimeri la anumii microtubuli este nsoit de pierderea unei
cantiti echivalente de la nivelul altor microtubuli. Peste aceast concentraie microtubulii
tind s creasc, sub ea, s descreasc. Din cauza instabilitii dinamice, un microtubul nou
format va persista numai dac ambele capete sunt protejate fa de depolimerizare. Capetele
minus sunt protejate de centrii de organizare microtubular, iar capetele plus sunt capturate
58

prin intermediul unor proteine ce alctuiesc structuri de acoperire sintetizate n cursul unor
evenimente celulare distincte, care controleaz n acest fel stabilitatea i localizarea
microtubulilor n celul. Att polaritatea celular ct i planul diviziunii celulare sunt
stabilite n acest fel. Un rol important l au proteinele asociate microtubulilor MAP cu rolul
de protejare al microtubulilor fa de dezasamblare i de a media interaciunea lor cu alte
componente celulare. Au fost izolate dou MAP n esutul nervos:
Tipul I (proteinele HMW ,,high molecular proteins) cum sunt MAP1A i MAP1B
care interconecteaz microtubulii adiaceni ai axonilor, leag microtubulii de filamentele
intermediare sau de membrana celular, controlnd aranjarea lor spaial.
Tipul II (MAP 2, 4 sau proteinele tau) care conecteaz microtubulii cu filamentele
intermediare, cu membrana plasmatic sau cu ali microtubuli. Au rol n stabilizarea
microtubulilor n timpul ntregului ciclu celular. Proteinele tau organizeaz microtubulii n
mnunchiuri, iar MAP 4 sunt importante n timpul diviziunii celulare.
4.2.1.Funciile microtubulilor sunt:
4.2.1.1. Micarea organitelor i transportul axonal. Prin microscopie optic de contrast de
faz s-a demonstrat c citoplasma celulelor vii este n micare continu, n timp de cteva
minute organitele i schimb poziia n citosol, executnd micri direcionate ce nu pot fi
confundate cu micarea brownian. Microscopul electronic a demonstrat c membranele
organitelor sunt conectate la microtubuli i c microtubulii au, alturi de microfilamentele de
actin un rol important n micrile pe care le efectueaz organitele celulare. Un exemplu de
micri rapide de-a lungul microtubulilor este transportul granulelor de pigment n celulele
melanofore.
Transportul axonal are loc de la corpul celular spre sinapsele axonice denumit
anterograd (transport de proteine i alte molecule sintetizate la nivelul corpului celular) i n
direcie opus, retrograd (veziculele conin membrane mbtrnite i proteine destinate
degradrii n lizosomii corpului celular). Mecanismul transportului axonal este explicat prin
existena unei proteine cu activitate ATP-azic, denumit kinesina, care are n structur
2 lanuri grele- situsuri de legare pentru ATP i pentru microtubuli i 2 lanuri uoare
situsuri pentru structurile delimitate de membrane(vezicule). n prezena ATP, kinesina se
mic de-a lungul microtubulului de la captul minus spre captul plus, realiznd transportul
anterograd. Explicaia const n modificrile conformaionale, alosterice ale acestor
proteine motor, cauzate de cicluri succesive de fosforilare defosforilare: legarea ATP de
protein, nsoit de trecerea de la o conformaie (1) la alta (2) a proteinei, hidroliza ATP-ului
legat cu eliberare de ADP i Pi , iar eliberarea ADP i Pi determin rentoarcerea proteinei la
conformaia sa iniial(1), procesul fiind ireversibil, ceea ce duce la transport unidirecional.
O alt protein asociat microtubulilor, denumit MAP1C sau dineina citoplasmic (cu
structur i funcie asemntoare dineinei flagelare) este responsabil de transportul in
direcia capetelor minus, deci retrograd.

59

Figura 34. Dineina i kinesina citoplasmic. (Imagine preluat din http://www.cytochemistry.net/cellbiology/microtubule_intro.htm)

4.2.1.2. Micarea flagelar(ciliar). Cilii i flagelii celulelor eucariote au o remarcabil


uniformitate structural-funcional; se deosebesc prin lungime i prin tipul btii: cilii execut
micare de ndoire urmat de micare de revenire, iar micarea flagelar const n unde de
diferite amplitudini, care sunt generate fie de la baz spre partea terminal, fie invers, spre
punctul de inserie, direcia de propagare a undelor determinnd micarea celulei n sens
invers direciei de propagare.
Flagelul este alctuit din corpul bazal i axonem. n axonem exist 2 microtubuli
centrali, individuali, C1 i C2, conectai printr-o punte i nconjurai de o teac fiboas care
pare s regleze forma btii flagelare sau ciliare i 9 perechi de microtubuli, denumite
dublete. Fiecare dublet este alctuit din subfibrele A (microtubul complet format din
13 protofilamente) i B (10-11 protofilamente). Ataarea subfibrelor A i B este realizat de
filamente proteice longitudinale de tectin. Fiecare subfibr A este conectat la cei doi
microtubuli centrali prin spie radiale, terminate prin capul spiei, cu o periodicitate de
32 nm (la fiecare al patrulea dimer de alfa-beta tubulin) de-a lungul protofilamentului.
Mobilitatea cililor i flagelilor este generat de braele externe i interne de dinein, care sunt
ataate de subfibrele A la intervale regulate i sunt orientate n aceeai direcie, n sensul de
rotaie al acelor ceasornicului. Axonema este consolidat printr-un set de leagturi de nexin
ntre dubletele adiacente, foarte elastice .

60

Figura 35. Seciune transversal prin axonema flagelar. (Imagine preluat din www.uic.edu)

n axonemele izolate, adugarea de ATP face ca fiecare dublet s alunece fa de unul


adiacent, n acord cu modelul de pire al dineinei, braele de dinein de pe subfibra A a
unui dublet determin naintarea subfibrei B de pe dubletul adiacent spre vrful axonemei.
Fora de producere a alunecrii dubletelor adiacente este determinat de formarea i ruperea
succesiv a punilor ntre braele de dinein ale unui dublet i subfibra B a dubletului
adiacent, cele dou dublete micndu-se unul fa de altul. Formarea unor astfel de puni este
ATP-dependent.
Structura i micarea dineinei flagelare de-a lungul microtubulului adiacent B sunt
similare cu cele ale dineinei citoplasmice implicate n translocarea organitelor: ambele pesc
spre captul minus al microtubulului adiacent. ntr-un flagel sau cil , toate dubletele externe
sunt constrnse prin legturile de nexin sau prin spiele radiale, de aceea, fora de alunecare
a dubletelor externe este convertit ntr-o btaie a axonemei. Btaia sub form de unde a
flagelului, are loc ntr-un anumit plan, o explicaie posibil este aceea c dou dublete
adiacente, notate convenional cu numerele 5 i 6 au legturi permanente rigide ntre ele.
Deoarece aceste dublete nu pot aluneca unul fa de cellalt, orice btaie a flagelului are loc
n acest plan.
4.2.1.3. Fusul mitotic din diviziunea celular.
Aparatul mitotic al oricrei celule este constituit din microtubuli, cinetocori i polii
fusului. n celulele animale, n centrul fiecrui pol mitotic se gsesc centrioli, care au funcia
de centru de organizare microtubular. S-ar prea c n structura centriolilor se gsete o
variant molecular de tubulin denumit gamma-tubulin, capabil s iniieze asamblarea
microtubular. Microtubulii fusului mitotic sunt de trei tipuri, grupai n fascicule denumite
fibre: microtubulii astrali radiaz din polii mitotici n citoplasma periferic. Microtubulii
polari sau interzonali se extind din poli spre ecuatorul fusului, unde are loc interdigitarea
microtubulilor provenii de la un pol cu cei provenii de la cellalt pol. Microtubulii
cinetocorici sunt ataai la nivelul cinetocorilor din zona centromeric a cromozomilor.Fusul
61

mitotic poate fi considerat ca fiind format din dou jumti numite semifusuri n care
microtubulii au o polariate bine definit: capetele minus sunt orientate spre poli, iar capetele
plus sunt orientate spre cromozomi.Microtubulii cinetocorici sunt mai stabili dect cei astrali
deoarece capetele lor plus sunt capturate i stabilizate la nivelul cinetocorilor, iar microtubulii
polari sunt i ei stabili datorit interaciunilor dintre capetele lor plus la nivelul
interdigitaiilor ecuatoriale. Numrul microtubulilor ataai de cinetocor este varibil, la om
cinetocorii au ataai 20-40 de microtubuli, n timp ce la microorganisme exist cte unul.,
care este suficient pentru a realiza micarea cromozomului.

Figura 36. Fusul mitotic alctuit din micotubuli astrali, cinetocorici i polari.

n timpul prometafazei, cromozomii sunt dispui ntmpltor ntre cei doi poli, aa
cum au rezultat n urma condensrii cromatinei i ruperii nveliului nuclear. Capetele plus
ale microtubulilor sunt captate treptat, ntmpltor i din direcii diferite, astfel nct
cromozomii execut micri de rotaie i de oscilaie ntre cei doi poli. Asocierea dintre
microtubuli i cinetocori este ntmpltoare i st la baza segregrii ntmpltoare a
cromatidelor n celulele-fiice. Deplasarea cromozomilor spre planul ecuatorial al celulei este
determinat de polimerizarea fibrelor cinetocorice. Aceste fibre au captul minus inserat n
centrozom i captul plus legat de cinetocor i stabilizat prin proteine asociate.
Experienele au evideniat faptul c cinetocorii pot transloca rapid microtubuli n
direcia capetelor minus i mai ncet spre capetele plus. Procesele de translocare sunt
dependente de starea de fosforilare a structurilor cinetocorilor, pentru c sunt dependente de
prezena proteinelor-motor, capabile de activitate ATP-azic. Cea mai cunoscut dintre aceste
proteine-motor este cea responsabil de micarea cinetocorului spre captul minus,
identificat ca o molecul de dinein, localizat att la nivelul cinetocorilor, ct i a coroanei
fibroase a cinetocorului. ns micarea direcionat spre captul plus care s-a ncercat s se
pun pe seama kinezinei, nu a putut fi demonstrat experimental, rezultatele fiind
contradictorii .
n anafaza A , ndeprtarea cromatidelorsurori devenite libere spre polii fusului de
62

diviziune, implic scurtarea microtubulilor cinetocorici, prin depolimerizare la nivelul


cinetocorului i nu la nivelul polului, pe msur ce cromozomii unicromatidici se mic spre
poli. Simultan, are loc anafaza B, care const n separarea celor doi poli ai fusului, prin
elongarea microtubulilor polari i ndeprtarea polilor. Pentru micarea cromozomilor nu este
necesar nici o surs de energie cum este ATP. n schimb, pentru elongarea microtubulilor
polari este nevoie de ATP, datorit interaciunii microtubulilor din zona de suprapunere, care
scade n lungime pe msur ce fusul se alungete, deci are loc polimerizare la captul plus,
dar i alunecarea microtubulilor unul fa de altul.

4.3.Microfilamentele sunt alctuite dintr-o singur protein globular major


denumit actina, care este proteina citosolic cea mai abundent n unele celule, responsabil
pentru meninerea i modificarea formei celulelor i pentru generarea forei de micare
celular. Microfilamentele de actin se asociaz n ndeplinirea funciilor celulare cu
numeroase alte proteine, formnd structuri specifice, cu funcii particulare. Cea mai
cunoscut este miozina, ea nsi structurat sub form de filamente. Microfilamentele de
actin cunoscute sub denumirea de actin F sunt polimeri ai unor subuniti proteice
globulare, actina G. Att n celulele musculare, ct i n cele nemusculare, microfilamentele
de actin constau ntr-un irag de monomeri identici, n form de halter, cu axa aproape
perpendicular pe axa microfilamentului, ceea ce determin forma de helix a
microfilamentului. Polimerizarea are loc dup modelul cap-coad, prin adugarea de
subuniti globulare legate de ATP, care este complexat cu Mg++, sau de ADP, rezultnd o
macromolecul helical, polar. Monomerii de actin legai de ATP polimerizeaz mult mai
rapid dect cei legai de ADP. Viteza de elongare este mult mai mare la capetele notate plus
fa de cele minus. Captul notat (-) este captul filamentului de actin care prezint actin G
cu situsul de legare al ATP expus mediului apos intracelular, iar captul opus al
microfilamentului este captul (+).

Figura 37. Structura tridimensional a actinei F i actinei G; n monomerul de actin G este


marcat cu rou molecula de ATP fixat pe situs. (imagine preluat din www.spring8.or.jp)

63

Actinele celulelor musculare i nemusculare sunt exprimate de gene diferite (la om


sunt 6 gene care codific izoforme ale actinei), au mici diferene structurale care sunt ns
responsabile de diferenele funcionale semnificative.
Viteza de disociere a microfilamentelor este mult mai redus dect a microtubulilor,
sunt structuri mult mai stabile intrinsec, stabilitatea datorndu-se i proteinelor asociate care
organizeaz filamentele de actin sub form de reele i teancuri. Proteinele asociate
filementelor de actin aparin superfamiliei de proteine cu domeniu omolog calponinei, mai
precis dein dou situsuri de legare a actinei a cror secven este omoloag unei secvene din
calponin. Organizarea situsurilor de legare a actininei n molecula acestor proteine este
determinant pentru organizarea filamentelor de actin n mnunchiuri sau reele: fimbrina i
-actinina determin mpachetare strns i aliniere sub forma de teancuri n formaiuni de
adeziune celular i expansiuni celulare, iar filamina formeaz reele de actin n celule sau
expansiuni celulare.

Figura 38. Organizarea filamentelor de actin conectate prin fimbrin (marcat cu rou ) sub form
de teancuri- imaginea din stnga (dup autor: D.Hanein) i sub form de reea, n care proteina
asociat este filamina, o protein lung, cu situsuri de legare ale actinei situate la distan n lanul
polipeptidic, ceea ce determin flexibilitatea ancorrii i formarea reelei-imaginea din dreapta
(dup autor: J.Hartwig). Imagini preluate din Lodish et al. ,,Molecular Cell Biology fifth ed.)

Anumite proteine asociate favorizeaz polimerizarea filamentelor de actin cum este


profilina, care leag monomerii de actin n raport 1:1 i intervine i n interaciuni ale
actinelor cu membrana celular (rol n semnalizarea intercelular). Proteinele Asp2/3 leag
filamente de actin i determin adiia de noi monomeri actin: profilin ntr-o manier care
determin apariia unei ramificaii, a unui nou filament de actin, Asp2/3 fiind localizat la
punctele de ramificaie ale unei reele de actin. Alte proteine asociate ,,acoper captul (+) proteina cap Z sau captul (-) -tropomodulina, mpiedicnd adiia sau ndeprtarea
subunitilor de actin G, cu stabilizarea filamentelor de actin. Depolimerizarea actinei F
este intensificat de cofilin care determin disocierea la capetele (-), gelsolina i severina rup
filamente de actin i rmn legate la captul (+) al fragmentelor rezultate, mpiedicnd adiia
de monomeri, furniznd n schimb numeroase capete (-) ale fragmentelor, care accelereaz
dezintegrarea citoscheletului actinic. Activitatea proteinelor asociate este reglat prin
64

modificarea concentraiei unor molecule semnal (PIP2) sau a ionilor de calciu n cursul
activrii unor ci de semnalizare celular. Migrarea celular prin modificarea citoscheletului
actinic este rezultatul unor semnale extracelulare.
Miozina din celulele musculare este miozina II alctuit dintr-o regiune globular prin
care se asociaz cu actina i un segment fibros. O astfel de molecul este constituit din 2
lanuri polipeptidice grele, identice, i dou perechi de lanuri uoare. Fiecare lan greu const
dintr-un cap N-terminal globular i o coad -helix sub forma unei baghete, aceasta
coninnd i captul C-terminal. Cozile -helix se rsucesc una n jurul celeilalte formnd o
coad rigid, cu dou articulaii, una ntre cap i coad i una la nivelul cozii. n celulele
musculare, 300-400 de dimeri miozinici se asociaz pentru a forma un agregat bipolar
denumit filament gros de miozin. Miozina are activitate ATP-azic, care este de 200 de ori
mai mare n prezena microfilamentelor de actin.

Figura 39. Structura miozinei i interaciunea filamentelor de miozin cu actina.

n muchiul striat, miofibrilele sunt organizate n benzi ntunecate, benzi A


(anizotrope) i benzi luminoase sau benzi I (izotrope), perpendiculare pe axa lung a celulei.
O miofibril este constituit din uniti repetate denumite sarcomere. Un sarcomer este
format dint-o band ntunecat i dou jumti de benzi luminoase. O band luminoas
ntreag este divizat n dou jumti de linia sau stria Z, iar banda ntunecat este traversat
de o zon mai luminoas denumit banda H. Un sarcomer este deci delimitat de dou linii Z.
Microscopia electronic arat c n alctuirea unui sarcomer intr dou tipuri de filamente:
groase i subiri. Filamentele groase sunt alctuite din miozin, iar filamentele subiri sunt
alctuite majoritar din actin. Capetele plus ale filamentelor sunt ancorate de discul rigid Z,
iar capetele minus sunt orientate spre centrul sarcomerului. Benzile H sunt regiuni unde, cnd
muchiul este relaxat, filamentele fine de actin nu se ntreptrund cu filamentele de miozin.
65

n zona de suprapunere, fiecare filament gros de miozin este nconjurat de 6 filamente


subiri de actin.

Figura 40. Structura unui sarcomer. Interaciunea filamentelor groase de miozin cu filamentele
subiri de actin n banda A. Imagine preluat din http://respiratory-research.com.

Filamentele de actin sunt ancorate prin capetele (+) la discurile Z, interaciunea fiind
stabilizat prin proteine asociate. Astfel, -actinina este concentrat n regiunea discurilor Z
i interconecteaz filamentele de actin. Filamentele de miozin sunt meninute ntr-un
aranjament hexagonal regulat prin proteine asociate. Exist n miocite proteine cu molecule
extrem de mari, titina i nebulina, care formeaz o reea de fibre proteice asociate
filamentelor de actin i miozin. Moleculele titinei se extind de la discurile Z la filamentele
groase de miozin, stabiliznd poziia central a miozinelor, fiecare filament de miozin fiind
nconjurat de filamentele de actin n zona de suprapunere. Moleculele de nebulin sunt
asociate filamentelor de actin i se extind de la un capt al filamentelor de actin la cellalt
capt. Miofibrilele sunt interconectate prin reea de filamente intermediare denumite desmin
i ancorate la membrana celular prin proteine flexibile, cum este proteina care leag actina,
denumit distrofin.
4.3.1. Mecanismul molecular al contraciei musculare. Contracia muscular presupune
scurtarea muchiului i a elementelor contractile prin alunecarea filamentelor de actin peste
filamentele de miozin. Limea benzii A rmne constant n timp ce discurile Z se apropie
cnd muchiul se contract. Deci, banda I devine mai ngust.
Contracia muscular este rezultatul interaciunii dintre capetele de miozin i
66

filamentele adiacente de actin: ntr-o prim etap (A) miozina leag ATP, n prezena ionilor
de calciu, cu slbirea legturii dintre miozin i actin i punerea n libertate a capului
miozinei. n etapa a doua (B), are loc hidroliza ATP la ADP i Pi, care rmn legai de
miozin, ceea ce determin o modificare mic a energiei libere, n schimb este generat o
stare energizat a miozinei, al crui cap se rotete prin regiunea de articulaie, devenind
perpendicular pe filamentul de actin. n etapa a treia (C), capul miozinei, n prezena ionilor
de calciu, elibereaz Pi i se leag de filamentul adiacent de actin. n etapa a patra (D), capul
miozinei pivoteaz la nivelul articulaiei, micnd filamentul de actin fa de miozin, ceea
ce are ca efect contracia. n timpul acestei etape, unghiul de ataare al capului miozinei se
schimb de la 90 la 45 , iar ADP este eliberat. Eliberrile de ADP i Pi sunt etape puternic
exergonice care poteneaz pivotarea capului miozinic. Cu fiecare ciclu care decurge cu
hidroliza unei molecule ce ATP per cap de miozin, filamentul de actin este micat pe o
distan de aproximativ 7 nm, are loc o pire a capetelor de miozin n aceeai direcie,
spre captul plus al filamentelor de actin.

Figura 41. Ciclul de interaciune miozin-actin. Imagine preluat din http://www.bms.ed.ac.uk.

Fiecare filament gros are aproximativ 500 capete de miozin, iar ciclul descris mai sus
se repet de 5 ori /sec. n contracia rapid pentru fiecare cap, rezultnd o vitez de alunecare
de 15 m/sec. a filamentelor de actin pe filamentul gros de miozin. Legarea de actin a
complexului miozin ATP este declanat de creterea concentraiei citosolice a Ca++ de la
10-7 la 10-6 moli, prin activarea canalelor pentru calciu din membrana cisternelor reticulului
sarcoplasmic ce nconjoar benzile A, sub efectul depolarizrii membranelor tubulilor
transversali T, invaginri delicate ale membranei plasmatice. Medierea efectelor Ca++ asupra
filamentelor de actin este realizat de tropomiozin, care polimerizeaz tot dup modelul
cap-coad i are situsuri de legare de actin, astfel nct formeaz filamente ce se dispun n
anurile helixului actinei. Tropomiozina are i situsuri specifice de legare a troponinei T,
care la rndul ei leag troponinele I (inhibitorie) i C (leag Ca2+) la tropomiozin. Troponina
I legat la tropomiozin determin o modificare conformaional a actinei, care se poate lega
de capetele de miozin, dar nu le poate activa regiunea ATP-azic. Troponina C, are structur
67

i funcie asemntoare calmodulinei, cu situsuri de legare a calciului ionic. Legarea calciului


are ca efect ndeprtarea TnI i TnC de tropomiozin. Tropomiozina eliberat i modific
poziia pe filamentul de actin, expunnd monomerii de actin interaciunii cu capetele de
miozin, ntr-o manier n care funcia ATP-azic este activat.
4.3.2. Particulariti de reglare a contraciei n celulele musculare netede. Filamentele
contractile ale muchiului neted nu au o organizare sarcomeric, nu au sistem dezvoltat al
RS, nici sistem de tubuli ai sarcolemei. Ca urmare, schimbarea concentraiei Ca++ n citosol
este lent, rspunsul este lent i tensiunea contractil este staionar. Celula muscular neted
este lipsit de troponine. n consecin, reglarea prin calciu a contraciei musculare este
diferit, prin calmodulin. n celula muscular neted, miozina LC inhib activitatea ATPazic a miozinei. Prin fosforilarea miozinei LC, sub aciunea miozin LC- kinazei, enzim
calmodulin-Ca++ dependent i cAMP, DAG- dependent, miozina LC devine inactiv i
contracia poate avea loc. Fosforilarea acestor lanuri uoare de miozin (miozina LC)
permite i polimerizarea miozinei n filamente groase. O protein denumit caldesmon, este
legat n prezena ionilor de calciu de tropomiozin de-a lungul filamentelor de actin i
mpiedic interaciunea actinei cu miozina. Creterea nivelului calciului citosolic i formarea
complexului Ca++-calmodulina are ca efect legarea de acest complex a calmodulinei,
desprinderea ei de pe tropomiozin i astfel are loc interaciunea miozinei cu actina.
4.3.3.Actina i miozina n celulele nemusculare. Filamentele de actin din celulele
nemusculare au un pronunat caracter tranzitoriu, formarea reelei de microfilamente este
reglat de factori proteici i de concentraia ionilor de calciu prin dou proteine identice ca
structur i funcie : vilina i gelsolina. La o concentraie mare a ionilor de calciu, proteinele
rup filamentele de actin i rmn ataate capetelor plus, mpiedicnd reasamblarea
filamentelor. La concentraii mici ale ionilor de calciu, vilina accelereaz procesul de
polimerizare al actinei. Profilina se leag de monomerii de actin formnd un complex
profilin-actin, care favorizeaz alungirea filamentului de actin la captul plus. n aceste
celule, actina interacioneaz cu capetele de miozin la fel ca n celulele musculare, dei
miozina este prezent n cantiti mici. Capetele plus ale microfilamentelor de actin sunt
ancorate de membrana plasmatic, deci exist posibilitatea ca n urma atarii miozinei s se
genereze tensiuni contractile. Activarea funciei ATP-azice a miozinei, se realizeaz prin
complexul Ca++- calmodulin, ceea ce explic lipsa troponinelor din aceste celule, dei s-a
pus n eviden prezena tropomiozinei.
Exemple:
a. Microvilii sunt expansiuni ale celulelor epiteliale ce delimiteaz lumenul
intestinului subire i al tubului contort proximal n rinichi. Sunt formaiuni necontractile,
alctuite din regiunea central i reeaua terminal. Regiunea central este reprezentat de un
mnunchi de filamente de actin dispuse paralel, cu capetele plus ndreptate spre vrful
microvilului, cu rol structural, de meninere a formei microvilului. Din regiunea central
lipsesc miozina, tropomiozina i alfa-actinina. Au fost izolate fimbrina i vilina care
stabilizeaz filamentele n mnunchiuri i proteina 110, similar miozinei I, care are activitate
ATP-azic. Se apreciaz c tensiunea generat de proteina110 menine mnunchiul de actin
68

n poziie central. La polul bazal, reeaua terminal alctuit din filamente scurte de actin i
proteine asociate cum este fodrina, interconecteaz filamentele de actin n mnunchi i
interconecteaz mnunchiurile ntre ele.

Figura 42. Structura microvililor. Imagine preluat din: Ross ,,Histology: A Text and Atlas, 4th ed.

b. Micarea amiboidal este un tip particular de locomoie ntlnit i la celule din


corpul uman: macrofage, fibroblaste, limfocite i const din emiterea i retracia continu a
unor prelungiri celulare. Procesul are la baz tranziia reversibil a hialoplasmei din stare de
gel, n stare fluid, de sol. Regiunea central a celulei, denumit endoplasm conine particule
i organite celulare aflate n permanent micare. n aceast regiune, hialoplasma se afl n
stare de sol. n regiunea distal, aflat sub membrana plasmatic, este localizat ectoplasma,
lipsit de organite, dar cu o reea de filamente de actin, interconectate prin filamin. n
reeaua de microfilamente se mai gsesc i alte proteine asociate, alfa-actinina i gelsolina.
Filamina i alfa-actinina, proteine implicate n formarea i stabilizarea reelei filamentelor de
actinin asigur tranziia n starea de gel, n timp ce gelsolina, n condiiile creterii
concentraiei ionilor de calciu, scindeaz filamentele de actin.
c. Actina i miozina n citokineza celulelor animale. Citokineza are loc prin
intermediul unui inel contractil, format n cea mai mare parte din microfilamente de actin,
situat sub plasmalem, la nivelul anului de clivaj. Citokineza se produce prin dezasamblarea
treptat a filamentelor de actin. Procesul de clivare progreseaz datorit unor interaciuni de
tip actin- miozin, filamentele de actin i cele de miozin formnd minisarcomere, fr
discuri Z.
d. Conul de cretere al neuroblastelor. Neuroblastele sunt precursorii neuronilor,
celule n curs de difereniere, fr proiecii axonale sau dendritice. Conul de cretere
69

exploreaz suprafeele i direcioneaz creterea axonului spre o int celular, astfel nct
viitorul neuron s-i poat ndeplini funcia de interconectare specific, prin intermediul
lamelipodiilor i filopodiilor. Lamelipodiile sunt emisii citoplasmatice la nivelul crora
citoplasma se disperseaz deasupra substratului. Filopodiile, denumite i microspie, sunt
prelungiri alungite i subiri care conin filamente de actin, pot fi extinse i retrase, orientnd
creterea spre o anumit direcie. Aceste micri sunt determinate de minimiozine. Creterea
axonal i dendritic propriu-zis se desfoar prin polimerizarea microtubulilor.
e. Activarea plcuelor sangvine. Plcuele sangvine provin din megacariocitele din
mduva osoas, nu sunt nucleate, dar au mici vezicule interne. Plcuele se ataeaz la nivelul
leziunii endoteliului, formnd un dop, apoi se activeaz, i schimb forma producnd
filopodii lungi. Procesul este declanat de fuzionarea membranelor veziculelor interne cu
membrana plasmatic. Apar astfel pe suprafaa plachetelor molecule proteice de suprafa
noi, care mresc capacitatea de aderare. n plcuele activate, monomerii de actin profilin
polimerizeaz n microfilamente de actin, care determin schimbarea formei plcuelor.

Figura 43. Activarea plcuelor sangvine. Imagine preluat din Alberts et al, ,,Molecular Biology of
the Cell, fourth ed.

70

4.4. Filamentele intermediare au un diametru intermediar (8-12nm), sunt mai groase dect
filamentele de actin i mai subiri dect microtubulii. Ca i celelalte elemente constitutive
ale citoscheletului, sunt rezultatul polimerizrii subunitilor proteice, dar aceste subuniti
proteice sunt specifice unui anumit tip celular.

Figura 44. Model de construcie a filamentelor intermediare. Imagine preluat din Alberts et al.
,,Molecular Biology of the Cell, fourth ed.

Cele 5 tipuri de proteine prezint caracteristici structurale comune, fiind formate


dintr-o regiune central -helicoidal i dou domenii globulare de mrimi variabile, n
regiunile carboxi- i aminoterminale (A, n figura de mai sus). Subunitile proteice formeaz
dimeri prin nfurarea strns una n jurul celeilalte a regiunilor centrale, n timp ce capetele
globulare rmn separate, subunitile fiind orientate paralel (B). Aceleai regiuni centrale
sunt responsabile de asocierea n tetrameri, dar antiparalel (C). Prin legarea cap la cap a
tetramerilor se genereaz protofilamentul (D), iar 8 protofilamente genereaz filamentul
intermediar (E). S-a constatat c aceste subuniti pot genera homopolimeri, n celulele n
71

care genele coexprim anumite proteine, acestea copolimerizeaz.


Modul de ordonare al subunitilor proteice n filamente imprim acestora un caracter
apolar. Deci, spre deosebire de microfilamentele de actin i microtubuli, filamentele
intermediare au capete echivalente funcional; polimerizarea i depolimerizarea se desfoar
cu aceeai vitez la ambele extremiti.
4.4.1. Tipuri de filamente intermediare i semnificaia lor funcional
4.4.1.1. Filamentele de vimentin sunt prezente n celulele mezenchimale (celule
endoteliale ale vaselor sangvine, fibroblati, adipocite) i unele celule epiteliale. n celulele
epiteliale filamentele de vimentin sunt ancorate n desmozomi, contribuind la creterea
rigiditii esutului epitelial. n adipocite filamentele nconjoar picaturile lipidice,
impiedicndu-le s fuzioneze ntre ele sau cu membranele celulare. n toate tipurile celulare
filamentele de vimentin sunt fizic legate de membrana nuclear, fiind probabil implicate n
coordonarea spaial a nucleului celular.
Se constat existena unei strnse asocieri ntre filamentele de vimentin i
microtubuli. Studiile efectuate pe fibroblati cultivai in vitro au demonstrat c n celulele
aflate n mitoz, filamentele intermediare nconjoar mnunchiurile de microtubuli ce
formeaz fibrele fusului de diviziune. Cele 2 tipuri de filamente sunt interconectate prin
proteine, nc neidentificate. Tratarea acestor celule cu colchicin a condus la dezasamblarea
microtubulilor urmat de deplasarea filamentelor de vimentin ce se organizeaz n
mnunchiuri n apropierea nucleului. Acest experiment sugereaz rolul important pe care
microtubulii l au n organizarea filamentelor de vimentina.
4.4.1.2. Filamentele de desmin se ntlnesc n toate tipurile de celule musculare.
Filamentele din celulele muchilor striai formeaz o reea ce strbate ntreaga miofibr i
care leag discurile Z ntre ele, de membrana plasmatic i, posibil, de unele organite celulare
(mitocondrii). Se apreciaz c filamentele de desmin joac, n principal, un rol structural,
susinnd discurile Z i miofibrilele.
4.4.1.3. Neurofilamentele (NF) sunt prezente exclusiv n axonii celulelor nervoase. n
corpul celular cele trei polipeptide se asambleaz n filamente i se asociaz cu microtubulii.
Complexele neurofilamente-microtubuli se deplaseaz n axon, conferindu-i acestuia
stabilitate.
4.4.1.4. Filamentele gliale sunt caracteristice celulei gliale.
4.4.1.5. Filamentele de cheratin (tonofilamentele) sunt ntlnite n celulele epiteliale.
Ancorate n desmozomi, filamentele de cheratin formeaz n celula epitelial o reea ce
asigur rezistena epiteliilor la factori mecanici. Se apreciaz c fiecare tip de celul epitelial
conine un complement citocheratinic specific.

72

5.Nucleul celular

Este cel mai mare organit din celul. Conine genomul, baza de date a celulei,
informaia genetic codificat n molecula de ADN. Nucleul este delimitat de nveliul
nuclear compus din dou membrane separate prin spaiul perinuclear. Nucleul conine
nucleolii, nucleoplasma i cromatina.

Figura 45. Structura nucleului celular i continuitatea membranei externe a nveliului nuclear cu
reticulul endoplasmic rugos. Imagine preluat din http://www.cytochemistry.net/cell-biology

5.1. nveliul nuclear este format din dou membrane care fuzioneaz la anumite
intervale formnd porii care delimiteaz cisternele perinucleare.
Membrana extern are 6nm grosime, faa citoplasmic prezint continuitate structuralfuncional cu RER, posed ribosomi care sintetizeaz proteinele al cror lan polipeptidic pe
msur ce este elongat, intr n cisternele perinucleare. Faa citoplasmic a membranei
externe a nveliului nuclear este n contatct cu o reea de filamente intermediare de
vimentin.
Membrana intern are 6nm grosime i este structura nveliului orientat spre
materialul nuclear, dar separat de acesta prin lamina nuclear, o structur fibroas, de 80300nm grosime, format din lamininele A,B,C, filamente intermediare care ajut la
organizarea nveliului nuclear i cromatinei perinucleare, avnd rol de susinere. Lamininele
au un rol important n diviziunea celular, n asamblarea i dezasamblarea nveliului nuclear:
fosforilarea lamininelor determin dezasamblarea, iar defosforilarea determin reasamblarea
nveliului nuclear.
73

Figura 46. nveliul nuclear n microscopie electronic (sursa: Martin Goldberg, imagine preluat din
http://www.lucasbrouwers.nl/blog/2009/10/unpopular-genes)

Cisternele perinucleare sunt situate ntre membrana extern i cea intern, cu o


grosime de 20-40nm, continu cu cisternele RER, sunt perforate de porii nucleari.
Porii nucleari au n medie diametrul de 80nm. Numrul lor este asociat cu intensitatea
activitii metabolice a celulei: poate ajunge la cteva mii.
Complexul porului nuclear (NPC) este alctuit din aproximativ 100 de proteine, este
alctuit dintr-un inel citoplasmic care prezint fibre ce se extind i n citoplasm, un inel
nucleoplasmic, cu un co nuclear central, un inel central care conine proteine-transportor
rspunztoare de transportul mediat de receptori al proteinelor, dinspre i nspre nucleu.

A.

B.

C.

Figura 47. Complexul porului nuclear. A. Reconstituire a structurii porului nuclear (de sus n jos):
inelul citoplasmic, inelul central i inelul nucleoplasmic cu coul nuclear central; B.imagine n
microscopie electronic a inelului nucleoplasmic cu coul nuclear central; C. imagine n microscopie
electronic a inelului citoplasmic. Imagini preluate din http://www.nature.com.

Funciile NPC: este implicat n transportul pasiv prin difuzie, avnd canale deschise
cu diametrul de 9-11nm; este rspunztor de transportul activ al proteinelor prin mecanism
mediat de receptori, proteinele transportate avnd o secven de aminoacizi denumit
secven-semnal de localizare nuclear (NLS). Importul i exportul macromoleculelor
74

necesit karioferine denumite importine i exportine. Importinele recunosc i leag n


molecula proteinelor secvena NLS. Proteinele, ARN de transfer i particulele ribosomale
sunt exportate din nucleu n asociere cu exportine. Transportul activ al macromoleculelor prin
NPC este mediat de GTPaze denumite Ran. Ran-GTP leag karioferinele. Importinele
elibereaz macromolecula transportat n momentul n care se leag de Ran-GTP, n timp ce
exportinele trebuie s se asocieze cu Ran-GTP pentru a forma un complex ternar cu particula
de export. Statutul dominant al Ran depinde de localizare: Ran-GTP n nucleu i Ran-GDP n
citoplasm.

