Teste MIKROGEN DIAGNOSTIK

recomLine Borrelia IgG

recomLine Borrelia IgM
1.

Scop

recomLine Borrelia este un test calitativ , in vitro , pentru detectarea anticorpilor de tip IgG
i / sau IgM anti- Borrelia burgdorferi sensu strictu, B. garinii, B. afzelii i B. bavariensis
(fosta B garinii OspA tip 4 = B. garinii 1) i B. spielmanii n ser, plasm sau LCR uman.
2. Domeniu de utilizare
recomLine Borrelia este utilizat pentru confirmarea probelor care sunt pozitive sau
necunoscute la testul de screening. Acesta poate fi, de asemenea, utilizat pentru detectarea
anticorpilor IgG i IgM umani formati intratecal n LCR (LCR / ser perechi) (s. 8.1).
recomLine Borrelia faciliteaz identificarea sigur a anticorpilor specifici mpotriva
antigenelor selectate de specii patogene de B. burgdorferi umane. Anticorpii mpotriva
antigenelor pot da anumite indicaii suplimentare privind stadiul infectiei.
3.

Principiul testului

Antigenele recombinante inalt purificate de purificate Borrelia burgdorferi sensu lato (OspA,
OspC, p100, VIsE, p39, p58 p18 (= DbpA, proteina A care leaga decorin), p41 (fagellina)
sunt fixate pe benzi de testare cu membrana de nitroceluloz.
1. Aceste benzi de testare sunt incubate cu proba diluat de ser sau plasm, i anticorpii
specifici se leaga de antigenele patogene de pe benzile de testare
2. Anticorpii nelegati sunt apoi eliminati.
3. ntr-o a doua etap, n care benzile sunt incubate cu anticorpi imunoglobulina anti-umani
(IgG i / sau IgM), care sunt cuplate la peroxidaza de hrean.
4. Anticorpii conjugati nelegati sunt apoi eliminati.
5. Anticorpii legati n mod specific sunt detectati cu o reacie de colorare catalizat de
peroxidaz. Dac a aparut o reacie antigen-anticorp, pe banda va aprea o banda de
culoare inchisa in punctul corespunztor.
Exist benzi de control la captul de sus a benzilor de testare:
a) controlul reaciei cu numrul benzii care trebuie s prezinte o reacie pentru fiecare proba
de ser / plasm.
b) controalele conjugatelor (IgG, IgM) sunt folosite pentru inspecia clasei de anticorpi
detectati. Dac, de exemplu, testul este folosit pentru detectarea anticorpilor IgG, conjugatul
IgG va prezenta o banda clara)
c) "controlul de prag [cutoff]": intensitatea acestei benzi permite evaluarea reactivitatii
fiecareia dintre benzile de antigen (a se vedea 9.2 Evaluare).

4.
4.1

Reactivi
Coninutul pachetului

Reactivii dintr-un pachet sunt suficienti pentru a 20 (200) teste. Fiecare kit de testare conine:
DILUBUF

MILKPOW
INSTRU
EVALFORM

100 ml (500 ml), tampon de diluare (gata-de-utilizare)

Conine tampon Tris, NaCl, detergent, MIT (0,01%) i
oxipirion (0,1%), conservanti i proteina
100 ml (500 ml) tampon de spalare A (de 10 ori
concentratia)
Conine tampon de fosfat, NaCl, KCl, detergent,
conservant: MIT (0,1%) i oxipirion (0,2%)
40 ml (2x 200 ml) substrat cromogenic
Tetrametilbenzidin (TMB, gata de utilizare)
5 g (5x 5 g) lapte praf degresat
1 Instruciuni de utilizare
1 (10) Formular de evaluare

Obinere la cerere:
TEMPEVAL

1 sablon de evaluare

WASHBUF A 10X

SUBS TMB

4.1.1 recomLine Borrelia IgG

n plus fa de componentele enumerate la punctul 4.1, fiecare set de test conine:
TESTSTR
CONJ IgG

2 (20) tuburi, fiecare cu 10 benzi de testare numerotate

500 l (3x 1,4 ml) conjugat IgG anti-uman(concentrat de o
sut de ori, capac cu filet verde)
De la iepure, conine NaN3, (<0,1%), MIT (<0,1%) i
clorazetamida (<0,1%)

