Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
PH Metre Spectrofotometre Cromatografe Electroforeze
PH Metre Spectrofotometre Cromatografe Electroforeze
Aparatura
PH-metru, echipat cu electrod de calomel (electrodul de referinta) si electrod
de sticla (electrodul de masurare).
In stare de repaus electrodul de calomel se pastreaza cufundat intr-o solutie
saturata de KCl, iar cel de sticla in apa distilata. Daca inainte de utilizare se
constata ca in interiorul electrodului de referinta exista bule de aer, se
completeaza lichidul din interiorul acestuia cu solutie saturata de clorura de
potasiu.
Mod de lucru
SPECTROFOTOMETRE
CROMATOGRAF
Cromatografia reprezinta un
grup de
metode de laborator care se
bazeaza pe
adsorbtia selectiva, prin care
componentele unui amestec
complex
pot fi identificate si/sau
purificate
(adsorbtia reprezinta aderenta
moleculelor la suprafata unei alte substante). Metoda a fost utilizata initial de
botanistul rus Mikhail Tsvett pentru separarea de produsi intens colorati, de
analizat este aplicat pe hartie/gel si cei doi electrozi sunt conectati la o sursa de
inalta energie (~5000 volti). Ionii pozitivi vor migra intr-o directie, iar cei
negativi in cealalta directie. Cu cat este mai mare incarcatura ionului, cu atat va
migra mai departe. Metoda este in mod special utila pentru separarea
amestecurilor proteice.
In cromatografia cu faza inversa moleculele sunt legate de o matrice
hidrofoba (hidrocarburi cu lant lung legate de o matrice de silicon) intr-un
tampon hidrofil. Moleculele pot fi apoi eluate prin scaderea polaritatii
tamponului, de exemplu prin cresterea concentratiei de alcool sau alt solvent
nepolar din tampon.
Cromatografia cu afinitate este utilizata mai mult in scop de cercetare;
moleculele sunt separate pe baza unor aspecte specifice ale structurii si
activitatii lor biologice. Sunt utilizati liganzi care sunt imobilizati intr-o matrice
de suport, din care este efectuata o coloana; peste coloana se toarna proba care
contine proteina de interes si care se leaga de liganzii continuti in coloana;
proteina este apoi eluata, fie prin modificarea conditiilor din coloana
(modificarea pH-ului sau concentratiei saline), fie prin utilizarea unei alte
molecule care va intra in competitie cu molecula de interes pentru situsurile de
legare ale liganzilor. Exemple de liganzi in functie de substanta de purificat:
substrat, inhibitor, cofactor (pentru enzime), antigene (pentru anticorpi),
secvente de baze complementare (pentru acizi nucleici).
Cromatografia lichida de inalta performanta utilizeaza pompe care
furnizeaza presiuni inalte care imping solventii prin coloane metalice. Aceasta
creste viteza procesului de separare si previne raspandirea solutiilor care poate
aparea in cromatografia in coloana gravitationala. Separarea are loc in minute in
loc de ore si este net superioara. Utilizand cromatografia cu faza inversa pot fi
separate doua proteine a cate 100 aminoacizi fiecare care difera printr-un singur
aminoacid.
Cromatografia cu gaz utilizeaza un lichid cu punct de fierbere inalt impregnat
intr-un suport solid inert ca faza solida si heliu ca faza mobila, intregul sistem
fiind incalzit. Solutul este injectat in coloana si se volatilizeaza imediat, heliul
indepartand componentele din coloana, fiecare component fiind inregistrat de
un detector care determina cantitatea relativa a acestuia. Polaritatea si
volatilitatea componentelor determina timpul cat acestea sunt retinute de
coloana. Capacitatea coloanei in cromatografia cu gaz fiind foarte mica, aceasta
este utilizata in principal ca un instrument analitic.
In cromatografia in strat subtire si cromatografia cu hartie coloana este
inlocuita cu un strat adsorbant (silicon, aluminiu, celuloza) aplicat pe un suport
de sticla/plastic/folie de aluminiu. Solutul este aplicat cu un tub capilar, iar
solventul este lasat sa se evapore. Apoi componentele sunt eluate cu un solvent
care este lasat sa urce pe placuta prin actiune capilara, antrenand componentele
amestecului in grade diferite. In final se aplica un agent oxidant, astfel incat
4,34
3,36
0,35
0,63
0,77
grame;
grame;
grame;
grame;
grame;