NATAMICINA

STUDENI: Borcan Alexandru, Costea Anca,

Ptin Adriana, Pruteanu Mihai

AN/ SPECIALIZARE: III/ IIPCB

PROFESOR NDRUMATOR: Isopencu Gabriela

Universitatea Politehnica Bucuresti

Facultatea de Chimie Aplicata si Stiinta Materialelor
- Mai 2016 -
 CUPRINS:

1. Introducere............................................................................................................... 3
2. Proprieti fizice........................................................................................................ 3
3. Metode de preparare................................................................................................... 5
4. Procesul de fermentaie................................................................................................ 8
5. Mecanismul de aciune................................................................................................ 9
6. Toxicitatea.............................................................................................................. 10
7. Aplicaii ale natamicinei in medicina si industria alimentara................................................12
8. Concluzii............................................................................................................... 14
9. Bibliografie............................................................................................................ 15

2
 1. Introducere

Natamicina a fost descoperit n 1950 i a fost descris pentru prima oar de Struyck
astfel:Un antibiotic cristalin nou, pimaricina, a fost izolat din pasta de fermenta ie a unei
culturi de Streptomicete, izolate dintr-o prob de sol obinut din vecintatea
Pietermaritzburg. Organismul a fost denumit Streptomyces natalensis.

Natamicina este produs prin fermentaia Streptomyces Natalensis. Aceasta poate fi

recuperat folosind extracie, filtrare i uscare. Pudra uscat este suficient de stabil pentru a
fi depozitat ani de zile fr a-i pierde activitatea substanial. nafara activit ii largi
mpotriva mucegaiurilor i drojdiilor, natamicina mai are nite caracteristici unice, care o fac
foarte potrivit pentru prevenirea creterii mucegaiurilor pe suprafaa produselor alimentare.
Este sigur pentru consumatori, eficient n concentraii mici i nu are efecte negative asupra
calitii produselor.

Natamicina, cunoscut ca i pimaricin este o polien utilizat pentru antibiotice, cu

formula C33H47NO13 produs n culturile anumitor familii Streptomyces ca: S. Natalensis, S.
Chattanoogensis i S. Lydicus. Importana acestui antibiotic st n spectrul larg de activitate
mpotriva microorganismelor, cu toxicitate sczut mpotriva celulelor maniferelor.
Natamicina este utilizat pentru a trata cheratita bacteriilor i fungilor.Este n special eficient
mpotriva Candida, Aspergillus, Cephalosporium, Fusarium i Penicillium.

n acelai timp este un inhibitor al fungilor unicelulari i filamentoi (exemplu:

mucegaiuri dar este inactiv asupra bacteriilor Gram pozitive i Gram negative, prevenind i
apariia micotoxinelor. Natamicina nu este duntoare oamenilor i de asemenea este dificil
de absorbit n tractul digestiv uman. Din punct de vedere microbial nu multe specii dezvolt
rezisten la ea, iar datorit solubilitii sczute este utilizat ca si conservant de suprafa a
produselor alimentare. De aceea natamicina este singurul antifungic utilizat ca i conservant.

2. Proprieti fizice

Natamicina aparine grupului de poliene macrolide antimicotice. Aceast grupare

este caracterizat de un macrociclu cu inel lactonic cu un numr de legturi duble
conjugate carbon-carbon. Masa molecular a natamicinei este 665,75.

3
 Natamicina este o pudr cristalin alb, fr miros. Este uor solubil n ap,
metanol, n acid diluat, acid acetic i insolubil n majoritatea solvenilor organici. Cnd
valoarea pH-ului este mai mare de 9 sau mai mic de 3, solubilitatea natamicinei cre te,
dar rmne stabil la valorile pH-ului asemntoare cu cele ale produselor alimentare.
Este relativ stabil cnd este uscat i este capabil s reziste la temperaturi nalte (100
C).

Aceasta este descompus la lumina ultraviolet, cu pierderea structurii de tetraen,

aadar este mai bine s fie pstrat la ntuneric. i iradierea Gamma descompune
natamicina.

Este dezactivat de clor, peroxizi, antioxidani, sulfai.Unii dintre aceti compui

sunt aplicai ca i ageni de curare n industria alimentar. Natamicina dizolvat este
mult mai susceptibil la inactivare. Sub condiii neutre apoase, majoritatea natamicinei de
pe suprafaa mncrurilor sau din suspensiile stoc, este prezent sub forma unor cristale
mult mai stabile.

