Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Microbiologie Curs PDF
Microbiologie Curs PDF
Microbiologie
Omul triete ntr-un mediu populat de o imensitate de microorganisme, fiind el
nui purttorul unora dintre ele. Dimensiunile lor reduse au fcut ca ele s scape mult
timp observaiei, dar rezultateleactivitii lor au fost sesizatedin totdeauna. Astfel, omul a
selectat empiric microorganisme pe care le-a folosit n scopuri practice ca, de pild,
dospirea pinii, fermentaia vinului, a berii etc., practicnd n acelai timp incontient
tehnici de sterilizare,care i-au permis conservareapentru un timp ndelungat a alimentelor.
Rolul microorganismelor n etiologia bolilor infecioase a fost descoperit doar n a
doua jumtate a secolului trecut, cu toate c de-a lungul timpului muli cercettori au
sugerataceastposibilitate.
Subiect paramedical la nceputurile ei, microbiologia devine o tiin de sine
stttoare la sfritul secolului al XIX-lea n urma descoperirilor lui Pasteur, precedate de
multe secole de observaii i cercetri.Ea se ocup cu studiul organismelor microscopice.
Astzi microbiologia este o tiin foarte vast, cu multe ramuri cum sunt:
microbiologia medical (uman i veterinar), microbiologia plantelor, microbiologia
industrial, microbiologia solului etc. Noi ne vom opri asupra microbiologiei medicale care
studiazmicroorganismeleimplicaten etiologia infeciilor la om.
1. CONCE P T U L
DE CONTAG I U N E
MICRO B I LO R
MICROO RGAN IS M E L O R
TEO R I E I
MICRO B I E N E
A BOL I L O R
ncepnd din secolul al XVII s-au ridicat tot mai frecvent voci care au pledat pentru
rolul microorganismelor n etiologia infeciilor, dar ele nu au fost luate n seam.Robert
Boyle sugereaz n 1663 c unele boli ca febrele i altele ... trebuie s rezulte n urma
unor fermentaii. Agostino Bassi descrie fungul (denumit mai trziu Botrytis bassiana)
care produce muscardina, la viermii de mtase i art c boala se transmite prin hrana
infectat. Acesta a fost primul raport tiinific cu privire la etiologia printr-un
microorganism al unei boli, urmat curnd de comunicarea lui Schnlein , care descrie o
ciuperc,Achorionschoenleini, ce produce la om boala numit favus.
n anul 1850 Rayer i Davaine raporteaz prezena unui bacil, cu capetele tiate
drept, n sngele animalelor ce au murit de antrax i posibilitatea transmiterii acestei
infecii la alte animale,prin inoculareasngelui n care exist aceti bacili.
I DE Z V O L T A R E A
IMUNOLOGI E I
I DE Z V O L T A R E A VI R U S O L O G I E I
CH I M I O T E R A P I E I
ANT I I N F E C I O A S E
MO D E R N
I CONTE M P O R A N
**generated by an Adobe
application**LOCUL AGENILOR
INFECIOI N SISTE M A T I C A
MICROO RGAN IS M E L O R
nainte i mult timp dup descoperirea microorganismelor, organismele vii au fost mprite n dou
regnuri, animal i vegetal, nebnuindu-se posibilitatea existenei unor alte forme de via.
n secolul trecut s-a observat, ns, c microorganismele prezint nu numai asemnri dar i diferene
fa de celulele de tip animal i vegetal. Sesiznd aceste diferene, Haeckel propune n 1866 reunirea
microorganismelor cunoscute ntr-un regn aparte, PROTISTA, care s cuprind algele, protozoarele, fungii
i bacteriile.
n secolul nostru, prin dezvoltarea mijloacelor de cercetare, s-a demonstrat c microorganismele,
ncadrate iniial n acest regn, difer n mod fundamental unele de celelalte. Astfel, celulele bacteriene au o
structur mult mai simpl, fiind desemnate ca celule de tip procariot, iar algele, protozoarele i fungii au o
structur complex de tip eucariot. Ca urmare, termenul de Protista s-a restrns asupra organismelor
unicelulare de tip eucariot, bacteriile fiind trecute ntr-un regn aparte - PROCARIOTE.
1. PROTISTE
Algele sunt microorganisme eucariote, acvatice, fotosintetizante, care formeaz un grup heterogen, de
la dimensiuni microscopice pna la forme gigante, pluricelulare, filamentoase. Se cunosc 16.000 de specii,
divizate n 6 grupe filogenetice. Ele nu prezint interes medical propriu-zis, cu excepia agar-agarului din
care se obine agarul, un polizaharid important n bacteriologie, deoarece servete la prepararea mediilor de
cultur solide.
Mycetele sau ciupercile microscopice sunt celule eucariote grupate n 4 clase. Exist n jur de 12.000
de specii, din care doar 100 sunt de interes medical.
Protozoarele sunt microorganisme unicelulare eucariote foarte evoluate structural i n general
mobile, asemnnndu-se cu celulele animale. Cele de interes medical se ncadreaz n 4 clase: flagelata,
rhizopoda, sporozoa i ciliata.
2. PROCARIOTE
Archaebacteriile sunt lipsite de interes pentru medicin. Ele sunt bacterii termofile, productoare de
metan.
Eubacteriile cuprind un numr foarte mare de bacterii, dintre care cele de interes medical sunt:
bacteriile clasice - cu forme variate i cu perete celular,
chlamydiile - bacterii cu parazitism intracelular obligatoriu i care prezint un mecanism de
multiplicare unic n lumea bacteriilor,
rickettsiile - bacterii cu habitat intracelular (cu o excepie), dar cu diviziune direct, ntlnit la
majoritatea bacteriilor,
micoplasmele - bacterii crora le lipsete n mod natural peretele celular.
**generated
by
an
Adobe
application**
MORFOLOGIA I
STRUCTURA BACTERIILOR
1. MORFOLOGIA BACTERIILOR
1.1. Dimensiuni
Lumea bacterian este populat de entiti microscopice ce nu pot fi vzute cu ochiul liber.
Dimensiunile sunt att de reduse, nct un volum de 1cm3 poate cuprinde 1012 bacterii cu o greutate de
aproximativ 1g, iar ntr-un mediu lichid limpede sunt necesare cel puin 1-10 milioane de bacterii pentru a
produce o turbiditate sesizabil macroscopic. n intestinul nostru sunt prezente n jur de 10-100 de trilioane
de bacterii, numrul lor depind cu mult cel al propriilor noastre celule.
Dimensiunea bacteriilor se exprim n micrometri (1=10 -3 mm), variaiile fiind n funcie de specie,
form, mediu i vrsta culturii. n general, este cuprins ntre 1-10. Cele mai mici bacterii sunt cele din
1.2. Form
n raport cu forma lor deosebim 4 categorii de bacterii: rotunde (cocii), alungite (bacili), ncurbate
(spirili, spirochete, vibrioni) i filamentoase (actinomycetele).
cocii sunt bacterii rotunde (genul Staphylococcus), ovalare (genul Streptococcus), lanceolate (specia
Streptococcus pneumoniae), reniforme (genul Neisseria) cu de 0,8 - 1;
bacilii sunt bacterii cu form alungit de bastona cu dimensiuni ntre 1,5 - 10. La bacili este
important examinarea extremitilor, aspectul acestora avnd rol n identificarea lor. Astfel, bacilii
pot prezenta capetele rotunjite (familia Enterobacteriaceae), tiate drept (Bacillus anthracis bacilul crbunos), mciucate (Corynebacterium diphteriae - bacilul difteric), n form de suveic
(Fusobacterium);
cocobacilii sunt bacterii uor alungite, fiind forme intermediare ntre coci i bacili (Yersinia pestis,
Bordetella pertussis, Haemophilus influenzae);
vibrionii sunt bacterii ncurbate n form de virgul (Vibrio cholerae);
spirilii sunt bacterii spiralate avnd 1-2 spire rigide (Spirillum volutans);
spirochetele sunt bacterii spiralate cu corpul flexibil avnd 12-20 de spire (Treponema pallidum),
foarte multe spire strnse (Leptospira) sau 2-3 spire (Borrelia):
actinomicetele sunt bacterii foarte asemntoare fungilor i formeaz filamente sau hife lungi i
ramificate care se rup, rezultnd forme bacilare (Actinomyces).
1.3. Aezare
Bacteriile sunt organisme unicelulare care se multiplic prin diviziune binar. La unele specii, dup
diviziune urmeaz separarea complet a celulelor fiice, rezultnd bacterii izolate. La alte specii, dup
diviziune, celulele fiice rmn legate ntre ele, grupndu-se n mod caracteristic datorit unei substane
vscoase dispus fie pericelular, fie localizat n anumite regiuni determinnd diferite tipuri de aezare a
celulelor.
Aezarea bacteriilor permite uneori recunoaterea genului, sau chiar a speciei, prin examinarea la
microscopul optic a preparatelor colorate efectuate din culturi, sau direct din produsul recoltat de la pacient.