4.1.2 recomLine Borrelia IgM

n plus fa de componentele enumerate la punctul 4.1, fiecare set de test conine:
TESTSTR
CONJ IgM

2 (20) tuburi, fiecare cu 10 benzi de testare numerotate

500 l (3x 1,4 ml) conjugat IgM anti-uman(concentrat de o
sut de ori, capac cu filet rosu)
De la iepure, conine NaN3, (<0,1%), MIT (<0,1%) i
clorazetamida (<0,1%)

4.2 Materiale necesare dar nefurnizate

tvi de incubare (pot fi achiziionate de la MIKROGEN)
ap deionizat (de nalt calitate)
forceps din material plastic
agitator orizontal
mixer Vortex sau alte rotatoare
pompa de vid sau dispozitiv similar
cilindri volumetrici, 50 ml i 1000 ml
micropipete cu varfuri de unic folosin, 20 l si 1000 l
pipeta sau distribuitor 10 ml
timer
prosoape absorbante de hrtie
mnui de protecie de unic folosin
container de deeuri pentru materiale bio-periculoase
5.

Perioada de valabilitate i manipulare

Stocati reactivii la +2 +8 C, nainte i dup utilizare, a nu se congela.

Tineti toate ingredientele cel puin 30 de minute la temperatura camerei (+18 la +25 C)
nainte de nceperea testului. Procedura de testare se efectueaz la temperatura camerei.
Reactivi identici (a se vedea simbolul de imprimare-out) pentru teste recomLine,
recomBlot i Immunoblot diferiti pot fi utilizati pentru toti parametrii i toate loturile. n
acest proces, trebuie s fie respectate perioadele de valabilitate ale acestor componente.
Se amestec bine reactivii si probele concentrate nainte de utilizare. Evitai o acumulare
de spum.
Deschideti tubul care conine banda de test doar imediat nainte de utilizare, pentru a
evita formarea condensului. Lsati benzi neutilizate n tub i continuati a le stoca la +2
+8 C (reetansati bine tubul, benzile de test sa nu devena umede nainte de test!).
Benzile sunt marcate cu numrul de ordine, precum i codul de test.
Pachetele poart o dat de expirare. Dup ce aceasta a fost atinsa nu poate fi oferita nici o
garanie a calitii.
Protejai componentele kitului fata de lumina direct a soarelui pe tot parcursul procedurii
de testare. Soluia de substrat (TMB) este deosebit de sensibila la lumina.
Testul trebuie s fie efectuat numai de ctre personal calificat i autorizat.
n cazul unor modificri substaniale ale produsului sau a regulilor de utilizare de ctre
utilizator, aplicaia se poate situa n afara scopului dat de MIKROGEN.
Contaminarea ncruciat a probelor sau conjugailor pacientului poate duce la rezultate
inexacte ale testelor. Adaugati cu atenie probele pacientului, benzile de testare i soluia
conjugata. Asigurai-v c soluiile de incubare nu deverseaza in alte cavitati. ndeprtai
cu grij lichidele.
Benzile trebuie s fie complet umezite i scufundate pe parcursul ntregii proceduri.
Automatizarea este posibila ; vei primi informaii suplimentare de la MIKROGEN.

6.

Avertismente i precauii

Numai pentru uzul in diagnosticul in vitro

7.

Toate produsele din snge trebuie s fie tratate ca potenial infecioase.

Benzile de testare au fost pregtite cu lizate de celule ntregi inactivate, antigene
bacteriene sau virale.
Dup adugarea eantioanelor de pacieni sau de control materialul benzii trebuie s fie
considerat infecios i tratat ca atare.
Se vor purta mnui adecvate de unic folosin pe parcursul ntregii proceduri de testare.
Reactivii conin ageni si conservanti antimicrobieni, azidde sodiu, MIT
(metilisotiazolon), oxipirion i cloroacetamida i peroxid de hidrogen. Evitai contactul
cu pielea sau mucoasele. Azida de sodiu poate forma o azid exploziva la contactul cu
metale grele, cum ar fi azida de cupru i de plumb.
Toate lichidele sifonate trebuie s fie colectate. Toate containerele de colectare trebuie s
conin dezinfectani adecvati pentru inactivarea agenilor patogeni umani. Toi reactivii
i materialele contaminate cu eantioane potenial infecioase trebuie s fie tratate cu
dezinfectante sau eliminate n conformitate cu reglementrile dvs. de igien. Trebuie s
fie respectate concentraiile i perioadele de incubare prevazute de productor.
Utilizati tvile de incubaie doar o singur dat.
Manevrai cu grij benzile utilizand pensete de plastic.
Nu se substituie sau se amestec reactivii cu reactivi de la ali productori.
Citii integral instruciunile de utilizare nainte de efectuarea testului i urmai-le cu
atenie. Abaterea de la protocolul de testare prevzut n instruciunile de utilizare poate
duce la rezultate eronate.
Prelevarea probelor i prepararea reactivilor

