MICOTOXINE N ALIMENTE

Micotoxinele prezente n alimente i nutreuri constituie un factor de risc pentru

sntatea omului i animalului, ele putnd ajunge n organismul uman fie direct,
prin ingerarea de alimente contaminate cu micotoxine (alune, nuci, porumb, secar,
cafea, cacao etc), fie indirect, prin ingerarea de produse alimentare (lapte, ou,
carne) provenite de la animalele intoxicate cu micotoxine.
S-au depistat micotoxine sub form de reziduuri n organe (ficat, rinichi, cord) i
muchi de porc, n ficat i esut muscular de psri, n organe i muchi de vit, n
lapte, ou i produse alimentare (pine, biscuii, piureuri de fructe pentru copii etc.)
n concentraii ce pun n pericol sntatea omului.
Un pericol pentru sigurana consumatorilor reprezint i prezena micotoxinelor n
furaje. Analize micotoxicologice ale furajelor folosite pentru psri au evideniat
prezena unui melanj micotoxicologic: ochratoxine, aflatoxine, citrinina,
trichotecene, patulin i sterigmatocistina. Examenul necropsic al unor psri
hrnite n aceste condiii a evideniat rupturi de ficat, rinichi mrii n volum,
enterite catarale i hemoragice, uneori hemoragii la nivelul mucoaselor i
seroaselor.
Mult vreme s-a promovat ipoteza c transformarea unor cereale, legume i fructe
care posed o ncrctur semnificativ de micotoxine n alimente determin
scderea coninutului micotoxinic n produsul final pn la un nivel nesemnificativ
pentru sntate. n realitate, produsul alimentar pstrnd un procentaj din
ncrctura micotoxinc iniial, i n prezent exist preocupri pentru limitarea
ptrunderii micotoxinelor n lanul alimentar. Astfel, s-a dovedit c fina de
porumb pstrez 50% din cantitatea de aflatoxine aflate n boabele de porumb, iar
pinea alb reine 20-30% din coninutul de ochratoxin a boabelor de gru. Pinea
neagr pstreaz 40-50 % din concentraia iniial de ochratoxin (10-50 ppb).
Zearalenona existent n boabele de gru persist n proporie de 60% n pine i

50% n pastele finoase. Cea mai mare parte a micotoxinelor se concentreaz n

germeni i tre.
Micotoxinele care posed cel mai ridicat potenial toxigen pentru om, mamifere,
psri i peti sunt cele produse de miceii care se dezvolt pe cereale: porumb,
gru, ovz i orez, ceea ce impune verificarea constant a acestora i a produselor
lor.
n urma prelucrrii statistice a rezultatelor din numeroase studii
privind incidena micotoxinelor n alimente i furaje provenite din ntreaga
lume s-a ajuns la o repartizare a micotoxinelor majore n urmtoarele zone
geografice:
- Centrul i sudul Europei (Ungaria, Suedia, Austria) sunt dominate
de prezena fusariotoxinelor, n special zearalenona i toxina T-2;
- Nordul Europei (Danemarca, Olanda, Polonia) au ca micotoxin dominant
ocratoxina A;
- Zonele reci (Alaska, Canada, peninsula Scandinavic i restul rilor din Europa)
sunt caracterizate de prezena aflatoxinelor,
zearalenonei, ochratoxinelor, diacetoxiscirpenolului, toxinei T-2 i toxinei HT-2;
- Zonele calde i umede din America Latin, Africa, Asia i Australia sunt
caracterizate de prezena aflatoxinelor.
Micotoxinele i miceii produc prejudicii importante n agricultur prin afectarea
culturilor de cereale, legume i fructe, zootehnie prin diminuarea reproducerii, prin
intoxicaii i mortalitate i n industria alimentar prin deprecierea alimentelor cu
ncrctur micotic i micotoxinic. Se apreciaz c aceste pierderi la nivel global
sunt de 5-10%.

Aflatoxinele prezentare i particulariti

Descoperirea aflatoxinelor i istoricul cercetrilor

Foarte puine lucruri erau cunoscute despre aflatoxine pn n 1961. n acel an, cteva
rapoarte alarmante despre boala misterioas a puilor de curc, au venit din sudul Angliei, boal
numit iniial boala Turkey X de ctre Blount (n 1961).
Psrile afectate refuzau hrana, prezentau letargie iar aripile erau tot timpul lsate. n
stadiile avansate, capul, gtul i picioarele erau poziionate anormal, ficatul i rinichii prezentau
pete hemoragice sau necroze precum i mrire n volum. n 500 astfel de episoade, aproape
100.000 de pui, majoritatea ntre 3 i 6 sptmni de via, au murit.
n mod similar, aproximativ 5000 de potrnichi i fazani de la o ferm i 14000 de rae de
la alt ferm au murit. (32)
Alcroft i colaboratorii (1961), au fcut cercetrile pentru identificarea bacteriilor,
precum i pentru prezena unor otrvuri organice sau anorganice. Cum nici o dovad a
provenienei deceselor nu a fost demonstrat, iar natura infecioasa nu a fost descoperit, totul a
fost pus pe seama otrvirii surselor de hran. Blount (1961) a fost de prere c faina de arahide
din Brazilia din alimentaie a stat la baza tuturor episoadelor de infestatii. Experimentele
alimentare au dovedit c fina de arahide a fost responsabil, totui factorul de toxicitate
rmnnd nedescoperit.
n aceeai perioad, cazuri de rae otrvite n Kenya dup consumul prealabil de fin de
arahide crescute n Uganda, au fost menionate la Laboratorul Veterinar Central din Weybirdge,
demonstrnd c sursa de hran coninea acelai factor toxic descoperit n Anglia (6).
Rapoarte din alte locuri demonstrnd intoxicaii acute ale animalelor de ferm ca porcii i
vieii, Loosmore i Harding (1961) artnd simptomatologii similare. Nu era cunoscut nici o
relaie evident ntre episoadele epidemice i pierderea de animale i psri de curte.
Lee (1965) a determinat cantitativ aflatoxinele n produsele din arahide, punnd o porie
de 10 20g fin degresat de arahide ntr-o sticl de 200 250 ml, peste care s-a adugat
echivalentul a de 10 ori greutatea finii. Produsul a fost amestecat pn la combinarea complet,
continundu-se prin ntoarcerea i revenirea sticlei aproximativ 30 de minute. A fost adugat
cloroform 5 - 100 ml, amestecarea continund pentru nc 10 minute. Cloroformul a fost

