Proiect biochimie-Electroforeaza

Electroforeza capilara este o metoda noua, cu aplicabilitate mult mai mare si o sensibilitate mult
crescuta fata de electroforeza in gel.
Prezinta numeroase avantaje:volumele folosite sunt mult mai mici decat la cea in gel, iar
capilarul in care sunt pompate probele poate fi reutilizat dupa ce sunt efectuate calibrarile,
exista posibilitatea constituirii unei baze de date, iar timpul prelucrarii probelor si a rezultatelor
este mult mai mic si bineinteles calitatea electroforegramelor este net superioara.
Capilarul este fabricat din silice topit, a crei suprafa interioar conine grupri silanol SiOH,
care, n contact cu tamponul, se disociaz n grupri SiO - , imprimnd peretelui capilar o
sarcin negativ.

Ca si principiu electroforeza capilara se aseamana cu HPLC (high performance liquid

cromatography) si GC-MS (gas cromatografia cuplata cu spectofotometria de masa), existand
un capilar prin pare toti compusiii parcurg aceeasi distanta intr-un timp real , numit timp de
migrare.
In loc de clasicele benzi apar asa numitele picuri-care sunt de fapt compusii care au fost
separati.
Acest tip de electroforeza prezinta si anumite dezavantaje cum ar fi aparatul de lucru , care are
un cost foarte ridicat pentru laboratoarele modeste. Dar acest instrument permite analiza pe
scara larga a narcoticelor din urina, teste de dopaj , analiza cantitativa si calitativa in industria
alimentara, cosmetica si biochimie.

Electroforeza este o metoda des utilizata in laborator.De cele mai multe ori este o etapa dintr un
experiment vast in care sunt incluse si metode prin care fractiile separate(blotare,
spectofotometrie in masa, cromatografie)
Frecvent benzile vor fi puse pe un suport (nitroceluloza), unde vor reactiona cu un agent
marcat chemiluminescent,, colorimetric sau fluorescent, proces numit blotting.

Sunt 3 tipuri de blotting:

1)Southern Blot:destinata fragmentelor de ADN care reactioneaza cu compusi radioactivi(P32)
sau lchemiuminescenti.La aceasta procedura fragmentee de ADN supuse analizei vor fi
sectionate cu ajutorul unei enzie de restrictie si mai apoi vor fi separate prin electroforeza in gel
de agaroza.Fregmentele rezultate vor fi transferate pe o membrana speciala.Benzile ce apar pe
acea membrana sunt aceleasi cu benzile din gel. Datorita implicarii compusului radioactiv,
benzile vor fi bine detectabile in domeniul razelor X. Fragmentele de restrictie pot fi plasmide
sau clone bacteriofage.
2)northern Blot: este tehnica utilizata pentru detectarea secventelor specifce de ARN folosind o
proba marcata de ADN.Tehnica presupune separarea ARN-ului in gel de agaroza. Dupa migrare
benzile vor fi transformate pe membrana si apoi vor bi incubate cu o proba de ADN

monocatenar. In urma incubarii se vor forma perechi de baze pe ADN ce sunt complementare
cu secventa de ARN supusa analizei. Vizualizarea se poate face in domeniul ultraviolet.
3) Western blot este o metoda de cuantificare a proteinelor, ce se efectueaza dupa migrarea
electroforetica a fractiilor proteice, in gel de poliacrilamida.Suportul pe care sunt transferate
benzile, este tratat cu anticorpi marcati, ce reactioneaza cu proteine specifice(util in screeningul
HIV-ului in sange.)detectia benzilor se realizeaza colorimetric, fluorescent si chemiluminescent.