ANTIGENE, ANTICORPI,

HLA
Cursul 3
1
Antigen definiie, exemple
Antigenele (Atg)
= structuri macromoleculare non-self (strine) ptrunse n
organism

Exemple:
- virusuri
- bacterii
- fungi
- parazii
- polen
- alimente
- medicamente
Sistemul imun (limfocitul B / T) hotrte dac o molecul
e self sau non-self

2
Antigen caracteristici, structur
Caracteristicile unui bun antigen:
- mas molecular mare (>10.000 Da)
- natur organic
- structur complex
- origine - non-self


Structur - Atg este format din:
- componenta purttor = carrier
- epitopi = determinani antigenici


Epitopi
3
Epitopul determinant antigenic
Definiii:
= partea imunologic activ a antigenului, care se cupleaz
cu receptorii specifici ai limfocitelor se numete epitop
sau determinant antigenic
= fragmente ale antigenului care confer specificitate
antigenic moleculei nonself
= regiunile imunologic active ale Atg
Caracteristici:
- epitopii sunt secvene moleculare mici care
protruzioneaz din conformaia Atg
- Atg pot avea - un epitop = Atg monovalente
- mai muli epitopi = Atg multivalente

4
Epitopii clasificarea epitopilor proteici
Epitopi secveniali
- sunt reprezentai de un segment continuu de AA
(aminoacizi) din structura unei proteine
- pot fi expui (accesibili permanent) sau ascuni
(accesibili doar prin denaturare).

Epitopi conformaionali - sunt formai din:
- AA care se afl la distan ntr-un lan polipeptidic
- AA situai pe lanuri diferite i sunt adui unul lng
cellalt prin plierea lanurilor (mpachetarea panglicii
proteice).
5
Denaturare Denaturare
Proteoliz
Epitopi
conformaionali
Epitopi secveniali
Accesibili
Inaccesibili
Pierderea epitopilor
prin denaturare
Ig se fixeaz doar de
epitopii proteinelor
denaturate
Ig se fixeaz de epitopii
proteinelor native i
denaturate
Epitopii clasificarea epitopilor proteici
6
Imunogenitatea definiie, caracteristici
Definiie: proprietatea unui antigen complet de a declana
un rspuns imun cnd ptrunde n organism
Atg = Imunogen
- Atg nu este ntotdeauna imunogen. Uneori pt a deveni
imunogen necesit conjugare cu o molecul purttor
- Atg sunt recunoscute de sistemul imun ca non-self dar
nu toate declaneaz rspuns imun
- un Atg care declaneaz rspuns imun se numete
imunogen sau antigen complet
- un Atg poate fi recunoscut ca non-self dar s nu
declaneze rspuns imun dect n anumite condiii (ex.
hapten - carrier) = antigen incomplet

7
Haptena
Definiie: o substan strin cu masa molecular suficient
de redus ca s nu poat produce rspuns imun
Condiii pentru a deveni imunogen:
- pentru a produce rspuns imun trebuie s se lege de un
carrier (substan transportoare de dimensiuni mai mari)
ca sa fie vzut de sistemul imun
- prin cuplarea carrier - haptena haptena devine
imunogen
- exemplu: medicamentele = haptene, sunt suficient de
mici ca s nu fie recunoscute ca strine de organism.
Uneori, acestea se pot lega de exemplu de proteine i
devin imunogene.

8
1. Factori dependeni de antigen
(a) Diferena biochimic fa de structurile self
- distana filogenetic ntre specii
(b) Mrimea (conteaz!)
- moleculele sub 5 kDa nu sunt n general imunogene
(c) Complexitatea biochimic
- peptidele polimerice = mai puin imunogene dect
cele cu aminoacizi aromatici de aceeai mrime

Imunogenitatea factorii care o determin
9
(d) Organizarea conformaional - cu ct e mai complex, cu
att substana este mai imunogen
- cele mai eficiente imunogene - peptidele
- mai puin imunogene - polizaharidele
- n general neimunogene - lipidele, acizii nucleici
Lys
Ala
Gly
Lys
Val
Leu
Structur primar Structur teriar
Imunogenitatea factorii care o determin
10
2. Factori dependeni de organism
(a) Vrsta - administrarea aceluiai antigen n diferite
perioade de via genereaz efecte diferite:
- la ft, nou nscut - toleran (sistemul imun imatur)
- la adult - rspuns imun manifest (sistem imun matur,
eficient)
- la btrn - rspuns imun diminuat, aberant (sistem
imun degenerat)
(b) Genotipul - rspuns diferit la acelai Atg, la persoane
diferite:
- diferene de ras / diferene individuale