recuperat fie prin centrifugare fie printr-o plnie separatoare, dup care aflatoxinele au fost
evideniate n mod direct prin cromatografia n strat subire conform literaturii publicate (6).
Nabney i Nesbitt (1965) au descris o metod de determinare a aflatoxinelor, AFB1 n
mod special, bazndu-se pe intensitatea absorbiei ultravioletelor la 363 m (lungimea de und a
absorbiei maxime), dup purificarea prin cromatografia n strat subire. Aceasta procedur a fost
aplicat pe faina de arahide i aflatoxin brut izolat din culturile de anumite tipuri ale A. flavus
i A. parasiticus. Aceasta metod a fost aplicat doar finurilor de mare toxicitate i nu este
aplicabil n forma prezentat, pe finurile de toxicitate medie i sczut.
Shotwell i colab. (1966) au dezvoltat o metod pentru producerea de aflatoxine prin
creterea de tulpini A. flavus NRRL 2999 pe substrat solid de orez. Randamentul a fost optim,
mai mult dect 1 mg de AFB1 pe g de mediu iniial, au fost obinute n 5 zile la 28 grade Celsius.
Un produs brut ce coninea aflatoxine, a fost izolat prin extragerea cu cloroform i precipitarea
cu hexan din soluii concentrate. Produsul brut const n 50% aflatoxine n proporiile urmatoare:
B1-B2-G1-G2, 100:00.15:0.22:0.02. AFB1 a fost separat din aproape toate impuritile i de
celelalte aflatoxine prin cromatografia pe gel siliciu (silica gel) cu 1% alcool n cloroform.
Analitic, AFB1 pur a fost recristalizat din cloroform mixtura de hexan.
Carnaghan i colab. (1967) au testat dou tulpini pe pui hibrid (hibrid A i hibrid B)
pentru posibilitatea otrvirii cu aflatoxine prin administrarea ntr-o singur doz i prin episoade
de hrnire. Hibridul A a fost gsit mult mai susceptibil la aflatoxine dect hibridul B. Nici o
modificare consistent n modelele de proteine nu a fost constatat, dar n grupul cel mai
susceptibil (hybrid A) s-a observat o reducere a coninutului total de proteine. (9)
Choudhary i Manjrekar (1976) au observat activitatea biologic a aflatoxinei astfel:
-

Embrionii de pui au fost sensibili la diferite doze de aflatoxine;

Toxicitatea a fost mai pronunat la embrionii sub 9 zile, urmat de mortalitate;

Leziunile histopatologice constau n congestia i necroza evidente la embrionii mai

mari de 9 zile.

Arafa i colab. (1981) au cercetat sensibilitatea relativ a puilor broiler, Leghorn, de

gsc, de prepeli i de curc la creterea coninutului dietei n aflatoxine de la 1 la 21 zile de
via. Aflatoxinele au fost introduse n diet n trei concentraii (0.7, 1.4, i 2.1 mg AFB1
echivalentul / kg).
Ei nu a raportat nici un efect semnificativ al aflatoxicozei la puii broiler i la Leghorn.
Aflatoxinele 0.7 mg/kg au sczut greutatea corporal la puii de curcan dar nu au modificat
reprezentativ creterea la cei de gsc. La 1.4 mg AF/kg de mncare , creterea n greutate a fost
afectat considerabil. Leziunile ficatului au aprut la puii de gsc i prepeli la toate dozele de
aflatoxine i a fost evident la 2.1 mg/kg. Puii de gsc au fost cei mai sensibili, prepeliele au
fost plasate intermediar, iar puii de gin cei mai rezisteni.
2.2 Micei responsabili de producerea aflatoxinelor
Aflatoxinele sunt produse n principal de Aspergillus flavus i Aspergillus parasiticus n
anumite regiuni ale lumii n mod special n Sud-Estul Asiei, Africa Centrala i de Est (n mod
special A.flavus) i America de Sud (n special A parasiticus).(1)
Aspergillius flavus se recunoate uor dup culoarea galben verzui, i aspectul mai mult
sau mai puin n forma de smoc al talului. Arahidele i derivatele lor constituie n mod
incontestabil substratul de dezvoltare cel mai des ntlnit i studiat (infecia radicelelor n
contact cu solul) dar au fost ntlnite i pe alte substraturi (5).
2.3 Clasificarea taxonomic i structura genului Aspergillus:

ASCOMYCETES

EU-ASCOMYCETES

PLECTOMYCETES

Ordinul Eurotiales

Familia EUROTIACEES = ASPERGILLACEES

nmulirea vegetativ prin exospori, conidia (nscute prin pensarea filamentelor difereniate)
i fialide, grupate la extremitatea conidioforilor.

Prezena

unui mucegai toxicogen, poate determina, dar nu ntotdeauna producerea

micotoxinelor iar absena mucegaiului nu este nsoit i de absena micotoxinei.