Figura 48. Importul proteic nuclear. Imagine preluat din: http://kc.njnu.edu.cn

5.2. Nucleolul este o zon dens din nucleu, nedelimitat de o membran, prezent n
celule cu sintez proteic activ. Pot exista unul sau mai muli nucleoli, detectabili cnd
celula este n interfaz. Nucleolii conin ARNr i proteine, puin ADN. Se formeaz n jurul
unor loci genetici specifici alctuii din ADN repetitiv ,,n tandem" care conin genele ARNr,
denumii regiuni de organizare nucleolar (NOR): poriuni ale cromozomilor umani
13,14,15,21,22, unde sunt localizate genele care sunt transcrise n ARNr. Aceste regiuni sunt
implicate n reconstituirea nucleolului n faza G1 a ciclului celular.
Nucleolul are 4 regiuni distincte:
1. Un centru fibrilar care conine ADN inactiv (care nu este transcris) i NOR; 2. Pars
fibrosa, o regiune fibrilar dens alctuit din fibrile de 5nm care nconjur centrul fibrilar i
conine ADN activ i preARNr. 3. Pars granulosa, o component granular care conine
particule precursori ale ribosomilor cu dimensiuni de 15nm. 4. Matricea nucleolar

75

Figura 49. Electronomicrografii ale nucleului celular cu nucleolul (Nu), eucromatina (E) i
heterocromatina (H), raportul cu reticulul endoplasmic rugos i structura nucleolului: centri fibrilari
(fc), pars fibrosa (dfc), pars granulosa (gc). Imagine preluat din: http://www.bio.miami.edu

Funciile nucleolului:
1. sinteza ARNr i asamblarea n precursori ai ribosomilor
2. conine proteine nucleolare care funcioneaz ca proteine semnal ale punctelor
critice de control ale ciclului celular.
Iniial, prin transcrierea ADN care codific ARNr de ctre ARNpolimeraza I, se
formeaz un preARNr de 45S care este procesat prin metilare i activitatea endo i
exonucleazelor, cu formarea ARNr matur de 28S, 5,8S i 18S gata de utilizat n biogeneza
ribosomilor. Pentru biogenez este necesar i un ARNr de 5S care este transcris de pe o gen
aflat n afara NOR, n nucleoplasm. Proteinele ribosomale sunt transcrise n citoplasm.
ARNm este exportat din nucleu, are loc sinteza de proteine n ribosomii RER, apoi proteinele
sunt importate n nucleu, ajung la nucleol unde are loc biogeneza ribosomilor.
5.3. Nucleoplasma este format din: matricea nuclear i diferite tipuri de particule.
Matricea nuclear are funcia de suport pentru organizarea nucleoplasmei i conine:
- componeni structurali: elemente fibrilare, pori nucleari, complexe nucleare laminare,
nucleoli reziduali, o reea rezidual de riboproteine
- componeni funcionali pentru transcripia i procesarea ARNm i ARNr, situsuri de legare
ale receptorilor steroidici, situsuri de legare ale carcinogenilor, proteine de oc termic,
dezoxoribovirusuri, proteine virale.
Particulele nucleare sunt:
- granule de heterocromatin, grupri de particule dispuse dezordonat, cu diametru de
20-25nm, alctuite din ribonucleoproteine i enzime.
- granule de pericromatin, granule izolate, dense, cu diametrul de 30-50nm, nconjurate de
un halou dens, localizate la periferia heterocromatinei, cu o substructur alctuit din fibrile
76

compacte de 3nm. Sunt alctuite din ARN 4,7S i dou peptide similare celor aflate n
hnRNP (ribonucleoproteine nucleare heterogene). Pot fi hnRNP alctuite din preARNm i
proteine implicate n procesarea ARNm. Cresc ca numr n celulele hepatice expuse la
carcinogeni sau la temperaturi mai mari de 37C.
5.4.Cromatina nuclear este format din ADN dublu-catenar complexat cu histone i
proteine acide. Cromatina este constituit din heterocromatin, cromatin condensat
inactiv, localizat la periferia nucleului i n jurul nucleolilor sau mprtiat prin
nucleoplasm i eucromatin activ transcripional, cu rol n sinteza ARN i diviziunea
celular. (vezi figura 49.)
5.4.1.Structura cromatinei. Cromatina este un complex alctuit din ADN dubluhelical i un tip special de proteine denumite histone, octamere formate din 4 tipuri de
histone: H2A, H2B, H3, H4, n jurul crora ADN se nfoar strns, formnd o structur
compact. Elementul structural repetitiv de baz al cromatinei este nucleosomul. Nucleosomii
sunt interconectai prin ADN linker (de legtur). n adiie fa de histonele din miezul
octameric al nucleosomului, exist o alt histon H1, de legtur, care se afl n contact cu
ADN care iese i intr n nucleosom. Nucleosomul mpreun cu histona H1 formeaz
cromatosomul.

Figura 50. Nucleosomul (octamerul histonic i ADN) care mpreun cu H1 formeaz cromatosomul.

77

Cromatosomii, conectai prin ADN linker de 20-60pb, formeaz structura ,,irag de


mrgele" de 11nm grosime. Fibra de 11nm se rsucete ntr-o structur helical cu diametrul
de 30nm, denumit structur solenoid cu 6 nucleosomi/tur. Acest nivel de organizare a
structurii cromatinei (fibra de nucleosomi) corespunde eucromatinei, care conine gene active
transcripional. ME a demonstrat c structura de solenoid este foarte dinamic, ea se depliaz
n fibra de 11nm cnd este parcurs de ARN polimeraza angajat n transcripie.

Figura 51. Structura solenoid a cromatinei i imaginile n microscopie electronic ale fibrei de 11nm
i structurii solenoid de 30nm. Imagine preluat din http://kc.njnu.edu.cn.

Structura de solenoid se spiraleaz, se nfoar pentru urmtorul nivel de


mpachetare al ADN, caracteristic cromatinei n metafaz. Structura dezoxiribonucleoproteic
a cromatinei este stabilizat prin interaciunea cu o reea proteic nonhistonic denumit
matrice nuclear, al crui component major este topoizomeraza II. Prin interaciunea fibrei de
30nm cu proteinele matricii nucleare, aceasta formeaz bucle, fiecare coninnd 75kb ADN:
fibra de cromatin i proteinele nonhistonice asociate formeaz o structur helical care poate
fi observat ca un cromozom.

Figura 52. Interaciunea fibrei de cromatin cu proteinele


matricii nucleare. ( http://kc.njnu.edu.cn)

78

53.A.
53.B.
Figura 53. Condensarea cromatinei sub form de cromozom n metafaz
Imaginea 53 A este preluat din http://kc.njnu.edu.cn; Imaginea 53 B este preluat din
http://www.cytochemistry.net/cell-biology

5.4.2. Replicarea ADN intervine n cursul procesului de diviziune celular, materialul


genetic al celulelor fiice trebuie s fie identic cu cel al celulei mam, de aceea replicarea
ADN este un proces cu nalt grad de fidelitate. Este un proces complex, care implic multiple
activiti enzimatice. Exist 5 tipuri distincte de ADN polimeraze identificate ca: , , , , .
Polimeraza este echivalentul ADN polimerazei III de la procariote, ADN polimeraza este
echivalentul ADN polimerazei I de la procariote, deci are rol de a cataliza mecanismele de
reparare ale ADN lezat sau greit mperecheat , n timp ce polimeraza intervine n replicarea
ADN mitocondrial. Capacitatea ADN polimerazei de a replica ADN necesit o serie de
proteine adiionale: primaza, proteine accesorii de procesare, proteine de legare de
monocatena de ADN, helicaza, ADN ligaza, topoizomeraze i uracil-ADNglicozilaz.
Procesul de sintez al ADN ncepe n situsuri specifice denumite origini ale replicrii,
necesit o amors cu capt 3OH, se desfoar n direcia 53 de-a lungul ambelor catene,
are ca rezultat copierea ambelor catene n manier semiconservativ, ceea ce nseamn c
noua caten (fiic) sintetizat rmne asociat cu catena matri (mam). Dimensiunea mare a
cromozomilor eucarioi i limitele de ncorporare ale nucleotidelor n cursul sintezei ADN,
determin necesitatea existenei mai multor origini de replicare, pentru ca replicarea s se
desfoare ntr-o perioad de timp rezonabil. Este clar c la nivelul originilor de replicare,
catenele dublului helix de ADN trebuie s se desfac prin ruperea legturilor existente ntre
perechile de nucleotide complementare, necesit i o dezrsucire, ceea ce determin
accesibilitatea catenelor pentru ADN polimeraza. Despiralizarea dublului helix este realizat
de helicaz. Regiunile monocatenare rezultate, sunt stabilizate prin proteinele de stabilizare a
ADN monocatenar, acesta fiind accesibil ADN polimerazei. Situsul catenelor despiralizate la
79

nivelul cruia se desfoar replicarea ADN se numete furculi de replicare. ADN


polimeraza ncepe sinteza ADN prin ataarea gruprii 5-fosfat a unui nucleotid la o grupare
3-OH liber a unei amorse. Amorsa cu gruparea 3-OH liber este furnizat prin activitatea
primazei, care utilizeaz catena de ADN ca matri pentru sinteza unui segment scurt de
ARN, denumit primer sau amors. Sinteza continu prin esterificarea gruprii 3-OH a
nucleotidului ataat anterior cu gruparea 5-fosfat a nucleotidului urmtor, cu eliberare de
pirofosfat, n direcie 53, ADN polimerazele parcurgnd catenele matri n direcie
35. Iniierea replicrii decurge concomitent pe ambele catene de ADN parentale, dar
continu bidirecional, cu o caten parental copiat continuu (catena n avans sau ,,leading
strand") i cealalt copiat discontinuu (catena ntrziat sau ,,lagging strand"). Termenul de
caten copiat ,,continuu este relativ, deoarece ADN polimerazele nu rmn asociate
catenelor matri indefinit, capacitatea unei ADN polimeraze de a rmne ataat ADN
monocatenar se numete procesivitate. Cu ct ADN polimeraza rmne ataat mai mult timp
de catena matri, cu att procesivitatea ei este mai mare, fiind intensificat prin activitatea
proteinelor adiionale care alctuiesc replisomul. Catena n ntrziere este format din
fragmente scurte de ARN primer i ADN nou sintetizat (100-200 nucleotide) denumite
fragmente Okazaki. Un model care explic copierea simultan n aceeai direcie 53 a
ambelor catene de ADN parental de ctre ADN polimeraz propune c ADN polimeraza ar
exista ca dimeri asociai cu alte proteine necesare replicrii, identificai ca replisomi la nivelul
furculiei de replicare. Catena n ntrziere este temporar nfsurat n jurul replisomului,
astfel nct ADN polimeraza se mic de-a lungul ambelor catene parentale n direcia
35simultan pentru distane scurte care corespund unui fragment Okazaki. Pe msur ce
furculia de replicare nainteaz de-a lungul catenelor parentale, catena nou-sintetizat i
catena parental formeaz dublu-helix, ceea ce nseamn c exist doar mici poriuni de ADN
monocatenar la fiecare moment dat al replicrii. Progresia furculiei de replicare necesit o
continu despiralizare a dublului-helix de ADN, iar ADN eucariotic fiind ataat reelei
proteice a matricii nucleare, deplasarea progresiv a furculiei de replicare introduce un sever
stress de torsiune n duplexul aflat n avans de furculia de replicare. Aceste constrngeri
topologice sunt rezolvate prin activitatea ADN topoizomerazelor, care realizeaz bree prin
ruperea ambelor catene de ADN ( topoizomeraza II) sau a uneia (topoizomeraza I). Breele
sunt reunite tot prin activitatea topoizomerazelor. Primerii ARN ai catenei n avans i ai
fragmentelor Okazaki ale catenei n ntrziere sunt nlturai prin activitatea polimerazelor
care realizeaz mecanismele reparatorii ale ADN, simultan fiind ncorporate
dezoxiribonucleotide. Spaiile dintre captul 3OH al unei catene n avans i grupul 5fosfat
al alteia sunt reunite de ADN ligaza, ca i fragmentele Okazaki ale catenelor n ntrziere,
astfel procesul de replicare fiind complet.

80

Figura 54. Modelul recent al replicrii ADN. RPA sunt proteine de stabilizare a monocatenei de ADN
rezultat n urma despiralizrii sub aciunea helicazei; ADN polimeraza sintetizeaz primerul ARN;
RFC disloc polimeraza i leag PCNA pe ADN. ADN polimeraza se asociaz pe PCNA
(,,Proliferating Cell Nuclear Antigen) pentru a forma holoenzima ADN polimeraza activ,
procesiv, care extinde catena de ADN prin adugarea de noi nucleotide. n catena ,,n avans
sinteza ADN este continu, n timp ce n catena ,,n ntrziere sinteza ADN continu numai pn
cnd ADN polimeraza ntlnete primerul anterior. Maturarea catenei ,,n ntrziere necesit
activitatea a dou enzime: nlturarea primerului ARN prin activitatea exonucleazic a RNazei H, iar
ultimul ribonucleotid i parte din ADN-ul adiacent sunt nlturate prin activitatea exonucleazei
Fen-1. O a treia enzim, ADN ligaza, repar breele i realizeaz continuitatea catenelor nousitetizate (http://herkules.oulu.fi)

81

5.4.3. Genele. Unitatea structural-funcional a ereditii este o copie unic a unei


gene funcionale. Genele eucariote, alctuite din ADN, conin instruciunile pentru sinteza
moleculelor proteice i a unor molecule mici de ARN (genele polimerazei II), pentru sinteza
ARN ribozomal (genele polimerazei I) i pentru sinteza ARN de transfer i a altor ARN de
dimensiuni mici (genele polimerazei III). Genele umane sunt variabile ca dimensiuni, de la
cteva sute de baze, pn la mai mult de 2 milioane de baze (gena distrofinei responsabil
pentru distrofia muscular Duchenne are 2,5 Mb). Genomul uman conine 30000-35000 de
gene, ceea ce corespunde unei medii de 1300-1500 de gene/cromozom uman. Fiecare
persoan are cte dou copii ale fiecrei gene, cte una motenit de la fiecare printe.
Alelele sunt forme ale aceleiai gene care se caracterizeaz prin mici diferene n secvena
proprie de ADN. Aceste mici diferene determin trsturile unice ale fiecrui individ. Cele
mai multe gene sunt formate din regiuni denumite exoni care sunt exprimate, cu secvene
intercalate denumite introni, care nu se exprim. Intronii sunt transcrii n preARN mesager
(ARN primar) n nucleu, dar sunt nlturai prin clivare din ARN matur, n citoplasm.
Numrul mediu de exoni/gen uman este 9, n timp ce numrul mediu de introni este 8, dar
sunt mari variaii de la aceast medie: gena distrofinei conine 79 exoni, n timp ce gena globinei conine doar 3 exoni. Lungimea medie a unui exon dintr-o gen uman este de 145
pb. Alturi de exoni i introni, genele umane conin o regiune 5promotor reglatoare situat
adiacent n amonte, alte secvene reglatoare care cuprind intensificatori (,,enhancers),
inhibitori (,,silencers) care sunt situate la distan de secvenele codificatoare i o regiune
locus de control (,,LCR). Primul i ultimul exon conin regiuni care nu sunt translatate
cunoscute ca 5UTR i respectiv, 3UTR. 5UTR marcheaz startul transcripiei i conine un
codon de iniiere care reprezint situsul de start al translaiei. 3UTR conine un codon de
terminare a translaiei i coada poliA. Regiunea promotor conine secvenele TATA, CG,
CAAT care reprezint situsurile de legtur pentru factorii de transcripie.

Figura
55. Structura unei gene funcionale de tip Poli II i sinteza ARN mesager corespunztor genei.
Imagine preluat din http://nitro.biosci.arizona.edu
82

5.4.4. Sinteza ARN denumit transcripie, este procesul de transcriere a informaiei


codificat n secvena nucleotidelor din ADN, ntr-o secven de nucleotide din ARN. Mai
precis, secvena ADN este copiat enzimatic de ctre ARN polimeraza pentru formarea unei
secvene complementare de ARN mesager, denumit n aa fel pentru c poart mesajul
genetic de la ADN la sediul sintezei de proteine. Diferena semnificativ ntre moleculele de
ADN i ARN este prezena uracilului (U) n ARN n locul timinei (T) din ADN. n cazul
genelor funcionale, alctuite din secvene de ADN care codific proteine, primul pas care
conduce la exprimarea informaiei coninute de gen este sinteza prin transcripie a
ARN mesager care poate fi considerat un intermediar. O unitate de transcriere a ADN (o
gen) este translatat apoi ntr-o protein. O astfel de unitate conine secvena care codific
proteina i secvene care regleaz translaia, adic sinteza proteic.

Figura 56. Sinteza ARN. Imagine preluat din: http://www.phschool.com/science/biology_place.

Transcripia este realizat de ARN polimeraze, care sunt de mai multe tipuri, n
funcie de tipul de ARN pe care l sintetizeaz.

Figura 57. ARN polimerazele (tipul I, tipull II, tipul III)


83

ARN polimeraza I sintetizeaz un preARNr de 45S (ARNr precursor), din care se


formeaz ARNr maturi de 28S, 18S i 5,8S care formeaz componenta ribonucleic major a
ribosomilor.
ARN polimeraza II sintetizeaz precursori de ARNmesager, cei mai muli ARNsn
(,,small nuclear), microARN (miARN) i small interferenceARN (siARN) cu rol n expresia
genic. Este tipul de sintez de ARN cel mai studiat, implic o diversitate de factori de
transcripie care sunt necesari pentru legarea ARN polimerazei II la promotor i care sunt
implicai ntr-un control strict al procesului de transcripie.
ARN polimeraza III sintetizeaz ARNt, ARNr 5S i alte molecule mici de ARN
localizate n nucleu i citosol.
Procesul de transcripie se afl sub un control strict, mecanismele de reglare determin
iniierea acestui proces i cantitatea de ARN care va fi produs. Transcripia unei gene de
ctre ARN polimeraz poate fi reglat cel puin prin urmtoarele mecanisme:
1. Factorii de specificitate modific specificitatea ARN polimerazei pentru un
anumit promotor sau set de promotori, crescnd sau scznd probabilitatea ca ARN
polimeraza s se lege de acetia.
2. Represorii se leag de secvene noncodogene care sunt apropiate sau
suprapuse regiunii promotor, mpiedicnd ARN polimeraza s avanseze de-a lungul catenei
ADN, deci mpiedicnd exprimarea genei.
3. Activatorii intensific interaciunea ARN polimerazei cu un anumit
promotor, favoriznd exprimarea genei, prin interaciuni cu subuniti ale ARN polimerazei
sau, indirect, prin modificri ale structurii ADN.
4. Intensificatorii (,,enhancers) sunt situsuri de pe helixul de ADN care leag
activatorii cu scopul de a se forma o bucl a ADN care va aduce un promotor specific n
complexul de iniiere.
Aceti factori generali de transcripie poziioneaz ARN polimeraza la situsul start al
secvenei codogene, consecutiv declannd transcrierea ADN de ctre ARN polimeraz cu
formarea ARN mesager.
Procesul de transcripie (indiferent de tipul de ARN polimeraz care l catalizeaz)
cuprinde 3 etape principale: iniierea, elongarea i terminarea.
Iniierea const n construcia complexului ARN polimeraz pe promotorul genei,
proces n care intervin factorii de transcripie. Polimerazele eucariote nu recunosc direct
secvena promotorului, legarea ARN polimerazei de acesta fiind mediat de un grup de
proteine denumite factori de transcripie. Numai dup ce anumii factori de transcripie se
leag de promotor, ARN polimeraza recunoate i se leag i ea la acest situs, formndu-se
complexul de iniiere a transcripiei. O secven promotor bine cunoscut i conservat n
multe organisme eucariote este secvena TATA, localizat la aproximativ 25 de nucleotide n
amonte de punctul de start al transcripiei (TSP), alturi de alte secvene mai slab conservate
n evoluie care includ Elementul de Recunoatere al TFIIB (BRE), aproximativ 5 nucleotide
n amonte ,,upstream(BREu) i 5 nucleotide n aval ,,downstream (BREd)de secvena
TATA. Ordinea n care se ataeaz factorii generali de transcripie este urmtoarea:
1. Proteina de legare de TATA (TBP: ,,TATA Binding Protein) i un complex
preformat de factori proteici ataai TBP (TAF: ,,TBP Associated Factors), mpreun
cunoscute ca TFIID (,, Transcription Factor for Polymerase II D) sau factor de transcripie
84

pentru polimeraza II D, se leag la secvena TATA.


2. TFIIA alctuit din trei subuniti , leag TFIID dar interacioneaz i cu ADN,
stabiliznd prima interciune.
3. TFIIB se leag ntre TFIID i situsul unde va avea loc interaciunea proxim cu
ARN polimeraza. Legarea TFIIB este parial specific, avnd o anumit preferin pentru
secvenele BRE.
4. TFIIF alctuit din dou subuniti (RAP30 i RAP74) prezint anumite similariti
cu factorul de la bacterii i intr n complexul de iniiere mpreun cu ARN polimeraza II.
TFIIF accelereaz procesul de polimerizare a ribonucleotidelor.
5. TFIIE intr n complexul de transcripie i are rol n modificri conformaionale ale
ARN polimerazei (asemntoare nchiderii i deschiderii maxilarelor), care permite micarea
de-a lungul catenei de ADN.
6. TFIIH intr n complexul de iniiere concomitent cu TFIIE, i n final se leag la
acest complex. TFIIH interacioneaz puternic cu TFIIE. TFIIE influeneaz activitatea
catalitic a TFIIH, n lipsa TFIIE, TFIIH nu poate desface i despiraliza helixul de ADN la
nivelul promotorului. TFIIH este el nsui un complex de proteine care conine pe lng alte
proteine CDK7/complex ciclinH kinaza i ADN helicaza. TFIIH are trei funcii: se leag
specific la catena de ADN care trebuie transcris i asigur c se transcrie lanul corect,
despiralizeaz dublul-helix al ADN n manier ATP-dependent, cu formarea ADN
monocatenar, datorit activitii helicazei componente i are activitate kinazic, fosforilnd
domeniul C-terminal (CTD) al ARN polimerazei II la aminoacidul serin. Aceast funcie
kinazic este ,,comutatorul care declaneaz sinteza de ARN de ctre ARN polimeraza i
marcheaz sfritul etapei de iniiere i nceputul etapei de elongare.
7. Mediatorul ,,ambaleazi stabilizeaz apoi ntreg complexul de iniiere care
conine factorii de transcripie i ARN polimeraza II, interacionnd cu intensificatorii
(,,enhancers), secvene aflate la distan n amonte sau n aval , care intervin n reglarea
transcripiei.
Reglarea iniierii transcripiei:
a) Prin interferena unor proteine, este procesul prin care anumite
proteine-semnal interacioneaz cu promotorul sau cu complexul de iniiere parial construit,
pentru a preveni finalizarea formrii complexului de iniere al polimerazei, deci iniierea
transcripiei.
b) Inhibiie prin structura cromatinei, proces n care promotorul este ascuns
datorit mpachetrii cromatinei. Structura cromatinei este controlat de modificri posttranslaionale ale histonelor i determin modificri eseniale, n sensul scderii sau creterii
drastice a nivelului transcripiei.
c) Reglarea prin fosforilare.
Cea mai mare subunitate a ARN polimerazei II (Rpb1) are un domeniu C-terminal (CTD)
care este inta kinazelor i fosfatazelor. Fosforilarea CTD permite atragerea sau respingerea
factorilor implicai n transcripie. CTD const dintr-un motiv de aminoacizi YSPTSPS
repetitiv, dintre care serina i treonina pot fi fosforilate. Exist multe posibiliti sau
combinaii de fosforilare n aceste secvene repetitive de aminoacizi, care se modific rapid n
cursul transcripiei. Astfel, n timpul ciclului de transcripie, CTD este fosforilat reversibil,
ARN polimeraza II cu CTD nefosforilat se leag la promotor, n timp ce forma fosforilat
85

este implicat n transcripia activ. De exemplu, fosforilarea serinei din poziia 5 a


heptapeptidului repetitiv este necesar iniierii transcripiei i este limitat la perioada de
interaciune a ARN polimerazei II cu promotorul i de eliberare de ARN polimeraz a
promotorului, fiind realizat prin funcia kinazic a TFIIH. Fosforilarea n poziia 2 este
caracteristic etapei de elongare i de procesare a captului 3 a preARN mesager. Dup ce
prima legtur este realizat, ARN polimeraza prsete promotorul, n aceast etap existnd
tendina de a elibera transcripte ARN scurte, trunchiate, proces denumit iniiere avortiv.
.

Figura 58. Formarea complexului de iniiere activ pe TATA box prin interaciunea factorilor de
transcripie cu ARN polimeraza II. Imagine preluat din Scott F. Gilbert ,,Developmental Biology,
eighth edition.
86

Cnd transcriptele au o lungime de 23 de nucleotide, poate ncepe etapa de elongare.


Elongarea este sinteza unei copii a ADN n ARN mesager. O catena de ADN, denumit
catena matri (,,template) sau noncodogen este utilizat ca matri pentru sinteza ARN
mesager. Pe msur ce procesul transcripiei este n evoluie, ARN polimeraza se deplaseaz
de-a lungul catenei matri a ADN i, pe baza complementaritii bazelor azotate cu secvena
ADN, creeaz o copie ARN. ARN polimeraza se deplaseaz de-a lungul catenei matri de
ADN n direcia 35, catena codogen fiind utilizat ca referin. Se produce o molecul
de ARN n direcia 53, o copie exact a catenei codogene de ADN, exceptnd nlocuirea
timinei cu uracilul i a dezoxiribozei cu riboza n ARN mesager format. Ca i procesul de
replicare al ADN, transcripia (sinteza ARN) implic multiple ARN polimeraze care
funcioneaz pe aceeai caten matri i multiple cicluri de transcripie, deci se formeaz mai
multe molecule de ARN mesager prin copierea unei singure gene (o amplificare a unui tip
particular de ARN mesager). Etapa de elongare implic i un control strict al corectitudinii
copierii ADN matri de ctre ARN polimeraze (,,proofreading mechanism) prin care bazele
incorect ncorporate n ARN sunt excizate i nlocuite.
Reglarea elongrii se realizeaz prin urmtorii factori:
a) factorul de elongare TFIIS sau, mai simplu SII activeaz ARN polimeraza, la fel i
proteinele P-TEFb (Positive Transcription Elongation Factor b). P-TEF b este component a
complexului multiproteic Cdk9 (o kinaz ciclin-dependent) care interacioneaz i este
activat de ciclinele K, T1, T2. Activitatea kinazic a P-TEF b const n fosforilarea serinei
din poziia 2 a CTD din ARN polimeraza II, fosforilarea hSPT5 care recruteaz enzimele de
metilare a capului 5 a preARN i recrutarea TAT-SF1 care la rndul su recruteaz
spliceosomul. n consecin, ARN polimeraza este protejat de aciunea negativ a DSIF
(Factorul de Inducere a Sensibilitii fa de 5,6 dicloro-1-beta-D-ribofuranozilbenzimidazol)
i a NELF (Factor de Elongare Negativ), ncepnd elongarea eficient cu formerea ARNm.
b) Factorii implicai n modificarea structurii cromatinei prin modificri
posttranslaionale a histonelor: fosforilare, acetilare, metilare i ubiquinare.
c) Factorii care influeneaz activitatea catalitic a ARN polimerazei II prin creterea
Vmax i a Km, mbuntind activitatea catalitic a acestei enzime: TFIIF, Elongina i familia
ELL.

87

Figura 59.a.Fosforilarea mediat de TFIIH n domeniul C-terminal al ARN polimerazei II (Pol II) poate
interveni n timpul formrii complexului de preiniiere. ,,DRB sensitivity-inducing factor (DSIF) i
,,Negative Elongation Factor (NELF) faciliteaz probabil blocarea ARN polimerazei ntr-o regiune
proximal promotorului i TFIIS se asociaz cu polimeraza blocat. TFIIS stimuleaz activitatea
intrinsec de clivare a ARN de ctre Pol II cu formarea unui nou capt 3'-OH n situsul activ al Pol II.
Se formeaz un capt 5 metilat al ARN prin adiia de guanozin metilat prin activitatea polimerazei
i a ARN(guanin-7) metiltransferazei. b. Factorul pozitiv de elongare-b (P-TEFb) mediaz fosforilarea
DSIF, NELF i Pol II CTD determinnd elongare productiv. TFIIS faciliteaz eliberarea eficient a Pol II
de pe situsul de pauz n care se afla blocat. NELF disociaz de pe complexul de transcripie i DSIF,
TFIIS, P-TEFb sunt transportate mpreun cu Pol II de-a lungul genei. TFIIF, ELL i elongina care
stimuleaz activitatea de elongare a Pol II, sunt de asemenea asociate la complexul de elongare.
Imagine preluat din Nature Reviews Molecular Cell Biology 7, 557-567 (August 2006) Abbie
Saunders, Leighton J. Core & John T. Lis ,,Breaking barriers to transcription elongation

Etapa de terminare a transcripiei const n desfacerea complexului polimerazei i


terminarea elongrii lanului ARN. Genele care codific proteinele eucariotelor conin
secvena semnal poliA, care determin sfritul sintezei lanului ARN mesager (mediaz
terminarea transcripiei de ctre ARN polimeraza II). Etapa de terminare ar putea fi
declanat de disocierea factorilor de elongare atunci cnd interacioneaz cu secvena poliA.
Un model alternativ pentru mecanismul de declanare a etapei de terminare a transcripiei
este modelul ,,torpedo. Conform acestui model, clivarea secvenei poliA ofer un capt 5 al
ARN neprotejat, care este degradat prin activitatea exonucleazelor 53(exonucleaze
,,torpedou), i astfel ar fi indus disocierea ARN polimerazei de pe matria de ADN.
S-a demonstrat c transcripturile ARN nascente situate la o distan de 1 kb n aval de
secvena poliA a genei -globinei umane sunt asociate cu o activitate de clivaj cotranscripional (CoTC), cu rol n terminarea transcripiei. Mai exact, secvena cu activitate
88

CoTC este o secven de ARN cu activitate autocatalitic, care intr rapid n autoclivaj.
CoTC prezint un capt ARN 5 liber, care este recunoscut de exonucleaza 53Xrn2.
Degradarea produsului de clivaj din aval de Xrn2 declaneaz terminarea transcripiei.
Exonucleaza se mic de-a lungul catenei ADN matri mpreun cu ARN polimeraza, ca un
,,torpedou ghidat, dar are acces la ARN nascent dup un clivaj endonucleotidic la situsul
poliA sau la un situs de clivaj cotranscripional (CoTC), ajutnd la disocierea complexului de
elongare al ARN polimerazei.

Figura 60. Modelul ,,torpedo de terminare a transcripiei.

5.4.5. Procesarea ARN are sediul n nucleu i genereaz ARN mesager matur, ARNt
i ARNr funcionali, pornind de la transcriptele ARN primare formate n procesul de
transcripie. Procesarea ARN cuprinde maturarea urmtorilor pecursori ARN:
preARN mesageri, preARN ribosomali i preARN de transfer.
Procesarea preARN mesager implic urmtorii pai:
1. Adugarea unui ,,cap 7-metilguanilat la captul 5 are loc imediat dup
nceperea transcripiei, prin formarea unei legturi speciale de tip 5-5trifosfat.
2. Poliadenilarea, adugarea unei ,,cozi poliA la captul 3care conine
aproximativ 250 resturi A.
3. Clivarea ARN sau ,,ARN splicing, semnificnd ndepartarea intronilor i
unirea exonilor.
Clivarea implic formarea unui complex de clivare activ denumit spliceosom, prin
asamblarea ordonat a particulelor discrete de snRNP ( ribonucleoproteine nucleare mici) pe
substratul de ARNhn (ARN heterogen). Spliceosomul este un complex alctuit din proteine
i ARN de tip special, care ndeprteaz intronii din pre-ARN mesager (ARNhn). Procesul
89

este cunoscut sub denumirea de ,,splicing sau clivarea intronilor. Spliceosomii conin
5 snRNP : U1,U2, U4,U5, U6 bogate n uridin. Prima etap este recunoaterea ARNhn de
ctre U1snRNP i a altor factori asociai non-snRNP, care se leag la situsul de clivare situat
la captul 5 a ARNhn. Se formeaz complexul de angajare E care este ATP independent i
care angajeaz ARNhn pe calea clivrii. U2snRNP este recrutat prin interaciune cu un
factor asociat denumit factor auxiliar U2snRNP i cu U1snRNP, formndu-se complexul A n
manier ATP-dependent. U2snRNP este ataat puternic n complexul A de o secven de
ramificare denumit ,,branch point sequence (BPS). Prezena unei pseudouridine n
U2snRNP opus situsului de ramificare, determin alterarea conformaiei duplexului ARNARN, cu ieirea n afar a adenozinei din BPS. Structura alterat a duplexului, plaseaz
gruparea 2OH a adenozinei din ,,umfltura produs ntr-o poziie favorabil pentru pentru
primul pas al clivrii. TriU4/U5/U6snRNP este recrutat la spliceosom pentru a forma
complexul B, care dup cteva rearanjri, formeaz complexul C, adic spliceosomul activ
catalitic pentru clivarea intronului. Recrutarea triU4/U5/U6snRNP s-ar prea c are loc prin
interaciuni protein-protein i interaciuni datorate complementaritii bazelor azotate ntre
U2snRNP i U6snRNP. Dup recrutarea triUsnRNP, au loc rearanjamente ARN-ARN care
preced prima etap catalitic i au loc rearanjamente moleculare la nivelul spliceosomului
activ catalitic. Primul proces de rearanjare implic probabil desprinderea U1snRNP de la
situsul de clivare 5 i interaciunea cu U6snRNP, U1snRNP avnd aciune inhibitorie asupra
interaciunii U6- situs de clivare 5. Legarea U2snRNP la BPS este un exemplu de
interaciune ARN-ARN care nltur o interaciune ARN-protein, fiind concret nlturat
proteina SF1 de pe BPS. n spliceosomul activ, conformaia bucl stem II este favorizat. Nu
este clar cum este nlturat U4 de pe U6snARN, ARN fiind implicat n asamblarea
spliceosomului, poate avea funcia de desprindere a U4 de U6 i de promovarea a
interaciunii U2/U6snARN. Buclele stem I i II ale interaciunii U4/U6 disociaz i poriunea
bucl stem II a U6 se autonfoar pentru a forma o bucl stem intramolecular, U4
nemaifiind necesar pentru asamblarea spliceosomului. Bucla stem I a U6 formeaz un helix
U2/U6 mpreun cu U2snARN.
La intronii din grupa I, reacia de splicing ncepe la o nucleotid guaninic, iar la
intronii din grupa II, la o nucleotid adeninic. Reacia de splicing const n dou reacii
consecutive de transesterificare (transfer de grupri fosfat):
1. O adenin din secvena intronului, poziionat n BPS, aproape de situsul de
clivare 3, n bucla format prin modificarea conformaional determinat de prezena
pseudouridinei n U2snRNP ataat la spliceosom, realizeaz un atac nucleofil prin gruparea
2-OH de la riboz, la nivelul unei guanozine din situsului de clivare 5, determinnd
formarea unei legturi 2 5 fosfodiesterice (lariat intermediar).
2. Captul 3OH liber al primului exon exercit un atac nucleofil asupra
situsului de clivare 5, cu eliberarea intermediarului lariat i unirea exonilor. n acest mod
sunt eliminai intronii i se formeaz ARN mesager care este exportat din nucleu i utilizat
pentru sinteza proteinelor funcionale.

90

Figura 61. Mecanismul de aciune al spliceosomului (clivarea intronilor). Imagine preluat din Bruce
Alberts et al. ,,Molecular Biology of the Cell, fifth ed.

PreARNt necesit patru tipuri de modificri:


1. ndeprtarea unei secvene de 16 nucleotide de la captul 5 prin activitatea
RNA-zei P.
2. ndeprtarea unui intron alctuit din 14 nucleotide din bucla anticodon prin
clivare.
3. nlocuirea a dou resturi uracil de la captul 3 al moleculei cu CCA
(citozin-citozin-adenin), care este ntlnit n toate ARNt mature.
4. Modificarea unor nucleotide cu alte nucleotide caracteristice: inozin,
dihidrouridin, pseudouridin.
PreARN ribosomal este alctuit din trei ARNr maturi: ARNr de 18S, ARNr de 5,8S i
ARNr de 28S, care trebuie separai pentru a deveni funcionali. PreARNr este sintetizat n
nucleol. U3snARN i ali snARN (,,sn-small nuclear) bogai n uracil mpreun cu proteine
asociate lor n nucleol intervin n clivarea preARNr. ARNr de 5S este sintetizat n
nucleoplasm i nu necesit procesare, dup sintez reintr n nucleol pentru a se combina cu
ARNr de 28S i ARNr de 5,8S cu formarea subunitii ribosomale mari.

91

6. Ribosomii. Translaia (sinteza proteinelor)

6.1. Caracteristicile ribosomilor. Ribosomii au aproximativ 20nm n diametru i


sunt formai din ARN ribosomali (65%) i proteine ribosomale (35%). Translateaz ARN
mesager pentru a forma lanul polipeptidic din aminoacizi furnizai de ARN de transfer. S-ar
prea c proteinele ribosomale nu au un rol activ n sinteza proteinelor, ele fiind un suport
structural cu funcie de intensificare a funciei ARN ribosomali, implicai n sinteza lanului
polipeptidic.

