Procedee de inducere a superovulatiei la vacile donatoare

PROCEDEE DE INDUCERE A SUPEROVULATIEI LA VACILE

DONATOARE

Transferul de embrioni este o biotehnologie cu ajutorul creia crete de zece ori

numrul de descendeni care se obin de la o femel.
Impactul pozitiv al acestei biotehnologii este mai mare la bovine i cabaline, din
cauza capacitii lor reproductive sczute (numrul de descendeni obinui ntr-un an) i a
intervalului mare dintre gestaii.
Utilizarea ct mai eficient a celor doi parteneri implicai n procesul de reproducere
are o importan major n mulirea i ameliorarea continu a efectivelor de animale i, prin
aceasta, n realizarea dezideratelor economice ale creterii animalelor.
Transferul de embrioni ofer posibilitatea depirii acestor impedimente prin
inducerea superovulaiei, urmat de recoltarea i transferul embrionilor la femelele
receptoare i, implicit, obinerea unui numr mai mare de descendeni.
Superovulaia sau poliovulaia este procesul de maturare i eliberare, n acelai ciclu
estral, a unui numr mai mare de ovocite, dect numrul caracteristic speciei.
Numrul ovulaiilor este determinat de hormonul care stimuleaz dezvoltarea
foliculilor ovarieni (FSH) i de hormonul care induce ovulaia (LH).
Tratamentele pentru inducerea superovulaiei au ca scop stimularea ovarelor s
produc un numr ct mai mare de ovocite mature ntr-un ciclu estral. Acest obiectiv poate fi
realizat prin tratamentul vacilor donatoare de embrioni cu hormoni foliculostimulatori (FSH
sau PMSG), care stimulaz creterea i maturarea foliculilor ovarieni.
La nceputul lucrrilor de embriotransfer, tratamentele de inducere a superovulaiei
au fost aplicate n faza folicular a ciclului estral. Cel mai bun moment de administrare a
hormonului foliculostimulator era considerat ziua a 16-a a ciclului estral, la debutul fazei
foliculare, cu condiia ca femelele s aib ciclul estral regulat de 21 de zile.
n prezent, tratamentele de stimulare folicular ncep n intervalul 8-14 zile ale ciclului
estral (ziua estrului fiind considerat ziua 0), perioad n care vacile donatoare rspund cel
mai bine la tratamentele de inducere a superovulaiei. Mapletoft (1987) recomand ca
tratamentele de inducere a superovulaiei s nceap n ziua a 9-a sau a10-a a ciclului
estral.
Intervalul de timp dintre momentul administrrii hormonilor foliculostimulatori i
ovulaiei poate influena reacia ovarelor la tratament. Foliculii din ovarele bovinelor au
nevoie de 4-5 zile pentru a ajunge la maturitate. Prin urmare, tratamentele de inducere a
2

Procedee de inducere a superovulatiei la vacile donatoare

superovulaiei trebuie s fie asociate cu o metod de control a estrului. Prostaglandina F 2

(PgF2) constituie mijlocul de ajustare a intervalului de timp de la nceputul tratamentului de
stimulare ovarian pn la estru. Inconvenientul acestei metode de control al estrului l
constituie faptul c nu poate fi utilizat fr o referin precis despre momentul manifestrii
ultimului estru.

Fig.1. Principiul tratamentelor de inducere a superovulaiei la vac

La vac, se folosesc urmtoarele procedee de inducerea superovulaiei: inducerea
superovulaiei cu FSH, inducerea superovulaiei cu PMSG, inducerea superovulaiei cu
PMSG/ser anti PMSG i inducerea superovulaiei cu FSH i gestagene.
3

Procedee de inducere a superovulatiei la vacile donatoare

Reacia ovarelor la tratamentele de inducere a superovulaiei se apreciaz dup

urmtorii parametrii: intensitatea reaciei ovarelor (numrul de corpi galbeni), numrul total
de embrioni recoltai i numrul i proporia embrionilor viabili (transferabili).