7.1 Probe
Proba poate fi ser sau plasm (EDTA, citrat, heparin, DPC), care trebuie s fie separata ct
mai curnd posibil, din cheagul de snge, dup prelevarea de snge pentru a evita o hemoliz.
Poate fi, de asemenea, utilizat CSF ( LCR ). A se evita contaminarea microbian a probelor.
Substanele insolubile trebuie s fie eliminate din proba nainte de incubare.
Nu este recomandat.utilizarea de probe inactivate prin cldur, icterice, hemolitice, lipemice
sau tulburi.
Atenie!
n cazul n care testele nu sunt efectuate imediat, probele pot fi stocate timp de pn la 2
sptmni, la +2 +8 C. Stocare prelungit a probelor este posibil la -20 C sau mai jos.
Nu este recomandat congelarea i dezghearea repetat a probelor din cauza riscului de
rezultate inexacte.
7.2 Pregtirea soluiilor
7.2.1 Tampon de diluare
Tampon de diluare pentru dilutia serului este gata-de-utilizare.
7.2.2 Pregtirea tamponului de spalare A gata-de-utilizare
Acest tampon este necesar pentru diluia conjugatului, precum i in etapele de splare.
Volumul tamponului de splare A pentru un numr corespunztor de teste trebuie sa stabilit
nainte de diluare.
Laptele praf degresat este mai intai dizolvat n tamponul de splare A concentrat i apoi
completat cu ap deionizata pana la volumul total (diluie 1+9). Cantitile necesare pentru

un numr definit de benzi de testare trebuie s fie stabilite matematic n conformitate cu

urmtoarea formul (nu se considera volumul mort specific al dispozitivului):
Reactiv
Formula
Exemplu: 5 benzi
Lapte praf degresat [g]
= numrul de benzi x 0.1
0.5 g
Concentrat de tampon de spalare A [ml]
= numrul de benzi x 2
10 ml
Ap deionizat [ml]
= numrul de benzi x 18
90 ml
Tampon de splare A gata-de-utilizare [ml] = numrul de benzi x 20
100 ml
Tamponul de splare A gata-de-utilizare poate fi pstrat timp de patru sptmni la +2 +8
C. Tamponul de splare A gata-de-utilizare este inodor i uor tulbure.
7.2.3 Pregtirea soluiilor de conjugat
Solutia de conjugat trebuie sa fie preparata chiar nainte de utilizare. Nu este posibil sa se
stocheze soluia de conjugat gata-de-utilizare. O parte de concentrat conjugat este diluata cu
100 pri tampon de spalare A gata-de-utilizare (1 + 100).
Cantitile necesare pentru un numr definit de benzi de testare trebuie s fie calculate in
conformitate cu formula urmatoare:
Reactiv
Formula
Exemplu: 5 benzi
Concentrat conjugat [l]
= numrul de benzi x 20
100 l
Tampon de spalare A gata-de-utilizare [ml] = numrul de benzi x 2
10 ml
Cantitile conjugate sunt calculate fr volum mort.
n funcie de manipulare (manual sau pe un dispozitiv), v rugm s se amestec conjugat
suplimentar pentru 1 pn la 3 benzi.
8. Procedura de testare
Nr.
1
2

Executie
Tineti toi reactivii cel puin 30 minute la 18-25
C (temperatura camerei), nainte de nceperea
testului.
Pregatirea benzilor de testare
Puneti benzile n 2 ml, tampon de diluare gatade-utilizare

3
a)