Aflatoxinele sunt n general stabilite la nivelul conidiilor (n spori), sau excretai n
mediul contaminat (hran, ap), ele reprezentnd un pericol potenial pentru oamenii i animalele
care inger sau inhaleaz aflatoxinele, transmiterea prin contact fiind mult mai rar ntlnit.
Astfel, mai multe studii au demonstrat prezena aflatoxinelor n aerul ambiant din spaiile de
producie a finei de arahide, de prelucrare a hranei pentru animale, sau n praful rezultat n
timpul recoltrii porumbului. (Ex: coninutul de aflatoxin B1 ntr-o instalaie de tratare a a
grului este de 107 ng/m3, ceea ce corespunde la o expunere zilnic de 40 - 856 ng).
Unele studii indic faptul c expunerea miceilor la praful ncrcat cu aflatoxin B1 poate
determina o inciden mai mare a cancerului la ficat i pulmonar din fabricile de prelucrare a
arahidelor.
Structura aflatoxinelor
Aflatoxinele au o structur prin care pot fi clasificate ca derivai bis-furanocumarinici
(clasa de componente chimice organice produse de unele plante) i includ aflatoxinele B1, B2,
G1, G2.
Moleculele de aflatoxine observate n lumina ultra-violet, prezint fluorescen detaliu
care este folosit pentru determinarea pe specie, astfel:
-

Fluorescen albastr aflatoxinele B (eng. blue)

Fluorescen verde aflatoxinele G (eng. green) (7)

Ca reprezentare chimic se observa urmatoarele:

Aspergillus flavus produce n principal aflatoxinele B1 si B2, neavnd rol n producerea
celor de tip G1 i G2, n timp ce Aspergillus parasiticus le produce pe toate 4.
AFB1 este cea mai toxic, dupa care urmeaz AFM1 (M1 = Milk 1 gsit n laptele de la
o vac infestat prin alimentaia cu furaje contaminate), AFB2 i AFG2.
Toxicocinetica AFB1

Absorbia se poate face pe cale oral sau traheal datorit lipofilelor care reglementeaz
deplasarea printr-un mecanism de difuzie pasiv. Deplasarea se face rapid, la nivelul intestinului
subire prin poriunea duodenal, AFB1 trecnd n ficat prin vena port. (7, 8)
Distribuia. Stocarea sa n organism se face datorit legturilor covalente cu moleculele
tisulare, ca exemplu putndu-se constata i pasajul transplacentar al aflatoxinelor. (7, 8)
Metabolizarea AFB1
Aflatoxinele B1 pentru a fi toxice sau mutagene, trebuiesc metabolizate fixndu-se pe
macromolecule. Acest lucru este realizat de citocromul P (CYP) hepatic i sunt transformate n
metaboliii urmtori: : AFB2a, AFQ1, AFP1, aflatoxicol H1, AFM1, aflatoxicol M1 i epoxydeAFB1 (cu exceptia epoxyde-AFB1 i AFM1 sunt mai puin toxici)
Eliminarea

pe cale biliar: reprezint 60% din eliminarea total, privind toi metaboliii formai,
cteodat AFB1 n forma liber;

pe cale urinar: se regsesc metabolii ce servesc ca marker n intoxicaii;

prin lactaie: doar AFM1 (7, 8)

2.4 Factori propice dezvoltrii

Factori genetici
Ex: varieti de arahide +/- sensibile la infestarea cu Aspergillus flavus i la contaminarea
ulterioar cu aflatoxine
Remarc: se poate nota existena diferitelor sue de A. flavus care sunt +/- toxicogene
Factori de mediu
Producerea de aflatoxine necesit o tensiune a apei
A w = 0.84 la 0.86

n spori unde aw este definit ca raportul dintre presiunea vaporilor de produs supra cea a
apei pure, la aceeai temperatur. Aw variaz de la 0 la 1, n plus daca aw este sczut va exista
mai multa ap disponibila pentru creterea ciupercii. (10)
Deteriorarea substratului
Exemplu: n timpul depozitrii i chiar pe cmp, efectele produse de insecte ca vectori ce
pot purta sporii de mucegaiuri pot fi observate la cereale, n leziunile pe care le prezint. (10)
Compoziia n nutrieni
Aceasta compoziie calitativ i cantitativ n unii nutrieni (glucide in mod special)
influeneaz contaminarea n afltoxicoz. (10)
Absenta altor microorganisme
Prezena simultan a unor bacterii sau altor micei, perturb producerea de micotoxine.
Exist o concuren ntre diferiti miceti, astfel, inhibarea produciei de aflatoxin a
Aspergillus flavus se face prin prezena unui inhibator de biosintez a acesteia produs de
Aspergillus niger . (10)
Temperatura
Producerea aflatoxinelor necesit o temperatur cuprins ntre 25 i 40 grade Celsius
(optim 30 i 35 grade. )
Aceste condiii sunt valabile i n zonele temperate n sezoanele foarte calde, pentru
culturile de bumbac sau porumb. (10)
Ph-ul mediului
Creterea miceilor productori de aflatoxine se desfoar la un ph = 5 sau mai mare.
Folosirea pesticidelor

Unele studii au demonstrat c utilizarea necontrolat a fungicidelor sau a altor pesticide

poate fi uneori favorizant pentru producerea de micotoxine, deci folosirea lor ar trebui s fie
judicioas. (10)

Mecanismele infestrii cu aflatoxine

n urma cercetrilor realizate de Smith i Hamilton (1970), n funcie de concentraia i
infestaia cu aflatoxine, ficatul s-a dovedit a fi deschis la culoare i de consistenta friabil, Raj i
colab. 1970 alturi de Tung i colab. 1972, prezentnd creterea acestuia n greutate.
Conform lui Hamilton (1971)(30), creterea n marime a ficatului, nu se datoreaz
edemului deoarece raportul dintre greutatea umed i cea uscat este constant. Creterea n
volum a ficatului sau infiltrarea cu grsime a acestuia observat de Newberne i Butler (1969),
Bryden i colab. (1970) se datoreaz acumulrilor lipidice din ficat.
Hamilton i colab. (1970) au fost de prere ca doza de aflatoxine ce produce mrirea n
volum a ficatului este mai mic dect cea necesar celorlalte organe. Conform lui Rao i colab.
(1980), 0,5 ppm de aflatoxine produc creterea ficatului. Schoental (1967) a fost de prere c
ficatul este organul int pentru carcinogenez.
Ficatul deschis la culoare cu incluziuni de grsime, sugereaz c aflatoxinele inhib
transportul lipidelor la puii broiler (14).
Trucksess i colab. 1983, au descoperit c ficatul coninea de la 0,11 la 0,83 g/g AFB1
n esuturile hepatice al ginilor hranite cu hran ce coninea aflatoxine, pentru 7 zile.
3.1 Patologia aflatoxicozelor
Chen i colab. (1981) au raportat c ginile hrnite cu furaje ce conineau aflatoxine n
concentratie 2.5 i 5.0 ppm pentru 28 de zile, au prezentat ficat deschis la culoare, friabil i cu
pete albe caracteristice.

