UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR A BNATULUI TIMIOARA FCULTATEA DE AGRICULTUR SPECIALIZAREA INGINERIA MEDIULUI NVMNT LA DISTAN

PROF.UNIV.DR. MADO EMILIAN

AMELIORAREA PLANTELOR

2005
1

CAPITOLUL 1

NOIUNI INTRODUCTIVE PRIVIND AMELIORAREA PLANTELOR

Ameliorarea este o tiin aplicativ care are ca obiect mbuntirea caracterelor i nsiirilor la plantele cultivate. Activiatea de ameliorare pe baze tiinifice se realizeaz dup dezvoltatea tiinelor biologice i n special a gneticii. Pe lng activitate de creare a noi soiuri i hibrizi, ameliorarea plantelor se ocup i cu activitatea e nmulire a acestora.

1.1. DEFINIIE I CONINUT

Asigurarea cu hran a reprezentat din toate timpurile pentru om o problem de real dificultate dar totodat de maxim importan de nsi existena i viitorul speciei umane. Spectrul foametei i al malnutriiei rmne i n zilele noastre o realitate extrem de dureroas pentru circa 2/3 din populaia globului i exist tendina ca acesta s se rspndeasc i s creasc pe msur ce populaia globului va spori iar decalajul dintre rile dezvoltate i cele subdezvoltate va continua s se adnceasc. Hrana este nu numai nendestultoare ci este, pentru majoritatea rilor subdezvoltate, n special a celor din: Africa, Asia i America de Sud, deficitar i din punct de vedere caloric i nutriional. Ea, este n mare msur amidonoas neavnd un aport proteic i lipidic balansat. Sporirea produciei agricole, n condiiile n care suprafeele cultivate nu mai pot fi extinse, sau aceast extindere este extrem de costisitoare, se poate realiza doar pe baza intensificr ii produciei plantelor la unitatea de suprafa. Sporirea produciei plantelor agricole este deter minat de civa factori care merit atenia principal. Astfel, sunt factori precum apa, ngrmintele, pesticidele etc care au rolul de a asigura condiii mai bune de mediu n care s creasc planta. Un loc aparte ntre aceti factori l ocup ns soiul
2

(hibridul)cultivat, care reprezint capacitatea ereditar a plantei de a produce ntr-un mediu existent. Cu alte cuvinte, se pot obine producii mai mari fie prin condiii de cretere mai bune sau prin mbuntirea ereditii speciei de cultur. Formularea cea mai simpl a acestei aciuni de mbuntire a acestei aciuni de mbuntire a ereditii speciei de cultur este fcut sub denumirea de ameliorare a unor soiuri (hibrizi) mai performani. Contribuia soiului (hibridului) n complexul msurilor menite s duc la sporirea produciei vegetale este esenial deoarece oricum celelalte msuri (chimizare, irigaii, mecanizare etc.) nu pot fi puse n valoare dect dac exist i se folosesc n cultur forme biologice adecvate. Soiul (hibridul) este rezultatul unei activiti ample, larg cuprinztoare, care face obiectul tiinei denumit amelior area plantelor. La originea termenului ameliorare st cuvntul latin ad melior (mai bine, mbuntire) dar care are astzi o semnificaie mai larg, cuprinztoare. Amelioarare plantelor s-a practicat din cele mai vechi timpuri, cnd omul a nceput s aleag cele mai bune plante. Rezultatele eforturilor omului primitiv n alegerea plantelor a contribuit indiscutabil ntr-o msur important la evoluia tuturor plantelor de cultur. Pe msur ce cunotinele omului despre plante au crescut, el a devenit capabil s efectueze o selecie mult mai potrivit. Astfel selecia a devenit prima metod a amelrii plantelor. Dup descoperirea sexelor la plante, hibridarea se adaug, cu o contribuie esenial la metodologia de ameliorare. n concepia actual, ameliorarea plantelor este tiine care se ocup de crearea soiurilor i hibrizilor, de mbuntirea acestora precum i de meninerea potenialului de producie i a tuturor nsuirilor valoroase a soiurilor i hibrizilor aflai n producie. Cu alte cuvinte munca amelioratorului nu se termin o dat cu crearea noului soi ci continu n procesul producerii de smn prin care se asigur nu numai simpla nmulire a seminelor ci i pstrarea valorii biologice superioare a acesteia. De aceea, denumirea mai exact i complet a acestei tiine este ameliorarea i producerea de smn.

1.2. PRILE AMELIORRII PLANTELOR

Adecvat acestei concepii, de ameliorarea plantelor cuprinde urmtoarele pri: ameliorarea general, ameliorarea special i producerea de smn. Ameliorarea general cuprinde noiunile referitoare la: tehnica general a procesului de ameliorare: colectarea, crearea i studiul materialului iniial; metodele de ameliorare i baza lor genetic; metodele de testare a materialului pe parcursul procesului de ameliorare. Ameliorarea special prezint problematica ameliorrii fiecrei specii de cultur, lundu-se n considerareparticularitile biologice ale plantei i scopul pentru care se cultiv. Producerea de smn cuprinde prezentarea metodologiei de nmulire a seminelor aparinnd soiurilor create prin procesul de ameliorare, cu meninerea tuturor nsuirilor i catracterelor de soi.

1.3. IMPORTANA AMELIORRII PLANTELOR

Ameliorarea plantelor, noiune ce implic un efort uman ndreptat spre mbuntirea vechilor soiuri i crearea de noi soiuri la plantele de cultur este o munc creativ cu rol esenial n rezolvarea problemei globale a asigurrii hranei. Acest fapt poate fi evideniat prin numeroase exemple. Astfel, la gru, dup cel de- al doilea rzboi mondial prin crearea i introducerea n producie a unor soiuri intensive rezistente la cdere i capabile s foloseasc mai eficient ngrmintele, producia de boabe a nregistrat un salt foarte mare ajungnd la 3-4t/ha. n prezent soiurile de gru cultivate realizeaz producii medii de 6-8 t/ha i producii record de peste10 t/ha. La porumb, dac hibrizii cultivai n prima jumtate a secolului al XX lea, produciile record erau de circa 5,0 t/ha, n prezent ele se cifreaz la peste 20,0 t/ha. Realizri i mai remar cabile s-au obinut i la pomii fructiferi i via de vie, la plantele legumicole i ornamentale Desigur, sporurile mari de producie nu s-au datorat exclusiv numai introducerii noilor soiuri. ns, trebuie subliniat c introducerea acestor noi forme biologice au impus aplicarea unor cantiti sporite de ngrminte, a irigaiilor, a unor tehnologii moderne fr de care ele nu puteau s-i realizeze potenialul lor de producie. Prin activitatea de ameliorar e au fost mbuntite i alte nsuiri i caractere importante ale plantelor de cultur. Astfel, crearea de soiuri cu o calitate deosebit, rezistente la condiii nefavorabile (ger, secet), precoce i care posed o bun plasticitate ecologic, a permis extinderea culturii unor specii n zone noi mai puin favorabile. De asemenea., s-au creat soiuri care pe lng o capacitate mare de producie posed i rezisten la boli i duntori i astfel se asigur constana i stabilitatea produciei de la un an la altul i se elimin necesitatea aplicrii tratamentelor cu pesticide. Ca rezultat, scade preul de cost al produciei i se elimin poluarea produselor agricole i a mediului nconjurtor.

1.4. LEGTURA AMELIORRII CU ALTE DISCIPLINE

Ameliorarea plantelor este o tiin aplicativ i ca atare este obligat s utilizeze informaii i cunotiine aparinnd altor tiine, n special biologice. tiina de care ameliorarea plantelor este indisolubil legat, dat fiind faptul c ea reprezint baza sa teoretic, este genetica. Genetica, prin informaiile pe care le ofer, cu privire la condiionarea genetic i modul de transmitere ereditar a diferitelor caractere i nsuiri, la interaciunea acestora cu mediu precum i prin fundamentarea tuturor metodelor de ameliorare, asigur desfurarea ntregii activiti de ameliorare pe baze certe,tiinifice. Lucrnd cu plantele, amelioratorul trebuie s fie un desvrit botanist,. El trebiue posede cunotiine de taxonomie, morfologie i mod de reproducere, furnizate de botanic. Ameliorarea plantelor utilizeaz de asemenea cunotiinele i informaiile furnizate de fiziologia plantelor, tiin care d relaii cu privire la nutriia i dezvoltarea plantelor la aciunea factorilor de mediu n care triesc. Amelioratorul depune eforturi pentru modificarea genetic a unor procese fiziologice, astfel nct planta s funcioneze mult mai eficient. La realizarea unor soiuri rezistente la boli i duntori, care s asigure constana i stabilitatea produciei, ameliorarea plantelor se folosete de informaiile i cunotinele cu privire la bolile i duntorii plantelor, puse la dispoziie de ctre fitopatologie i entomologie. Rezistena gazdei este
4

indiscutabil o important msur de combatere a multor boli la plante. De asemenea controlul biologic al populaiilor de insecte, prin ameliorarea pentru rezisten este un important mod de a reduce pagubele provocate de acestea la culturile agricole. Ameliorarea plantelor este legat de biochimia vegetal, de la care folosete cunotiine i tehnici de testare pentru mbuntirea calitii produselor rezultate de la plantele de cultur. Pentru evaluarea comparativ a performanelor diferitelor linii, soiuri (hibrizi) etc., urmrite n programele de ameliorare sunt necesare cunotine de statistic matematic. Obinerea unor rezultate sigure i interpretarea corect se bazeaz pe folosirea tehnicii de experimentare n cmp, ct i a unor metode statistice de calcul adecvate. Aplicarea procedeelor statistice asigur o mai bun nelegere a ereditii caracter elor cantitative i pentru prognosticarea ctigului genetic posibil care poate fi obinut la un sistem particular de reproducere. Indiscutabil, ameliorarea plantelor este strns legat de agrotehnic i fitotehnie. Amelioratorul trebuie s tie i s anticipeze cerinele agriculturii n aa fel nct s fie capabil s evalueaz materialul de ameliorare disponibil i s planifice programul de ameliorare n lumina necesitilor de perspectiv ale produciei.

1.5. ETAPELE DEZVOLTRII AMELIORRII PANTELOR

Perioada ameliorrii empirice nceputurile ameliorrii plantelor se leag n mod intim de domesticirea plantelor slbatice i de nceputurile agriculturii, perioad plasat cu cca. 10.000 n urm.n activitatea de cultivare a plantelor, omul a executat incontient nc de la nceput i s aciune de mbuntire a plantelor. Astfel, cu timpul, acumulnd experien i tradiie n cultivarea plantelor el i-a dat seama c poate obine recolte mai mari dac folosete pentru semnat smn de la plantele cele mai bine dezvoltate i seminele cele mai mari i mai bune. Reinerea pentru nmulire a celui mai bun material ct i cultivarea plantelor n condiii controlate reprezint acte de selecie pe care omul primitiv le-a aplicat probabil din cele mai vechi timpuri i se poate astfel afirma c ameliorarea plantelor reprezint una din cele mai vechi ndeletniciri ale omului. Procesele de selecie i de mbuntire a condiiilor de cretere a plantelor care au condus spre de spre dezvoltarea plantelor de cultur a fost lent i se estimeaz c acestea au fost capabile s asigure cca. 50% din necesarul de hran al omenirii abia n secolul al II-lea .C. Aceste specii de cultur i populaiile locale aprute se deosebesc radical de strmoii lor slbatici i n multe cazuri nu mai pot exista fr intervenia omului. S-au elaborat i ipoteze care consider c selecia empiric a fost efectuat de om chiar nainte de luarea n cultur a plantelor. Se presupune c omul a folosit doar speciile care corespundeau ntr-o msur mai mare cerinelor sale i c a ales fructele i seminele cele mai mari pe care le-a rspndit n jurul locuinelor sale n toate zonele n care s-a deplasat. Aceast aciune de selecie involuntar dei pare neimportant, innd ns cont c s-a executat timp de milenii a avut probabil o nsemnat contribuie la apariia i evoluia plantelor cultivate.

Perioada ameliorrii tiinifice Evoluia ameliorrii ca tiin s-a datorat contribuiei aduse de numeroi oameni de tiin i cercettori, ea desfurndu-se la nceput relativ lent i accelerndu-se n special dup mijlocul secolului al-XX-lea. Un veritabil impuls pentru dezvoltarea acestei tiine l-au constituit lucrrile lui Darwin, care prin lucrrile sale a fundamentat selecia artificial, dar mai ales cercetrile lui Mendel (1865), care descoperind legile ereditii a pus bazele apariiei geneticii ca tiin independent. Treptat, s-au acumulat date experimentale care au permis mbuntirea metodologiei de ameliorare a plantelor, progresele fiind mult vreme relativ lente. i n ara noastr, ca de altfel pe plan mondial, amelior area empiric ncepe odat cu formarea primelor comuniti stabile i luarea n cultur a plantelor. Prin activitatea de selecie empiric efectuat de cultivator n special dup secolul al XIV-lea au fost obinute numeroase soiuri i populaii locale, unele foarte valoroase pentru acele timpuri, ajunse pn astzi i care reprezint o zestre genetic de valoare inestimabil. Dintre acestea menionm. grul blan romnesc, grul de Banat, grul rou romnesc, orzul de Banat; populaii de porumb: Hngnesc, Ardelenesc, Scorumnic; cele de floarea soarelui: Mslinica, Uleioasa; fasolea Ouoar de Moldova, Ceal de Dobrogea, de Transilvania, de Banat, Ialomiean; cnep de Moldova, de Trnave; lucern de Banat; trifoiul de Transilvania etc. Dintre soiurile locale la pomii fructiferi i la via de vie cu mare rspndire n acea perioad amintim: la cire: Boabe, Cotnari; la mr. Creeti, Ptule, Domneti; la prun : Bobie, la via de vie: Feteasc alb, Feteasc neagr, Tmioas, Gras. Saltul calitativ n organizarea, conducerea i desfurarea lucrrilor de ameliorare tiinific a plantelor n ara noastr are loc ns abia dup 1927, cnd a luat fiin Institutul de Cercetri Agronomice al Romniei (ICAR). n cadrul institutului , activitatea de ameliorare a fost coordonat de secia de ameliorarea plantelor i s-a desfurat la nceput la nceput la staiunile experimentale de la Cluj, Iai, Cenad i Mrculeti, iar mai trziu i la staiunile experimentale de la Cmpia Turzii, Valea lui Traian, Studina i Trgul Frumos. La plantele horticole, activitatea de ameliorare propriu-zis organizat i cu aciuni concrete se menioneaz abia dup 1948 cnd se organizeaz primele laboratoare de biologie i ameliorare a acestora. Dintre numeroasele soiuri create de ICAR n cei 30 de ani de existen, amintim soiurile de gru: A15, Cenad 512, Trgul Frumos 16, Arnut de Studina; soiurile de orz: Cluj 123 i Trgul Frumos 240; soiurile de porumb: Dinte de cal ICAR, Galben timpuriu; soiurile de in de ulei: Deta, ICAR 44, ICA 32; soiurile de cnep: Carmagnolla Cluj, ICA42/118; soiurile de cartof: Ardeal, Napoca, Somean, Bucur, Colina; soiurile de sfecl de zahr: Lovrin 532, CT 34. Sarcina coordonrii cercetrilor agricole din Romnia dup dispariia ICAR-ului revine, n perioada 19621969, Institutului Central de Cercetri Agricole (ICCA) iar din 1969, Academia de tiine Agricole i Silvice (A.S.A.S.). Dup nfiinarea A.S.A.S. apar structuri de cercetare noi (institute, staiuni i laboratoare) pentru foarte diversele preocupri ale cercetrii agricole la plante i animale.
6

Astfel, apar noi institute de cercetare precum: Institutul de cercetri pentru legumicultur i floricultur de la Vidra, Institutul de cercetri pentru vi i vinificaie de la Valea Clugreasc, Institutul de cercetri pentru pomicultur de la Mrcineni, Institutul de puni i pajiti Braov, Institutul pentru cultura sfeclei de zahr Fundulea, Institutul pentru cultura cartofului Braov, etc. n paralel crete semnificativ numrul staiunilor de cercetare care disperseaz indiscutabil resursele financiar e i umane

NTREBRI: 1.Care este domeniul de activitate al ameliorrii plantelor ? 2.Care sunt prile ameliorrii plantelor ? 3.Care sunt disciplinele cu care ameliorarea plantelor are legturi ? 4.Care sunt etapele de dezvoltare ale ameliorrii plantelor ? 5.Cum este organizat activitatea de ameliorare a plantelor la nivel naional ?

CAPITOLUL 2.

MATERIALUL INIIAL FOLOSIT N PROCESUL DE AMELIORARE

Mterialul biologic de la care pornete procesul de ameliorare constituie materialul iniial de ameliorare. Principalele zone unde se pot gsi forme cu gene valoroase pentru procesul de ameliorare sunt denumite centre genice sau centre de diversificare. Materialul iniial este constituit din forme existente (cultivate sau spontane) sau din forme create prin diferite metode de ameliorare.

2.1. CENTRELE GENICE SAU DE DIVERSIFICARE A PLANTELOR

Se consider c n vremuri foarte ndeprtate, acolo unde s-au format primele centre de civilizaie (obinuit n bazinele fluviilor), populaia a nceput s foloseasc speciile spontane existente. Deoarece aceste centre de civilizaie erau izolate prin diferite bariere naturale i ntru-ct nu exista schimb de mrfur i, diversificarea plantelor luate n cultur a avut loc doar n limitele zonei respective. Aceste zone au fost numite de Vavilov centre de origine (genice) pentru a indica staiunile primare ale diversificrii plantelor de cultur. Mai trziu, ca rezultat al iniierii i dezvoltrii schimbului de mrfuri ntre diferitele centre de civilizaie, plantele de cultur au fost introduse i n alte zone, ceea ce a determinat alte diversificri genetice. Au aprut deci i alte centre de diversificare (secundare, teriare etc.) care prezint importan prin multitudinea de forme ce le conin. Desigur c n prezent, cnd harta resurselor vegetale agricole este mult diferit fa de perioadele anterioare, este greu de afirmat dac actualele centre genice (diversificare) coincid cu centrele de origine ale speciilor cultivate.
7

Privitor la originea plantelor de cultur sunt i alte preri. Astfel, Harlan (1970) consider c de fapt originea plantelor de cultur a fost difuz n timp i spaiu i c problemele asociate cu centrele de origine ale plantelor nu vor fi niciodat complet elucidate. Aceste zone precum i altele nc necercetate rmn n continuare locuri deosebit de importante pentru explorrii viitoare, ntruct cercetarea din punct de vedere botanic a globului este nc incomplet, estimndu-se c pn n prezent sunt cunoscute numai 60-70% din totalul plantelor superioare existente pe Pmnt. Lund n considerare originea i vechimea lor n cultur, Vavilov introduce noiunile de plant primar sau secundar. Plantele primare sunt acele specii cultivate care au fost luate n cultur n mod direct, din cele mai vechi timpuri, fr a trece printr-o etap intermediar ca buruieni. n aceast categorie se includ: grul, orzul, orezul, meiul, porumbul etc. Plantele secundare sunt acele specii cultivate, care iniial au fost apoi luate n cultur, fie ntmpltor, fie datorit unor nsuiri deosebite care au impus cultivarea lor. Dintre speciile care n mod ntmpltor au fost luate n cultur se menioneaz speciile antropochore ce creteau n stare slbatic n preajma aezrilor omeneti, unde gseau condiii prielnice ca de pild: cnepa, morcovul, sfecla, varza, macul, diferite plante medicinale etc. Exist unele specii mai recent luate n cultur, care nu pot fi ncadrate n niciuna din cele dou grupe, deoarece nu ndeplinesc nici condiia de vechime, nici cea de fost buruian n cultur. Revizuirea n timp a multora dintre cunotinele privitoare la genurile care cuprind speciile cultivate a fcut necesar ns modificarea numrului, delimitrii geografice i a structurii centrelor genice stabilite de ctre Vavilov. Jukovski completeaz teoria lui Vavilov privitoare la centrele genice i introduce noiunea fitogeografic de microcentre. Astfel, el stabilete c n fapt sunt 12 centr genice (megacentre) i 103 microcentre pe care le-a localizat i descris. Cele 12 centre genice (megacentr e) sunt urmtoarele: I. Centrul chino- japonez, este foarte bogat n specii cultivate i sbatice i anume: specii de plante agricole (soia, orezul, meiul, ovzul, orzul, grul, sorgul, fasolea); specii de legume (ridichea, salata, vinetele, castraveii) i numeroase specii de pomi fructiferi (mr, p, piersic). II. Centrul indoneziano- indochinez, reprezentativ pentru unele plante tropicale, precum citrice, nuca de cocos etc. III. Centrul australian, care se consider a fi unul din centrele de origine a speciilor din genul Gossipium, Eucalyptus etc. IV. Centrul indian, cu rol important n dezvoltarea resurselor vegetale mondiale. Se ntlnesc specii de: orez, bumbac, trestie de zahr, citrice, iut, fasole etc. V. Centrul din Asia Central cuprinde o mare diversitate de specii cultivate, precum i multe specii endemice utile omului. Este, mpreun cu centrul urmtor (Orientul Apropiat) centrul primar al grului cultivat, precum i a multor legume (ceap, spanac, morcov etc.). VI. Centrul din Orientul Apropiat este de asemenea centrul primar al grului, al secarei, pepenelui cultivat i a mai multor pomi fructiferi (pr, gutui etc.).