Cocii se aaz:
n grmezi sau asemntor unei ciorchini de struguri ca, de exemplu, germenii din genul
Staphylococcus;
n tetrade la genul Micrococcus;
n baloturi de cte 8 coci orientai n cele 3 direcii ale spaiului la genul Sarcina;
n lanuri la genul Streptococcus;
n diplo, ca dou flcri de lumnare care se unesc prin bazele lor, la specia Streptococcus
pneumoniae;
n diplo, ca dou boabe de cafea care se privesc fa n fa prin concavitile lor ca, de pild, la
Neisseria gonorrhoeae (gonococ) i Neisseria meningitidis (meningococ);
izolai, care nu sunt de interes medical.
legate de beta-hidroxiacizi grai cu 10-16 atomi de carbon fixai direct de membrana extern,
miezul sau core, numit i antigen R, comun tuturor bacteriilor gram - negative i care include 2
zaharuri caracteristice: acidul keto-deoxyoctanoic i o heptoz.
uniti monozaharidice repetitive (15-40) care sunt specifice de specie i tip i constituie
antigenul O al bacteriilor gram-negative.
LPZ este o toxin termolabil, care se elibereaz n mediul nconjurtor de ctre bacteriile gramnegative numai dup liza lor i foarte reactiv n organismul gazd. Astfel, lipidul A produce febr,
activeaz mecanismele aprrii antiinfecioase i n exces produce ocul endotoxic cu evoluie grav, chiar
fatal.
Spaiul periplasmic. Sistemul structural dublu al peretelui celular la bacteriile gram-negative creeaz
un compartiment ce se ntinde de la membrana celular pn la membrana extern, numit spaiu
periplasmic. El conine peptidoglicanul i un gel care favorizeaz nutriia bacteriei prin coninutul n
enzime degradative ca, de pild, fosfataze, nucleaze, proteaze etc. Tot aici sunt prezente enzimele de
inactivare ale unor antibiotice cum sunt beta-lactamazele i cefalosporinazele.
Bacteriile acido-alcoolorezistente de interes medical sunt bacilul tuberculos i bacilul leprei a cror
perete celular se aseamn cu cel al bacteriilor gram-pozitive. Structurile speciale conin acid micolic i o
cear ce confer acestor bacterii caractere tinctoriale deosebite i rezisten crescut la factorii de mediu.
Astfel dac, dup o nclzire de scurt durat ce topete cerurile, un colorant ptrunde n celula bacterian,
decolorarea acesteia sub aciunea acizilor sau alcoolilor nu se mai produce ca la alte bacterii. Acest caracter
se numete acido-alcoolo-rezisten. Bacteriile acido-acoolo-rezistente se coloreaz foarte slab cu coloraia
gram, evidenierea lor fcndu-se la cald prin tehnica Ziehl-Neelsen.
Bacterii cu perete alterat sau formele L. Sunt bacterii cu stratul bazal viciat sub aciunea unor
factori din mediu ca, de exemplu, lizozimul i penicilina, care lizeaz, respectiv mpiedic sinteza
peptidoglicanului.
Bacteriile lipsite total de perete celular se numesc protoplati i provin din rndul bacteriilor gram pozitive, iar cele cu perete parial lezat, sferoplati din bacteriile gram-negative, care i pierd mai greu
peretele.
Formele L sunt foarte sensibile la variaiile osmotice, putnd supravieui numai n condiii speciale de
osmolaritate, dar sunt foarte rezistente la antibioticele beta-lactamice. Dac factorii nocivi dispar din
mediu, formele L se pot transforma n bacterii normale prin resinteza peretelui celular. Unele teorii mai
vechi susin c formele L pot ntreine i croniciza o infecie, dar dovezile n acest sens lipsesc.
Funciile peretelui celular:
asigur forma, rezistena mecanic i osmotic a bacteriei;
asigur protecia membranei citoplasmatice fa de presiunea intern a celulei bacteriene, care
este foarte mare: 5-6 atm la E. coli, 20-30 atm. la S. aureus;
regleaz traficul molecular de perete n ambele sensuri, deci schimbul de substane dintre
bacterie i mediul nconjurtor, fiind permeabil pentru molecule cu o GM mai mic de 10.000
daltoni i cu un diametru mai mic de 1nm;
stocheaz unele enzime n spaiul periplasmic la bacteriile gram-negative ce vor fi eliberate dup
necesiti, spre deosebire de bacteriile gram-pozitive care i elimin enzimele direct n mediul
extern;
prezint receptori pentru bacteriofagi1;
este sediul antigenelor de suprafa, fiind deci implicat n rspunsul imun al macroorganismului;
este sediul unor factori de patogenitate;
are rol n diviziunea bacterian i n procesul de sporulare.
1. COM P O Z I I A CH I M I C
A BACT E R I I L O R
Compoziia chimic a bacteriilor este asemntoare tuturor organismelor vii. Ea cuprinde n jur de 20
de elementeale sistemului periodic, care se pot mpri n trei grupe:
elementele de baz , H, C, N, O, P i Sulf, care intr n compoziia substanelor cu rol
primordial structural i energetic a oricrei celule vii (proteine,lipide i zaharide),
elemente n concentraie sub 1% i mai ales sub forma ionizat cum sunt K +, Na+, Mg 2+, Cl -,
Ca etc. cu rol funcional n procesele de activare a unor enzime (Mg), n permeabilitatea sistemului
membranar al celulei bacteriene (Ca), n vscozitateacitoplasmei etc.
2+
oligoelementele, cum sunt Mn 2+, Fe2+, Fe3+, Co 2+, Cu 2+, MoO 42+, SeO32-, WO 42- etc., ce se
g sesc n celula bacterian n cantit i foarte reduse, sub 0,001%, i care intr n structura unor
coenzime absolut necesaredesfurrii metabolismului,
coninutul n ap al bacteriilor se situeaz n medie la 85% din masa celular. Apa este faza n
care se solubilizeaz, sunt transportai electroliii i substanele neelectrolitice i mediul n care se petrec
toate reaciile metabolice. Ea particip la multe din aceste reacii (hidroliz , reacii anabolice etc.) i
formeaz mpreun cu substanele anorganice i macormoleculele organice coninute o unitate fizicochimic i biologic.
2. NUT R I I A
BACT E R I A N
Nutriia bacterian reprezint totalitatea proceselor prin care bacteriile i procur din mediul
nconjur tor substanele necesare supravieuirii, cre terii i nmulirii , iar respiraia bacterian
modalitateade a-i produce energia necesar activitii metabolice.
Sursa de energie . n funcie de sursa de energie pe care o folosesc,bacteriile se mpart n:
fotosintetizante, care utilizeaz energia luminoas pentru sintezacompuilor proprii i
chimiosintetizante, care si procur energia prin reacii de oxido-reducere a unor
substane. Bacteriile care oxideaz substanele anorganice se numesc lithotrofe, iar cele care
oxideaz substane organice chemoorganotrofe .
Sursa de carbon. Dup sursa de carbon, bacteriile se clasific n:
autotrofe, care sintetizeaz compu i organici pornind de la substane anorganice, sursa de
carbon fiind CO 2,
mixotrofe, care folosesc ca surs de carbon att substane organice ct i CO 2,
heterotrofe, care utilizeaz ca surs de carbon numai substane organice.
Sursa de azot a bacteriilor de interes medical o constituie n general aminoacizii, dar unele bacterii
utilizeaz i srurile de amoniu (Escherichiacoli,Salmonellaetc.).
Necesarul de oxigen pentru dezvoltareabacteriilor este variabil i va fi discutat n cadrul reaciilor de
energogenez.
3. M E T A B O L I S M U L
BACT E R I A N
Metabolismul bacterian cuprinde totalitateareaciilor biochimice care au loc n celula bacterian, precum i cele
care sunt determinate de microorganism n mediul nconjur tor. Ele au ca scop final cre terea i multiplicarea
bacteriei i se mpart n:
reacii catabolice , prin care se fragmenteaz substratul nutritiv n uniti componente cu eliberarede
energie,
reacii metabolice intermediare , prin care energia rezultat
nmagazinat n compui macroergici i
reaciile anabolice , prin care celula bacterian i sintetizez substanele propri, cu consum
energetic.
Toate acestereacii sunt catalizatede enzime a cror activitateeste controlat genetic astfel nct intensitatealor
s fie ct mai eficient adaptat condiiilor n care bacteria crete i se nmulete.
i catalaz care
4. CR E TE R E A
I N M U L I R E A
BACT E R I I L O R
5. IN F L U E N A FACTO R I L O R DE M E D I U
N M U L I R I I BACT E R I I L O R
ASU P R A
Unii parametri fizici ai mediului nconjur tor influeneaz n mod hot rtor cre terea i multiplicarea
microorganismelor.
5.1. Temperatura
Temperarura optim de dezvoltare a bacteriilor este cea a habitatului lor natural. n funcie de aceast
temperatur , bacteriile se mpart n psihrofile, care se nmulesc optim la 20C dar i sub aceast temperatur ,
mezofile, cu temperatura optim cuprins ntre 20-40C i termofile, care se nmulesc optim la peste 45C.
Bacteriile mezofile sunt cele patogene deoarecese nmulesc la temperatura organismului, fiind denumite i
bacterii homeoterme.
Limitele de temperatur n care acestebacterii pot s creasc sunt ns mai mari i variaz de la specie la specie.
Astfel, gonococul i meningococul nu suport variaii mai mari de 1-2C fa de temperatura optim, spre deosebire
de enterobacterii, care cresc n limite foartelargi.
Microorganismele sunt sensibile la temperaturile ridicate,aplicaia practic a acestui aspectfiind sterilizarea.