Inducerea superovulaiei cu FSH

Hormonul de Stimulare Folicular (FSH) extras din hipofiza de mamifere (n special

de la suine) are o activitate biologic foarte scurt (40-80 de minute). Din aceast cauz
este necesar repetarea administrrii, de dou ori pe zi, la interval de 12 ore, timp de 4-5
zile, pentru a stimula creterea foliculilor ovarieni
Dozele totale de FSH sunt de 25-35 mg pentru viele i 30-50 mg pentru vaci,
administrate i.m. n 8 doze descrescnde, la intervale de 12 ore, timp de 4 zile.
Cele mai bune rezultate se obin atunci cnd tratamentele ncep n a 10-a zi a ciclului
estral, iar la 48 de ore de la administrarea primei doze de FSH se injecteaz 0,500-0,750 mg
Cloprostenol (analog sintetic al PgF2).
Se poate atepta ca femelele donatoare s manifeste estrul la dou zile dup
administrarea Cloprostenolului. Dac femelele sunt observate n clduri la nceputul zilei, n
mod obinuit acestea se nsmneaz n dimineaa aceleai zile, deoarece nu se cunoate
cu exactitate nceputul cldurilor i se repet seara. Dac apar cldurile mai trziu n timpul
zilei se va efectua prima nsmnare dup amiaz i se repet n dimineaa zilei urmtoare.
Se va evita nsmnarea femelelor dup terminarea cldurilor deoarece scade proporia
embrionilor viabili recoltai.
Dac femelele donatoare nu reacioneaz la dozele uzuale, acestea pot fi mrite cu
50% dar, la doze mari de FSH, exist riscul scderii numrului embrionilor transferabili.
Au fost ncercri de reducere a numrului de inoculri cu FSH n tratamentele de
inducere a superovulaiei la vac. Astfel, Schmidt i colab. (1992) au administrat vacilor din
lotul experimental o cantitate total de 35 mg FSH/femel, n cte o inoculare zilnic, timp
de 3 zile n doze descrescnde (14 mg, 12,25 mg i 8,75 mg), iar celor din lotul martor li s-a
administrat aceeai doz, n cte dou inoculri zilnice timp de 4 zile (2x7 mg 2x5,3 mg
2x3,5 mg i 2x1,75 mg). La 72 de ore de la prima inoculare cu FSH, femelelor li s-au
administrat 0,750 mg Cloprostenol. nsmnrile artificiale au fost efectuate la 12 i 24 de
ore de la debutul cldurilor. S-au recoltat n medie 9,2 embrioni de la femelele din lotul
experimental i 6,4 embrioni de la femelele din lotul martor. Numrul mediu de embrioni
transferabili a fost de 4,4 respectiv 3,6. Se poate concluziona c administrarea FSH o dat
pe zi timp de 3 zile, induce o reacie ovarian similar cu dou administrri pe zi timp de 4
zile.
n alt experiment s-a utilizat 400-480 UI Folicotropin-Spofa. Din totalul femelelor
tratate, 79,0% au reacionat la tratamentele de inducere a superovulaiei i au avut n medie
9,3 corpi luteali. De la acestea s-au recoltat n medie 7-8 embrioni, dintre care 4-5 embrioni
4

Procedee de inducere a superovulatiei la vacile donatoare

transferabili (60,4%). Incidena femelelor cu ovare suprastimulate (foliculi neovulai n ziua

recoltrii embrionilor) a fost de 14,9%. La 3 zile de la recoltarea embrionilor s-au administrat
0,500 mg Cloprostenol (N. Pcal i colab 1997).
Utilizarea FSH-ului n inducerea superovulaiei este costisitoare datorit preurilor
ridicate ale preparatelor hormonale cu FSH i a multiplelor intervenii asupra donatoarei
(minim 10) deoarece trebuiesc efectuate dou inoculri zilnice timp de 4 zile.
Majoritatea experimentelor confirm afirmaia potrivit creia n urma tratamentelor de
inducere a superovulaiei cu FSH intensitatea reaciei ovarelor la stimularea hormonal este
mai redus, dar se obin mai muli embrioni transferabili comparativ cu tratamentele cu
PMSG.