Incubarea probelor
20 l (IgG) sau 40 l (IgM) din o proba
nediluata (ser sau plasma umana) se pun cu
pipeta pe banda de testarepentru fiecare amestec
de incubare (Dilutie 1+100 si/sau 1+50)

b)

se incubeaza 1 ora cu agitare usoara

Nota
Procedura de testare se efectueaz
la temperatura camerei
Nu atingei benzile cu mainile goale
- utilizati penseta. Numrul benzii
trebuie sa fie indreptat n sus.
Este necesar o cavitate n
tava de incubare (a se vedea 4.2)
pentru fiecare banda. Benzile
trebuie s fie complet imersate..
Proba se pune cu pipeta la un cap al
benzii imersate in tamponul de
dilutie de spalare si se amesteca cat
mai repede posibil agitand cu grija
tava
Acoperii tava de incubare cu
capacul de plastic i puneti-o n

agitator.
4
a)

Spalare
ndeprtai cu grij capacul de plastic de la tava
de incubare.

b)

Sifonati cu grija dilutia de ser din cavitatile

individuale

Realizati fazele de spalare 8.4a-8.4c

de trei ori in total. Evitati
contaminarea incrucisata
In cursul procesarii automate
trebuie sa se respecte instructiunile
producatorului

c)

Puneti cu pipeta 2 ml de tampon de spalare A

gata-de-utilizare in fiecare cavitate, spalati timp
de 5 minute cu agitare usoara si apoi scoateti
prin sifonare tamponul de spalare A
5
Incubarea cu conjugat
Acoperii tava de incubare cu
Adaugati 2 ml de solutie de conjugat gata-decapacul de plastic i puneti-o n
utilizare si incubati timp de 45 minute cu
agitator.
agitare usoara
6
Spalare
Realizati fazele de spalare de trei
vezi 8.4
ori in total (vezi 8.4a-8.4c.)
7
Reactia de substrat
Adaugati 1,5 ml de solutie de substrat gata-deutilizare si incubati timp de 8 minute cu agitare
usoara
8
Stoparea reactiei
Indepartati solutia de substrat
Spalati cel putin de trei ori scurt cu apa
deionizata
9
Uscarea benzilor
Indepartati cu grija benzile din apa
Uscati banda intre doua straturi de hartie
utilizand penseta din plastic.
absorbanta timp de 2 ore inainte de citire.
Depozitati benzile ferite de lumina
Atenie!
Soluiile de incubare nu trebuie s contamineze probele. Stropirea trebuie s fie
evitata n special la deschiderea i nchiderea capacului.
8.1 Analiza CSF/lcr/ser
Pentru detectarea anticorpilor umani IgG i IgM formati intratecal n LCR (LCR / perechi de
ser), este disponibil un manual de instruciuni separat, fia de date a pacientului i software.
Versiunile curente pot fi solicitate de la Mikrogen (+49 89 54801 -0) sau sunt disponibile
pentru descrcare (www.mikrogen.de Descarcare).
9. Rezultate
Atenie:
V rugm s nu folosii interpretarea automata, fr luarea n considerare a informaiilor cu
privire la interpretare date mai jos.
9.1 Validarea - controlul calitii

Poate fi efectuata o analiz a testului n cazul n care au fost ndeplinite urmtoarele criterii:
1. Band de control a reaciei (linia cea mai de sus) este n mod clar colorat, band
nchisa
2. Clasa de anticorpi (benzile a doua i a treia): benzile de control de conjugat pentru IgG i /
sau IgM trebuie s prezinte o colorare clara.
3. Control cut-off de (banda a patra): colorare slaba, dar vizibila
9.2 Evaluarea
Analiza benzilor de testare poate fi vizual sau asistat de calculator - cu ajutorul software de
analiz banda de testare recom scan. Software-ul recom scan este conceput pentru a sprijini
evaluarea benzilor de testare. Mai multe informaii i instruciuni legate de analiz asistat de
calculator este disponibil la cerere de la MIKROGEN. Urmtoarele instruciuni se refer la
analiza vizual.
9.2.1 Evaluarea intensitii benzii
1. Notati data i numrul lotului, precum i clasa de anticorpi detectat, pe formularul de
evaluare ataat.
2. Introducei numerele de identificare probe n fia de evaluare.
3. Lipiti acum banda de testare corespunztoare pe cmpurile corespunztoare de pe
formularul de evaluare folosind un stick de lipici. Aliniai banda de testare cu benzile de
control de reacie de-a lungul liniilor marcate. Apoi, utilizai o band adeziv transparent
pentru a ataa banda de testare la stnga a liniilor marcate (nu aplicati banda transparenta
pe banda de control a reaciei!). Lipirea ntregii benzi de testare cu ajutorul lipiciului sau
benzii poate duce la modificri de culoare.
4. Acum identificati benzile dezvoltat pe banda de testare pe baza a benzii de control tiprit
pe fia de evaluare i introducei acest lucru n fia de evaluare. n acest scop, efectuati
evaluarea intensitatii benzilor aparute pe baza de tabelul 1 separat pentru clasele
immunglobulin corespunztoare.
Tabelul 1: Evaluarea intensitatii benzii in relatie cu banda de prag [cut-off]
Intensitatea de pata a benzilor
Nici o reacie
Intensitate foarte sczut (mai mic dect banda de cut-off)
Intensitate mica (echivalentul a benzii de cut off)
Intensitate puternica (mai puternic dect banda de cut off)
Intensitate foarte puternica