VII. Centrul mediteranean, foarte bogat n forme aparinnd gramineelor, leguminoaselor, inului de ulei i plantelor de nutre. De asemenea se ntlnesc specii leguminoase ca morcov, varz, ptrunjel, sparanghel. VIII. Centrul african cuprinde forme de sorg, orez, ricin, cafea etc. IX. Centrul europeano-siberian, cu rol important n evoluia plantelor cultivate. Este centrul primar al sfeclei de zahr, al speciilor de varz de grdin i al unor specii de plante furajere (trifoi, lucern). X. Centrul sud-american este patria cartofului i ntr-o msur a porumbului i fasolei. Este centrul primar pentru tomate, alune de pmnt, lupin etc. XI. Centrul din America de Central, este reprezentativ pentru unele plante cultivate i anume: porumb, fasole, cartof, ardei i bumbac. XII. Centrul nord-american este patria florii-soarelui, viei de vie, porumbului, tutunului. Caracteristicile centrelor genice Centrele genice se gsesc situate n general n zone cu climat i condiii mai puin propice agriculturii (podiuri, zone muntoase etc.) i separate ntre ele prin bariere naturale (muni, ape, deerturi). Suprafaa total a acestor centre este relativ restrns, reprezentnd doar 2,5% din suprafaa uscat a globului. S-a remarcat o legtur ntre diversificarea genetic i distribuia geografic. Astfel, s-a constatat o cretere progresiv a dimensiunilor fructelor, seminelor i a altor pri ale plantei pornind de la munii Himalaia spre zonele mediteraneene. De asemenea s-a constatat c toate culturile de cmp se caracter izeaz printr-o durat de vegetaie mai scurt n zonele deertice, precum i n majoritatea zonelor muntoase. Centrele genice sunt considerate de asemenea zone n care se ntlnesc numeroase forme cu rezisten natural la atacul bolilor i duntorilor. Astfel, majoritatea speciilor de vi de vie provenite din America de Nord sunt foarte rezistente la filoxera i la man; centrul chinez este un important bazin de gene pentru imunitate la rapnul pomilor fructiferi, n centrul african i anume n Etiopia se ntlnesc forme de orz rezistente la virusul care produce nglbenirea i putrezirea plantelor, iar n Africa de Nord forme de gru rezistente la musca de Hessa etc. Cu privire la condiiile pedoclimatice variate existente n aceste zone trebuie specificat c ele sunt diferite la distane foarte mici (uneori doar civa metri) i astfel o mutaie aprut chiar dac nu gsete condiii de supravieuire n locul de apariie le poate ntlni n imediata vecintate i poate astfel s se menin, adaptndu-se acestui biotop. Deci ansele de supravieuire ale unui nou tip sunt mult mai mari dect la es, unde condiiile sunt uniforme pe mari suprafee. Faptul c diversitatea existent n centrele genice s-a meninut att de mult timp poate fi explicat prin aceea c acestea sunt n general amplasate n zone mai ndeprtate de circulaia mondial i cu o agricultur nc primitiv.

2.2. MATERIALUL INIIAL FOLOSIT N AMELIORAREA PLANTELOR

Printre bogiile unei ri, dup cum remarc KELLUER i GIURA (1979), trebuie menionat i complexul de material ereditar al speciilor,
9

subspeciilor, resurselor geografice i populaiilor de plante existente, reprezentat printr-o mare bogie de forme, deci printr-o mare variabilitate genetic i care este cunoscut sub denumirea de resurse genetice vegetale, germoplasm sau simplu material iniial pentru ameliorare. Noiunea de resurse genetice sau material iniial pentru ameliorare definete totalitatea formelor spontane sau cultivate (existente sau create de ameliorator) care sunt folosite pentru crearea de noi cultivare la o anumit plant de cultur. Numeroasele forme aparinnd speciilor de cultur sunt datorate ndelungatei evoluii naturale a lumii vegetale ct i activitii omeneti manifestat n timp, prin domesticirea formelor slbatice i transformarea plantelor primitive n plante cultivate, extinderea arealelor de cultur ale plantelor cultivate prin aclimatizarea lor n multe alte zone ale globului i n mod deosebit prin activitatea la nceput empiric apoi contient de ameliorare a plantelor. Realizarea i meninerea unei germoplasme disponibile reprezint una din condiiile eseniale ale desfurrii activitilor de amelior area plantelor, asigurndu-se astfel variabilitatea genetic util pentru lucrrile prezente i viitoare de creare a noi soiuri (hibrizi) la plantele de cultur. Principalele resurse ale variabilitii genetice care trebuiesc pstrate sunt. - soiurile vechi i actuale de cultur; - materialele de ameliorare (linii, hibrizi etc.) care dei n-au fost omologate sunt cunoscute ca posesoare a unor gene valoroase i se utilizeaz n programele de ameliorare; - materialele care evideniaz genele specifice (coninut ridicat de protein, rezistente la boli etc.); - soiuri primitive sau locale, n special acelea a cror variabilitate genetic nu a fost introdus n soiurile cultivate; - stocuri genetice speciale; Soiurile (hibrizii) ameliorate sunt forme create sau nrudite printr- un proces de ameliorare tiinific. Ele sunt rezultatul unor selecii intensive prin care se urmrete atingerea unui anumit nivel de homozigoie genetic, i deci omogenitate i stabilitate ereditar. Aceste soiuri (hibrizi) reprezint cea mai valoroas surs de germoplasm pentru numeroase nsuiri (producie, calitate, rezisten etc.). Soiurile primitive (soiuri locale, populaii locale) sunt acele forme care au aprut ntr-o foarte lung perioad de timp, n diferite zone geografice sau ecologice ca rezultat al seleciei naturale i al seleciei empirice efectuate de cultivatori. Ele posed n primul rnd o bun adaptare la condiiile de mediu n care s-au format, fiind rezistente la factori nefavorabili (ger, secet, boli etc.). Totodat, dup cum s-a menionat deja, soiurile primitive prezint un polimorfism accentuat (fiind de fapt un amestec de numeroase biotipuri) care le confer o foarte mare plasticitate ecologic. n ameliorare, soiurile locale se folosesc ca material de selecie n vederea identificrii i izolrii unor genotipuri valoroase i rar ca genitori pentru hibridare. La plantele alogam ale sunt folosite i ca material iniial pentru obinerea liniilor consangvinizate. Materialul iniial din flora spontan cuprinde genuri, specii, subspecii, forme spontane nrudite cu specia de cultur la care se efectueaz ameliorarea.

10

Formele spontane reprezint o important surs de germoplasm pentru procesul de ameliorare datorit numeroaselor nsuiri de rezisten la factorii nefavorabili de mediu, la boli i duntori, a capacitii de adaptare i a plasticitii ecologice, caracteristici rezultate n urma ndelungatei aciuni a seleciei naturale. Stocuri genetice speciale. Materialul iniial de ameliorare pentru fiecare specie de cultur trebuie s conin i diferite surse de utilizare special n programele de ameliorare. Astfel, sunt necesare forme care posed anumite nsuiri genetice, citogenetice i citoplasmatice care pot fi transmise altor forme ca: surse de gene de rezisten, la anumite boli i duntori; surse de androsterilitate; surse de gene restauratoare de fertilitate a polenului; surse de aneuploidie i surse de gene specifice (porumb, sfecl, cnep etc.); surse ce pot servi ca martori citologici (floarea-soarelui, orz) etc.

NTREBRI: 1.Ce se nelege prin centru de diversificare ? 2.Care sunt principalele caracteristici ale centrelor de diversificare ? 3.Ce se nelege prin plante primare i plante secundare de cultur ? 4.Ce se nelege prin material iniial de ameliorare ? 5.Care sunt principalele tipuri de material iniial ?
CAPITOLUL 3

OBIECTIVE I METODE DE AMELIORARE

n procesul de ameliorare se urmrete atingerea unor obiective care pot fi generale (ntlnite la toate speciile) sau speciale (care apar la grupe de specii). Cele mai importante obiective ale ameliorrii este de a mbunti capacitatea de producie, calitatea acesteia i nsuirile de rezisten. Metodele prin care aceste obiective pot realizate sunt mewtode care prelucreaz variabilitatea, care o creaz i metode speciale. Alegerea metodei se face n fucnie de modul de reproducere a plantelor care are influen asupra variabilitii i stabilitii populaiilor cu care se lucreaz. Formele create prin procesul de ameliorare trebuie s posede un complex de caractere i nsuiri valoroase care constutuie obiectivele de ameliorare. Acestea sunt condiionate de trei factori principali: condiiile de clim i sol ale zonei unde vor fi cultivare, nivelul de dezvoltare a tehnologiei de cultur i cerinele pieei fa de producia agricol.

3.1. OBIECTIVE DE AMELIORARE

Obiectivele de ameliorare se pot mpri n dou categorii. Obiective generale, care se ntlnesc n ameliorarea tuturor speciilor i obiective speciale, care apar numai la anumite specii. Obiectivele generale sunt urmtoarele: - Sporirea capacitii de producie este scopul principal al oricrui proces de ameliorare. Aceasta se poate realiza prin crearea de modificri la nivelul unor caractere morfologice (numr de plante fertile la unitatea de suprafa, numrul i mrimea fructelor pe plant) sau a unor nsuiri fiziologice (randamentul fotosintezei, reducerea respiraiei, etc.) mbuntirea
11

acestui caracter trebuie s duc la atingerea unor niveluri deosebite ale produciei ca de exemplu: 10.000 kg/ha la gru, 18.000 kg/ha la porumb, 5.000 ka/ha la floarea soarelui5.000 kg/ha la soia, etc. - mbuntirea calitii este un obiectiv la fel de important. Acesta depinde de specie i vizeaz coninutul n anumite substane a recoltei. Astfel, se urmrete cretere coninutului n proteine, grsimi, zaharuri sau alte substane. De exemplu coninutul n protein trebuie s tind spre 18% la gru, 14 % la porumb, 45% la soia; coninutul n ulei s fie de 55% la floarea soarelui, 45% la in 25% la soia; coninutul de fibr n tulpini s fie de 25% la in, 27% la cnep. - mbuntirea rezistenei la boli i duntori este un alt obiectiv general. Prin crearea de forme rezistente se elimin tratamentele chimice de combatere aceasta contribuind la reducerea preului de cost al produsului i la prevenirea polurii n agricultur. Astfel de forme pot fi create prin preluarea de gene de la formele slbatice, care sunt foarte rezistente. - Obinerea de forme precoce. Aceste forme prezint unele avantaje: evit atacurile puternice de boli i duntori fiind mai avansate n vegetaie n faza de atac maxim, evit perioadele secetoase din var i pot permite nfiinar ea unor culturi succesive. - mbuntirea aptitudinilor pentru mecanizarea culturii este un obiectiv prin care se creeaz forme rezistente la cdere i scuturare pentru ca recoltatul s se fac fr pierderi, dar i cu o conformaie care s permit accesul mai uor al utilajelor la efectuarea lucrrilor de ntreinere (talia mai mic, rdcini adnci, frunze dispuse mai grupat, etc.) Obiectivele speciale sunt ntlnite numai n ameliorarea unor specii. Acestea sunt: - Crearea de forme rezistente la temperaturi sczute este un obiectiv care este necesar la plantele ce se seamn toamna, sau n cazul celor de primvar, numai pentru zonele cu climat foarte rcoros din zonele de deal. - Crearea de forme rezistente la secet i ari este necesar numai pentru zonele din sudul rii unde regimul precipitaiilor este deficitar. - Crearea de forme pentru cultura irigat care trebuie s aib o mare capacitate de utilizare a apei i a fertilizanilor, dar i o rezisten superioar al atacul bolilor. - Crearea de forme destinate cultivrii pe soluri speciale (soluri acide, srturi, soluri calcaroase, etc.) - Crearea unor forme cu nsuiri speciale: forme monoice (unisexuate) la cnep, forme androsterile (care nu produc polen fertil) la porumb, forme monogerme (cu o singur smn n fruct) la sfecl, acestea prezentnd avantaje tehnologice deosebite

3.2. METODE DE AMELIORARE.

Orice metod care contribuie direct sau indirect la atingerea obiectivelor de ameliorare constituie o metod de ameliorare. Aceste metode se pot mpri n trei categorii: - metode care permit identificarea i izolarea genotipurilor valoroase, aici fiind incluse diferitele tipuri de selecie; - metode care sporesc variabilitatea genetic, care permite obinerea unui material nou, aici fiind cuprinse: hibridarea, mutageneza, poliploidia, consangvinizarea i metode ale biotehnologiilor;
12

- metode care utilizeaz avantajele unor fenomene genetice: heterozisul, androsterilitatea.

3.3. ALEGEREA METODOLOGIEI DE AMELIORARE N FUNCIE DE MODUL DE REPRODUCERE

Modul de reproducere al plantelor are influena hotrtoare asupra alegerii metodei de ameliorare. Aceasta deoarece, reproducerea influeneaz direct structura genetic a plantelor, respectiv, variabilitatea i stabilitatea populaiilor supuse ameliorrii. La plante, reproducerea poate fi sexuat sau asexuat. Reproducerea sexaut se realizeaz prin fecundarea gameilor femeli cu gameii masculi, n final rezultnd zigotul din care se va dezvolta smna. Dup proveniena polenului (gametul mascul) care particip la fecundarea ovarului (gametul femel), plantele pot fi de dou tipuri: autogame i alogame. Plantele autogame sunt specii la care polenizar ea de face cu polen propriu, fenomenul fiind numit autopolenizare. n decursul evoluiei aceste specii i-au realizate anumite adaptri pentru a mpiedica polenizarea cu polen strin. Acestea sunt: - cleistogamia polenizarea nainte de deschiderea florii (orez) - chasmogamia polenizarea n timpul deschiderii florii.(gru, orz, fasole,soia, in, etc.) Aceste specii se caracterizeaz prin starea de homozigoie a indivizilor, stare care confer uniformitate populaiilor i stabilitate de la o generaie la alta. La aceste specii, ameliorarea trebuie s utilizeze metodele prin care se produce variabilitate genetic (hibridare, mutagenez, poliploidie), apoi s fie alese formele valoroase prin selecie. Plantele alogame sunt plante la care polenizarea se face cu polen strin, de la alte plante. i aceste specii prezint o serie de adaptri la mpiedicarea polenizrii cu polen propriu: - separarea sexelor n inflorescene diferite pe aceiai plant (monoicitate flori femele i flori mascule, cum este cazul porumbului) sau pe indivizi diferii (plante femele i plante mascule la cnep) - maturizarea la date diferite a organelor femele i a celor mascule: protandria cnd polenul se maturizeaz ai devreme sau protogenia, cnd stigmatul florii se maturizeaz mai devreme; - heterostilia cnd stigamtul este mult mai lung dect staminele i polenul nu poate ajunge pe stigmatul florii proprii; - autoincompatibilitatea care este un fenomen genetic prin care polenul nu poate fecunda ovarul florii proprii. Aceste specii au o stare heterozigot care creeaz o variabilitate foarte mare a populaiilor i o slab stabilitate de la o generaie la alta. Ameliorarea trebuie s reduc din aceast variabilitate i s valorifice numai genele valoroase. Metoda specific acestor specii este consangvinizare, dar pot fi folosite i celelalte metode. Reproducerea asexuat a plante se realizeaz pe cale vegetativ, prin intermediul diferitelor organe: bulbi (ceap), tuberculi (cartof), lstari sau altoi (pomi fructiferi i via de vie), drajoni (cpun), etc. Acest tip de nmulire asigur o stabilitate foarte mare a populaiilor de la o generaie la alta i o uniformitate perfect. Ameliorarea trebuie f aplice metode de provocare a variabilitii urmate de alegerea formelor valoroase.
13

NTREBRI: 1.Care sunt obiectivele principale de ameliorare ? 2.Care sunt obiectivele secundare de ameliorare ? 3.Care sunt principalele tipuri de metode de ameliorare ? 4.Care sunt adaptrile plantelor autogame pentru a mpiedica polenizarea cu polen strin ? 5.Care sunt adaptrile plantelor alogame pentru a mpiedica polenizarea cu polen propriu ? 6.Cum influeneaz tipul de polenizare structura genetic a unei populaii ?

CAPITOLUL 4

SELECIA CA METOD DE AMELIORARE

Alegerea formelor care corespund obiectivelor de ameliorare se realizeaz prin selecie. Selecia poate avea ca scop modificarea mediei unie populaii, unoformizarea populaieim sau mprirea ei n subpopulaii. Selecia se relozeaz prin alegerea de elite i urmrirea descendenelor acestora. Descendenele se pot urmri impreun sau separat.

4.1. DEFINIIE I IMPORTAN

Selecia este cea mai veche i cea mia folosit metod de ameliorare. Spre deosebire de selecia natural care asigur supravieuirea celui mai apt, selecia artificial este un proces prin care sunt favorizai indivizii care prezint caractere i nsuiri conform obiectivelor de ameliorare. n unele situaii aciunea seleciei naturale este benefic ameliorrii (n cazul rezistenei la factorii de mediu nefavorabili, rezistena la boli i duntori). n alte situaii, cele dou tipuri de selecie au aciune contradictorie ( capacitate de producie, rezisten la cdere i scuturare, calitate) Selecia poate fi definit drept metoda de ameliorare cu ajutorul creia se izoleaz genotipurile valoroase dintr-o populaie, prin inter mediul alegerii celor mai buni indivizi (elite) i a celor mai bune descendene ale acestora. Fiind drept ce are drept scop fixarea genotipurilor valoroase, izolate dintr-un material iniial, precum i meninerea acestora ct mai multe generaii prin nmulirea lor n producie, selecia reprezint o metod de baz obligatorie n programele de ameliorare dar i n producerea de smn.

4.2.TIPURI DE SELECIE
Selecia dup scop.
14

Selecia direcional este selecia prin care media unie populaii se modific spre una din valorile extreme, putnd scdea sau crete. Aceasta se obine prin eliminarea indivizilor de la una din extremele, fie a celor cu valori mici, cnd se dorete cretere mediei, fie a celor cu valori mari, cnd se dorete micorarea mediei. Acest tip de selecie se aplic frecvent n ameliorare. Selecia stabilizatoare (conservativ) este selecia prin care se elimin valorile extreme, att a celor minime ct i a celor maxime, n final media rmnnd neschimbat, dar populaia va fi mai uniform. Acest tip de selecie se aplic n producerea de smn. Selecia disruptiv (diversificatoare) este selecia prin care se elimin valorile din jurul mediei, n final rezultnd dintr-o populaie, dou populaii deosebite ntre ele. Acest tip de selecie poate fi aplicat n ameliorare. Selecia dup modul de urmrire a descendenelor. Dup modul de studiere a descendenelor plantelor elit, selecia poate fi n mas i individual, care sun variante ale seleciei direcionale cu larg aplicabilitate n ameliorare. Selecia n mas. Principiul metode const n selecionarea dintr-o populaie a mai multor elite i nmulirea n amestec a acestora. Este deci, o selecie fenotipic deoarece descendenele elitelor nu se verific separat. Se pleac de la ideea c plantele valoroase alese dup fenotip vor fi i genotipic valoroase. Rezultatele seleciei n mas depind de mrimea populaiei i de numrul elitelor extrase. Selecia n mas pate fi pozitiv i negativ. Selecia pozitiv const n alegerea dintr-o populaie a indivizilor valoroi, iar selecia negativ reine din populaia prelucrat indivizii nevaloroi. Primul tip de selecie este specific procesului de ameliorare, iar cel de-al doilea producerii de smn. Selecia pozitiv const n alegerea unui numr de elite i nmulirea lor n amestec. Acest tip este caracteristic ameliorrii i prezint mai multe variante. Selecia n mas simpl (cu o singur alegere) const n alegerea unor elite asemntoare fenotipic din cadrul unei populaii i se formeaz o populaie nou care se va semna n parcele pentru a fi comparat cu o form martor. Este specific plantelor autogame. Selecia n mas repetat const n repetarea alegerii de elite timp de mai muli ani pn cnd noua populaie nu mai evideniaz deosebiri semnificative fa de populaia din anul precedent (din care s-au extras elitele). Este specific plantelor alogame. Selecia n mas pe grupe se aplic dac materialul iniial este foarte heterogen i concomitent se pot forma mai multe grupe de elite deosebite. Selecia n mas negativ const n eliminar ea plantelor cu nsuiri nedorite, nainte de recoltare. Se practic n producerea de smn i poart denumirea de purificat biologic. Cmpul de alegere

15

Cmpul de control CCO Culturi comparative de orientare CCC Culturi comparative de concurs Testare la ISTIS Figura 7.1. Schema seleciei n mas cu o singur alegere Cmpul de alegere

Cmpul de alegere

CC Cmpul de control CCO Culturi comparative de orientare CCC Culturi comparative de concurs Testare la ISTIS Figura 7.2. Schema seleciei n mas repetat Cmpul de alegere

16

Cmpul de control CC Culturi comparative de orientare CCO Culturi comparative de concurs CCC Testare la ISTIS Figura 7.3. Schema seleciei n mas pe grupe Selecia individual. Selecia individual const n alegerea de elite i urmrir ea separat a descendenelor acestora, n scopul unei estimri precise a valorii genotipului. Prin aceasta se obine o eficien sporit compar ativ cu selecia n mas. Selecia individual prezint dou variante. Selecia individual cu o singur alegere const n reinerea de elite i semnatul lor individual n vederea obinerii descendenelor. Descendenele se verific mai muli ani n cmpul de ameliorare, n final obinndu-se un nou soi. Este specific plantelor autogame i cu nmulire vegetativ. Selecia individual repetat anual se aplic atunci cnd n interiorul descendenei apar variaii genetice au valoare selectiv. Repetarea alegerii de elite din descendene are loc pn cnd se obin descendene valoroase i stabile. Este o metod specific plantelor alogame. Cmpul de alegere

X Cmpul de selecie Cmpul de control

CC Culturi comparative de orientare CCO

17

Culturi comparative de concurs CCC Testare la ISTIS Figura 7.4. Schema seleciei individuale cu o singur legere

Cmpul de alegere

X X

X Cmpul de selecie X Cmpul de selecie Cmpul de control

CC Culturi comparative de orientare CCO Culturi comparative de concurs CCC Testare la ISTIS Figura 7.5. Schema seleciei individuale repetate

NTREBRI: 1. Definiia seleciei. 2. Clasificarea seleciei dup scopul urmrit.