Inducerea superovulaiei cu PMSG

Gonadotropina seric (PMSG sau Serul de iap gestant) este produs de cupele
endometriale ale iepelor ncepnd cu ziua 35-41-a de gestaie atinge un nivel maxim la 5570 de zile i dispare dup 120-130 de zile de gestaie. Cupele endometriale sunt de origine
embrionar, rezultnd din grefarea celulelor trofoblastului printre celulele epiteliului uterin.
Utilizarea PMSG in tratamentele de inducere a superovulaiei are avantajul c este
mai ieftin iar tratamentul mult mai simplu. Deoarece are o perioad lung de metabolizare
(5-6 zile) este suficient o singur administrare pentru inducerea superovulaiei.
Perioada lung de metabolizare a PMSG-ului constituie i un dezavantaj deoarece
poate conduce la suprastimularea ovarelor i prezena, n ziua recoltrii embrionilor, a unor
foliculi neovulai. n momentul estrului, PMSG nu este n totalitate metabolizat i, n
consecin, stimuleaz o nou cretere folicular cu secreie de estrogeni care perturb
primele stadii ale dezvoltrii embrionare cu consecine negative asupra calitii embrionilor
recoltai.
Rezultatele celor mai multor cercetri au demonstrat c cu ct sunt mai mari dozele
de PMSG cu att este mai intens reacia ovarelor la tratamentele de inducere a
superovulaiei (numrul corpilor Iuteali) dar crete variabilitatea numrului de ovulaii i
scade numrul embrionilor transferabili (Schams i colab 1978; N. Pcal 1996).
Concluzia este c 3000 UI PMSG este doza cea mai ridicat la care se poate obine
un rspuns superovulator satisfctor. Cel mai frecvent se utilizeaz doze de 2000-2500 UI
PMSG, administrate o singur dat la mijlocul ciclului estral (zilele 8-14), iar dup 48 de ore
se administreaz o doz luteolitic de PgF2 (25-30 mg PgF2 natural sau 0,5-1 mg
Cloprostenol).
n lucrrile ntreprinse de N. Pcal n 1996 s-a administrat 2500 UI PMSG
(Serogonadin Follgon sau Intergonan) n dimineaa zilei a 10-a a ciclului estral (ziua
manifestrii cldurilor este considerat ziua 0), iar n dimineaa zilei a 12-a s-au administrat
5

Procedee de inducere a superovulatiei la vacile donatoare

0,500 mg Cloprostenol (Oestrophan Prosolvin Flavoliz Proliz). Majoritatea femelelor

donatoare au intrat n clduri la cca 60 de ore de la administrarea Cloprostenolului Prima IA
s-a efectuat la primele semne de clduri dup care s-au mai efectuat nc dou IA, la
intervale de cca 12 ore. Intensitatea reaciei ovarelor a fost n medie de 11,6 corpi luteali. De
la vacile superovulate s-au recoltat n medie 6,8 embrioni, dintre care 3,2 embrioni
transferabili (47.0%). Incidena ovarelor suprastimulate (cu foliculi nedehisceni) a fost de
24,4 %. La 3 zile de la recoltarea embrionilor s-au administrat 0,500 mg Cloprostenol.
Intensitatea reaciei ovarelor la stimularea cu PMSG este mai mare comparativ cu
stimulrile cu FSH. n schimb, se obin mai puini embrioni transferabili Boland i colab
(1978), Pcal i colab. (1998) au observat c proporia embrionilor transferabili scade
odat cu creterea intensitii reaciei ovarelor.