Figura 62. Structura ribosomului eucariot. Imagine preluat din http://www.biochem.arizona.edu

Ribosomii sunt ataai membranei reticulului endoplasmic rugos, de unde


caracteristica de rugozitate a acesteia, de nveliul extern al membranei nucleului care are
continuitate structural-funcional cu RER, sau sunt liberi- suspendai n citosol. Ribosomii
ataai de membrane i cei liberi sunt identici structural, difer doar distribuia spaial
dependent de prezena unei secvene-semnal int de localizare la nivelul RE. Aceasta
nseamn c atunci cnd un ribosom sintetizeaz o protein cu secven de localizare la
nivelul RE, va fi ataat la RER, iar dac acelai ribosom sintetizeaz o protein fr aceast
secven, este liber n cioplasm. Ribosomii liberi pot fi localizai oriunde n citosol, dar nu i
n nucleu i organite celulare. Proteinele sintetizate de ribozomii liberi sunt eliberate n
citosol i utilizate intracelular. Lanurile polipeptidice sintetizate n ribosomii ataai RER
sunt introduse direct n lumenul RE i transportate la destinaie pe calea secretorie: ribosomii
ataai RER produc n general, proteine care sunt utilizate la nivelul membranei plasmatice
sau sunt exportate prin exocitoz.
Ribosomii nu sunt organite celulare tipice, nefiind delimitai de membran
fosfolipidic, sunt mai degrab particule multimoleculare, dar i putem considera organite
celulare fr membran. Au fost observai pentru prima dat dup 1950 de George Palade la
microscopul electronic ca ,,granule sau ,,particule dense, iar n 1958 a fost propus de
Richard B. Roberts denumirea de ,,ribosomi.
92

6.2. Funcia ribosomilor. Translaia ncepe la captul 5 al ARN mesager, la nivelul


unor situsuri specifice de iniiere. Secvena 5terminal a ARN mesager nu codific
aminoacizi, se numete secven netranslatat 5 (5UTR). ARN mesager eucariot codific un
singur lan polipeptidic (ARN mesager monocistronic) i se termin cu secvenele
netranslatate 3 (3 UTR). Translaia este ntotdeauna iniiat cu aminoacidul metionin,
codificat de tripletul nucleotidic (codonul) AUG, excepie fcnd sinteza proteic a
mitocondriilor. Ribosomii recunosc i se leag de ,,capul 7-metilguanilat al ARN mesager i
parcurg lanul nucleotidic pn la ntlnirea unui codon de iniiere AUG. Secvenele
adiacente primului codon AUG afecteaz iniierea translaiei, n consecin n multe cazuri se
trece peste acest prim codon de iniiere i iniierea apare la un codon AUG n aval de primul.
Primul pas n iniierea translaiei este legarea iniiatorului specific, metionil-ARNt i a ARN
mesager de subunitatea ribosomal mic. Subunitatea ribosomal mare ader la complex,
formnd un ribosom funcional, la nivelul cruia se declaneaz elongarea lanului
polipeptidic. Un lan de ARN mesager poate fi translatat simultan de mai muli ribosomi,
aflai la intervale de 100-200 nucleotide unul fa de urmtorul. Un astfel de grup de ribosomi
legai la acelai ARN mesager se numete poliribosom sau polisom. Sinteza proteic decurge
independent la nivelul fiecrui ribosom, i cuprinde urmtoarele etape: iniierea, elongarea i
terminarea
6.2.1. Iniierea sintezei proteice necesit mai multe proteine (cel puin 10) denumite
factori de iniiere eucariotici- eIF. Factorii eIF-1, eIF-1A i eIF-3 se leag la subunitatea
ribosomal mic 40S, iar eIF-2 n complex cu GTP se leag cu iniiatorul metionil- ARNt.
ARN mesager este recunoscut i adus la ribosom de grupul eIF-4 de factori de iniiere ( eIF4E recunoate ,,capul 5 7-metilguanilat, iar eIF-4G se leag att la eIF-4E ct i la o
protein de legare a ,,cozii 3 poliA a ARN mesager, denumit PABP-,,PoliA Binding
Protein). ARN mesager este apoi adus la unitatea ribosomal 40S de eIF4E i eIF4-G n
asociere cu eIF-4A i eIF-4B, eIF-4G interacionnd cu eIF-3.

Figura 63. Iniierea sintezei proteice. Imagine preluat din http://www.nature.com.


93

Subunitatea ribosomal 40S cu metionil-ARNt asociat i factorii de iniiere proteici


ataai, ,,scaneaz apoi ARN mesager n cutarea codonului de iniere AUG. Atunci cnd
acest codon de iniiere este gsit, eIF-3 declaneaz hidroliza GTP de pe eIF-2. Factorii de
iniiere, inclusiv eIF-2-GDP sunt apoi eliberai din complex, iar subunitatea ribosomal 60S
se leag de subunitatea 40S pentru a forma complexul ribosomal eucariotic de 80S i
elongarea poate ncepe.
6.2.2. Etapa de elongare a lanului polipeptidic. Ribosomul are 3 situsuri pentru
legarea ARNt, denumite situs peptidil (P), aminoacil (A) i situsul exit (E). Iniiatorul
metionil-ARNt se leag la situsul peptidil.

Figura 64. Etapa de elongare a catenei polipeptidice.


http://www.genetics.med.ed.ac.uk/transelong/transelong.jpg

Imagine

preluat

din

Primul pas n elongare const n legarea urmtorului aminoacil-ARNt la situsul


aminoacil, corespunztor celui de-al doilea codon din ARN mesager. Aminoacil-ARNt este
escortat la situsul aminoacil din ribosom de un factor proteic implicat n elongare denumit
eEF-1, complexat cu GTP. GTP este hidrolizat, aminoacil-ARNt corespunztor este inserat
la locusul aminoacil i eEF-1 asociat cu GDP este eliberat. Dup eliberarea eEF-1, se
formeaz legtura peptidic ntre iniiatorul metionil-ARNt de la locusul peptidil i al doilea
aminoacid, aflat sub forma aminoacil-ARNt la locusul aminoacil. Formarea legturii
peptidice este catalizat de subunitatea ribosomal mare, mai precis de ARN ribosomali ai
acestei subuniti, care realizeaz transferul metioninei pe aminoacil-ARNt din situsul A,
formnd un peptidil-ARNt n acest situs, iar ARNt din locusul peptidil rmnnd liber.
Hidroliza GTP nainte de eliberarea eEF-1 de pe ribosom este etapa limitant de vitez a
elongrii lanului polipeptidic i furnizeaz intervalul de timp necesar pentru ca, un
aminoacil-ARNt incorect inserat, legat mai slab la codonul ARN mesager care nu
corespunde anticodonului din ARNt, s poat disocia de pe ribosom mai curnd dect s fie
94

folosit n sinteza proteic. Hidroliza GTP este deosebit de important pentru acurateea
sintezei proteice, datorit timpului pe care l furnizeaz desfurrii mecanismului de
,,proofreading al mperecherii codon-anticodon, nainte ca legtura peptidic s se fi format.
Urmtorul pas n elongare, dup formarea peptidil-ARNt n locusul aminoacil, este
translocarea, care necesit prezena factorului de elongare eEF-2 i hidroliz de GTP.
Translocarea const n micarea ribosomului de-a lungul ARN mesager cu trei nucleotide,
poziionnd urmtorul codon n locusul A rmas gol dup translocarea peptidil-ARNt din
locusul A n locusul P i a ARNt liber din locusul P n locusul E. Urmeaz legarea unui nou
aminoacil-ARNt pe locusul aminoacil care induce eliberarea ARNt liber de pe locusul E,
ribosomul fiind apt s insereze urmtorul aminoacid n lanul polipeptidic n aflat n elongare.

Figura
65.
Elongarea
catenei
polipeptidice.
Imagine
preluat
http://www.ncbi.nlm.nih.gov: Griffiths, A.J.F. et al. ,,An Introduction to Genetic Analysis

din

Fiecare etap de legare a unui nou aminoacid n catena polipeptidic implic resinteza
GTP din GDP legat de eEF-1. Aceast reacie necesit un al treilea factor proteic de
elongare denumit eEF-1 care determin nlocuirea GDP de pe eEF-1 cu GTP. Refacerea
eEF-1-GTP semnific redobndirea capacitii acestui factor de elongare ca, n form legat
de GTP, s duc un alt aminoacil-ARNt n situsul aminoacil al ribosomului.
6.2.3. Terminarea sintezei lanului polipeptidic. Elongarea continu pn cnd este
translocat un codon stop (UAA, UAG, UGA) n dreptul situsului aminoacil al ribosomului.
Celulele nu dein ARNt cu secvene anticodon complementare acestor codoni stop, dar
posed un factor de eliberare RF (,,Release Factor) care recunosc codonii stop ca semnale de
terminare a sintezei proteice. Acest factor de eliberare eRF-1 recunoate toi cei trei codoni
stop i acioneaz mpreun cu un alt factor proteic de eliberare eRF-3. Aceti factori de
eliberare se leag la codonul stop din dreptul locusului A i activeaz hidroliza legturii
dintre lanul polipeptidic i ARNt din locusul peptidil, cu eliberarea lanului polipeptidic
complet sintetizat din ribosom i a ARNt. Matria ARN mesager, ca i subunitile
ribosomale disociaz.

95

Figura 66. Etapele de terminare a sintezei proteice. Imagine preluat


http://www.ncbi.nlm.nih.gov: Griffiths, A.J.F. et al. ,,An Introduction to Genetic Analysis

din

6.2.4.Reglarea translaiei. Expresia genic este reglat i la nivel translaional, prin


mai multe mecanisme. Un mecanism de reglare este legarea proteinelor represor la secvene
specifice ale moleculei ARN mesager. Un alt mecanism de reglare se exercit prin modularea
activitii factorilor de iniiere a sintezei proteice, mai ales a eEF-2. Acest factor de iniiere
poate fi fosforilat de proteinkinaze cu rol reglator. n forma fosforilat este inhibat conversia
GDP n GTP, deci iniierea translaiei. Factorul proteic eIF-4E, care recunoate capul 5
7-metilguanilat al ARN mesager, este cunoscut ca fiind implicat ntr-un mecanism reglator al
translaiei. Efectul de stimulare a sintezei proteice exercitat de insulin este un efect mediat
prin fosforilarea proteinelor asociate cu eIF-4E, rezultnd stimularea activitii eIF-4E i
activarea iniierii translaiei. Translaia este reglat prin stress, prin semnale mitogene sau
prin citokine, care activeaz ci distincte de semnalizare, cu reducerea sintezei de proteine.
Premiul Nobel pentru chimie a revenit n 2009 dr. Venkatraman Ramakrishnan,
dr.Thomas A. Steitz i dr. Ada E. Yonath ,,pentru studii asupra structurii i funciei
ribosomilor.
96

7. Reticulul endoplasmic

7.1.Structura reticulului endoplasmic. Reticulul endoplasmic este o reea alctuit


dintr-un sistem complex de membrane care delimiteaz cisternele (saci turtii). Membranele
fosfolipidice ale RE delimiteaz spaiul cisternal sau lumenul, care are continuitate cu spaiul
perinuclear.
Din punct de vedere morfologic i funcional, RE prezint trei tipuri de structuri:
reticulul endoplasmic rugos (RER), reticulul endoplasmic neted (REN), aflate n relaie de
continuitate structural, avnd membran i lumen comune i fiind interschimbabile n
funcie de necesitile metabolice ale celulei i reticulul sarcoplasmic (RS) din celulele
musculare.

Figura 67. Structuri ale reticulului endoplasmic: reticulul endoplasmic rugos ,,rough ER i reticulul
endoplasmic neted ,,smooth ER.

7.2. Reticulul endoplasmic rugos se caracterizeaz prin prezena pe suprafaa


membranei a numeroi ribosomi, care confer membranei aspectul neregulat, rugos.
Existena ribosomilor legai la membrana RER i funcia RER n sinteza proteinelor a fost
demonstrat de Porter i colaboratorii n 1945 n microscopie electronic i prin metode
biochimice. Ribosomii nu sunt un constituient structural stabil al RE, ei fiind ataai i
eliberai n mod constant de pe membrana RE. Un ribosom se leag la RE dup ce ncepe s
sintetizeze proteinele destinate cii secretorii: proteine pentru export, cu destinaie
extracelular i proteine pentru uz intracelular cum sunt enzimele lizosomale, proteinele
integrale ale sistemului endomembranelor sau ale plasmalemei. Mecanismul de direcionare
al ribosomilor ctre membrana RE implic existena unei secvene-semnal de recunoatere,
situat la captul N-terminal al proteinei, format din 16-30 de aminoacizi, respectiv unul
sau mai muli aminoacizi ncrcai pozitiv adiaceni unei secvene de 6-12 aminoacizi
97

hidrofobi. Cnd sinteza proteic ncepe n ribosomii liberi din citosol, aceast secvensemnal din proteina nascent direcioneaz ribosomul spre membrana RE i iniiaz
translocarea n lumenul RE. Mecanismul implic o particul de recunoatere a semnalului
(PRS), care este o particul ribonucleoproteic citosolic, capabil de a se lega simultan la
secvena-semnal din proteina nascent, la subunitatea ribosomal mare i la un receptor al
particulei PRS, care este o protein integral din membrana RE. PRS este format din
6 polipeptide i o molecul de ARN format din 300 de nucleotide, una din proteinele PRS
denumit P54 leag de fapt secvena-semnal din structura lanului polipeptidic aflat n curs
de elongare. Numai dup ce complexul PRS/protein nascent/subunitate ribosomal mare se
leag la receptorul PRS din membrana RE, PRS elibereaz lanul polipeptidic nascent i
elongarea acestuia continu la o rat normal de vitez. Fidelitatea procesului este asigurat
de o hidroliz asociat a GTP, energia obinut fiind utilizat pentru eliberarea proteinelor
nascente care nu au secven-semnal de pe PRS i din complexul legat la receptorul pentru
PRS. Interaciunea complexului PRS/lan polipeptidic nascent/ribozom cu receptorul PRS
este declanat cnd GTP se leag de subunitatea P54 a PRS i subunitatea a receptorului
PRS. Transferul consecutiv al ribosomului cu lanul polipeptidic n curs de elongare la un
situs al membranei RE unde poate avea loc translocarea permite hidroliza GTP. Dup
disociere, PRS i receptorul pentru PRS elibereaz GDP n citosol unde este reciclat.
Prin legarea particulei semnal de recunoatere de receptorul propriu din membrana
RE, este ataat i ribosomul cu proteina n curs de elongare care conine secvena semnal de
recunoatere, care va intra n lumenul RER, proces denumit translocare cotranslaional.

Figura 68. Ataarea ribosomului cu lanul polipeptidic n curs de elongare, purttor al


secvenei-semnal de direcionare spre reticulul endoplasmic. Ataarea este urmat de restabilirea
vitezei normale de elongare a lanului polipeptidic, care trece n lumenul RER prin translocon.
Imagine preluat din http://www.cytochemistry.net/cell-biology/rer2.htm
98

Ribozomii cu lanul polipeptidic nascent sunt rapid transferai spre translocon, un


canal proteic din membrana RE. Pe msur ce translaia continu, lanul polipeptidic n curs
de elongare trece direct de pe subunitatea ribosomal mare n porul central al transloconului.
Transloconul este format din copii multiple ale unui complex denumit Sec61, format din 3
uniti structurale proteice: o protein integral de membran denumit Sec61, cu 10
domenii transmembranare de tip -helix, Sec61 i Sec61, care sunt proteine mici. Aceste
copii Sec61 se asambleaz pentru a forma canalul transloconului, care poate fi vizualizat n
microscopie electronic: canalul cilindric are 5-6nm nlime, un diametru de 8,5nm, cu un
por central de 2nm. Transloconul este un canal cu poart similar canalelor ionice, cu un
mecanism de nchidere-deschidere controversat. Dac transloconul ar fi deschis tot timpul, n
lipsa ribosomului ataat i a polipeptidului de translocat, molecule mici ca ATP i
aminoacizii ar difuza liber prin porul central. Pentru a menine proprietatea de barier cu
permeabilitate selectiv a membranei RE, transloconul se deschide numai atunci cnd are
ataat un ribosom cu un lan polipeptidic nascent. Exist dou ipoteze privind mecanismul de
nchidere-deschidere al porului: o protein din lumenul RE blocheaz porul cnd nu este
ataat un ribosom pe faa citosolic a RE sau, conform unei alte ipoteze, complexul Sec61 se
gsete n stare dezasamblat n membrana RE, iar la situsul unde ribosomul i lanul
polipeptidic sunt aduse la membrana RE de PRS prin legarea de receptorul PRS, are loc
asamblarea complexului Sec61.
Dup ce proteina a ajuns n lumenul RER, secvena semnal de recunoatere este
clivat de o semnal-peptidaz care este o protein transmembranar asociat transloconului,
ribosomul i SRP se desprind i sunt reciclate, fiind reutilizate la nivelul citosolului ntr-un
nou ciclu de sintez proteic i respectiv, de ataare a ribosomilor la membrana RE.

Figura 69. Semnal peptidaza asociat transloconului din membrana reticulului endoplasmic.
Imagine preluat din http://www.mun.ca

Proteina, odat intrat n lumenul RER, este supus unor modificri care n confer
structura potrivit pentru ndeplinirea unor funcii specifice i pentru localizarea strict n
celul. Gruprile care confer proteinelor direcia de localizare se numesc semnale de dirijare
i sunt adugate posttranslaional n RER i aparatul Golgi. Membrana RER este continu cu
membrana nuclear extern, dar nu prezint continuitate cu membranele aparatului Golgi,
astfel nct proteinele vor fi exportate n aparatul Golgi prin transport vezicular. Veziculele
de transport prezint proteine de suprafa denumite COPI i COPII. COPII orienteaz
99

veziculele ctre aparatul Golgi, iar COPI determin aducerea veziculelor cu proteine napoi
la RER. n acest mod, RER acioneaz concertat cu aparatul Golgi pentru a orienta proteinele
nou sintetizate spre destinaia potrivit. Exist i o a doua cale de export din RE, prin situsuri
de contact ntre membranele RE i membranele altor organite, care permit transferul unor
molecule mici.
7.2.1. Funciile RER
Proteinele solubile de secreie i proteinele de membran sintetizate la nivelul
reticulului endoplasmic rugos sunt supuse urmtoarelor 4 tipuri de modificri: 1. formarea
legturilor disulfidice; 2. plierea moleculelor i formarea proteinelor oligomerice; 3. adiia i
modificarea resturilor oligoglucidice; 4.clivajul proteolitic specific.
1. Legtura disulfidic ntre dou resturi de cistein este implicat n stabilizarea
structurii teriare i cuaternare a proteinelor. Asemenea legturi disulfidice sunt ntlnite n
structura proteinelor de secreie i n domeniul exoplasmic al proteinelor de membran
(proteinele citosolice i ale organitelor care sunt sintetizate n ribosomii liberi sunt lipsite de
legturi disulfidice). Sunt eseniale pentru structura normal i activitatea enzimatic sau
hormonal a proteinelor de secreie. Formarea legturilor disulfidice este dependent de
prezena n lumenul RE a proteindisulfidizomerazei (PDI), abundent n RE al celulelor
secretorii din organe cum sunt ficatul sau pancreasul. Legtura disulfid din situsul activ al
PDI este transferat unei proteine prin dou reacii secveniale de transfer tiol-disulfid. Este
generat PDI redus, care se transform n PDI oxidat prin aciunea unei proteine din
lumenul RE denumit Ero1, care poart o legtur disulfid care este transferat PDI.
2. Plierea moleculelor i formarea proteinelor oligomerice. Unele proteine sunt
constituite din mai multe lanuri polipeptidice. Imunoglobulinele, de exemplu, sunt proteine
oligomerice, alctuite din dou lanuri polipeptidice H(heavy) i dou L(light), legate prin
legturi disulfidice datorit activitii PDI. PDI contribuie i la plierea corect a lanurilor
polipeptidice, stabilizat prin punile disulfidice. Plierea n conformaie corect are loc n RE
n decursul a cteva minute de la sintez. Rapida pliere depinde de activitatea unor proteine
din lumenul RE, proteinele chaperone care includ proteindisulfidizomeraza (PDI), ERp29,
Grp78, membru al familiei Hsp70, calnexina, calreticulina, peptidilpropil izomerazele.
Proteine lumenale omoloage lectinelor, calnexina i calreticulina, se leag selectiv la
oligozaharide legate la azot (N-linkate) din lanurile polipeptidice nascente nepliate,
prevenind agregarea segmentelor adiacente ale lanului polipeptidic, pe msur ce acesta este
elongat (previn o pliere prematur, incorect a proteinelor nou-sintetizate). Alte proteine
implicate n plierea proteinelor sintetizate n RER sunt peptidilprolil izomerazele, o familie
de enzime care accelereaz rotaia legturilor peptidil-prolil din secvene nepliate ale
proteinelor, aceast izomerizare de tip cis-trans fiind o etap limitant de vitez a procesului
plierii. Proteinele nu pot prsi lumenul RE dac nu sunt pliate corect. Orice mutaie care
determin o pliere incorect sau incomplet a unei proteine mpiedic transferul ei din
membrana sau lumenul RE n aparatul Golgi. Aceste proteine incorect pliate se gsesc legate
permanent la proteine ale RE denumite chaperone, cum este calnexina. Celulele rspund la
prezena proteinelor nepliate prin intensificarea transcripiei genelor care codific
chaperonele din RE i ali catalizatori ai plierii, datorit proteolizei unei proteine
transmembranare a RE denumit ATF6. Eliberarea prin proteoliz a domeniului citosolic al

100

ATF6 este urmat de importul n nucleu al acestui domeniu proteic, unde exercit funcia de
activare a transcripiei genelor care codific chaperonele RE.
Proteinele de secreie sau cele de membran i subunitile neasamblate ale
proteinelor oligomerice sunt degradate n citosol ntr-un interval de 1-2 ore de la sintez.
Aceste molecule sunt transportate n sens invers prin translocon, ajung n citosol unde sunt
degradate perin calea proteolizei mediat de ubiquitine. Enzimele de ubiquitilare sunt
localizate pe faa citosolic a RE i, prin activitatea lor, determin adiia de ubiquitin la
proteinele incorect pliate, reacie cuplat cu hidroliza ATP. Polipeptidele poliubiquitinilate
rezultate sunt rapid degradate n proteosomi.
4.Glicozilarea (adiia i modificarea resturilor oligozaharidice). n reticulul
endoplasmic rugos se produce adiia unui precursor oligozaharid preformat din 14 resturi
monoglucidice: trei resturi de glucoz, nou resturi de manoz i dou resturi de
N-acelilglucozamin. Acest precursor este modificat n RE i aparatul Golgi, dar 5 dintre cele
14 resturi monoglucidice sunt conservate n structura tuturor oligozaharidelor N-linkate ale
glicoproteinelor de secreie sau de membran. Precursorul oligozaharidic este legat printr-un
rest pirofosforil la dolicol, un lan lung poliizoprenic ferm ancorat n membrana RE.
Oligozaharidul dolicol pirofosforil este format pe membrana RE, printr-un set de reacii
catalizate de enzime ataate de faa citosolic sau lumenal a membranei RE, astfel nct
poriunea oligozaharidic s proemine pe faa lumenal a RE. Urmeaz etapa de transfer a
precursorului format din 14 resturi monoglucidice de pe dolicol, la o asparagin din lanul
polipeptidic nascent care ptrunde n lumenul RE, deoarece numai resturile de asparagin
dintr-un tripeptid Asn-X-Thr sau Asn-X-Ser pot constitui substratele enzimei
oligozahariltransferaza, care leag resturile oligozaharidice la atomul de azot al grupului
aminic al asparaginei.

Figura 70. Oligozaharidul dolicol pirofosforil. Transferul oligozaharidului de pe dolicol pe


asparagina din lanul polipeptidic catalizat de oligozaharidtransferaza (E). Imagine preluat din
http://www.cryst.bbk.ac.uk.

Dou din cele trei subuniti ale oligozaharidtransferazei sunt proteine integrale ale
membranei RE, ale cror domenii citosolice se leag la ribosom, orientnd a treia subunitate,
care este subunitatea catalitic, lng lanul polipeptidic n curs de elongare. Dup transferul
precursorului oligozaharidic pe polipeptidul nascent, trei enzime diferite ndeprteaz cele
trei resturi de glucoz i un rest particular de manoz, prin activitatea glicozidazelor I i II.
101

Figura 71. Glicozidazele I i II din RE. Imagine preluat din http://www.cryst.bbk.ac.uk

Glicozilarea la atomul de azot al asparaginei are un rol determinant n plierea corect


a glicoproteinelor i n exportul proteinelor spre destinaia lor final.

7.2.2. Sortarea proteinelor specifice RE.


Multe dintre proteinele translocate cotranslaional n RER rmn i funcioneaz n
acest organit, datorit prezenei n structura lor a unor secvene de aminoacizi cu funcie de
semnal specific. Aceste secvene sunt formate din patru aminoacizi KDEL (Lis-Asp-GluLeu) i sunt situate la captul C-terminal. Secvenele KDEL determin reinerea proteinelor
n RE datorit unor receptori specifici pentru KDEL situai n membrana RE.

7.2.3. Reticulul endoplasmic neted


O celul nu poate s creasc sau s se divid fr biogeneza de membrane necesar ariei
extinse a membranelor plasmatice i endomembranelor. Generarea de membrane este un
proces la fel de important ca i sinteza proteic i replicarea ADN i implic sinteza
fosfolipidelor, sfingolipidelor i colesterolului care are loc n mare msur n reticulul
endoplasmic neted. Componentele proteice ale membranelor au un rol funcional bine stabilit,
dar proprietile structurale i fizice ale membranelor sunt determinate de componentele
102

lipidice. Celulele au capacitatea de a importa i de a sintetiza aceste molecule, n scopul


biogenezei membranelor. Celulele sintetizeaz membrane noi prin expansiunea celor
existente, deoarece dei primii pai n sinteza lipidelor se desfoar n citoplasm, etapele
finale sunt catalizate de enzime legate de membranele celulare preexistente. Acizii grai sunt
transformai n esteri ai acidului gras cu coenzima A, care constituie substratul pentru sinteza
fosfolipidelor din acilCoA, glicerol 3-fosfat i precursori ai capului polar, proces catalizat de
enzime de pe faa citosolic a reticulului endoplasmic neted. Restul acil fiind hidrofob, este
inclus n bistratul lipidic, iar CoA proemin pe faa citoplasmic a membranei. Sinteza
lipidelor const din procese enzimatice faziale, enzimele implicate sunt i ele amfipatice, cu
poriuni hidrofobe inserate n bistratul lipidic i poriuni hidrofile care proemin n citosol.
Deci, biosinteza lipidelor apare la interfaa citosol-membrana REN i ncepe cu esterificarea
glicerol 3-fosfatului cu resturi de acizi grai din acil CoA, cu formare de acid fosfatidic, cele
dou lanuri hidrocarbonat lungi ale acidului fosfatidic ancoreaz molecula n bistratul lipidic.
n etapa urmtoare, o fosfataz transform acidul fosfatidic n diacilglicerol, urmnd
transferul capului polar, de exemplu fosforilcolina este transferat de pe CDP-colin pe
grupul hidroxil expus.
Fosfolipidele nou sintetizate sunt localizate iniial n foia citoplasmic a membranei
REN. Fosfolipidele sunt ns distribuite asimetric n cele dou foie ale bistratului lipidic al
membranei RE i al altor membrane. Fosfolipidele trec ntre foia citoplasmic i foia
exoplasmic prin micri flip-flop care au loc cu frecven sczut, mult mai ncet dect
micrile de difuzie lateral n planul membranei. Pentru expansiunea membranelor prin
creterea ambelor foie cu o distribuie asimetric a fosfolipidelor, componentele fosfolipidice
trebuie s realizeze o micare flip-flop rapid i selectiv. Mecanismul implicat n generarea
i meninerea asimetriei fosfolipidelor membranare nu este bine cunoscut, dar s-ar prea c
sunt implicate proteine integrale de membran capabile s catalizeze procesul flipflop,denumite flipaze. Una dintre cele mai bine studiate flipaze este proteina ABCB4,
membr a superfamiliei de ABC ATPaze, exprimat n hepatocite, care mut fosfatidilcolina
din foia citoplasmic n foia exoplasmic, n scopul eliberrii ulterioare n bil n combinaie
cu colesterolul i acizii biliari.
Sfingolipidele sunt sintetizate pornind de la sfingozin, un aminoalcool cu lan
hidrocarbonat lung, nesaturat, produs n REN, prin cuplarea palmitoilCoA cu serina, urmat
tot n REN de adiia unui acid gras pentru a forma N-acilsfingozina (ceramid). Adiia
consecutiv la ceramid a capului polar are loc n aparatul Golgi.
Colesterolul este component major, alturi de fosfolipide i sfingolipide, al
membranelor celulare. Primul pas n sinteza colesterolului, de transformare a acetilCoA n
hidroximetilglutarilCoA are loc n citosol, ns conversia HMG CoA n mevalonat este
catalizat de HMG-CoA reductaza, o protein integral de membran din RE.
HMG CoA reductaza are domeniul catalitic hidrosolubil n citosol, dar cele opt segmente
transmembranare reglatoare ancoreaz ferm enzima n membrana RE. Mevalonatul este
transformat n izopentenilpirofosfat (IPP) i n stereoizomerul dimetilalilpirofosfat (DMPP),
transformare catalizat de enzime cu localizare n citosol. Tot enzime localizate n citosol
catalizeaz condensarea a ase uniti IPP cu formare de scualen, un intermediar format din
30 de atomi de carbon. Transformarea scualenului n colesterol se realizeaz prin reacii
catalizate de enzime legate de membrana RE.
Colesterolul n exces din celule este esterificat prin activitatea catalitic a
acilcolesterolaciltransferazei (ACAT) cu acilCoA provenite din acizi grai. ACAT este
localizat n membrana REN. Colesterolul esterificat este depozitat sub forma de picturi
lipidice, abundente n celulele esuturilor productoare de hormoni steroizi.

103

Implicarea n sinteza lipidelor, steroizilor i n metabolismul acestora nu este unica


funcie a REN. Intervine n metabolismul carbohidrailor, deoarece conine enzima glucozo6-fosfataza, care transform glucozo-6-fosfatul n glucoz n gluconeogenez.
Metabolismul medicamentelor (xenobioticelor) are localizarea principal la nivelul
reticulului endoplasmic neted din hepatocite, dei fiecare esut are o anumit capacitate de a
metaboliza medicamente. Metabolismul xenobioticelor semnific transformarea compuilor
xenobiotici lipofili n compui cu caracter polar, hidrosolubili i uor de eliminat din
organism, prin introducerea sau demascarea unor grupri polare n molecula acestor compui.
Implic anumite ci care pot fi clasificate n reaciile fazei I i fazei II :
Faza I:
Oxidarea: implic activitatea sistemului monooxigenazei citocromului P450,
sistemului monooxigenazei flavinice, alcooldehidrogenazei, aldehiddehidrogenazei,
monoaminooxidazei, peroxidazelor
Reducerea: implic reductaza citocrom P450-NADPH i citocromul 450 redus.
Hidroliza: prin esteraze, amidaze i epoxidhidrolaze
Faza II:
Metilarea prin activitatea metiltransferazelor
Sulfatarea prin activitatea glutation S-transferazelor
Acetilarea realizat de N-acetiltransferaze, aminoacid N-aciltransferaze
Glucuronidarea cu UDP-glucuronoziltransferaze
Sinteza acidului mercapturic
REN este bine reprezentat n hepatocite, unde una dintre principalele funcii este de
detoxifiere, prin acest proces fiind ndeprtai i produi ai metabolismului sau cantiti
crescute de etanol provenite din consumul exagerat de buturi alcoolice sau barbituricele n
supradoze. Pentru realizarea acestor funcii, n anumite condiii REN i poate dubla suprafaa
timp de cteva zile, revenind la dimensiuni normale dup ce agresiunea a ncetat.

7.2.4. Reticulul sarcoplasmic


Este un tip special de reticul endoplasmic neted din celulele musculaturii netede i
striate, care nu are funcii biosintetice, are doar de funcii de depozitare i eliberare a ionilor
de calciu. O pomp de calciu introduce ionii de calciu n lumenul RS unde calsequestrina
leag i depoziteaz calciul la concentraii mari. Eliberarea ionilor de calciu datorit
stimulrii electrice are rolul major n cuplarea excitaiei cu contracia n cursul contraciei
musculare.

104

A.

B.
Figura 72.A. Ultrastructura sarcoplasmei muchiului scheletic cu reticulul sarcoplasmic i mitocondrii.
(www.bu.edu/histology) B. Eliberarea Ca++ din reticulul sarcoplasmic i declanarea contraciei
musculare. Imagine preluat din: www.biozentrum.uni-wuerzburg.de.

105

8. Aparatul Golgi
8.1. Caracterisici generale. Aparatul Golgi, complexul Golgi sau dictiozomul este
un organit celular caracteristic tuturor celulelor eucariote, situat n centrul celulei, aproape de
nucleu. A fost evideniat n 1898 de ctre doctorul italian Camillo Golgi prin colorarea
neuronilor cu nitrat de argint. Aparatul Golgi este o parte a sistemului endomembranar al
celulei, constituit din mai multe compartimente distincte funcional. Dalton i Felix au stabilit
prin microscopie electronic n 1954 c aceste compartimente ale aparatului Golgi sunt
formate din nite sculei aplatizai suprapui(cisterne), n numr de 4-8/celul, delimitai de
o membran simpl, dilatai la capete i nconjurai de micro i macrovezicule, generate din
aceste cisterne. Forma dictiozomilor variaz de la o celul la alta (n strile patologice au un
aspect granulos). Morfologic, biochimic i funcional, este un organit format din
compartimente cu polaritate distinct: cis Golgi, Golgi median i trans Golgi.

Figura 73. Ultrastructura complexului Golgi: faa cis, compartimentul median, faa
trans.Imagine preluat din www.uic.edu.

8.2. Funcia aparatului Golgi.


8.2.1. Rolul aparatului Golgi n transportul vezicular al proteinelor.
Proteinele nou-sintetizate sunt proteinele rezidente n RE (n lumen sau ncorporate n
membrana organitului) sau proteine care sunt mpachetate n vezicule de transport anterograd,
cptuite cu protein COP II, care vor fuziona pentru a forma cisternele compartimentului
cis Golgi. Anumite proteine, care conin secvena KDEL, cu localizare normal la nivelul RE,
care au fost direcionate eronat ctre cis Golgi, sunt retrimise n RE prin vezicule de transport
retrograd, care conin proteina COP I. O cistern nou format prin nmugurire de vezicule
din RE i fuziunea veziculelor de transport anterograd este o cistern care aparine
compartimentului cis. mpreun cu proteinele pe care le conine, se mut din poziia cis, din
apropierea RE, ntr-o poziie trans, mai departe de RE, devenind cistern median Golgi, iar
apoi cistern trans Golgi, proces denumit progresie cisternal. n cursul progresiei cisternale,
106

proteinele rezidente ale aparatului Golgi sunt reciclate: dup ce sunt mutate progresiv odat
cu cisternele, n direcie cis-trans, ele sunt transportate retrograd, de data aceasta prin
mecanism vezicular, fiind din nou localizate n situsul firesc din cisternele cis, mediane sau
trans Golgi. n schimb, proteinele cii secretorii, care au alte destinaii (nu sunt proteine
structurale sau enzime ale RE sau ale aparatului Golgi), ajung ntr-o reea complex de
membrane i vezicule denumit reeaua trans Golgi (TGN). De aici, proteinele pot fi preluate
n cel puin trei tipuri de vezicule:
1. primul tip de vezicule, dup ce nmugurete din TGN, se deplaseaz i fuzioneaz
cu membrana plasmatic, elibernd coninutul prin exocitoz n mediul extracelular, proces
denumit secreie continu sau constitutiv. Exemple: secreia de anticorpi din limfocitele B,
secreia de proteine serice din hepatocite.
2. Un alt tip de vezicule care provin din TGN sunt veziculele secretorii care sunt
meninute n celul pn cnd apare un semnal care declaneaz procesul de exocitoz, n
acest caz, secreia proteinelor este reglat. Exemple: secreia hormonilor proteici din celulele
endocrine (insulina, glucagonul, ACTH), eliberarea neurotransmitorilor sau secreia
precursorilor enzimelor digestive.
3. A treia categorie de vezicule provenit din TGN are ca destinaie final lizosomul,
fiind mai nti transportate n compartimentul endolizosomal sau endosomal trziu. n acest
mod sunt livrate enzimele lizosomale (proteaze, glicozidaze, fosfataze) i proteine de
membran lizosomale cum sunt H+ ATPazele (pompe din clasa V care asigur pH-ul acid al
compartimentului lizosomal).
Dac transportul de la RE la Golgi are loc prin vezicule mbrcate cu COP II,
transportul retrograd are loc prin vezicule mbrcate cu COP I. Veziculele mbrcate cu
clatrin i proteine AP transport proteinele de la TGN sau de la membrana plasmatic la
compartimentul endosomal trziu, ns proteina care cptuete veziculele care transport
proteinele pentru secreie constitutiv sau reglat nu este nc cunoscut.

Figura 74. Transportul anterograd i retrograd mediat de proteine COP I i II n complexul Golgi.