Evaluare
+/+
++
+++

9.3 Interpretarea rezultatelor testelor

Rezultatul testului se determin prin nsumarea valorilor n puncte, n conformitate cu
Tabelul 2, ale benzilor individuale reactive peste cut-off (respectiv, cu un grad minim de +).
Suma rezultat este nscrisa n coloana cu simbolul Sigma (nsumare).
Evaluare pozitiv, necunoscut sau negativ a probei poate fi apoi determinat direct folosind
tabelul 3 i introdusa n coloana de evaluare a fiei de evaluare.
Ce este de remarcat este faptul c valorile punctelor sunt calculate doar o singur dat pentru
reacia OspC i benzile p18, indiferent de care i ct de multe OspCs i / sau p18 sunt.

Tabelul 2: Evaluare prin puncte a antigenilor

Antigen
p100
VIsE
p58
p41
p39
OspA
OspC
p18

Puncte IgG
5
5
4
1
5
5
5
5

Puncte IgM
5
5
4
1
4
5
8
5

Tabelul 3: Interpretarea testului

Suma de puncte
5
6
7

Evaluare IgG
negativ
Neconcludent( de
granita )
pozitiv

Evaluare IgM
negativ
Neconcludent( de
granita )
pozitiv

10. Limitri ale metodei Restricii

Rezultatele testelor serologice trebuie s fie ntotdeauna interpretate n contextul tabloului
clinic al pacientului. Consecinele terapeutice ale rezultatelor serologice trebuie s fie
ntotdeauna luate n context cu datele clinice.
Un rezultat negativ pentru recomLine Borrelia nu se poate exclude o infectie cu Borrelia
burgdorferi. n special, n faza timpurie a infeciei, anticorpii pot sa nu fie prezenti sau sa fie
prezenti n cantiti nedetectabile. n stadiu incipient, un tratament cu antibiotice poate
preveni dezvoltarea de anticorpi detectabili. Prelevarea de probe i reluarea testarii ar trebui
s se fac dup trei sptmni, atunci cnd exist suspiciune clinic a bolii Lyme (Borelioza
L.) i constatare negativ i / sau neconcludente privind serul.
Un rezultat pozitiv n recomLine Borrelia IgG i / sau IgM nu se refer ntotdeauna la
prezena activ a bolii Lyme (Borelioza L.). Deoarece anticorpii IgG i unii anticorpi IgM
persista mai mult, poate fi dovedita prezena de anticorpi din infecii anterioare.
Detectarea anticorpilor formati intratecal se va face la suspiciunea clinic de
neuroborrelioza. n acest scop, este necesar de a testa LCR / ser perechi simultan ntr-un test
de cuantificabil (de exemplu, recomwell Borrelia). Corespunztor diagnosticarii uzuale in 2pasi a serului, pragul i / sau rezultatele pozitive pot fi ulterior garantate cu recomLine
Borrelia. Instruciunile de la MIKROGEN pot fi legate de aceste teste de diagnosticare
(diagnosticele de Borrelia burgdorferi CSF/LCR). Un program Excel poate fi solicitat de la
Mikrogen pentru facilitarea calculelor pentru diagnosticare CSF (conform Reiber) (s. 8.1).
O reacie cu OspC este foarte caracteristica pentru un raspuns imunitar precoce (IgM). O
reacie puternic cu urmtoarele benzi apare mai ales in seruri din etape ulterioare ale
infectiei (IgG): p100, VIsE, p58, p18 i p39. Dimpotriv, anticorpi anti- OSPA, sunt mai rar