Natamicina trihidratat, cristalizat din solveni apoi, conine aproximativ 7,5%

ap. Extractele din metanol pot fi obinute prin cristalizare dintr-o soluie saturat de
metanol. Cnd extractul din metanol intr n contact cu apa, se convertete rapid n forma
trihidratat. Forma anhidr a natamicinei poate fi preparat prin uscarea trihidratului ntr-o
etuv la temperatura camerei pe pentaoxid de fosfor.

Forma anhidr este instabil, pierde 15% din activitate cnd este depozitat pentru

4
48 de ore sub condiii optime. Totui, depozitat n atmosfer de azot sau temperaturi
joase prezint o stabilitate mai bun. Srurile de calciu i bariu n forma lor solid sunt
stabile, dar n contact cu apa ele se dizolv rapid i sunt convertite ntr-un trihidrat stabil.
n principiu, fenomenul poate fi folosit pentru a obine preparate cu activitate ridicata a
natamicinei, dizolvat pentru o perioad scurt de timp.

Natamicina este solubil 20-50 mg/L n ap, solubil n acid acetic glacial,
metilpirolidon, dimetil formamid, dimetil sulfoxid, glicerin i propilen glicol. Prezint
o insolubilitate n alcooli cu numr mare de atomi de carbon, eteri, esteri, hidrocarburi
aromatice sau alifatice, hidrocarburi clorurate, cetone, dioxan, ciclohexanol i varii
uleiuri.

Mycosamina este produsul principal obinut prin hidroliza natamicinei.

3. Metode de preparare

Natamicina este obtinuta din Streptomyces natalensis, care a fost izolat pentru
prima oara in anul 1955 dintr-o proba de sol din Pietermaritzburg , un oras din provincia
Natal, South Africa (Struyk et al., 1957-58). Cativa ani mai tarziu Burns a izolat
natamicina dintr-o cultura de S. chattanoogensis, obtinut dintr-o proba de sol din
Chattanooga, Tennessee. Productia de natamicina se realizeaza la scara industriala
produs prin fermentaie aerobic a Streptomyces Natalensis. Fermentatia se realizeaza pe
parcursul a mai multor zile . Deoarece marea parte a natamicinei este legata de miceliu,
fie este izolata din intreaga masa de extractie , fie prin extracia miceliului cu ajutorul
alcoolilor inferiori.
Tulpina de S. Natalensis a fost iniial activat timp de 4 zile ntr-un mediu compus
din:extract de mal 10 g/ L, extract de drojdie 4g/L i glucoza 4g/L. Sporii germinai au
fost cultivai timp de 10 zile ntr-un mediu de cultur cu agar. pH-ul mediului a fost
ajustat la 7 nainte de sterilizare. Dup incubare la 30C pentru 10 zile, sporii aprui au
fost colectai ntr-o soluie de glicerol 50%. Suspensia celular a fost depozitat n
criotuburi de 2 ml la -80C intr-un congelator ca banca principal de celule. Viabilitatea
celulor a fost verificat periodic pentru a asigura stabilitatea celulei n timpul stocrii.
Condiii de inoculare:
Pentru fiecare experiment o cultur este scoas din congelator i activat ntr-un
mediu ISP-2 pentru 7 zile la 30C. Sporii aprui au fost colectai ntr-o soluie salin
(NaCl 0,9%) i diluai pn la un nivel de 10 3 i 105 spori/mL. Dup o cultivre de 24 h,
celulele obinute au fost folosite la inocularea mediului de producie la o concentra ie de
5%.
5
 Mediul a fost preparat din: glucoz 20 g/L, extract de carne 2g/L, extract de
drojdie 2 g/L, asparagin 0,5 g/L i KH 2PO4 0,05 g/L. PH-ul mediului a fost ajustat la 7,0
nainte de sterilizare prin autoclavare la 121C timp de 15 min. Glucoza a fost strerilizat
separat prin autoclavarea la 115C timp de 20 min. Toi aditivii au fost sterilizai prin
filtrare i au fost adugai mediului de fermentaie n condiii sterile.