Imunogenitatea factorii care o determin
11
3. Factori dependeni de modul de administrare
(a) Doza de administrare - exist o doz optim de
stimulare a sistemului imun:
- doze prea mici - toleran de zon joas
- doze prea mari - toleran de zon nalt
(b) Numrul de administrri - rspunsul imun crete n
intensitate la administrri repetate
(c) Calea de administrare - este determinant pentru
intensitatea i viteza rspunsului imun
- cele mai eficiente ci - intravenoas, subcutanat,
intraperitoneal
- mai puin eficient - calea oral

Imunogenitatea factorii care o determin
12
Antigenele clasificare
1. Antigene timoindependente
- determin producia de anticorpi fr a necesita
intervenia limfocitelor T helper
- sunt n general structuri polimerice care cupleaz
simultan un mare numr de receptori ai limfocitului B
(BCR) i l stimuleaz masiv, fr a mai fi necesar ajutorul
limfocitelor T
- sunt polizaharide din capsula bacteriilor
- genereaz apariia de IgM
- nu induc formarea de celule B de memorie (RI secundar)

13
2. Antigene timodependente
- marea majoritate a antigenelor
- necesit intervenia limfocitelor T helper pentru a
genera rspuns imun
- genereaz apariia Ig de toate clasele,
- induc formarea celulelor B de memorie (RI secundar)

Antigenele clasificare
14
Anticorpii definiie, generaliti
ANTICORPI (Atc) = IMUNOGLOBULINE (Ig) = GAMAGLOBULINE

Atc = sunt proteine serice care fac parte din fraciunea gama-
globulinelor
Se mai numesc imunoglobuline, deoarece sunt globuline cu rol
de aprare imun
Sunt prezente n - plasm, lichidul interstiial, secreii
Sunt produse de plasmocite ca rspuns la un imunogen
Au capacitatea s recunoasc i s se combine specific cu Atg
Atc recunosc specific un anumit epitop, de care se leag cu o
poriune care are structura complementar = paratop, situs de
legare sau situs combinativ.


15
Anticorpii forme de prezentare
Se prezint sub 2 forme:
- membranar (Atc membranari)
Atc prezeni doar pe membrana limfocitului B
formeaz receptorul specific de antigen (BCR)
rol n recunoaterea antigenului
- secretat (Atc secretai)
Atc prezeni n circulaie
rol n eliminarea antigenelor
ndeplinesc funcia efectorie a sistemului imun
16
Anticorpii Atc membranari
Atc membranari = Ig membranare ale limfocitelor B i sunt
utilizate ca receptor specific de antigen (BCR = receptorul
celulei B)
Prezint n continuarea regiunii constante, alte 2 regiuni:
- o regiune transmembranar
- o regiune citoplasmatic

17
Fiecare limfocit B are pe membran un singur tip de Ig, cu
o anumit secven de AA n regiunea variabil (o anumit
form a situsului de legare cu Atg) destinat s cupleze
doar un anumit Atg
Dac acel Atg apare n circulaie, el se cupleaz cu Ig
membranare
Limfocitul B este activat, se divide rapid i se difereniaz
n plasmocite (cu ajutorul Limfocitului Th)
Plasmocitele produc o mare cantitate de Ig pe care le
elimin n lichidul nconjurtor

Anticorpii Atc membranari
18
Anticorpii Atc secretai (Ig secretate)
Ig secretate produse de plasmocite sunt identice ca
structur cu Ig membranare iniiale, dar le lipsete
segmentul transmembranar i citoplasmatic
Ele ajung prin lichide n toate regiunile organismului i se
cupleaz cu Atg specific
Dup cuplare, activeaz complementul i se leag de
receptorii unor celule distructive, determinnd astfel
eliminarea Atg

19
Fab Fab
Balama
Fc
Anticorpii structur general
Au forma literei Y cu 3 regiuni:
- n centru - regiune balama,
rol: asigur mobilitatea
braelor
- braele superioare - Fab
(fragment antigen-binding)
rol: fixarea Atg
- regiunea inferioar - Fc
(fragment cristalizabil)
rol: eliminarea Atg
20
tipul de lan greu
determin clasa de
imunoglobuline -
IgG, IgM, IgA, IgD
i IgE
- 2 lanuri uoare L (light)
identice - k sau
formate din circa
200 AA

O molecul de imunoglobulin prezint 4 lanuri:
- 2 lanuri grele H (heavy) identice - , o, o sau c
formate din circa 400 - 500 AA
Anticorpii structur primar
21
Fiecare lan de Atc prezint
dou regiuni:
- variabil (VH sau VL)
- constant (CH sau CL),
cuprinde regiunea balama
Fiecare regiune are domenii:
- VH - domeniul VH
- CH - domeniul CH
1
, CH
2
,
CH
3
, CH
4
- VL - domeniul VL
- CL - domeniul CL
Anticorpii structur primar
22
Anticorpii structur tridimensional
domeniile variabile (VH i VL) formeaz regiunea variabil,
numit situsul de legare cu Atg
acesta are form variabil, n funcie de forma antigenului
suprafeele Atg i Atc sunt complementare - principiul cheii
n broasc
cu ct cele dou suprafee se potrivesc mai bine, Atc are
afinitate mai mare pentru Atg
23
Anticorpii funcii generale
Legarea Atg
Activeaz cascada complementului pe calea clasic
Se ataeaz de membranele unor celule prin receptori
specifici. Cnd moleculele de Atc fixate de membrane
recunosc Atg, ele stimuleaz anumite funcii celulare
Unii Atc pot traversa placenta