18

3. Care este principiul seleciei n mas i care sunt variantele de lucru. 4. Care este principiul seleciei individuale i care sunt vriantele de lucru.

CAPITOLUL 5

UTILIZAREA HIBRIDRII N AMELIORARE .

Hibridara este prioncipala metod de provocare a variabilitii la plantele autogame. ncepnd cu generaia F datorit recombinrii i a
2

segregrii apare variabilitate care poate fi porelucrat prin selecie individual. n fucnie de momentul nceperii seleciei, aceasta poate fi genealogic, tardiv sau n populaii pariele. Realizarea hibrizilor de poate face n mai multe moduri, utiliznd doi sau mai muli genitori (hibridare simpl sau complex) care pot aparine aceleiai specii sau pot face parte din specii diferite (hibridare apropiat sau ndeprtat). O vriant special a hibridrii este back-cross-ul, care poate aplicat simplu, repetat sai n trepte. 5.1. IMPORTANA HIBRIDRII . nc de la nceputurile ameliorrii plantelor, ca o activitate contient, hibridarea a fost metoda prin care s-a ncercat obinerea unor combinaii noi de caractere. Dup punerea la punct a fundamentrii tiinifice prin elaborarea legilor ereditii de ctre G.Mendel i a teoriei cromozomiale a ereditii de ctre T.H.Morgan, hibridarea a constituit i nc mai constituie, metoda de baz utilizat n ameliorare. Hibridrile naturale au dus la apariia unor forme valoroase n intervale de timp foarte lungi datorit caracterului lor limitat. n majoritatea cazurilor, ncrucirile naturale s-au produs ntre forme apropiate, foarte asemntoare. De asemenea, ele s-au produs ntmpltor, foarte multe dintre rezultatele acestor ncruciri fiind puin valoroase sau chiar duntoare. Hibridarea, ca metod de ameliorare s-a conturat nc din secolul al XIX-lea. Cu timpul a devenit cea mia folosit metod, ajungndu-se astzi, s fie aplicat planificat n vederea obinerii unor genotipuri cu anumite combinaii de gene.
19

Dac se dorete definirea hibridrii, din punct de vedere genetic, hibridarea constituie o ncruciare ntre doi genitori care se deosebesc prin cel puin o pereche de caractere. Pentru ameliorare, n sens larg, hibridarea este o metod de creare a variabilitii prin ncruciarea ntre indivizi care fac parte din soiuri, specii sau genuri diferite. La realizarea diversitii n urma hibridrii concur o serie de fenomene genetice care permit apariia unui material iniial nou. Principala consecin a hibridrii este recombinarea genetic. Prin unirea celor doi gamei, provenii de la cele dou forme parentale se realizeaz combinaii noi de gene, fiecare genitor participnd cu zestrea sa genetic. Aceasta va constitui baza de aciune a altor fenomene genetice. La sporirea variabilitii concur i alte fenomene genetice: nlnuirea genelor, crossing-over-ul sau diferite interaciuni ntre genele alele ori nealele. Toate aceste fenomene care nsoesc nmulirea sexuat ofer posibilitatea manifestrii unei variabiliti foarte pronunate, ns nu tot ceea ce apare nou poate fi valorificat. Cu toate c hibridarea este o metod veche, va rmne n continuare modalitatea principal prin care se poate provoca variabilitatea la toate speciile supuse ameliorrii. Uurina cu care se aplic este un argument n plus pentru meninerea ei ca metod de baz.

5.2. TIPURI DE HIBRIDARE FOLOSITE N AMELIORAREA PLANTELOR.

Hibridarea fiind o metod foarte mult utilizat, s-a ajuns la situaia de a fi aplicat sub mai multe forme. Astfel, se pot face diferite clasificri ale hibridrii, dup mai multe criterii. Dup modul n care se realizeaz, hibridarea poate fi natural i artificial. Cea mai larg clasificare a hibridrii se poate realiza dup numrul genitorilor ce particip la realizarea hibridului. Dup gradul de nrudire a formelor parentale, hibridarea poate fi apropiat (intraspecific) sau ndeprtat (interspecific, dac speciile sunt aparintoare aceluiai gen, sau intergeneric, dac speciile sunt din genuri diferite). Dup scopul care se urmrete a fi realizat, hibridarea poate fi divergent, cnd duce la diversificare, deci la apariia variabilitii, sau convergent cnd are ca efect restrngerea variabilitii. Toate tipurile de hibridare, cu excepia unuia, oricare ar fi criteriul de clasificare, sunt divergente. Excepie face un caz aparte a hibridrii simple, back-cross-ul, prin care se revine la un genotip existent anterior. Efecte asemntoare back-crossului se pot obine i prin aplicarea unor hibridri succesive. Hibridarea n funcie de modul de realizare. n funcie de intervenia omului n realizar ea hibridrii exist dou variante ale hibridrii: hibridare natural, care se realizeaz fr aportul omului i hibridare artificial, care este dependent de aciunea amelioratorului. Hibridarea natural a avut un rol deosebit n evoluia speciilor, dar i n ameliorare, la nceputurile acesteia ca activitate contient. n cazul hibridrii naturale, ncrucirile se realizeaz spontan, din acest motiv nu se cunoate de la cine a provenit polenul, deci nu se tie care este combinaia hibrid.
20

Hibridarea artificial este o activitate controlat care necesit intervenia omului n realizarea hibridului. n obinerea dirijat a unor hibrizi trebuie controlat foarte strict polenizarea. Stabilirea partenerilor care se vor ncrucia este elementul hotrtor n crearea unor hibrizi valoroi. ncrucirile nu se fac la ntmplare. Formele parentale se aleg judicios, dup un studiu prealabil foarte bine fundamentat. Hibridarea dup numrul genitorilor. Dup umrul formelor parentale ce particip la realizarea hibridului, hibridarea poate fi simpl, cnd particip doi genitori i hibridare complex, cnd la realizarea hibridului particip mai mult de doi genitori. Hibridarea simpl Hibridarea simpl este cea mai folosit n ameliorare i producerea de smn i const n ncruciarea a dou genotipuri diferite (A x B), acestea putnd fi soiuri, linii, linii consangvinizate. Hibridarea simpl este foarte mult utilizat pentru provocarea variabilitii la speciile autogame, al toate grupele de plante, agricole i horticole. Hibridarea simpl poate aprea sub mai multe forme, n funcie de modul n care se folosesc genitorii. Dac se are n vedere poziia pe care o ocup genitorii n hibridare, hibridarea simpl poate fi direct i reciproc. Hibridarea direct poziioneaz unul dintre genitori ca form mam, iar cellalt ca form tat. Forma mai precoce se va utiliza ca mam pentru avea flori neajunse la maturitate. Acesta este doar un criteriu arbitrar pentru stabilirea poziiei n hibridare. Hibridarea reciproc este ncruciarea n care poziia partenerilor se schimb. Dac hibridul direct este de tipul A x B, reciprocul su este B x A; forma care a fost utilizat ca mam va fi folosit ca tat. Hibridarea reciproc se efectueaz atunci cnd hibridul direct ncercat nu s-a putut obine.. Modul de utilizare a genitorilor n hibridarea simpl a dus la apariia unor modaliti aparte de lucru care constituie metode distincte de ameliorare convergent (retroncruciarea sau backcrossul) sau metode de studiu genetic al determinismului caracterelor (bazate pe diferite sisteme de calcul), ori studiul valorii unor genitori ca forme parentale n obinerea hibrizilor comerciali (hibridarea ciclic sau hibridarea dialel). Backcrossul - este o hibridare care const n ncruciarea unui hibrid F
1

cu unul dintre prini, spre exemplu ( A x B ) x A. Este considerat o hibridare simpl deoarece are la baz numai doi genitori. Fiind o metod prin care, n fond, variabilitatea genetic se restrnge, backcrossul va fi tratat pe larg separat. Hibridarea ciclic este o metod prin care se obin mai muli hibrizi simpli din ncruciarea mai multor genitori, folosii de regul ca form mam, cu un tester. n cazul unui set de patru genitori (A, B, C, D), hibridarea ciclic const n ncruciarea tuturor cu un tester i obinerea hibrizilor: A x T, B x T, C x T, D x T. Valoarea genotipurilor ca genitori rezult n urma studierii hibrizilor obinui n culturi comparative. Hibrizii avnd unul dintre prini acelai genotip (testerul), diferenele dintre ei se datoreaz capacitii printelui testat de a transmite nsuirile sale valoroase prin hibridare. Aceasta este capacitatea combinativ general. Hibridarea dialel este un sistem de hibridare care necesit un set de genitori, ntre acetia efectundu-se toate ncrucirile posibile. Acest tip de
21

hibridare se folosete n studiile de analiz genetic sau n selecia liniilor consangvinizate pentru stabilirea capacitii combinative specifice. Acest tip de testare stabilete care este cea mai valoroas combinaie hibrid. n cazul unui grup de patru genitori (A, B, C, D), hibridarea dialel const n executarea urmtoarelor ncruciri: AxBBxCCxD AxCBxD AxD La plantele autogame, hibridarea dialel se practic numai n studiile de genetic. Exist multe sisteme de calcul i interpretare prin care n urma efecturii unor ncruciri dialele se pot obine informaii despre numrul genelor implicat n realizarea unor caractere sau a interaciunilor dintre acestea. Hibridarea complex Hibridarea complex se realizeaz prin folosirea la realizarea hibridului a mai mult de doi genitori. Hibrizii compleci sunt des utilizai n ameliorare, n cadrul acestora putndu-se combina un numr mai mare de nsuiri, n final rezultnd un genotip care reunete caractere din surse diferite. Utilizarea mai multor genitori se poate face n dou moduri: prin hibridare n mas sau prin hibridare n perechi. Hibridarea n mas (poly-cross) se aplic la plantele alogame i const n ncruciarea liber, fr castrare a mai multor elite reinute din dou sau mai multe soiuri diferite, dup care urmeaz un studiu al descendenelor rezultate i alegerea celor mai valoroase, care prin amestecare vor forma un soi nou. Hibridarea n mas este mai puin utilizat. Ca metod de ameliorare, de folosete n ameliorarea unor specii furajere care se pot nmuli i vegetativ. H ibridarea n perechi este mult mai utilizat, att n ameliorare ct i n producerea de smn. Printr-o astfel de hibridare se poate modela un viitor genotip, care, fie c va fi cultivat, fie c va fi prelucrat prin selecie pentru obinerea de noi soiuri. Hibridarea complex n perechi poate crea mai multe tipuri de hibrizi. Hibrizii trilinairi sunt hibrizi la realizarea crora concur trei genitori i se obin din ncruciarea unui hibrid simplu cu un al treilea genitor: (A x B) x C. Hibrizii dublii sunt hibrizi obinui din ncruciarea a doi hibrizi simpli, deci la realizarea hibridului diblu particip patru genitori diferii: (A x B) x (C x D). Hibrizii compleci obinui prin hibridare succesiv n perechi, sunt foarte mult folosii pentru mbuntirea unor caractere acntitative prin acumularea de gene din surse diferite. Prin acest tip de ncruciare se realizeaz acumulri pas cu pas. Hibridarea dup gradul de nmulire a formelor parentale. Dup gradul de nmulire a formelor parentale, hibrizii pot fi intraspecifici (apropiai) sau interspecifici (ndeprtai). Hibridarea intraspecific este cel mai mult utilizat n ameliorare. Hibridarea apropiat const n ncruciarea unor forme (soiuri, linii, populaii locale) ce aparin aceleiai specii. Hibridarea ndeprtat (interspecific) const n ncruciarea ntre dou specii diferite. Dac cele dou specii aparin la dou genuri diferite, se va numi intergeneric. Hibridarea ndeprtat este folosit tot mai mult n ameliorare datorit posibilitilor vaste de provocare a variabilitii. Hibridarea ndeprtat este
22

utilizat foarte mult la transferarea de la formele slbatice a unor gene de rezisten la boli sau la factorii de mediu nefavorabili. Aa se pot obine soiuri cu o larg plasticitate ecologic i cu rezisten la o palet mai cuprinztoare de ageni patogeni i de rase fiziologice a acestora. Utilizarea hibridrii ndeprtate n ameliorare este limitat de diferenele genetice dintre specii care mpiedic realizarea fecundrii i obinerea seminei hibride. Un alt dezavantaj este acela c hibrizii ndeprtai sunt parial sau total sterili. Din acest motiv, hibridarea ndeprtat necesit luarea unor msuri care s nlture aceste neajunsuri.

5.3. TEHNICA GENERAL A HIBRIDRII.

Hibridarea este o metod complex care necesit o succesiune de operaii. Etapele care trebuie urmrite n obinerea unui hibrid prezint o line general la toate speciile, dar i multe particulariti i diferene de la o specie la alta Stabilirea obiectivelor ameliorrii prin hibridare. Stabilirea obiectivelor ine cont de specia cu care se lucreaz. Aceasta trebuie s fie cunoscut foarte bine n privina variabilitii, mai ales care sunt limitele existente pentru caracterele i nsuirile luate n studiu. Pentru a uura munca de ameliorare, este bine ca numrul caracterelor care trebuie mbuntite s fie redus, Din acest motiv, materialul de la care se pornete trebuie s fie valoros, deficitar n privina unui numr mic de caractere. O atenie deosebit trebuie acordat caracterelor cantitative (capacitate de producie, calitate), care au o eritabilitate redus, din cauza complexitii determinismului genetic mbuntirea lor se face foarte greu. Se recomand ca aceste nsuiri s constituie obiective principale, celelalte, care prezint un determinism genetic mai simplu i au o expresivitate mai pronunat n fenotip, s fie ameliorare n paralel. Foarte important este cunoaterea caracterelor i nsuirilor care limiteaz atingerea obiectivelor principale. Pe ct posibil, genitorii trebuie s fie lipsii de asemenea nsuiri. Alegerea genitorilor. Succesele realizate de ctre ameliorare depind n mod hotrtor de alegerea unui material iniial valoros. n cazul hibridrii, care este o metod folosit frecvent n obinerea de soiuri, alegerea formelor parentale este cea mai important faz. Modelul imaginat a fi obinut n urma hibridrii depinde de gsirea unor forme parentale n care s fie reunite toate genele implicate n realizarea nsuirilor urmrite. Efectuarea hibridrii Hibridarea necesit mai multe operaiuni prin care se asigur polenizare formei mam cu polen de la forma tat. Pentru aceasta este necesar s fie urmrite mai multe etape, fiecare avnd caracteristici distincte i momente prielnice de executare. n ordinea desfurrii lor, n continuare vor fi prezentate fazele tehnicii de hibridare. Alegerea genitorilor este o etap despre care s-a vorbit deja, aceasta trebuind fcut pe baze tiinifice i cu mult nainte de nfiinarea cmpului de ameliorare. Din parcelele care cuprind genitorii, n scopul aplicrii operaiilor necesare hibridrii se vor alege plantele cele mai viguroase, cu nsuiri caracteristice cultivarului din care fac parte, neatacate de boli i duntori, cu inflorecene bine dezvoltate. Aceste criterii sunt valabile att pentru plantele cu care se lucreaz fcnd parte din forma mam, ct i pentru cele din forma tat.
23

n cazul formei mam, inflorescenele vor fi izolate, pregtite pentru castrat, castrate, apoi polenizate. De la plantele formei tat se va recolta polen folosit n polenizarea florilor castrate. Pregtirea plantelor pentru castrat este prima lucrare tehnic asupra plantelor mam. Momentul optim pentru castrat este nainte de maturizarea polenului. Pentru castrat se vor alege florile cele mai dezvoltate. n cazul plantelor cu flori care nu sunt grupa n inflorescene, pentru hibridri se utilizeaz numai primele 2-3 flori, acestea fiind mai bine hrnite de ctre plant. Este recomandabil ca celelalte flori s nu fie lsate s fructifice ( la ardei, vinete). n cazul speciilor la care florile sunt grupate n inflorescene se vor folosi flori din primele inflorescene aprute: primele 2-3 inflorescene ( la tomate, mazre, fasole), spicul principal la cerealele pioase, primul tiulete la porumb, etc. Din fiecare inflorescen se vor elimina florile mai mici lsnduse numai cele mai mari i uniforme ca dezvoltare. Astfel, la gru se ndeprteaz spiculeele de la baz i de la vrf, iar n spiculeele rmase se las numai florile bazale; la mazre, tomate, via de vie, pomii fructiferi se ndeprteaz din inflorescen florile mai mici. ndeprtarea acestor flori, ct i ndeprtarea nveliului floral (secionarea glumelor i paleelor la cerealele pioase, secionarea petalelor la florile de fasole, floarea soarelui, varz, etc.) pentru a uura ajungerea la anterele staminelor care trebuie eliminate, constituie faza de pregtire nainte de castrat. Aceast operaiune pregtitoare are o serie de particulariti n funcie de specie. n majoritatea cazurilor este obligatorie deoarece castrarea, fcnduse nainte ca floarea s fie matur, anterele sunt acoperite de nveliul florii sau al inflorescenei. Castrarea este operaiunea cea mai important. Dup ce floarea a fost pregtit, urmeaz ndeprtarea anterelor sau distrugerea viabilitii polenului. Aceast operaiune este obligatorie la speciile cu flori hermafrodite, fie c sunt de la specii autogame, fie c sunt ale speciilor alogame. La speciile cu flori unisexuate (monoice sau dioice) este suficient izolarea florilor femele pentru a preveni polenizarea la ntmplare. Aceast izolare trebuie fcut nainte cu cel puin dou zile ca stigmatul s fie receptiv pentru ca, eventualul polen ajuns pe stigmat, s-i piard viabilitatea pn la ajungerea la maturitate a stigmatului. Castrarea florilor hermafrodite se poate realiza n mai multe moduri. La cele mai multe specii se realizeaz manual, cu ajutorul pensetelor . Dac de aplic aceast metod, se va avea grij ca anterele s fie extrase fr a se rni sau fr a se rupe. Chiar dac antera nu a eliberat polen, dup rnirea ei polenul se poate disemina i poate fi capabil de fecundare. De asemenea, atenia trebuie s fie ndreptat i n direcia protejrii stigmatului. n cazul speciilor cu flori de dimensiuni mici ( sfecl, soia, morcov), lucrarea se face foarte dificil, numai de ctre persoane calificate i cu experien. Castrarea poate fi nlocuit cu unele metode prin care se distruge viabilitatea polenului. Aceste metode se practic numai cnd castrarea este imposibil de realizat din cauza dimensiunilor foarte reduse a florilor. Astfel, la unele specii se practic sterilizarea polenului pe cale termic, prin introducerea inflorescenelor n ap cald. Spre exemplu, la orez, sterilizarea se face la 45-48 C, timp de 1-10 minute. Sterilizarea termic se mai 0 aplic i la sorg sau la unele ierburi furajere. La gru i la orez a fost ncercat i sterilizarea prin temperaturi sczute (la 0 C). Aceste procedee nu asigur o 0 sterilizare total, n plus sunt destul de greu de realizat n condiii de cmp.