Inducerea superovulaiei cu PMSG/ser anti-PMSG

Perioada lung de metabolizare a PMSG-ului (120 de ore) este o caracteristic

important deoarece ofer posibilitatea inducerii superovulaiei printr-o singur administrare.
Dar exist i un inconvenient deoarece, dup ovulaie concentraiile sanguine ale PMSG
sunt nc suficient de crescute pentru a stimula din nou ovarul. Aceast stimulare tardiv
este urmat de o nou cretere a foliculilor ovarieni (suprastimulare ovarian), a cror
secreie de 17 -estradiol influeneaz negativ numrul embrionilor transferabili.
Anticorpii anti-PMSG, injectai la nceputul estrului, au menirea s inactiveze
hormonul. Asocierea PMSG cu serul anti-PMSG permite mrirea dozelor de PMSG i
repetarea tratamentelor de inducere a superovulaiei. S-a studiat eficiena unui asemenea
protocol de inducere a superovulaiei, care d rezultate comparabile tratamentelor cu FSH,
dac nu mai bune, adic cel puin 5 embrioni transferabili per donatoare.
Comparativ cu tratamentele numai cu PMSG, la femelele donatoare crora li s-a
administrat i ser anti-PMSG s-a observat diminuarea numrului de foliculi nedehisceni,
prezeni pe ovare n ziua recoltrii embrionilor i ameliorarea calitii embrionilor. Trebuie
remarcat faptul c aceste rezultate se obin cu puine intervenii asupra animalului, ceea ce
este foarte important atunci cnd tratamentele de inducere a superovulaiei se efectueaz n
fermele de creterea animalelor. n cazul tratamentelor cu FSH, sunt necesare cel puin 10
intervenii (deplasri), iar n cazul tratamentelor cu PMSG/ ser anti-PMSG, sunt necesare
numai 4 intervenii.
Referitor la momentul administrrii serului anti-PMSG (2 ml), s-a constatat un procent
mai mare de ovulaii dac acesta se administreaz la 60 de ore dup PgF 2 (adic la
nceputul estrului).
Stimulrile hormonale cu PMSG/ser anti-PMSG pot fi utilizate mai ales n cazul
repetrii tratamentelor de inducere a superovulaiei.

Procedee de inducere a superovulatiei la vacile donatoare

Inducerea superovulaiei cu FSH i hormoni gestageni

n ultimii ani, pentru a se reduce variabilitatea reaciei ovarelor la stimulrile cu

hormoni gonadotropi, se folosesc tot mai frecvent hormonii gestageni. Stimularea hormonal
poate ncepe fr referin la ziua manifestrii cldurilor, cu condiia ca femelele donatoare
s manifeste ciclic cldurile. Datorit acestui fapt, lucrrile de stimulare hormonal i
recoltare a embrionilor se pot efectua simultan la mai multe femele donatoare. Durata
lucrrilor de inducere a superovulaiei, recoltarea i transferul embrionilor este de 18 zile,
spre deosebire de lucrrile clasice, care dureaz 24-25 de zile (Robertson. Ed 2003).
Hormonii gestageni, reprezentai de Progesteron i Norgestomet (analog sintetic al
progesteronului) sunt administrai sub diverse forme: implante subcutane, dispozitive
intravaginale (PRID, CIDR). Odat cu hormonii gestageni, se administreaz i hormoni
estrogeni (Valeriat de estradiol sau Benzoat de estradiol).
Hormonii estrogeni au rolul, fie de a induce involuia unui corp galben funcional, fie
de a mpiedica ovulaia i formarea unui corp galben. De asemenea stimuleaz apariia unui
val de cretere folicular la cca 5 zile de la administrare(Mapletoft, 1987).
nceperea tratamentelor cu FSH n ziua a 5-a de la administrarea gestagenelor
corespunde creterii finale a folicuIilor mici i mijlocii, salvndu-i" de la atrezie. Deci,
tratamentele de inducere a superovulaiei nu epuizeaz ovarele, ci salveaz foliculii i,
implicit ovocitele care, n condiii fiziologice, se pierd. Administrarea FSH exogen nu mrete
numrul de ovocite care se matureaz n timpul unui ciclu estral, ci salveaz ovocitele care
se degradeaz la fiecare ciclu estral (Pcal i colab., 2001).
ntr-o alt lucrare, superovulaia a fost indus conform protocoalelor descrise n
tabelele urmtoare.
Ca surs de hormoni gestageni a fost folosit preparatul Synchro Mate-B (SMB). O
doz este format dintr-un implant cu 3 mg Norgestomet i 2 ml soluie injectabil care
conine 3 mg Norgestomet i 5 mg Valeriat de estradiol. Implantul s-a aplicat subcutan pe
faa extern a urechii, odat cu acesta s-a administrat intramuscular i soluia injectabil.
Ziua introducerii implantului se consider ziua 0 a protocolului de stimulare hormonal.
n vederea inducerii superovulaiei, au fost utilizate extracte hipofizare de FSH
(Follicotropin-V), n doz total de 400 mg (NIH-FSH-P1), divizat n 8 doze de cte 50 mg,
administrate la intervale de 12 ore. Odat cu ultimele dou doze de FSH s-au administrat
cte 25 mg Lutalyse (Prostaglandin F2). Implantul cu Norgestomet a fost retras n
dimineaa zilei a 9-a, odat cu administrarea ultimelor doze de FSH i PgF2.