Temperaturile moderat sczute,ca, de pild, cea de +4oC din frigidere,nu distrug bacteriile,dar opresc n general
nmulirea lor prelungindu-le viabilitatea. Din acest motiv, majoritatea produselor biologice sau patologice destinate
examenului bacteriologic se pstreaz n aceste condiii. Totui, exist tulpini microbiene care se nmulesc i la
temperatura frigiderului ca, de exemplu, tulpinile criogene de Pseudomonasaeruginosa, ce se nmulesc la 0oC i tulpini
din familia Enterobacteriaceae(E.coli) care se n nmulesc la +5oC. Acest aspect trebuie luat n calcul de ctre medicul
5.2. pH- ul
Bacteriile se pot dezvolta n limite largi de pH, cele patogene pentru om dezvoltndu-se optim la un pH de 7,27,4. Exist i excepii ca, de pild, bacteriile din genul Brucellacare cresc la un pH de 6,0 i vibrionul holeric la pH de
9,0. Lactobacilii, prezeni n flora vaginal normal se dezvolt chiar i la un pH de 3,9.
Unele bacterii modific ele ns i prin procesele metabolice pH-ul mediului. Aceast modificare poate opri
nmulirea lor sau chiar distruge cultura. Din acest motiv, multe medii au n compoziia lor soluii tampon care
menin pH-ul n limite convenabile.
Modificarea de ctre o bacterie a pH-lui unui mediu poate avea valoare deosebit n identificareaunui microb i
poate fi sesizat prin adaugarea n mediu a unui indicator de pH. Foarte multe bacterii se identific biochimic prin
proprietatea lor de a fermenta diferite zaharuri. Aceast capacitate se evideniaz tocmai prin ns mnarea unei
bacterii pe mai multe medii ce conin fiecare alt zahar i un indicator de pH. n cazul ferment rii, acidifierea va
determina schimbareaculorii mediului.
5.3. Umiditatea
Apa liber este absolut necesar creterii i multiplicrii microbilor. Necesarul de ap variaz n funcie de
specie. Astfel, datorit coninutului srac n ap a unor alimente cum sunt gemul de fructe, pinea, unele sorturi de
cacaval, arahidele etc.,multiplicarea bacteriilor este practic imposibil, n timp ce mucegaiurile se pot dezvolta foarte
bine chiar i n acestecondiii.
Pentru a aprecia umiditatea,se compar coninutul n ap a vaporilor deasupra apei curate,care se noteaz cu 1,
cu coninutul n vapori deasupra mediului de cultur. Bacteriile de interes medical au nevoie de o umiditate de 0,98,
pe cnd ciupercile cresc i la o umiditatede 0,8.
Prin liofilizare (desicare brusc la -78oC), care este o metod de conservare a microbilor, se extrage practic
ntreaga ap liber din celulele bacteriene, ceea ce are ca urmare creterea stabilit ii biopolimerilor i ncetarea
metabolismului. Bacteriile liofiliizatese pstreaz ani de zile.
5.5. Ultrasunetele
Ultrasunetele cu o frecven peste 20.000 de cicli/s sunt bactericide. Bacteriile i virusurile sunt distruse de
ultrasunete ntr-un interval de o or . Ultrasonarea microorganismelor se folose te mai puin pentru sterilizare, ct
pentru a obine diferite componente bacteriene sau virale, cum sunt: enzime, perei celulari, acizi nucleici bacterieni
n scopul cercetrii acestora.
5.8. Electricitatea
Electricitateasub form de cureni galvanici, cureni de joas sau nalt frecven nu afecteaz bacteriile. Dac
ns curentul electric este trecut printr-un mediu lichid, bacteriile pot fi afectatesub aciunea unor ioni sau produi
chimici rezultai n urma electrolizei.
5.9. Radiaiile
5.9.1. Razeleneionizante
Razeleultraviolete. Puterea bactericid a razelor luminoase devine perceptibil la o lungime de und de 330nm,
crescnd pe msur scderii lungimii de und a luminii UV. Timpul necesar distrugerii microorganismelor depinde de
6. M E T O D E
DE CULT I V A R E
A BACT E R I I L O R
Cunoaterea necesitilor nutritive ale bacteriilor este foarte important n bacteriologia medical, deoarecest
la baza prepar rii mediilor de cultur destinate izol rii diverselor specii bacteriene din produsele biologice sau
patologice.
La nceputurile dezvoltrii bacteriologiei, prepararea mediilor a fost artizanal, numeroi bacteriologi intrnd n
istoria microbiologiei prin mediile pe care le-au preparat i care le poart i ast zi numele. Astfel, amintim, de
exemplu, mediul Loeffler pentru cultivarea bacilului difteric, mediul Lwenstein-Jensen pentru bacilul lui Koch,
mediul selectiv Wilson-Blair pentru salmonele i multe altele.
Prin cercetarea necesit ilor nutritive ale diferitelor specii s-au realizat medii adecvate pentru aproape toate
bacteriile de interes medical, speciile necultivabile fiind foarte puine, ca, de pild , Mycobacterium leprae i unele
spirocheteprintre care Treponemapallidum.
Cultivareabacteriilor n scop diagnostic pune n esen dou probleme:
alegereaunui mediu de cultur optim, care s permit izolarea tuturor bacteriilor care ar putea fi prezente
n produsul de examinat i
obinerea bacteriilor n culturi pure, pentru a putea fi identificate.
Ereditatea este nsuirea general biologic a tuturor vieuitoarelor de a transmite caracterele specifice speciei
la urmai iar variabilitatea apariia unor caractere diferite de cele ale genitorilor.
Dintre cele dou laturi ale geneticii bacteriene, variabilitatea este cea care intereseaz medicina n mod
deosebit. Modificarea zestrei ereditare la bacteriilor d natere unor tulpini bacteriene noi care, prin virulen i
rezistena la chimioterapice, se adapteaz mai bine condiiilor de mediu i nlocuiesc bacteriile mai puin adaptabile.
Un exemplu foarte sugestiv n acest sens l reprezint modificarea, numai ntr-un secol, a etiologiei infeciilor
nosocomiale 1. Astfel, agenii etiologici ai hospitalismului clasic ca, de pild, bacteriile din genurile Clostridium i
Streptococcus, se ntlnesc astzi extrem de rar, ei fiind nlocuii cu agenii etiologici ai hospitalismului modern care
sunt tulpini multirezistente la antibiotice ce aparin speciilor Staphylococus aureus, Pseudomonas aeruginosa,
familiei Enterobacteriaceae etc.
Pentru a nelege mecanismele variabilitii, vom schia, pe scurt, bazele structurii, replicrii i funcionalitii
materialul genetic la bacterii.
- plasmide
- genomul bacteriofagilor
- fragmentele de inserie (IS)
- transpozonii (Tn).
3. VARIABILITATEA LA BACTERII
Bacteriile sunt supuse acelorai legi ale eredittii, unitare lumii vii, cu unele particulariti dictate de
organizarea materialului genetic. Astfel, n timpul diviziunilor succesive (n lipsa unui accident genetic) toi
descendenii unei bacterii sunt identici ntre ei i identici cu celula din care provin. Aceasta este descendena
vertical cu formare de clone de indivizi identici, stabilitatea fiind posibil datorit cromozomului haploid cu set
unic de gene.
Variabitatea la bacterii, latur a geneticii care are implicaii deosebite n medicina practic, poate fi explicat
prin dou procese fundamentale:
variaia fenotipic, care reprezint schimbarea unor nsuiri ale bacteriilor, ca adaptare la condiiile mediului
nconjurtor, fr s intervin vreo modificare n genomul bacterian i
variaia genotipic, ce rezult prin modificarea genomului.
Apariia modificrilor genetice la bacterii este cunoscut de mult dar nu s-a tiut, ns, dac aceste modificri
urmeaz aceleai legi ca i la organismele cu organizare superioar. n 1943 s-a dovedit faptul c modificrile
proprietilor unei populaii bacteriene este rezultatul unor variaii rare la un numr mic de celule, care se selecteaz
i dau natere unei populaii noi. Variabilitatea la bacterii se produce prin: mutaii, transfer de material genetic i
transpoziie.
3.1. Mutaia
CLASA III cuprinde bacteriofagii transpozabili ca, de pild, fagul Mu i D 108, care folosesc transpoziia ca
mod de replicare. Fagul Mu este un fag temperat care se inser n cromozomul celulei bacteriene dup ptrundere.
Inseria acestui fag intrerupe activitatea genei n care s-a inserat i a unor gene neadiacente din acelai operon. Fagul
se replic, originalul ramne pe loc, iar copia se inser n orice alt loc de pe cromozom.
Inseria oricrei gene ntre dou elemente transpozabile face posibil transferul ei prin recombinare
neomolog, n aceeai celul pe o molecul de ADN nenrudit structural.
Astfel, prin transpoziie se pot produce deleii, inversii, transpuneri de determinani genetici de pe un plasmid
pe altul sau chiar fuzionarea stabil a unor repliconi complei, de pild a dou plasmide.
Evoluia rezistenei la antibiotice a bacteriilor nu poate fi conceput astzi fr fenomenul de transpoziie.
Studii moleculare au relevat posibilitatea ca genele de rezisten la antibiotice s fi aprut cu mult timp nainte,
la microorganismele productoare de antibiotice. Aceti determinani genetici au fost mobilizai i au ptruns prin
mecanismele transferului genetic la bacteriile importante din punct de vedere clinic.
Mecanismele transpoziiei sunt responsabile de formarea plasmidelor cu multirezisten, prin inserarea
succesiv pe un plasmid a determinanilor genetici de rezisten situai ntre dou elemente transpozabile de pe alte
plasmide.