Condiiile de cultivare:
Pentru experimentele n flacoane cu agitare, s-au efectuat culturile n pahare
Erlenmeyer de 50 mL. Inoculul se afla sub forma celulelor vegetative cu vrsta de 24 h, la
o concentraie de 5%. Flacoanele inoculate au fost incubate la 30 C ntr-un shaker la 200
rpm pentru 96 h. Au fost prelevate probe din flacoene pentru a determina greutatea
celulelor moarte, coninutul de antibiotic i de glucoza.
Prin inoculare celulele cresc exponenial, cu o vitez de cretere de 0.067 g/Lh,
atingnd un maxim de biomas de 4.3 g/L dup 84 de ore, care a fost men inut constant i
pentru celelalte culturi. n pararel cu aceast cretere a culturii, creterea cantitii de
natamicin n cultur este la o vitez constant de aproximativ 0.014 g/Lh, ajungnd la
1.31 g/L dup 96 de ore. ncetarea producerii de natamicin a fost limitat de substratul de
glucoz a culturii. n timpul creterii culturii i a producerii de natamicin, glucoza se
consum cu o vitez de 0.207 g/Lh i a ajuns la 0 dup 96 de ore. Chiar dac natamicina
este un antibiotic foarte stabil n forma s-a lichid, se observ o descre terii a
concentraiei de antibiotic n masa de fermentaie datorat activitii microbiene i a
degradrii urmat limitrii concentraiei de carbon. n graficele din Fig. 2. s-a prezentat
producerea natamicinei n funcie de consumarea cantitii de glucoz n cultura de S.
Natalensis.

6
Fig. 2. Variaia creterii cantitii de natamicin funcie de concentraia de glucoz
S-a transferat cultura ntr-un bioreactor de 2 L, s-au meninut aceleai condi ii de lucru,
pH egal cu 7 i alimentare continu cu NaOH i HCl n mediul de cultur. Valoarea
maxim a celulelor crescute este de 5.4 g/L. Valoarea maxim a cantitii de natamicin
obinut este de 3.98 g/L dup 84 de ore. n bioreactor concentraia de glucoz a sczut
mai rapid dect n probele la scar mai mic, substratul de glucoz fiind total consumat n
72 de ore, deoarece bioreactorul ofer o mai bun oxigenare i o mai bun amestecare a
culturii.
Natamicina recuperat dup fermentaie este de culoare alb-crem i nu prezint
miros sau gust, iar n faz cristalin este foarte stabil. S. Natalensis este absent din
produsul final. n timpul extraciei natamicina este dizolvat i filtrat printr-o membran.
Caracterul amfoter al natamicinei este cauza insolubilitatii acesteia in solventi
nepolari.

7
4. Procesul de fermentaie

Speciile de Streptomyces sunt supuse unor medii predeterminate, medii care sunt
destinate a mbuntii producerea de natamicin. S-a demonstrat ca putem mbuntii
randamentele de producere a natamicinei prin adugarea unor ageni care menin pH-ul
bazic a mediului de fermentaie, un pH ntre 5 i 7. Un mediu apos propice pentru inocul
conine: o protein ca surs de azot n concentraii de 2-6 g/L, n mod normal concentra ia
este 8 g/L i o surs de carbon metabolizant care este suficient pentru a nu avea o
deprivare de surs de carbon, de obicei 5-30 g/L, a mediului.
Un mediu apos propice folosit n timpul fermentaiei pentru a induce producerea
de natamicin conine: n jur de 80-250 g/L surs de carbon metabolizant i o protein
ce conine azot . Aceast surs trebuie s conin o protein care nu este pentru
mucegaiuri i una care este pentru mucegaiuri.
Un organism capabil s produc natamicin este plasat ntr-un mediu
predeterminat pentru a produce un inocul i apoi ntr-un mediu pentru producerea
fermentaiei care va susine activitatea metabolic a organismului n viitoarea dezvoltare
i pentru producerea natamicinei. n timpul fermentaiei, organismul transform cel puin
o parte din mediu n natamicin. S-a determinat c viteza de producere a natamicinei i
randamentul de obinere a ei este strns legat de ct de bine este inut mediul de
fermentaie ntre valorile limit ale pH-ului.
Mediul de fermentaie trebuie s conin o concentraie potrivit de carbon
metabolizant i proteine care s conin azot. Deasemenea, este de dorit ca mediul s
conin factori de cretere compleci, elemente anorganice. Mediul de fermentaie este
inut la o temperatur de 25-40C i n mod normal la temperaturi cuprinse ntre 28-35C.
De obicei, procesul de fermentaie dureaza de la 70 pn la 168 de ore, dar este dependent
de cantitatea de substrat a mediului, de temperatur, cantitatea de inocul i de cantitatea
de natamicin ce se dorete a fi produs.
Modaliti de cretere a randamentului de producie a natamicinei :
S-au studiat efectele adiiei n mediul de cultur a acizilor carboxilici cu catena
scurt (acetic, propionic, butyric) asupra creterii celulare i a cineticii produciei. La
adugarea acestora n mediul de fermentaie la concentraii sub 2 g/L, au fost prezente
efecte stimulatoare ale creterii produciei de natamicin. Mai mult, adiia acizilor
carboxilici nu a dus doar la creterea volumului de antibiotic ct i la micorarea timpului
de reacie de la 96 h.
De asemenea au fost studiate i efectele diferiilor nutrieni asupra producerii de
natamicin.