107

Aceste tipuri de vezicule mbrcate se formeaz prin polimerizarea unor proteine


citosolice n membrana donatoare din care nmuguresc veziculele, care la scurt timp de la
eliberare i pierd nveliul, expunnd proteinele necesare pentru fuziunea cu membrana int.
Proteinele care leag GTP, aparinnd superfamiliei GTPazelor, controleaz polimerizarea
proteinelor care mbrac veziculele: pentru COP I i clatrin, GTPaza este ARF, iar pentru
veziculele mbrcate de COP II, GTPaza este Sar1. Ciclul de legare i hidroliz al GTP-ului
de ctre aceste GTPaze, controleaz iniierea i asamblarea nveliului veziculelor, iar dup
ce veziculele sunt eliberate din membrana donatoare, hidroliza GTP legat la Arf sau Sar1
declaneaz dezasamblarea nveliului proteic care cptuete veziculele.
Pe de alt parte trebuie s existe un mecanism prin care veziculele de transport s fie
capabile de a discrimina ntre proteinele de membran i proteinele solubile, acceptnd
proteinele solubile care trebuie s avanseze spre compartimentul urmtor, excluznd
proteinele care trebuie s rmn ca rezidente n compartimentul donor de vezicule. Acest
mecanism de sortare ar consta n legarea direct a unor secvene specifice denumite semnale
de sortare, prin interaciune cu poriunea citosolic a proteinelor cargo de membran
(nveliul proteic polimerizat acioneaz ca o matrice cu afinitate mare de legare a
proteinelor). Proteinele solubile care vor ajunge n lumenul unor organite, se leag de
domenii lumenale ale proteinelor cargo ale veziculelor. n urmtoarea etap, un alt set de
GTPaze, proteinele Rab, particip la orientarea veziculelor spre cea mai apropiat membranint. Conversia de la RabGDP la RabGTP, determin o schimbare conformaional care
permite proteinei Rab s interacioneze cu o protein de suprafa dintr-o vezicul de
transport i s-i insereze ancora izoprenoidic n membrana veziculei, urmnd interaciunea
cu efectorii Rab care sunt proteine de dimensiuni mari din membrana-int. Dup ce are loc
fuziunea veziculei cu membrana-int, GTP de pe Rab este hidrolizat la GDP, declannd
eliberarea RabGDP care este reciclat, participnd la un alt ciclu de fosforilare, legare,
hidroliz. Dup aceast etap de orientare a veziculelor ctre membrana-int, urmeaz
fuziunea propriu-zis, mediat de proteinele SNARE (vSNARE din membrana veziculelor cu
tSNARE din membrana-int).
8.2.2. Modificrile macromoleculelor la nivelul aparatului Golgi. Complexul
Golgi reprezint o unitate de prelucrare multifazial, n care macromoleculele i, n primul
rnd proteinele sunt modificate n stadii succesive, pe msur ce ele trec de la un
compartiment la altul.
8.2.2.1. Glicozilarea la azot a proteinelor.
Lanurile oligozaharidice ale glicoproteinelor sintetizate n RE sunt modificate prin
nlturarea din lanul oligoglucidic a unor resturi monoglucidice i prin adugarea unor resturi
monoglucidice noi. Lanurile oligoglucidice manozice nu li se vor mai aduga monoglucide
noi n complexul Golgi: ele vor fi formate din dou resturi de N-acetilglucozamin i mai
multe resturi de manoz, aa cum s-au format n cursul sintezei lor n reticulul endoplasmic.
n schimb, lanurile oligoglucidice complexe sunt rezultatul modificrilor n aparatul Golgi:
pe lng cele dou resturi de N-acetilglucozamin i resturi de manoz adugate n reticulul
endoplasmic, care alctuiesc regiunea miez a lanurilor oligoglucidice complexe, ele sunt
formate dintr-o regiune terminal adugat n complexul Golgi. Aceast regiune terminal
este format dintr-un numr variabil de resturi triglucidice N-acetilglucozamin- galactozacid N-acetilneuraminic i este adugat n compartimentul Golgi trans.
108

Figura 75. Regiunile terminale sunt sintetizate prin activitatea catalitic a


glicoziltransferazelor care acioneaz n ordine strict determinat i adaug resturi monoglucidice
activate prin legarea de nucleozide i importate din citosol n lumenul Golgi trans prin proteine
transportoare din membrana golgian. Prima modificare este nlturarea a trei resturi de manoz,
urmat de adiia secvenial a unui rest de N-acetilglucozamin, nlturarea a nc dou resturi de
manoz i adiia de fucoz i dou resturi de N-acetilglucozamin. Final, sunt adugate trei resturi de
galactoz i trei resturi de acid sialic. Imagine preluat din Cooper,G.M. ,,The Cell A Molecular
Approach, second edition.

Glicozilarea proteinelor la atomul de azot n complexul Golgi decurge diferit: lanul


oligozaharidic format poate s aib coninut diferit n funcie de structura proteinei i de
cantitatea de enzime de glicozilare disponibile n complexul Golgi al diferitelor tipuri de
celule. n consecin, proteinele pot iei din Golgi cu o varietate de lanuri oligozaharidice
N-linkate.
8.2.2.2. Glicozilarea la oxigen i asamblarea proteoglicanilor.
Unele glicoproteine sunt glicozilate la oxigen, lanurile oligoglucidice fiind legate la
gruparea hidroxil a treoninei sau serinei din structura proteinei.

Figura 76. Structura proteoglicanilor.

109

Este un proces fazial, catalizat de glicoziltransferaze, primul monoglucid adugat fiind


de obicei N-acetilglucozamina, urmat de un numr variabil de alte resturi monoglucidice
(zece sau mai multe).
Proteoglicanii sunt proteine intens glicozilate la oxigen, n complexul Golgi se
asambleaz lanuri poliglucidice pe miezul proteic prin intermediul unui trizaharid de
legtur cu rol de primer (amors), care este legat la un rest de serin. Trizaharidul amors
este format din xiloz i dou resturi de galactoz, iar lanul poliglucidic
(glicozaminoglicanic) este format prin polimerizare unor uniti diglucidice (acid glucuronic/
galactoza- Nacetilglucozamina/N-acetilgalactozamina). Lanul poliglucidic este modificat n
cursul elongrii prin reacii de sulfatare i epimerizare. n final, proteoglicanii pot fi formai
din pn la 95% din greutatea lor din glucide, care formeaz lanuri glicozaminoglicanice
neramificate (pn la cteva sute), formate prin polimerizarea a aproximativ 80 de resturi
monoglucidice. Majoritatea proteoglicanilor sunt secretai ca i componente ale matricii
extranucleare, o mic parte fiind glicoproteine integrale ale membranei plasmatice, servind la
ancorarea celulei de matrice sau la organizarea macromoleculelor acesteia. Mucusul ce
constituie nveliul protector al unor epitelii este un amestec concentrat de proteoglicani i
glicoproteine nalt glicozilate.
8.2.2.3. Sulfatarea proteoglicanilor, glicoproteinelor i glicolipidelor.
Este ultima modificare a proteinelor nainte de exportul din aparatul Golgi prin
mecanism vezicular i se desfoar sub aciunea sulfat transferazelor, n compartimentul
Golgi trans.
8.2.2.4. Modificri proteolitice.
Unii hormoni polipeptidici i alte polipeptide sunt sintetizate sub form de precursori
inactivi, din care moleculele active funcional sunt eliberate prin proteoliz. Modificrile
proteolitice ncep n TGN i continu n veziculele de secreie, prin activitatea
endoproteazelor din membranele TGN sau din membranele veziculelor de transport.
Endoproteazele cliveaz polipeptidele la nivelul a dou resturi succesive de aminoacizi
bazici: Arg-Arg, Lys-Arg, Lys-Lys, Arg-Lys din captul C-terminal, dar procesul de clivare
poate s fie complex, cum este cazul proinsulinei, n care clivajul proteolitic are loc la captul
N-terminal al lanului B i la captul C-terminal al lanului A, care apoi sunt legate n insulina
matur, activ, prin legturi disulfidice, deci maturarea decurge cu pierderea i degradarea
unui peptid central C. Pentru unele proteine, cum este hormonul somatotrop, nlturarea
secvenei semnal RE din regiunea N-terminal este singurul clivaj proteolitic al lanului
polipeptidic nativ, dup care proteina devine activ. Multe proteine de membran sau
proteine solubile de secreie sunt ns sintetizate ca precursori polipeptidici lungi
(proproteine), de exemplu enzimele lizosomale, albumina seric, insulina, glucagonul i
marea majoritate sunt sortate la nivelul TGN n vezicule de transport, clivajul proteolitic
pentru formarea proteinei active avnd loc n veziculele de transport.
Moleculele peptidice cu funcie de semnal sunt de obicei molecule mici, dar sunt
sintetizate eficient n poliribosomii ataai RE, ca poliproteine (copii multiple ale aceleiai
secvene aminoacidice). Moleculele active se obin prin clivarea lanului polipeptidic
sintetizat iniial.
8.2.2.5. Agregarea proteinelor n TGN.
Este mecanismul prin care anumite proteine ca ACTH, insulina, tripsinogenul sunt
sortate i ajung n veziculele de transport pentru secreia reglat. Dei aceste trei proteine nu
mprtesc o secven comun de aminoacizi care ar avea rol de secven de sortare, ele au
110

aceeai proprietate: sortarea lor n vezicule de secreie reglat este controlat de agregarea
proteic selectiv. Veziculele imature ale cii de secreie reglat, n momentul n care
nmuguresc din TGN, conin deja agregate proteice. Unele studii au artat c celulele
secretorii ale mamiferelor conin trei proteine: cromogranina A, cromogranina B i
secretogranina II, care formeaz agregate n condiiile de concentraie ionic i pH din
reeaua trans Golgi, dar nu agreg n condiiile din lumenul RE. Agregarea selectiv a
proteinelor de secreie cu cromogranina A, cromogranina B i secretogranina II, ar putea fi
mecanismul pe care se bazeaz sortarea acestor proteine n veziculele de transport specifice
cii.
8.2.2.6. Sinteza glicolipidelor i sfingomielinei. Aparatul Golgi are funcii n
metabolismul lipidic, n sinteza glicolipidelor i sfingomielinei. Sinteza fosfolipidelor,
colesterolului i ceramidelor are sediul n reticulul endoplasmic neted, ns sfingomielina i
glicolipidele sunt mai apoi sintetizate din ceramide n aparatul Golgi.

Figura 76. Sinteza glicolipidelor i sfingomielinei pornind de la ceramide. Imagine preluat


din Cooper,G.M. ,,The Cell A Molecular Approach, second edition.

Sfingomielina este unicul fosfolipid din membranele celulare non-glicerol, sinteza sa pornind
de la transferul unui grup fosforilcolin de pe fosfatidilcolin pe ceramid. Sfingomielina este
sintetizat pe faa lumenal a cisternelor Golgi. n sinteza glicolipidelor adiia de resturi de
glucoz la ceramide are loc pe faa citosolic a cisternelor Golgi, iar adiia de alte resturi
monoglucidice are loc pe faa lumenal. Dup sintez ele sunt localizate n foia lumenal a
bistratului membranei Golgi i, dup transport vezicular, n foia extern a bistratului
membranar, cu grupurile lor polare proeminnd la suprafaa celulei. Lanurile oligozaharidice
ale glicolipidelor sunt markeri de suprafa importani n recunoaterea intercelular.

111

9. Lizosomii

Lizosomii au fost descoperii n 1949, de citologul belgian Christian de Duve n urma


studiilor efectuate asupra omogenatelor de ficat i asupra fosfatazei acide. Activitatea
fosfatazei acide este mai mare n preparatele n care enzima a fost extras n ap distilat,
dect n cele n care enzima a fost extras n soluii echilibrate din punct de vedere osmotic.
Aceast constatare a condus la concluzia c enzimele hidrolitice sunt localizate ntr-un
organit specific. Dup zece ani de la aceste observaii, lizosomii au fost descrii direct prin
microscopie electronic.

Figura 77. Structura lizosomilor. Imagine preluat din http://bricker.tcnj.edu/micro

9.1. Structura lizosomilor. Lizosomii sunt organite specifice celulei eucariote,


delimitai de o membran unic, avnd dimensiuni cuprinse ntre 0,1-1,2m. Conin 40 de
enzime hidrolitice responsabile de digestia celular controlat a macromoleculelor: proteaze,
nucleaze, glicozidaze, amilaze, lipaze, fosfolipaze, fosfataze i sulfataze. Enzimele sunt
hidrolaze acide, interiorul lizosomului avnd un pH acid, de 4,8, comparativ cu pH-ul
citosolic care este de 7,2. De aceea, leziuni ale membranei lizosomale urmate de eliberarea
enzimelor n citosol nu afecteaz celula, enzimele lizosomale fiind inactive la pH-ul neutru al
citosolului. Membrana lizosomal deine proteine transportoare care permit eliberarea n
citosol a produilor finali de digestie ai hidrolazelor lizosomale; au pompe protonice,
H+ATPaze din clasa V care menin pH-ul acid, utiliznd energia obinut din hidroliza ATP
pentru a pompa H+ n interiorul organitului. Proteinele membranei lizosomale sunt nalt
glicozilate pentru a fi protejate de aciunea propriilor hidrolaze.
Enzimele lizosomale, ca i proteinele membranei lizosomale, sunt sintetizate n
ribosomii ataai RE (cu translocare cotranslaional) i procesate n aparatul Golgi.
Veziculele de transport care livreaz aceste proteine lizosomilor se desprind din TGN.
Mecanismul de sortare al hidrolazelor lizosomale este cunoscut i implic manozo-6-fosfatul,
ataat la oligoglucidele legate de azot ale enzimelor lizosomale. Ataarea M6P ncepe n
veziculele desprinse din RE i continu n compartimentul cis Golgi. Fosforilarea resturilor
de manoz este catalizat de N-acetilglucozaminfosfotransferaza i o fosfodiesteraz. Pe faa
lumenal a membranelor TGN exist receptorii pentru M6P. Regiunile membranei TGN care
conin complexul receptor M6P-enzima lizosomal se desprind i formeaz vezicule de
transport mbrcate de clatrin spre organite mici, de form neregulat denumite endosomi
timpurii, de unde trec n endosomii trzii, unde are loc procesul de sortare acid, interiorul
endosomilor trzii avnd pH-ul6. Receptorii M6P sunt capabili s lege enzimele lizosomale
112

la pH-ul neutru al lumenului TGN, dar nu i la pH-ul acid din organitele de sortare. n
consecin, din organitele de sortare (endosomii trzii) nmuguresc vezicule care recicleaz
receptorul eliberat napoi n TGN precum i vezicule care conin numai enzimele lizosomale,
prin care aceste enzime ajung la destinaia lor final, lizosomii. Veziculele care recicleaz
receptorii hidrolazelor acide nu sunt mbrcate de clatrin, sunt vezicule cu retromer, un
nveli care se asambleaz n endosomi numai cnd: 1.se poate lega de domeniul citoplasmic
al receptorilor cargo; 2. poate interaciona direct cu un bistrat fosfolipidic curbat; 3. se poate
lega la un fosfatidilinozitol fosforilat (fosfoinozitid) care acioneaz ca marker endosomal.
Toate aceste trei condiii trebuie ndeplinite simultan, retromerul este un ,,detector de
coinciden care se asambleaz la locul i momentul potrivit.
Lizosomii sunt organite cu heterogenitate structural, fiind diferite din punct de
vedere morfologic, dar sunt definite de o funcie comun: degradarea intracelular a
macromoleculelor.

Figura 78. Funcia lizosomilor. Imagine preluat din http://bricker.tcnj.edu/micro

9.2. Biogeneza lizosomilor.


O cale a biogenezei lizosomale este cea de fuziune a veziculelor de transport
nmugurite din TGN cu endosomii care conin macromolecule preluate din mediul
extracelular prin endocitoz. Moleculele internalizate prin endocitoz sunt livrate prin
vezicule mbrcate de clatrin endosomilor timpurii, unde sunt livrate i hidrolazele acide
provenite din aparatul Golgi. Anumite molecule sunt reciclate ctre membrana plasmatic,
printre care i receptori care au mediat endocitoza, iar altele trec n endosomii trzii: de
exemplu enzimele lizosomale care disociaz aici de receptorii manozo-6-fosfat care sunt
reciclai spre aparatul Golgi sau molecule a cror digestie ncepe deja n interiorul acestor
113

organite care este un mediu acid. Formarea lizosomului matur presupune pierderea unor
componente membranare endosomale trimise ctre membrana plasmatic sau TGN i
scderea pH-ului pn la valoarea optim necesar activitii enzimelor lizosomale. Formarea
lizosomilor pe aceast cale presupune interaciunea ntre calea secretorie prin care sunt
procesate proteinele lizosomale i calea endocitozei prin care substratele hidrolazelor acide
sunt preluate de la exteriorul celulei, prin vezicule mbrcate de clatrin. Exist dou teorii
privind biogeneza lizosomilor pe aceast cale: formarea lizosomilor prin fragmentarea
endosomilor trzii sau formarea unui organit hibrid ntre endosomi trzii i lizosomi, urmat
de condensarea coninutului acestui organit i reciclarea selectiv a constituienilor
membranari.
O alt cale de biogenez a lizosomilor este cea care implic preluarea particulelor
internalizate prin fagocitoz. Celule specializate cum sunt macrofagele i neutrofilele preiau
particule mari cum sunt bacteriile, resturi celulare i celule mbtrnite. Aceste particule,
dup preluare formeaz vacuole de fagocitoz (fagosomi) care fuzioneaz cu lizosomi, n
acest mod coninutul lor este digerat. Fagolizosomii formai pot fi mari i heterogeni,
dimensiunile i forma lor fiind dependent de coninut.
Lizosomii sunt responsabili de autofagie, turn-over-ul gradual al componentelor
celulare. Procesul pare s nceap prin nconjurarea organitului care urmeaz s fie degradat,
de o membran dubl a crei provenien nu este cunoscut. Procesul este reglat ntr-un
anumit mod, organitele sunt selectate precis pentru degradare n lizosomi n scopul
remodelrii celulare (de exemplu, mitocondrii sau peroxisomi senesceni sau membrane ale
REN care au proliferat pentru a-i ndeplini funcia de detoxifiere, iar dup ndeprtarea
xenobioticului sunt i ele nlturate din celulele hepatice). Autofagia este procesul care
ndeprteaz pri nedorite ale celulelor difereniate intervenind n dezvoltarea i sntatea
celular, inclusiv ca adjuvant n mecanismele de aprare mpotriva virusurilor i bacteriilor.
Prin autofagie pot fi ndeprtate agregate proteice mari i chiar organite, situaii n care
capacitatea de aciune a proteazelor celulare este depit.
Modul de reglare al procesului de autofagie i de selectare a organitelor-int este
puin cunoscut, dar sunt implicate mai mult de 25 de proteine diferite n realizarea autofagiei,
care include urmtoarele etape: nucleaia i extensia unei membrane care nconjur o poriune
selectat a citoplasmei, formarea autofagosomului delimitat de o membran dubl, fuziunea
cu lizosomul i digerarea membranei interne a autofagosomului mpreun cu coninutul su.
Sistemul de membrane din care provin veziculele care formeaz nveliul autofagosomilor,
precum i mecanismul de selectare precis a organitelor-int supuse autofagiei trebuie
elucidate.

Figura 79. Electronomicrografia unui autofagosom (stnga) i a unei vezicule endosomale.


Imagine preluat din http://www.helsinki.fi/bioscience/biochemistry/pictures/Figure2IsoEskelinen
114

10.Peroxisomii
10.1. Structura i caracteristicile generale ale peroxisomilor. Peroxisomii sunt
organite delimitate de o singur membran, cu dimensiuni de 0,2-1m, care conin catalaz i
una sau mai multe oxidaze generatoare de H2O2, fiind implicate n metabolismul peroxidului
de hidrogen n celulele eucariote. Au fost descoperite n TEM de Rhodin n anul 1951 i
denumite microcorpuri, iar denumirea de peroxisomi a fost atribuit dup descoperirea
coninutului de uratoxidaz, D-aminoacidoxidaz i catalaz de ctre Christian de Duve n
1967. La om lipsete acid uric oxidaza, ceea ce explic acumulrile de acid uric n gut.

Figura 80. Structura peroxisomilor. Imagine preluat din http://bricker.tcnj.edu/micro

Peroxisomii mamiferelor conin peste 50 de enzime, ficatul i rinichiul fiind organele n care
peroxisomii sunt cei mai abundeni. Sub efectul unor ageni de proliferare, volumul lor n
celul poate s creasc de 7-10 ori. n fibroblaste i amniocite, peroxisomii sunt mult mai
mici, cu diametrul de 0,1-0,25m i sunt mai puin abundeni. n celulele capabile de secreie
steroidic (celulele corticosuprarenalei), n celulele adipoase i n celulele gliale care produc
mielin, peroxisomii nu exist ca entiti distincte, ci sub forma unui reticul peroxisomal
format prin interconectarea peroxisomilor. n celulele n care are loc proliferarea
peroxisomal, exist o reea de peroxisomi, format prin diviziunea activ a acestora.
Descoperiri recente au artat c celulele mutante cu numr mic de peroxisomi i pot reface
numrul caracteristic de peroxisomi, dup introducerea genei ,,wild type n celulele
respective.
10.2. Funciile peroxisomilor. Datorit echipamentului enzimatic obligatoriu,
oxidaze-catalaz, peroxisomii sunt sediul unor transformri metabolice de tip respirator:
respiraia peroxisomal. Oxidarea substratelor n prezena O2 se realizeaz prin intermediul
unor compui peroxidici toxici. Substratul RH2 este oxidat n prezena O2, procesul fiind
catalizat de o oxidaz flavin-dependent:

115

Catalaza utilizeaz H2O2 pentru a oxida substratele proprii: fenoli, acid formic, formaldehida
i alcoolii:

n acest mod fiind ndeprtat peroxidul de hidrogen toxic. Aceast reacie este important n
ficat i rinichi, peroxisomii din celulele acestor organe au rol n detoxifiere. Aproximativ
25% din etanolul consumat este oxidat la acetaldehid prin reacia de mai sus. Atunci cnd se
acumuleaz n celule un exces de H2O2, catalaza convertete peroxidul de hidrogen la ap
prin reacia de mai jos:

O funcie major a peroxisomilor este oxidarea acizilor grai cu lan lung, proces
denumit -oxidare, prin care din molecula AG se ndeprteaz succesiv cte doi atomi de C,
sub form de acetil-CoA, transportat n citosol, unde este utilizat n diferite ci metabolice.
Reacia necesit acil-CoA oxidaz localizat n peroxisomi dar i n mitocondrii, unde are loc
de asemenea -oxidarea AG.
Peroxisomii i mitocondriile reprezint situsurile celulare majore de utilizare a O2, dar
spre deosebire de mitocondrii, unde procesele respiratorii au ca finalitate producerea i
conservarea energiei sub form de ATP, procesele oxidative peroxisomale au ca rezultat
disiparea energiei eliberate n cele dou etape, oxidazic i catalazic, sub form caloric.
-oxidarea peroxisomal are loc n matricea peroxisomului i const n patru reacii
consecutive: oxidarea primar (desaturarea acil-CoA la 2-trans-enoil-CoA), hidratarea
intermediarului nesaturat la L-3-hidroxiacil-CoA, o a doua reacie de oxidare cu formarea
3-cetoacil-CoA i a patra reacie este una de clivaj tiolitic, cu eliberarea acetil-CoA i
acil-CoA, cu 2 atomi de carbon mai scurt dect lanul iniial:

Figura 81. Reaciile -oxidrii peroxisomale.


116

Reaciile prezentate mai sus sunt aceleai att n mitocondrie ct i n peroxisomi, dar
enzimele care le catalizeaz sunt diferite. Prima reacie a -oxidrii peroxisomale este
catalizat de o oxidaz flavin-dependent, care transfer electronii direct oxigenului
molecular, peroxidul de hidrogen produs fiind descompus prin aciunea catalazei.

Acil-CoA

oxidaza
flavin-dependent

Enoil-CoA

Figura 82. Prima etap de oxidare flavin-dependent n -oxidarea peroxisomal i transferul


electronilor de pe FADH2 pe O2, cu formarea peroxidului de hidrogen. Imagine preluat din
Grisham C.M, Garrett R.H. ,,Biochemistry, second edition.

n mitocondrii, electronii FADH2 sunt introdui n lanul transportor de electroni, via


ubiquinon:

Figura 83. Oxidarea FAD dependent- prima etap n -oxidarea mitocondrial este urmat
de transferul electronilor n lanul transportor de electroni i are ca finalitate producereea de
energie nmagazinat n molecula ATP. Imagine preluat din Grisham C.M, Garrett R.H.
,,Biochemistry, second edition.

Urmtoarele dou reacii ale -oxidrii sunt catalizate de o enzim cu funcie de hidrataz i
dehidrogenaz, care are i funcie enoil-CoA-izomerazic (de 3, 2-enoil-CoA izomeraz
care transfer dubla legtur de pe C3 pe C2), permind -oxidarea AG nesaturai. Reacia
final a -oxidrii peroxisomale este catalizat de o tiolaz. Energia provenit din prima
reacie de oxidare din care rezult H2O2 este disipat sub form caloric, n timp ce a doua
reacie de oxidare, care decurge cu reducerea NAD+, permite conservarea energiei prin
electronii de energie nalt ai NADH2, care difuzeaz liber n citosol, membrana
peroxisomilor fiind permeabil pentru aceste molecule (-oxidarea peroxisomal este
eficient doar pe jumtate n ceea ce privete conservarea energiei). Spre deosebire de
117

-oxidarea mitocondrial, care este inhibat de creterea concentraiei mitocondriale de ATP,


-oxidarea peroxisomal este stimulat de creterea concentraiei intracelulare de ATP.
-oxidarea peroxisomal genereaz cldur, fiind implicat n termogenez.
-oxidarea peroxisomal nu are ca finalitate descompunerea complet a substratelor
de AG n acetil-CoA, ci doar o scurtare a lanului atomilor de carbon. Sistemul de enzime
implicate n -oxidare are activitate catalitic maxim asupra esterilor acil-CoA saturai, cu
12-16 atomi de C, apoi activitatea scade treptat pe msura scderii numrului de atomi de C
ai substratului ( peroxisomii mamiferelor nu sunt capabili s oxideze butiril-CoA i ali esteri
ai acizilor grai cu molecul scurt, tiolaza fiind inactiv pentru acil-CoA cu lan mai scurt de
8 atomi de C). Sistemul de enzime ale -oxidrii peroxisomale are o activitate catalitic
sczut i n transformarea esterilor CoA ai acizilor grai cu lan foarte lung, de exemplu
lignoceroil-CoA, dar aceast activitate, dei sczut este foarte important deoarece
mitocondriile nu oxideaz deloc aceste substrate. Produii finali ai -oxidrii peroxisomale
sunt diferii fa de cei ai mitocondriilor, iar destinaia lor este diferit: acetil-CoA, acetatul,
acetilcarnitina, propionil-CoA i acil-CoA cu lan scurt de atomi de C. Peroxisomii sunt
lipsii de enzimele ciclului Krebs sau ale cetogenezei, astfel nct unitile acetil vor difuza
prin membrana peroxisomal, fiind preluate i oxidate n mitocondrii sau utilizate n sinteze
de AG, colesterol i dolicol. Propionil-CoA este oxidat la CO2 n mitocondrii sau pe calea
gluconeogenezei, dup convertire la succinil-CoA. Acil-CoA cu lan scurt pot fi oxidai n
mitocondrii sau esterificai la glicerolipide n RE. -oxidarea peroxisomal furnizeaz
substrate pentru oxidare mitocondriei, dar furnizeaz acetil-CoA proceselor de biosintez
celulare, atunci cnd celulele nu au nevoie de producere de energie.
Carnitinacil-transferazele sunt implicate n mitocondrii n transportul substratelor n
matrice, n timp ce n peroxisomi sunt situate n matricea peroxisomului i faciliteaz
transportul spre citosol al produilor -oxidrii.
Prima reacie n formarea plasmalogenului are loc n peroxisomi. Plasmalogenul este
cel mai abundent fosfolipid al mielinei. Deficitul de plasmalogeni determin anomalii
profunde n mielinizarea celulelor nervoase, care conduc la boli neurologiceadrenoleukodistrofia.
10.3. Importul proteinelor n peroxisomi. Peroxisomii sunt organite lipsite de ADN
i ribosomi proprii, n consecin toate proteinele peroxisomului trebuie importate prin
membrana acestui organit. Proteinele peroxisomale sunt importate datorit existenei unor
secvene semnal de import situate C-terminal i N-terminal, secvene semnal interne nefiind
demonstrate nc.
Un semnal proteic specific (PTS sau semnal-int peroxisomal) alctuit din trei
aminoacizi: serin-lizin-leucin (SKL) a fost identificat n domeniul C-terminal al
proteinelor cu destinaie peroxisomal. De fapt, secvena tripeptidic C-terminal minimal
poate fi definit fr a acoperi ntreaga diversitate ca S(C)A-K(H)R-L, localizat ntre primii
12 aminoacizi C-terminali. De exemplu, D-aminoacidoxidaza de la om are secvena
C-terminal SHL, proteina 2 de transport sterolic la om are AKL, catalaza la om are SHL.
Unele proteine peroxisomale au secvena-semnal de adresare peroxisomal localizat la
captul N-terminal al lanului polipeptidic. Printre aceste proteine sunt i tiolazele, sintetizate
n citosol sub form de precursori. n timpul importului n peroxisomi, presecvena lor este
nlturat de obicei prin proteoliz, dar aceasta nu este o etap obligatorie a importului.
Presecvena tiolazelor conine o secven-semnal de adresare peroxisomal. Dac presecvena
este nlturat, proteina va fi localizat n citosol. Destinaia peroxisomal a tiolazelor este
determinat de o secven-semnal N-terminal de tipul: RLXXXXXQ/HL (cu X sunt notai
aminoacizii care nu au semnificaie pentru adresarea peroxisomal- pot s fie orice
aminoacizi).

118

10.3.1. Mecanismul importului peroxisomal. Sunt cel puin 32 de proteine


peroxisomale cunoscute, denumite peroxine care sunt implicate n importul proteic
peroxisomal, cu consum de energie furnizat prin hidroliza ATP. Exist ci diferite de import
pentru proteinele matricii peroxisomale, respectiv pentru inserarea proteinelor n membrana
peroxisomal. Exist dou subcomplexe cunoscute ca ,,docking (Pex8p, Pex13p, Pex14p,
Pex17p) i RING (Pex2, Pex10p, Pex12p) legate printr-o punte alctuit din Pex8p sau
Pex3p, pentru a forma un complex denumit importomer. Pex3p acioneaz ca ancor
peroxisomal pentru Pex19p. Importomerul este implicat n importul proteinelor n matrice
dar nu i n membrana peroxisomului.
Receptorii PTS1 i PTS2 (Pex5 i Pex7) i proteinele asociate cum este Pex20p
poart proteine cargo din citosol i interacioneaz la nceput cu subcomplexul ,,docking.

Figura 84. Structura importomerului, complexul E2 de reciclare a receptorilor PTS i ATPazele AAA.
Imagine preluat din http://biology.ucsd.edu/labs/subramani/research.htm.

Complexele receptor-cargo intr n matrice sau sunt introduse n membrana


peroxisomului. Pex5p i Pex20p devin proteine peroxisom-asociate i protejate fa de
proteaze chiar i n absena subcomplexului RING al importomerului, ns intrarea lor n
peroxisom este Pex14p-dependent. Proteinele cargo sunt eliberate n matricea
peroxisomului, iar receptorii eliberai sunt exportai n membran, urmnd dislocarea i
reciclarea n citosol. Dislocarea/reciclarea receptorilor necesit activitatea unui complex de
reciclare ,,E2-like ubiquitin-conjugating enzyme, Pex4p, dou AAA ATPaze, Pex1p i
Pex6p, care interacioneaz n manier ATP-dependent i o protein peroxisomal de
membran PEX26 care ofer situsul de legare al Pex6p. Cnd acest complex este afectat se
produce poliubiquitinarea Pex5p i Pex20p, urmat de degradarea lor n proteasom.

119

Figura 85. Mecanismul importului proteic peroxisomal

Mutaii n orice component al importomerului afecteaz importul proteinelor matricii


peroxisomale, sugernd c ntregul importomer este implicat n translocarea proteinelor prin
membrana peroxisomal. Celulele mutante defective n peroxinele Pex10, Pex12 i Pex2 nu
mai pot ncorpora catalaza i alte proteine n peroxisom.
10.4. Biogeneza peroxisomilor. Creterea numrului celular al peroxisomilor poate
avea loc prin diviziunea organitelor preexistente sau peroxisomii pot fi generai ,,de novo.
Proteinele peroxisomale de membran sau matriceale sunt sintetizate la nivelul ribosomilor
citosolici, neataai RER, ulterior fiind importate n peroxisomi. n situaia generrii
,,de novo, proteinele peroxisomale sunt orientate spre o membran precursor prin
secvene-semnal care difer de secvenele PTS. Studii cu celule mutante au evideniat c
Pex19 este receptorul responsabil pentru orientarea proteinelor peroxisomale n membran, n
timp ce Pex3 i Pex16 sunt necesare pentru inseria acestor proteine n membran. Inserarea
proteinelor peroxisomale de membran genereaz membrane care au toate componentele
necesare importului proteinelor din matrice, conducnd la formarea peroxisomilor maturi.
Procesul de proliferare peroxisomal se bazeaz pe diviziunea peroxisomilor preexisteni n
celule.
10.5. Proliferarea peroxisomal. Procesul este indus de o mare varietate de molecule
de natur amfipatic care au fost denumite ageni de proliferare peroxisomal. Proliferatorii
peroxisomali sunt substane de importan farmaceutic, industrial i agricol, sunt acizi
alifatici sau aromatici sau esteri ai acestora . Dar nu orice acid are capacitatea de proliferare
peroxisomal, deci procesul nu este provocat de un semnal structural cum este gruparea
carboxilic. Printre proliferatorii peroxisomali cei mai cunoscui se numr: medicamentele
hipolipemiante din familia fibrailor, substane accesorii adugate n masele plastice (ageni
de plasticizare-ftalai i adipai), unele erbicide (acidul 2,4 diclorofenoxiacetic), medicamente
120

de larg utilizare cum este aspirina, substane comune n alimente ( acidul fitic constituient al
clorofilei, AG din uleiul de pete, etc.). Hormonii steroizi i tiroidieni, precum i acidul
retinoic pot fi considerai proliferatori peroxisomali de natur endogen. Proliferatorii
peroxisomali nu au efect genotoxic, nu au activitate mutagen, deci nu afecteaz integritatea
i structura ADN.
Cu toate c peroxisomii sunt prezeni la majoritatea celulelor eucariote, proliferarea
peroxisomal este limitat la un numr redus de organisme, n primul rnd la mamifere, fiind
remarcabil la roztoarele de laborator (oareci i obolani), dar este slab sau nul la om,
chiar dup expunere prelungit la agenii proliferatori. La organismele n care se manifest,
este un proces specific esutului hepatic, provocnd inclusiv hepatomegalie i creterea
activitii enzimelor implicate n calea -oxidrii AG , la nivel renal proliferarea fiind
atenuat att n ceea ce privete numrul i volumul celular al peroxisomilor, ct i n privina
amplificrii masei relative i a activitii enzimelor.
Agenii de proliferare produc o proliferare profund a peroxisomilor n hepatocitele
roztoarelor i primatelor i creteri marcate ale activitii enzimelor -oxidrii acizilor grai:
acil-CoA oxidaze (ACOX), enoil-CoA hidrataza/3-hidroxiacil-CoAdehidrogenaza (enzima
bi/trifuncional PBE), 3-cetoacil-CoA tiolaza, datorit activrii rapide i coordonate a
transcripiei genelor care codific aceste enzime. Proliferatorii peroxisomali induc la aceste
animale carcinoame hepatocelulare dup expunere ndelungat, datorit rspunsului pleiotrop
tisular-specific indus de aceti ageni. Mai precis, n celulele hepatice cu cretere masiv a
volumului peroxisomilor determinat de proliferatorii peroxisomali, se modific reglarea
transcripiei genelor care codific catalaza i enzimele productoare de H2O2, cum este
ACOX, astfel nct se dubleaz activitatea enzimatic a catalazei, dar crete activitatea
ACOX de aproximativ 20 de ori, ceea ce determin acumulri de H2O2 i ali radicali reactivi
ai oxigenului n celul, urmate de transformri neoplazice celulare.
esuturile umane care nu au un grad semnificativ de rspuns la proliferatorii
peroxisomali, este puin probabil s dezvolte tumori, chiar dup expunere cronic la
proliferatorii peroxisomali. Mecanismele prin care hepatocitele umane sunt protejate de
rspunsul pleiotrop declanat de proliferatorii peroxisomali nu este elucidat. S-au propus mai
multe explicaii care implic: doza de agent de proliferare peroxisomal, farmacocinetica,
biodisponibilitatea acestora, afinitatea agenilor fa de situsurile-int din celulele umane,
distribuia izoformelor PPAR (receptorii activai de proliferatorii peroxisomali) n celuleleint, natura elementului de rspuns la PPAR din structura genelor-int (PPRE).
Activarea transcripiei genelor-int care rspund la agenii proliferatori peroxisomali
este mediat de PPAR , / i care sunt un grup de receptori proteici nucleari care
funcioneaz ca factori de transcripie i regleaz exprimarea genelor. Sunt codificai de gene
diferite i au distribuie tisular specific: PPAR sunt exprimai n ficat, rinichi, inim,
muchi, esut adipos; PPAR/ sunt exprimai marcat n creier, esut adipos i piele; PPAR1
n toate esuturile, PPAR2 mai ales n esutul adipos, iar PPAR3 este exprimat n
macrofage, intestin gros i esut adipos. Descoperirea PPAR a facilitat identificarea PPRE n
amonte (upstream) de gena ACOX de la obolan. PPRE sunt formate din dou secvene direct
repetate AGG(A/T)CA, separate printr-un nucleotid, aa-numitul motiv DR1 care leag cu
mare afinitate heterodimeri PPAR/RXR (heterodimeri ai receptorului activat de proliferatorii
peroxisomali cu receptorul retinoidic X). Formarea acestor heterodimeri este expresia
convergenei cii de proliferare peroxisomal cu calea de semnalizare prin acid retinoic. S-a
descoperit existena PPRE n promotorul genei ACOX umane sub forma unui motiv DR1,
diferena este poziionarea fa de situsul de iniiere a transcripiei, care la obolan este situat
ntre -570 i -558, iar la om, PPRE are urmtoarea secven: AGGTCACTGGTCA i este
situat n amonte de situsul de iniere al transcripiei ntre -1918 i -1906.
Inducia ACOX este markerul pentru aprecierea intensitii rspunsului pleiotrop indus de
121

proliferatorii peroxisomali.
10.5.1. Efectele biologice ale PPAR n celulele umane. Dei n hepatocitele umane
exist PPAR i enzimele -oxidrii peroxisomale i a fost evideniat elementul de rspuns la
PPAR funcional n gena ACOX i alte gene implicate n metabolismul lipidic, i mai mult,
heterodimerii PPAR/RXR de la obolan se leag cu mare afinitate de PPRE de tip DR1
din hepatocitele umane, rspunsul nu include proliferare peroxisomal. Agenii de proliferare
peroxisomal, ca i alte molecule lipofile (steroizii, acidul retinoic, hormonii tiroidieni,
vitamina D3) funcioneaz prin interaciunea cu factorii de transcripie care conin receptori ai
superfamiliei de receptori nucleari.