Aciunea cancerigen a aflatoxinelor se manifest n principal prin apariia carcinoamelor

hepatocelulare (34). La obolan, aceste tumori maligne sunt precedate de noduli hepatici, deci
morfologia iniiala este modificat.
Pot fi observate

4 tipuri de alterri hepatocitare: hiperplazia, creterea bazofiliei

euzenofilelor i creterea numrului de vacuole (35).

Acestora li se asociaz noduli de euzenofile, se produce alterarea capacitii de fixare a
lectinelor ca i n celulele maligne, apoi sugernd c euzenofilele stau la originea apariiei
ulterioare a hepatocarcinoamelor.
Aceste rezultate sunt in acord cu observaiile lui Newberne i Wogan 1968 care descriu
apariia secvenial a leziunilor bazofile apoi euzenofile n carcinoamele hepatice la obolan.
Principala int a aflatoxinelor, regsit la speciile studiate este fr ndoial, ficatul.
Modificarile identificate ca rezultat al infestaiei la animale i psri sunt reducerea greutii i a
depozitelor de grsime, hemoragie intern, icter, necroza ficatului i ciroz (34). La pui, AFB1
are un procent letal de 50% ntr-o doz de 9,28mg/kg (35). Aflatoxicoza este carcinogenic i
teratogen pentru fetuii mamiferelor. Efectele aflatoxinelor pot fi potenate de contaminarea cu
alte micotoxine, ex.: diacetoxyscirpenol (32), acidul cyclopiazonic (33), ochratoxine (31),
deoxynivalenol (31) i toxina T-2 (30). n contrast cu celelalte descoperiri, (Smith i colab.
1992), a fost raportat i o sinergie seminificativ ntre aflatoxine i acidul ciclopiazonic (9).
Aflatoxinele pot induce unele semen patologice la pui (9). La o doz de nivel 2 2,5 ppm
de aflatoxine, s-a raportat fragilitatea oaselor (31), demonstrnd astfel interferena toxinei cu
mecanismul de absorbie al calciului.

Venulele centrolobulare i din spaiul portobiliar, asemntor capilarelor, au lumen larg

comparativ cu ficatul puilor din lotul martor. Unele hepatocite prezint modificri nucleare ca
indicatori ai morii celulare reprezentate mai ales prin picnoz (fig. 1, a,b).

Fig. 1. Ficat de pui de gin n vrst de 13zile din LE, dup 7 zile de expunere la aflatoxina B1.
Venulele centrolobulare i din spaiul portobiliar i capilarele, au lumen larg.. Col. PAS x200
Puilor de gin crora li s-au administrat 0,8g/kg greutate vie aflatoxin timp de 14zile, la
nivelul ficatului se nregistreaz modificri histologice mai evidente comparativ cu lotul anterior.
Acestea constau n acumularea picturilor de lipide intracitoplasmatic care conflueaz, un numr
mare de hepatocite

prezint picnoz. Capilarele sinusoide sunt mrite n volum, pline cu

eritrocite.
Venulele din spaiul portobiliar centrolobulare i capilarele, au lumen larg n care se pot
observa eritrocite. n spaiul portobiliar se pot observa un numr mic de limfocite (fig. 2, a,b).

Fig. 2 Ficat de pui din LE, dup14 zile de expunere la aflatoxina B1. Hepatocite ncrcate cu
picturi de lipide, altele cu nuclei picnotici. Col. PAS x200.

Fig. 3 Ficat de pui n vrst de 27 zile, dup 21 zile de expunere la AFB1, din LE1. Hepatocite
cu picturi de lipide intracitoplasmatice, nuclei excentrici, alii picnotici. Col. PAS x100.

Fig. 4 Ficat de pui n vrst de 27 zile, dup 21 zile de expunere la AFB1, din LE1. Capilarele
sinusoide sunt largi, hepatocite cu picturi de lipide intracitoplasmatice. Zone de necroz
intralobulare. Col. PAS x200.

Fig. 6 A, B. Ficat de pui n vrst de 36 zile, dup 30 zile de expunere la AFB1, din LE1
Acumularea lipidelor n hepatocite. Aglomerri limfoide mici n spaiul portobiliar. Col. Giemsa
x900.

Fig. 7 Ficat de pui de 42 zile, dup 35 zile de expunere la AF B1. Congestie hepatic, zone de
necroz. Col PAS x200.

Aflatoxinele sunt de asemenea cunoscute pentru alterarea coagulrii sngelui.

Aflatoxina B1 produce modificri biochimice ai factorilor de coagulare V, VII, X, a
tromboplastinei, i reduce protrombina plasmatic i fibrinogenul (Doer 1976). n consecin
crete n totalitate coagularea sngelui i distribuia protrombinei (Doer 1974). Creterea
timpului protrombinei a fost considerat a fi rezultatul scderii sintezei hepatice, a factorilor de
coagulare cauzai de toxicitatea aflatoxinei asupra hepatocitelor.
Aflatoxina crete fragilitatea vascular i reducerea muchilor scheletici, se produce
ruperea vaselor de snge, eliberarea sngelui n esutul nconjurtor (Wyatt 1991).
Hemoragiile subcutanate par a fi induse de alterarea factorilor de coagulare II, VII, IX, X
i creterea timpului de coagulare (9; 36; 12).