Procedee de inducere a superovulatiei la vacile donatoare

Ziua
0
5
6
7
8
9
10
11
12
18
21

AM
Introdus implant SMB + 2ml soluie
injectabil SMB
50 mg FSH
50 mg FSH
50 mg FSH
50 mg FSH + 25 mg Lutalyse retras
implant SMB
IA
IA
Recoltare, transfer sau congelare embrioni
25 mg Lutalyse

PM
50 mg FSH
50 mg FSH
50 mg FSH
50 mg FSH +
25mg Lutalyse
IA
25 mg Lutalyse

Tabelul 1 Protocol de inducere a superovulaiei vacilor donatoare cu FSH i implant

Norgestomet.

S-au efectuat trei IA, n dimineaa i dup masa zilei a 11-a i n dimineaa zilei a 12a. Embrionii au fost recoltai nechirurgical n ziua a 18-a de la nceputul stimulrilor
hormonale (ziua a 7-a de la estrul indus). La 3 zile de la recoltarea embrionilor s-au
administrat 25 mg Lutalyse.
S-au obinut n medie 20 de embrioni per recoltare, dintre care 13 embrioni
transferabili. Proporia embrionilor transferabili din totalul embrionilor recoltai a fost de 63%.
S-a observat i o uniformitate a stadiului de dezvoltare a embrionilor recoltai, deoarece
majoritatea au fost n stadiul de blastocist, stadiu caracteristic vrstei de 7 zile (intervalul de
timp de la caldurile induse pn la recoltarea embrionilor) (Pcal i colab., 2001).
Dac se folosesc CIDR (Controlled Intravaginal Drug Release), acestea se plaseaz
n vagin i se menin timp de 6-8 zile. La utilizarea CIDR, pot apare unele probleme
expulzarea acestuia din vagin, iritarea mucoasei vaginale, mai ales n sezonul cald i
apariia unor vaginite uoare care nu pun probleme n cazul donatoarelor. Atunci cnd
femelele receptoare de embrioni se sincronizeaz cu CIDR, vaginitele pot diminua ratele de
gestaie.

Procedee de inducere a superovulatiei la vacile donatoare

Ziua
0
1
2
3
4
5

AM
Introdus CIDR + 100 mg
GnRH
FSH
FSH
FSH
FSH + PgF2

6
7
8

IA
IA

14

Recoltare, transfer sau

congelare embrioni
PgF2

17

PM
FSH
FSH
FSH
FSH + PgF2
Retras CIDR
IA
PgF2

Tabelul 2 Protocolul de inducere a superovulaiei vacilor Donatoare cu FSH, CIDR i GnRH