Anticorpii in examinarea

celulelor

Anticorpi - Definitie

ANTICORPI: proteine specifice elaborate de organism

ca rspuns la prezenta unui antigen.
Antigen: orice protein strin organismului
producator de anticorpi; prin extensie, orice
proteina (sau glican, proteoglican) care nu apartine
in mod normal unui compartiment al organismului
Epitop: o portiune dintr-un antigen care este legata
de un anticorp;
Uneori definita si ca Cea mai mica portiune din
antigen care poate fi legata de un anticorp
O imunoglobulin, n forma literei Y, produs de
limfocitele B, folosit de sistemul imun pentru
identificarea i neutralizarea particulelor strine.

Structura unui anticorp

Situsuri de combinare cu antigenul

Portiune
variabila

Portiune
fixa

Lant
usor
(L)
Lant
Greu(H)

Lant
usor
(L)
Lant
Greu(H
)

Fragment FC Fragment legare a

complementului

Tipuri de anticorpi
Anticorpi policlonali: sunt anticorpii produsi
in mod normal in organisme. Sunt produsi
de mai multe tipuri de limfocite B si
recunsoc epitopi diferiti ai aceluiasi antigen.
Anticorpi monoclonali: produsi prin metode
de recombinare, de hibridoame (produsi
de fuziune intre un Limfocit B si o celula
tumorala (mielom). Au capacitate de
replicare infinita (M) si sintetizeaza
Anticorpi (LB). Un AMC recunoaste un
singur epitop al unui antigen.

Caracteristici
Afinitatea anticorpului masoara taria interactiunii dintre un
epitop si un situs de legare a anticorpului
Este definita de principiile generale ale termodinamicii privind
interactiile intermoleculare:
KA = constanta de afinitate
[Ab]= concentratia molara a situsurilor de legare neocupate de pe
anticorp
[Ag]= concentratia molara a asitusurilor de legare (epitopi) de pe
antigen
[Ab-Ag] = concentratia molara a complexelor anticorp-antigen
Cu alte cuvinte, KA descrie cantitatea de complexe AB-Ag la punctul
de echilibru. Este cuprinsa intre sub 10 5 mol-1 si peste 1012 mol-1,.
Afinitatea AMC se poate masura cu acuratete, deoarece sunt
omogeni.
Afinitatea APC este inexact determinata, deoarece reprezinta
amestecuri de AC pentru diferiti epitopi si cu caracterisitici de
legare diferite

 Aviditatea Anticorpilor
Aviditatea da o masura a tariei generale a
complexullui anticorp-antigen. Depinde de:
Afinitate
Valenta anticorpului si antigenului
Aranjamentele structurale ale partilor in contact
Toti AC sunt multivalenti; IgG sunt bivalente iar
IgM sunt decavalente; cresterea valentei
inseamna cresterea capacitatii de antigen care
poate fi legat.
AG pot de asemenea sa fie multivalente,
deoarece se pot lega la mai mult decat un AC
Intercatiile multimerice ajuta la stabilizare.

Marcarea (coloratia) directa

Testele de tip ELISA

Coloratia indirecta
(anticorp secundar marcat)

Tehnica
Sectiunile pe lama se blocheaza pentru
legarea nespecifica cu Albumina sau cu
Lactalbumina
Se incubeaza cu AC primar (nemarcat);
Se spala AC primar; blocare
Incubare cu AC secundar
Incubare cu amestecul de vizualizare dupa caz, DAB (peroxidaza), pnitrofenilfosfat (fosfataza alcalina)
Examinare la MO

Vizualizarea IHC a Parkinei la

pacienti cu TBC

IHC Receptori VEGF (Cancer

mamar)
Coloratie Fosfataza alcalina

Amiloid beta, creier uman

(Peroxidaza)

OHd piele umana (PA)

F-actina, muschi neted de

soarece,
col. DAB

C-myc, HCC uman, col.

Peroxidaza (brun)