Figura 86. Rolul PPAR n organismul uman. Dup activarea n citoplasm i formarea heterodimerilor
PPAR-RXR/RAR (receptor retinoidic X /receptor acid retinoic), complexul heterodimeric este
transportat n nucleu i leag specific PPRE (,,peroxisome proliferator response element) localizat n
promotorul genei-int: http:// www.jpp.krakow.pl/journal/archive/0605/articles/01_article.html

Este neclar dac agenii proliferatori peroxisomali activeaz direct PPAR n


esuturile umane. Controlul transcripiei genelor implicate n metabolismul lipidic este extrem
de complex i efectul net al proliferatorilor peroxisomali poate depinde de heterodimerizarea,
legarea/disocierea factorilor nucleari cu efect pozitiv sau negativ asupra transcripiei. hNUC1
(PPAR subtip NUC1) izolat din sarcom osteogen, este un represor al PPAR umane.
Distribuia tisular a hNUC1 nu este elucidat. Exist posibilitatea ca hNUC1 s fie o
izoform PPAR dominant n ficatul uman, iar rspunsul tisular pleiotrop indus de
proliferatorii peroxisomali s fie modulat de incapacitatea acestor liganzi de a depi
mecanismul de represie prin hNUC1. PPAR are un rol important n metabolismul lipidic
prin reglarea expresiei genelor care codific proteine implicate n preluarea AG liberi n
122

celule, n -oxidarea lor i n traficul intracelular al colesterolului, dar i n mecanisme


antiinflamatorii. PPAR i PPAR au un rol central n procesele de difereniere celular
(reglarea invaziei citotrofoblastului i reglarea diferenierii celulelor stem multipotente n
celule precursor). PPAR regleaz diferenierea i creterea adipocitelor i celulelor
musculaturii netede vasculare, are deci funcie anti-proliferativ prin stimularea diferenierii
i inhibarea migrrii celulelor endoteliale n cursul vasculogenezei. Inhibarea creterii
neoplazice prin ligandul TZD (thiazolidenodiona) al PPAR confirm funcia
antiproliferativ. Are activitate antiinflamatorie prin reducerea exprimrii TNF-. Stimuleaz
metabolismul lipidic i al carbohidrailor prin creterea sensibilitii la insulin a esuturilor
periferice i a prelurii i -oxidrii AG.

123

11. Mitocondria
11.1. Caracteristici generale i structur. Mitocondriile sunt organite ntlnite n cele mai
multe celule eucariote, cu diametru de 0,5-10 m, care genereaz cea mai mare parte din
ATPul necesar celulei ca surs de energie. n afara funciei de furnizor de energie,
mitocondria este implicat n procese celulare ca: semnalizare, difereniere celular,
apoptoz, creterea celular i controlul ciclului celular, senescena celular. Numrul de
mitocondrii dintr-o celul variaz n funcie de tipul tisular, n unele tipuri de celule cu
activitate intens, numrul lor poate ajunge pn la cteva mii n funcie de necesarul de
energie (un hepatocit conine 1000-2000 de mitocondrii, care reprezint 1/5 din volumul
celular). Sunt organite proximale miofibrilelor n miocite i nconjoar componentele
structurale ale flagelului spermatozoidului. Sunt asociate citoscheletului celular, un rol
important n stabilirea acestei asocieri avnd vimentina. Mitocondriile formeaz, mpreun cu
citoscheletul, o reea tridimensional ramificat, care influeneaz forma i funciile
mitocondriilor. Mitocondriile sunt delimitate de o membran extern i o membran intern
ntre care exist un spaiu intermembranar. Membrana intern formeaz invaginri denumite
criste care proemin n matricea mitocondrial. Mitocondriile dein genom propriu, genele
mitocondriale codific o parte din proteinele coninute de acest organit, mitocondriile din
miocard fiind constituite din 615 tipuri distincte de proteine cu rol structural i funcional.

Figura 87. Structura mitocondriei: membrana extern, membrana intern cu cristele i matricea
mitocondrial cu ADN i ribosomi. Imagine preluat din Lehninger,D. L. Nelson & M. M. Cox:
Principles of Biochemistry, 3rd edition, 2000

Membrana extern este format din fosfolipide i proteine de membran, ntr-un


raport similar cu cel din membrana plasmatic a eucariotelor (1:1), conine un numr mare de
proteine integrale denumite porine. Porinele formeaz canale care permit moleculelor de
124

5000 Da sau mai mici s difuzeze prin membran. Proteine cu molecula mai mare pot s fie
transportate prin membrana mitocondrial extern dac au o secven-semnal de int
mitocondrial situat la captul N-terminal, care se leag specific de o translocaz din
membrana extern, care le transport activ prin membran. Leziuni ale membranei
mitocondriale externe determin difuzia proteinelor n citosol, declannd apoptoza.
Membrana mitocondrial extern se poate asocia cu membrana RE, formnd o structur
denumit MAM (mitocondrie asociat membranei RE), cu implicare n semnalizarea prin
calciu i n transferul de lipide ntre RE i mitocondrie.
Spaiul intermembranar este delimitat ntre membrana mitocondrial extern i cea
intern. Datorit permeabilitii membranei externe pentru molecule mici i ioni, concentraia
acestora n spaiul intermembranar este aceeai ca i n citosol.
Membrana mitocondrial intern formeaz numeroase expansiuni denumite criste,
care i mresc suprafaa funcional, inclusiv activitatea ATP-sintetazic. n mitocondriile
hepatocitelor, datorit cristelor, suprafaa membranei interne este de cinci ori mai mare dect
a membranei externe, iar n mitocondriile celulelor musculare care necesit mai mult consum
de energie furnizat de ATP, membrana intern formeaz mai multe criste. Membrana
mitocondrial intern conine proteine care ndeplinesc urmtoarele funcii: reaciile redox
din fosforilarea oxidativ, generarea de ATP (ATP sintetaza), transportul metaboliilor n i
din matrice, importul proteic mitocondrial, fuziunea i fisiunea mitocondrial. Raportul
proteine: fosfolipide este mai mare n greutate molecular dect cel al membranei externe
mitocondriale, de 3:1, adic 1 molecul proteic la 15 molecule de fosfolipide. Membrana
mitocondrial intern conine un fosfolipid de tip special denumit cardiolipin, care are patru
AG n molecul, contribuind la proprietatea membranei interne mitocondriale de a fi
impermeabil, alturi de o alt caracteristic structural: lipsa porinelor. n consecin,
proteinele sunt transportate prin membrana mitocondrial intern datorit unor complexe
translocaz (TIM) sau datorit Oxa1. Exist un potenial de membran de-a lungul
membranei mitocondriale interne, datorat activitii enzimelor lanului transportor de
electroni.
Matricea mitocondrial este spaiul delimitat de membrana intern, implicat n
producerea ATP de ctre ATP sintetaza localizat n membrana mitocondrial intern.
Matricea conine sute de enzime, cele mai importante fiind cele ale oxidrii piruvatului i
-oxidrii AG, precum i enzimele ciclului acizilor tricarboxilici (Krebs). n matrice se
gsesc ribosomii mitocondriali, ARNt, i cteva copii ale ADN genomic mitocondrial.
ADNul uman mitocondrial este o molecul circular, ca la procariote, format din
16.569 pb, conine 37 de gene care codific 22 ARNt, 2 ARNr i 13 molecule proteice
integrate n membrana mitocondrial intern, alturi de proteine codificate de gene din
nucleul celular. O mitocondrie conine 2-10 copii de ADN mitocondrial. Mitocondriile dein
propriul aparat de sintez proteic, n mitocondrie asamblndu-se ribosomi 70 S, ca n
celulele procariote i nu 80S, cum sunt cei asamblai n celul, prin sintez n nucleol.
11.2. Funciile mitocondriilor.
11.2.1. Sinteza ATP prin fosforilarea ADP este funcia major a
mitocondriilor, reflectat prin numrul mare de proteine din membrana mitocondrial intern,
implicate n aceast funcie. Prin glicoliz, n citosol se formeaz piruvat, care este transportat
activ prin membrana mitocondrial intern n matrice, unde este oxidat, cu formare de CO2,
acetil-CoA i NADH. Acetil-CoA este substrat pentru ciclul acidului citric denumit i ciclul
acizilor tricarboxilici sau ciclul Krebs. Enzimele ciclului Krebs sunt localizate n matricea
mitocondrial, cu excepia succinat dehidrogenazei, care este legat la membrana
mitocondrial intern. n ciclul Krebs, acetil-CoA este oxidat la CO2 i sunt produi
cofactori redui (trei molecule de NADH i o molecul de FADH2), care reprezint sursa de
125

electroni din lanul transportor de electroni. Energia redox de la NADH i FADH2 este
transferat oxigenului molecular n mai multe etape din lanul transportor de electroni.
NADH i FADH2 sunt produse i n citosol, n cursul glicolizei, i sunt importai prin
antiportul malat-aspartat sau prin sistemul glicerolfosfat. Lanul transportor de electroni
cupleaz reacia chimic dintre un donor de electroni (NADH,FADH2) i un acceptor de
electroni (O2) cu transferul de protoni prin membrana mitocondrial intern printr-un set de
reacii biochimice intermediare.

Figura 88. Funcia major a mitocondriei este de a utiliza NAD redus i FAD redus rezultai din
glicoliz sau -oxidarea AG pentru producerea de energie nmagazinat n moleculele ATP. Imagine
preluat din http://campus.queens.edu/faculty/jannr/index.htm

NADH dehidrogenaza, citocrom c reductaza i citocrom c oxidaza realizeaz transferul de


electroni i eliberarea energiei care este utilizat pentru a pompa H+ n spaiul
intermembranar. Acest proces este eficient, dar o mic parte din electroni pot reduce
prematur oxigenul, formnd specii reactive de oxigen, cum sunt radicalii superoxid, implicai
n reducerea funciilor mitocondriale asociat procesului de mbtrnire. Pe msur ce crete
concentraia protonilor n spaiul intermembranar, este stabilit un gradient electrochimic de o
parte i de alta a membranei interne. Protonii se rentorc n matrice prin ATP sintetaz, iar
energia lor este utilizat pentru sinteza ATP din ADP i Pi. Acest proces, denumit
chemiosmoz a fost descris de Peter Mitchell care a primit premiul Nobel pentru chimie n
1978. n 1997, Paul D. Boyer i John E. Walker primesc premiul Nobel pentru clarificarea
mecanismului de funcionare a ATPsintetazei.

126

Figura 88. Sinteza de ATP, producerea de radicali superoxid prin inhibarea transportului de electroni
la nivelul complexului III i producerea de cldur. Imagine preluat din: Brownlee, M. ,,Biochemistry
and molecular cell biology of diabetic complications Nature 414 (2001), p.813-820

11.2.1.1. Transportorii de electroni. Transferul electronilor de la o molecul cu


energie mare (donor) la o molecul cu energie mic (acceptor) poate fi separat spaial ntr-o
serie de reacii redox intermediare care alctuiesc un lan transportor de electroni. Primii
transportori implicai n transportul de electroni n membrana mitocondrial intern sunt
NAD+/NADH, FAD/FADH2 i FMN (este un grup prostetic al unor flavoproteine). FMN
(FAD) accept 2 e- + 2 H+ i formeaz FMNH2 (FADH2). FMN, legat la situsul activ al unor
enzime accept 1 e- pentru a forma radicalul semiredus semiquinon. Semiquinona accept al
doilea e- pentru a forma FMNH2. Din moment ce poate accepta sau ceda 1 sau 2 e-, FMN are
un rol important n medierea transferului de e- ntre transportori care transfer 2e- ( de
exemplu, NADH) i transportori care accept doar 1e-(de exemplu Fe+++). Coenzima Q
(ubiquinona) este extrem de hidrofob, avnd un lan poliizoprenic. Inelul quinon poate fi
redus la quinol n reacia:
Q + 2 e- + 2 H+  QH2
Atunci cnd este legat n situsuri specifice n complexele respiratorii, CoQ poate
accepta 1 e- i formeaz un radical semiquinon (Q-). Deci, ca i FMN poate media ntre
donori/acceptori de 1 e- & 2 e- i funcioneaz ca un transportor mobil n interiorul
membranei mitocondriale. Hemul este grupul prostetic al citocromilor i conine un atom de
fier n inelul porfirinic. Gruparea hem a celor trei clase de citocromi difer prin substituienii
inelului porfirinic i numai hemul c este legat covalent la protein prin legturi de tip tioester
stabilite cu resturile de cistein. Fierul hemului poate ceda i accepta 1 e- prin tranziia ntre
ionul feric i ionul feros: Fe+++ + e-  Fe++ . Inelul porfirinic formeaz un plan, iar fierul
127

hemului este legat la doi liganzi axiali, situai deasupra i dedesubtul planului hem.
Citocromii sunt proteine cu grup prostetic hem, care absorb lumina la lungimi de und
caracteristice. Schimbrile de absorban n cursul proceselor de oxidoreducere ale fierului
din hem furnizeaz o baz pentru monitorizarea statutului redox al hemului. Citocromul c
este o molecul proteic mic, hidrosolubil, cu un singur grup hem, n timp ce
citocromii a i a3 sunt de fapt grupuri hem simple, neataate unui polipeptid. Citocromul c
posed resturi de lizin n jurul gruprii hem, care pot interaciona cu resturi anionice din
structura membranei, atand citocromul c la membran atunci cnd cedeaz sau accept
electroni. Centrii fier-sulf (Fe-S) sunt grupri prostetice care conin 2,3,4 sau 8 atomi de fier
complexai cu S elementar sau cu S provenit din cistein. Un asemenea centru cu 4 Fe poate
alterna ciclic ntre strile redox Fe+++ (oxidat) + 1 e- Fe++ (redus). Proteinele cu funcie
de transfer de electroni pot conine mai muli centri Fe-S. Aceti centri Fe-S transfer doar un
electron chiar dac conin unul sau mai muli atomi de fier, datorit strnsei proximiti a
atomilor de fier. Cei mai muli constituieni ai lanului respirator sunt ancorai n membrana
mitocondrial intern, iar invaginrile n matrice denumite criste cresc suprafaa membranei.
11.2.1.2. Structura lanului transportor de electroni. Lanul transportor de
electroni este format din 4 complexe, n interiorul fiecrui complex electronii trec secvenial
prin mai muli transportori de electroni. Altfel spus, electronii sunt transferai de la NADH la
O2 prin mai multe complexe moleculare din interiorul membranei mitocondriale:
complexul I, III i IV plus CoQ i citocromul c. Exist situsuri de legare pentru CoQ n
interiorul complexelor cu care aceasta interacioneaz, CoQ fiind un cru mobil, care
difuzeaz liber n membrana mitocondrial. Citocromul c este rezident n spaiul
intermembranar i se leag alternativ la complexele III i IV n cursul transferului de
electroni. Nu exist dovezi ale existenei unor agregate supramoleculare stabile care s
conin mai multe complexe. Complexele individuale ale lanului respirator mitocondrial
au fost de altfel izolate i compoziia lor a fost determinat. Inhibitorii lanului respirator
includ: rotenona care blocheaz complexul I, antimicina A care blocheaz transferul de
electroni n complexul III, CN- & CO inhib complexul IV.
Complexul I (NADH dehidrogenaza sau NADH ubiquinon oxidoreductaza)
catalizeaz oxidarea NADH i reducerea CoQ, cu transferul de pe NADH a 2 electroni i
formarea produsului redus, ubiquinol:
NADH + H+ + Q NAD+ + QH2
Complexul I mut 4 protoni prin membran, producnd gradient protonic.
Complexul I nu este numai situsul de intrare a electronilor n lanul respirator, este i situsul
de producere a radicalilor liberi superoxid. Complexul I al mamiferelor are forma literei L,
include 46 de proteine, grupul prostetic FMN i centre Fe-S. Domeniul periferic care conine
FMN i accept 2e- de la NADH proemin n matricea mitocondrial. Centrii Fe-S sunt
localizai n domeniul periferic hidrofil, unde formeaz o cale de transfer al e- de la FMN la
coenzima Q. Situsul de legare al CoQ este aproape de interfaa dintre domeniul periferic i
cel intramembranar. Transferul iniial de electroni este:
NADH + H+ + FMN  NAD+ + FMNH2
FMNH2 + (Fe-S)ox  FMNH + (Fe-S)red + H+
Apoi FMN este reoxidat prin transferul electronului pe urmtorul centru fier-sulf :
FMNH + (Fe-S)ox  FMN + (Fe-S)red + H+
128

Electronii trec printr-o serie de centri fier-sulf i sunt transferai coenzimei Q, care accept
2 e- i preia 2 H+ cu formarea coenzimei Q reduse (QH2).
Complexul II. FAD, acceptorul iniial de e-, este redus la FADH2 concomitent cu
oxidarea succinatului la fumarat. FADH2 este apoi reoxidat prin transferul electronilor
coenzimei Q, printr-o serie de trei centri fier-sulf, cu formarea QH2. Coenzima Q redus este
reoxidat via complex III, furniznd o cale de transfer a electronilor de la succinat n lanul
respirator. Succinatdehidrogenaza ciclului Krebs mai este denumit complex II sau succinatCoQ reductaz.
FAD FeScentru 1 FeScentru 2 FeScentru 3 CoQ

Complexul III (complex citocrom bc1) accept electroni de la coenzima QH2 care este
generat prin transferul electronilor n complexele I & II. QH2 transfer secvenial electronii
ctre 2 molecule de citocrom c, cu transformarea quinolului n quinon. Prin oxidarea
quinolului se formeaz un gradient protonic: n total 6 protoni- 2 protoni reduc quinona la
quinol i 4 protoni sunt eliberai de pe 2 molecule de quinol. Complexul bc1 nu acioneaz ca
o pomp de protoni, gradientul de protoni se formeaz prin absorbie/eliberare asimetric a
protonilor. Citocromul c1, un grup prostetic din complexul III reduce citocromul c, care este
donorul de electroni ctre complexul IV.
Complexul IV (citocrom c oxidaza) preia 4 electroni de la 4 molecule de citocrom c i i
transfer pe oxigenul molecular (O2), cu producerea a dou molecule de ap. n acelai timp,
mut 4 protoni prin membran, producnd gradient protonic. Citocrom c oxidaza este format
din domenii transmembranare de tip -helix i este sediul urmtoarei reacii:
O2 + 4 H+ + 4 e-  2 H2O
Cei 4 electroni sunt transferai n complex de pe citocromul c simultan. Complexul IV
conine hem a & hem a3, CuA (2 atomi de Cu adiaceni) & CuB. O2 reacioneaz la un centru
binuclear constnd din hemul a3 i CuB. Electronii intr n complexul IV deodat, din
citocromul c fiind transferai la CuA. Apoi trec via hem spre centrul binuclear:
cit c CuA hem a hem a3/CuB
O2 se leag la hemul a3, adiacent CuB i are loc transferul electronilor pe O2.
O2 + 4 H+ + 4 e-  2 H2O

Teoria chemiosmotic propus de Peter D. Mitchell, explic cuplarea transportului de


electroni cu fosforilarea oxidativ prin gradientul de protoni de o parte i de alta a membranei
mitocondriale interne. Efluxul de protoni creeaz un gradient electrochimic i de pH.
Gradientul de protoni este utilizat pentru sinteza ATP n complexul F0F1 al ATPsintetazei
ATP sintetaza este considerat complexul V al lanului transportor de electroni. Componenta
F0 a ATP sintetazei este un canal ionic prin care protonii sunt transportai napoi n matricea
129

mitocondrial, i energia liber produs n timpul generrii formelor oxidate ale


transportorilor de electroni (NAD+ i Q) este eliberat, fiind utilizat n sinteza ATP
catalizat de componenta F1 a complexului.
11.2.2. Producerea de cldur. n anumite condiii, protonii pot reintra n matricea
mitocondrial fr a trece prin ATP sintetaz i fr a contribui la sinteza ATP. Acest proces
este datorat difuziei facilitate a protonilor n matrice. Energia potenial a gradientului
electrochimic de protoni este eliberat sub form de cldur. Procesul este mediat de un canal
proteic denumit termogenin sau UCP1 (uncoupled protein1), a fost descoperit n esutul
adipos brun, care exist la natere i dispare cu vrsta i este responsabil de termogenez n
afara esutului muscular.
11.2.3. Funcia de depozitare a calciului. Concentraia intracelular a calciului
regleaz diferite reacii din celul i este important n semnalizarea celular. Mitocondriile
pot depozita calciu, intervin n homeostazia celular a calciului, prin preluare rapid a
calciului din citosol. Principalul depozit celular de calciu este RE i exist o interrelaie
semnificativ ntre mitocondrii i RE n privina calciului. Calciul este preluat n matrice de
un uniport din membrana mitocondrial intern care este activat prin potenialul de
membran. Eliberarea calciului din mitocondrie n citosol are loc printr-o protein de schimb
Na+-Ca++ sau prin cile de eliberare ale calciului induse de calciu. Consecutiv eliberrii, au
loc creteri ale concentraiei citosolice a calciului care activeaz proteine aparinnd cilor de
semnalizare celular (mesageri secundari), care coordoneaz procese celulare cum este
eliberarea neurotransmitorilor din neuroni sau a hormonilor din celulele endocrine.
Mitocondriile au un rol important n alte procese: reglarea potenialului membranar,
apoptoz, reglarea proliferrii celulare, reglarea metabolismului celular, sinteza hemului sau
a steroizilor. n ficat, mitocondriile conin enzime care intervin n metabolizarea amoniacului.
11.3. Replicarea mitocondriilor. Mitocondriile se divid prin fisiune binar, ca i
celulele bacteriene. Spre deosebire de bacterii, mitocondriile pot fuziona. n celulele umane,
ADN-ul mitocondrial se replic i mitocondriile se divid mai ales ca rspuns la necesarul de
energie al celulei, i mai puin sincron cu ciclul celular. Cnd necesarul de energie al celulei
crete, mitocondriile cresc i se divid, iar cnd necesarul de energie scade, mitocondriile sunt
distruse i devin inactive. Mitocondriile sunt distribuite randomic n celulele-fiice rezultate n
urma diviziunii, prin diviziunea citoplasmei. Genele mitocondriale se motenesc pe linie
matern, din ovul, spre deosebire de genele nucleare care provin att din nucleul
spermatozoidului ct i din nucleul ovulului. Mitocondriile paternale sunt marcate prin
ubiquitinare i distruse n celulele embrionului. Zigotul conine puine mitocondrii care se vor
divide pentru a popula celulele organismului adult. Motenirea uniparental las puine anse
pentru recombinarea genetic, existena recombinrii genetice n ADN mitocondrial uman
este controversat.
11.4. Relaia cu procesul de mbtrnire. Pierderi de electroni din lanul respirator
mitocondrial pot determina formarea speciilor reactive ale oxigenului, avnd ca rezultat un
stres oxidativ semnificativ la nivelul mitocondriilor, cu o rat nalt a mutaiilor n ADN
mitocondrial. Stresul oxidativ determin un cerc vicios: mutaii n ADN mitocondrial,
anomalii structurale ale enzimelor i consecutiv, stres oxidativ. esuturile persoanelor
vrstnice dein mitocondrii cu activitate sczut a proteinelor din lanul respirator
mitocondrial. Boala Parkinson este asociat cu deleii n genomul mitocondrial care conduc la
un nivel ridicat de radicali superoxizi, iar stresul oxidativ determin moartea celulelor
neuronale. (vezi Capitolul 16. ,,Apoptoza)

130

12. Semnalizarea celular


Moleculele-semnal controleaz procesele metabolice, creterea i diferenierea
celular, sinteza i secreia proteinelor, homeostazia intra i extracelular. Moleculele-semnal
sunt produse de anumite celule i produc un rspuns specific n celulele-int care au
receptori pentru aceste molecule-semnal. Din punct de vedere chimic, moleculele-semnal
sunt o clas extrem de heterogen care include molecule mici de tipul acetilcolinei sau
molecule mai mari cum sunt proteinele, molecule hidrofile care interacioneaz cu receptorii
specifici de pe suprafaa membranei celulare sau molecule hidrofobe cum sunt steroizii,
retinoizii, tiroxina, care difuzeaz prin bistratul lipidic al membranelor celulare i se leag de
receptori intracelulari. Comunicarea intercelular prin semnalizare ncepe printr-o
interaciune de tip receptor-ligand, datorit complementaritii de structur dintre moleculasemnal (ligandul) i un situs sau un domeniu structural din molecula receptorului.
12.1. Tipuri de semnalizare celular. n funcie de distana la care acioneaz
moleculele-semnal, exist trei tipuri de semnalizare celular:
Semnalizarea endocrin este procesul prin care moleculele-semnal denumite hormoni
acioneaz asupra unor celul-int situate la distan de celulele organelor endocrine care au
sintetizat i secretat hormonii. Moleculele-semnal, adic hormonii endocrini sunt transportai
la celulele-int prin fluxul sangvin sau prin alte fluide extracelulare.
n semnalizarea paracrin, moleculele-semnal sunt eliberate de celule aflate n
proximitatea celulelor-int: eliberarea neurotransmitorilor la nivelul sinapselor
interneuronale sau a sinapselor neuron-celul muscular sau aciunea unor factori de cretere.
Prin semnalizarea autocrin, celulele rspund la molecule-semnal pe care le elibereaz
chiar ele. Anumii factori de cretere acioneaz n acest mod, fiind un tip de semnalizare
obinuit n celulele tumorale, care se caracterizeaz prin supraexprimarea i eliberarea unor
factori de cretere care stimuleaz propria proliferare i a celulelor adiacente, cu creterea
masei tumorale.
Exist molecule-semnal care sunt molecule integrale ale membranei unei celule i
care se leag de receptori de pe suprafaa unor celule adiacente, declannd diferenierea
acestora. Un alt caz particular este cel al moleculelor-semnal care pot aciona asupra unor
celule-int aflate la distan scurt sau lung: epinefrina este un neurotransmitor implicat n
semnalizare paracrin i un hormon endocrin.
12.2. Semnalizarea prin receptori de suprafa celular. Acest tip de semnalizare
celular implic: sinteza i eliberarea moleculei-semnal de ctre celule, transportul
moleculelor-semnal la celulele-int, legarea moleculei-semnal de un receptor proteic
specific, urmat de activarea receptorului printr-o modificare conformaional, declanarea
unei ci intracelulare de traducere a semnalului de ctre receptorul activat i modificri
specifice ale funciei celulare. Acest tip de semnalizare celular este specific unor hormoni
proteici, factori de cretere, neurotransmitori care sunt liganzii care prezint o
complementaritate structural cu un anumit domeniu al receptorului proteic.
Rspunsul unei celule la semnale externe depinde de receptorii pe care i posed, de
cile de traducere ale semnalului pe care legarea semnalului la receptor le activeaz i de
procesele celulare afectate. Fiecare receptor leag specific o anumit molecul-semnal sau un
grup restrns de molecule nrudite chimic. Moleculele-semnal pot ns s se lege la mai multe
131

tipuri de receptori, aparinnd diferitelor tipuri celulare, ceea ce are ca rezultat activarea unor
ci diferite de traducere a semnalului i, n consecin rspunsuri celulare diferite.
De exemplu, acetilcolina se leag de receptorul specific de pe suprafaa celulei
musculare striate i are ca efect declanarea contraciei prin activarea unui canal ionic cu
poart dependent de ligand. Eliberarea acetilcolinei n apropierea unei celule musculare
cardiace ncetinete ritmul contraciei prin activarea unui receptor cuplat cu proteina G, iar
legarea acetilcolinei pe receptorul unei celule din acinii pancreatici declaneaz exocitoza cu
eliberarea granulelor secretorii care conin enzimele digestive. Deci, receptorii proteici de
suprafa celular se caracterizeaz prin specificitate de legare a unui anumit ligand,
complexul receptor-ligand rezultat prezint o specificitate efectoare pentru c mediaz un
rspuns celular specific.
Exist receptori de suprafa care dei leag diferii liganzi, declaneaz acelai
rspuns celular: epinefrina, glucagonul, ACTH se leag de membrii diferii ai familiei de
receptori cuplai cu proteina G de pe suprafaa hepatocitului, dar iniiaz aceeai cale de
semnalizare intracelular, sinteza AMP ciclic. Acest mesager secundar regleaz diferite ci
metabolice, deci cei trei hormoni au acelai efect asupra celulei hepatice.
Rspunsul celular la moleculele-semnal depinde de numrul de receptori de pe
suprafaa unei celule, de afinitatea acestora fa de anumii liganzi i de concentraia
ligandului n proximitatea celulei-int. Reglarea numrului de receptori specifici pentru o
anumit molecul-semnal influeneaz sensibilitatea celulei la un anumit semnal i
influeneaz funciile i dezvoltarea celulei. Endocitoza poate reduce semnificativ numrul de
receptori expui pe suprafaa unei celule, determinnd reducerea rspunsului celular n
condiiile unei concentraii constante de molecule-semnal.
Legarea moleculelor-semnal extracelulare denumite ,,primul mesager de receptorii
specifici membranari conduce la o cretere sau la o descretere a concentraiei unor moleculesemnal intracelulare, cu greutate molecular mic denumite ,,mesageri secundari:
3,5AMPciclic (cAMP), 3,5GMPciclic (cGMP), 1,2 diacilglicerol (DAG),
inozitol 1,4,5trifosfat (IP3), Ca2+, inozitolfosfolipidele membranare. Activarea receptorului
prin legarea semnalului extracelular declaneaz transducia, calea de semnalizare
intracelular cu modificarea concentraiei intracelulare a mesagerului secundar care va
determina alterarea structurii i funciei unor proteine (enzime sau proteine cu alte funcii).
12.2.1. Receptorii cuplai cu proteine G
12.2.1.1. Receptorii cuplai cu proteine G care au ca efector adenililciclaza.
Proteinele G traductoare de semnal sunt trimeri constituii din trei subuniti: , i .
Subunitatea G este o GTPaz care alterneaz ntre forma activ legat de GTP i forma
inactiv legat de GDP. Activarea receptorului prin legarea moleculei-semnal determin
activarea proteinei G, care la rndul ei regleaz activitatea unei alte proteine denumit
protein efectoare. Astfel de proteine efectoare sunt canale ionice din membrana celular sau
enzime care catalizeaz formarea mesagerilor secundari: cAMP, DAG, IP3, etc.
Heterogenitatea cii de semnalizare avnd ca traductor proteina G se explic prin faptul c
genomul uman conine gene care codific 27 G, 5 G i 13 G, care prin combinare n
trimeri formeaz clasa proteinelor G. n stare de repaus, cnd receptorul este liber,
subunitatea G este legat de GDP i complexat cu G. Formarea complexului receptorligand determin schimbul de nucleotide i GGTP disociaz de pe G, dar subunitile
rmn ancorate la membran. Activarea proteinei G determin modificarea activitii
proteinei efector, ns activarea dureaz doar cteva secunde, ntruct activitatea unei GTPaze
determin hidroliza GTP legat de G i inactivarea proteinei G.
Epinefrina mediaz rspunsul organismului la frig sau efort intens, cnd esuturile au
o nevoie crescut de a cataboliza glucoz i acizi grai pentru a produce ATP. Eliberarea
glucozei prin glicoliz i a acizilor grai prin lipoliz este declanat prin legarea epinefrinei
132

sau norepinefrinei la receptorul -adrenergic de pe suprafaa celulelor hepatice, respectiv de


pe suprafaa adipocitelor. Legarea epinefrinei la receptorul specific -adrenergic din
membrana miocitelor crete ritmul contraciilor inimii, ceea ce produce un flux sangvin
intens la nivelul esuturilor. Prin legarea de receptorii specifici -adrenergici din musculatura
neted, determin relaxarea acesteia. Epinefrina are receptori specifici 2-adrenergici n
musculatura neted din tunica vaselor sangvine din tractul intestinal, piele i rinichi, iar
formarea complexului receptor-ligand n acest caz, determin constricie arteriolar i
reducerea fluxului sangvin la nivelul acestor organe. Toate aceste efecte au ca rezultant
producerea i furnizarea de energie necesar musculaturii striate n condiii de stress
menionate. Receptorii epinefrinei sunt receptori cuplai cu protein G, ambele subtipuri de
receptori 1 i 2 sunt cuplai cu proteina G stimulatoare (GS), care activeaz enzima
adenililciclaza, care la rndul ei determin creterea concentraiei intracelulare de cAMP.
Alte dou subtipuri de receptori -adrenergici ai epinefrinei, 1 i 2, sunt cuplai cu alte
tipuri de proteine G: 1 cu proteina Gi care inhib adenililciclaza, 2 cu proteina Gq activeaz
un alt efector, fosfolipaza C, care determin creterea concentraiei intracelulare a altor
mesageri secundari: IP3 i DAG.
Anumite toxine bacteriene conin subuniti care penetreaz membrana plasmatic a
celulelor-gazd i catalizeaz modificarea chimic a proteinei GsGTP, care mpiedic
hidroliza GTP, Gs rmne n stare activ, activnd continuu adenilatciclaza i n lipsa
stimulului hormonal. Toxina holeric i enterotoxinele E.coli acioneaz n acest mod la
nivelul celulelor epiteliului tractului intestinal, consecina fiind pierderea apei i electroliilor
la nivelul lumenului intestinal cu diaree apoas. Toxina pertussis (Bordetella pertussis)
determin modificri chimice ale Gi , care mpiedic eliberarea GDP de pe subunitatea G,
blocnd proteina Gi n stare inactiv, ceea ce are ca efect creterea concentraiei intracelulare
a cAMP n celulele epiteliale ale tractului respirator, cu pierdere de fluide i electrolii i
secreie de mucus.
Datorit cuplrii la proteina G, receptori specifici unor hormoni diferii activeaz
aceeai cale de semnalizare celular i produc aceleai rspunsuri celulare: glucagonul i
epinefrina se leag la receptori diferii de pe suprafaa hepatocitelor, dar ambii receptori sunt
cuplai i activeaz aceeai protein GS care activeaz adenililciclaza i declaneaz aceleai
rspunsuri celulare.
Efectele cAMP sunt mediate prin proteinkinaza A (PKA), care este denumit
proteinkinaz dependent de cAMP. PKA este un tetramer format din dou subuniti
reglatoare R i dou subuniti catalitice C. Cele dou subuniti reglatoare au cte dou
situsuri distincte pentru legarea cAMP, iar legarea cAMP la ambele situsuri determin
demascarea subunitilor catalitice i activarea kinazei. Rspunsul celular este dependent de
izoforma particular PKA care se activeaz i de substraturile PKA exprimate n respectiva
celul. De exemplu, epinefrina care activeaz calea de semnalizare intracelular care
determin creterea concentraiei AMP ciclic i activarea PKA, are aceleai efecte n celula
muscular i hepatic: activarea glicogenolizei i inhibarea glicogenogenezei, ns n
adipocite, activarea PKA indus de epinefrin determin fosforilarea i activarea fosfolipazei
care catalizeaz hidroliza trigliceridelor, cu mobilizarea AG. Activarea PKA n celulele
ovariene prin FSH sau LH determin sinteza de estrogeni i progesteron. PKA acioneaz
asupra unor substraturi extrem de diferite, dar ntotdeauna fosforileaz n substrat un rest de
serin sau treonin din aceeai secven de aminoacizi: X-Arg-(Arg/Lys)-X-(Ser/Thr)-,
unde X semnific orice aminoacid, iar semnific un aminoacid hidrofob. Prin fosforilarea
enzimelor acestea trec n form activ sau, din contr, inactiv. De exemplu, PKA
fosforileaz i inactiveaz glicogensintetaza, dar intensific i degradarea glicogenului prin
fosforilarea i activarea glicogenfosforilazkinazei (GPK), care la rndul ei fosforileaz i
activeaz glicogenfosforilaza care degradeaz glicogenul. ntregul proces se oprete cnd
133

epinefrina este ndeprtat i nivelul intracelular de cAMP se prbuete, inactivnd PKA.