8
 Producia antibioticului necesit glucoz cu o concentraie n mediu de 20 g/L. Pe
de alt parte cea mai mare producie de antibiotice a fost obinut pe un mediu con innd
0,05 g/L KH2PO4.
Printre diferitele surse de N testate, numai sulfat de amoniu, azotat de sodiu i
extractul de carne de vit au fost surse de azot potrivite n sus inerea produciei de
antibiotice. De asemenea, un amestec de extract de carne de vit i extract de drojdie (8
g / l i 2 g / l, respectiv) au prezentat un efect sinergetic n cre terea produc iei de
natamicin ajungnd la aproximativ 1,5 g / l. Mai mult, trebuie avut o grij deosebit la
concentraia mediului deoarece raportul ntre diferitele componente poate schimba calea
metabolic a tulpinii pentru a favoriza producerea metaboliilor secundari n detrimentul
antibioticului.
Aadar compoziia mediului joac un rol important att n creterea produciei
volumetrice cat i n creterea specificitii ei.

5. Mecanismul de aciune

Membrana celulei eucariote conine lipide, fosfolipide, proteine i steroli. Sterolii

joac un rol important n aciunea selectiv a polienelor antimicotice. Natamicina ucide
mucegaiurile prin legarea specific la ergosterol, dar fr a permeabiliza membrana
plasmatic.

Ergosterolul este sterolul majoritar n membrana celulei mucegaiurilor i

drojdiilor, n timp ce colesterolul este un sterol major n celulele mamiferelor.

Natamicina are afinitate ridicat pentru ergosterol i se leag ireversibil de

ergosterolul membranei celulei fungice. Astfel este perturbat permeabilitatea membranei
celulare, care duce la scurgeri rapide ale ionilor eseniali i a peptidelor mici, astfel
cauznd liza celulei. Ea inhib fuziunea vacuolar prin interacii specifice cu ergosterolul.
Aadar este activ mpotriva drojdiilor i mucegaiurilor, dar nu i a bacteriilor, virusurilor
i protozoarelor.

Natamicina poate fi aplicat direct prin incorporarea n sistem lichid. n cazul

mncrii solide, poate fi aplicat prin diferite tehnici: preierea, imersare i periere, pentru
a putea controla creterea microbial. S-a artat c Natamicina este eficient mpotriva S.
Cervisiae, Z. Rouxii i Y. Lipolytica, fiind administrat prin diferite tehnici.

Natamicina aplicat n film a artat o inhibare a S. Cerevisiae mai eficient

comparat cu aplicarea prin preiere. n plus, Natamicina aplicat n film a fost capabil
9
s mpiedice contaminarea extern cu mucegaiuri, atunci cnd alimentele sunt depozitate.

Natamicina nu poate fi folosit ca dezinfectant. Dac peretele celular previne

interaciunea natamicinei cu membrana celular, nseamn c natamicina oprete creterea
miceliului fungic la nceputul creterii acestuia prin interaciunea cu membrana celular a
ciupercilor. Celulele btrne nu sunt omorte direct, dar e puin probabil s triasc.
Natamicina, de asemenea, inhib germinarea sporilor fungici printr-un mecanism
necunoscut.

Micotoxinele produse de fungi pot cauza probleme de sntate i unele sunt

carcinogene. ndeprtarea sau eliminarea mucegaiului dup creterea acestuia pe
produsele alimentare nu afecteaz micotoxinele, care pot migra n produsele alimentare.
Aadar, este foarte important de a preveni creterea ciupercilor toxice pe produsele
alimentare. Modul de inhibare a natamicinei se potrivete perfect pentru aceast aplicaie.

6. Toxicitatea

n diferite studii a fost demonstrat c natamicina i produii ei degenerai sunt greu

de absorbit de corp. Dup un timp de expunere de 150 de zile, cantit i mici au fost gsite
n ficat, rinichi i esutul adipos.