1. GENERALIT I
Microorganismele triesc n mediul nconjurtor n prezena anumitor factori fizici, chimici i biotici
care influeneaz n mod favorabil sau defavorabil dezvoltarea i nmulirea lor. De-a lungul timpului,
omul a nv at s selecteze acei factori care s- i permite distrugerea speciilor patogene sau selectarea
speciilor folositoare.
n cele mai vechi civilizaii s-au cunoscut practici care au prevenit alterarea alimentelor, putrefacia
cadavrelor, fr a se cunoate rolul microorganismelor n aceste procese. Astfel, alimentele perisabile
au fost conservate prin adaus de sare, uleiuri aromatice, afumare sau fermentaie acid. Conservele au
aprut cu 50 de ani naintea cercetrilor lui Pasteur, fr a fi fost lmurit principiul care st la baza lor.
La nceputul secolului al XVIII-lea s-a folosit pentru prima oar clorura de var i fenolul pentru
dezodorizarea gunoaielor i n final pentru curirea plgilor, fr a se cunoate aciunea bactericid
a acestor substane.
Tehnicile de sterilizare s-au dezvoltat iniial n laboratoare pentru a permite izolarea miocrobilor n
culturi pure, ele fiind apoi rapid preluate de toate specialitile medicale pentru a preveni rspndirea
infeciilor.
Se folosesc doi termeni pentru a desemna distrugerea sau nlturarea microorganismelor,
sterilizarea i dezinfecia, diferena dintre ele fiind important.
Prin termenul de sterilizare, care este un termen absolut, se neleg procedeele fizice i chimice
care elimin toi germenii viabili (bacterii, spori, fungi, virusuri, parazii) de pe un obiect. Se
desemneaz ca steril un obiect care a fost supus unui procedeu de sterilizare i protejat n mod
corespunztor pentru a preveni contaminarea sa.
Se folosesc, n principiu, 4 metode de sterilizare:
sterilizarea prin cldur;
3. ST E R I LI Z A R E A P RIN R A D I A I I
3.1. Razele neionizante
Razele ultraviolete. Puterea bactericid a razelor luminoase devine perceptibil la o lungime de
und de 330nm, crescnd pe msur scderii lungimii de und a luminii UV. Timpul necesar distrugerii
microorganismelor depinde de intensitatea luminii, distana de sursa de emisie i mediul n care se
gsesc microorganismele. Mecanismul bactericid al razelor UV const n inducerea formrii n celula
4. ANTI S E P T I C E I D E ZINF E C T A N T E
Dezinfectantele sunt substane puternic bactericide la concentraii relativ sczute, folosite la
decontaminarea obiectelor i ncperilor. Spre deosebire de radiaiile letale care acioneaz asupra
DNA i a agenilor chimioterapici care interacioneaz ireversibil cu multiple sisteme metabolice, inta
de atac a majorittii dezinfectantelor este peretele celular, membrana celular cu enzimele asociate i
citoplasma. Ele acioneaz prin dizolvarea lipidelor din nveliurile celulare (detergeni, solveni lipidici)
sau prin denaturarea proteinelor structurale i enzimatice (oxidani, ageni alkilani, reactivi sulfhidrilici
etc.).
Antisepticele sunt substane cu aciune bacteriostatic, uneori bactericid, putnd fi aplicate pe
tegumente sau ca splturi ale unor mucoase (vaginal, uretral, otic etc.). Aceeai substan poate
fi antiseptic sau dezinfectant n funcie de concentraie.
4.3 Srurile
Dintre sruri, cele ale metalelor grele au efectul bactericid cel mai puternic. Astfel, ionii de Hg i Ag
sunt activi ntr-o proporie de 1/un milion. Aciunea lor bactericid se datoreaz combinrii lor cu
grupri active al enzimelor pe care le inactiveaz. Eficiena lor depinde, ns, mai degrab de
densitatea culturii bacteriene dect de concentraia lor, deoarece ei sunt absorbii repede i
preferenial de bacterii, atingnd n bacterii concentraii mari n defavoarea concentraiei din mediu.
clorura de mercur (sublimatul) 1%o se folosete n laboratoare ca dezinfectant pentru pipete i
lame;
merthiolatul, care este un compus organic al mercurului, este folosit drept conservant pentru seruri
i vaccinuri n concentraie de 1/10.000 i ca dezinfectant n concentraie de 1/1000;
nitratul de argint n concentraie de 1% se folosea n profilaxia oftalmiei gonococice la nou-nscut
nainte de introducerea penicilinei n terapie;
colargolul, protargolul i argirolul sunt compui de argint care se folosesc sub forma de colire i
unguente n concentraie de 1-1,5%;
compuii organici ai arsenului, bismutului, antimoniului au fost utilizai n trecut n tratamentul
sifilisului i a unor infecii produse de unele protozoare.
sulfatul de cupru este folosit cu succes ca fungicid, dar nu n medicin, ci n agricultur;
oxidul de zinc se folosete ca antiseptic, astringent i caustic n dermatologie.
4.4. Halogenii
Halogenii cei mai utilizai ca antiseptice i dezinfectante sunt clorul i iodul, ambele cu aciune
puternic bactericid i sporicid. Mecanismul de aciune al halogenilor se bazeaz pe proprietile lor
oxidante.
Clorul a fost introdus ca dezinfectant de O.W.Holmes la Boston n anul 1835 i de Semmelweis la
Viena n 1847 pentru a preveni transmiterea febrei puerperale prin minile medicilor.
clorul gazos n concentraie de 2-3mg%o este folosit pentru potabilizarea apei, dar concentraia
trebuie s fie mai mare dac apele au coninut crescut de substane organice, deoarece
acestea fixeaz i inactiveaz clorul;
hipocloritul de sodiu se folosete tot pentru dezinfecia apei, a veselei i a WC- urilor, la
curirea suprafeelor n industria alimentar, n uniti de alimentaie public etc;
cloramina este folosit ca dezinfectant pentru vesel, lenjerie, n concentraie de 2-3% i ca
antiseptic n concentraie de 1%;
Iodul este un oxidant puternic i se combin ireversibil cu proteinele bacteriene. Se folosete sub
form de:
4.10. Coloranii
Coloranii trifenilmetanici, cum sunt cristal-violetul, metil-violetul i verdele briliant, sunt substane
puternic bacteriostatice, slab bactericide active mai ales pe bacteriile gram-pozitive. Violetul de geniana
se poate folosi ca antiseptic n concentraie de 0,2%.
Dintre coloranii acridinici, cel mai utilizat este rivanolul (lactat de metacridin) n
concentraii de 1-2%, la antiseptizarea plgilor chirurgicale i traumatice.
P rintele chimioterapiei antiinfecioase este Paul Ehrlich, care dup numeroase sinteze i
cercet ri asupra compu ilor arsenicali obine n anul 1909 salvarsanul (compusul 606) activ
asupra Treponemei pallidum i altor spirochete.
n anul 1929 Fleming descoper penicilina, secretat de mucegaiul Penicillium notatum, dar
introducerea ei n terapie s-a produs de abia dup un deceniu, fiind meritul a doi chimiti de la
Oxford, Florey i Chain.
Studiind aciunea bactericid a unor colorani, Domagk (1934) descoper c prontozilul
rou administrat la oareci i protejeaz de efectul letal al infeciei experimentale cu streptococi
beta-hemolitici, n ciuda faptului c in vitro este lipsit de activitate bactericid . Trfoul i Niti
(1935) arat c n organismul oarecilor prontozilul se descompune ntr-un compus cu aciune
bacteriostatic - sulfamida.
n trecut, sub denumirea de chimioterapice erau desemnate substanele antimicrobiene
obinute prin sintez chimic (sulfamide, sulfone, nitrofurani etc.) iar sub cea de antibiotice
substane de origine biologic, secretate de unele bacterii i mucegaiuri. Cu timpul, ns , unele
antibiotice s-au obinut mai u or pe cale sintetic dect pe cale biologic (de exemplu
cloramfenicolul), motiv pentru care termenul de chimioterapic antiinfecios este utilizat ast zi
pentru orice substan folosit n tratamentul infeciilor, indiferent de origine.
Introducerea chimioterapiei antiinfectioase a dus la o cre tere spectaculoas a ratei de
supravieuire dup infecii. Din p cate, ns , rezultatele nceputului nu mai pot fi reeditate
deoarece utilizarea antibioticelor n infeciile bacteriene a determinat, n decurs de 50 de ani,
apariia sub presiune selectiv a fenomenului de rezisten . Ca urmare, producerea de
chimioterapice antiinfecioase a devenit o industrie care, fiind n permanent concuren cu
apariia tulpinilor rezistente, caut produi noi fa de care microorganismele s fie sensibile.
Introducerea unui nou chimioterapic n practica medical este evaluat la 200 milioame de
dolari i parcurge mai multe etape care dureaz aproximativ 10 ani.
1. CLASIFICARE
sunt:
Chimioterapicele se clasific dup mai multe criterii, dintre care de importan medical
2. FARMACOCINETIC
O chimioterapie antiinfecioas poate fi eficient numai dac n focarul infecios se realizeaz
concentraii de antibiotic biologic active asupra germenilor patogeni.
Concentraia minim inhibitorie (CMI) a unui antibiotic pentru o anumit tulpin bacterian este cea
mai mic concentraie care inhib complet multiplicarea tulpinii respective.
Concentraia minim bactericid (CMB) a unui antibiotic pentru o tulpin este concentraia minim
care omoar tulpina. Cu ct CMI sau CMB sunt mai mici fa de nivelul seric maxim pe care l poate
atinge un antibiotic, cu att acesta este mai activ.