24
Anticorpii funciile regiunilor
Funcia regiunii variabile = cuplarea Atg
- aceste regiuni se numesc variabile deoarece secvena
de AA difer mult de la un Atc la altul
- diversitatea structural asigur o enorm varietate de Atc,
fiecare destinat unui anumit Atg
- VH (captul variabil al lanurilor H) se asociaz cu VL
(captul variabil al lanurilor L) i formeaz situsul
combinativ pentru legarea cu Atg, care urmeaz s fie
recunoscut

25
Funcia regiunii balama =
asigurarea mobilitii
- funcioneaz ca un pivot
- confer mobilitate
- permite celor 2 situsuri de
legare de pe cele 2 brae
s cupleze Atg aflate la
distan variabil

Anticorpii funciile regiunilor
26
Funcia regiunii constante = eliminarea Atg
- are aceleai secvene de AA pentru fiecare clas de Atc
- domeniile constante C din lanurile H (CH) sunt
responsabile de aciunile biologice ale Atc
- domeniile CH1 i CL au rol de a prelungi braele
superioare ale Atc, permind cuplarea a 2 Atg aflate la
distan mai mare
- domeniile CH2 (CH3) au rol de activare a
complementului distrugerea Atg
- domeniile CH3 (CH4) au rol de cuplare cu receptori
specifici de pe macrofage, neutrofile, celule NK
eliminarea Atg

Anticorpii funciile regiunilor
27
Anticorpii generarea diversitii Ig
Fiecare om are, la un moment dat, sute de milioane de tipuri
de Ig
Acestea difer ntre ele prin forma situsului de legare cu Atg
Cum poate apare aa o mare varietate de Ig?
- limfocitele B, n cursul maturrii din mduva hematogen,
efectueaz un proces numit recombinare genic, prin
care se genereaz aceast uria varietate de Ig
- dup ntlnirea cu Atg, n organele limfoide secundare,
limfocitele B activate sufer procese de mutaie frecvent
a genelor imunoglobulinice, pentru a genera Atc tot mai
eficieni

28
Anticorpii clasele de imunoglobuline
Imunoglobulina G (IgG)
- reprezint 75% din Ig serice
- se prezint sub form de monomeri
- exist 4 subclase: IgG1, IgG2, IgG3 i
IgG4
- sunt cele mai eficiente Ig, apar n
rspunsul imun secundar. Toate 4
subclasele de IgG sunt caracteristice
pentru rspunsul imun secundar, care
apare la al 2, 3,.. n contact cu Atg

- trec prin placent i realizeaz imunizarea pasiv
umoral a nou-nscuilor n primele luni de via
(protecia ftului)

29
Imunoglobulina M (IgM)
- reprezint 10% din Ig serice
- se prezint sub form de
pentameri (5 monomeri leagai
prin puni disulfidice)
- prezint lan J
- apar n rspunsul imun primar
- nu trec prin placent

- IgM particip la aprarea contra bacteriilor i virusurilor
- sunt anticorpii naturali ai grupelor sanguine, factorii
reumatoizi din poliartrita reumatoid

Anticorpii clasele de imunoglobuline
30
Imunoglobulina A (IgA)
- reprezint 12 - 15% din Ig serice
- 2 forme: monomer (n plasm) i dimer (n secreii)
- forma dimer prezint o structur numit component
secretorie care protejeaz molecula de digestie
- este principala Ig n secreii - asigur imunitatea mucoaselor
(n lacrimi, saliva, suc gastric, surfactant pulmonar)
- au rol n aprarea antiviral i antibacterian
- nu traverseaz placenta



Anticorpii clasele de imunoglobuline
31
Imunoglobulina D (IgD)
- 0,2% din totalul Ig, rol redus
- se prezint sub form de monomer
- are o pies coad (tail piece)
- IgD este prezent pe suprafaa celulelor B
Anticorpii clasele de imunoglobuline
32

Imunoglobulina E (IgE)
- 0,01% din totalul Ig serice
- se prezint sub form de monomer cu extradomeniu CH4
- IgE se afl la indivizii normali n concentraii serice extrem
de sczute, (ng/ml)
- rol esenial n fenomenele alergice - IgE crete foarte mult