Concentraia de natamicin, care inhib cre terea fungilor pe mediu, are efect inhibitor
redus, asupra numrului bacteriilor dintr-o colonie. O concentra ie a Natamicinei de 50-200 mg/L
este necesar pentru un control fungic eficient asupra mediului.

Natamicina, un produs care este sigur pentru oameni i utilizat n tehnica alimentar, a
fost propus s nlocuiasc cicloheximida pe mediu.

Cel mai mare potenial de expunere la natamicin a fost sub 0.1 mg/kg/zi pentru copii i
sub 0.05 mg/kg/zi pentru aduli, dat de un consum excesiv de brnz i crna i usca i i trata i.

n ceea ce privete animalele, dup ingerarea unei doze de 50 mg/kg de natamicin de

ctre obolani, nu a fost observat nicio alt zon de acumulare nafar de tractul gastro-intestinal.
De aici, putem trage concluzia c doza a fost distribuit uniform n ntreg sistemul. Dup o or,
cantitatea de natamicin s-a concentrat n esofag, stomac i intestinul sub ire. Dup 2 ore, s-au
artat semne de acumulare i n cecum. Dup 4 ore, aceasta s-a relocalizat n colon. Dup 8 ore s-a
concentrat n intestin, dar stomacul conine, nc, substan activ. La 24 de ore activitatea n
tractul gastro-intestinal a sczut considerabil, cea mai mare concentra ie a fost gsit n cecum i
colon..

Urme din ficat, rinichi i esut adipos au fost putut observate doar prin expunere de lung
10
durat la doze radioactive, care indic faptul c natamicina este adsorbit de tractul gastro-
intestinal.

Valorile LD50 ale natamicinei dup administraia oral sunt raportate a fi mai mari de 1400
mg/kg pentru oareci, i 4700 mg/kg la obolani i 1400 mg/kg pentru iepuri. LD 50 pentru porci de
guineea este raportat a fi 450 mg/kg.

ntr-un studiu s-a oferit o doz de natamicin unor subieci suferind de micoz. Dozele au
variat ntre 25 i 1000 mg/pers/zi ntr-o perioad de la 20 la 180 de zile. Tratamentul a cauzat
anorexie, ameeal i vom la doze de 200 mg/pers/zi i mai mari. La o doz de 50 mg/pers/zi a
aprut flatulena. n trei cazuri, tratamentul a fost oprit datorit toxicitii. Un subiect a
tolerat o doz de 400 mg/pers/zi cu probleme gastro-intestinale, dar nu s-a putut mrii
doza.

Se cunoate faptul c natamicina nu este toxic oamenilor, acest lucru fiind asociat
cu lipsa interaciunii asupra membranelor celulare umane. Astfel a fost testat toxicitatea
asupa unei membrane celulare sintetice. Straturile membranei nu au fost afectate, dar a
cauzat o expansiune n starturile de colesterol. Dar aceste efecte au fost observate la o
concentraie mare de colesterol (50% molare sau mai mare). n cazul membranei cu 25%
molare, stabilitatea ei termodinamic ridicat a protejat-o de aciunea natamicinei. Acest
lucru explic de ce administrarea ei la mamifere este sigur.

Doar membranele bogate n steroli, colesterol n cazul nostru sunt predispuse

aciunii natamicinei.

Natamicina a fost folosit pentru o perioad lung de timp n tratarea candidei

vaginale, chiar i n primele stagii ale sarcinii. Un studiu recent a artat c tratamentul nu
a provocat nicio daun.

Informaiile despre toxico-cinetica natamicinei ne demonstreaz c nu se produc

acumulri n tractul gastro-intestinal i c aceasta este eliminat din organism prin fecale.
Produii obinui n mediul acid din stomac sunt foarte puini posibili s fie aceeai cu cei
obinui in vitro.

n final, s-a dovedit c natamicina este sigur pentru a fi folosit ca aditivi

alimentari i este sigur a se folosi pentru prevenirea creterii mucegaiului i drojdiilor n
industria alimentar.

