Universitatea de Stat de Medicin i Farmacie Nicolae Testemianu

Catedra Biologie molecular i Genetic uman

Curs

Genetica uman

Chiinu, 2012
 Cuprinsul
CURS 1 ...................................................................................................................................................................... 3
GENETICA UMAN TIIN FUNDAMENTAL I MEDICAL ......................................................... 3
CURS 2 ...................................................................................................................................................................... 7
APARATUL GENETIC AL CELULEI UMANE .............................................................................................. 7
CARACTERISTICA GENOMULUI UMAN .................................................................................................. 12
CURS 3 .................................................................................................................................................................... 17
VARIABILITATEA I FORMELE EI............................................................................................................. 17
(A) VARIABILITATEA NEEREDITAR ...................................................................................................... 18
(B) VARIABILITATEA EREDITAR SAU GENOTIPIC .......................................................................... 19
CURS 4 .................................................................................................................................................................... 21
CROMOZOMII UMANI .................................................................................................................................. 21
(B) CLASIFICAREA CROMOZOMILOR UMANI ........................................................................................ 26
STUDIUL CROMOZOMILOR UMANI.......................................................................................................... 28
NOMENCLATURA CROMOZOMILOR UMANI ......................................................................................... 32
CURS 5 .................................................................................................................................................................... 36
ANOMALII CROMOZOMICE ........................................................................................................................ 36
ANOMALIILE CROMOZOMICE DE STRUCTUR ................................................................................. 36
ANOMALIILE CROMOZOMICE NUMERICE ............................................................................................. 40
CURS 5 .................................................................................................................................................................... 47
TRANSMITEREA MATERIALULUI GENETIC DE LA CELUL LA CELUL ....................................... 47
ERORILE MITOZEI ......................................................................................................................................... 50
CURS 6 .................................................................................................................................................................... 55
TRANSMITEREA INFORMAIEI GENETICE DE LA PRINI LA COPII ............................................ 55
GAMETOGENEZA .......................................................................................................................................... 55
DINAMICA CROMOZOMILOR N MEIOZ ............................................................................................... 57
ERORILE MEIOZEI I CONSECINELE LOR............................................................................................. 60
CURS 7 .................................................................................................................................................................... 62
GENELE UMANE ............................................................................................................................................ 62
CURS 8 .................................................................................................................................................................... 75
TEHNICI DE ANALIZ A GENELOR ......................................................................................................... 75
CURS 9 .................................................................................................................................................................... 81
CARACTERE EREDITARE ............................................................................................................................ 81
CARACTERISTICA GENELOR ALELE I NEALELE ................................................................................ 81
CARACTERE MONOGENICE MENDELIENE ............................................................................................ 82
DETERMINISMUL UNOR CARACTERE EREDITARE NORMALE ......................................................... 83
CARACTERE MONOGENICE NON-MENDELIENE ................................................................................... 84
CARACTERE EREDITARE NORMALE POLIGENICE ............................................................................ 86
CURS 10 .................................................................................................................................................................. 88
STUDIUL CARACTERELOR EREDITARE ................................................................................................. 88
PARTICULARITILE CARACTERELOR EREDITARE .......................................................................... 88
METODE DE STUDIU UTILIZATE N GENETICA UMAN ..................................................................... 90
CURS 11 .................................................................................................................................................................. 94
INTRODUCERE N PATOLOGIA GENETIC UMAN ............................................................................. 94
ASPECTE COMUNE N PATOGENEZA BOLILOR GENETICE ................................................................ 96
BOLI CROMOZOMIALE ................................................................................................................................ 98
BOLI MONOGENICE .................................................................................................................................... 101
TESTAREA GENETIC ................................................................................................................................ 112

2
 CURS 1
GENETICA UMAN TIIN FUNDAMENTAL I MEDICAL

Genetica este o tiin biologic fundamental, cu ritm rapid de dezvoltare, ce studiaz

proprietile universale ale vieii ereditatea, variabilitatea i substratul lor material moleculele de
ADN. n conceptul actual, organismul viu este un sistem deschis, ce se autoregleaz i se
autoreproduce. Activitatea vital este susinut de schimbul permanent de energie, substane i
informaie. Particularitile organizrii i funcionrii sistemelor biologice, cile de transformare a
substanelor i energiei sunt controlate de informaia ce se conine n gene. Descifrarea informaiei
genetice se realizeaz n procesul de biosintez a diverse proteine, care reprezint suportul tuturor
proceselor vitale ale organismului.

Ereditatea este proprietatea organismului de a pstra i a transmite caracterele morfologice,

fiziologice, biochimice i de comportament generaiilor urmtoare. Ereditatea este asigurat de
proprietatea moleculelor de ADN de a se replica cu mare exactitate i a determina transmiterea de-a
lungul miilor i milioanelor de generaii a informaiei i, deci, a caracterelor. Astfel, n realitate, nu
caracterele se pstreaz i se transmit, ci informaia genetic despre ele, codificat n ADN. Ereditatea
face posibil conservarea speciilor n spaiu i timp.