24

Literatura se specialitate semnaleaz i procedee chimice, prin utilizarea unor substane care s distrug viabilitatea polenului. n cazul lucernei, florile se introduc n alcool etilic. La alte specii au fost ncercate alte categorii de substane, aa numiii ageni chimici de hibridare. Exist i situaii speciale, la speciile autoincompatibile (unele soiuri de mr, cire, nuc, ceap, varz, sfecl), la care castrarea nu este obligatorie, .ns pentru siguran, se recomand a fi efectuat. Izolarea i etichetarea inflorescenelor castrate este necesar pentru a se mpiedica polenizarea la ntmplare. Deoarece, n momentul castratului, stigmatele sunt imature, pn la polenizare trebuie s treac 1-2 zile. Izolarea se face cu diferite tipuri de izolatoare, n funcie de specie. Cel mai des folosite sunt pungile de hrtie de pergament (la cereale, leguminoase, pomi fructiferi). Se pot folosi i izolatoare din tifon sau pnz (la floarea soarelui, ceap) n cazurile n care inflorescenele sunt mai mari. Izolatoarele trebuie s asigure o izolare perfect, dar s asigure inflorescenei i viitoarelor fructificaii, o bun aerare, umiditate corespunztoare i lumin suficient. Izolatoarele se nchis n partea de jos i se prind de tulpina plantei prin diferite metode (agrafe, inele de cauciuc, sfoar). Odat cu punerea izolatorului se face i etichetarea. Ataarea unei etichete este obligatorie i n cazul izolatoarelor din materiale textile. Pe pungi, se scrie cu creionul, direct pe pung: data efecturii castratului i combinaia hibrid care urmeaz a fi realizat. Polenizarea se efectueaz la 1-2 zile dup castrat, perioad n care stigmatele se maturizeaz. n funcie de viabilitatea polenului, acesta trebuie utilizat proaspt sau poate fi recoltat i pstrat. n limita posibilitilor, se recomand folosirea polenului proaspt. Dac este nevoie ca polenul s fie pstrat, aceasta se poate face numai la temperaturi sczute (0-4 C, numai pentru cteva zile. Este posibil i pstrarea pe termen mai lung, dar n acest caz trebuie controlat foarte riguros att temperatura, ct i umiditatea. n privina polenizrii, exist mai multe modaliti de lucru: polenizare liber, semiliber i forat. Polenizarea liber const n lsarea florilor castrate neizolate, polenul urmnd a fi adus de vnt sau de insecte. Aceast hibridare liber se practic foarte rar n lucrrile de ameliorare. Posibilitatea utilizrii ei apare la pomii fructiferi, cnd se lucreaz n livezi cu soiuri autoincompatibile, unde sunt intercalate soiuri polenizatoare. n asemenea cazuri, exist o oarecare siguran asupra hibridului ce va rezulta. Polenizarea semiliber se aplic la un numr mare de specii. Aceasta const n introducerea sub izolator, alturi de inflorescena castrat, a 1-3 inflorescene de la forma tat. Pentru aceasta, cei doi genitori trebuie s fie semnai apropiat. n caz contrar, inflorescenele genitorului patern se menin viabile n recipieni cu ap. Punerea n contact a polenului cu stigmatul , sub izolator, se face liber, prin scuturare (la ovz) sau prin introducerea n izolator a unor insecte polenizatoare ( la ceap, mor cov) Polenizarea forat este cea mai eficace. Aceast metod const n recoltarea polenului de la forma tat i depunerea lui pe stigmatele florilor castrate ale genitorului matern. Punerea n contact a polenului cu stigmatul se poate realiza prin scuturarea inflirescenelor inflorite (la gru) ori prin scuturarea polenului recoltat (la porumb, tomate, pomi fructiferi). Pentru

25

scuturare se folosesc pensule, la speciile cu polen puin sau tampoane din vat ( la floarea soarelui). Momentul optim al zilei pentru efectuarea polenizrii depinde de specie. Exist specii care prefer timpul mai rcoros i umed. La acestea polenizarea trebuie fcut dimineaa (ovz, fasole, soia). Alte specii prefer temperaturile mai ridicate, la acestea polenizarea fcndu-se n orele amiezii (gru). Pentru legarea florilor, la multe specii, umiditatea aerului este foarte important. La acestea se recomand stropirea izolatoarelor sau umbrirea n primele dou zile de la polenizare, cnd temper aturile sunt foarte ridicate ( la ovz). La speciile sensibile, la care procentul de legare a florilor este foarte sczut, polenizarea se poate repeta dup 1-2 zile. Dup polenizare, izolatorul se pune dinnou i se pstreaz pn la maturitate (la cereale pioase, porumb, sfecl, floarea soarelui) sau este scos dup 2-3 sptmni i se va nlocui cu o etichet de pedunculul florii ( la pomii fructiferi, tomate, ardei, fasole). Recoltarea seminei hibride este faza final a hibridrii. Smna F se
0

va recolta la maturitatea deplin i va fi pstrat pn la semnat n pungi, fiecare combinaie hibrid ntr-o pung separat. Pe pungi se scrie combinaia hibrid. n cazul unor cercetri de genetic se recomand pstrarea separat a seminei fiecrei plante. 5.4. SELECIA N POPULAII HIBRIDE. Prelucrarea populaiilor rezultate n urma hibridrii se realizeaz n funcie de tipul de polenizare a speciei cu care se lucreaz. Diferenele dintre specii rezult din efectul pe care l are hibridarea, ct i din scopul final al seleciei. La plantele autogame hibridarea se efectueaz pentru a provoca variabilitate. Din variabilitatea creat se vor alege forme care corespund obiectivelor de ameliorare spre a fi nmulite, n final obinndu-se un nou soi. Aplicarea hibridrii n ameliorare este generalizat la aproape toate speciile cultivate autogame. Variabilitate acare ncepe s se manifeste ncepnd cu generaia F ofer posibilitatea aplicrii seleciei ceea ce n cazul unor
2

populaii existente (soiuri, populaii locale) are o foarte slab eficacitate datorit limitrii acesteia, i a epuizrii n scurt timp. Numrul cel mai mare a recombinrilor apare n prima generaie segregant. Marea majoritate a acestora sunt genotipuri n stare heterozigot i vor continua s segregheze n continuare, dar populaia recombinatelor noi se va reduce treptat n generaiile urmtoare. n cazul autogamelor, selecia trebuie s rein indivizi valoroi i stabili. Stabilitatea se datoreaz homozigoiei ca urmare, elaborarea unei strategii de selecie se vor avea n vedere dou elemente: variabilitatea i starea de homozigoie. Variabilitatea maxim se ntlnete n F , ns gradul de homozigoie
2

este redus. Dac se ncepe selecia n prima generaie segregant, trebuie s se adopte o metod cu verificarea genotipului, adic o metod bazat pe principiile unei selecii individuale repetate. Aceast metod poart numele de selecie genealogic i este metoda cea mai precis, care valorific toat variabilitatea ce apare. Cu ct se amn debutul seleciei n generaii segregante mai avansate, cu att procentul homozigoiei n populaii va crete i se poate adopta varianta unei selecii individuale cu o singur alegere. Extragerea
26

elitelor ncepnd cu genreraia F este mai uor de aplicat, dar o parte din
7

vairabilitate se va pierde. Aceast metod se numete selecia tardiv. O alt cale este cea prin care elitele reinute n F se vor nmuli pn n F , cnd, din
2 7

populaiile formate se va reine elite a doua oar. Aceast variant se numete selecie n populaii pariale. Selecia genealogic (pedigree) Selecia genealogic este tipul de selecie care prelucreaz variabilitatea nc de la nceputul manifestrii ei. Pentru aceasta extragerea de elite se face n generaia F Deoarece n aceast generaie segregant proporia heterozigoilor
2.

este cea mai ridicat, selecia trebuie s se aplice dup varianta alegerii repetate, ansele de a seleciona forme stabile fiind foarte reduse. Cu alte cuvinte, selecia genealogic esteo selecie individual repetat, extragerea de elite fcndu-se din descendenele elitelor reinute anterior. Aceast repetare poate s continue pn n generaiile F F , unii autori recomandnd chiar n
5 7

generaia F . Alegerea de elite din descendene se oprete cnd descendena va

10

fi uniform. (figura 8.1.) Uniformitatea arat c s-a ajuns la starea de homozigoie, moment n care descendena poate deveni linie spre a trece din cmpul de selecie n verigile urmtoare ale cmpului de ameliorare. Metoda seleciei genealogice are avantajul c evalueaz mai complet dect oricare metod materialul hibrid i c permite identificarea timpurie a genotipurilor valoroase, mai ales n privina caracterelor calitative (rezistene la boli, precocitate, culoare, etc). Folosirea unor tehnici speciale n generaiile timpurii (infecii artificiale, microteste de calitate) permite identificarea unor plante valoroase. Efectuarea hibridrii Cmp de hibridare

AxB
Cmp hibrizi F
1

Cmp alegere F
2

xx

Cmp selecie (alegere)

F
3

Cmp selecie (alegere)

F
4

Cmp selecie

F
5-7

27

Cmp de control

Culturi comparative de orientare Culturi comparative de concurs Figura 8.1.Schema seleciei genealogice Selecia n populaii hibride avansate (bulk-method) Aceast metoda a fost utilizat de NilsonEhle, apoi a fost preluata n SUA n ameliorarea multor specii autogame. (figura 8.2.) Metoda are la baz conceptul c extragerea elitelor s nceap dup realizarea homozigotrii, dup 5-7 generaii de autopolenizare. n generaiile avansate, marea majoritate a plantelor din populaie sunt homozigote. Studiile arat c n F proporia
6

homozigoilor este de 96,9%, iar n F de 99,8%. Avnd n vedere faptul c

10

elitele alese vor fi testate n privina valorii i uniformitii descendenelor, selecia se poate aplica chiar i n F , generaie n care proporia homozigoilor
5

este satisfctoare. Populaiile hibride nmulite pe parcursul generaiilor segregante sunt supuse seleciei naturale, care favorizeaz nmulirea biotipurilor cu nsuiri valoroase n lupta pentru existen (rezisten la condiiile nefavorabile de mediu, la boli i duntori). Din aceast cauz se ajunge ca selecia artificial care se execut n F -F s se fac pe populaii cu biotipuri adaptate. Prin
57

diferite msuri se pot intensifica factorii seleciei naturale i astfel se elimin biotipurile neadaptate, n funcie de indicele de selecie pe care selecia natural l are asupra genotipului.

Efectuarea hibridrii A x B F
1

F
2

F
3

F
4

F
5-7

28

Cmp selecie Cmp de control Culturi comparative de orientare Culturi comparative de concurs Figura 8.2. Schema seleciei tardive Selecia n populaii pariale . Conform acestei metode alegerea de elite ncepe n F fcndu-se apoi o
2

triere a descendenelor acestora, cele mai bune descendene se vor nmuli pn n generaiile F -F . Pe parcursul nmulirii, fiecare descenden va da natere
57

unei populaii. Prin acest mod de lucru se elimin de timpuriu multe din genotipurile nevaloroase. Pentru a nu se pierde din variabilitatea aprut se recomand ca numrul elitelor reinute n F s fie foarte mare. Observarea
2

descendenelor n timpul nmulirii se face cu mar e atenie pentru ac s nu fie eliminate populaii ci indivizi valoroi. (figura 8.3.)

Efectuarea hibridrii AxB F

1

F
2

Cmp selecie

F
3

Inmulire

F
4

nmulire

F
5

29

Cmp de selecie

Cmp de control Culturi comparative de orientare Culturi comparative de concurs Figura 8.3. Schema seleciei n populaii pariale. La plantele alogame hibridarea poate fi folosit n dou direcii. O posibilitate ar fi asemntoare celei aplicate la plantele autogame, dar soiuri se cultiv la tot mai puine specii alogame. Pentru crearea de hibrizi, la alogame, hibridarea se efectueaz n vederea valorificrii heterozisului manifestat n generaia F .
1

5.5. FOLOSIREA BACK-ROSS-ULUI N AMELIORARE

Back-cross-ul, o variant hibridrii, a fost recomandat ca metod de ameliorare. Aceast metod, bazat pe hibridri repetate ofer posibilitatea introducerii unui numr restrns de gene ntr- un genotip, pentru corectarea unor caractere deficitare. nc de la nceputul utilizrii, back-cross-ul a fost menionat ca o metod de mbuntire a rezistenei la boli. Se tie c n cazul hibridrii simple, teoretic, participarea celor doi genitori la realizarea zestrei ereditate a hibridului este egal. Aceast situaie este avantajoas dac ambii genitori sunt valoroi. n cazul n care este necesar mbuntirea unui soi deosebit de valoros, dar deficitar n privina unui numr redus de caracteristici, se va aplica back-cross-ul. Prin aceast metod, noul soi obinut nu se va deosebi de cel iniial dect prin faptul deficienele avute au fost corectate. Ca metod de ameliorare, cack-cross-ul const n ncruciarea repetat a unui hibrid F cu unul dintre prini, la ncruciate alegndu-se plantele care se
1

aseamn ct mai mult cu printele folosit (cel care trebuie corectat), dar care s prezinte i caracterele dorite a se transfera de la cellalt printe. Ca urmare, n acest tip de ncruciare apar dou categorii de forme parentale. Printele folosit la ncruciarea cu hibridul F este printele valoros, dar deficitar n
1

privina ctorva caractere. Aceast form parental este denumit printe recurent. Cellalt genitor, de la care se preiau genele cu ajutorul crora se vor corecta deficienele printelui recurent, este denumit printe donator. Pentru a mbunti printele recurent, numrul retroncrucirilor necesare depinde de complexitatea genotipului printelui recurent i de numrul genelor care trebuie preluate de la printele donator. Extinderea aplicrii back-cross-ului n ameliorare s-a produs datorit avantajelor pe care aceast metod le prezint fa de hibridarea obinuit. Ca
30

metod de ameliorare, back-cross-ul ofer posibilitatea programrii precise a unui produs final cu condiia gsirii donatorului adecvat pentru mbuntirea printelui recurent. La ncheierea back-cross-rii forma obinut nu mai trebuie testat deoarece se tie c este superior recurentului iniial prezentnd i caracterele transferate de la donator. Un alt avantaj este acela c n timpul efecturii hibridrilor, numrul plantelor cu care se lucreaz nu trebuie s fie prea mare. Dup finalizarea backcross-rii va avea loc o nmulire a plantelor spre a se obine cantitile de smn necesare. Cu toate aceste avantaje, reuita back-cross-ului necesit asigurarea unor anumite condiii. n primul rnd, printele recurent trebuie s fie un soi foarte valoros n privina majoritii caracterelor, astfel c dup terminarea programului de ameliorare cu ajutorul acestei metode el s rmn competitiv. Pe de alt parte numrul caracterelor pentru care recurentul trebuie mbuntit trebuie s fie foarte mic. O alt condiie primordial este gsirea unui donator care s posede caracterele adecvate de la care acestea s poat fi preluate cu uurin. n final, foarte important este numrul retroncrucirilor. Acesta trebuie s fie suficient de mare pentru a reface ct mai fidel genotipul recurentului.

5.6. TIPURI DE BACK-CROSS.

Deficienele soiurilor pot fi n numr mai mare sau mai redus. n funcie de acestea, ct i dependent de valoarea donatorilor existeni, back-cross-ul este de mai multe tipuri. Back-cross-ul simplu const n ncruciarea o singur dat a hibridului F cu printele recurent. n acest mod, din genotipul donatorului va rmne o
1

proporie mai mare. Acest tip de back-cross se utilizeaz cnd recurentul este deficitar n privina mai multor caractere, toate genele pentru corectarea acestora, gsindu-se la un singur donator. Dup aplicarea acestui tip de back-cross, populaia rezultat se va prelucra n continuare prin selecie. Pentru a gsi combinaiile de caractere dorite, n aplicarea acestui tip de back- cross trebuie s fie folosite un numr mare de plante hibride F . Aplicarea seleciei n continuare se face conform
1

metodelor specifice prelucrrii populaiilor hibride ( selecia genealogic sau selecie n populaii avansate). n aplicarea seleciei se va urmri reinerea formelor foarte asemntoare recuentului, dar care s prezinte i caracterele preluate de la donator. Back-cross-ul repetat const n hibridarea timp de mai multe generaii a hibrizilor F ca printele recurent. Acest tip de back-cross se folosete la
1

mbuntirea unor soiuri foarte valoroase, dar deficitare n privina unui singur caracter, deficien care se poate corecta prin transferarea unei singure gene de la un donator corespunztor. Acest tip de back-cross este specific transferrii unor gene de rezisten la diferii ageni patogeni, a genelor de androsterilitate , a celor de restaurare a fertilitii sau a altor gene importante. Pentru ca genotipul recurentului s se refac Aproape n totalitate, sunt necesare 5-6 generaii de back-cross (uneori mai multe), n timpul aplicrii acestora fcndu-se i o selecie n direcia printelui recurent. Back-cross-ul n trepte este un tip de back-cross aparte, care presupune mai multe etape de lucru deoarece se lucreaz cu mai muli donatori. Metoda se
31

utilizeaz pentru mbuntirea unor soiuri deficitare n mai multe caractere, genele necesare mbuntirii acestora fiind preluate de la mai muli donatori. Dac se urmrete obinerea unui soi foarte uniform, ameliorare dureaz mai mult, preluarea genelor de la donatori fcndu-se succesiv. Exist i posibilitatea scurtrii duratei ameliorrii, lucrndu-se n paralel cu fiecare donatori. n acest caz, n final se va obine un soi cu polimorfism accentuat.

5.7. BAZELE GENETICE ALE APLICRII BACKCROSS-ULUI .

Influena back-cross-ului asupra genotipului iese n eviden dac se face un studiu comparativ al acestei metode cu hibridarea urmat de autopolenizare. Dac nu intervine retroncruciarea cu unul dintre prini. Dup hibridarea i autopolenizarea hibrizilor F va avea loc o segregare conform
1

legilor mendeliene pentru fiecare pereche de gene. Dac se are n vedere o singur pereche de gene, n F raportul de segregare va fi:
2

AA x aa F : Aa (autopolenizare)
1

F : 25% AA + 50% Aa + 25% aa

2

Conform acestei legi, n F numai 25% din indivizi vor prezenta gena
2

n stare homozigot, att cea dominant, ct i cea recesiv. Dac se intervine cu aplicarea back-cross-ului, raportul de segregare se va schimba n favoarea genei prezente la printele recurent: AA x aa F : Aa x AA (recurentul) (BC )
1 1

50% AA + 50% Aa Se constat c dup primul back-cross, jumtate din indivizi vor avea genotipul recurentului pentru fiecare pereche de gene. Prin repetarea de mai multe ori a ncrucirilor cu printele recurent, treptat se va ajunge la un genotip homozigot asemntor recurentului, pentru marea majoritate a perechilor de alele. La aceast situaie se ajunge datorit faptului c la fiecare generaie de back-cross-are proporia existent din genotipul donatorului n genotipul hibridului se reduce la jumtate. Dup prima ncruciare, n genotipul hibridului F , att din genotipul recurentului ct i din
1

al donatorului se va regsi cte 50%. Dup primul back-cross, n genotipul hibridului 25% va reprezenta partea din genotipul donatorului. Dup cel de-al doilea back-cross, proporia de participare a donatorului se va reduce la 12,5%. (figura 8.4. ) 1 , unde m reprezint numrul generaiilor de back- m 2

cross-are.

32

Back-cross-area se continu pn cnd se ajunge la procentajul dorit. Cu ct numrul genelor preluate de la donator va fi mai mic, cu att vor fi necesare un numr mai mare de retroncruciri cu printele recurent. Gradul de reducere a proporie de participare a genotipului donatorului n populaia hibrid se poate calcula cu formula: 1 , unde m reprezint numrul generaiilor de back-cross-are. m 2

Recurent

Donator

x
50%recurent 50%donator recurent
1

BC

x
75%recurent 25%donator recurent BC
2

33

87,5%recurent 12,5%donator Figura 8.4. Reprezentarea schematic a creterii proporiei de participare a genotipului printelui recurent n urma aplicrii back-cross-ului

NTREBRI: 1.Care sunt fenomenele care duc la apariia variabilitii n urma hibridrii ? 2.Care sunt tipurile de hibridare folosite n ameliorare plantelor ? 3. Care sunt tipurile de selecie folosite n prelucrarea populaiilor hibride la plantele autogame ? 4.Care sunt etepele de realizare a unei hibridri ? 5.Ce se nelege prin back-cross ? 6.Care sunt tipurile de back-cross ?
CAPITOLUL 6

CONSANGVINIZAREA N AMELIORARE .
Consangvinizarea este o metod specific plantelor alogame avnd ca scop punerea n valoare a genelor recesive. n urma consangvinizrii fenotipul este afectat nefavorbil, dar genotipul se aduce n stare homozigot. Prin ncruciarea intre ele a unor linii consangvinizate se reface starea de heterozigoie care atrage manifestarea fenomenului heterozis n prima generaie hibrid. Acest fenomem se valorific n culturile pentru consum prin cultivarea hibrizilor comerciali, care pot fi simpli, triliniari sau dubli. Pentru a ajuta obinerea seminei hibrdie comerciale se utilizeaz fenomenul androsterilitii.

6.1. DEFINIIE I IMPORTAN

Prin consangvinizare se nelege procesul de nmulire a plantelor alogame care se realizeaz prin autofecundare la plantele hermafrodite i unisexuat monoice i prin ncruciarea descendenilor unei singure plante la cele dioice. Consangvinizarea este singura metod prin care se pot izola genotipurile valoroase i se elimin genele recesive nevaloroase din populaiile alogame. n final, n urma consangvinizrii se ajunge la starea de homozigoie care ofer posibilitatea manifestrii n fenotip i a genelor recesive. Liniile conangvinizate sunt materialul de baz n obinerea hibrizilor care s manifeste fenomenul heterozis .
34

6.2. EFECTELE CONSANGVINIZRII.

Consangvinizarea fiind o metod de nmulire anormal, atrage o serie de efecte asupra plantelor i a populaiilor. Aceste efecte pot fi fonotipice sau genotipice cu implicaii deosebite n ameliorare i producere de smn. Efectele fenotipice se observ n modificarea unor caracter e i nsuiri n urma consangvinizrii. Principalul efect este depresiunea de consangvinizare care const n reducerea pronunat a vitalitii i fecunditii. Efectul se observ prin scderea nlimii plantelor, a mrimii i numrului fructelor i seminelor. Efectul este foarte puternic n prima generaie, iar dup un anumit numr de generaii de consangvinizare scderea nu mai este evident. Acest moment se numete prag minim de consangvinizare. Atingerea pragului minim depinde de specie i de caracter, reaciile fiind diferite. Efectul depresiv este foarte puternic la porumb i floarea soarelui i mai puin evident la sfecl. Reacia fa de consangvinizare este diferit de la o specie la alta. Toate speciile sunt sensibile la consangvinizare, numai c unele nu ajung la sterilitate dect dup un numr mar e de generaii de autopolenizare, altele ns devin sterile dup un numr redus de consangvinizri. Acest aspect al consangvinizrii poart denumirea de toleran la consangvinizare. ntre specii exist diferene n ceea ce privete tolerana la consangvnizare. Speciile tolerante se preteaz a fi prelucrate prin aceast metod (floarea soarelui, porumb), ns la cele sensibile metoda nu poate fi aplicat (lucerna). Efectele genotipice au implicaii asupra structurii genetice a indivizilor i a populaiei prelucrate. Un efect de acest tip este scderea varaibilitii ca rezultat a scderii frecvenei heterozigoilor i creterea progresiv a homozogoilor. Dup mai multe generaii succesive de consangvonizare indivizii aparinnd aceeai descendene devin foarte asemntori fenotipic, realizndu-se homozigotarea acestora. Creterea gradului de homozogoie se realizeaz conform formulei: n - 2 , unde m reprezint numrul generaiilor de consangvinizare, iar n 1 2m numrul perechilor de alele heterozigote la nceperea consangvinizrii. Alt efect este desfacerea populaiei heterozigote iniiale n biotipuri componente. Homozigotarea populaiilor iniiale nu constituie un obiectiv n sine ci mijloc de a izola genotipurile valoroase i stabile i a elimina genotipurile necorespunztoare. n urma consangvinizrii, din populaia iniial pot rezulta un numr de 2 biotipuri, n reprezentnd numrul perechilor de alele n heterozigote din populaia iniial.