Majoritatea antibioticelor se administrez la intervale de timp fixe n funcie de perioada de
njumtire a antibioticului. n unele cazuri, timpul de njumtire este att de scurt nct este necesar
administrarea continu a antibioticului prin perfuzie.
La administrarea intermitent a unui antibiotic, concentraia plasmatic depinde de doz , de
intervalul administr rii, de absoria i eliminarea antibioticului. Cu ct perioada de resorbie este mai
lung cu att concentraia va fi mai mic. Prin eliminare se neleg procesele prin care se inactiveaz
principiul activ al unui antibiotic sau se elimin din organism. De obicei eliminarea are loc prin filtrare
glomerular sau prin secreie tubular . Mai rar, unele antibiotice se pot elimina prin intestin, dup ce
urmeaz un ciclu enterohepatic de retrorezorbie sau sunt metabolizate n ficat prin reacii de oxidare,
reducere, hidroliz sau conjugare.
Raportul dintre concentraia sanguin a chimioterapicului i cea din focarul infecios depinde de pe
de o parte de diferitele propriet i fizico-chimice ale chimioterapicului iar pe de alt parte de
macroorganism. Constanta de disociere (pK), solubilitatea, dimensiunea molecular a antibioticului i ali
factori cum sunt perfuzarea diferitelor organe i esuturi, pH-ul plasmei i n focarul infecios etc.
influeneaz repartizarea regional i astfel raportul dintre concentraia plasmatic i cea din focar.
3. TOXICITATE
Subliniem c cefalosporinele de-a doua i a treia generaie sunt mai puin active
asupra cocilor gram-pozitivi dect cele de prim generaie. Ele nu sunt active asupra
tulpinilor de Streptococcus pneumoniae rezistente la penicilin , a celor de stafilococi
rezisteni la meticilin, pe enterococi sau listerii. Este deci o gre eal administrarea n
infecii produse de coci gram-pozitivi a cefalosporinelor de generaie recent n ideea
c ele sunt superioare penicilinelor. Este, de asemenea, important faptul c tulpinile de
Enterobacter, Serratia i Pseudomonas dezvolt foarte repede rezisten fa de aceste
antibiotice.
7.1.2. Glicopeptidele
Sunt polipeptide cu molecul mare, fiind reprezentate de vancomicin i teicoplanin. Se obin din
Streptomyces orientalis. Au un spectru de aciune ngust fiind active numai asupra bacteriilor grampozitive.
Vancomocina i teicoplanina interfereaz elongaia peptidoglicanului, fiind bactericide n faza de
multiplicare a bacteriilor.
Administrarea lor este indicat n infeciile produse de bacterii gram-pozitive rezistente la
betalactamine i la pacieni alergici la peniciline. Bacteriile gram-negative sunt natural rezistente la
glicopeptide, deoarece acestea au molecula prea mare pentru a putea ptrunde prin membrana extern a
peretelui celular.
Glicopeptidele sunt alergene, nefro i ototoxice, evitndu-se utilizarea lor la pacienii cu afeciuni
renale.
Rezistena bacteriilor la glicopeptide se transmite prin intermediul plasmidelor conjugative i este
destul de rar. S- au semnalat totui tulpini rezistente de enterococi, stafilococi, listerii, leuconostoc etc.
7.1.3. Bacitracina
Bacitracina este un antibiotic cu structura polipeptidic care din cauza toxicitii ridicate se utilizeaz
doar n aplicaii locale n infeciile cutanate. Este activ numai pe bacteriile gram-pozitive prin mecanisme
multiple: mpiedic sinteza peretelui celular prin inhibiia unei enzime ce transport precursorii
peptidoglicanului, altereaz membrana celular i perturb transcripia ARN.
7.1.4. Isoniazida, cicloserina i etionamida
Aceste chimioterapice se utilizeaz n tratamentul tuberculozei. Cicloserina inhib dou enzime care
catalizeaz sinteza peretelui celular, iar etionamida i izoniazida interfereaz multiplicarea micobacteriilor
la mai multe nivele. Rezistena se instaleaz prin sc derea permeabilitii peretelui celular i modificarea
moleculelor int.
7.3.2. Tetraciclinele
Structur . Tetraciclinele au o structura ciclic cu posibilit i multiple de ata are a unor radicali
diferii.
Mecanismul de aciune const n blocarea producerii leg turilor peptidice ntre aminoacizi. Are
acelai efect i asupra celulei eucariote, fiind deci toxic i pentru aceasta.
Absoria este optim n tubul digestiv, administrarea obinuit fiind cea oral. n anumite situaii se
poate administra i pe cale sistemic . Cloramfenicolul traverseaz bariera hematoencefalic i are
penetraie intracelular bun. Este inactivat prin conjugare n ficat i eliminat pe cale renal.
Spectru de aciune i utilizare. Spectrul de aciune este foarte larg cuprinznd bacterii grampozitive, gram-negative, aerobe i anaerobe, inclusiv bacteriile cu habitat intracelular, cum sunt
chlamydiile i rickettsiile.
Toxicitatea. Cloramfenicolul este un antibiotic imunodepresor, foarte toxic, a c rui administrare
trebuie evitat . Este contraindicat la gravide, sugari i copii. El acioneaz asupra m duvei osoase
datorit structurii sale nitrobenzenice, putnd produce aplazie medular. Toxicitatea se manifest sub 2
forme:
- toxicitatea dependent de doz, dup administrare ndelungat de cloramfenicol, i
- toxicitatea prin mecanism alergic, care duce la anemie aplastic ireversibil (1/24.000).
Rezistena la cloramfenicol. Este codificat de plasmide i const n sinteza unei acetiltransferaze
intracelulare care mpiedic legarea cloramfenicolului de moleculele int de pe ribozomi.
Mecanismul de aciune al sulfamidelor este competitiv. Atunci cnd ele se g sesc n mediu n
cantiti superioare acidului paraaminobenzoic, necesar sintezei de acid folic, l vor nlocui pe acesta n
metabolismul bacterian blocnd astfel sinteza de acid folic i implicit pe cea de DNA. Sulfamidele sunt
chimioterapice bacteriostatice. Bacteriile care nu sintetizeaz acid folic ci I iau din mediul nconjur tor
sunt n mod natural rezistente la sulfamide.
Sulfamidele se administreaz pe cale oral, se metabolizeaz n ficat i se elimin prin urin. Ele se
utilizeaz mai ales n infeciile urinare, spectrul lor de aciune cuprinznd bacilii gram-negativi (cu
excepia bacilului piocianic). Cele mai cunoscute sulfamide sunt Sulfanilamida, Sulfamethoxazol,
Sulfurazol, Ftalilsulfatiazol etc.
Rezistena la sulfamide este foarte r spndit , antibiograma fiind obligatorie nainte de
recomandarea lor.
Sulfamidele sunt lipsite n general de efecte toxice, dar pot da alergii cutanate i ocazional depresii
1. CLASIFICAREA MICROORGANISMELOR
DUP PATOGENITATE
ntre organismul uman i microorganisme (bacterii, virusuri, fungi, protozoare) se stabilesc
relaii care pot fi de comensalism, mutualism i parazitism.
Comensalismul este o asociaie n care un microorganism folose te ca mediu de via un
alt organism fr s -l prejudicieze. Omul este gazda unei flore comensale foarte bogate, prezent
pe piele, mucoase, tract digestiv etc. i care alctuiete flora normal.
Mutualismul este o relaie care se stabilete n beneficiul ambilor parteneri ai asociaiei.
De exemplu, ntre bacilii lactici i gazda uman exist un beneficiu reciproc: vaginul ofer condiii
de via bacililor lactici iar ace tia la rndul lor acidific, mediul mpiedicnd dezvoltarea altor
microorganisme.
Parazitismul este o relaie care se stabilete n mod cert n beneficiul microorganismului i
n detrimentul gazdei umane. Din aceast categorie fac parte microorganismele patogene.
Subliniem, ns , c acestor tipuri de relaii nu le corespund grupe taxonomice fixe de
microorganisme, deoarece relaiile ce se stabilesc depind n egal m sur de gazda uman .
Astfel, n anumite condiii, relaia de comensalism sau mutualism poate s se transforme ntr-o
relaie de parazitism cu efecte nefavorabile asupra gazdei. A adar, microorganismele nu se pot
clasifica rigid din punct de vedere al patogenit ii, deoarece n anumite condiii acela i
microorganism stabilete relaii diferite cu gazda uman.
La un capt al clasificrii n funcie de patogenitate se afl microorganismele nepatogene
care triesc n mediul nconjurtor i nu gsesc condiii prielnice de dezvoltare n gazda uman, iar la
cellaltcaptse afl microorganismele patogene care produc ntotdeauna mbolnviri cu penetraie
mare n populaie (Salmonella typhi, Yersinia pestis etc.) sau mboln viri cu consecine grave
(Streptococcus pyogenes , Treponema pallidum).
ntre aceste dou extreme se afl flora condiionat patogen care, de regul, provine din
flora normal a organismului i care produce infecii doar n anumite condiii, ca, de exemplu, n
sc derea rezistenei antiinfecioase a organismului (n stress, dup viroze, dup tratament
imunodepresor, n SIDA etc.) i n cazul n care colonizeaz zone anatomice sterile (septicemii,
meningite).