Rspunsul sistemului hematopoietic n infecia cu aflatoxine, a fost studiat de Tung i

colab (1975), acetia raportnd o reducere semnificativ a hemoglobinei i a numrului
eritrocitelor. Exist deasemenea date contradictorii (33) care arat c parametrii hematologici nu
sunt afectai de infeciile produse prin aportul de aflatoxine 500 ppb.
Aflatoxina la o doz de 200g/g hran, poate scdea semnificativ spermatogeneza (33),
la masculii de reproducie. (33). Clarke i colab.(1987) au condus un studiu pentru investigarea
schimbrilor endocrine i testiculare la masculii de pui, asociate cu ingestia de 10 sau 20 ppm AF
n 3 stadii diferite de dezvoltare, descoperind c nivelul de plasm al hormonului LH la vrsta de
6 sptmni a fost semnificativ mai mic, n timp ce la masculii mult mai n vrst nu au fost
constatate modificri. Conform acestui raport, ntrzierile la vrfurile de LH, la fel ca i supresia
testosteronului i greutatea testiculelor, indic o posibil ntrziere n maturizarea sexual
asociat cu aflatoxicoza la pui. (33).
Rspunsul imun la infecia AF este sczut i pare s difere de la o linie de pui la alta.
(33). Imunitatea mediat celular este deasemenea afectat de administrarea aflatoxinelor. (27).
Regresia bursei lui Fabricius a fost deasemenea raportat n aflatoxicoz (27, 33).
Aflatoxinele au aratat selectivitate pentru sensibilitate la pui i alte animale, n infestaia
ce interfereaz cu dezvoltarea rspunsului imun.
Smith i colab. (1975) au sugerat c AFB1 poate s nu fie selectiv specific n ataarea de
esutul animal. Ei au observat leziuni uoare n miocard, creier i tesutul osos n paralel cu
leziunile la ficat i muchiul trapez. Efectul aflatoxinelor asupra funciilor renale (echilibrul
acido-bazic, debitul urinar, rata de filtrare a glomerulului) au fost descrise de Glahn i colab.
(1990). Ei au raportat c aflatoxicoza a sczut eliminarea fracionala a fosforului (EFF) i a
concentraiei de plasm Ca++, dar nu a alterat semnificativ alte funcii renale.
Semne clinice
Semnele clinice asociate cu boli de ficat sunt foarte variabile de multe ori manifestnduse vag atribuindu-se asfel altor boli. Pentru c ficatul este un organ mare i are o capacitate
uimitoare de a se regenera atacurile asupra ficatului pot s nu provoace boli semnificative astfel
multe psri rmnand asimptomatice.

Atunci cnd semnele clinice sunt evidente, acestea pot fi nespecifice incluznd
manifestri pariale sau totale de anorexie, letargie, depresie, diaree, poliurie, polidipsie, dispnee,
calitatea sczut a penelor i slbiciune.
Mai multe semne specifice de boal hepatic includ distensie abdominal, cretere
exagerat i vnti n cioc,
Sindrom hemoragipar- melen, peteii, hemoragie acut i deces.
Prin hemoleucograma (CBC)

s+au observat modificri sugestive ale bolii hepatice

incluznd leucocitoz sau leucopenie (n funcie de etiologie), anemie non-regenerativ sau

hemoragic, hipo sau hiperproteinemie (n funcie de cronicitatea bolii).
Colosterolul
Concentraii crescute ale colesterolului sunt asociate cu o varietate de afectiuni i boli,
inclusiv afeciuni endocrine (hipotiroidie, hiperadrenocorticism i a diabetului zaharat), sindrom
nefrotic, nefropatie, boala obstructiv hepato-biliara, pancreatit acut i disfuncie hepatic.
Creterea colesterolului poate fi asociat cu lipemia sau alte forme ale bolilor de ficat,
hipotiroidism, obstrucia ductului biliar, foame, dieta cu un continut ridicat in grsimi,
xanthomatoza sau ateroscleroza. Scderea concentraiilor plasmatice de colesterol a fost asociat
cu unele cazuri de insuficien hepatic.
Glucoza
Hipoglicemia poate rezulta din insuficiena/disfuncia hepatic, septicemie, neoplazie,
infeci/inflamatii, tulburri de malabsorpie, foame, i boli urinare.
Acidul uric
Concentraia de acid uric este un produs deosebit de important pentru psri. Acesta este
produs n ficat i eliminat prin secreie tubular independent. Hipouricemia este rareori vzut
la psri n comparaie cu hiperuricemie, deoarece acidul uric este sintetizat n ficat.
Hipouricemia poate sugera boal hepatic sever.
3.3 Efecte asupra productivitii la pui