7. Aplicaii ale natamicinei in medicina si industria alimentara

11
 Natamicina a fost folosita pe parcursul a mai multor decenii in industria
alimentara pentru a suprima dezvoltarea fungilor pe suprafata branzeturilor si a
mezelurilor , iar in medicina veterinara si umana a fost utilizat pentru infec ii fugice
tipice ale ochilor, prului, membranelor mucoase, unghii i piele, implicnd organisme din
genul Candida, Epidermophyton, Microsporum i Trichophyton.
Natamicina are o toxicitate scazuta asupra mamiferelor. Pe parcursul a 7 zile de
administrare orala a unor doze de pana la 500 mg/zi nu a fost observata absortie sa la
nivelul tractului intestinal uman.
Natamicina si / sau sorbatii sunt singurele antifungice aprobate in cele mai multe
tari pentru tratarea alimentelor precum branza si carnatii uscati . Comparativ cu
natamicina , sunt necesare concentratii relativ mari de sorbat pentru a preveni cresterea
fungilor si a unor forme de deteriorare ce au dezvoltat rezinstenta fata de acest acid. Mai
mult de atat, sorbatul difuzeaza de la suprafata spre interiorul produsului , rezultand o
eficienta redusa. Utilizarea sorbatului poate afecta de asemenea si gustul si culoarea
produsului. (Stark, 2007)
Marele avantaj al natamicinei il reprezinta spectrul sau larg de activitatea si faptul
ca nu a fost reportata dezvoltarea unei rezistente naturale. (Tabelul 1)

12
 Alte avantaje ale natamicinei sunt : lunga istorie de utilizare n condiii de
siguran, timpul de lucru prelungit i activitatea relativ ridicat la pH sczut, neutru i
ridicat (Stark, 2007). Mai mult dect att, este stabil chimic i nu are nici o culoare,
miros, gust, sau orice efecte negative asupra calitii produsului.
Datorit solubilitii scazute n apa , natamicina va fi in principal prezent n stare
solid, sub forma de cristale. Pe parcursul dizolvarii lente , natamicina devine activa si
difuzeaza pe intreaga suprafata, compensand cantitatea de natamicina pierduta prin
interactiunea cu celulele fungice, prin hidroliza, inactivare prin oxidare sau lumina..
Aceasta eliberare lenta a natamicinei , ii garanteaza o activitate prelungita in timp.
Natamicina este foarte eficienta la concentratii mici (Delves-Broughton et al., 2005;
Stark, 2007).

8. Concluzii

13
 Actinamycetele sunt productori a compuilor metabolici folosii comercial ca
antibiotice, medicamente, conservanti alimentari. Acest studiu arat cum izolaii
microbieni au capacitatea de a produce ageni antimicrobieni. Natamicina a demonstrat
efecte inhibitoare mpotriva patogenilor microbieni.
Natamicina deine o structur care este alert mpotriva geno-toxicologiei datorit
inelului epoxidic. Totui, n legtur cu acest fapt putem spune c:

Inducerea devierii cromozomale observat n studiile recente a fost acompaniat

de citotoxicitate;

Sunt studii in vitro asupra mutagenitii bacteriilor i celulelor rmamiferelor, n

devierile cromozomale, care au fost fcute cu ajutorul GLP i au rezultat negative;

Nicio substana cu efect neo-plastic nu a fost observat pe durata studiilor

ndelungate;

innd cont de faptul ca natamicina este foarte puin absorbit de organism se

consider sigur datorit rezultatelor obinute n cadrul analizelor pe termen lung.

14
 9. Bibliografie

1. Van Leeuwen, M. R. ,Golovina, E. and Dijksterhuis, J. (2009). The polyene antibiotics

nystatin and filipin disrupt the plasma membrane; whereas natamycin inhibits
endocytosis in germinating conidia of Penicillium discolor. J. Appl. Microbiol. 106:
1908-1918.

2. Antimicrobials in food .Third Edition .Taylor and Francis Group

3. Stark J, 2004. Permitted preservatives - natamycin. In Robinson RK, Batt, CA and Patel P
(eds.). Encyclopaedia of Food Microbiology, Academic Press, New York, pp. 1776-1781.

4. Thomas LV and Delves-Broughton J, 2003. Natamycin. In: Encyclopedia of Food Sciences and
Nutrition. Eds. B Caballero, L Trugo and P Finglas, pp. 4109-4115. Elsevier Science Ltd.

5. Biochemical studies on the Natamycin antibiotic produced by Streptomyces lydicus:

fermentation, extraction and biological activities H.M. Atta a,*, A.S. El-Sayed b, M.A. El-
Desoukey b, M. Hassan c, M. El-Gazar d . King Saud University
Journal of Saudi Chemical Society.

15