Flora accidental patogen provine din flora comensal a organismului dar necesit condiii
deosebite de nmulire chiar dac ptrunde n zone anatomice sterile. Astfel, streptococii viridans
se gsesc n mod normal n faringe i ajung n circulaie dup extracii dentare sau chiar i dup
periaje energice ale dinilor. La omul s ntos, mecanismele rezistenei naturale antiinfecioase
nltur streptococii n cteva ore de la ptrunderea lor n snge, pe cnd la cei cu vicii valvulare,
la care exist depozite de fibrin pe endocard, streptococii se vor nmuli producnd endocardita
lent malign . Sunt cunoscute, de asemenea, e ecurile din chirurgia ortopedic i cardiac
datorita p trunderii, n timpul operaiei, a tulpinilor de Staphylococcus epidermidis, principalul
comensal al pielii. Flora condiionat patogen i cea accidental patogen alc tuiesc flora
oportunist, care profit n orice mprejurare de vulnerabilitatea gazdei umane.
Este remarcabil modificarea de-a lungul timpului a ponderii germenilor n etiologia
infeciilor. Pn la descoperirea rolului microbilor n producerea acestora, patologia infecioas a
fost dominat clar de bacteriile nalt patogene care au generat de-a lungul secolelor epidemii
pustiitoare. Descoperirile lui Pasteur au avut ca urmare ntroducerea metodelor de antisepsie i
asepsie care au avut ca rezultat sc derea considerabil a morbiditatii prin aceste bacterii. Pe
de alt parte introducerea profilaxiei specifice, prin vaccinare i seroterapie a bolilor infecioase a
Cte o molecul de C1q, C1s i dou molecule de C1r formeaz unitatea de recunoatere care se
va lega de complexul antigen-anticorp. Unitatea de recunotere va cliva C2 i C4 n C2a, C2b i C4a,
C4b. C4b2a va forma C3 convertaza cii clasice, care va cliva C3 n C3a i C3b, piesa esenial n
reaciile urmtoare.
Formarea complexului de atac al membranei. Indiferent pe ce cale s-a activat complementul,
reaciile urmtoare sunt comune ambelor ci. Ambele C3 convertaze se combin cu C3b formnd
C5 convertaza (C3b2BbP pentru calea alternativ i C3b4b2a pentru calea clasic). C5 se va
descompune n C5a i C5b. C5b se fixeaz pe suprafaa celulei pe suprafaa creia se afl antigenul
- deci n cazul nostru pe suprafaa bacteriei. De C5b se vor lega n continuare C6,7,8 care mpreun cu
mai multe molecule de C9, care polmerizeaz, formeaz un complex de atac al membranei ce
perforeaz membrana celular cu liza consecutiv a celulei bacteriene.
Rolul biologic al complementului
Activarea complementului genereaz o serie de efecte biologice de o importan deosebit n
n cazul invaziei organismului de ctre ageni strini (bacterii, toxine), se declaneaz secreia de
citokine care contribuie n ansamblu la creterea rezistenei la infecii.
Astfel, citokinele au rol important n declanarea inflamaiei. IL-1este implicat n producerea
febrei, creterea permeabilitii vasculare, induce explozia respiratorie n macrofage i PMN, moment
GALT este alctuit din plcile lui Peyer (aglomerri submucoase de limfocite
B i T de-a lungul intestinului care sunt stimulate de antigenele ce ptrund pe cale
digestiv) i limfocitele intraepiteliale.
Situate deasupra plcilor lui Peyer nspre lumenul intestinal se afl celulele
M sau celulele lui Owen. Ele au form de potcoav cu concavitatea spre plcile
Peyer i sunt specializate n preluarea antigenelor din intestin. Limfocite tinere
strbat membrana bazal a epiteliului intestinal i ptrund n celulele M. Acestea
vor prelua antigenul prin pinocitoz, dar nu l prelucreaz ci l trec n plcile lui
Peyer unde interacioneaz cu limfocitele T i B ducnd la diferenierea acestora.
Celule M pot prelua n anumite situatii proteine solubile precum i antigene
particulate cum sunt unele virusuri, bacterii i protozoare. n general ptrunderea
acestora din urm ar trebuie s fie mpiedicat de IgA secretor ce se afl pe
mucoasa digestiv, dar unele microorganisme au dezvoltat mecanisme de eludare a
acestei bariere de aprare.
Limfocitele B sensibilizate de antigen i care vor produce IgA prsesc plcile
lui Peyer i ajung mai nti n ganglionii limfatici regionali (mezenterici). De aici,
urmnd calea vaselor eferente, ajung n canalul toracic i n circulaia general.
Majoritatea acestor limfocite B reintr n lamina proprie a mucoasei intestinale,
fenomen denumit homing limfocitar. O mic parte din limfocitele B care au
prsit iniial intestinul, prsesc torentul sanguin i se ndreapt spre alte esuturi
limfoide mucoase (tract respirator, urogenital, bronii etc) sau n glande cu secreia
exocrin (salivare, mamare) unde se vor transforma tot n plasmocite secretoare de
IgA. n acest fel informaia antigenic este rspndit n ntreg organismul.
Dup aezarea lor, ele se matureaz spre plasmocite secretoare de IgA dimer.
Cele dou molecule de IgA sunt legate ntre ele pintr-un lan J, apoi trec prin
celulele epiteliale dobndind piesa secretorie. De la contactul celulelor M cu un
antigen trec 30 - 50 de zile pn la apariia anticorpilor pe suprafaa mucoasei
respiratorii.
Deci, ptrunderea antigenelor pe cale respiratorie i digestiv poate duce la
apariia unor anticorpi protectori la suprafaa mucoasei nazale, bronice sau
intestinale. Cunoaterea acestui proces este foarte important deoarece st la baza
vaccinrilor pe cale oral pe de o parte sau declaneaz fenomene de
hipersensibilizare pe de alt parte (astm bronic, alergii alimentare).
Soarta unui agent infecios care strbate barierele externe ale aprrii
antiinfecioase naturale depinde de calea de ptrundere. Astfel, dac agentul
infecios ptrunde direct n circulaie va ajunge n splin unde va iniia un
rspuns imunitar. Dac ptrunde prin piele, datorit unui traumatism, de
imun.
2.4. Receptorii pentru antigene
Recunoaterea antigenului este punctul nodal al rspunsului imunitar i se
bazeaz pe complementaritatea steric dintre antigen i moleculele implicate n
recunoaterea sa, respectiv receptorii pentru antigene ai limfocitelor i anticorpii.
2.4.1. Receptorii pentru antigen a limfocitelor
a) Receptorii pentru antigen a limfocitelor B (BCR)
Majoritatea limfocitelor B exprim la suprafaa lor 2 clase de
imunoglobuline:IgM i IgD. Numrul limfocitelor circulante care prezint pe
suprafaa lor IgG, IgA sau IgE este redus, spre deosebire de limfocitele din esutul
limfoid asociat mucoaselor care au pe suprafaa lor mai ales IgA. Pe lng
imunoglobulinele cu rol de receptori, limfocitele B mai posed pe suprafaa lor
MHC de clasa II, cu rol importnt n cooperarea intercelular.
Receptorii pentru antigen ai limfocitelor B, respectiv imunglobulinele de
suprafat, recunosc antigenele n stare nativ, respectiv epitopii structurali sau
epitopii B ai anigenelor. Reamintim c antigenele timodependente sunt
recunoscute de limfocitele B numai n prezena limfocitelor T-helper, pe cnd cele
timoindependente fra intervenia acestora.
b) Receptorii pentru antigen a limfocitelor T
TCR este receptorul pentru antigen al limfocitului T. Este format din dou
lanuri polipeptidice sau .
Majoritatea limfocitelor prezint la suprafa TCR 2 care este format din 2
lanuri de tip i . Ambele lanuri au cte dou domenii extracelulare, o poriune
transmembranar de ancorare i o prelungire intracelular scurt. Fragmentele
extracelulare sunt foarte asemntoare structurii de baz a anticorpilor, domeniul
apropiat de membrana celular fiind constant iar cel deprtat, variabil, responsabil
de legarea specific a antigenului.
O minoritate a limfocitelor T au pe suprafaa lor receptorul pentru antigen TCR
format tot din dou lanuri cu dispoziie asemntoare i Rolul limfocitelor T
purttoare ale acestor receptori nu este nc pe deplin lmurit.
TCR nu recunosc antigenele native, ci doar dup prelucrare macrofagic i n
asociaie cu antigenele de histocompatibilitate de clasa II. Limfocitele T citotoxice
recunosc numai antigenele virale sau tumorale care se afl la suprafaa acestor
2.4.2. Anticorpii
Anticorpii sunt proteine serice care migreaz n cmpul electric cu
gamaglobulinele, dar prezeni i n alte umori sau secreii, cu o structur capabil
s le asigure legarea ferm i specific de antigen. Ei au fost pui n eviden
pentru prima oar de Tiselius care a reuit separarea electroforetic a proteinelor
plasmatice.
a) Structura general a anticorpilor
Anticorpii sunt structuri moleculare bifuncionale: o parte a moleculei se leag
prin complementaritate de antigen, iar cealalt parte este responsabil de o serie de
efecte biologice secundare.
Unitatea de baz a anticorpilor este format din 2 lanuri identice grele, H
(heavy) cu GM de 50.000 - 70.000 Da i 2 lanuri identice uoare L (light), cu GM
n jur de 25.000 Da, care se asambleaz n form de T sau Y. Lanurile sunt legate
ntre ele de fore necovalente hidrofobe i prin puni disulfurice: o punte ntre
lanurile L i H i cel puin dou ntre lanurile H n funcie de clasa i subclasa de
anticorp. Aceast unitate monomeric are o GM n jur de 150.000 Da.