Niveluri sczute de aflatoxine sunt asociate cu scderi ale productivitii la puii aparent
sntoi ( Ginile outoare infestate cu AFB1 au artat o scdere considerabil a produciei de
ou la un nivel AF de 0.7 mg/kg greutate corporal pe zi sau mai mare (18). Huff i colab (1975)
au raportat scderi n producia de ou i scderea mrimii oulor, sub influena aflatoxinelor.
Totalul greutii glbenuului de ou i a glbenuului ca procent din greutatea oului a sczut.
Conform lui Washburn (1985), aflatoxina la doze de 5 ppm, poate scdea n greutate (galbenuul
i albuul), coaja nereducndu-se n aceleai proporii (o scdere a capacitii acestuia de a se
sparge).(39)
Aflatoxicoza la puii broiler pare a fi caracterizat mai degrab prin reducerea greutii i
consumul redus de furaje (30), dect prin mortalitatea crescut. (Carnaghan i colab. 1966).
Mashaly i colab. (1986) au demonstrat c psrile tratate cu aflatoxine, prezint o scdere
semnificativ n greutate fa de psrile netratate la finalul perioadei experimentale. (39)
Reddy i colab. (1984) au observat scderea n greutate a puilor broiler de pn la 4
sptmni de via, iar Giambrone i colab. (1985) au observat c efectul toxic asupra creterii
este perceptibil de la 5 sptmni n sus. S-a observat deasemenea c hrnirea cu niveluri
ridicate de toxine la o vrst mica a puilor a fost mult mai duntoare dect hrnirea cu doze mici
pe perioad mai lung de prob.
Shukla i Pachari (1985) au raportat deasemenea o reducere semnificativ a greutii
corporale i a ficatului, la cocoii ce au primit doze diferite de aflatoxine. Reddy (1984) a
descoperit scderea n greutate i scderea consumul hranei la i peste 0.75 ppm de aflatoxine la
psrile hrnite cu o dieta toxic pentru 28 de zile.
Maurice i colaboratorii (1983), au administrat bucal 50 sau 100 g AFB1 pe kilogram i
nu descoperit nici un efect semnificativ asupra greutii i consumului de hran.
Conform lui Osborne i Hamilton (1982), reducerea greutii pare a fi asociat cu
scderea activitii pancreasului i ca urmare a sindromului de malabsorbie, evident de fapt i la
administrarea dozelor de 2.5 ppm, non inhibitorii. Ca efect advers poate afecta multe dintre
procesele legate de folosirea nutrienilor. Deficite secundare ale aminoacizilor (proteine), lipide,
energie i vitaminele (D,K,E,A, acid folic i riboflavine) pot rezulta deasemenea (30).

Miller i Wyatt (1985) au fcut o ncercare n dorina de a determina dac ipoteza slabei
absorbii intestinale este un efect generalizat de aflatoxicoz. Ei au descoperit c a existat o
scdere cu 30 35% n snge a concentraiei de chlortetraciclin, reprezentativ pentru acest
control, aceasta fiind administrat n ap de but. Antibioticul a fost deasemenea introdus prin
injectarea intravenoas la psrile cu aflatoxicoza pentru a elimina posibila influen a absorbiei
intestinale a medicamentului. Niveluri sczute ale medicamentului au fost din nou observate.
Calculele variate realizate n acest experiment, indic faptul c scderea n snge a cantitii de
chlortetraciclina nu a fost din cauza scderii absorbiei intestinale, ci mai degrab creterea ratei
eliminrii medicamentului din snge.
Metabolismul aflatoxinelor. Ca orice compui strini aflatoxinele sunt supuse n
organism unui proces de biotransformare care duce la formarea unor metabolii polari ce pot fi
excretai mai uor pe cale renal i gastrointestinal. Creterea polaritii se realizeaz de ctre
enzimele microsomale, n special n ficat, urmate de conjugare sau esterificare, cu apariia de
compui polari. Daca pentru majoritatea compuilor procesele de oxidare i conjugare conduc la
formarea de derivai netoxici, uneori are loc un proces de bioactivare, care determin apariia de
compui intermediari mai reactivi, cu potenial toxic sau carcinogenetic.
Metabolismul hepatic al aflatoxinelor implic dou ci majore: calea microsomal, n
care biotransformrile sunt mediate de catre funcia hidroxilazicp mixt a enzimelor
microsomale i calea citoplasmatic sau solubil.
Interaciunea i inhibarea sintezei ADN. Sediul principal de atac al aflatoxinei, dupa
bioactivare se afl la nivelul poziiei N-7 al guaninei, formnd 8,9 dihidroxi- 9- (7-guanil)-10hidroxi aflatoxina. Produsul a fost evideniat prin incubarea ADN cu AF B1 n prezena
sistemului de activare microsomal. (19)
Modificarea ADN-ului poate duce la o lips de rspuns a celulei fa de mecanismele
care controleaz replicarea celular normal i la carcinogenez.
Reversibilitatea inhibiiei sintezei ARN i ADN dupa administrarea acut de AF B1,
sugereaz posibilitatea reparrii leziunilor ADN-ului. Comparativ cu alte substane carcinogene
chimice AF B1 este cel mai puternic carcinogen cunoscut, care acioneaza pe cale oral.
Experimental, aflatoxina determin producerea de tumori gastrice, renale, pulmonare, ale
glandelor salivare, ale colonului, iar n administrarea subcutanat produce sarcoame la locul
injectrii.

Cercetrile biochimice au evideniat posibilitatea prediciei efectului carcinogen n

funcie de calea de metabolizare a aflatoxinei. AFB1 are dou ci distincte de metabolizare: cea
microzomal care d natere AFM1, AFQ1, AFD1 i AFB2 i citoplasmatic cu producele de
aflatoxicol. Aflatoxicolul este cel mai puternic mutagen i carcinogen dintre metaboliii AFB1.
n hepatocit are loc transformarea ireversibil a aflatoxicolului n AFB1 ceea ce prelungete
expunerea celulei la aciunea carcinogenului. De asemenea aflatoxicolul conserv dubla legatur
vinil-eter i poate suferi procesul de bioactivare, cu formare de epoxid - 8,9.
Actual cercetrile se axeaz asupra geneticii i biologiei moleculare ale aflatoxinelor. Au
fost descrise 17 gene rspunztoare de biosinteza aflatoxinelor i a sterigmatocistinelor.
Majoritatea acestora formeaz gene cluster, ca de exemplu cele din A. nidulans cuprind 25 gene
cu o lungime de 60 kbp. Proteina care este rspunztoare reglrii transcriptice - ZnII.2 Cys6
ADN (binding protein) este codificat de gena afl R. Funciile produilor genetici: sinteza
acizilor grai, sinteza poliketidelor, monooxigeneze, reductaze, dehidrogeneze, metil-transferaze,
esteraze.

Genele cluster pentru aflatoxinele A. Flavus i A. Parasiticus au o lungime de 75

kbp i conin 17 gene diferite.