6.3. MATERIALUL INIIAL FOLOSIT LA CONSANGVINIZARE .

Materialul iniial poate fi grupat n dop categorii, dup intervenia autopolenizrilor. Materialul din primul ciclu de selecie cuprinde forme care nu au mai fost autopolenizate. Acestea au variabilitate mare i constituie surse de gene pentru diferite tipuri de rezistene. n aceast grup sunt cuprinse soiurile ameliorare i cele primitive, populaii locale. Prezentnd un numr mare de gene nevaloroase i un grad mare de heterozigoie, se prelucreaz mai greu
35

Materialul din ciclul doi de selecie sunt forme care au mai fost autopolenizate, ca urmare ele conin gene nevaloroase mai puine, dar pot fi deficitare n privina anumitor gene. Fiind cu un grad de heterozigoie sczut se prelucreaz mai uor. Din aceast categorie fac parte liniile consangvinizate mai vechi i hibrizii ntre linii consangvinizate. Ambele tipuri de materiale trebuie prelucrate nainte de aplicarea consangvinizrii n scopul ndeprtrii unor caractere nedorite (n cazul materrialului din primul ciclu de selecie) sau a introducerii unor gene deficitare (n cazul materialului din ciclul doi de selecie). Metoda utilizat pentru mbuntirea materialului iniual supus consangvinizii este selecia recurent. Principiul acesteia este alternarea autopolenizrilor cu polenizarea liber i eliminarea din populaie a indivizilor cu caractere nedorite. Selecia recurent este de trei tipuri: selecie recurent simpl, selecie recurent pentru capacitate combinativ i selecie recurent reciproc. Selecia recurent simpl se desfar n cicluri dse cte doi ani. n primul an se aleg plante valoroase care se autopolenizeaz, iar n anul al doilea acestea se vor poleniza liber ntre ele. Populaia obinut din polenizarea liber va fi supus dinnou alegerii de plante care se vor autopoleniza. Ciclurile se repet pn cnd se va ajunge la o populaie uniformizat i cu puine caractere nedorite. Selecia recurent pentru capacitate combinativ se desfoar n cicluri de cte trei ani. Pe lng selecie plantelor valoroase i autopolenizarea lor se face i o testare a capacitii combinative a acestora. n primul an se ale gplante care se autopolenizeaz, iar n paralel se efectueaz i hibridri cu un tester. Smna obinut prin autopolenizare se pstreaz un an pentru c n al doilea an se studiaz hibrizii rezultai din testare. Se va reine numai smna autopolenizat de la plantele care au dat hibrizi valoroi n hibridarea cu testerul. Ca tester se poate folosi un hibrid simplu sau o linie consangvinizat. Aceast smn se va folosi la obinerea unei polulaii n care se efectua o polenizare liber. Ciclul se va relua pn se va ajunge la o valoare corespunztoare nceperii consangvinizr ii. O O O O O O Cmp de autopolenizri O O O O O O Primul ciclu Cmp de polenizare liber Figura 9.1. Schema seleciei recurente simpl Selecia recurent reciproc se aseamn cu selecia recurent pentru capacitate combinativ desfurndu-se n cicluri de cte trei ani. Se utilizeaz la mbuntirea concomitent a dou linii consangvinizate, fiecare linie servind ca teste pentru cealalt. mbuntirea liniilor consangvinizate vechi n privina unor caractere deficitare se realizeaz prin aplicarea back-cross-ului. O O O O Cmp de autopolenizri
36

i testare O O O O Tester Cmp pentru testarea capacitii combinative Cmp de polenizare liber Figura 9.2. Schema seleciei recurente pentre capacitate combinativ

6.4. OBINEREA LINIILOR CONSANGVINIZATE I UTILIZAREA ACESTORA.

Crearea liniilor consangvinizate se face prin autopolenizare forat 7-10 generaii, n funcie de gradul de heterozigoie. Aceasta presupune izolarea inflorescenelor nainte de nflorit, colectarea polenului i distribuirea acestuia pe stigmate. Ca izolatoare se folosesc pungi din hrtie sau sculei din tifon. Seminele autopolenizate se pstreaz separat de la un la altul pentru a se continua consangvinizarea. Liniile consangvinizate nu prezint valoare economic din cauza depresiunii de consangvinizare. Ele se folosesc la obinerea de hibrizi, ncrucindu-se ntre ele. n urma hibridrii, la hibrizii din prima generaie se manifest efectul heterozis care duce la sporirea capacitii de a produce semine sau fructe (heterozisul generativ), rdcini, frunze sau tulpini (heterozis somatic) sau a capacitii de adaptare la condiii nefavorabile de mediu (heterozis adaptativ) n funcie de numrul liniilor participante la crearea hibridului, n producie se cultiv diferite tipuri de hibrizi. Hibrizi simpli (ntre dou linii consangvinizate), hibrizi triliniari (ntre un hibrid simplu i o linie consangvinizat), hibrizi dublii (ntre doi hibrizi simpli) i sorto-liniari (ntre o linie consangvinizat i un soi), hibrizi compleci (ntre mai mult de 4 linii consangvinizate)

6.5. FOLOSIREA ANDROSTERILITII N PRODUCEREA DE SMN HIBRID

37

Androsterilitatea este fenomenul care determin ca plantele s nu produc polen sau s produc polen steril. Aceasta este un avantaj deosebit pentru c uureaz lucrrile de hibridare nemaifiind necesar castrarea formei mam. Se cunosc trei tipuri de determinare a acestui fenomen: genic, nuceocitoplasmatic i citoplasmatic. Dintre tipurile de androsterilitate, n producerea de smn se utilizeaz dou tipuri de androsterilitate, cea genic (tot mai puin utilizat n prezent) i cea nucleocitoplasmatic. Androisterilitatea genic este determinat de gene recesive situate n nucleul celulei, notate ms. nmulirea liniei androsterile se face prin polenizare cu o form polenizatoare asemntoare ei , fertil, care prezint gena de androsterilitate n stare heterozigot. n urma polenizrii rezult un amestec de indivizi androfertili i androsterili. Cei androfertili trebuie eliminai din lotul de hibridare nainte de nflorit. Aceasta se realizeaz prin nlnuirea genei de fertilitate a polenului cu o gen marcatoare care s evidenieze un caracter uor de sesizat nainte de nflorit. Linia androsteril x Menintorul de fertilitate ms ms MS ms 50 % MS ms + 50 % ms ms linia mam din lotul de hibridare Mk plantele cu gena marcatoare se elimin Androsterilitatea nucleo-citoplasmatic este determinat de gene recesive din nucelu care sunt n inteaciune cu factori din citoplasm. nmulirea liniei androsterile se face prin polenizare cu o form creia i lipsete factorul din citoplasm numit analog fertil. Pentru ca hibridul s fie fertil, forma tat trebuie s posede nite gene speciale prin care s se anihileze interaciunea genelor din nucleu cu factorii din citoplasm. Aceste gene se numesc restauratoare de fertilitate i se noteaz Rf. Acest tip de androsterilitate este cel mai utilizat n producerea seminei hibride. Linia androsteril x Analogul fertil ms ms (S) ms ms (F) 100% ms ms (S) smna pentru lotul de hibridare Forma mam x Forma tat (lotul de hibridare) ms ms (S) Rf Rf (F) Rf ms (S) hibrid comercial androfertil Androsterilitatea citoplasmati c este determinat de factori ereditari situai n citoplasma celulei. Liniile consangvinizate de acest tip nu se pot nmuli prin semine, ci numai pe cale vegetativ. Caracterul se transmite la urmai, ca urmar e i hibrizii vor fi androsterili. Acest tip de androsterilitate ar putea fi uilizat la plantele cu nmulire vegetativ care sunt cultivate pentru pri vegetative, deoarece fertilitatea polenului nu poate fi restabilit.

38

NTREBRI: 1.Ce se nelege prin consangvinizare la plante ? 2.Care sunt efectele consangvinizrii ? 3.Care sunt tipurile de material iniial utilizate n consangvinizare ? 4.Care sunt metodele de mbuntire a materialului inial supus consangvinizrii ? 5.Cum se obin liniile consanrgvinizate ? 6.Care sunt tipurile de hibrizi comerciali ?

CAPITOLUL 7

UTILILIZAREA MUTAIILOR N AMELIORARE

Mutageneza este o metod de ameliorarea prin care pot fi create noi caractre pe baza modificrii ereditii materialului ereditar sub aciunea unor factori care pot aciona n mod matural sau care pot fi manipulai. Principalii factori care pot induce mutaii sunt factorii fizici (diferite tipuri de radiaii), chimici sau biuologici. Selecia mutantelor aprute se realizeaz prin selecie individual. Mutantele pot fi utilizate ca soiuri noi sau ca genitori n procerse de hibridare.

7.1. DEFINIIE I IMPORTANA MUTAIILOR

Mutageneza reprezint o metod de ameliorare cu contribuie necunoscut n dezvoltarea variabilitii genetice la plantele de cultur. Individul care sufer o mutaie se numete mutant, iar mutageneza reprezint totalitatea evenimentelor care conduc la apariia mutaiilor sub influena agenilor mutageni Mutaiile aprute spontan sau artificial pot fi folosite direct ca noi soiuri, dar mai ales indirect n programele de ameliorare, ca genitori care posed unele caractere sau nsuiri deosebite. Din punct de vedere genetic, mutaia reprezint orice schimbare n structura i funciile materialului genetic i care nu este consecina recombinrii genetice.

39

Un rol deosebit n reuita ameliorii prin mutaii l are i valoarea materialului biologic (soi, linie etc.). n acest scop se vor folosi soiuri sau linii valoroase care necesit mbuntiri pentru un singur sau cteva caractere, ca de pild rezistena la un anumit patogen, o talie mai redus a tulpinii pentru a asigura o mai bun rezisten la cdere etc. Mutaiile reprezint o metod modern, care alturi de hibridare contribuie la inducerea variabilitii genetice la speciile de cultur. Prin mutaie pot fi mai uor mbuntite caractere precum: precocitatea, rezistena la cdere, rezistena la boli i duntori, culoarea, forma etc. dar mult mai greu sau deloc alte caractere foarte importante din punct de vedere agronomic, care sunt controlate de sisteme poligene. Folosirea direct a mutaiilor obinute experimental ca noi soiuri, constituie cea mai eficient valorificare a acestora. n comparaie cu hibridarea, n acest caz, se reduce la jumtate timpul de creare a noului soi iar preul de cost este mult mai sczut. Rezultatele obinute pn n prezent realizeaz faptul c foarte rar se pot obine prin mutaii forme noi superioare care s poat fi introduse direct n forme noi superioare care s poat fi introduse direct n producie. Cel mai adesea mutaiile selecionate posed n general doar schimburi genetice valoroase privind unul sau doar cteva caractere precum: precocitatea, rezistena la cdere, rezistena la boli i duntori, un coninut biochimic mbuntit etc. Principalele obiective urmrite n ameliorarea prin mutaii sunt: Folosirea unor linii mutante ca genitori. n acest caz se poate combina caracterul valoros indus prin mutaii cu alte caractere valoroase existente la alte cultivare. Acest mod de valorificare a mutaiilor pozitive a fost cel mai folosit n special la speciile care se nmulesc prin semine. Schimbarea unei gene sau a unui mic bloc de gene. Se urmrete ca genotipul s rmn neschimbat, excepie fcnd o gen sau cteva gene care determin un caracter ca trebuie ameliorat. Acest obiectiv devine necesar cnd exist soiuri foarte valoroase, cu larg rspndire, dar deficiente ntr-un caracter. Schimbri n structura cromozomilor. Unele mutaii cromozomale ca de pild translocaiile, deleiile i duplicaiile sunt folosite pentru transferarea sau eliminarea unor gene. Sporirea procentului de crossing-over. Prin folosirea unor tratamente combinate (iradiere cu raze X sau gamma i temperaturi nalte) sporete frecvena crossingoverelor n unele regiuni ale cromozomului, n special cele adiacente centromerului. Producerea de recombinr i n zonele cromozomului , unde obinuit ele nu apar, duce la sporirea variabilitii la plantele heterozigote.

7.2. TIPURI DE MUTAII

Ca rezultat, n funcie de cantitatea de material genetic implicat n aceast schimbare la nivel molecular pot apare mai multe tipuri de mutaii Mutaiile pot apare spontan (natural) sau prin inducere artificial, ambele categorii avnd importan recunoscut pentru ameliorare. Mutaiile spontane au avut un rol incontestabil n evoluia lumii vii, constituind sursa primar a variabilitii genetice. Prin diferite tehnici, ameliorarea provoac mutaii artificiale, care pot fi de mai multe tipuri. Ele pot fi mprite n dou categorii: genice i extragenice.
40

Mutaiile genice pot afecta ntregul segment de ADN care alctuiete gena sau doar una sau cteva perechi de nucleotide din lanul perechilor de nucleotide al genei respective. Mutaiile care afecteaz gene majore cu activitate independent se numesc macromutaii i ele sunt uor detectabile, fiind vizibile n genotip. Mutaiile care produc efecte mici i care pot fi detectate doar prin observaii sau msurtori efectuate asupra unui grup de plante se numesc micromutaii. Mutaiile extragenice pot fi, dup stuctura afectat: cromozomiale, de genom i plasmamutaii. Mutaiile cromonzomiale afecteaz structura cromozomilor i duc la apariia unor cromozomi noi, cu form i compoziie deosebite. Mutaiile cromozomiale pot provoca adugarea la un cromozom a unor segmente noi (adiie), pierderea unor segmente (deleie), repetarea unui segment (duplicaii), schimbarea poziiei unui segment (inversie) sau schimbarea unui segment cu altul ( translocaie). Mutaiile de genom provoac variaii ale numrului de cromozomi. Dac sunt afectai numai unii dintre cromozomi mutaia se numete aneuploidie, iar dac sunt afectai toi cromozomii, euploidie. Aneluploizii sunt forme care au un cromozom sau o pereche de cromozomi n plus ori n minus. Astfel pot aprea forme ploisomice (2n+1 = trisomi sau 2n+2 = tetrasomi) sau oligosomice (2n-1 = monosomi oari 2n-2 = nulisomi). Euploizii sunt i ei de dou tipuri. Cei la care numrul cromozomilor este redus la jumtate (n cromozomi) se numesc haploizi, iar cei la care numrul cromozomilor este multiplicat se numesc poliploizi (3n, 4n, 5n, etc.) Plasmamutaiile se datoreaz schimbrii structurii materialului ereditar situat m fara nucelului celulei. n unele situaii pot induce apariia unor caractere utile n procersul de amelior are, spre exemplu androsterilitatea.

7.3. INDUCEREA MUTAIILOR I SELECIA MUTANTELOR.

Mutaiile artificiale, cu care se lucreaz cel mai frecvent n ameliorare sunt provocate cu ajutorul factorilor mutageni. Tratarea materialului biologic cu ageni mutageni fizici. Pentru obinerea unor rezultate bune prin iradiere, este nevoie de o testare prealabil a sensibilitii specifice a formelor ce vor fi supuse tratamentului mutagen, n vederea determinrii dozei necesare pentru a obine o frecven ridicat a mutaiilor i n special a celor cu valoare practic. n afar de doza de iradiere este important de stabilit timpul i condiiile de iradiere. n privina dozelor de iradiere se opiniaz pentru folosirea unor doze mari care s permit supravieuirea doar a maxim 10-20 din plante. Efectul de doz este clar i el determin: frecvena mutantelor; crete odat cu creterea dozei utilizate; numrul indivizilor supravieuitori descrete cu creterea dozei; vitalitatea i fertilitatea plantelor rezultate descrete rapid cu creterea dozelor. Foarte eficace, mai ales pentru modificarea caracterelor cantitative, este iradierea repetat a materialului biologic. Din numeroasele cercetr i efectuate s-au desprins unele concluzii importante a fi cunoscute pentru practic i anume: - temperatura ridicat reduce frecvena mutaiilor genice letale i a translocaiilor n cazul folosirii razelor X;
41

- eficacitatea iradierii crete odat cu creterea coninutului de ap al seminelor; - creterea concentraiei de oxigen sporete numrul mutaiilor, n special al aberaiilor cromozomale; - depozitarea mai ndelungat a seminelor iradiate nainte de a fi semnate, mrete efectul iradierii. Tehnica de aplicare a tratamentului difer n funcie de organul iradiat. Pot fi supuse iradierii semine, inflorescene, muguri, polen sau n doze mici timp ndelungat (iradiere cronic). Cel mai eficace este tratamentul care se aplic seminelor i polenului, pentru c se realizeaz cel mai uor. Seminele pot fi supuse iradierii n stare uscat, umectate sau germinate. Polenul se supune iradierii n pliculee de plastic sau hrtie. La plantele care produc polen puin se iradiaz de obicei florile sau inflorescenele. Perioada optim de iradiere a polenului este cu 4-7 zile nainte de mprtierea polenului. Tratarea materialului biologic cu ageni mutageni chimici. nc de la mijlocul acestui secol, s-a stabilit c unele substane chimice induc mutaii la fel ca i radiaiile ioizate. n prezent, mutagenii chimici sunt preferai deoarece tratamentul se face mai uor, este mai puin costisitor i se evit posibilitile de iradiere i de poluare a mediului. Cele mai eficiente substane chimice mutagene sunt agenii alkilani, etil-metan-sulfonatu (EMS), etilenimina, dietilsulf atul i nitroso-etil- ureea. Toate sunt pronunat cancerigene i de aceea trebuiesc folosite cu maxim pruden. Materialul biologic (semine, muguri, rdcini etc.) se trateaz prin scufundare ntr-o soluie ce conine substana chimic mutagen. Meninerea materialului biologic n soluie trebuie s dureze un timp suficient pentru a asigura infuzia mutagenului n esuturile plantei. Durata tratamentului variaz ntre 2-24 ore n funcie de capacitatea de penetraie a mutagenului. Concentraia exact a soluiei i timpul ct dureaz tratamentul variaz n funcie de organul plantei care este tratat, pH-ul soluiei i postratamentul aplicat. Selecia mutantelor. Dup aplicarea factorilor mutageni populaia obinut trebuie nmulit prin autoploenizare. Plantele primai generaii mutagene sunt heterozigote i din aceast cauz nu se aplic selecie. De asemenea, foarte multe midif ciri din prima generaie nu sunt ereditare, acestea fiind numite radiomorfoze. ncepnd cu generaia a doua poate ncepe selecia, care se desfoar dup modelul unei selecii individuale cu o singur alegere. Selecia se continu i n a treia generaie, dup care se ntrerupe.

NTREBRI: 1.Ce se nelege prin mutaie i care este importana mutaiilor pentru ameliorare ? 2.Care sunt principalele tiprui de mutaii artificiale ? 3.Cum se induc mutaiile utiliznd factorii mutageni fizici ? 4.Cum se induc mutaiile utiiznd factorii mutageni chimici ?

42

CAPITOLUL 8

UTILIZAREA POLIPLOIDIEI N AMELIORAREA PLANTELOR

Poliploidia este o metod prin care se reralizeaz multiplicarea numrului de cromozomi ale unie specii (autoploiploidie) sau cromozomii reunii prin hibridare de la dou specii diferite (aloploliploidie). n cazul autoploiploidiei principaleul efect este mrirea organelor vegetative i o reducere a fertilitii, pe cnd n cazul aloppliploidiei pot aprea specii noi. Poliploidia este o variaie a numrului de cromozomi, respectiv o multiplicare a acestuia. Aceste forme au aprut pe cale natural, dar pot fi create i artificial. Dup originea lor, poliploizii pot fi autopoliploizi i alopoliploizi. Autopoliploidia este tipul de poliploidie rezultat prin multiplicarea setului de baz al unei specii. Ca urmare, fiecare cromozom al genomului speciei autopoliploidie se va gsi n trei, patru sau mai multe exemplare, n funcie de gradul de ploidie, seturile fiind perfect omologe. Alpoliploidia rezult prin hibridare interspecific sau intergenetic urmat de dublarea numrului de cromozomi al hibridului. n acest caz, seturile de cromozomi provin de la specii sau genuri diferite, faptpentru care ele nu manifest omologie sau doar o omologie parial.