Lanurile grele prezint o diversitate structural accentuat fiind notate cu
literele greceti gama (), miu (), alfa (), delta () i epsilon (). Lanurile
uoare sunt numai de dou tipuri: kappa () i lambda ().
Imunoglobulinele se clasific n funcie de lanurile pe care le conin n 5
clase: IgG, IgM, IgA, IgD, IgE. De exemplu imunoglobulina G conine 2 lanuri
grele i dou lanuri uoare sau . Aceeai imunoglobulin conine sau lanuri
sau . Imunogobulinele care conin lanuri apar de dou ori mai frecvent
dect cele ce conin lanuri .
Elucidarea relaiei ce exist ntre structura i funciile anticorpilor a nceput
prin digestia proteolitic a acestora. Sub aciunea pepsinei imunoglobulinele se
cliveaz, la nivelul aminoacidului 234 al lanurilor grele, ntr-un fragment F(ab)2
(fragment antigen-binding) i un fragment Fc (fragment cristalizabil), iar sub
aciunea papainei, la nivelul aminoacidului, 224 n dou fragmente Fab i un
fragment Fc.
Fragmentele Fab reprezint capetele NH2 terminale ale moleculei, fiind
Cea mai mare parte a IgA este prezent extravascular sub form de dimer
- IgA secretor (S-IgA) - n secreiile epiteliilor (lacrimi. saliv, mucus bronic
etc.) i la suprafaa mucoaselor. Cea mai mare parte a S-IgA este produs de
plasmocitele esutului limfatic asociat mucoasei intestinale dar i ale celui asociat
celorlalte mucoase (respiratorii, nazale etc.).
S - IgA este alctuit din 2 molecule de IgA, legate printr-un lan J (join)
glicolipidic i o component secretorie polipeptidic (CS). Componenta secretorie
se adaug dimerului n celula epitelial i faciliteaz transportul IgA prin epitelii i
secreia sa n saliv, lacrimi, lapte i protejeaz S - IgA de aciunea enzimelor
digestive. Ca i IgA seric, S - IgA nu poate fixa (activa) complementul pe cale
clasic ci numai alternativ, deci nu poate participa la opsonizare. Fixeaz ns
bacterii i virusuri prin Fab formnd complexe imune i mpiedic astfel fixarea
acestor ageni infecioi de celulele epiteliale ale mucoaseor. Aceast
neutralizare este cea mai important funcie antiinfecioas a S-IgA pe mucoase.
IgA are dou subclase IgA1 i IgA2. IgA 1 se gsete predominent sub form
monomeric deci n ser, iar IgA2 mai ales sub forma de S-IgA.
Concentraia normal de S-IgA este atins la vrsta de 10-11 ani, ceea ce
explic frecvena infeciilor respiratorii la copii.
La una din 700 de persoane se constat un deficit de S-IgA, Dac acest deficit
nu este compensat de o activitate crescut de IgM sau dac se adaug i un deficit
de IgG, persoanele afectate sunt susceptibile de a face frecvent infecii respiratorii
i intestinale.
Imunoglobulina M
IgM se prezint sub forma unei structuri mari (IgM-macroglobulin)
pentamerice cu o greutate molecular de 900.000 Da i constant de sedimentare
de 19S. Cei 5 monomeri de IgM sunt legai ntre ei printr-un lan J. Datorit
greutii moleculare mari, IgM nu trece prin placent. Reprezint 6-7% din totalul
imunoglobulinelor serice, concentraia fiind de 0,5-2mg/ml. Aceast concentraie
este atins la vrsta de 1 an. Timpul de njumtire a IgM este de 6 zile. Se cunosc
2 subclase de IgM - IgM1 i IgM2, fr a se evidenia ns diferene n activitatea
lor biologic.
n contextul rspunsului imun, IgM este clasa de anticorpi care apare n
rspunsul primar. Prezena anticorpilor IgM fa de un anumit agent infecios
indic o infecie acut, recent.Mare parte din anticorpi naturali, ca de exemplu
isoaglutininele de grup (anti-A, anti B), sunt IgM.
Datorit structurii pentamerice, IgM are 10 situsuri de combinare cu o
multe antigene au mai muli epitopi. Astfel, dac dou antigene pot avea pe lng
epitopii specifici i epitopi comuni, vor induce formarea de anticorpi policlonali
care vor reaciona cu ambele antigene prin epitopii comuni (reacie ncruciat).
n mod natural anticorpi monoclonali apar prin malignizarea plasmocitelor (n
mielomul multiplu) care secret un anticorp monoclonal n cantiti mari. Proteina
secretat de plasmocitele bolnavilor cu mielom multiplu (proteina Bence-Jones),
care se elimin prin urin, reprezint de fapt lanuri uoare L monoclonale. Ele au
avut un rol important n descoperirea structurii imunoglobulinelor.
Dificultatea de a obine anticorpi monoclonali in vitro a constat n
imposibilitatea de cultivare a limfocitelor B.
Anticorpii monoclonali s-au obinut n laborator de prin izolarea n cadrul unui
rspuns imun policlonal a unui singur limfocit B i hibridizarea lui cu o celul
tumoral care s-i confere imortalitate. Produsul de fuziune, hibridomul, unete
imortalitatea celulei tumorale cu specificitatea celulei B. Anticorpii monoclonali
sunt reactivi foarte valoroi ntruct recunosc un singur epitop. Ei nu reacioneaz
ncruciat dect n cazuri de excepie cnd structurile sunt extrem de asemantoare.
Anticorpii monoclonali au o larg utilizare att n cercetare, terapie ct i n
practica de rutin a oricrui laborator. Cu ajutorul anticorpilor monoclonali marcai
cu o substan fluorescent (de obicei izotiocianatul de fluorescein) se evideniaz
prin microscopie n UV antigene bacteriene sau virale n produsele patologice sau
biologice recoltate de la bolnavi, fiind astfel posibil un diagnostic rapid i precis n
infecii n care agentul etiologic este greu de cultivat (infecii chlamydiene,
herpetice, sifilis etc.).
3. RSPUNSUL IMUN
3.1. Rspunsul imun umoral
Soarta antigenelor, deci i a microorganismelor care ptrund n organism,
depinde de calea de ptrundere i de penetrarea barierelor externe ale aprrii
antiinfecioase. Dac microorganismul ptrunde direct n snge, va ajunge n splin
unde va avea loc i rspunsul imun. Microorganismele care ptrund n tegument
ajung pe cale limfatic la primul ganglion limfatic, iar cele care au reuit s
traverseze mucoasele (digestiv, respiratorie) vor ajunge n sistemul limfatic ataat
mucoaselor (MALT).
4. FENOMENE DE HIPERSENSIBILITATE
Cnd alergenul este inoculat n doz foarte mic (nepturi de albin) sau
depus pe o mucoas (polenuri, praf de cas, mucegaiuri, alimente ca: ou, pete,
fragi), expresia clinic a fenomenului este mai mult sau mai puin circumscris la
tegument (urticaria), la mucoasa nazal i conjunctiv (febra de fn), la cile
respiratorii inferioare (astmul bronic). Sensibilizrile spontane fa de antigene
care ptrund n organism pe cale digestiv sau respiratorie se numesc i reacii
atopice.
Evoluia unor infecii se poate nsoi de fenomene anafilactice: viroze ale
copilului (de exemplu, cu virusul sinciial respirator), astmul intrinsec (sensibilizare
la antigene ale bacteriilor care infecteaz tractul respirator inferior), lambliaza,
helmintiaze (ascaridioz, echinococoz etc.).
Depistarea sensibilizrilor anafilactice este obligatorie, mai ales atunci cnd
se administreaz un produs cunoscut pentru reaciile anafilactice pe care le
produce.
Testul intradermic este indicat nainte de administrarea penicilinelor, a
procainei, a serurilor imune heteroloage. La cteva minute de la inocularea
intradermic a unei mici doze de alergen, la persoanele sensibilizate, apare o papul
urticarian nconjurat de o aureol congestiv i nsoit de prurit. Fenomenele
dispar dup aproximativ o or. Riscul ocului anafilactic impune medicului care
face testarea s lucreze cu diluii mari de antigen i s aib la dispoziie o medicaie
corespunztoare i antioc.
4.2. Reaciile de tip II citotoxic-citolitic
Reaciile de tip II se datoreaz anticorpilor Ig G, mai rar IgM, care se
formeaz n organism fa de antigene situate la suprafaa unor celule sau
esuturi. Antigenele pot aparine unor celule strine sau propri dac acestea nu mai
sunt recunoscute ca self sau i-au modificat anigenitatea. Leziunile se produc
prin 2 mecanisme:
legarea anticorpilor de celula int cu activarea pe cale clasic a
complementului i citoliz consecutiv,
citotoxicitatea mediat de anticorpi IgG i limfocitele K.
n reaciile posttransfuzionale, anticorpi de tip IgM reacioneaz cu antigene de
grup ABO ale eritrocitelor, fiind responsabile de aglutinare, activarea
complementului seric i hemoliza intravascular.
Anemia hemolitic a nou-nscutului, datorit incompatibilitii Rh, este
produs de anticorpi materni de tip IgG care recunosc antigene specifice Rh
Omul a fost expus ntotdeauna contaminrii cu microorgansime i ca urmare a dezvoltat de-a lungul
evoluiei sale mecansime de aprare antiinfecioas care s limiteze numrul microbilor i s
favorizeze eliminarea lor din organism. La rndul lor, unele microorganisme au elaborat diverse strategii
prin care dep esc mecanismele de aprare ale gazdei, fiind capabile s produc infecii.