O protein fosfataz ndeprteaz gruprile fosfat de pe glicogensintetaz activnd-o, i de pe
formele fosforilate ale glicogenfosforilazkinazei i glicogenfosforilazei, inactivndu-le.
Aceast proteinfosfataz este inhibat atunci cnd PKA este activ, deoarece PKA
fosforileaz i activeaz un inhibitor al fosfoproteinfosfatazei. n condiiile unei concentraii
intracelulare sczute de cAMP, PKA este inactiv, inhibitorul nu este fosforilat i
fosfoproteinfosfataza este activ. Este stimulat sinteza glicogenului i inhibat degradarea
lui.
Creterea concentraiei citosolice a cAMP stimuleaz exprimarea unor gene care
conin o secven denumit element de rspuns la cAMP (CRE) care leag o form fosforilat
a factorului de transcripie denumit proteina de legare a CRE (CRE binding protein sau
CREB), situat n nucleu. Legarea neurotansmitorilor sau hormonilor la receptori cuplai cu
proteina GS, activeaz adenililciclaza, determinnd o cretere a cAMP i eliberarea
consecutiv a PKA activ. Anumite subuniti PKA sunt translocate n nucleu i fosforileaz
serina din poziia 133 a proteinei CREB. CREB fosforilat interacioneaz cu un coactivator
CBP/300 i se leag de secvenele CRE ale unor gene int stimulnd transcripia acestora.
Afinitatea receptorului pentru hormon scade cnd GDP legat la GS este nlocuit cu
GTP. GTP este rapid hidrolizat, se ajunge la inactivarea adenililciclazei i la scderea
produciei de AMP ciclic. Pe de alt parte, cAMP fosfodiesteraza hidrolizeaz cAMP, ceea ce
determin ntreruperea rspunsului celular. Rspunsul celular poate fi suprimat i printr-un
mecanism de feedback prin produs final, datorat fosforilrii unor resturi de serin i treonin
din domeniul citosolic al proteinei GS de ctre PKA activ. Astfel, expunerea prelungit a
celulei la aciunea unui hormon determin desensibilizarea receptorului -adrenergic datorit
fosforilrii GS. Aceast desensibilizare prin feedback, prin fosforilare catalizat de PKA,
poate afecta orice receptor cuplat cu GS, care leag diferii liganzi. Fosforilarea unor
aminoacizi din domeniul citosolic al receptorului -adrenergic, catalizat de kinaza
receptorului -adrenergic (BARK), are loc numai n prezena ligandului legat de receptor,
afecteaz exclusiv receptori -adrenergici activai. Resensibilizarea receptorilor se produce
prin defosforilri datorate unor fosfataze constitutive. Expunerea celulelor la o cantitate din
ce n ce mai mare de hormon determin, datorit acestor mecanisme, o activare mai slab a
cilor de semnalizare celular dect dac celula este expus la un hormon dup ce n mediul
extracelular hormonul a lipsit. Dac molecula-semnal este complet ndeprtat, receptorul
devine complet defosforilat i poate rspunde cu maximum de sensibilitate chiar la
concentraii sczute de hormon.
Un alt mecanism de reglare a receptorilor -adrenergici este -arestina, o protein
citosolic ce se leag la receptorii fosforilai de BARK i inhib complet interaciunea lor cu
proteinele GS. -arestina se leag i de moleculele de clatrin i proteinele AP care mbrac
veziculele de endocitoz, determinnd internalizarea prin endocitoz a receptorilor i
scderea numrului lor la suprafaa celular.
12.2.1.2. Receptorii cuplai la proteine G care regleaz canale ionice. Receptorii
neurotransmitorilor sunt receptori cuplai la proteine G, iar efectorii unor astfel de receptori
sunt canalele de Na+ i K+ din membrana postsinaptic. Neurotransmitorii se leag la aceti
receptori i determin deschiderea sau nchiderea acestor canale ionice cu poart dependent
de ligand, conducnd la modificri ale potenialului de membran.
Legarea acetilcolinei la receptorii nicotinici din musculatura striat genereaz un
potenial de aciune care declaneaz contracia muscular. Legarea acetilcolinei la receptorii
muscarinici are efect inhibitor asupra contraciei miocardului prin meninerea hiperpolarizrii
membranei miocitelor timp de cteva secunde. Activarea receptorului muscarinic dup
legarea acetilcolinei determin activarea proteinei Gi, conducnd la deschiderea canalului
pentru K+ i un eflux de ioni de potasiu care are ca efect hiperpolarizarea membranei
134

plasmatice.
Rodopsina, un receptor cuplat la proteina G care este activat de lumin, este localizat
la nivelul discurilor membranare din segmentul extern al celulelor cu bastonae. Proteina G
cuplat la acest receptor este denumit transducin Gt , o celul cu bastona uman avnd
4x107 molecule de rodopsin , format din proteina opsin i pigmentul 11-cis-retinal.
Dup absorbia luminii, 11-cis retinalul este rapid convertit la izomerul trans, ceea ce
determin o modificare conformaional a opsinei i activarea acesteia (metarodopsin sau
opsin activat). Acest receptor activat interacioneaz i activeaz proteina Gt.
La ntuneric, potenialul de membran al celulelor cu bastona este de -30 mV, mult
mai mic dect potenialul de repaus al altor celule excitabile, cum este neuronul: -60-90 mV.
Ca o consecin a acestei depolarizrii, celulele cu bastona secret continuu
neurotransmitori, iar neuronii bipolari cu care sunt legate prin sinapse sunt stimulai
continuu. Depolarizarea determin n fapt existena unor canale ionice neselective deschise,
care permit trecerea ionilor de Na+, K+ i Ca2+. Absorbia luminii determin nchiderea
acestor canale, potenialul devine i mai negativ i sunt eliberai din ce n ce mai puini
neurotransmitori. Aceast modificare este perceput la nivelul creierului ca lumin.
Proteina care realizeaz conexiunea opsinei activate cu canalele cationice din
membrana plasmatic a celulelor cu bastona este GMP ciclic, care este sintetizat continuu
din GTP printr-o reacie catalizat de guanilatciclaza, care nu este afectat de lumin. De
fapt, absorbia luminii de ctre rodopsin induce activarea cGMP fosfodiesterazei, care
hidrolizeaz cGMP la GMP liniar, cu scderea concentraiei intracelulare de cGMP n cursul
expunerii la lumin. Nivelul intracelular crescut de cGMP la ntuneric menine canalele
ionice cu poart dependent de cGMP deschise, iar lumina induce descreterea nivelului
intracelular de cGMP i nchiderea canalelor ionice, hiperpolarizarea membranei i reducerea
secreiei de neurotransmitori. Trei sau patru molecule de cGMP trebuie s se lege de
canalul ionic pentru a-l deschide, aceast interaciune alosteric fiind foarte sensibil la
modificri mici de concentraie intracelular a cGMP.
12.2.1.3. Receptori cuplai la proteine G care au ca efector fosfolipaza C. Exist
ci de semnalizare celular care au ca mesager secundar molecule derivate din
fosfatidilinozitol. Fosfoinozitidele (PI4,5 bifosfat) sunt clivate de enzime asociate membranei
plasmatice denumite fosfolipaze C, cu formarea 1,2-diacilglicerolului (DAG), o molecul
lipofil care rmne asociat membranei, i inozitol 1,4,5 trifosfat (IP3) care difuzeaz n
citosol. Hormonii care se leag de receptori specifici cuplai la proteina Go sau Gq induc
activarea fosfolipazei C.
Concentraia intracelular de Ca2+ este meninut constant, sub 0,2, prin mai
multe mecanisme. Pompele Ca2+ATPazice pompeaz ionii de calciu din citosol n mediul
extracelular sau n lumenul unor compartimente celulare, deoarece o modificare mic a
concentraiei intracelulare a Ca2+ determin o varietate de rspunsuri celulare. Legarea unor
hormoni la receptorii lor de pe suprafaa hepatocitelor, adipocitelor i altor celule determin o
cretere a concentraiei intracelulare a ionilor de calciu, chiar i atunci cnd acest ion lipsete
din mediul extracelular, datorit eliberrii din lumenul RE prin deschiderea canalelor pentru
Ca2+ cu poart dependent de IP3 din membrana RE. Aceast protein-canal este format din
4 subuniti identice, fiecare dintre ele posed un situs de legare al IP3 n domeniul citosolic
N-terminal. Aceast cretere a concentraiei intracelulare a Ca2+, mediat de IP3, este
tranzitorie, deoarece Ca2+ATPazele localizate n membrana plasmatic i n membrana RE
pompeaz activ ionii de calciu din citosol la exteriorul celulei i n lumenul RE. n plus, o
grupare fosfat a IP3 este hidrolizat, cu formare de inozitol 1,4 difosfat care nu poate
declana eliberarea ionilor de calciu din lumenul RE. A fost evideniat existena n
membrana plasmatic a unui canal pentru Ca2+ denumit canal TRP care se deschide ca
rspuns la depleia depozitelor de ioni de calciu din lumenul RE. Aceast depleie determin
135

prin mecanism necunoscut o modificare conformaional a canalelor ionice pentru Ca2+ cu


poart dependent de IP3 din membrana RE, care le permite acestor proteine canal s se lege
de canalele TRP determinnd deschiderea acestora din urm.
Diacilglicerolul, rezultat din clivarea fosfoinozitidelor de ctre fosfolipaza C,
activeaz o familie de proteinkinaze denumite proteinkinazele C (PKC). n absena stimulrii
hormonale, PKC sunt proteine solubile din citosol, inactive. O cretere a concentraiei
citosolice a ionilor de calciu determin legarea proteinkinazei C la membrana plasmatic
unde este activat de DAG. Efectul DAG asupra proteinkinazei C necesit formarea unui
complex cuaternar ntre diacilglicerol, Ca2+, proteinkinaza C i un fosfolipid, probabil
fosfatidilserina. Activarea proteinkinazei C n diferite tipuri celulare determin rspunsuri
celulare care influeneaz creterea celular i metabolismul. Proteinkinaza C poate fosforila
factori de transcripie, ceea ce induce sinteza ARNm care declaneaz proliferarea celular.
Activeaz glicogensintetaza, determin eliberarea de serotonin i de enzime lizosomale din
plachetele sangvine, datorit creterii concentraiei intracelulare a Ca2+ induse de trombin
este declanat agregarea plachetar dup modificri conformaionale ale acestor fragmente
celulare. Activarea proteinkinazei C declaneaz eliberarea de adrenalin din
medulosuprarenal, secreia de aldosteron din corticosuprarenal, eliberarea insulinei din
insulele Langerhans. Stimularea prin acetilcolin a receptorilor cuplai cu proteine G situai la
suprafaa celulelor din pancreas i parotide determin creterea concentraiei de Ca2+ mediat
de IP3, urmat de fuziunea veziculelor cu membrana plasmatic i secreia de amilaze din
pancreas i parotide, eliberarea acetilcolinei n sinapsele neuromusculare, contracia
musculaturii netede, transportul glucozei i biosinteza lipidelor n adipocite, degradarea
glicogenului n celulele renale.
Efectele ionilor de calciu sunt mediate de o protein citosolic chelatoare de calciu
denumit calmodulina. Este o protein ubiquitar la eucariote, activitatea de mediere vizeaz
multiple efecte celulare ale ionilor de calciu. Structura calmodulinei este identic n toate
celulele, avnd patru situsuri de legare a Ca2+. Legarea calciului va determina o schimbare
conformaional a acestei molecule, care va conduce la o cretere a afinitii calmodulinei
fa de alte proteine active. Deoarece ionii de calciu se leag la calmodulin n manier
cooperant, o mic modificare n concentraia intracelular a calciului va determina schimbri
importante n nivelul de calmodulin activ.
Una dintre enzimele activate de complexul Ca2+/calmodulin este miozinkinaza care
regleaz activitatea miozinei n celulele musculare. O alta este cAMP fosfodiesteraza care
degradeaz cAMP.
12.2.2. Receptori cu activitate enzimatic asociat sau intrinsec.
O superfamilie de molecule-semnal care au rol fundamental n reglarea dezvoltrii
sunt factorii de transformare a creterii TGF (,,transforming growth factor ), din care fac
parte proteinele BMP, implicate n osteogenez, n formarea mezodermului i n etapele
timpurii ale hematogenezei. Un alt membru al superfamiliei, TGF1 are capacitatea de a
induce transformri fenotipice ale unor celule de cultur. Toate cele trei izoforme ale TGF
au efecte antiproliferative asupra mai multor tipuri de celule. Alterri ale receptorilor TGF
sau ale unor molecule proteice din celule implicate n transducia semnalului cii TGF,
determin stimularea proliferrii i induce apariia tumorilor. TGF1,TGF2 i TGF3 sunt
codificate de o singur gen i exprimate tisular specific sub forma unui precursor.
Exprimarea TGF este reglat n dependen de dezvoltarea esuturilor. TGF secretat este
depozitat n ECM sub forma unui complex latent, inactiv, legat covalent de o protein LTBP
(,,Latent TGF Binding Protein). Interaciunea LTBP cu trombospondina din ECM sau cu
integrine ale suprafeelor celulare declaneaz modificri conformaionale ale LTBP care
conduc la eliberarea dimerilor TGF activi, maturi. Eliberarea dimerilor activi TGF poate fi
determinat i de digestia LTPP de ctre metaloproteazele matricii.
136

TGF induce exprimarea unor molecule ale adeziunii celulare i ale ECM. Legarea
TGF de receptorii celulari specifici stimuleaz celulele s sintetizeze i s secrete factori de
cretere care balanseaz efectul de inhibare a creterii exercitat de semnalele TGF, de aceea
TGF au fost considerai iniial ei nii factori de cretere. Receptorii TGF, odat activai
fosforileaz i activeaz un tip particular de factor de transcripie, rezultatul acestei activri,
adic rspunsul celular depinde de ali factori de transcripie existeni n celula respectiv.
Exist trei tipuri de receptori TGF: RI, RII i RIII. Cel mai abundent este RIII, un
proteoglican de suprafa celular denumit glican. RI i RII sunt proteine transmembranare
dimerice care au domenii citosolice cu activitate serin/treoninkinazic. RII este o kinaz care
se autofosforileaz n lipsa TGF. Legarea TGF induce formarea complexelor care conin
cte dou copii de RI i RI, ca urmare RII fosforileaz resturi de serin i treonin din RI
adiacent feei citosolice a membranei plasmatice, n acest mod RI kinaza devenind la rndul
ei activ. Receptorii activai TGF i exercit activitatea catalitic asupra unor factori de
transcripie denumii proteine Smad, care sunt de trei tipuri: Smad reglate de receptor
(R-Smad), co-Smad i Smad antagoniste sau inhibitoare (I-Smad). R-Smad conine dou
domenii MH1 i MH2 , iar domeniul N-terminal MH1 conine situsul specific de legare la
ADN i o secven semnal de localizare nuclear (NLS) necesar pentru importul nuclear al
proteinei. n forma inactiv, nefosforilat a R-Smad, NLS este mascat i domeniile MH1 i
MH2 sunt asociate n aa manier nct proteina nu se poate lega la ADN sau la co-Smad.
Fosforilarea R-Smad de ctre RI separ domeniile i permite legarea importinei la NLS. Se
formeaz complexul R-Smad cu co-Smad i importina mediaz translocarea complexului n
nucleu. Dup disocierea importinei, complexele Smad coopereaz cu ali factori de
transcripie pentru a activa transcripia genelor-int.
Toate celulele mamiferelor secret cel puin o izoform TGF i cele mai multe au
receptori TGF pe suprafaa lor, ns datorit faptului c proteinele Smad activate
interacioneaz cu seturi diferite de factori transcripionali n diferite tipuri de celule,
rspunsurile celulare obinute variaz n funcie de tipul celular. Semnalizarea celular prin
Smad este reglat de proteine denumite SnoN i Ski, identificate ca oncoproteine, deoarece
determin proliferare celular anormal dup supraexprimare n fibroblaste. SnoN i Ski se
leag la complexele Smad, blocnd activarea transcripiei i determinnd rezistena celulelor
la aciunea de inhibare a creterii prin TGF. Dup stimulri ndelungate ale celulei cu TGF
este posibil s apar nivele crescute de SnoN i Ski, ca i I-Smad, mai ales Smad7, care
blocheaz capacitatea RI de a activa prin fosforilare proteinele R-Smad.
Multe tumori umane sunt determinate de mutaii care produc alterri ale receptorilor
TGF i ale proteinelor Smad, celulele tumorale fiind rezistente la inhibarea creterii indus
de TGF: cancerele pancreatice umane sunt determinate de o deleie a unei gene care codific
un tip de Smad; retinoblastomul, cancerul de colon, gastric i hepatic, proliferrile maligne
ale celulelor T i B se datoreaz unor alterri ale receptorilor TGF de tip I sau II.
O alt clas de receptori cu activitate enzimatic asociat sunt receptorii citokinelor,
asociai la nivelul domeniului lor citosolic cu un membru al familiei de proteintirozinkinaze
denumit familia JAK kinazelor. Receptorii tirozinkinazici (RTK) au activitate enzimatic
intrinsec, proteintirozinkinazic, la nivelul domeniului citosolic. Liganzi ca interferoni,
eritropoietina, hormonul de cretere, interleukine (IL-2, IL-4) se leag pe receptorii
citokinelor i liganzi ca insulina, factorul de cretere epitelial (EGF), factorul de cretere al
fibroblastelor (FGF), neurotrofina i ali factori de cretere se leag pe receptorii
tirozinkinazici i declaneaz formarea receptorilor dimerici, activi, prin modificarea
conformaiei monomerilor preexisteni. Receptorii dimerici sunt deci formai prin asocierea a
dou kinaze, care se fosforileaz reciproc la nivelul unui rest de tirozin din situsul de
activare. Ca urmare a fosforilrii, acest situs se mic spre exterior, permind ATP i
moleculelor substratului proteic s se lege la aceste kinaze. Kinazele activate fosforileaz n
137

continuare alte resturi de tirozin din domeniul citosolic al receptorului, fosfotirozinele fiind
situsuri de ancorare ale domeniilor SH2 sau PTB caracteristice multor proteine ale cii de
transducie intracelular a semnalului. Prin ancorare, aceste proteine sunt la rndul lor
activate prin fosforilare de ctre kinazele asociate sau intrinseci ale acestor receptori i aduse
n apropierea moleculelor substratului, activnd calea de semnalizare intracelular. Sunt
ancorate astfel mai multe proteine formndu-se complexele de multiancorare cu rol n
traducerea semnalului.
Citokinele sunt o familie de proteine mici care controleaz aspecte ale creterii i
diferenierii tipurilor celulare specifice. De exemplu, interleukina 2 este esenial pentru
proliferarea celulelor T ale sistemului imun. Interleukina 4 este esenial pentru formarea
celulelor mature B productoare de anticorpi. Factorul de stimulare al coloniilor de
granulocite (G-CSF) induce diferenierea unui tip particular de celul stem pluripotent din
mduva osoas n granulocite. Trombopoietina induce diferenierea megacariocitelor, din
care prin fragmentare se formeaz plachetele sangvine, cu rol n hemostaz.
Eritropoietina este o citokin care induce diferenierea celulelor roii ale sngelui,
sintetizat de celule renale prin activarea factorului de transcripie HIF 1, sensibil la nivelul
de oxigen din snge. Eritropoietina se leag la receptorul specific EpoR, al crui domeniu
citosolic este asociat kinazei JAK2. Eritropoietina leag monomerii EpoR, pe care i aduce
aproape unul de cellalt declannd fosforilarea lor reciproc la tirozina din situsul de
activare. Se produce activarea kinazei. Resturile de fosfotirozin servesc ca situsuri de legare
pentru un grup de factori de transcripie denumii STAT. Bineneles, toate aceste proteine
STAT au un domeniu N-terminal SH2 care leag fosfotirozine, un domeniu central care
conine situsul de legare la ADN i un domeniu C-terminal cu un rest de tirozin care va fi
fosforilat de JAK kinaze, conducnd la activarea STAT i disocierea de pe receptor. STAT
disociate formeaz un dimer prin interaciunea fosfotirozinelor din domeniile lor SH2,
dimerizarea expunnd situsul NLS. Dimerul STAT importat n nucleu, se leag la o secven
ADN denumit enhancer, fiind un activator al transcripiei genei int. n eritroblaste,
stimularea prin eritropoietin induce transcripia genei care codific Bcl-xL. Aceast protein
previne moartea celular programat (apoptoza), permind eritroblastelor s prolifereze i s
se diferenieze n eritrocite.
Receptorii tirozinkinazici (RTK) leag factori de cretere i insulina. Dup
interaciunea cu ligandul, se produce activarea receptorului, a activitii tirozinkinazice, care
stimuleaz consecutiv calea Ras-MAP kinazelor i alte ci de traducere a semnalului, cu
implicare n supravieuire, proliferare, difereniere celular i reglarea metabolismului celular.
Alterri ale structurii RTK datorate unor mutaii n genele care codific aceti receptori au
fost asociate cu diferite forme de cancer. RTK mutante trimit celulei semnale de activare a
proliferrii n lipsa factorilor de cretere. Supraproducia receptorului EGF n anumite forme
de cancer mamar explic proliferarea tumoral n condiiile unor nivele normale de EGF.
RTK sunt monomeri i interaciunea cu ligandul determin formarea dimerilor RTK.
Receptorul insulinei formeaz dimeri prin legturi disulfidice n absena ligandului, ns
interaciunea cu insulina determin modificri conformaionale care activeaz receptorul. n
receptorul dimeric, kinaza unei subuniti fosforileaz unul sau mai multe resturi de tirozin
din situsul de activare al celeilalte subuniti, acest situs de activare fiind n proximitatea
situsului catalitic al celuilalt monomer. Se produce modificarea conformaional care permite
legarea ATP sau a substratelor proteice la receptorul activat. Este intensificat activitatea
kinazic a domeniului citosolic al receptorului, iar fosfotirozinele sunt situsuri de ancorare
pentru proteine adaptor, care au domenii SH2, SH3 sau PTB, care leag componente proteice
ale cilor de traducere cum sunt cele care activeaz Ras.
Proteinele Ras sunt proteine care leag GTP, alternnd ntre starea activ i starea
inactiv care este RasGDP. Activarea Ras este accelerat de un factor de conversie al
138

guaninnucleotidelor (GEF), care se leag de complexul RasGDP, determinnd disocierea


GDP. GTP, prezent n celule la concentraii mai mari dect GDP, se leag spontan la Ras
libere, cu eliberarea GEF i formarea RasGTP. Hidroliza GTP la GDP dezactiveaz Ras, dar
dezactivarea necesit i asistena unei proteine activatoare a GTPazelor (GAP), care se leag
de fosfotirozinele RTK activate i intensific activitatea GTPazic intrinsec de 100 de ori.
Att proteinele trimerice G ct i proteinele Ras sunt membre ale superfamiliei GTPazelor.
Alterarea Ras n celulele umane prin mutaii genice (proteinele Ras oncogenice au o mutaie
n poziia 12) sunt asociate cu cancerele. Aceste proteine mutante nu pot hidroliza GTP i
contribuie la transformarea malign. nlocuirea glicinei din poziia 12 cu un alt aminoacid
blocheaz asocierea cu GAP i n acelai timp blocheaz proteina n stare activ, legat de
GTP.
Activarea RTK este urmat de legarea unei proteine citosolice GRB2 prin domeniul
SH2 la fosfotirozina receptorului. GRB2 are dou domenii SH3 care leag i activeaz Sos, o
protein GEF, care activeaz hidroliza GTP legat de Ras.
Activarea Ras induce formarea la nivelul membranei a unor complexe de semnalizare
care conin trei proteinkinaze care acioneaz secvenial. Cascada de kinaze culmineaz cu
activarea MAP kinazelor, serin/treoninkinaze cunoscute i sub numele de ERK. Dup
importul n nucleu MAP kinazele pot fosforila factori de transcripie care regleaz
transcrierea genelor care codific proteine cu rol important n reglarea ciclului celular i
diferenierii celulare. Activarea MAP kinazelor n diferite tipuri celulare conduce la
rspunsuri celulare diferite, iar activarea sa n una i aceeai celul poate fi consecina
stimulrii prin hormoni diferii. Complexul RasGTP se leag la domeniul reglator
N-terminal al Raf, o serin/treoninkinaz care este n acest mod activat. Hidroliza GTP din
RasGTP elibereaz Raf activ, care fosforileaz i activeaz MEK. MEK, la rndul ei,
fosforileaz i activeaz MAP kinazele care fosforileaz multe alte proteine. Ca i proteina
mutant n poziia 12 Ras (RasD), mutantele Raf sunt codificate tot de oncogene. n celulele
n repaus, fr stimulare hormonal, Raf este o protein citosolic cu o conformaie n care
domeniul reglator N-terminal este legat la domeniul catalitic (kinazic) pe care l inhib.
Aceast conformaie inactiv este stabilizat de interaciunea cu un dimer al proteinei 14-3-3
care se leag la resturi de fosfoserin dintr-un numr mare de proteine implicate n ci de
semnalizare. Interaciunea Raf cu RasGTP ancorat n membran determin o modificare
conformaional a Raf care o disociaz de proteina 14-3-3 i nltur efectul de inhibiie a
activitii kinazice a Raf.
Interaciunea factorilor de cretere cu celule de cultur aflate n G0 determin o
cretere rapid a expresiei a mai mult de 100 de gene diferite, denumite gene de rspuns
timpuriu deoarece sunt induse nainte ca celulele s intre n faza S. O astfel de gen codific
factorul de transcripie c-Fos, care mpreun cu ali factori de transcripie cum este c-Jun,
induc expresia multor gene care codific proteine necesare celulei pentru parcurgerea
ciclului celular. Secvena enhancer a genei care codific c-Fos conine un element denumit
SRE (Serum Response Element) denumit aa pentru c leag numeroi factori de transcipie
activai la rndul lor prin ci de semnalizare celular declanate de numeroi factori de
cretere din ser. Aceste ci de semnalizare pot fi activate de MAP kinaze, dar i de
proteinkinaza A din calea adenozinmonofosfatului ciclic sau de proteinkinaza C din calea
fosfoinozitidelor. MAP kinazele active induc transcripia genei c-Fos prin modificarea a doi
factori de transcripie: factorul complex ternar (TCF) i factorul de rspuns seric (SRF). Mai
precis, n citosol, MAP kinazele fosforileaz i activeaz o alt kinaz- proteina p90RSK,
care este translocat n nucleu, unde fosforileaz o serin din SRF. Dup translocarea n
nucleu, MAP kinazele fosforileaz direct tot la un rest de serin TCF. Asocierea TCF
fosforilat cu dou molecule de SRF fosforilat formeaz un trimer activ care se leag la
secvena SRE din ADN.
139

RTK i receptorii citokinelor pot iniia i cile de semnalizare IP3/DAG prin activarea
unei izoforme a fosfolipazei C (PLC). Domeniile SH2 ale izoformei a PLC se leag de
fosfotirozine din receptorii activai, n acest mod fosfolipaza C fiind poziionat aproape de
substratul su, PIP2 legat la membran. n acelai timp, activitatea kinazic a receptorului
determin fosforilarea resturilor de tirozin din PLC legat la membran, intensificnd
activitatea hidrolazic a acesteia.
Anumii receptori ai citokinelor sau RTK activai pot iniia o alt cale de traducere a
semnalului denumit calea fosfatidilinozitol-3 kinazei, prin recrutarea acestei enzime la
membran. PI-3 kinaza are un rol important n ci de semnalizare eseniale n proliferarea
celular i prevenirea apoptozei. Una dintre cele nou izoforme ale PI-3 kinazelor codificate
de gene umane a fost bine studiat i s-a constatat c are o subunitate p110 cu activitate
catalitic i o subunitate 85 cu un domeniu SH2 care se leag la resturi de fosfotirozin din
domeniul citosolic al RTK sau receptorilor citokinazici activai. PI-3 kinaza este poziionat
lng substratul fosfoinozitidic i catalizeaz formarea PI-3,4difosfatului sau
PI3,4,5 trifosfatului care acioneaz ca situsuri de ancorare pentru proteine implicate n ci
importante de traducere a semnalului. O astfel de protein este proteinkinaza B, o
serin/treoninkinaz. Pe lng domeniul catalitic, PKB conine un domeniu PH care se leag la
fosfatul din poziia 3 a PI3,4 difosfatului sau a PI3,4,5 trifosfatului, n acest mod PKB fiind
localizat la nivelul membranei plasmatice, iar situsul catalitic al PKB este demascat
devenind activ. Dup activarea complet a PKB prin interaciunea n planul membranei cu o
alt kinaz PDK1 care produce o fosforilare a PKB, PKB fosforileaz direct numeroase
proteine cu diferite funcii celulare. Astfel de proteine sunt proteinele pro-apoptotice Bad, a
cror activare previne apoptoza. PKB activat promoveaz supravieuirea celulelor prin
fosforilarea factorului Forkhead-1. n absena factorilor de cretere, Forkhead-1 este
nefosforilat i localizat n nucleu, unde activeaz transcripia unor gene care codific proteine
proapoptotice. Cnd celulele sunt stimulate de factori de cretere, PKB devin active i
fosforileaz Forkhead-1, care leag n aceast stare proteine 14-3-3, fiind sechestrat n
citosol. Inactivarea PKB favorizeaz apoptoza, iar mutaii care altereaz proteina Forkhead-1,
astfel nct sunt afectate serinele care sunt situsurile de fosforilare prin activitatea PKB,
iniiaz apoptoza i n prezena PKB activ. Fosforilarea prin PI-3 kinaz este reversibil.
PTEN fosfataza poate nltura gruprile fosfat ataate la resturi de serin, treonin i tirozin,
are capacitatea de a nltura gruprile fosfat din poziia 3 a PI 3,4,5 trifosfatului, ceea ce are
ca efect declanarea apoptozei.
Receptorul insulinic este un receptor dimeric tirozinkinazic care poate iniia calea
Ras-MAP kinazelor, conducnd la modificri n exprimarea genelor. Insulina poate stimula
inierea cii PI-3 kinazelor, cu activarea PKB. n hepatocitele, celulele musculare sau
adipocitele stimulate de insulin, PKB activat determin scderea glicemiei prin importul
glucozei n celule i stimularea glicogenogenezei. Mecanismul prin care PKB activ
determin transportul glucozei n celule nu este pe deplin elucidat, dar s-ar prea c este
determinat de mutarea transportorului GLUT4 al glucozei din membrane intracelulare n
membrana plasmatic. Att n ficat ct i n musculatur, stimularea prin glucoz activeaz
glicogen sintetaza (GS) care catalizeaz sinteza glicogenului din UDP-glucoz. n celulele n
repaus, n absena insulinei, glicogensintetazkinaza 3 este activ i fosforileaz
glicogensintetaza blocndu-i activitatea. PKB activ fosforileaz i inactiveaz GSK 3, astfel
GS este activ i catalizeaz sinteza glicogenului.
12.2.3. Ci care implic clivare proteolitic indus de semnal.
Aceste ci de semnalizare sunt ireversibile deoarece un component este clivat
proteolitic.
Una dintre aceste ci este calea NF-kB care permite celulelor s rspund rapid la
condiii determinante de stres. Mecanismul specific const n fosforilare urmat de degradare
140

ubiquitin-mediat a unei proteine inhibitor, cum este factorul de transcripie NF-kB, care este
principalul reglator transcripional din celulele sistemului imun. NF-kB este rapid activat n
celulele imune ca rspuns la infecii, inflamaii, la citokinele proinflamatorii cum este TNF
i interleukina-1 secretate de celule adiacente ca rspuns la infecie i la ali factori de stres,
cum sunt radiaiile ionizante. Cele dou subuniti ale heterodimerului NF-kB mprtesc
aceleai regiuni omoloage n domeniul N-terminal care permit dimerizarea lor i legarea de
ADN. n celulele n repaus NF-kB este sechestrat n citosol n form inactiv, fiecare
monomer fiind legat de o molecul inhibitoare care mascheaz i secvenele de localizare
nuclear. Dup stimulare, n cteva minute, este activat o kinaz care fosforileaz dou
resturi de serin din proteina inhibitoare a NF-kB. O ubiquitin-ligaz se leag apoi de aceste
fosfoserine ale inhibitorului, declannd degradarea proteolitic de ctre proteasom.
Degradarea inhibitorului expune i secvena de localizare nuclear a NF-kB, care este
importat n nucleu unde activeaz transcripia unei multitudini de gene-int (mai mult de 150
de gene), printre care i a celor care codific citokine i chemokine cu funcia de atragere a
altor celule imune i fibroblati la situsul infeciei, ca i a genelor receptorilor care leag
proteinele ce permit neutrofilelor s migreze din fluxul sangvin n esuturi. NF-Kb stimuleaz
exprimarea genei iNOS, enzima inductibil care produce oxid nitric, care este toxic pentru
celulele bacteriene i exprimarea genelor unor proteine antiapoptotice care previn moartea
celulelor imune. Acest factor de transcripional activeaz expresia unor gene fie ca rspuns
direct la patogeni/stres, fie ca rspuns indirect la aciunea moleculelor semnal eliberate de
celule infectate sau lezate (citokine sau interleukine).
Una dintre genele a crei exprimare este activat de NF-kB este gena inhibitorului
NF-kB, care leag NF-kB n nucleu i l transport n citosol, inactivndu-l prin feedback
negativ. NF-kB este implicat n rpunsul inflamator i imunitate, dar i n dezvoltarea
normal datorit faptului c stimuleaz exprimarea unor proteine antiapoptotice, evitndu-se
apoptozele excesive care ar determina degenerare de organe, prin moartea unor celule care n
mod normal, trebuie s supravieuiasc.
O alt cale de semnalizare care implic proteoliza unui component este calea NotchDelta. Receptorul Notch i ligandul su Delta sunt proteine transmembranare, cu numeroase
secvene repetitive de tip EGF n domeniul extracelular. Au rol n mecanisme de difereniere
celular de tipul inhibiiei laterale, prin care celule adiacente, echivalente din punct de vedere
al potenialului de difereniere, devin capabile s urmeze ci de difereniere total diferite. Se
previne astfel de exemplu, formarea a prea multor precursori ai celulelor nervoase din stratul
de celule nedifereniate. Proteina Notch este sintetizat ca protein monomer membranar n
RER, unde leag presenilina1, o protein membranar cu mai multe domenii
transmembranare. Complexul format ajunge n aparatul Golgi unde are loc o clivare
proteolitic care genereaz o subunitate extracelular i o subunitate transmembranarcitosolic, care rmn asociate prin legturi slabe, non-covalente, n absena interaciunii cu
ligandul Delta din alt celul. Legarea Delta declaneaz o prim clivare proteolitic, o a
doua clivare n regiunea hidrofob transmembranar a receptorului Notch este catalizat de
presenilina1 i are ca rezultat eliberarea domeniului citosolic al Notch, care este translocat n
nucleu. Presenilina 1 este o protein a crei gen prezint mutaii la pacienii cu form
autozomal dominant a maladiei Alzheimer. Modificarea patologic major este acumularea
plcilor de amiloid n creier. Aceste plci de amiloid conin agregate de peptide mici alctuite
din 42 de aminoacizi denumite A42, care deriv din clivarea precursorului amiloidului, o
protein de suprafa specific neuronilor. Clivarea precursorului amiloidului este catalizat
de sau secretaze. secretazele catalizeaz o a doua clivare, care implic aceeai
metaloproteaz denumit TACE ce cliveaz i Notch, genernd peptide alctuite din 26 de
aminoacizi care nu au efecte nocive. Clivarea iniiat de secretaze determin apariia
peptidelor patologice A42, clivarea fiind intensificat de presenilina1 mutant de la
141

pacienii cu maladie Alzheimer, ceea ce duce la formarea plcilor de amiloid i moartea


neuronilor. Date recente sugereaz c presenilina este o proteaz care determin stimularea
clivrii Notch i APP, este un component alturi de secretaze, al complexului de proteoliz al
acestor proteine.

142

13. Ciclul celular

13.1. Etapele ciclului celular. Ciclul celular are 4 faze majore: faza G1 n care are loc
sinteza ARN i a proteinelor, este o faz de pregtire pentru faza S n care se desfoar
sinteza de ADN i replicarea cromozomilor, urmeaz faza G2 i faza M (mitoza).
Cromozomii sunt structuri condensate ale cromatinei, vizibile n microscopia optic,
formate din dou molecule de ADN rezultate din replicare, care mpreun cu histonele i alte
proteine ale cromatinei, alctuiesc cele dou cromatide-surori, unite la nivelul centromerului.
n interfaz, membrana nucleului este continu, n relaie structural-funcional cu RE.
n profaz, nveliul nuclear se dezintegreaz, se retrage n RE i aparatul Golgi, care
formeaz vezicule. Microtubulii formeaz fusul de diviziune i capteaz cromozomii prin
intermediul cinetocorului. n metafaz, cromozomii migreaz n placa metafazic, la centrul
fusului de diviziune. Anafaza se caracterizeaz prin separarea cromatidelor-surori i migrarea
cromozomilor unicromatidici spre cei doi poli ai fusului de diviziune. n telofaz microtubulii
fusului de diviziune se dezasambleaz, cromozomii se decondenseaz, se formeaz nveliul
nucleului celor dou celule-fiice, la fel i sistemul de endomembrane dup citokinez
(diviziunea fizic a citoplasmei, cu formarea celor 2 celule-fiice). Celulele rezultate n urma
mitozei intr n faza G1, au un numr diploid de cromozomi, motenit de la celula parental.
Ciclul celular al celulelor umane este parcurs n intervalul de 24 de ore, din care mitoza se
desfoar n 30 de minute, faza G1 dureaz aproximativ 9 ore, faza S n jur de 10 ore, iar
faza G2 aproximativ 4-5 ore. Celulele difereniate ies din ciclul celular n timpul fazei G1,
intr n faza G0 unde supravieuiesc zile, sptmni sau toat viaa fr a se divide din nou
(neuronii). Anumite celule aflate n faza G0 se pot rentoarce n ciclul celular, pe care l
parcurg i se divid , procesul fiind strict reglat prin mecanisme de control ale proliferrii
celulare. Fibroblatii i limfocitele pot fi stimulate s reintre n ciclul celular i s se divid
din nou.