3.4 Metode de combatere

Tratamentele cerealelor cu substane chimice reprezint o posibilitate de prevenire a
micotoxicozelor. Exist aproximativ 100 de compui care se pare c pot inhiba producerea
aflatoxinei.(2,3,4,20)
Unii aditivi furjeri pot reduce expunerea animalelor la micotoxine i astfel limiteaz
efectele lor negative. S-a demonstrat c dezvoltarea fungilor este inhibat de amoniacul, acidul
propionic, aditivii microbieni i enzimatici din silozuri. Astfel se pot aduga la nsilozare aditivi
care s intensifice fermentaia. Inhibitorii fungilor se pot folosi ca tratament la suprafaa silozului
pe msur ce se folosete din el sau dup orice manipulare a silozului reducndu-se riscul
dezvoltrii fungilor la suprafaa expus a sa. n cazul cnd apar nivele inacceptabile de
micotoxine se procedeaz la diluarea sau ndeprtarea hranei incriminate.
Amonizarea cerealelor poate distruge unele micotoxine nereprezentnd o metoda practic
de detoxifiere a furajelor afectate i deja depozitate. (36)

Datorit faptului c Seleniul i unele vitamine A,C i E au clare proprieti antioxidante

care acioneaz ca eliminatori ai anoionului superoxid, acestea au fost cercetate ca i ageni de
protecie mpotriva efectelor toxice ale micotoxinelor.
Dovezi n plus n legtur cu efectele protectoare ale unor vitamine i ale precursorilor lor
mpotriva deteriorarilor cauzate de micotoxine reies din numeroasele studii n vivo i n vitro.
Civa compui naturali ( vitamine, provitamine, carotenoizi, clorofila i derivaii si, fenol i
seleniu) i sintetici cu proprieti antioxidante par a fi eficace. Proprietile protectoare ale
antioxidanilor se datoreaz probabil capacitilor de a aciona ca eliminatori ai anionului
superoxid protejnd astfel membrana celular de tulburrile produse de micotoxine. Rezultate
ncurajatoare s-au obinut n studiile privind aciunea protectoare a unui mare numr de nutrieni,
componeni alimentari, aditivi, microorganisme i absorbani. (2,3,4,20)
Se tie c medicamentele naturiste funcioneaz pe baz de antioxidani care elimin
radicalii liberi i inhib peroxidarea lipidelor. Studiile sugereaz deasemenea c ele protejeaz
mpotriva sintezei proteinelor hepatocitare, scderea activitilor agenilor tumorali stabilizeaz
celulele mduvii, chelateaz fierul i ncetinesc metabolismul calciului. Unele studii sublineaz
capacitatea unor extracte din plante medicinale de a contracara toxicitatea aflatoxinei B1. Ei au
raportat c un extract de etanol dintr-un concentrat de Casia sena n vitro inhib efectul mutagen
al acestei toxine.
Daca se face abstracie de latura financiar a acestor tratamente, este evident c pna n
prezent nu s-a gasit nici o metod de neutralizare a micotoxinelor care s duc la succes absolut;
cantiti mai mici sau mai mari de toxine rmn oricum n produsul respectiv, sau n fraciunile
obtinute prin macinare. Fiecare metod necesit cheltuieli substaniale, aadar actualmente nu
este disponibil o metod ntradevr ieftin, eficient i uor de aplicat, care sa fac posibil
scderea coninutului de toxine din produs, sau separarea boabelor contaminate de cele
sntoase. Aceasta nseamn c dac nu putem stopa contaminarea pe terenul arabil, n etapele
ulterioare interveniile pot avea eficacitate cel mult moderat. (37)
Multe dintre metodele fizice chimice i biologice gsite n literatura studiat sunt
eficiente n eliminarea, distrugerea i inactivarea diferitelor micotoxine, dar sunt rare cazurile
cnd acestea ndeplinesc celelalte condiii menionate mai sus. (2,3,4,20)
Abordarile nutriionistilor prin suplimentarea nutrienilor sau a aditivilor cu proprieti
anti toxice, sau adugarea unor inhibitori non furajeri capabili s reduc biodisponibilitatea

micotic pot fi o soluie la detoxifierea respectiv decotaminarea alimentelor contaminate, metode

care s ndeplineasca toate cerinele. Suplimentarea n diet cu aditivi non furajeri reprezint de
departe cea mai eficient i studiat metod. Un agent izolator este acela care previne sau
limiteaz absorbia toxinelor n tractul gastrointestinal al animalului. Ideal ar fi ca acel agent s
aib raz de aciune asupra mai multor micotoxine, atta timp ct furajele sunt contaminate cu
mai multe tipuri de micotoxine. Pentru a rmne practici aceti ageni ar trebui s fie ieftini i s
nu ocupe o pondere mare n diet., fr impuriti gust i miros neplcut.
Unul dintre cele mai importante aspecte ale evalurii agenilor inhibitori este clasificarea
corect a acestora n sensul c nu trebuie generalizat i concluzionat aciunea unui anumit grup
de absorbani deoarece s-ar putea ca elementele din acelai grup s aib eficien diferit.
(2,3,4,20)
Ageni absorbani de micotoxin
Crbunele activ
Crbunele activ este o form amorf de carbune nclzit n absena aerului, tratat apoi cu oxigen
pentru a se obine milioane de pori ntre atomii de carbon.
Sursa de carbon e aleas dintr-o mare varietate de materiale cum sunt de la nuci, lemn,
turb. Acest praf absorbant a fost folosit ca i tratament al unor intoxicaii acute nc din secolul
al 19-lea. Crbunele activ poate fi un produs eficace pentru decontaminarea alimentelor
contaminate cu aflatoxine i alte micotoxine, dei este mult mai potrivit folosirea acestuia
pentru tratarea unor intoxicaii. Proprietile absorbante sunt determinate de o serie de factori
cum ar fi mrimea porilor, suprafaa, tipul de micotoxine i doza. n timp ce in vivo eficiena
acestuia a dat rezultate variabile trebuie avut mare grij la evaluarea utilizrii acestuia.
Suprafaa specific a carbunelui activ variaz de la 500 mp/g la crbunele pe baz de lignin
pna la mai mult de 3500 mp/g la crbunele superactivat. (20)
David i Mc Gowman au furajat pui broiler timp de 8 sptmni cu 10 ppm aflatoxin. O
grup de pasari a primit 0,1 % carbune activ n apa de but, n timp ce varianta martor nu a
primit carbune. S-a constat o mbuntire a consumului gobal de furaje i o cretere a sporului
mediu zilnic la varianta tratat.
Galvano i colab. au experimentat potenialul carbunelui activ n reducerea transferului
de alfatoxin B1 din furaje n aflatoxina M1 din lapte la vaci. Folosind 12 vaci Holstein autorii
au comparat dou tipuri de carbune i un tip de HSCAS (aluminosilicat de calciu cu sodiu