Patogenitatea este un proces complex i multifactorial, care cuprinde totalitatea mecanismelor
biochimice prin care microorganismele produc infecii. Ea este dependent att de microorganism ct i
de gazda n care acesta ptrunde. n timp ce unele microorganisme (patogene) produc n mod obinuit
infecii la indivizii neimunizai dar cu rezistena natural intact, altele (oportuniste) produc infecii
doar la indivizi cu barierele aprrii naturale compromise.
Virulena este gradul de patogenitate a unei tulpini n cadrul speciei. Spre deosebire de
patogenitate, care este un caracter de specie, virulena este un caracter de tulpin. De exemplu, n
cadrul speciei Corynebacterium diphteriae exist specii toxigene virulente i netoxigene, deci
nepatogene. Chiar i ntre tulpinile toxigene exist o diferen n ceea ce privete cantitatea de toxin
secretat.
S- a observat c tulpinile de bacil Koch izolate de la pacieni din India sunt mai virulente pentru
cobai dect cele izolate de la pacienii din Anglia. De asemenea, patogenitatea tulpinilor de pneumococ
pentru oricelul alb variaz n funcie de cantitatea materialului capsular. Exemplele sunt nenumrate.
Virulena unei tulpini microbiene se apreciaz prin comparaie cu o tulpin standard a crei
virulen este cunoscut i se exprim prin DLM (doza letal minim) sau DL50 (doz letal medie).
Doza letal minim este numrul total de germeni necesari sau cantitatea de toxin necesar pentru a
omor toate animalele dintr-un lot experimental, iar DL50 numrul de germeni sau cantitatea de toxin
necesar pentru a omor 50% dintr-un lot de animale experimentale.
Pentru a produce o infecie, microorgansimele trebuie s parcurg, n general, dar nu n mod
obligatoriu, urmtoarele etape:
ataarea i ptrunderea n organismul gazd;
invadarea local sau general a organismului;
multiplicarea n organismul gazd i secreia unor factori de patogenitate.
Pentru unele microorgansime, ca, de pild, Vibrio cholerae, Bordetella pertussis (agentul etiologic al
tusei convulsive), ataarea de mucoasa digestiv, respectiv, respiratorie reprezint destinaia final. De
aici ele vor aciona asupra celulelor epiteliale sau vor secreta toxine cu aciune nociv asupra celulelor
nvecinate sau situate la distan.
Dac am mpri bacteriile dup capacitatea de invazie a organismului, la un capt s-ar afla
bacteriile toxigene, care se multiplic discret la poarta de intrare, iar toxina, secretat i apoi vehiculat
de snge n organsim, este responsabil de apariia bolii. Este cazul bacilului difteric i bacilului tetanic
care produc infecia prin multiplicarea lor la poarta de intrare fr a invada organismul. Mai mult, bacilul
botulinic, care i secret toxina numai n condiii de anaerobioz, la 30C (n conservele alimentare),
nici nu ptrunde n organism, boala fiind o intoxicaie ce se produce prin consumul alimentelor
conservate.
La cellalt capt se afl bacteriile invazive pentru care ataarea constituie un prim pas n
penetrarea mai adnc a esuturilor sterile. Ajunse aici, se vor multiplica, vor secreta diveri factori de
patogenitate, rezultatul fiind infecia. Astfel de bacterii sunt, de pild, bacilul crbunos care produce
ntotdeauna o infecie generalizat, cocobacilul ciumei, pneumococul etc.
La aceste dou categorii se adaug bacteriile sensibilizante, care prin infecie sensibilizeaz
organismul. Acesta va rspunde prin reacii imunopatologice ce i sunt nocive i genereaz leziuni. Cel
mai bun exemplu n acest sens este bacilul tuberculos.
1.1. Fimbriile
Fimbriile sunt oligomeri proteici care apar ca apendici filamentoi la suprafaa celulei bacteriene.
Ele sunt alctuite din subuniti proteice cu masa molecular de 17.000 Da i dintr-o component
proteic minor. Sinteza fimbriilor este influenat de condiiile de mediu, mai ales de temperatur i
de factori ce influeneaz rata de dezvoltare a culturii microbiene. Subunitile proteice ale fimbriilor pot
fi supuse unei variaii antigenice care scap bacteria de rspunsul imun al gazdei.
fimbriile de tip 1, sau pilii comuni, sunt prezente la multe specii de Enterobacteriaceae. Ele se
leag de glicoconjugaii din membrana citoplasmatic a celulelor gazd ce conin manoz.
fimbriile P sunt prezente pe tulpinile de Escherichia coli pielonefritogene. Receptorul pentru aceste
fimbrii sunt glicolipidele ce conin dou molecule alturate de galactoz prezente n membrana
celulelor epiteliului urinar.
fimbriile S s-au evideniat la tulpinile de E.coli implicate n meningite i se ataeaz de
glicoconjugaii ce conin acid sialic.
fimbriile K88 i K89 se gsesc la tulpinile de E.coli enterotoxigene ce produc diaree. Receptorii
celulelor sensibile conin acid sialic i lactoz.
Aceeai tulpin de Escherichia coli poate conine mai multe tipuri de fimbrii codificate de anumite
2.1. Exoenzime
Bacteriile secret numerose exoenzime dintre care o parte, agresinele, faciliteaz invazia n
esuturi. Astfel:
hialuronidaza, sau factorul de difuziune este o enzim ce hidrolizeaz acidul hialuronic din
substana fundamental a esutului conjunctiv permind ptrunderea prin esut a unor
bacterii ca, de pild: Streptococcus pyogenes , S.aureus i Clostridium welchii;
coagulaza, enzim asemn toare trombinei este produs de toate tulpinile de S.aureus. Ea
protejeaz stafilococii, pe de o parte prin formarea unor bariere de fibrin n jurul stafilococilor i
a leziunilor produse ce acetia iar, pe de alt parte prin inactivarea unor substane bactericide
prezente n serul sanguin;
fibrinolizina secretat, de exemplu, de Streptococcus pyogenes i S.aureus favorizeaz
difuzarea infeciei prin lizarea fibrinei ce se formeaz n jurul leziunilor produse de bacteriile
respective;
enzimele hidrolitice (lipaze, proteaze, nucleaze) sunt secretate de toate speciile bacteriene
indiferent de patogenitatea lor. Nu toate sunt implicate n patogenitate, dar unele dintre ele joac
un rol n virulen ca, de pild, colagenaza produs de Cl.welchii, care este implicat n
patogeneza gangrenei gazoase, neuraminidaza prezent la multe bacterii i virusuri. Aceasta din
urm hidrolizeaz mucoproteinele de pe suprafaa celulelor, expunndu-le atacului;
3. TOXINE BACTERIENE
Toxinele bacteriene sunt substane solubile cu efect toxic asupra organismului. Ele se mpart n
exotoxine, pe care bacteriile le secret n mediul nconjurtor ca un produs al metabolismului propriu, i
endotoxine, care fac parte din structura peretelui celular la bacteriiile gram-negative i sunt eliberate n
mediu numai dup moartea bacteriei.
3.2. Endotoxine
Endotoxina este lipopolizahardul (LPZ) din membrana extern a peretelui celular al bacteriilor gramnegative i joac un rol important n patogenia infeciilor produse de aceste microorgansime. Ea este
cartea de vizit a bacteriilor gram-negative.
Structura endotoxinei. LPZ sau endotoxina se compune din 3 uniti: un glicofosfolipid ce se
numete lipidul A, o parte numit core format din zaharuri, etanolamin i acid fosforic i antigenul O ,
un lan lung, de zaharide, mai puin obinuite, specific de specie. Partea activ este lipidul A, celelalte
avnd rol de carrier. Lipidul A, singur, este inert fiind insolubil n ap, dar devine activ n combinaie cu
celelalte componente ale exotoxinei. Efectele endototoxinei nu sunt specifice speciei, ci sunt identice
indiferent de la ce bacterii gram negative provine.
Efectele endotoxinei. Ea se elibereaz numai dup distrugerea bacteriilor. n cantiti mici
produce reacii de alarm benefice organismului, cum sunt: febra, activarea complementului pe cale
alternativ, activarea macrofagelor i stimularea limfocitelor B. n cantiti mari, ns, produce ocul
endotoxic ce poate evolua fatal.
Reaciile de alarm
febra. Endotoxina acioneaz ca un pirogen atunci cnd n esuturi apare un numr suficient de
mare de bacterii gram-negative care s le permit contactul cu circulaia sanguin. 100 ng de
endotoxin injectate iv. induc febra, ceea ce corespunde unui numr de aproximativ 10 milioane
de bacterii. Endotoxina determin reacia febril prin aciunea ei asupra macrofagelor care vor
secreta pirogeni endogeni (interleukina I, Tumor Necrosis Factor);
activarea complementului. Endotoxina activeaz direct complementul pe cale alternativ, ceea
epidemic: cazuri numeroase ce apar ntr-un timp scurt i ntr-o zon geografic
limitat (holer, febr tifoid, cium);
contact direct prin atingere (rujeol, varicell, variol etc.), srut (mononuleoz
infecioas, hepatita B), contact sexual (sifilis, gonoree, SIDA etc.),
contact indirect prin obiecte care au venit n contact cu bolnavul, ca, de pild,
batiste, lenjerie, vesel, termometre, siringi infectate etc.,