intalniti. VIsE este un marker foarte timpuriu de raspuns IgG, dar, de asemenea, insoteste
frecvent rspunsul imun la manifestare tardiv a infeciei, i apare pe langa p100 i / sau p18.
Prin utilizarea selectiv a antigenilor recombinanti Borrelia burgdorferi, o reacie
ncruciat cu anticorpi, care sunt induse de infectia cu ageni patogeni de sifilis (Treponema
pallidum), febr recurent (Borrelia recurrentis, Borrelia duttonii, Borrelia hermsii) sau
leptospiroza (Leptospira sp.) sunt excluse n mare msur. ntr-o infecie activ de sifilis i /
sau o cicatrice ser sifilis, s-au constatat activiti izolate de anticorpi mpotriva antigenului
p41. O infectie sifilis ar trebui s fie exclusa pentru serologie Borrelia neclara.
O stimulare policlonala a limfocitelor B poate s apar n prezena unei mononucleoze
infectioase (febra glandei lui Pfeiffer, infectie EBV). Acest lucru poate duce la reacii
nespecifice n timpul de detectare a anticorpilor de clas IgM. n cazul n care istoricul
medical este neclar i n prezena unui rspuns IgM bun, este recomandat sa se excluda o
infectie EBV prin diagnostic diferenial.
Benzi intunecate de testare: Unele probe de pacient pot produce o colorare ntunecat,
uniforme sau model n ntreaga band de nitroceluloz. Diversi factori din fiecare ser de
pacient sunt responsabili pentru acest lucru. Evaluarea acestor benzi este de obicei doar
parial posibila. Astfel, benzile "invers" (benzi albe pe fundal negru), de exemplu, ar trebui
s fie evaluate ca fiind negative. Serul respectiv ar trebui s fie ntotdeauna examinat prin alte
metode serologice.
11. Performana testului
11.1 Sensibilitatea diagnosticului
Numr

IgG pozitiv

Artrita Lyme
28
27 (96%)
ACA *
11
11 (100%)
Neuroborrelioza
35
29 (83%)
Eritemul Migrans
42
18 (43%)
* Acrodermatita Chronica atrophicans

IgM pozitiv
6 (21%)
1 (9%)
18 (51%)
30 (71%)

IgG / IgM
pozitiv
27 (96%)
11 (100%)
33 (94%)
33 (79%)

11.2 Specificitatea diagnosticului

Dou teste de comparaie negativ
IgG
IgM
171
169
0
0
0
0
100%
100%

recomLine Borrelia
Negativ
Neconcludent
Pozitiv
Specificitate
11.3 Rat de detectare
Ser de la donatori de
sange*

Numr

IgG pozitiv

IgM pozitiv

200

21 (10,5%)

5 (2,5%)

IgG / IgM
pozitiv
25 (12,5%)

* Din regiunea din sudul Germaniei

11.4 Specificitate analitic
Specificitatea analitic este definit ca fiind capacitatea testului de a determina exact analitii
n prezena unor factori de interferen poteniali n matricea probei sau reacii ncruciate cu
anticorpi cu potenial de interferen.
a) Interferene: Studii de control asupra factorilor cu potenial de interferen au artat c
performana de testare nu este influenat de anticoagulante (citrat, EDTA, heparina, DPC),
hemoliz sau lipaemia a probei. Au avut loc rezultate fals pozitive cu seruri icterice.
b) Reacii ncruciate:. n studiile de control sunt examinate interferenele poteniale ale
anticorpilor mpotriva altor organisme (Treponema SP). n plus, sunt testate condiiile care
pot fi atribuite unei activitati atipice a sistemului imunitar (anticorpi antinucleari autoimuni,
factor reumatoid, sarcina, infectie EBV, infecia cu CMV). Nu s-au evidentiat reacii
ncruciate.
Instruciuni de utilizare n alte limbi pe site-ul nostru www. mikrogen.de