Figura 89. Ciclul celular. Imagine preluat din http://iam2be.net/cancer

143

13.2. Reglarea ciclului celular. n controlul ciclului celular un rol central l au


ciclinele, subuniti reglatoare ale proteinkinazelor denumite ciclin-dependent proteinkinaze
(CDK). Concentraia diferitelor tipuri de cicline crete i descrete pe msur ce celula
progreseaz prin ciclul celular i interacioneaz cu molecule specifice ale CDK, subuniti
catalitice inactive, fr activitate enzimatic, n lipsa asocierii cu o subunitate reglatoare (un
anumit tip de ciclin).

Figura 90. Reglarea ciclului celular.

Celula este stimulat s parcurg ciclul celular i s se divid prin exprimarea unor
complexe G1 ciclin-CDK, care fosforileaz i activeaz factorii de transcripie ai genelor care
codific enzimele implicate n replicarea ADN. Este activat i transcripia genelor care
codific S-ciclin-CDK. n faza G1 trzie, G1ciclin-CDK declaneaz prin fosforilri
degradarea inhibitorilor fazei S, care sunt poliubiquitinilai i clivai de proteasom.
Ciclin-CDK caracteristice fazei S devin, n consecin active, activeaz enzimele
replisomului, care i ncep activitatea la situsurile de origine ale replicrii. n faza S sunt
sintetizate complexele M ciclin-CDK, care ns sunt meninute inactive, inhibate prin
fosforilarea unor situsuri specific din molecule, astfel nct replicarea ADN s fie complet,
iar mecanismele reparatorii ale erorilor din replicarea ADN s aib la dispoziie timpul
necesar pentru a-i ndeplini rolul. Prin defosforilarea ulterioar, M ciclin-CDK devin active
144

i declaneaz procesele de condensare a cromozomilor, dezintegrarea nveliului nuclear,


asamblarea fusului de diviziune, alinierea cromozomilor n placa metafazic.
Promovarea anafazei are un efector important, complexul de promovare a anafazei
(APC), care este o poliubiquitinligaz multisubunitar. n timpul fazei M, APC
poliubiquitineaz proteine care apoi sunt degradate de proteasom. Una dintre proteinele
degradate n acest mod este securina. Aceast protein inhib degradarea proteolitic a
proteinelor de legare a cromatidelor surori. Att timp ct APC este inhibat, securina este
activ, i cinetocorii se pot ataa pe centromere, devin ataai i microtubulilor fusului de
diviziune, iar cromozomii se aliniaz n placa metafazic. APC devine activ,
poliubiquitineaz securina, care este degradat, cromatidele sunt eliberate prin degradarea
proteinelor de legtur dintre ele, i este iniiat anafaza, cromatidele segreg i sunt
transporate spre polii opui ai fusului de diviziune. n anafaza trzie, APC determin
poliubiquitinarea M ciclin-CDK care sunt degradate prin proteoliz: proteinele fosforilate de
M ciclin-CDK sunt defosforilate de proteinfosfataze active constitutive i sunt declanate
urmtoarele procese: decondensarea cromozomilor, reconstituirea nveliului nuclear,
reasamblarea aparatului Golgi i citokineza, separarea celor 2 celule-fiice. n consecin,
degradarea n scop reglator a unor proteine la tranziia prin punctele critice ale ciclului celular
determin caracterul ireversibil al acestei tranziii (parcurgerea ciclului celular ntr-un singur
sens): G1S, metafazanafaz, anafaztelofaz i citokinez.
Factorii de cretere extracelulari sunt mitogeni pentru c induc sinteza G1 ciclinCDK. Punctul din faza G1 trzie n care progresia celulei prin ciclul celular devine
independent de mitogeni se numete punct de restricie (celula intr n faza S i parcurge
ntreg ciclul celular). Studiul ciclului celular se realizeaz pe celule din cultur care necesit
factori de cretere pentru stimularea proliferrii celulare. Legarea acestor factori de cretere
pe receptorii specifici celulari declaneaz o cascad de reacii de traducere a semnalului care
are ca rspuns celular transcrierea unor gene i sinteza proteinelor corespunztoare, implicate
n controlul ciclului celular. Aceste celule din culturi, n prezena factorilor de cretere ies din
G0 i depesc punctul de restricie 14-16 ore mai trziu, intr n faza S dup nc 6-8 ore.
13.3. Moleculele specifice implicate n reglarea ciclului celular. Reglarea ciclului
celular este realizat de o familie de kinaze dependente de cicline (CDK): CDK1, CDK2,
CDK4, CDK6. Celulele umane exprim mai multe tipuri de subuniti reglatoare ale acestor
kinaze: ciclinele A i B care funcioneaz n faza S, G2 i nceputul mitozei, 3 tipuri de
cicline D i o ciclin E care sunt ciclinele fazei G1 i sunt eseniale pentru depirea
punctului de restricie. Celulele aflate n G0, n lipsa factorilor de cretere nu exprim nici
cicline, nici CDK.
Procesele de reglare prin APC afecteaz numai ciclinele B care au o secven
conservat de aminoacizi denumit secven de degradare, care este recunoscut de APC
ubiquitinligaza, n timp ce ciclinele G1 nu au o asemenea secven. Adugarea factorilor de
cretere la culturi cu celule aflate n faza G0 este urmat de transcripia mai multor gene:
gene de rspuns rapid i gene de rspuns ntrziat, n funcie de rapiditatea cu care apare
ARN mesager corespunztor. Transcripia genelor de rspuns rapid are loc la cteva minute
dup adiia factorilor de cretere, cu declanarea traducerii semnalului i a rspunsului celular
prin care sunt activai factori de transcripie preexisteni n nucleu sau citosol. Rspunsul
rapid se datoreaz preexistenei factorilor de transcripie, care nu sunt sintetizai ca rspuns la
145

aciunea factorilor de cretere, n consecin, nu intervin inhibitori ai transcripiei sau


translaiei care s ntrzie sinteza factorilor de transcripie i exprimarea genelor de rspuns
rapid. Factorii de transcripie sunt doar activai prin fosforilare sau prin ndeprtarea unui
inhibitor. Unele gene de rspuns rapid codific factorii de transcripie ai genelor de rspuns
ntrziat, care codific la rndul lor ciclina E i CDK2, CDK4, CDK6. Asemenea factori de
transcripie ai genelor de rspuns ntrziat sunt c-Fos i c-Jun. Forme mutante ale c-Fos i
c-Jun sunt exprimate de retrovirusuri oncogene (v-Fos i v-Jun) implicate n stimularea
proliferrii i transformarea malign a celulelor infectate. Sinteza ciclinelor D este reglat i
la nivelul translaiei: factorii de cretere determin activarea cii PI3 i ca rspuns activarea
unui factor de iniiere a elongaiei care stimuleaz translaia ARNm corespunztor ciclinelor
D. TGF- inhib translaia ARNm al ciclinelor D, deci inhib proliferarea celular.
Factorii EF2 sunt codificai de gene de rspuns trziu i activeaz transcripia i
exprimarea genelor replisomului, genelor ciclinelor E (faza G1 trzie), genelor ciclinelor A
(determin tranziia fazaG1faza S), genelor CDK2 (CDK caracteristice fazei S) i
propriilor gene. Interaciunea EF2 cu o protein codificat de o gen supresoare a tumorilor
denumit protein Rb determin represia transcripiei. Se formeaz un complex de interaciune
ntre EF2, protein Rb i histon-deacetilaze: histonele deacetilate determin condensarea
cromatinei i inactivarea transcripiei. CDK1 este necesar pentru intrarea n faza M,
complexul cicline E- CDK2 determin activarea complexelor de prereplicare. Ciclina A este
necesar pentru sinteza ADN (intrarea n faza S), iar ciclina B sintetizat n faza S trzie are o
concentraie crescut n G2metafaz care descrete n anafaza trzie. Activitatea
complexelor ciclin-CDK este reglat prin inhibitori ai CDK (CIP) care recunosc, leag i
inactiveaz toate complexele ciclin-CDK i INK care se leag specific doar de CDK 4 i 6 i
inhib trecerea prin G1.
13.4. Puncte de control n reglarea ciclului celular:
1. Punctul de control al ADN nereplicat n fazele S i G2 previne activarea factorilor
fazei M (MPF) nainte ca replicarea ADN s fie complet (Cdc25).
2. Punctul de control al asamblrii previne iniierea prematur a anafazei (Mad2 i alte
proteine care controleaz i inhib degradarea securinei prin APC).
3. Punctul de control al segregrii cromozomilor previne telofaza i citokineza pn
cnd cromozomii nu sunt corect segregai, astfel nct celulele-fiice s moteneasc un set
complet, adecvat de cromozomi. O GTP-az denumit Tem1 activeaz o fosfataz Cdc14
care activeaz la rndul ei APC i factorul specific APC denumit Cdh1. Ciclinele B au rol n
degradarea i inactivarea MPF.
4. Punctul de control al leziunilor ADN oprete ciclul celular la tranziia G1/S pn
cnd leziunea este reparat: rol important au proteinele supresoare ale tumorilor ATM/ATR,
Chk1/2, p53. Proteina p53 activeaz p21 care determin arestarea celulelor n G1 i G2.
Proteina p53 este o protein proapoptotic.

146

14. Apoptoza

14.1. Caracteristici i cauze. Apoptoza (moartea celular programat) este un proces


caracteristic celulelor care alctuiesc organismele multicelulare. Cuprinde evenimente
celulare biochimice i morfologice caracteristice: pierderea asimetriei bistratului lipidic
membranar, pierderea adeziunii celulelor, fragmentarea nucleului, condensarea cromatinei,
fragmentarea moleculelor de ADN. Spre deosebire de necroz, care este o moarte celular
traumatic, rezultat al unei agresiuni acute asupra celulei, apoptoza este un proces normal i
avantajos pentru dezvoltarea organismului. ntr-un organism adult normal mor zilnic datorit
apoptozei ntre 50 i 70 bilioane de celule, iar n organismul unui copil, ntre 20-30 bilioane
de celule. n decursul unui an balana dintre proliferare i distrugere celular prin apoptoz
implic o mas de celule egal cu greutatea unui individ.
Apoptoza este consecina infeciilor virale, a unor condiii de stres celular, a lipsei
nutrienilor. Apoptoza este determinat de leziunile ADN aprute prin aciunea unor factori
chimici, UV, radiaii ionizante. Unul dintre mecanisme implic genele supresoare ale
tumorilor (p53). Decizia pentru moarte prin apoptoz poate fi luat de celula nsi, de
esuturile adiacente sau de sistemul imun, cu scopul de a nltura celule deteriorate.
14.2. Importana apoptozei. Apoptoza are un rol important n prevenirea cancerelor,
orice eveniment care interfer cu mecanismele de declanare a apoptozei sau cu exprimarea
genelor supresoare ale tumorilor poate declana proliferarea celular i transformarea
malign. Apoptoza intervine n meninerea numrului relativ constant de celule ale unui
organism: celulele deteriorate sunt nlturate prin apoptoz, care balanseaz proliferarea
celular (rata mitozelor este balansat de rata apoptozei). Dac acest echilibru este distrus i
celulele se divid n ritm mai rapid dect ritmul n care mor prin apoptoz, apar tumori, sau
dac celulele se divid n ritm mai lent are loc o pierdere de celule din esuturi. Apoptoza
intervine n dezvoltarea normal. Datorit fragmentrii celulelor prin apoptoz i fagocitrii
resturilor celulare, nu sunt eliberate enzime celulare care ar putea afecta esuturile adiacente
i o proliferare celular selectiv nsoit de apoptoze selective modeleaz organismul n
cursul dezvoltrii embrionare. Diferenierea limfocitelor T i B este un proces complex care
genereaz o palet divers de celule imature, precursori potenial duntori organismului,
care sunt nlturai prin apoptoz. Limfocitele T citotoxice i autoinduc apoptoza prin
deschiderea unor pori n membran, datorit secreiei de perforin. Prin pori se elibereaz
enzime (granzima B) care activeaz caspazele.
14.3. Mecanismul apoptozei. Apoptoza este un proces controlat prin semnale
extracelulare (inductori extrinseci) sau prin semnale intracelulare (inductori intrinseci).
Semnalele extracelulare sunt toxine, hormoni, factori de cretere, NO, citokine care
traverseaz membrana sau se leag de un receptor membranar i induc traducerea semnalului
i declanarea rspunsului celular pozitiv (declanator) sau negativ (represor, inhibitor) al
apoptozei. Legarea unui ligand la receptorul specific celular poate iniia apoptoza- inducie
147

pozitiv sau poate determina represia activ a apoptozei- inducie negativ.


Semnalele intracelulare sunt sintetizate ca rspuns al celulei la stres determinat de:
legarea glucocorticoizilor la receptorii nucleari, cldur, radiaii, privare de nutrieni, infecii
virale, hipoxie, creterea concentraiei intracelulare de Ca2+ i activeaz proteine reglatoare
ale apoptozei a cror int este funcia mitocondrial sau proteinele adaptor ale mecanismelor
apoptotice.
14.3.1. Reglarea apoptozei prin mecanism mitocondrial. Scderea funciei
mitocondriale i a respiraiei aerobe determin moartea celular prin apoptoz. Proteinele
implicate n reglarea apoptozei afecteaz n mod diferit mitocondriile: datorit creterii
permeabilitii membranelor mitocondriale, efectorii apoptotici ies din mitocondrii. De
exemplu, NO disip potenialul de membran, ceea ce are ca efect creterea permeabilitii
membranelor mitocondriale. Efectorii apoptotici care ies din mitocondrii sunt SMAC
(activatori mitocondriali secundari ai caspazelor) care ajung n citosol i se leag de inhibitori
ai proteinelor apoptotice (IAP), declannd apoptoza. Proteinele proapoptotice sunt
cisteinproteaze denumite caspaze, care determin degradarea componentelor celulare. Un alt
grup de efectori apoptotici care sunt exportai din mitocondrii sunt citocromii c, care n
citosol leag Apaf-1, ATP i pro-caspaze, formndu-se complexele denumite apoptozomi.
Apoptozomul cliveaz pro-caspaza care este un precursor inactiv, cu eliberarea formelor
active ale caspazelor: caspaza 9 activ care, la rndul ei activeaz caspaza 3 efectoare.
Proteinele Bcl-2, codificate de gene antiapoptotice, scad permeabilitatea membranelor
mitocondriale.
14.3.2. Traducerea direct a semnalelor proapoptotice (mecanisme directe de
iniiere a apoptozei)
1. Apoptoza indus de TNF (factori de necroz tumoral), citokine sintetizate i
secretate de macrofagele activate. Celulele umane au dou tipuri de receptori care leag
specific TNF: TNFR1 i TNFR2. Legarea TNF pe TNFR1 va declana activarea caspazelor
prin domeniul citosolic R1 al receptorului denumit TRADD (,,TNF receptor associated death
domain). Interaciunea TNF-TNFR1 determin activarea unor factori de transcripie
implicai n supravieuirea celular i rspunsul inflamator. Producia de TNF anormale poate
declana boli autoimune.
2. Apoptoz indus de ligand Fas, care se leag pe receptorul Fas, al crui domeniu
citosolic FADD (,, Fas associated death domain) devine activ i formeaz mpreun cu
caspaza-8 i cu caspaza-10 un complex DISC (,,death-inducing signaling complex).
Activarea caspazelor proteolitice determin modificri caracteristice ale morfologiei
celulare: micorarea celulei care devine sferic consecutiv aciunii caspazelor asupra
citoscheletului, citoplasma devine dens, cu organite strns mpachetate, are loc condensarea
cromatinei n pachete compacte lng nveliul nuclear (proces denumit picnoz), apoi
nveliul nuclear devine discontinuu, ADN se fragmenteaz (procesul denumit cariorexis) i
nucleul se desface n corpi de cromatin. Urmeaz nmugurirea membranei celulare, celula
fiind rupt n vezicule denumite corpi de apoptoz care sunt fagocitai, fr a produce rspuns
inflamator. Procesul de fagocitare a corpilor de apoptoz se numete eferocitoz , declanat
de expunerea unor molecule cum este fosfatidilserina pe suprafaa celular. Fosfatidilserina
ajunge din foia intern a bistratului lipidic n cea extern prin activitatea catalitic a
scramblazei.
148

Figura 91. Cile apoptotice. Imagine prelucrat dup www.hixonparvo.info/model.html

14.4. Ci apoptotice defective. Supraexprimarea unui inhibitor al apoptozei, proteina


X-linkat (XIAP) care se leag de caspaza-9 i suprim activitatea activatorului apoptozei
citocrom c este una dintre cile prin care celula evit apoptoza. n consecin, celulele
deteriorate continu s se divid (n acest mod apare proliferarea tumoral din cancerul
pulmonar). Acumularea proteinei supresoare a tumorilor p53 n celule prin activarea
transcripiei genelor care codific aceast protein sub efectul - i -interferonilor intensific
apoptoza celulelor tumorale. Proteina p53 previne proliferarea tumoral a celulelor prin
oprirea ciclului celular n faza G1, pentru ca celula s aib timp aib timp s repare leziunile
ADN i induce apoptoza dac mecanismele reparatorii ale ADN sunt deficitare i leziunile se
menin. Dereglarea unor asemenea mecanisme favorizeaz apariia tumorilor. Infeciile virale
pot declana apoptoza celulelor infectate dac virusurile respective interfer n anumite ci de
semnalizare prin interaciune cu receptori celulari, sau interfer mecanismul de supresie a
tumorilor prin proteina p53. Exprimarea proteinelor virale mpreun cu proteinele MHC pe
suprafaa celulelor infectate determin recunoaterea acestora de celulele sistemului imun
(NK , limfocite T citotoxice) i declanarea apoptozei prin semnale sintetizate de aceste
149

celule. Unele gene virale codific proteine omoloage unor inhibitori ai apoptozei: omologi ai
Bcl-2 (virusul Epstein-Barr), omologi ai inhibitorilor activrii caspazelor sau determin
blocarea TNF i Fas sau inhibarea p53 (virusul hepatitei B). Infecia cu HIV (virusul
imunodeficienei umane) determin depleia limfocitelor T helper CD4+. Un mecanism de
depleie const n declanarea apoptozei prin enzime sintetizate de HIV care dezactiveaz
proteina antiapoptotic Bcl-2 sau prin interferena cu mecanismul proapoptotic mediat de Fas.
Proteinele HIV determin scderea expunerii glicoproteinelor CD4 pe suprafaa lfT helper
(markeri membranari ai lfT helper). Celulele CD4+ infectate pot primi semnale apoptotice de
la limfocite T citotoxice.

150

15. Proliferarea i diferenierea celular

15.1. Celulele-stem. Celulele-stem au capacitatea de a se rennoi prin diviziune


mitotic, au potenialul de a regenera esuturi n timpul vieii organismului i de a se
diferenia ntr-o diversitate de celule specializate. Celulele-stem au dou proprieti
fundamentale:
1. Capacitatea de a tranzita numeroase cicluri de diviziune celular cu meninerea
statutului de celul nedifereniat.
2. Potena, care este capacitatea de difereniere n tipuri de celule specializate (celule
puripotente/totipotente, care dau natere oricrui tip de celul difereniat, matur).
Se pot clasifica n:
Celule-stem embrionare, care se difereniaz n cursul dezvoltrii embrionare n toate
tipurile de celule specializate ale embrionului.
Celule-stem din organismul adult care reprezint sistemul reparator al organismului,
cu meninerea turn-over-ului normal al organelor regenerative: piele, intestine, snge.
Clasificarea celulelor-stem se poate face dup criteriul potenei:
Totipotente- pot construi un organism complet viabil. Prin fuziunea ovulului cu
spermatozoidul se formeaz zigotul, prin diviziuni succesive ale zigotului la 4-5 zile de la
fecundare se formeaz blastocistul. Masa intern de celule ale blastocistului este format din
celule totipotente.
Pluripotente- sunt descendeni ai celulelor totipotente (celule derivate din cele trei
straturi germinative: ectoderm, mezoderm, endoderm) din care se difereniaz aproape toate
tipurile de celule specializate.
Multipotente- se pot diferenia n celule specializate aparinnd unor grupuri nrudite
de celule
Oligopotente- se pot diferenia n cteva tipuri de celule mature (celulele-stem
limfoide sau mieloide)
Unipotente- se pot diferenia ntr-un singur tip de celule, au proprieti de
autorennoire (celulele-stem musculare).
Celulele-stem embrionare sunt pluripotente, formeaz cele trei straturi primare ale
embrionului: ectoderm, mezoderm, endoderm, care la rndul lor se pot diferenia n cele
200 de tipuri de celule specializate ale organismului adult. Dein factori de transcripie
specifici: Oct-4, Nanog, Sox2 cu rol n supresia genelor care determin diferenierea i
menin pluripotena. Dein antigeni specifici de suprafa de tipul glicolipidelor
SSEA3/SSEA4 sau antigene keratansulfat Tra-1-60, Tra-1-81.
Celulele-stem adulte sunt celule-stem ntlnite n organismele dezvoltate, adulte.
Celula-stem adult are capacitatea de a se divide i de a crea celule identice cu ea dar i
capacitatea de a se divide i de a crea celule mai difereniate, mai specializate dect ea.
Celulele-stem adulte pluripotente sunt rare i puine ca numr (sngele cordonului ombilical).
151

Cele mai multe celule-stem adulte sunt multipotente, se difereniaz n celule identice cu
esutul de origine, de exemplu celulele-stem mezenchimale, adipoase, endoteliale, etc.
Celulele-stem se caracterizeaz prin dou tipuri de diviziune: diviziune simetric din
care rezulta dou celule-stem identice cu celula-mam i diviziune asimetric din care rezult
o celul stem i o celul progenitor cu capacitate redus de autorennoire datorit segregrii
diferite a unor receptori celulari i a altor proteine cu funcii importante. Celulele progenitor
sunt cele care se difereniaz n celule specializate.
15.2. Diferenierea celular. Este procesul prin care o celul formeaz o alt celul
cu grad mai mare de specializare. Din zigotul format prin fecundarea ovulului cu
spermatozoidul se formeaz datorit proceselor de difereniere organismul multicelular
alctuit din mai multe tipuri de celule i esuturi specializate. Organismul adult este format
din 1014 celule care conin o copie proprie a genomului i, cu excepia hematiilor adulte, sunt
celule cu numr diploid de cromozomi, somatice, difereniate, specializate pentru diferite
funcii. Organismul adult conine i celule germinale (gameii) precum i celulele-stem
adulte. Celulele-stem ale organismului adult se divid i formeaz celule-fiice difereniate n
cursul reparrii esuturilor i procesului normal de turn-over celular. Diferenierea const n
modificri ale formei i dimensiunii celulelor, ale potenialului de membran, modificri
metabolice i ale semnalizarii celulare datorit modificrii exprimrii genelor, dar nu i a
secvenei primare a ADN. Se produc modificri celulare fizice i fiziologice, dar genomul
rmne acelai.
n cursul embriogenezei au loc diviziuni celulare coordonate, specializri celulare,
procese de migrare celular i apoptoze. Primele diviziuni ale zigotului denumite clivri se
caracterizeaz prin lipsa creterii celulare, citoplasma se reduce la jumtate n celulele-fiice,
genomul devine activ i controleaz dezvoltarea embrionar ulterioar. Clivrile au loc n
interiorul zonei pellucida, o membran ferm cu important coninut glicoproteic, care
a nconjurat de la nceput ovulul i a fost penetrat de spermatozoid. La 1 or de la
fecundare, zigotul se divide n dou celule identice, n a 8-a etap de diviziuni celulare grupul
de celule format devine compact prin interconectare datorit unor jonciuni de tip permeabil
(,,gap junctions), n care conexinele delimiteaz porul ce permite schimbul de ioni i
molecule mici ntre celule. Dup compactare se formeaz stadiul embrionar denumit morula,
al crei strat extern de celule prezint polaritate (un pol al unei celule difer de cellalt pol).
n a 5-a zi de dezvoltare embrionar, datorit exprimrii difereniate a unor gene n celulele
morulei, are loc cavitaia (se formeaz o cavitate plin cu lichid denumit blastocel), apare un
nou stadiu embrionar, blastocistul i ncepe specializarea celular. Dispare zona pellucida,
ceea ce va permite creterea embrionului. Se ncheie astfel faza de preimplantare din
dezvoltarea embrionar. Blastocistul este format dintr-un strat extern de celule denumit
trofoblast, provenit din stratul extern de celule cu polaritate al morulei, i o mas intern de
celule (ICM), provenite din celulele apolare ale stratului intern al morulei. Sursa primar de
energie n primele etape de diviziune ale embriogenez denumite clivri sunt piruvatul,
lactatul i aminoacizii, n timp ce celulele blastocistului uman dein transportorul membranar
al glucozei denumit GLUT8 i receptori membranari pentru factorul de cretere IGF-1
(,,insulin like growth factor).
Zigotul i celulele aprute prin clivrile din embriogeneza timpurie (faza de
preimplantare) sunt celule-stem totipotente, celule care se pot diferenia n toate tipurile de
152

celule. Pierderea unor celule n aceast etap, care sunt prelevate din embrionul obinut prin
FIV, n scopul obinerii unui diagnostic genetic preimplantare, poate fi compensat de
celelalte celule-stem embrionare. Celulele masei interne a blastocistului au proprietate de
pluripoten, din ele se vor forma toate esuturile embrionului i esuturi extraembrionare. n
ziua a 8-9 dup fecundare, blastocitul este implantat n uter . Trofoblastul se difereniaz n
dou straturi: unul intern denumit citotrofoblast i cellalt extern denumit sinciiotrofoblast,
care va realiza implantarea blastocistului n endometru prin formarea unor proiecii
digitiforme denumite vili corionici i a unor spaii denumite lacune care conin snge matern.
ICM se difereniaz n hipoblast i epiblast, din hipoblast prin difereniere se formeaz
endodermul extraembrionar, care va da natere la sacul vitelin, iar epiblastul formeaz
ectodermul primitiv sau embrionar i ectodermul amniotic. Procesele de difereniere
menionate determin formarea gastrulei (ziua a 14-a dup fecundare). ntre ziua a 14-a i a
16-a a dezvoltrii embrionare, apare anul primitiv. Ectodermul primitiv se difereniaz n
straturi germinale: n ectoderm embrionar i datorit anului primitiv sunt delimitate
endodermul embrionar i mezodermul embrionar (i mezodermul extraembrionar).
Celulele endodermului se vor diferenia n celulele epiteliale ale tubului digestiv, cu
excepia epiteliilor cavittii bucale, faringelui i prii terminale a rectului, n celule epiteliale
ale glandelor digestive, inclusiv cele ale ficatului i pancreasului, n epiteliile urechii externe
i cavitii timpanului, n celulele traheei, bronhiilor, alveolelor pulmonare, n celulele vezicii
urinare i parial ale uretrei; prin difereniere din celulele-stem ale endodermului se formeaz
celulele foliculilor tiroidieni i celule ale timusului.
Mezodermul formeaz prin difereniere celular miocitele din musculatura scheletic,
celulele scheletului, celulele dermului, celulele esuturilor conjunctive, ale sistemului
urogenital, celulele miocardului, ale splinei i elementele figurate ale sngelui.
Ectodermul formeaz sistemul nervos central, cristalinul, analizorii, ganglionii i
nervii, celulele pigmentare, epiderma, foliculii piloi i glandele mamare.
Celulele primordiale germinale se desprind din regiunea proximal a epiblastului i
migreaz n mezodermul extraembrionic, evitnd anumite evenimente care ar conduce aceste
celule pe calea diferenierii n celule somatice. Mecanismele de evitare a diferenierii n
celule somatice sunt mecanisme epigenetice.
15.3. Mecanismele diferenierii celulare. Celulele specializate exprim un subset al
genelor care alctuiesc genomul speciei, fiecrui tip celular fiindu-i caracteristic un anumit
model (pattern) de reglare a expresiei genice. Diferenierea implic trecerea de la un mod de
reglare a expresiei genice la un alt mod. Rolul central n difereniere revine unor procese
moleculare aparinnd unor ci de semnalizare, diferenierea fiind declanat de anumite
molecule-semnal cum sunt factorii de cretere. Activarea n etapa final a unui factor de
transcripie sau a unei proteine asociate citoscheletului declaneaz diferenierea.
Diviziunea celular asimetric conduce la formarea unor celule-fiice cu soart
distinct n ceea ce privete diferenierea: celulele progenitor totipotente. Celulele-progenitor
rezult n urma citokinezei datorit distribuiei neuniforme a unor molecule cu rol reglator
provenite din celula-mam pluripotent. Celulele progenitor motenesc un set diferit de
proteine fa de cel al celulei-stem din care provin, i un patern diferit de difereniere.
Exprimarea unor gene stimuleaz proliferarea celulelor ICM i/sau epiblastului,
menine pluripotena i caracterul de celule nedifereniate ale acestora. Exist mecanisme de
153

reglare genetic care, dimpotriv, orienteaz celula spre o anumit cale de difereniere sau
determin implantarea embrionului n uter.
Decizia ntre a prolifera i a se diferenia este o decizie critic pe care o celul trebuie
s o ia de cteva ori n cursul dezvoltrii i un rol central au mecanismele epigenetice de
reglare a diferenierii. Epigenetica se refer la modificri ale expresiei genice care nu
altereaz secvena primar a ADN. Majoritatea schimbrilor epigenetice se produc pe
parcursul vieii, dar unele se transmit de la o generaie la alta. Printre procesele specifice
epigenetice se numr: paramutaia, bookmarking-ul (memoria celular, transmiterea
patternului expresiei genice n timpul mitozei celulelor-fiice), amprentarea genomic,
reprimarea expresiei genice, inactivarea cromozomului X, reglarea modificrilor histonice,
metilarea ADN. Epigenetica studiaz fenomenele biochimice care permit acidului
dezoxiribonucleic s se exprime ntr-o manier diferit, datorit activrii sau reprimrii
anumitor gene, dar fr a provoca schimbri la nivelul secvenei genice. Celulele unui
organism multicelular sunt omogene din punct de vedere genetic, dar heterogene din punct de
vedere structural i funcional, datorit exprimrii diferite a genelor. Multe din aceste
modificri n expresia genic apar n cursul dezvoltrii, dar sunt ,,reinute, memorate n
cursul mitozelor.
15.3.1. Metilarea ADN este o modificare post-replicare predominant n citozinele
secvenelor de dinucleotide CpG (citozin5metilcitozin). Se produce iniial un val de
demetilri n timpul clivrilor, urmat de metilare genomic de novo dup implantarea
embrionului. Metilarea este un proces intens n gastrul, dar descrete pe msur ce au loc
diferenieri, n celulele specializate. Metilarea ADN este un eveniment rar n dezvoltarea
postgastrulaie, dar des ntlnit n stabilirea de linii celulare in vitro sau n celulele tumorale.
Dinucleotidele CpG reprezint 1% din genomul uman, 80% fiind metilate. CpG nemetilate
sunt grupate n ,,insule de CpG care sunt situate n regiunile reglatorii 5 ale genelor. n
anumite procese cum este cancerul, insulele CpG din promotorii unor gene achiziioneaz o
hipermetilare neobinuit, care determin inactivarea transcrierii genelor n celulele
respective, dar i n generaiile descendente de celule (,,heritable transcriptional silencing).
De fapt, metilarea ADN poate influena expresia genic n dou moduri: blocarea fizic a
interaciunii cu gena a proteinelor implicate n reglarea transcripiei, fiind astfel blocat
transcrierea genei sau, al doilea mecanism probabil mai important, const n legarea la ADN
metilat a unor proteine cunoscute sub denumirea de proteine de legare a domeniului metilCpG, urmat de recrutarea unor proteine adionale n acest locus, cum ar fi histondeacetilazele sau alte proteine de remodelare a cromatinei care contribuie la formarea
cromatinei compacte, inactiv transcripional. Acest proces are un rol central n dezvoltare, n
cursul diferenierii celulare. Pe de alt parte, pierderea unei astfel de proteine de legare a
domeniului metil-CpG denumit MeCP2 (,,Methyl-CpG-binding Protein 2) este implicat n
sindromul Rett, iar MBD2 (Methyl-CpG binding domain protein 2) mediaz inactivarea
transcripional a genelor hipermetilate n celulele tumorale, cum sunt genele supresoare ale
tumorilor. La om, procesul de metilare al ADN este catalizat de trei enzime,
ADN metil transferazele 1, 3a i 3b (DNMT1, DNMT3a, DNMT3b). DNMT3a i DNMT3b
sunt metiltransferazele care catalizeaz metilarea de novo, stabilind pattern-urile de metilare
ale ADN n dezvoltarea embrionar timpurie. DNMT1 este metiltransferaza care copiaz
pattern-ul de metilare al ADN n catenele-fiice n cursul replicrii ADN.
154

15.3.2. Modificrile histonelor. Histonele sunt inta unor modificri


posttranslaionale variate, care includ acetilarea lizinelor, metilarea argininelor i lizinelor,
fosforilarea serinelor i treoninelor sau ubiquitinarea i sumoilarea lizinelor. Aceste
modificri apar att n regiunea amino-terminal a histonelor, care proemin pe suprafaa
nucleosomilor, dar i n regiunea lor central- globular. Modificarea chimic a histonelor
afecteaz funcia cromozomilor prin cel puin dou mecanisme. Primul mecanism ar consta n
modificarea ncrcrii electrice a histonelor, cu modificarea conformaiei moleculei i a
interaciunii cu ADN. Al doilea mecanism propune aceste modificri chimice ale histonelor
ca situsuri de legare a bromodomeniilor sau cromodomeniilor care sunt domenii din
moleculele unor proteine care regleaz transcripia.

Figura 92. a) histon acetiltransferazele (HAT) genereaz pattern-uri de acetilare (Ac) recunoscute de ali reglatori
ai transcripiei, cum sunt bromodomeniile care conin factorii TAFII250, PCAF i GCN5 cu rol n ,,deschiderea
cromatinei i activarea genelor. b) histona H3 metilat, legat de proteinele HP1/Swi6 ale cromodomeniului
asociat heterocromatinei, stabilete un domeniu de cromatin inactiv transcripional. Imagine prelucrat dup
Patrick A. Grant. ,,A tale of histone modifications.