8.1. FOLOSIREA AUTOPOLIPLOIDIEI N AMELIORAREA PLANTELOR

43

Datorit multiplicrii seturilor de baz de cromozomi, autoploidia determin profunde modificri morfologice, fiziologice i biochimice care efectueaz nsuirile i caracterele plantelor. Sunt afectate frunzele, florile, tulpina etc. Astfel, la formele poliploide frunzele sunt mai mari, mai groase i prezint modificri n ce privete culoarea, poziia i forma. Tulpina plantelor poliploide este ntotdeauna mai groas iar rdcinile sunt mai mari dect a celor diploide corespunztoare. Florile, fructele i seminele plantelor poliploide sunt mai mari dect la formele diploide, dar adeseantr-un numr mai redus. Formele poliploide prezint un ritm de cretere mai lent, nfloresc mai trziu i au o perioad mai lung de vegetaie. Comparativ cu diploizii, autoploizii au o fertilitate mai redus datorit unor deranjamente n timpul formrii polenului i fecundrii, deranjamente provocate de mperecherea i distribuia anormal a cromozomilor n gamei. Dup numrul multiplicrilor setului cromozomial de baz, autoploiploizii sunt: triploizi (3x), tetraploizi (4x), pentaploizi (5x), hexaploizi (6x), etc. Etapele ameliorrii prin autoploidie Inducerea autoploizilor se face prin mai multe metode (folosindu-se colchicina sau produsul sintetic colcemida, care are efect similar). Colchicina se aplic pe vrfurile de cretere ale plantelor prin udarea cu o soluie apoas, prin stropire cu emulsie sau prin frecare cu o past de lanolin. Tratamentul este eficient cnd se aplic la seminele germinate, la plantule, rdcini sau puncte de cretere, ca de pild la boboci. Pot fi folosite i metode fizice prin care se caut dereglarea diviziunii celulare. Dintre acestea, n trecut s-au folosit ocurile de temperatur i centrifugarea. n perioada actual metoda chimic, de tratare cu colchicin este cea mai eficace Identificarea autopoliploizilor se face n prima generaie dup aplicarea tratamentului. Calea direct de identificare este studiul la microscop i numrarea cromozomilor. Se pot aplica i metode indirecte, bazate pe corelaiile strii de poliploidie cu unele nsuiri morfologice: mrime a frunzelor i florilor, mrime i densitate a stomatelor, mrimea grunciorilor de polen, etc. Formele poliploide se folosesc ca noi soiuri la speciile la care modificrile datorate strii de poliploidie sunt avantajoase. Soiuri de acest tip apar la plantele furajere (trifoi rou) care prezint un foliaj bogat. La secar soirile tetraploide dau producii mai mari pentru c prezint boabe mai mari. Formele cu grad par de ploidie (4x, 6x) se creeaz la plantele care se cultiv i se nmulesc prin semine. Formele cu grad impar de ploidie (3x) sunt forme sterile i intereseaz la speciile la care se dorete obinerea de fructe fr semine. Acestea se obin prin ncruciarea unor forme tetraploide cu forme diploide. Astfel de hibrizi se cultiv la pepene i castravei, via de vie (fructe fr semine) sau la sfecla de zahr (rdcini mari i bogate n zahr)

8.2. FOLOSIREA ALOPOLIPLOIDIEI N AMELIORAREA PLANTELOR

44

Aloploliploizii nsumeaz genotipurile de la dou specii diferite. Aceste forme obinute pe cale artificial sunt, de fapt specii noi. Alopoliploizii au aprut i pe cale natural n umr foarte mare. (exemple de specii aprute pe aceast cale sunt: grul, bumbacul, cartoful, ovzul,etc) Aloploiploizii naturali sunt de dou tipuro, dup gradul de nrudire a speciilor care au contribuit la realizarea lor. Aloploiploizii pot fi genomiali, dac speciile care stau la baza lor au fost total difereniate genetic, sau de segmentaie, dac speciile au avut genomuri omoloage. Cei genomiali prezint fertilitate 100%, pe cnd cei se segmentaie prezint grade diferite de sterilitate sau sunt adaptai la nmulirea vegetativ. Rezultate bune prin aceast cale se obin numai dac cele dou specii sunt suficient de nrudite pentru a se putea hibrida, dar n acelai timp trebuie s fie i suficient de deosebite pentru a nu avea pri asemntoare din genom, n asemenea situaie fiind afectat fertilitatea. Etapele ameliorrii prin alopoliploidie. Prima etap este ncruciarea ntre cele dou specii. Hibridarea se face lundu-se msurile necesare pentru a ajuta realizarea fecundrii, deoarece hibrizii ndeprtai se obin mai greu. A doua etap este dublarea numrului de cromozomi ai hibridului din prima generaie cu ajutorul colchicinei, dup care urmeaz selecia formelor care mbin n mod favorabil caracterele celor dou specii. De regul, dup dublarea numrului de cormozomi urmeaz un proces amplu de ameliorare deoarece unele dintre caracter e trebuie ndeprtate sau mbuntite. ncercrile de acest tip au fost foarte multe. Singura specie creat i ameliorat prin aceast metod sunt triticalele, obinute din gru i secar.

NTREBRI: 1.Ce este poliploidia ? 2.Ce este autoploiploidia i cum poate fi indus ? 3.Ce este aloploiploidia i cum se poate realiza ?

45

CAPITOLUL 9

VERIGILE CMPULUI DE AMELIORARE

Cmpul de ameliorare ete locul unde se desfoar principalele lucrri de creare a noi cultivare. Pentru a se testa valoarea noilor creaii se parcurg mai multe etape, fiecare etap constituind o verig a cmpului de ameliorare. Principalle verigi sunt: cmpul de colecie, cmpul de alegere, cmpul de selecie, cmpul de control i culturile comparative. Procesul de ameliorare este de lung durat i se desfoar n cmp i n laborator, pe parcursul a mai multe etape. Fiecare etap a prosecului de ameliorare necesit o anumit suprafa d eteren n cmp. Acete suprafee asamblate la un loc formeaz cmpul de ameliorare, diferitele etape mai fiind denuzmite verigi ale cmpului de ameliorare. Verigile cmpului de ameliorare difer n funcie de planta ameliorat i de metoda de ameliorare aplicat. Metoda de ameliorare cea mai utilizat este hibridarea, n cazul acestei metode apare i cea mia complex organizare a cmpului de ameliorare. Un proces complet de ameliorare n cepe cu studierea materialului iniial, continu cu aplicarea unie emtode de amelior are i cu selecia materialului care corespunde obiecvtivelor de ameliorar e din variabilitatea creat. n cazul utilizrii hibridrii ca metod de ameliorare, verigile cmpului de ameliorare sunt: cmpul de colecie, mpul de hibridare, cmpul de hibrizi F , cmpul de
1

alegere, cmpul de selecie, cmpul de control i cmpul de culturi comparative. Cmpul de colecie cuprinde materialul iniial de baz necesar ameliorrii plantei l care se lucreaz. Acesta cuprinde populaii locale, soiuri vechi, soiuri amelior ate, specii nrudite cultivate sau din flora spontan. Scopul
46

organizrii acestei verigi este de a evidenia formele valoroase, meninerea i conservarea lor. Materilul iniial se studiaz n privina adaptabilitii i a coportrii caracterelor i nsuirilor principale n condiiile climatice locale. Durata experiemntrii este de trei ani normali din punct de vedere climatic. n timpul vegetaiei se noteaz aspectele principalelor faze de cretere i dezvoltare, nsiirile de rezisten la factori de mediu nefvorabili i la atacul bolilor i duntorilor, iar la maturitate se efectueaz msurtori biometrice asupra principalelor caractere componente ale capacitii de producie. Se pot efectua i analize de calitate a produciei. Pe baza acestor observaii se stabilete valoarea fiecrui material i metoda specific pin care va fi prelucrat n continuare. Materialele valoroase, care vor fi supuse imediat unei metode de ameliorare vor fi trecute n colecia de lucru i se vor nmuli n fiecare an, celelalte se vor trece n colecia de baz, iar nmulirea lor se va realiza numai la intervale de 2-5 ani pentru a fi meninut germinaia seminelor. Numrul forrmelor din cmpul de colecie fiind mare studiul lor se va fce pe parcele mici, cu o suprafa de 3-5 m la plantele semnate n rnduri 2 dese, sau o suprafa necesar pentru minim 25 plante la speciile pritoare. La plantele senate n rnduri dese distana ntre rnduri va fi ma maire dect cea obinuit, de minim 20 cm. Experimentarea se face ntr-o singur repetiie, iar compararea materialului se va efectua fas de un soi martor, care este cel mai valoros soi cultivat n zon. Numrul parcelelor din cmpul de colecie fiind mare, soiul martor va fi amplasat dup fiecare a noua parcel. Cmpul de hibridare cuprinde genitorii stabilii n panul de hibridare. Planul de hibridare se ntocmete dup crietrii precise pentru ca n viitorii hiubrizi s fie reunite ct mai multe caractere i nsuiri valoroase preluate de la formele parentale. Scopul cmpului de hibridare este de efectuare a ncrucirilor i obinerea seminei hibride F .
0

Parcelele cmpului de hibridare au suprafaa de 5-10 m n fucnie de 2 numrul plantelor necesare. Semnatul se efectueaz cu distane ntre rnduri mai mari i crri mai largi ntre parcele. Pentru a asigura nflorirea n acelai timp a formelor parentale i pentru a avea o perioad ct mai lung de timp plante nflorite, cmpul de hibridare se poate semna n mai multe epoci. Cmpul de hibridare se realizeaz ntr-o singur repetie, fr varianta martor. Uneori hibridrtile se pot efectua direct n cmpul de colecie. Cmpul de hibridare poate fi nlocuit cu cmpul de inducere a mutaiilor, sau de consangvinizare, sau de ploiploidizare, n funcie de metoda de ameliorare aplicat. Cmpul de hibrizi F cuprinde hibrizii n prima generaie hibrid
1

obinui n cmpul de hibridare. Hibrizii F sunt supui unei simple nmuliri

1

deoarece selecia nu poate fi aplicat din cauza uniformitii acestei generaii. Compararea hibrizilor se va face cu formele parentale. Pentru aceasta fiecare hibrid va fi semnat pe cte un rnd care va fi intercalat de rnduri cu formele parentale. Prin studiul hibrizilor F i a genitorilor lor se obin informaii asupra
1

homozigoiei genitorilor (n fucnie de uniformitatea hibrizilor) i a determinismului genetic al principalelor caractere. Cmpul de alegere cuprinde populaii hibride segregante (F -F ) sau alte
25

populaii cu variabilitate natural sau creat (prin mutagenez, poliploidie sau alte metode). Scopul cmpului de alegere este de a prtelucra variabilitate prin extragere de elite.
47

Elita este unitatea selectiv fiind reprezentat de o plant care ntrunete complexul de nsuiri i caractere corespunztoare obiectivelor de ameliorare. Cmpul de alegere se organizeaz ntr-o singur repetiie, pe parcele cu mrimi diferite n fucnei de cantitatea de smn existent. La plantele semnate n rnduri dese, semnatul de face mai rar pentru a evidenia forte bine fiecare individ i pentru a oferi plantelor posibilitatea de a-i manif esta maximul potenialului productiv. Alegerea elitelor se face dup caracterele fenotipice, iar n laborator vor supuse unor msurtori biometrice i analize de calitate. La plantele autogame este de dorit ca elitele s fie plante homozigote, ns acest lucru nu poate fi cunoscut n momentul reinerii. Starea genotipului se verific pin studierea descendeneilor plantelor elit. Cmpul de selecie cuprinde descendenele plantelor elit obinute prin semnarea seminelor elitelor. Descendena esre reprezentat de totalitatea indivizilor rezultai din smna unei elite. Scopul cmpului de selecie este de a verifica genotipul elitei i de a stabili valorea descendenei comparativ cu soiurl martor. Dac descendena este uniform nseamn c provine de la o elit homozigot, ca urmare descendena va fi stabil. n cazuzl n care descendena este superioar soiului martor ea se va reine, n caz contrar se va elimina. Fiecere descenden se va semna pe cte un rnd, distana ntre rnduri fiind de cel puin 40 cm. Pentru a se realiza o uoar comparare cu martorul, acesta va fi amplasat tot din 10 n 10 rnduri. Descendenele se grupeaz n straturi a cte 100 de rnduri. Observaiile n perioada de vegetaie se continu, iar la maturitate se apreciaz potenialul productiv prin msurtor i biometice. Se vor reine descendenele superioare martorului i foarte uniforme. Cmpul de control cuprinde cele mai valoroase descendene reinut din cmpul de selecie. Studiul lor se va efectua pe parcele experimentale cu suprafaa minim de 5 m , n una sau dou repetiii. Pentru prima dat se va 2 efectua o testare a capacitii de producie n condiii tehnologice obinuite, respectndu-se distana ntre rnduri i celelalte recomandri ale tehnologiei. Se vor continua observaiile n vegetaie, iar la maturitate se va stabili capacitatea de producie. Descendenele mai productive dect martorul vor fi reinute. Dac asupra unor descendene exist dubii n privina valorii, ele mai pot fi pstrate nc un an n cmpul de control. Culturile comparatrive sunt verigile superioare ale procesului de ameliorare. Descendenele care ajung n culturi comparative se contureaz ca viitoare soiuri i sunt denumite linii la plantele autogame, familii a plantele alogame i clone la plantele cu nmulire vegetative. Linia este descendena unei plante autogame homozigote i este constituit din indivizi cu aceiai constituie genetic. Familia este descendena unie plante alogame i cuprinde indivizi asemntori dar aparinnd mai multor biotipuri. Clona este descendena unei elite la plantele cu nmulire vegetativ i cuprinde indivizi identici din punct de vedere fenotipic i genotipic. Testarea n culturi comparative se desfoar n mai multe etape, n funcie de cantitatea de smn existent. Culturile comparative sint de trei tipuri: de orientare, de concurs i de producie. Culturile comparative de orientare se organizeaz pe parcele cu suprafaa de nimim 5 m , n cel puin trei repetiii, pe o durat de trei ani. 2 Principlul scop este stabilirea capacitii de producie. Rezultatele de producie se prelucreaz statistic. Dup ncheierea ciclului de experimentare se vor reine
48

liniile care corespund n privina nsuirilor morfologice i de rezisten, iar din punct de vedere a capacitii de producie depesc producia soiului martor cu un spor de minim 10% i asigurat din punct de vedere statistic. Culturile comparative de concurs se organizeaz cu o precizie mai mare. Parcelele vor avea suprafaa de minim 10 m , numrul repetiiilor va fi 2 de cel puin 5, iar durata experiemnatrii va fi tot de 3 ani. Pentru a testa adaptabilitatea liniilor, culturile compaartive de concurs se vor organiza n cel puin trei localiti situate n zone pedo-climatice diferite. Dup aceast etap a testrii, cele mai valoroase linii vor fi propuse spre omologare ca soiuri noi la Institutul de Stat pentru Testarea i nscrierea Soiurilor (I.S.T.I.S.). Culturile comparativ de producie se organizeaz n paralel cu culturile comparative de concurs. Se organizeaz pe parcele mai mari (0,5-5 ha) n cel mult dou repetiii. Scopul lor este de a se face o testare ct mai apropiat de condiiile unie culturi de producie i de a se realiza i o nmulire a a viitoarelor soiuri. Pot fi organizate i parcele speciale de nmulire pentru liniile cele mai valoroase, ca n cazul omologrii s existe suficiente cantiti de smn pentru a fi puse la dispoziia cultivatorilor. Fa de aceast prezentare a cmpului de ameliorare pot aprea unele modificri, n fucnie de metoda de ameliorare adoptat. Oricare ar fi metoda dup care se lucreaz verigi obligatorii sunt cmpul de colecie, cmpul de alegere, cmpul de selecie, cmpul de control i culturile compaartive. Cmpul de hibridare se va nlocui cu un cmp corespunztor aplicrii metodei de creare a variabilitii: mutagenez, poliploidie sau chiar consangvinizare.

NTREBRI: 1.Care sunt verigile unui cmp de ameliorare ? 2.Ce este elita ? 3.Ce este linia, familia i clona ? 4.Cu cine se face compararea meterialului procesul de ameliorare ?

49

CAPITOLUL 10

METODE NECONVENIONALE FOLOSITE N AMELIORAREA PLANTELOR

Metodele neconvcenionale sunt metode specifice biotehnologiilor i sunt recent aprute n procesul de ameliorare. Avatajul lor este c pe suprafee mici se poate amnipula un numr marte de genotipuri. Asupra culturilor inh vitro pot fi aplicate metode asemntoare celor clasice (hibridare somatic, mutgenez in vitro, poliploidizare). Tehnici ale culturilor in vitro pot fi folsoite i pentru nmulirea formelor valoroase i chiar nlocuirea producerii de smn de tip clasic.

10.1. CONSIDERAII GENERALE

Speciile vegetale, aceste extraordinare i complexe structuri biologice au fost n fapt proiectate printr-un singur proces evoluia natural. Evoluia plantelor pe cale natural s-a desfurat n condiiile luptei pentru existen, fiind avantajai indivizii i speciile cu o capacitate sporit de adaptare la condiiile de mediu. n cazul plantelor de cultur, evoluia acestora a fost ns marcat puternic de intervenia omului, care prin activitatea de ameliorar e a schimbat complet sensul evoluiei naturale. Prelund pe seama sa nmulirea speciilor cultivate omul le-a modificat treptat, dar ntr-un timp foarte scurt comparativ cu ceea ce natura a realizat n mii i chiar sute de mii de ani, n direcia satisfacerii nevoilor sale mereu crescnde de hran, materii prime, combustibil, etc. Din punct de vedere istoric, ameliorarea plantelor a fost, o perioad foarte lung, un proces pasiv legat puternic de consecinele seleciei naturale i
50

abia dup apariia geneticii ca tiin, s-au dezvoltat programe tiinifice active i eficiente de mbuntire a speciilor cultivate. Rezultatul activitii de ameliorare s-a concretizat ntr-un numr extrem de mare de soiuri locale, soiuri cultivate i hibrizi comerciali obinui prin folosirea unor metode denumite astzi convenionale. Ameliorarea convenional (clasic) se bazeaz n fapt pe exploatarea prin selecie ( la nceput empiric i apoi tiinific) a variabilitii genetice naturale i artificiale a speciilor culturale. Ea dispune de o metodologie adecvat pentru plantele autogame, alogame i cu reproducere vegetativ n ce privete inducerea unei variabiliti genetice ct mai largi, selecia genotipurilor cu caracteristici dorite, nmulirea descendenelor valoroase, cu asigurarea omogenitii i stabilitii lor. n fapt, selecia i hibridarea au reprezentat metodele de baz folosite n ameliorarea convenional n secolul trecut, urmrindu-se introducerea n genotipurile valoroase a unor caractere (gene) dorite care provin de la forme cultivate sau slbatice nrudite. Cererea mereu crescnd de hran, ca urmare a creterii explozive a populaiei mai ales dup mijlocul secolului trecut, a impus gsirea unor noi modaliti, mai eficiente, altele dect cele aparinnd agriculturii tradiionale. Asistm, prin urmare, la dezvoltarea unui alt tip de agricultur, cea industrial, bazat pe revoluia tehnico-tiinific n plin desfurare care s-a caracterizat prin folosirea mecanizrii i implicarea masiv a chimizr ii n tehnologiile de cultur. S-au folosit masiv ngrminte chimice, mai ales cu azot, care s asigure o nutriie optim plantelor dar i pesticide care s protejeze culturile de inamicii lor, buruienile i duntorii vegetali i animali. Aceste deosebite condiii asigurate deveneau eficiente doar prin folosirea unor genotipuri capabile s le valorifice ct mai complet, respectiv prin performane remarcabile n special n privina capacitii de producie. Ameliorarea convenional a realizat astfel de genotipuri superioare, introduse n cultur ncepnd cu anii 60, mai ales la cereale i unele plante tehnice. Ele au avut un impact deosebit asupra randamentelor agricole i au stat la baza aa zisei revoluii verzi, care l-a avut ca protagonist pe Norman Borlang, laureat al Premiului Nobel. A fost n fapt i perioada de vrf a ameliorrii convenionale. Agricultura industrial, implicnd i cultivarele superproductive, a contribuit n bun msur la atenuarea deficitului de hran al omenirii, dar prin cerinele ridicate i costisitoare devine tot mai puin eficient i mai ales extrem de poluant. Discutnd despre reuitele ameliorrii clasice se impune i menionarea limitelor ei. n fapt, ea este o variant derivat a evoluiei naturale. ntr-o prim etap (empiric) ea a artat cum rezultatele obinute prin evoluie natural pot fi mbuntite i apoi (etapa tiinific) a demonstrat c nsuirile complexe poligenice ale ntregului organism pot fi optimizate, fr a avea ns informaii cu privire la genele care le determin. Ameliorarea clasic este deci un proces dovedit de optimizare a ntregului genom al plantei. Ea este un proces simplu, recursiv, care implic mai ales recombinarea de ADN provenind de la genomuri nrudite, urmat de selecia urmailor i nmulirea celor cu proprieti mbuntite. Obinerea unui nou cultivar prin tehnicile convenionale de ameliorare necesit ns: timp ndelungat; costuri ridicate; examinarea i trierea unui volum uria de material biologic n cmp i laborator. i nu n ultimul rnd

51

trebuie menionat faptul c rezultatele ntregii activiti de ameliorare rmn incerte pn la finalul acestei activiti. nceputurile unei noi abordri n metodologia de ameliorare a plantelor se fac simite mai ales dup 1970, cnd datorit unor rezultate remarcabile obinute n biologia molecular, genetic i informatic se contureaz i se dezvolt biotehnologiile moderne. Biotehnologia, conform definiiei OCDE include orice tehnic ce presupune utilizarea unor organisme vii sau unor componente ale acestora pentru a ameliora plante sau animale, pentru a obine i modifica produse sau pentru a produce microorganisme cu utilizri speciale (Elena Marcela BADEA, 2001). Implicarea biotehnologiilor moderne reprezint fr nici o exagerare un adevrat eveniment revoluionar n metodologia de ameliorare, eveniment care a determinat propulsarea acestei tiine ntr- o nou etap cunoscut sub numele de ameliorare neconvenional. Nu trebuie s se neleag c de acum trebuie s se renune la tot ceea ce nseamn ameliorare convenional, dar trebuie subliniat c spre deosebire de metodele convenionale, care se bazeaz pe manipularea ntregului genom pe baza reproducerii sexuate a plantei, biotehnologiile moderne dezvolt tehnologii de manipulare genetic la nivel molecular i prin urmare ele aduc un potenial unic de suplimentare a metodelor convenionale de ameliorare a plantelor. Implicarea biotehnologiilor moderne se face resimit nu doar n obinerea de noi genotipuri cu caracteristici performante ci i n multe probleme majore precum: diminuarea inputurilor industriale costisitoare i poluante n agricultur; mbuntirea strii de sntate a populaiei; pstrarea diversitii biologice; conservarea i ameliorarea mediului etc. (Maria BOGDAN, 2000). Aportul biotehnologiilor moderne la dezvoltarea metodologiei de ameliorare s-a concretizat ntr-o prim etap prin punerea n valoare a unor ipoteze mai vechi privind potenialitile celulei vegetale, ct i a unor tehnici care au permis descoperirea capacitii celulelor i esuturilor prelevate de la plantele superioare de a reconstitui, n afara corpului plantei, prin cultura pe mediu artificial in vitro, organismul original. A trebuit s acceptm faptul c plantele pot fi nmulite i altfel, nu doar prin smn sau din unele organe vegetative, majoritatea specializate. Culturile in vitro au gsit ntr-un timp foarte scurt numeroase aplicaii practice n ameliorarea multor specii de cultur printre care: multiplicarea genotipurilor valoroase; propagarea stocurilor genetice libere de viroze; conservarea germoplasmei. n plus, variaia genetic manifestat la plantele regenerate din culturi in vitro (denumit variabilitate somaclonal) a putut fi folosit pentru obinerea unor genotipuri valoroase. ntr-o urmtoare etap i-a fcut apariia aa numita tehnologie a genelor pentru a desemna biotehnologiile moderne cu implicaii directe n ameliorarea plantelor: genomica; ameliorar ea molecular; transgeneza (ingineria genetic). Cu ajutorul acestor noi tehnologii, care diversific metodologia de ameliorare, se pot realiza: secvenializarea genomurilor; hrile genetice; selecia asistat de markeri genetici; transformarea genetic sau transgeneza. Toate aceste noi metode i tehnologii sunt deja cunoscute drept metode neconvenionale de ameliorare i ele prezint o superioritate evident fa de cele convenionale n ceea ce privete sursa de gene; gradul de modificare i
52

posibilitatea de caracterizare a rezultatului obinut (WOODSON i RUSSELL, 2003). Astfel, n cazul aplicrii metodelor convenionale pot fi folosite ca surse de gene de interes (care determin caractere utile) numai speciile nrudite, compatibile sexual cu specia care urmeaz a fi ameliorat. Prin metode neconvenionale, sursele de gene de interes sunt reprezentate de oricare organism (procariot sau eucariot). Prin metodele neconvenionale se poate transfera doar gena (sau cteva gene) de interes. Aceasta nseamn ctig considerabil de timp, comparativ cu abordarea clasic de transfer, respectiv prin hibridare cu printele donator deoarece hibridul rezultat motenete att genele dorite dar i nedorite fiind necesare numeroase backcrossuri repetate urmate de selecie pentru eliminarea caracterelor nedorite. Rezumnd, metodele neconvenionale de ameliorare sunt n stare s controleze rezultatele i s caracterizeze efectul cu foarte mare acuratee, comparativ cu cele convenionale. Dar ca n cazul tuturor ideilor noi, dup cum subliniaz SAVATTI (2003) i n cazul biotehnologiilor trebuiesc emise aprecieri raionale privind oferta lor de complementaritate util la procesele convenionale privind manipulrile genetice ale materialului de ameliorare. Este esenial ca amelioratorul s neleag posibilitile i limitele pe care le ofer biotehnologiile, de aa manier nct s permit implicarea cu succes a acestora n perfecionarea procedeelor de ameliorare existente.