Anticorpii clasele de imunoglobuline
33
IgE se fixeaz pe membrana mastocitelor. Cnd apar Atg
(alergene), determin degranularea mastocitelor cu
eliberarea de mediatori
IgE - implicate n aprarea antiparazitar. Dup fixarea pe
suprafaa paraziilor, IgE sunt recunoscute de eozinofile,
care distrug paraziii

Anticorpii clasele de imunoglobuline
34
Molecule HLA definiie
Ansamblu de molecule membranare care mediaz prezentarea
Atg i fenomenele imune
Determin tolerana / rejetul grefelor, de aceea se mai numete
COMPLEXUL MAJOR DE HISTOCOMPATIBILITATE
(Major Histocompatibility Complex - MHC)
Istoric, la om s-au descoperit iniial pe leucocite, de aceea se
mai numesc antigene leucocitare umane
(Human Leucocyte Antigen - HLA)
molecule MHC = molecule HLA
Moleculele HLA sunt denumite antigene de histocompatibilitate
i confer individualitate biochimic fiecrui individ.


35
Molecule HLA clasificare, roluri
Exist trei clase de molecule HLA
- clasa I
- clasa a II-a
- clasa a III-a
Sunt codificate de gene situate pe cromozomul 6
Motenim jumtate din genele HLA de la mam i jumtate
de la tat
Roluri:
- Rol n rspunsul imun
- Rol n transplant
- Rol n predispoziia fa de boli


36
Molecule HLA HLA clasa I
Structur
- un lan o cu 3 domenii o1, o2, o3
- domeniile o1 i o2 delimiteaz
situsul de legare al Atg
- |-2 microglobulina
Tipuri
- 3 tipuri de HLA clasa I: A, B, C
Distribuie
- pe toate celulele nucleate din
organism
- nu au HLA I: eritrocitele, neuronii,
spermatozoizii, celulele
trofoblastice

37
Funcie prezentarea de Atg endogene Lf Tc:
- legarea Atg proteice endogene HLA se cupleaz n
interiorul celulei cu segmente din proteinele sintetizate n
acea celul
- prezentarea Atg care provin din citoplasma celulei (Atg
virale i Atg canceroase) mpreun cu molecula HLA, la
exteriorul celulei, limfocitului T citotoxic CD8+ (Lf Tc)



- recunoaterea Atg de ctre Lf Tc
- dac peptidele sunt non-self
(celule cu virus, tumorale),
Lf Tc CD8+ se activeaz i
astfel celula este distrus
Molecule HLA HLA clasa I
38
Structur
- un lan o cu 2 domenii o1 i o2
- un lan | cu 2 domenii |1 i |2
- domeniile o1 i |1 delimiteaz
situsul de legare
Tipuri
- DR - cel mai important
- DQ, DP, DO
Distribuie
- numai pe celulele prezentatoare
de antigen (macrofage, celule
dendritice, limfocite B)
Molecule HLA HLA clasa II
39
- HLA II se cupleaz n interiorul
celulei prezentatoare de
antigen cu peptide rezultate
din procesarea Atg exogene
- prezint, la exteriorul celulei,
aceste peptide la limfocitul T
helper (Lf Th)
- Lf Th se activeaz astfel i
stimuleaz alte celule imune
(limfocitul B, limfocitul T
citotoxic)

Funcie prezentarea de Atg exogene Lf Th:
Molecule HLA HLA clasa II
40
Implicarea HLA n recunoaterea Atg
41
Moleculele HLA diversitate
Exist zeci - sute de variante HLA din fiecare tip, notate cu
litera corespunztoare tipului i numrul alelei (ex. HLA A3,
A66, B7, B27, C3, C9, DR3, DR4 etc.)
Fiecare om are, pe suprafaa celulelor sale:
2 tipuri distincte de molecule HLA clasa I de tip A,
2 tipuri distincte de molecule HLA clasa I de tip B,
2 tipuri distincte de molecule HLA clasa I de tip C
2 tipuri distincte de molecule HLA clasa II de tip DR
cte una motenit de la mam i alta de la tat
Astfel, exist foarte multe posibiliti de combinaie a
diferitelor tipuri de HLA, ceea ce face ca fiecare om s aib
practic o combinaie HLA distinct

42
Datorit recunoaterii HLA de ctre Lf Tc, aceste molecule
determin tolerana sau rejetul grefelor
Cu ct combinaia de HLA este mai asemntoare ntre donor
i recipient, ansa de supravieuire a grefei este mai mare
Determinarea combinaiei de molecule HLA i identificarea
unui donor compatibil este esenial pentru efectuarea unui
transplant reuit
Rol n transplantul de organ:
Haplotip identic 100% = compatibilitate 100%
Haplotip identic 50% = compatibilitate 50%
Haplotip identic <50% = risc de rejet
Moleculele HLA diversitate
43