hidratat). Unul dintre cele dou tipuri de carbune a dat rezultate semnificativ pozitive n timp ce
al doilea crbune a fost ineficient.
Crbunele activ este un absorbant non specific cu mare capacitate de reinere a unor micotoxine.
Ca urmare a testrii pe termen lung a rezultat c prin puterea deosebit de absorbie a acestuia se
pot atrage totodat i nutrieni valoroi ce diminueaz folosirea acestuia ca i agent antimicotic.

Silicaii minerali
Cea mai mare clasa de ageni absorbani de micotoxine sunt silicaii minerali. n aceasta
clas se gsesc dou subclase importante: filosilicaii si tectosilicai.. Argilele minerale provenite
din subclasa filosilicailor include montmorilonitele grupul kaolin i argila mica. Tectosilicaii
cuprind zeoliii.

Montmorilonitele/ bentonitele
Montmorilonitele sunt constituentul de baz al bentonitelor. Pe baza schimburilor
cationice bentonitele se clasific n bentonite de Ca, Mg, K, Na.
Datorita coninutului lor acestea au proprietatea de a se umfla i a forma un gel. Ca
urmare a capacitii ridicate de schimb ionic aceste produse au fost folosite pentru absorbia
micotoxinelor.
Masimango (1978) a fost cel care a demonstrat c bentonitele au capacitatea de a reine
aflaoxinele n soluii tampon. Mai mult s-a artat c bentonita este absorbant de aflatoxin n
medii ca apa, soluii saline, ser sangvin, fluid din stomacul porcilor, i n lichid ruminal de
bovine.
n mai multe experimente pe porci s-a artat c bentonita de sodiu adugat n procent de
5% n diete contaminate cu 800 ppm aflatoxina a mbuntit consumul i sporul mediu zilnic.
Adugarea bentonitei a dus la mbuntirea ureei din snge, a proteinei totale, a albuminei. (22)

Zeoliii
Zeoliii sunt un grup de silicai cu pori mari ce asigur spaiu pentru cationi cum sunt cei
de Na, K, Ba i Ca i chiar molecule mai mari cum sunt apa, amoniacul, carbonaii i nitraii. La
unii zeolii spaiile sunt interconectate formnd canale lungi i largi ale cror mrime variaz n
funcie de compoziia materialului.

Aceste canale faciliteaz circulaia ionilor n sau n afara structurii. Zeoliii sunt
caracterizai de proprietatea acestora de a pierde sau de a absorbi ap fr ca structura lor
cristalin s fie afectat. Exist peste 45 minerale recunoscute ca aparinnd acestui grup.
Acestea pot s fie mprite n grupa silicailor, a zeoliilor sintetici i a mineralelor fosfate.
De cnd zeoliii au fost identificai cu aciune eficient ca i absorbant de aflatoxin mai
multe cercetri au studiat comportamentul acestora in vivo.
Scheideler (1993) a administrat zeolii naturali la pui ce consumau 2,5 ppm aflatoxin
B1. Zeolitul adugat n procent de 1% din raie a tamponat descreterea n greutate i a redus
acumularea lipidelor n ficat. Totodat zeolitul a sczut concentratia de P i Cl din ser.

Clorofilina
Clorofilina, pigmentul solubil n apa al clorofilei, s-a artata eficient n reducerea
concentraiilor de aflatoxin. Mai muli cercettori au demonstrat proprietile chemoprotejante
ale clorofilinei, generate de proprietile antioxidante al acestui derivat clorofilian.

Drojdiile
Dawson i colab. (2001) au utilizat mai multe ecuaii izoterme pentru a evalua absorbia
aflatoxinei B1 de ctre preparatul din perei celulari de drojdii numit Mycosorb (MS). MS a fost
eficient n absorbia micotoxinelor i la concentraii reduse cea ce reflect afinitatea ridicat a
preparatului pentru aflatoxina B1. Afinitatea i puterea de absorbie ridicat fac ca MS s fie
atractiv n controlul micotoxicozelor.
Studii n vitro fcute ulterior au ajutat la descrierea interaciunilor existente ntre
micotoxine i pereii celulari de drojdie. Eluia n serie a alfatoxinelor absorbite de ctre drojdii a
demonstrat clar c absorbia micotoxinelor e un proces reversibil dependent de concentraie ,
aflatoxinele nefiind modificate dup absorbie.
Acest lucru a fost de maxim importan n stabilirea mecanismelor cinetice de absorbie.
Absorbia aflatoxinelor mai este influenat de ph-ul mediului, absorbia maxim aprnd la un
ph de 4. Absorbia mai e influenat i de concentraia de fosfat din soluie, valoarea maxim
nregistrndu- se la 0,5 M. Valorile optime de 90 absorbie n ceea ce privete influena ph-ului i

concentraia fosfailor coincid cu cea din tractul gastro intestinal, sugernd faptul c absorbia n
tractul gastrointestinalar crete capacitatea de absorbie.(20)