10.2. CULTURILE DE CELULE I ESUTURI I FOLOSIREA LOR N AMELIORAREA PLANTELOR

Cultura i regenerarea plantelor in vitro Cercetrile efectuate n primele decenii ale secolului trecut de ctre HABERLADN, WHITE, GAUTHERET, NOBECOURT .a. au permis evidenierea capacitii unor fragmente detaate din esuturile plantelor de a genera prin cultur pe medii de cretere adecvate i n condiii aseptice, ntregul organism. Aceast capacitate denumit totipoten se bazeaz pe faptul c fiecare celul somatic conine aceeai informaie genetic ca i zigotul, respectiv celula embrionar iniial i prin urmare potenialul expresiei tuturor proprietilor unui organism. Culturile de esuturi se iniiaz n general din fragmente de esut multicelular, care se numesc explante i care se obin din planta vie. Explantele pot proveni dintr-un spectru larg de esuturi ale plantelor incluznd: frunza; tulpina; rdcina; peiolul; hipocotilul; cotiledonul; embrionul; diferitele meristeme. Pot fi folosite pentru regenerarea plantelor i antere, polen, ovar, ovule, celule. Dar, potenialul i modul de regenerare al diferitelor organe sau esuturi ale plantelor sunt foarte diferite. Aceste caracteristici sunt cunoscute sub numele de competen, respectiv potenialul endogen al unui anumit esut sau celul de a se dezvolta ntr-un mod particular. Explantele pot conine celule nedifereniate (apex, muguri, meristeme) sau pot proveni din esuturi difereniate, formate din celule specializate pentru anumite funcii i care i-au pierdut capacitatea de a se divide. n condiiile de cultur in vitro celulele definitivate structural i funcional i pierd specializarea format n timpul proceselor care determin diferenierea i regreseaz spre o stare simpl, embrionar, recptndu- i
53

capacitatea de a se divide. Aceast nsuire se numete dedifereniere i ea este foarte diferit n funcie de specie, organ, esut. Ca urmare a dediferenierii explantul i pierde structura, transfomnduse dup cca 4-8 sptmni, datorit proliferrii celulelor dedifereniate, ntr- un esut neorganizat numit calus. Calusul poate fi meninut timp ndelungat sau poate fi multiplicat rapid (prin divizare) prin subcultivare pe medii proaspete, n condiii aseptice, la lumin slab i temperaturi de cca 25 C. Subcultivarea 0 repetat poate determina diminuarea capacitii de regenerare i chiar modificarea stabilitii genetice a materialului vegetal. Calusul agitat n mediul lichid d natere suspensiilor celulare. Celulele cultivate n mediu lichid se comport ca i cele crescute pe substrat semisolid, adic se pot menine ca atare prin subcultivare, pot regenera plante iar prin trecerea suspensiei pe mediu cu agar, reiniiaz cultura de calus. Desigur, nu toate celulele care alctuiesc calusul sau suspensia celular sunt totipotente. Cele care posed aceast capacitate (celule sau grupuri de celule) pot evolua organogen sau pot forma mase proembriogene, respectiv celulele din aceste structuri pot funciona similar zigoilor. Manifestarea totipotenei celulare, dup cum subliniaz TORREY (1973), implic att dediferenierea ct i rediferenierea. Rediferenierea este procesul prin care o colonie de celule nceteaz s creasc nedefinit i se organizeaz n vederea formrii unor esuturi specializate, componente ale organelor vegetale i plantei ca ntreg. Regenerarea plantelor din celule i esuturi cultivate in vitro se realizeaz deci n dou moduri, i anume prin organogenez somatic i embriogenez somatic. Organogeneza somatic const ntr-un proces de dedifereniere a calusului, n urma creia se poate forma n masa celular primordii de muguri i rdcini. Prin dirijarea balanei hormonale n mediu de cultur, din muguri se formeaz tulpinie (caulogenez) iar ulterior n poriunea bazal se poate induce formarea rdcinilor (rizogenez). Formarea plntuelor se poate iniia i prin inducerea lstarilor adventivi sau mugurilor axilari, care pot s apar din calus sau direct din explant. Dup ce lstarii adventivi sunt formai, cultura este transferat pe un mediu de cultur de nrdcinare pentru a induce formarea rdcinilor i apoi a plantelor. Embriogeneza somatic este un proces care const n iniierea formrii de embrioni din calus, din celule izolate sau agregate celulare n suspensii. Embr ionii somatici, asemenea embrionilor formai prin unirea sexuat a gameilor, au att rdcini ct i apexul lstarilor i pot dezvolta direct plante. Pn n prezent inducerea formrii de embrioni somatici a fost realizat doar la unele specii vegetale. Organogeneza i embr iogeneza somatic pot fi: directe, dac respectivele procese sunt parcurse de celule ale explantelor, fr s mai fie parcurs faza de calus; indirecte, dac se intercaleaz i faza de calus sau suspensie celular. Pentru inducerea diviziunii celulare, citodiferenierii i morfogenezei, explantele prelevate se plaseaz n recipiente de sticl sau plastic, cu respectarea regulilor culturilor in vitro a microorganismelor. Se asigur: - mediu de cultur difereniat adecvat, care s pun la dispoziia celulelor sau esuturilor toi factorii pe care- i furnizeaz ntreaga plant. Constituenii mediului sunt: ioni organici (macro i microelemente); sursa de
54

carbon (sucroz, ocazional glucoz); nitrogen redus (azot organic, aminoacizi, etc.); vitamine (tiamin, kinetin); regulatori de cretere precum auxine (IAA, IBA, NAA), citochinine, gibereline. Regulatorii de cretere sunt folosii pentru realizarea diviziunii celulare i regenerrii. O concentraie ridicat de auxine favorizeaz formarea rdcinilor dar suprim formarea lstarilor, n timp ce o concentraie ridicat de citochinine favorizeaz formarea lstarilor dar inhib iniierea rdcinilor. Giberelinele ajut la creterea organelor deja formate. n natur, diviziunea celulelor este determinat de eliberarea factorilor endogenetici de cretere, n spe auxina, de aceea adugarea auxinei (2,4D sau NAA) in vitro deter min formarea calusului. Trebuie pstrat ns un echilibru ntre auxine i citochinine. Cea mai larg folosit formul pentru un mediu de cultur este cea preconizat de Murashige i Skoog, dar pentru anumite specii sau obiective ea poate fi modificat. Mediul este n general solidificat prin adugarea agarului, dar cteva specii de plante pot fi cultivate i n mediu lichid, n care coninutul de oxigen este mult mai sczut dect n aer. Aeraia poate fi generat prin agitaie mecanic, utiliznd agitatoare. Mediul de cultur este ajustat n mod normal la un pH 5-6; - asepsie total a mediului de cultur, a explantelor care se inoculeaz, a recipientelor, instrumentarului etc., pentru a feri cultura de contaminare cu bacterii saprofite i fungi; - climat controlabil n privina luminii, temperaturii, umiditii care s permit incubarea, diviziunea i morfogeneza. Aplicaii ale culturilor de celule i esuturi vegetale n ameliorarea plantelor i multiplicarea genotipurilor valoroase Cultura in vitro a unor specii agricole i horticole reprezint, dup cum evideniaz ARDELEAN i colab..(1995), primul exemplu de implicare a cuceririlor biologiei moleculare n ameliorarea plantelor. * Micropropagarea . Termenul definete nmulirea in vitro a plantelor i reprezint o form de multiplicare vegetativ. Acest mod de nmulir e permite obinerea rapid a unui numr impresionant de indivizi identici din punct de vedere genetic. Micropropagarea se poate face pe ci diferite i anume: formarea lstarilor adventivi; lstrire axilar multipl i embr iogenez somatic. Foarte important de subliniat este i faptul c plantele obinute prin cultur in vitro, fiind copii conforme cu planta mam, alctuiesc o cultur cu o mare uniformitate, ceea ce este mai greu de realizat prin procedeele tradiionale. Propagarea prin culturi de esuturi nu poate fi folosit practic pe scar larg la plantele agricole care produc smn sau n cazul n care suprafee mari trebuiesc plantate, din cauza costurilor prea mari de transplantare a plantulelor regenerate. n schimb, exist un larg potenial i rezultate deosebite la multe alte specii floricole si ornamentale care produc smn puin (Anthurium, Pelargonium, Begonia, Freesia, Chrysanthenum, etc), precum i la specii horticole (cartof, cpun, etc). Sunt multiplicate in vitro n msur important, numeroase specii de arbuti ornamentali, pomi i arbuti fructiferi dar i arbori forestieri. Cea mai avansat aplicare comercial s-a realizat la orhidee

55

* Embriogeneza somatic i smna artificial . Embriogeneza somatic constituie modalitatea cea mai eficient de accelerare a micropropagrii. Utilizndu-se calus, pe un mediu lichid este agitat, celulele care formeaz conglomerate nedifereniate se disperseaz i evolueaz datorit mediului nutritiv, formnd embrioni ntr-un timp relativ scurt. Prezentnd primordii cotiledonale i un mugure central, acetia nu difer cu nimic de un embrion natural coninut de o smn. Producerea de semine artificiale. ntr-o perspectiv mai mult sau mai puin ndeprtat, apare posibilitatea crerii seminelor artificiale. S-a pornit de la ideea ncapsulrii embrionilor somatici ntr-un mediu nutritiv i ntr- o membran permeabil biodegradabil care va permite seminei artificiale s germineze n sol i s formeze o nou plant, copie a plantei de la care a fost prelevat explantul de origine. Principiul este simplu i pus la punct sub aspect teoretic. * Propagarea stocurilor genetice libere de viroze . Propagarea clonal prin culturi de esuturi meristematice, care a devenit o metod convenional de multiplicare la unele specii (orhidee, plante horticole etc.), are un avantaj decisiv care const n aceea c plantele rezultate sunt sntoase, nefiind atacate de virui sau ali ageni patogeni. Virusurile sunt prezente obinuit la speciile cu reproducere vegetativ i nu pot fi combtute pe cale chimic, precum bacteriile i ciupercile. Prezena virusului este foarte mare n frunzele i tulpinile plantelor i este mic sau absent n esuturile meristematice aprute recent. Este clar c, efectund clonarea din explantele vrfurilor de meristeme, se regenereaz plante libere sau aproape libere de viroze. * Pstrarea i schim bul de germoplasm . Pstrarea germoplasmei pe termen lung este necesar pentru procesul de ameliorare, pentru situaii n care se cere o multiplicare rapid a materialului stocat i pentru schimburile internaionale de materiale genetice. Ea se poate realiza n condiiile deosebit de favorabile prin folosirea culturilor in vitro. n cazul propagrii culturilor care se nmulesc vegetativ, metodele in vitro sunt extrem de valoroase pentru c un numr mare de clone poate fi pstrat ntr- un spaiu relativ redus, n condiii libere de boli, cu o vitez foarte ridicat de multiplicare att pentru plantele de cultur anuale ct i pentru cele lemnoase perene. Comparativ, prin folosirea metodelor tradiionale, aceste plante, n special cele lemnoase necesit spaii foarte mari pentru pstrare i sunt vulnerabile la boli. Perioada de pstrare poate fi prelungit prin subculturi de rutin. Acest mod de prezervare pe termen lung a genotipurilor valoroase este cel mai sigur i ieftin i nu necesit echipamente costisitoare. * Avantajele i dezavantajele micropropagrii, comparativ cu metodele convenionale de ameliorare i producere de material de reproducere. Cultivarea in vitro a materialului vegetal ( esuturi meristematice, celule, embrioni somatici) prezint numeroase avantaje i anume: - asigur o rat de multiplicare ce nu poate fi atins de nici una dintre metodele tradiionale. Prin aceast modalitate, la multe specii de cultur, n special plante ornamentale, pomi i arbuti fructiferi i arbori, se asigur multiplicarea n mas i rapid a noilor cultivare, ceea ce poate permite chiar schimbarea rapid a sortimentului existent;
56

- asigur meninerea i nmulirea unor genotipuri dificil sau imposibil de nmulit prin metode convenionale, precum cele heterozigote, autoincompatibile, androsterile sau la care seminele germineaz foarte slab sau sunt incapabile de germinare; asigur material de reproducere liber de viroze i n unele cazuri i de micoze; - permite stocarea materialului n condiii relativ facile ceea ce face posibil desfurarea produciei oricnd n timpul anului, eliminnd dependena nmulirii de sezonul optim i de fenomenele de laten; - permite prezervarea stocurilor genetice n spaii foarte restrnse i pe perioade lungi fr pericole de contaminar e cu ageni patogeni. Alturi de avantaje, micropropagarea aduce i unele dezavantaje. Ele sunt minuios inventariate de Dorina CACHIA (1987). Dezavantajul cel mai important pentru ameliorare este c propagarea clonal avantajeaz rspndirea n cultur a unui numr redus de clone sau chiar de culturi monoclonale, ceea ce conduce la o srcire genetic a speciilor de cultur, respectiv la vulnerabilitate genetic. n astfel de situaii apare pericolul selectrii naturale de duntori care pot decima n scurt timp exemplarele unei clone. De aceea, se recomand cultivarea concomitent a mai multor clone (8-10). Ca orice nou metod i micropropagarea este apreciat n ultim instant prin eficiena ei economic, desigur cu referire la producia la nivel industrial. Posibilitile de obinere i selecie a genotipurilor valoroase prin folosirea metodelor in vitro Obinerea de noi genotipuri se poate realiza i prin metode in vitro, prin folosirea variabilitii celulelor somatice sau a metodelor sexuate i parasexuate in vitro (pentru eliminarea barierelor naturale care mpiedic hibridarea dintre genotipuri ndeprtate filogenetic). * Variaia somaclonal i utilizarea ei n ameliorarea plantelor . Obinuit, plantele care rezult prin cultura in vitro sunt identice fenotipic i genotipic cu cele din care provin. S-a observat totui la multe caractere, indiferent de determinismul lor genetic, o variabilitate larg. Ea a fost denumit de LARKIN i SCOWCROFT (1981) variabilitate somaclonal, deoarece apare n celulele somatice. Acest tip de variabilitate este indus n timpul proliferrii in vitro a celulei i astfel apare variaia la cultura de celule i esuturi. Variaia poate fi att recesiv ct i dominant i cnd cultura implic mutaia unei gene, schimbarea n structura i numrul de cromozomi este genetic, adic se poate transmite sexuat sau se menine la mai multe generaii obinute prin multiplicare vegetativ. Variaia poate fi epigenic, de obicei instabil i apare ca rezultat al modificr ii expresiei genelor. Variaia somaclonal afecteaz deopotriv att caracter ele calitative ct i cele cantitative. Au fost identificate astfel: variaii somaclonale care au determinat modificr i ale unor caractere cantitative (reducerea taliei, prelungirea maturitii, creterea numrului de tulpini, modificarea spicului etc.); altele care au indus rezisten la unele boli cum ar fi: Phytophthora infestans i Fusarium oxisporum la cartof, Helminthosporium la porumb, sau rezistena la erbicidare, stres salin i toleran la aluminiu. Chiar dac aceste forme aduc avantaje, adesea folosirea lor n ameliorare este limitat din cauza efectelor sinergice asupra altor caractere, expresiei instabile n medii diferite i transmiterii genetice necunoscute n generaiile urmtoare

57

* Obinerea de form e recombinate prin hibridare sexuat i parasexuat in vitro. Numeroasele eforturi fcute pentru obinerea de hibrizi ndeprtai (interspecifici i intergenerici) au fost n cea mai mare msur fr rezultat din cauze bine cunoscute i anume: intersterilitatea cauzat de incompatibilitatea la fecundare a formelor parentale (care determin avortarea zigoilor sau lipsa de viabilitate a embrionilor); sterilitatea hibrizilor datorit neomologiei i neconjugrii cromozomilor n meioz. Culturile in vitro de celule i esuturi asociate hibridrii nltur multe din aceste piedici permind astfel recombinarea genotipurilor aparinnd unor specii de plante care nu pot fi hibridate sexuat n manier convenional. Astfel, devine posibil obinerea unor genotipuri recombinate, atunci cnd genitorii nu se pot hibrida sexuat, problema ncrucirii fiind rezolvat prin metode sexuate i parasexuate in vitro. - Metode de hibridare sexuat in vitro. Acestea pot fi folosite cnd exist bariere de incompatibilitate prezigotice (nainte de fecundare) sau postzigotice (dup fecundare). Polenizarea in vitro i fecundarea. Metoda const n recoltarea ovulelor sau ovarelor nefecundate, cultivarea lor pe un mediu nutritiv n condiii aseptice i polenizarea lor prin pudrare cu polen proaspt. Tuburile polinice penetreaz peretele ovulului permind polenizarea acestuia. Cultura de embrioni imaturi (embr iocultura). Cultura embrionilor imaturi se aplic n cazul existenei barierelor postzigotice la hibridrile ndeprtate care fac s eueze dezvoltarea embrionului datorit incompatibilitii dintre endosperm i embr ion fapt ce determin avortarea embrionului hibrid. - Hibridarea parasexuat in vitro (hibridarea somatic folosind tehnica protoplatilor). Metoda se refer la fuziunea protoplatilor plantelor diferitelor specii i regenerarea de plante hibride din protoplatii fuzionai. Procesul poate fi utilizat n ameliorarea plantelor pentru a forma un hibrid prin fuzionarea celulelor somatice, n cazul speciilor la care nu se pot obine semine prin hibridrile sexuate interspecifice. Fuzionarea celulelor somatice este ngreunat de prezena membranei celulare pecto-celulozice. Aceast constatare i-a determinat pe cercettori s elimine peretele celular pentru a obine celule lipsite de membran, respectiv protoplati. Protoplatii se izoleaz frecvent din frunze, apexul vegetativ, rdcini, nodozitile rdcinilor la plantele leguminoase, microspori, esuturi cultivate in vitro sau suspensii de celule. Mezofilul frunzei rmne cea mai utilizat surs de obinere a protoplatilor. Pe medii de cultur adecvate protoplastul reconstituie relativ repede peretele pectocelulozic i intr n meioz, dnd natere la microcolonii din care rezult calus. Din protoplatii izolai s-au putut regenera plante ntregi la circa 50 specii. Cele mai bune rezultate s-au obinut la specii din genul Brassica, Nicotiana, Petunia, Solanum. Fusiunea de protoplati. Protoplatii, spre deosebire de celulele vegetale complete (cu perete celular) pot fuziona. Aceast constatare a dus la ideea fuziunii protoplatilor de la dou specii diferite care nu se pot Metoda de fuzionare a protoplatilor prezint mai multe etape pe care le prezentm n continuare. Mai nti este necesar s se obin protoplati de la speciile care dorim s obinem hibrizi somatici.

