LP 12.

Dozarea lipidelor totale / 3 ore

Concentratia plasmatica a lipidelor are variatii diurne semnificative si depinde de
alimentatie. De aceea pentru ca probele sa aiba semnificatie diagnostica trebuie recoltate
la 12 -14 ore dupa ultima masa. Se considera ca in acest interval chilomicronii
(lipoproteine formate din 90% TG si restul fosfolipide, colesterol 1% si proteine 1%)
dispar iar in sange se afla doar trigliceridele endogene, sintetizate de ficat, si transportate
ca pre--lipoproteine.
Conditii optime pentru recoltarea sangelui in vederea investigarii profilului lipidic:
-

Se pastreaza regimul alimentar obisnuit timp de 3 saptamani;

Nu se consuma alimente cel putin cu 12 ore inainte de recoltare;
Nu se consuma alcool 72 ore inaine;
Fara tratament cu hormoni tiroidieni, de reproducere, corticoizi,
contraceptive orale, hipolipemiante

Dozarea lipidelor totale prin metoda vanilina acid fosforic

Principiul metodei
Acizii grasi din lipidele serului se elibereaza si se sulfoneaza cu acidul sulfuric la cald.
Prin tratare cu vanilina si acid fosforic se obtine un compus colorat roz-violet,
fotometrabil. Intensitatea coloratiei obtinute este direct proportionala cu concentratia
lipidelor din ser.
Reactivi
Trusa contine reactivii necesari pentru 100 de determinari:
- acid sulfuric conc.
- Reactiv fosfo-vanilinic
- Standard: solutie trioleina in cloroform
Proba
Se foloseste serul, care poate fi conservat la frigider 24 ore.
Daca n unele seruri se separa un strat lipidic, se va omogeniza agitnd bine nainte de
luarea probelor.
TEHNICA DE LUCRU
Se pipeteaza n eprubete PROBELE (P) si un STANDARD (S) la care se adauga reactivi
conform tabelului:
REACTIVI
SER
STANDARD
Acid sulfuric

U.M.
ml.
ml.
ml.

P
0,1
2,0

S
0,1
2,0

Se amesteca bine si se tin n baie de apa la fierbere timp de 10 minute.

Se racesc imediat si se pipeteaza n alte eprubete conform tabelului:
REACTIVI
AMESTEC acid - ser
AMESTEC acid - standard
Acid sulfuric
Reactiv fosfo-vanilinic

U.M.
ml.
ml.
ml.
ml.

P
0,1
2,5

S
0.1
2.5

B
0,1
2,5

Se amesteca bine si se tin 15 minute la 37C.

Se racesc la jet de apa 1-2 minute.
n decurs de 15 minute se masoara extinctia probelor (EP) si a standardului(ES) fata de
blanc (B), la = 530 nm, n cuve de 1 cm.
OBSERVATII
Acidul sulfuric si acidul fosforic au densitatea si vscozitatea mare ceea ce impune ca
pipetarile sa fie efectuate cu grija, lasnd timp de scurgere suficient.
Amestecarea serului cu reactivii trebuie efectuate energic pentru a asigura omogenizarea.
CALCUL
CP= (EP / ES) x CS
mg. LIPIDE TOTALE / 100 ml SER = (EP / ES) x 250
VALORI NORMALE:
LIPIDE TOTALE = 500 800 mg/100 ml ser
Variatii fiziologice in functie de varsta, sex rasa, tipul de alimentatie, factori genetici,
clima, profesie, etc.
LIPEMIA are valoare mica la nou-nascut si pana in copilarie, crescand apoi spre
batranete.
Sarcina produce o usoara crestere a lipemiei.
Variatii patologice
Valori crescute:
Hiperlipemia se datoreaza n principal urmatoarelor cauze: ateroscleroza, hiperlipemia
congenitala, insuficienta hepatica, obstructie a cailor biliare, hipotiroidism, sindrom
nefrotic, diabetul zaharat, pancreatita
Valori scazute:
Hipolipemia este intalnita in: infectii acute, hipertiroidism, anemie, necroza hepatica,
inanitie, malabsorbtie