Acetilarea i deacetilarea gruprilor -amino din resturile de lizin ale histonelor sunt implicate
n activitatea de transcripie: histonele acetilate sunt asociate cu cromatina activ transcripional,
iar histonele deacetilate, cu cromatina inactiv transcripional. Acetilarea histonelor este asociat
replicrii ADN, asamblrii nucleosomilor i mpachetrii cromatinei, precum i interaciunilor
proteinelor non-histonice cu nucleosomii. Histona H3 este nalt conservat n evoluie, iar
gruprile amino ale lizinelor din poziia 9, 14, 18 i 23 din H3 i ale lizinelor din poziia 5, 8,12
i 16 din histonele H4, sunt frecvent modificate. Neutralizarea sarcinilor electrice pozitive din
partea amino-terminal a acestor histone prin acetilare, reduce afinitatea de legare a ADN

155

datorat gruprilor fosfat cu ncrcare negativ, dar i interaciunile dintre histonele


nucleosomilor adiaceni sau dintre histone i alte proteine reglatoare. Scderea afinitii de
legare a ADN i a interaciunilor cu alte molecule ale cromatinei favorizeaz activarea
transcripiei, deoarece permite interaciunea factorilor de transcripie i ARN polimerazei cu
promotorii genelor. Proteine reglatoare ale transcripiei ca Gcn5 i PCAF au activitate de
histonacetiltransferaze (HAT) i sunt asociate cu ali activatori transcripionali n complexe
multisubunitare care regleaz specificitatea i recrutarea Gcn5 la promotori ai genelor-int.
Intervin n asociere cu activitatea complexelor de remodelare ale cromatinei ATP-dependente
SWI/SNF care permit factorilor de transcripie accesul la structurile int din cromatin. Au fost
identificate peste douzeci de molecule proteice cu activitate enzimatic care genereaz patternuri specifice de acetilare ale histonelor libere sau asociate nucleosomilor: superfamilia GNAT
(Gcn5 N-acetytransferases), care include proteine implicate n iniierea transcripiei, elongrii
(Elp3), modificrii histonelor sau inactivrii telomerelor (Hat1). Familia p300/CBP HAT sunt
proteine cu nalt omologie de secven cu GNAT cu funcie de coactivatori transcripionali.
Familia MYST de HAT cuprinde membrii care i dau numele: MOZ (oncogen uman asociat
leucemiei acute mieloide), Ybf2/Sas3, Sas2 i Tip60. Alte acetiltransferaze sunt factori
transcripionali bazali, de exemplu TAFII250, component al complexului TFIID complex, sau
cofactori ai receptorilor nucleari: ACTR i SRC1. Au fost raportai HAT care modific
supresorul p53 al tumorilor i factorii bazali de transcripie TFIIE i TFIIF. Histonele acetilate
sunt recunoscute specific, bromodomeniul din factorii de transcripie i HAT ca TAFII250,
PCAF i Gcn5 este un domeniu proteic care permite recunoaterea preferenial a histonelor
cnd sunt acetilate la resturi specifice de lizin. Acetilarea histonelor precede i stabilizeaz
recrutarea complexelor ATP-dependente de remodelare a cromatinei. Gcn5 stabilizeaz
interaciunea SWI/SNF cu un promotor, interaciune mediat mai precis prin bromodomeniul
Gcn5. Recrutarea Gcn5 i acetilarea histonelor precede recrutarea complexului SWI/SNF n
timpul interaciunii cu promotorul interferon-, transactivarea prin receptorii nucleari
RAR/RXR implic acetilarea histonelor anterior aciunii SWI/SNF. Deacetilarea histonelor este
catalizat de histon deacetilaze, multe identificate ca fiind corepresori ai transcripiei. Regiuni
specializate ale cromatinei ca telomerii, centromerii i ali loci inactivi transcripional sunt
domenii hipoacetilate ale cromatinei. Inhibarea activitii histondeacetilazelor i inactivarea
situsurilor de hipoacetilare n histonele H4 determin discontinuiti n structura nalt condensat
a cromatinei. Fosforilarea histonelor are un rol important n transcripia genelor, repararea
ADN i condensarea cromatinei. Fosforilarea serinei din poziia 10 a H3 este corelat cu
activarea genelor n celulele mamiferelor. Fibroblatii, n prezena EGF, declaneaz o
fosforilare rapid a serinei din poziia 10 i inducia genelor de rspuns rapid cum este c-Fos.
Fosforilarea este catalizat de kinaza Rsk-2 i celulele provenite de la pacieni cu sindrom
Coffin- Lowry deficitari n Rsk-2, nu prezint fosforilri ale serinelor din poziia 10 i nici
inducia genelor c-Fos ca rspuns la EGF. Mecanismul incriminat ar fi adiia gruprilor fosfat
ncrcate negativ la cozile histonice i neutralizarea sarcinilor pozitive ale acestora, reducnd
afinitatea pentru ADN. Activitatea histonacetiltransferazelor crete pe substrate fosforilate la
serinele din poziia 10, iar mutaii care afecteaz serinele din poziia 10 a histonelor scad
activarea transcriiei prin Gnc5. De exemplu, fosfoacetilarea histonelor H3 din structura genelor

156

c-Jun i c-Fos favorizeaz activarea acestor gene. Acelai mecanism de fosforilare mediaz
alterarea structurii condensate a cromatinei, favoriznd accesul proteinelor implicate n
mecanismele reparatorii ale leziunilor ADN. Metilarea histonelor este implicat n activarea
transcripiei. Metilarea are loc preferenial la lizinele din poziiile 4, 9 i 27 ale histonelor H3 i
la lizinele din poziia 20 ale histonelor H4, lizinele pot fi mono-, di- sau trimetilate. Proteina
uman SUV39h1 metileaz selectiv lizina din poziia 9 a histonei H3. Supraexprimarea
SUV39H1 induce formarea de heterocromatin n locaii normal eucromatinice, probabil
metilarea favorizeaz legarea proteinelor specifice ale heterocromatinei. Proteina specific
heterocromatinei HP1 leag cu mare afinitate H3 care au fost metilate la lizine din poziia 9 de
ctre SUV39H1 i este inactivat transcripia. Regiunile de tip cromodomeniu ale HP1 mediaz
aceste intraciuni cu metillizinele. Metilarea lizinelor din poziia 9 interfer cu fosforilarea
serinei adiacente din poziia 10 catalizat de Ip11/kinaza aurora i este inhibat de acetilarea
anterioar a lizinelor din poziia 9. Cozile histonice nemodificate favorizeaz metilarea mediat
de SUV39H1 i rspndirea heterocromatinei.
15.3.3. Interferena ARN (RNAi). Este un proces de inactivare genic (,,gene
silencing) controlat de RISC (,,RNA-induced silencing complex) i iniiat de molecule dublucatenare de ARN care interacioneaz cu componentul catalitic al RISC, endonucleaze denumite
argonaut. ARN dublu catenar poate fi de origine exogen, achiziionat de celule prin infecii cu
ribovirusuri (ARN viral) sau prin infectarea n timpul manipulrilor n laborator, este importat
n citoplasm i clivat n fragmente scurte. Clivarea ARN este catalizat de enzima Dicer, se
formeaz fragmente scurte, alctuite din 21-25 perechi de baze i cteva baze excedentare
nemperecheate la ambele capete ale fragmentelor. Aceste specii moleculare mici de ARN de
origine endogen se numesc siARN (,,small interference ARN). siARN sunt complementare
unui singur ARN mesager int, induc clivarea unui singur ARN mesager specific.
ARN dublu catenar de origine endogen este sintetizat ca pre-microARN, prin transcripia
genelor care i codific, genomul avnd gene care nu codific proteine, ci diferite specii de
ARN. Dup sintez, pre-microARN este exportat din nucleu i clivat n citoplasm de enzima
Dicer. miARN au complementaritate parial cu ARN mesager int, recunoate i leag mai
multe tipuri de ARN mesager cu secven similar i inhib translaia. miARN are deci efect
represor al translaiei, probabil prin inhibarea interaciunii factorilor de iniiere a translaiei cu
coada poliA a ARN mesager. miARN intervine n acest mod n dezvoltare, n morfogenez i n
meninerea statutului de celule nedifereniate sau incomplet difereniate al celulelor-stem.
miARN sunt implicai n formarea tumorilor prin intervenie n mecanismele de reglare ale
ciclului celular, dar intervin i n mecanismele de supresie tumoral. RNAi poate declana
activarea unor gene, siARN i miARN care sunt complementare promotorilor unor gene pot
intensifica transcripia acelor gene.
15.4. Ci particulare de reglare a diferenierii celulare.
Proteina Shp2, codificat de gena PTPN11, este o proteintirozinfosfataz cu rol n
reglarea creterii i diferenierii celulare. Intervine n transformarea oncogen. Are rol reglator
n semnalizarea celular prin reglarea fin a puterii semnalului din diferite ci de semnalizare,
ceea ce are ca finalitate reglarea transcripiei unor gene implicate n difereniere i n migrarea
157

celular. Scderea exprimrii Shp2 prin RNAi previne diferenierea celular.


Oct4 (octamer4) codificat de gena POU5F1, este un factor de transcripie activ iniial
ca factor maternal n oocit i rmne activ n embrion n faza de preimplantare. Exprimarea
Oct4 reprezint un marker al fenotipului nedifereniat i al tumorilor. Are rol n meninerea
statutului de celul nedifereniat, cu capacitate de autorennoire al celulelor-stem, regleaz
pluripotena. Scderea exprimrii Oct4 n celulele ICM determin diferenierea acestora n
celule ale straturilor germinale. n timp ce Oct4 persist n celulele ICM, nu se regsete n
celulele trofoblastului care se difereniaz n citotrofoblast i sinciiotrofoblast sau n celulele
difereniate de diferite tipuri care apar dup gastrulaie; se exprim n celulele-stem germinale.
Formeaz heterodimeri cu proteina Sox2 sau cu E1A (care rol de co-activatori), exercit rol
reglator al transcripiei unor gene prin legarea la ADN. Oct4 acioneaz asupra unor geneint cum este gena FGF-4 (,,fibroblast growth factor-4).
Proteinele trithorax i grupul de proteine polycomb au un rol important n reglarea
epigenetic a dezvoltrii i diferenierii celulare, prin modificri chimice ale cromatinei.
Complexul represor polycomb 2 (PRC2) mediaz represia transcripiei prin di-i trimetilarea
lizinei din poziia 27 a lizinei din histonele H3.
UTX i JMJD3 sunt histondemetilaze H3K27 implicate n reglarea transcripiei genelor
HOX i n dezvoltare. Prin activitatea lor demetileaz H3, disloc complexul represor PRC2,
ceea ce conduce la activarea transcripiei genelor HOX i la difereniere celular.
Jmjd1a i jmjd2c codific demetilaze H3K9, sunt reglate de Oct4. Scderea exprimrii
jmjd1a i a jmjd2c determin difereniere celular acompaniat de reducerea exprimrii
genelor specifice celulelor-stem embrionare i inducerea exprimrii genelor specifice liniei de
celule specializate.
JMJD2A demetileaz H3K9Me2 din regiunea promotor a genelor asociate pluripotenei
(Tcl1, Tcfcp2l1, Zpf5) i activeaz exprimarea acestor gene.
JMJD2C este reglator pozitiv al Nanog, factor de transcripie implicat n proliferarea
celulelor-stem (activeaz exprimarea genelor pluripotenei). Semnale extracelulare ca Nanog,
LIF (factorul inhibitor al leucemiei), BMP (,,bone morphogenetic protein) determin
susinerea caracterului de celul-stem pluripotent capabil de autorennoire prin reglarea
exprimrii genelor pluripotenei. Semnale intrinseci ca FoxD3, p53, Oct4 regleaz exprimarea
Nanog i meninerea pluripotenei. Oct4 i Sox2 se leag de promotorul genei Nanog n
celulele-stem embrionare.
Nanog represeaz GATA-6 prin legare de promotorul genei. Exprimarea genelor
GATA-6 determin diferenierea celulelor ICM n celule ale endodermului visceral, n timp ce
GATA-4 este exprimat n celule ale endodermului visceral i parietal.
Proteinele Ronin pot compensa pierderea activitii Oct4 printr-un mecanism de aciune
diferit, dar paralel. Ronin este un represor care previne transcrierea genelor implicate n
diferenierea celular prin modificri chimice ale histonelor. Caspaza-3 cliveaz i reduce
nivelul intracelular de Ronin i Nanog.
BMP interacioneaz cu receptori specifici de suprafa celular, traducerea
158

semnalului avnd ca efect mobilizarea proteinelor din familia SMAD cu rol n dezvoltarea
cordului, SNC, cartilajului, oaselor i patternului embrionar. BMP4 i inhibitorii si regleaz
polaritatea embrionului. BMP4 regleaz diferenierea celulelor mezenchimale derivate din
mezoderm, activeaz gene n celulele epiblastului, ca urmare acestea migreaz i formeaz
anul primitiv. SMAD activate de BMP induc exprimarea proteinelor Id care acioneaz ca
inhibitori ai diferenierii. Id au rol important n angiogenez, neurogenez i osteogenez,
reglnd rspunsul celular la BMP i TGF-.
Wnt sunt molecule-semnal care dup legarea de receptorul lor specific determin
activarea cii de semnalizare care duce la creterea nivelului intracelular de -catenin, prin
inhibarea complexului axin-GSK-3-APC care degradeaz proteolitic -catenina. -catenina
care se acumuleaz intracelular ptrunde n nucleu, interacioneaz cu anumii factori de
transcripie (TCF/LEF) care activeaz exprimarea specific a unor gene implicate n
difereniere. De exemplu, dup interaciunea cu TCF3, acest factor de transcripie scade
exprimarea Nanog care menine pluripotena celulelor-stem. Wnt sunt factori de cretere ai
celulelor-stem, promoveaz proliferarea i diferenierea acestora n celule progenitor
multipotente din mezoderm i endoderm, stimuleaz gastrulaia, formarea anului primitiv,
stimuleaz diferenierea celulelor mezodermale cu potenial hematopoietic (Wnt1i3),
proliferarea celulelor-stem neuronale (Wnt1) n regenerarea celulelor sistemului nervos.
FGF (,,fibroblast growth factor) sunt ageni mitogeni, au efecte reglatoare i
morfologice, au rol esenial n dezvoltarea embrionar prin proliferarea celulelor endoteliale i
organizarea lor fizic n structuri tubulare; promoveaz angiogeneza, repararea esuturilor i
mucoaselor lezate (formarea esuturilor de granulaie) prin proliferarea, diferenierea i
migrarea celulelor epiteliale. n dezvoltarea embrionar stimuleaz deci proliferarea i
diferenierea celular, au rol regulator n migrarea celuleor i apoptoz. n organismele adulte
au rol esenial n repararea tisular. Receptorii acestor factori de cretere fac parte din clasa
receptorilor tirozinkinazici.
Calea LIF-STAT3: STAT3 regleaz direct exprimarea factorilor de transcripie Myc.
Activarea receptorului citokinei LIF (LIF-R), este urmat de recrutarea STAT3 la complexul
receptor, unde este activat de Jak (Janus kinaze), se produce dimerizarea STAT3, translocarea
n nucleu i activarea genelor-int prin exprimarea crora este meninut pluripotena i
capacitatea de autorennoire a celulelor-stem murine. LIF i Wnt promoveaz pluripotena prin
activarea unor ci separate de semnalizare celular, care ns converg, avnd un efector
comun, factorul de transcripie Myc. La om ns, celulele-stem embrionare se difereniaz n
prezena familiei de citokine Il-6 (din care face parte i LIF) i se pierd markerii pluripotenei:
Nanog, Oct4, TRA-1-60, deci nu poate fi prevenit diferenierea. Celulele-stem mezenchimale
adulte au un potenial de difereniere n mai multe linii celulare. Expresia Il-6 este crescut n
celulele-stem mezenchimale comparativ cu nivelul de exprimare din derivaii lor condrogeni,
osteogeni, adipogeni. Celulele mduvei spinrii secret mari cantiti de Il-6 care scad
dramatic n cursul diferenierii osteogene. Il-6 este necesar pentru proliferarea celulelor MS,
protecia fa de apoptoz, inhib diferenierea adipogen i condrogen.
Calea Il-6 ERK1/2 menine pluripotena i inhib diferenierea celular. Il-6 activeaz
STAT3 i ERK1/2 (MAPK) n celulele-stem cardiace. Stimularea prin LIF determin inducia
genelor specifice celulelor endoteliale (VE-caderine, CD31, Flk-1, GATA-4, GATA-6). Il-6
induce diferenierea celulelor-stem neurale n neuroni glutamat responsivi i celule astrogliale.
Activarea cii MAPK/CREB (,,mitogen activated protein kinase/cAMP response element
159

binding protein) prin Il-6 stimuleaz neurogeneza, iar activarea STAT3 promoveaz
gliogeneza.
ERK5 (kinaza 5 reglat de semnale extracelulare), care este membru al proteinkinazelor
activate de mitogeni, la fel ca ERK1/2 exercit roluri importante n diferenierea i proliferarea
celular i n migrarea celular n cursul dezvoltrii sistemului cardiovascular i diferenierii
neurale. ERK activate fosforileaz factori de transcripie ca c-Myc sau Elk1 i proteinkinaze,
ceea ce are ca efect inducia unor gene-int ca c-Fos care contribuie la proliferarea celular.
Proteinele REST (,,RE1-silencing transcription factor) blocheaz exprimarea miRNA
prin inactivarea genelor corespunztoare ( REST controleaz transcripia a 11 tipuri de
miRNA). Nivelul intracelular crescut de REST din celulele-stem conduce la inactivarea genelor
miRNA-21, scderea exprimrii miRNA-21 care inactiveaz ARNm corespunztor markerilor
pluripotenei: Oct4, Nanog, Sox2, c-Myc etc. ceea ce determin meninerea statutului de celule
pluripotente, nedifereniate. Scderea nivelului REST favorizeaz exprimarea miRNA care
degradeaz ARNm al markerilor de nedifereniere, reduce capacitatea de proliferare,
favoriznd diferenierea.
Inducia genelor FGF/MAPK i a genelor PI3K favorizeaz diferenierea celulelor
hepatice i ale intestinului din masa de celule multipotente ale endodermului.
Factori de transcripie care regleaz exprimarea genelor implicate n difereniere,
dezvoltare embrionar i semnalizare sunt membrii Forkheadbox (FOX). Unul dintre membrii
acestei familii de factori de transcripie, FOXA1 leag stabil nucleosomi i distruge structura
nalt organizat a cromatinei i mpreun cu alte proteine reglatoare intermediare ntre H1
linker i factorii de transcripie tradiionali, creeaz o regiune expus a cromatinei care permite
legarea altor factori de transcripie.
Proteinele ,,Groucho-related Gro/Tlc/Grg sunt corepresori care regleaz segmentarea
embrionului, pattern-ul dorsoventral, neurogeneza i cile de semnalizare Notch i Wnt.
Groucho se leag de situsurile reglatoare ale genelor-int i determin dizlocarea complexelor
activatoare ale transcripiei acestor gene i recrutarea proteinelor represoare de tip histondeacetilaze. Celulele nedifereniate ale endodermului exprim Grg1 i Grg 3. n timpul
diferenierii n celule specializate ale ficatului i pancreasului, nivelul intracelular de Grg
scade, ceea ce permite activarea exprimrii setului de gene ale celulei specializate. FOXA1
recruteaz Grg la nivelul situsurilor de reglare ale genelor, prevenind exprimarea lor
nepotrivit, dar scderea Grg permite activarea rapid a transcrierii genelor i specializarea
celular.
15.5. Proliferarea tumoral. Cancerele sunt o clas de boli n care anumite celule
prezint cretere necontrolat i diviziuni peste limita normal ( se depete limita Hayflick),
urmate de invazie i distrugerea esuturilor adiacente i cteodat i metastaze (rspndire n
organism prin snge i limf). Sunt determinate de anomalii ale materialului genetic induse de
carcinogeni sau de erori aprute n cursul replicrii ADN asociate cu mecanisme deficitare de
reparare ale acestor leziuni. Apariia cancerului implic de multe ori cauze ereditare.
Anomaliile genetice afecteaz dou clase de gene:
1. oncogenele care odat activate, confer noi proprieti celulelor (cretere
hiperactiv i diviziuni peste limita normal, protecie fa de apoptoz, capacitatea de a se
stabili n diverse medii tisulare). 2. inactivarea genelor supresoare ale tumorilor.
160

Celulele tumorale se caracterizeaz prin pierderea acurateei mecanismelor de


replicare a ADN, pierderea controlului ciclului celular, a orientrii i adeziunii n esuturi i
modificarea interaciunii cu celulele sistemului imun. Erorile (mutaiile) care se produc se
fixeaz n descenden, la celulele-fiice, n lipsa eficienei unor mecanisme reparatorii ale ADN
sau datorit dereglrii mecanismelor senescenei i apoptozei. Prezena carcinogenilor, a
radiaiilor i hipoxia determin acumularea erorilor i transformarea malign. Mutaiile pot
afecta chiar mecanismele de corecie, reparatorii ale ADN i consecina este o acumulare a
erorilor. Se poate produce o mutaie care s afecteze o cale de traducere a semnalului. Mutaiile
pot determina mobilizarea, migrarea celulelor din esutul de origine i invazia esuturilor
sntoase. Unele mutaii afecteaz telomerii. Cancerele reprezint un lan de efecte cauzate de
cteva erori care conduc la erori mai severe. Apariia tumorilor maligne este explicat prin erori
care conduc la mai multe erori.
O alt caracteristic este evoluia clonal. Dac 10.000 000 000 de celule ale tumorii sunt
distruse prin terapie, este suficient s rmn 10 celule tumorale care se autoreplic sau trimit
semnale determinante de erori spre alte celule, i procesul rencepe. Debutul tumorii urmat de
progresie spre stadii tot mai invazive se numete evoluie clonal.
Mutaiile ADN sunt produse de ageni mutageni, iar mutaiile care determin apariia cancerelor
sunt produse de ageni mutageni care se numesc carcinogeni: fumatul, de exemplu,,ofer 50 de
carcinogeni, printre care nitrozaminele i hidrocarburile aromatice policiclice. Sunt carcinogeni
care nu sunt mutageni: alcoolul stimuleaz rata diviziunilor celulare, astfel nct mecanismele
reparatorii ale ADN au mai puin timp s repare erorile produse n timpul replicrii ADN.
Infeciile virale sunt cauza a aproximativ 15% din cancerele umane (infecii cu
Papilomavirus, virusul hepatitei B, virusul hepatitei C, virusul Epstein-Barr, virusul limfotrofic
uman-HTLV). Virusurile pot determina transformri acute datorit unei oncogene virale
supraactive care se exprim n celula-gazd i determin transformarea imediat a acesteia n
celul tumoral. Virusurile pot determina transformri lente, atunci cnd genomul viral este
inserat lng o proto-oncogen a genomului celulei-gazd i promotorul viral sau un alt factor
de reglare a transcripiei din genomul viral declaneaz supraexprimarea proto-oncogenei,
urmat de transformarea malign a celulei-gazd. Hormonii sunt carcinogeni non-mutageni,
stimuleaz creterea celular excesiv: n statut hiperestrogen datorit stimulrii se poate ajunge
la cancer de endometru. Disfunciile sistemului imun din infeciile cu HIV pot conduce la
apariia sarcomului Kaposi, limfomului non-Hodgkin, iar deficitele imune comune variabile sau
deficitul de IgA cresc riscul apariiei cancerelor. Deficitul imun din infecia cu HPV
(Papilomavirus) favorizeaz apariia cancerului anal sau de cervix.
Ereditatea poate furniza defecte ale unor gene implicate n mecanisme de protecie fa
de cancere. Defecte motenite ale genelor BRCA1/BRCA2cancer mamar/ovarian, ale genelor
MEN (tip1, 2a, 2b)neoplazii endocrine; ale genei p53osteosarcom, cancer de sn, sarcom
al esuturilor moi, tumori cerebrale, ale genei APCpolipoz adenomatoas familial i
carcinom de colon, defecte motenite care favorizeaz apariia HNPCC (,,hereditary
nonpolyposis colorectal cancer), cancerului uterin, cancerului gastric, cancerului ovarian.
Aberaiile numerice cromozomiale cum este trisomia 21 (sindromul Down) favorizeaz
apariia leucemiilor i cancerului testicular la indivizii afectai.
Cancerele nu sunt boli transmisibile, o form de transmitere este doar cea prin placent, de la
mam la ft n cazul leucemiei acute, limfoamelor, melanomului i carcinoamelor.
Mecanismele fiziopatologice au la baz alterarea genelor implicate n cretere i
difereniere. Este incriminat o palet larg de defecte genetice de la aberaii numerice
cromozomiale pn la mutaii care afecteaz o singur nucleotid.
Oncogenele pot fi gene normale care sunt supraexprimate foarte intens sau gene care au
suferit mutaii i care exprim n celul noi prorieti (proprietile fenotipice ale celulei
161

tumorale).
Genele supresoare ale tumorilor inhib diviziunea celular i favorizeaz supravieuirea,
iar defectele acestor gene favorizeaz proliferarea tumoral.
Mutaiile la scar mare care determin transformare malign sunt:
amplificarea genomic- mai multe copii ale unui locus cromozomial care conine
oncogene
translocarea- dou locususuri cromozomiale separate devin anormal fuzionate ( ntre
cromozom din perechea 9 i din perechea 22, urmat de exprimarea unei proteine de fuziune
denumit proteina BCR-abl care este o tirozinkinaz oncogen)
Proliferarea tumoral poate fi declanat de mutaiile la scar mic:
n promotorul unei gene, afectnd exprimarea genei
n secvena codificatoare, consecina este sinteza unei proteine cu funcie sau stabilitate
alterat
integrarea materialului genetic viral care influeneaz exprimarea oncogenelor celuleigazd.

162

List de abrevieri

AA- aminoacizi

FSH- hormon foliculostimulant

ADN- acid dezoxiribonucleic

GAG- glicozaminoglicani

AG- acizi grai

Gly- glicin

Ala- alanin

GTP- guanozintrifosfat

ARN- acid ribonucleic

HA- acid hialuronic

ARNm- acid ribonucleic mesager

ICAM- intercellular adhesion molecule

ARNr- acid ribonucleic ribosomal

Il- interleukin

ARNt- acid ribonucleic de transfer

LDL- low density lipoprotein

Arg- arginin

LH- hormon luteinizant

Asn- asparagin

NAD(P)H- nicotinadenindinucleotid(fosfat)
redus

ATP- adenozintrifosfat

PIP2- fosfoinozitolfosfat

ADP- adenozindifosfat

Pro- prolin

AMP- adenozinmonofosfat

PSGL-1-

cAMP- adenozinmonofosfat ciclic

RHAMM-

cGMP- guanozinmonofosfat ciclic

RER- reticul endoplasmic rugos

CDK- kinaze dependente de cicline

RS- reticul sarcoplasmic

CDP- citozindifosfat

Ser- serin

CD- cluster of differerentiation

TEM- microscopie electronic cu transmisie

CoA- coenzima A

TSH- hormon tireostimulant

CTP- citozintrifosfat

Tn- troponine

DAG- diacilglicerol

TNF-- factor de necroz tumoral alfa

ELL- elongation factor RNA polymerase II

TF- factori de transcripie

EMC- matricea extracelular

UDP- uridindifosfat

FADH2- flavinadenindinucleotid redus

UTP- uridintrifosfat

FAD- flavinadenindinucleotid oxidat


FMN(H2)-flavinmononucleotid
oxidat(redus)

163

Lista aminoacizilor cu abrevierile lor


Aminoacizii nepolari (hidrofobi)
aminoacid

Cod din
trei litere

Cod din
o liter

glicina

Gly

alanina

Ala

valina

Val

leucina

Leu

izoleucina

Ile

metionina*

Met

fenilalanina

Phe

triptofan

Trp

prolina

Pro

serina*

Ser

treonina*

Thr

cisteina*

Cys

tirozina*

Tyr

asparagina

Asn

glutamina

Gln

Aminoacizi polari (hidrofili)

* aminoacizi care conin sulf


*aminoacizi care pot fi fosforilai

164

Aminoacizi ncrcai negativ:


acid aspartic

Asp

acid glutamic

Glu

lizina

Lys

arginina

Arg

histidina

His

Aminoacizi ncrcai pozitiv:

165

Bibliografie selectiv

1. Agger K., Cloos P.A.C., Christensen J., Pasini D., Rose s., Rappsilber J., Issaeva I.,
Canaani E., Salcini A.E., Helin K. ,,UTX and JMJD3 are histone H3K27 demethylases
involved in HOX gene regulation and development, Nature 449(2007): p.731-734
2. Alberts B., Johnson A., Lewis J., Raff M., Roberts K., Walter P. ,,Molecular Biology
of the Cell, fifth edition, Garland Publishing Inc., 2007
3. Alberts B., Bray D., Hopkin K., Johnson A., Lewis J., Raff M., Roberts K.,
Walter P. ,,Essential Cell Biology, third edition, Garland Publishing Inc., 2009
4. Anderson G.J., Darshan D. ,, Small-molecule dissection of BMP signaling, Nature
Chemical Biology 4(2008): p.108-115
5. Avruch J., Khokhlatchev A., Kyriakis J.M.,,Ras activation of the Raf kinase: tyrosine
kinase recruitment of the MAP kinase cascade. Recent Progress in Hormone
Research 56: p.127155
6. Becker W.M., Kleinsmith L.J., Hardin J., Bertoni G.P. ,,World of the Cell, seventh
edition, Benjamin Cummings/Prentice Hall, 2008
7. Benga Gh. ,,Introducere n Biologie Celular i Molecular, Ed. Medical
Universitar, Cluj-Napoca, 2005
8. Berger J., Moller D.E. ,,The mechanisms of action of PPARs Annual Review of
Medicine 53(2002): p.409435
9. Bttcher R.T., Niehrs C. (2005),, Fibroblast Growth Factor Signaling during Early
Vertebrate Development, Endocrine Reviews 26 (1): p.63-77
10. Brasier A.R. ,,The NF-B regulatory network Cardiovasc. Toxicol.(2006) 6 (2):
p.111130
11. Brouwers N., Sleegers K., Van Broeckhoven C. (2008). ,,Molecular genetics of
Alzheimer's disease: an update Annals of Medicine 40 (8): p.562583
12. Brownlee, M. ,,Biochemistry and molecular cell biology of diabetic complications,
Nature 414(2001): p.813-820
13. Cartwright P., McLean C., Sheppard A., Rivett D., Jones K., Dalton S.(2005)
,,LIF/STAT3 controls ES cell self-renewal and pluripotency by a Myc-dependent
mechanism, Development 132(5): p.885-96
14. Citron M., Westaway D., Xia W., Carlson G., Diehl T., Levesque G., Johnson-Wood
K., Lee M., Seubert P., Davis A., Kholodenko D., Motter R., Sherrington R., Perry B.,
Yao H., Strome R., Lieberburg I., Rommens J., Kim S., Schenk D., Fraser P., St
George Hyslop P., Selkoe D.J. (1997) ,,Mutant presenilins of Alzheimer's disease
increase production of 42-residue amyloid beta-protein in both transfected cells and
transgenic mice. Nature Medicine 3 (1): p.6772
15. Cooper G.M., Hausman R.E. ,,The Cell: A Molecular Approach, fifth edition, ASM
Press& Sinauer Associates, 2009.
16. Dance M., Montagner A., Salles J.P., Yart A., Raynal P. ,, Ras/Mitogen-activated
protein kinase (ERK1/2) pathway Cellular Signaling 2008 20(3):P.453-459
17. Erdmann R., Schliebs W., ,,Peroxisomal matrix protein import: the transient pore
model , Nat. Rev., Mol. Cell Biol. 6 (2005), p.738742.
18. Garrett R. H., Grisham C. M. ,, Biochemistry , Thomson Brooks/Cole, Cengage
Learning, 2008

166

19. Gilmore T.D.(2003) ,,Introduction to NF-B: players, pathways, perspectives


Oncogene25 (51): p.66806684
20. Grant P.A. ,, A tale of histone modifications Genome Biology 2001,
2(4):reviews0003.10003.6 (http://genomebiology.com/2001/2/4/reviews/0003)
21. Griffiths A.J.F., Wessler S.E., Lewontin R.C., Gelbart W.M., Suzuki D.T., Miller J.H.
,, An Introduction to Genetic Analysis , eighth edition, W.H.Freeman, 2005
22. Helmreich E.J.M. ,,The Biochemistry of Cell Signaling, Oxford University
Press,2001
23. Jacob, F., Perrin, D., Sanchez C., Monod J. ,,Operon: a group of genes with the
expression coordinated by an operator, C. R. Hebd. Seances Acad. Sci., Vol.
250(1960)p.17271729
24. Jennings B.H., Ish-Horowicz D. ,,The Groucho/TLE/Grg family of transcriptional corepressors Genome Biology 2008, 9: p.205
25. Kisseleva B., Bhattacharya S., Braunstein J., Schindler C.W. ,,Signaling through the
JAK/STAT pathway, recent advances and future challenges Gene 285 (1-2): p.124
26. Leonard W.J. ,, Role of Jak kinases and STATs in cytokine signal transduction
International Journal of Hematology 2001, 73(3): p.271-277
27. Lewin B. ,,Genes VIII, Prentice Hall, 2004
28. Lodish H., Berk A., Kaiser C. A., Krieger M., Scott M.P., Bretscher A., Ploegh H.
,,Molecular Cell Biology, fifth edition, W.H.Freeman, 2004
29. Lohse M.J., Benovic J.L., Codina J., Caron M.G., Lefkowitz R.J. ,,-Arrestin: a
protein that regulates -adrenergic receptor function Science 248(1990): p.15471550
30. Luo W., Johnson A.W., Bentley D.L. ,,The role of Rat1 in coupling mRNA 3-end
processing to transcription termination: implications for a unified allosteric-torpedo
model, Genes&Development 20(2006)p.954-965
31. Makarov E.M., Makarova O.V., Urlaub H., Gentzel M., Will C.L., Wilm M.,
Lhrmann R. ,,Small nuclear ribonucleoprotein remodeling during catalytic activation
of the spliceosome. Science 298 (2002):p.22052208.
32. Massagu J., Chen Y.G. ,,Controlling TGF-beta signaling Genes&Development14
(6;2000): p.627644
33. McCubrey J.A., Steelman L.S., Chappell W.H., Abrams S.L., Wong E.W., Chang F.,
Lehmann B., Terrian D.M., Milella M., Tafuri A., Stivala F., Libra M., Basecke J.,
Evangelisti C., Martelli A.M., Franklin R.A. ,, Roles of the Raf/MEK/ERK pathway in
cell growth, malignant transformation and drug resistance, Biochimica et biophysica
acta (2007), 1773(8): p.1263-1284
34. Lehmann O.J., Sowden J.C., Carlsson P., Jordan T., Bhattacharya S.S. (2003) ,,Fox's
in development and disease Trends in Genetics 19 (6): p.339344.
35. Liu X, Rubin JS, Kimmel AR (2005). "Rapid, Wnt-induced changes in GSK3beta
associations that regulate beta-catenin stabilization are mediated by G proteins".
Current Biology 15 (22): p.19891997
36. Loh Y.H., Zhang W., Chen X. ,, Jmjd1a and Jmjd2c histoneH3Lys9 demethylases
regulate self-renewal in embryonic stem cells, Genes&Development 21(2007):
p.2545-2557
37. Metzler D.E., Metzler C. ,,Biochemistry: The Chemical Reactions of Living Cells,
second edition, Harcourt/Academic Press, 2001
38. Mixich F., Ardelean T. ,,Principii fundamentale de biologie molecular,
Ed. Medicala Universitara, 2002;
39. Moldoveanu E., Popescu L.M. ,,Apoptoza- Mecanisme Moleculare, ediia a II-a,
Editura Universitar ,,Carol Davila, Bucureti, 1999

167

40. Moore M.J., Query C.C., Sharp P.A. ,,Splicing of precursors to messenger RNAs by
the spliceosome, The RNA World. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor
Laboratory Press, 1993:p.303357.
41. Moore M.J., Query C.C., Sharp P.A. ,,Splicing of precursors to messenger RNAs by
the spliceosome, The RNA World. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor
Laboratory Press, 1993:p.303357.
42. Morgan D.O. ,,The Cell Cycle: Principles of Control, New Science Press, 2007
43. Morris K.V. ,,Epigenetic Regulation of Gene Expression- ,, RNA and the Regulation
of Gene Expression: A Hidden Layer of Complexity, Caister Academic Press ,2008
44. Moustakas A. ,,Smad signalling network, Journal of Cell Science 115: p.33553356
45. Murray R.K., Bender D.A., Botham K.M., Kennelly P.J., Rodwell V.W., Weil P.A.
,,Harpers Illustrated Biochemistry, 28th edition, The McGraw-Hill Companies, 2009
46. Nelson D.L., Cox M.M. ,, Lehninger Principles of Biochemistry, third edition,
W.H.Freeman, 2000
47. Niwa H., Miyazaki J., Smith A.G. (2000),,Quantitative expression of Oct-3/4 defines
differentiation, dedifferentiation or self-renewal of ES cells, Nature Genetics 24 (4):
p.372376
48. Petrescu I. ,,Biochimie vol.1 ,,Constituienii chimici ai celulei, Presa Universitar
Clujean, 1998
49. Petrescu I. ,,Biochimie vol.2 ,,Reacii chimice n celula vie, Presa Universitar
Clujean, 1998
50. Platta H., Erdmann R. ,,The peroxisomal protein import machinery
FEBS Letters 581:p.2811-2819
51. Rodda D.J., Chew J.L., Lim L.H. (2005). ,,Transcriptional regulation of nanog by
OCT4 and SOX2 The Journal of Biological Chemistry 280 (26): p.2473124737
52. Robertson K.D., Uzyolgi E., Lian G. et al. (1999). ,,The human DNA
methyltransferases (DNMTs) 1, 3a, 3b: Coordinate mRNA expression in normal
tissues and overexpression in tumors, Oxford Journals: Nucleic Acids Research 27
(11): p.22912298
53. Rodriguez C., Noe V., Cabrero A., Ciudad C.J., Laguna J.C. ,,Differences in the
Formation of PPARa-RXR/acoPPREComplexes between Responsive and
Nonresponsive Species upon Fibrate Administration, Molecular Pharmacology
58(2000): p.185-193
54. Ross M.H., Kaye G.I., Pawlina W. ,,Histology: A Text and Atlas, fourth edition,
Lippincott Williams & Wilkins, 2002
55. Saunders A., Core L.J., Lis J.T. ,,Breaking barriers to transcription elongation Nature
Reviews Molecular Cell Biology 7, (August 2006), p.557-567
56. Scott F.G. ,,Developmental Biology, eighth edition, Sinauer Associates Inc:
Massachusetts, 2006
57. Schuettengruber B., Chourrout D., Vervoort M., Leblanc B., Caval G. ,,Genome
Regulation by Polycomb and Trithorax Proteins, Cell 128(4)2007: p.735-745
58. Tarba C. ,,Biomembrane, transport i energetic celular, Editura Academiei
Romne, 1996
59. Tsuchiya S., Okuno Y., Tsujimoto G. ,,MicroRNA: Biogenetic and Functional
Mechanisms and Involvements Journal of Pharmacological Sciences 101(2006), p.
267 270 (2006)
60. Zhang S.Q., Yang W., Kontaridis M.I., Bivona T.G., Wen G., Araki T., Luo J.,
Thompson J.A., Schraven B.L., Philips M.R., Neel B.G. ,, Shp2 regulates SRC family
kinase activity and Ras/Erk activation by controlling Csk recruitment, Mollecular
Cell. 2004 13(3): p.341-355
168

61. Zwaka T.P. ,,Ronin and Caspases in Embryonic Stem Cells: A New Perspective on
Regulation of the Pluripotent State Cold Spring Harbour Symposia on Quantitative
Biology 2008; 73: p.163-169;
62. Wobus A.M., Boheler K.R. ,,Stem Cells Handbook of Experimental Pharmacology
Volume 174, 2006
63. Wu J., XieX.(2006) ,,Comparative sequence analysis reveals an intricate network
among REST, CREB and miRNA in mediating neuronal gene expression, Genome
Biology 7(9): R.85
64. Ying Q-L., Nichols J., Chambers J., Smith A. ,, BMP Induction of Id Proteins
Suppresses Differentiation and Sustains Embryonic Stem Cell Self-Renewal in
Collaboration with STAT3, Cell 115 (3)2003: p.281-292
65. http://www.cytochemistry.net/cell-biology
66. http://www.bu.edu/histology
67. http://iam2be.net/cancer
68. http://stemcells.nih.gov/info/stem cells reports (AppendixA: Early Development)

169