58

Apoi, suspensiile de protoplati provenind de la cele dou specii se amestec i se centrifugheaz n prezena unui agent fuzigenic, n mod obinuit polietilen-glicol (PEG), pentru a favoriza fuziunea acestora. Primele fuziuni de protoplati, s-au realizat la Petunia, de POWER i colab. (1976) n Anglia i la Nicotiana de ctre CARLSON i colab. (1972, 1975) n SUA. La tutun s-a obinut un hibrid somatic ntre Nicotiana galuca (2n =24) i N.langsdorfii (2n=18), specii diferite prin forma frunzelor, talia plantelor .a. Plantele rezultate au avut un numr de cromozomi diferit, dar s-a gsit o plant la care 2n=42 cromozomi, prin urmare ntregul set cromozomal de la cele dou specii. Hibridul obinut a fcut dovada posibilitilor de realizare a hibridrilor somatice ntre dou specii care nu pot fi ncruciate sexuat. O dorin veche, obinerea unui hibrid ntre tomate i cartof, nu este posibil pe cale sexuat, datorit incompatibilitii totale ntre cele dou specii ce aparin familiei Solanaceae. MELCHERS (1978) a reuit s obin prin fuziunea protoplatilor o specie sintetic, POMATO, care posed cromozomii i citoplasma ambelor specii. Dei realizarea acestei specii sintetice nu are nc valoare agronomic, ea demonstreaz posibilitile de obinere a unor plante hibride cu caractere valoroase i chiar specii noi sintetice, n viitorul nu prea ndeprtat pe aceast cale .

10.3. INGINERIA GENETIC I IMPLICAIILE SALE METODOLOGICE N AMELIORAREA PLANTELOR

Ameliorarea convenional a plantelor a practicat manipularea genomic sau subgenomic (cromozomi sau segmente de cromozomi) folosind hibridarea i ingineria cromozomal. Din aceast cauz metodele convenionale de manipulare genetic sunt ncete, relativ incerte i se pot aplica n deosebi la speciile care se hibrideaz sexuat. Prin aceste metode se transfer n descenden pe lng gena dorit i alte gene, dintre care multe nedorite. Deosebitele rezultate obinute n ultimele decenii ale secolului al XXlea n domeniul biotehnologiilor moderne au condus la configurarea unui ansamblu de tehnici care face posibil modificarea patrimoniului ereditar al unei celule/organism prin manipularea materialului genetic la nivelul moleculei de ADN i care poart numele de inginerie genetic. Manipularea materialului genetic la nivelul moleculei de ADN se realizeaz prin tehnici speciale in vitro i permite asocierea altor secvene de nucleotide. Din aceast cauz procesul se mai numete i tehnologia ADN recombinat. Transducia este procesul prin care transferul ADN-ului sau genei se face prin intermediul unui vector care este introdus n celulele plantei gazd. Transgena este definit drept un segment de AND cu o funcie precis, provenind de la o surs i care se introduce la specia receptor folosind tehnologii transgenice (metoda Agrobacterium tumefaciens, metoda biolistic, etc.). Planta rezultat se numete plant transgenic. Cu ajutorul ingineriei genetice se pot introduce n genomul unei celule una sau mai multe gene noi de interes, desigur utile, rezultnd organisme transgenice sau organisme modificate genetic (OMG). Prin transfor mare genetic, sau transgenez, amelioratorii au la dispoziie o metodologie nou care elimin limitele metodelor convenionale, permind acestora: s identifice
59

i s cloneze genele pentru caracterele dorite; s introduc aceste gene ntr-un cultivar performant chiar i n cazul n care hibridarea nu este posibil; s reduc durata i cheltuielile programelor de ameliorare deoarece plantele transgenice manifest gena dorit i pot fi selecionate direct. n plus, gena transferat poate proveni nu numai de la plante ci i din oricare alt surs (virusuri, bacterii, animale, etc.), ceea ce extinde n mod nelimitat posibilitile de ameliorare, compatibilitatea sexuat devenind neesenial. Transgeneza presupune parcurgerea urmtoarelor etape: identificarea i izolarea genelor de interes; realizarea unor construcii genetice (conin secvene ADN care urmeaz a fi transferate, la care se ataeaz secvene de reglare adecvate speciei sau esutului n care va funciona, pentru a poseda semnalele utile expresiei genelor); clonarea (multiplicarea) construciei genetice ntr-o bacterie; introducerea construciei genetice ntr-un vector; introducerea genei la planta receptor; regenerarea plantelor transgenice; selecia plantelor care exprim la un nivel optim caracterul transferat; evaluarea n cmp a stabilitii expresiei transgenei. * Rezultatele i perspectivele folosirii transgenezei n ameliorarea plantelor. De la apariia primelor cultivare transgenice au trecut puini ani, dar avantajele lor incontestabile au fcut ca aprecierea i rspndirea lor n cultur s fie foarte rapide. Dac n 1986, s-a efectuat primul test experimental al unui cultivar transgenic n condiii de cmp i deplin izolare, n 1992 o astfel de form s-a introdus n cultur. n prezent asemenea forme au fost obinute la peste 60 specii de cultur i suprafaa ocupat de acestea depete , pe plan mondial, 45 milioane hectare. Avantajele aduse de ingineria genetic sunt ns mult mai numeroase i nu se rezum strict doar la aspectele economice sau de protecia mediului. i ne gndim mai ales la potenialul extraordinar al ingineriei genetice de sporirea diversitii biologice a plantelor, dar i la timpul infinit mai scurt pentru apariia unor noi forme comparativ cu perioadele foarte lungi necesare pentru apariia unor astfel de forme sub aciunea factorilor naturali, sau chiar a metodelor neconvenionale de ameliorare. Dar cel mai important fapt, dup cum meniona un renumit biotehnolog, este c natura face modificri mari i substaniale, dar ea este o cutie neagr, modif icr ile fiind haotice, ntmpltoare. n schimb, cine cunoate genele le poate stpni i deci riscul modificrilor genetice fcute de acetia este incomparabil mai mic dect al celor naturale. Tehnologia ADN-ului recombinat este astzi inclus n categoria metodelor de ameliorare folosit deja n mod practic la crearea de forme tolerante la erbicide i rezistente la insecte. A fost, dup cum arat Elena Marcela BADEA (2000), prima generaie de plante transgenice incluznd cultivar e cu aceste rezistene care se folosesc astzi n cultur, pe milioane de hectare, foarte bine apreciate de cultivatori. Dar exist deja posibiliti prezente i de perspectiv de a ameliora pe aceast cale i alte caracteristici ale plantelor de cultur precum: calitatea plantelor n ceea ce privete coninutul de carbohidrai, uleiuri i proteine, dar i a caracteristicilor tehnologice i comerciale; tolerana plantelor cultivate fa de factori de stres abiotic, etc. Referindu-ne la implicarea ingineriei genetice n ameliorarea plantelor trebuie s menionm i aplicaiile acesteia n metodologia propriu-zis de
60

ameliorare i producere de smn (obinerea de forme androsterile, restauratoare de fertilitate; producerea de smn la speciile autoincompatibile etc.). n cele ce urmeaz vom prezenta doar cele mai cunoscute i semnificative rezultate ale transgenezei n ameliorarea plantelor, respectiv rezistena la antibiotice i rezistena la atacul patogenilor. * Rezultatele obinute n ameliorarea rezistenei plantelor de cultur la erbicide, prin transgenez. Erbicidele reprezint o mare parte din pesticidele utilizate n agricultur, majoritatea fiind selective i prezentnd riscuri ecologice majore datorit remanenei lor, ele nefiind biodegradabile. Exist ns i erbicide neselective (totale), care fiind biodegradabile (neremanente) au efecte reduse sau nule asupra mediului, dar aplicarea lor se face doar preemergent. Cu ajutorul metodelor de inginerie genetic se pot transfera gene de rezisten, preluate de la unele microorganisme sau chiar de la plantele superioare, pentru obinerea unor forme tolerante la erbicide. n acest scop se utilizeaz dou strategii: modificarea intei erbicidului din punct de vedere cantitativ i calitativ; introducerea unui sistem de degradare a erbicidului. Se tie c aciunea erbicidelor interacioneaz cu anumite enzime int implicate n fotosintez sau n procesul de sintez al aminoacizilor, producnd moartea plantelor. Mecanismele prin care plantele pot rezista la aciunea erbicidelor sunt: detoxifierea erbicidelor prin reacii enzimatice de degradare sau conjugare; supraproducia enzimei int; compensarea biochimic a aciunii erbicidelor; modificarea situsurilor de legare a enzimelor int ce nu mai pot interaciona cu erbicidul, inhibarea ptrunderii sau transportul erbicidului la situsul activ al enzimei int. Astfel, sunt bine cunoscute i apreciate formele transgenice de soia i porumb tolerante la un erbicid cu spectru larg, neselectiv cu denumirea de Roundup, care au ca substan activ glifosatul. Erbicidul este utilizat n special pentru combaterea ierburilor anuale i perene, este rapid degradat n sol i este puin toxic pentru animale. Glifosatul blocheaz calea metabolic de sintez a aminoacizilor aromatici prin inactivarea enzimei int (EPSPS). De asemenea, ea poate bloca transportul enzimei active codificate de gene nucleare i sintetizate n citoplasm, n cloroplaste, care reprezint locul de aciune. Aceast cale este prezent la plante i microorganisme dar nu la om i animale. Mecanismele de rezisten la glifosat sunt foarte diferite. Astfel, au fost identificate unele gene mutante care codific enzime int insensibile la aciunea erbicidului i care pot fi izolate de la bacterii sau plante (petunie, porumb, etc.). Au fost identificate i forme rezistente ca urmare a supraproduciei de enzime int (morcov, tutun, etc.). Primele forme rezistente la glifosat s-au obinut la tomate, ca urmare a transferului genei de rezisten de la Salmonella typhimurium i apoi s-au obinut astfel de forme la soia, sfecl, bumbac, porumb, etc. n cazul unor specii, precum porumbul i sfecla, rezistena nu a fost satisfctoare deoarece glifosatul s-a acumulat n meristeme i a mpiedicat dezvoltarea normal a plantelor. Prin clonarea dubl, att a unor gene bacteriene, rezistena s-a dovedit stabil, fr ca genele transferate s afecteze dezvoltarea plantelor. n 1996 s-a introdus deja n cultur soia rezistent la glifosat denumit soia Roundup Ready care posed o gen transferat de la Agrobacterium, care
61

codific o protein insensibil la glifosat (adic plantele de soia Roundup Ready pot sintetiza aminoacizi aromatici i n prezena erbicidului). La porumbul tolerant la glifosat, porumb Roundup Ready, rezistena se datoreaz ns unei gene izolat tot de la porumb, modificat prin mutagenez in vitro, care a fost transferat n genomul unei linii consangvinizate, form parental a unor hibrizi comerciali. Formele tolerante la erbicidele totale (Roundup Ready) au marele avantaj c permit aplicarea postemergent a erbicidului, ceea ce face posibil executarea tratamentelor doar atunci cnd este nevoie. Aceasta nseamn: reducerea pronunat a cheltuielilor, deoarece poate fi folosit un singur erbicid; se reduc cantitile de erbicid i costurile legate de aplicarea lor; se elimin remanena unor produse toxice pentru culturile urmtoare. A doua strategie utilizat n vederea toleranei la erbicide neselective vizeaz detoxifierea erbicidului prin reacii enzimatice de degradare. Erbicidul neselectiv, glufosinat de amoniu (cunoscut sub diferite denumiri comerciale ca: Basta, Liberty, Challenge, etc.) inhib o enzim foarte important implicat n procesul de asimilare a azotului, ceea ce faciliteaz acumularea n plant a amoniacului n concentraii letale. Prin transferul unei gene izolate de la specii de Streptomyces la unele specii cultivate (rapi, sfecla de zahr, porumb, etc.), care codific o enzim care detoxific glufosinatul, transformndu-l ntr- un compus inactiv, se obin forme rezistente. S-au obinut rezultate importante i n privina toleranei la erbicide selective. Foarte utilizate n agricultur sunt atrazinele, care reprezint un grup de erbicide selective cu un spectru larg de aciune. Numrul speciilor rezistente la aceste erbicide este relativ redus. Aciunea lor const n inhibarea procesului de fotosintez. Mecanismele de rezisten cele mai importante constau n detoxifierea erbicidului n cadrul unor reacii de degradare sau al unor reacii de conjugare (ca de pild glutationul). Diferite ncercri la rapi au fost mai puin reuite, plantele obinute fiind debile i desigur mai puin productive. Rezultatele obinute ns prin clonarea i transferul unei gene de la ficatul de oarece la plante, care codific enzima glutation S transferaza i este capabil s detoxifice atrazinul, sunt ns pozitive prin faptul c nu afecteaz vigoarea plantelor. S-au obinut organisme modificate genetic tolerante i la alte erbicide selective, cum ar fi sencorul (substana activ fiind metribuzin) care este folosit pentru combaterea buruienilor dicotiledonate i monocotiledonate din culturile de soia, cartof, tomate, sparanghel, etc. Se pare ns c n acest caz mecanismul de rezisten este mai complex fiind de natur oligo-poligenic. Rezistena este influenat att de o gen major, care codific enzima capabil s detoxifice sencorul printr-un mecanism de conjugare, dar i de sistemul poligenic al receptorului mai mult sau mai puin favorabil exprimr ii nsuirii de toleran. BOTEZ i colab. (1995) menioneaz unele limite de ordin tehnic n ceea ce privete obinerea plantelor transgenice tolerante la erbicide precum relativa dificultate care apare la regenerarea plantelor din celulele transformate genetic, precum i reducerea vigorii i produciei acestora. Pe de alt parte este posibil ca noile gene introduse s produc constitueni cu efecte nedorite asupra consumatorilor.

62

Exist ns i riscul ecologic legat de posibilitatea diseminrii genelor de rezisten la unele specii de buruieni cu care plantele de cultur se pot hibrida. * Rezultatele obinute n ameliorarea rezistenei la patogeni prin transgenez. Cele mai importante rezultate s-au obinut n privina rezistenei la atacul insectelor. - Rezistena genetic la insecte a plantelor prezint avantaje considerabile comparativ cu protecia culturilor asigurat prin tratamentele cu insecticide. Este vorba mai nti despre eliminarea costurilor foarte ridicate ale proteciei chimice dar i de alte avantaje foarte importante facilitate de folosirea plantelor transgenice rezistente la insecte precum: reducerea polurii chimice a solului; protejarea entomofaunei i nu n ultimul rnd eliminar ea reziduurilor de insecticide din ap i alimente. Metodele ingineriei genetice se dovedesc a fi deosebit de eficiente numai n condiiile existenei unui determinism genetic relativ simplu al nsuirii de rezisten. Singurele forme transgenice aflate n cultur rezistente la insecte exprim gene care provin de la bacteria Bacillus thuringiensis. Aceasta este o bacterie din sol care codific proteine cu efect insecticid denumite toxine Bt, ( endotoxine sau proteine cristaline - cry) care confer rezistena plantelor la atacul insectelor. Toxinele Bt, ingerate de insecte, se leag de receptori ai intestinului unor insecte i distrug intestinul acestora, provocnd moartea. Asemenea receptori nu se gsesc la vertebrate i nici la celelalte nevertebrate. Prin transferul unor secvene genice, care codific fraciunea toxic a acestor proteine de la Baccilus thuringiens la o anumit plant de cultur, gazda transgenic va fi capabil s produc proteina toxic i va deveni rezistent la insectele sensibile la proteina respectiv. Exist numeroase tulpini de Baccilus thuringiens care produc toxina Bt (proteine cry) pentru un spectru diferit de insecte gazd. Au fost inventariate 10 gene care codific diferite toxine Bt care au fost denumite: cry1Aa; cry1Ab; cry1Ac; cry1Ba; cry1Ca; cry1H; cry2Aa; cr y3A; cry6A i cr y9C care confer rezisten la unele lepidoptere i coleoptere. Dei aceste gene Bt au fost transferate la 26 specii diferite de plante, o eficien optim exprimat prin nivelul nalt de mortalitate a insectelor int n cmp, s-a constatat doar la: bumbac, porumb, cartof, lucern, varz, brocoli la unele dintre acestea existnd cultivare Bt rspndite n cultur (tabelul 13.1). Tabelul 11.1. Cultivare Bt rezistente la atacul unor insecte aflate n cultur (dup Elena Marcela BADEA i Daniela SNDULESCU, 2001) Specia Cultivarul Bt Insectele int Anul omologrii Solanum New Leaf Leptinotarsa 1995 tuberosum decemliniata Gossypium Bollgard Heliotis virescens 1995 hirsutum Zeld Gard Ostrinia nubilalis 1995 Zea mays Nature Gard Ostrinia nubilalis 1995 Maximizer Ostrinia nubilalis 1995 Lycopersicon - Heliotis zea 1998 aesculentum
63

Exist i alte surse de transgene utilizabile pentru obinerea unor plante rezistente la atacul insectelor. Menionm printre altele Streptomyces, care posed gena care codific o enzim (colesterol oxidaza) ce provoac liza celulelor epiteliului intestinal la mai multe insecte, printre care i Diabrotica undecimpunctata (care atac paniculul). Dar i unele specii de plante conin gene care determin rezistena la atacul insectelor, ele codificnd ndeosebi inhibitori ai enzimelor digestive (proteinaze i amilaze) i astfel insectele sensibile nu mai pot degrada proteinele i mor prin nfometare. Familii de gene care codific astfel de inhibitori au fost identificate n organele de depozitare (semine, tuberculi) ale multor specii aparinnd familiilor Solanaceae, Poaceae, Fabaceae, etc. Prin transferul unor gene de la plantele care codific inhibitori, la plante care nu produc astfel de inhibitori se poate induce rezistena acestora din urm la atacul de insecte (Lepidoptere, Coleoptere, Ortoptere, etc). Au fost introduse la diferite specii cel puin 14 gene inhibitoare a proteinazelor. Cel mai activ inhibitor identificat pn n prezent este CpTi (cowpea trypsin) care acioneaz ca un insecticid i este eficace n combaterea insectelor din genurile Coleoptera, Lepidoptera i Orthoptera. - Rezistena la infeciile virale prin metodele ingineriei genetice implic: ncorporarea unei secvene virale n genomul plantei; folosirea viruilor satelit; folosirea ARNs sau ARN complementar antisens la secvena viral pozitiv. Integrarea unei secvene virale implic fie utilizarea genei pentru nveliul proteic (capsida), fie a unei secvene non-structurale. ncorporarea genei pentru nveliul proteic viral n genomul plantelor determin o acumulare de substane ale nveliului proteic care vor sechestra genomul viitorului virus, prevenind infecia. Rezistena mediat de nveliul proteic (CP-MR) este efectiv aproape pentru toate tipurile de virui care paraziteaz diferite plante precum: orezul, pepenele, cartoful, sfecla de zahr etc. Virusurile satelit. Genomul multor virusuri care atac plantele are o singur caten ARN, i uneori ARN este mprit n cteva secvene distincte cu proprieti unice. Ribovirusurile plantelor sunt asociate cu particule ce conin ARN cu secvene de nucleotide diferite att fa de ARN viral ct i fa de genomul gazdei. Aceste asocieri de particule ARN se numesc satelii. Sateliii sunt complet dependeni de virusurile respective pentru replicarea lor. n plus ei nu posed informaia genetic pentru nveliul lor proteic i din aceast cauz sunt considerai ARN satelii (ARN S), acionnd ca parazii virali. Astfel, ARN satelit al virusului mozaicului castravetelui determin o atenuare drastic a simptomelor induse de unele virusuri. Includerea genei pentru ARN satelit poate conferi deci rezisten la virui. Rezistena la atacul ciupercilor . Posibilitile i perspectivele ameliorrii rezistenei plantelor la atacul ciupercilor parazite prin metode de inginerie genetic sunt mai puin promitoare comparativ cu realizrile i perspectivele transgenezei n ameliorar ea rezistenei la insecte i virusuri. Unele rezultate recente obinute n acest domeniu consider drept eficient: identificarea i clonarea ctorva proteine cu efect autofungic puternic manifestat in vitro; clonarea genelor de rezisten la atacul
64

ciupercilor, simultan cu o mai bun nelegere a bazelor moleculare ale interaciunii plant-parazit. Astfel, rezistena mediat de proteinele cu efect antifungic include utilizarea unor gene ce codific enzime cu rol n degradarea pereilor celulelor ciupercilor parazite (chitinaze, B-1,3-glucanaza), proteine care inactiveaz ribozomii, peptide de mici dimensiuni cu efect antifungic i proteine sau peptide de la alte organisme, etc.. Peptidele cu rol antifungic se numesc defensive i au fost descoperite la plante care evideniaz o activitate antifungic in vitro. Astfel, unele peptide cu rol antifungic includ thionina de la orz i gru sau lecitina.

NTREBRI: 1.Care sunt factorii care fac posibil regenerarea plantelor in vitro? 2.Care sunt aplicaiile culturilor in vitro n ameloiorarea plantelor i multiplicare ? 3.Care sunt posibilitile obinerii unor genotipuri valoroase prin metode ale culturilor in vitro ? 4.Care sunt perspectivele folosirii transgenezei n ameliorarea plantelor ?

BIBLIOGRAFIE SELECTIV 1. Badea Marcela Elena, Sndulescu Gabriela 2001 Biotehnologii vegetale, Fundaia BIOTECH, Bucureti; 2. Ceapoiu N. 1980 Evoluia speciilor, Ed.Academiei RSR, Bucureti; 3. Mado E., Ciulca S. 1998 Lucrri practice de ameliorarea plantelor, Ed.Agroprint, Timioara; 4. Nedelea G. 1985 Ameliorarea plantelor, partea I, Lito IAT; 5. Nedelea G., Mado E. 2003 Ameliorarea plantelor, Ed.Eurobit, Timioara; 6. Potlog A.S., Suciu Z., Lzureanu A., Nedelea G., Moisuc A. 1989 Principii moderne n ameliorarea plantelor, Ed.Facla. Timioara;

65

66