Variabilitatea este proprietatea organismului de a prezenta caractere deosebite de cele ale

prinilor, asigurnd diferene individuale, intrafamiliale i intrapopulaionale. Sursele principale ale
variabilitii sunt diferite modificri ale materialului ereditar (mutaiile) care apar n rezultatul erorilor
de replicaie sau aciunii diferitor factori mutageni fizici, chimici sau biologici. O alt surs de
variabilitate, este capacitatea moleculelor de ADN de a se recombina i, ca rezultat, apar combinaii noi
de gene i, respectiv, de caractere. Totodat, diveri factori ai mediului (intern i extern) pot modula
activitatea genelor, asigurnd rspunsul organismului n condiii concrete. Apariia la descendeni a
caracterelor noi este important din punct de vedere evolutiv, asigurnd adaptarea indivizilor la
condiiile noi ale vieii. Transmiterea caracterelor evaluante la descendeni determin dezvoltarea
speciei n timp.

Substratul ereditii i variabilitii la majoritatea organismelor vii este molecula de ADN (ca
excepie, la unii virui materialul genetic este reprezentat de molecule de ARN). Structura moleculelor
de ADN, proprietile, structura i funcia genelor, mecanismele moleculare ale reglrii activitii
genice reprezint obiectul de studiu al geneticii contemporane. Permanent sunt elaborate metode noi de
cercetare, identificate gene noi, stabilite legiti noi ce permit de a ptrunde mai profund n tainele
vieii.
Genetica ofer o nelegere tiinific a proceselor biologice ce stau la baza activitii vitale
normale a organismului, ct i a dereglrilor n diverse stri patologice. Toate tiinele despre om
integreaz realizrile geneticii, fapt confirmat prin ompartimentele geneticii care s-au transformat n
discipline independente:
Genetica general, clasic;
Genetica dezvoltrii;
Genetica senescenei;
Imunogenetica;
Genetica ecologic;
Neurogenetica;
Farmacogenetica;
Genetica comportrii;
Genetica medical;
Genetica clinic.

3
 Genetica uman contemporan reprezint o tiin bazat pe genetica clasic i genetica
molecular ce se focuseaz pe:
legitile pstrrii, transmiterii i realizrii informaiei ereditare;
mecanismul apariiei, manifestrii i transmiterii modificrilor materialului genetic;
structura i funciile genelor normale i patologice.

Genetica uman contemporan utilizeaz att metodele clasice ale geneticii ct i cele
moleculare:
metoda genealogic studiul agregrii familiale ale caracterelor ereditare, stabilirea tipului de
transmitere i calcularea riscului de recuren la generaiile urmtoare, reprezentnd o etap
important n consultul i sfatul genetic;
metoda gemenologic studiul ponderii factorilor genetici i ecologici n manifestarea
caracterelor normale sau patologice;
metode citogenetice - analiza cromozomilor i depistarea anomaliilor cromozomiale de numr i
de structur;
metode molecular genetice analiza variaiilor nucleotidice la nivelul moleculei de ADN,
studiul genelor normale i genelor mutante, identificarea polimorfismelor normale i mutaiilor
patologice;
metoda populaional statistic analiza genofondului populaiei, stabilirea frecvenei unor
gene patologie, evaluarea factorilor ce deregleaz echilibrul populaional;
modelarea matematic i biologic;
genetica celulelor somatice studiul corelaiei dintre modificrile materialului genetic cu
modificrile fenotipice la nivel celular;

Medicii de diferite specialiti n activitatea lor ntlnesc boli genetice, de aceea utilizeaz
diverse metode n investigarea acestora. Depistarea modificrilor n structura genelor prin studiul ADN
reprezint o cale n diagnosticul corect al bolilor genetice. Ingineria genic permite elaborarea i
producerea diferitor preparate medicamentoase: hormoni, factori de cretere, interferon, etc. Una dintre
problemele actuale ale medicinei se refer la posibilitatea clonrii embrionilor pentru transplantul
esuturilor i organelor. Se elaboreaz metode ale terapiei genice, prin care gena patologic este
nlocuit cu cea normal. Din aceste considerente, genetica uman este o tiin aplicativ, cu un rol
deosebit n medicin.

Profilaxia bolilor genetice se bazeaz pe realizrile geneticii umane:

diagnosticul prenatal prin screeningul mutaiilor patologice;
terapia genic ce permite introducerea genelor umane in genomul celulelor somatice ale
purttorilor de mutaii cu revenirea la un genotip normal;
obinerea produilor genetici artificiali, transferul lor n alt celul sau organism, studiul
funciei;
sinteza noilor proteine cu proprieti terapeutice.

***
Piatra de temelie pentru progresul Geneticii umane este pus n anul 1956, an n care a fost
stabilit cromosologia uman i an n care a avut loc I-ul Congres n Genetica Uman la Copenhaga.
Principalele evenimente discutate la acest congres au fost:
- numrul de cromozomi la specia uman (46,XX; 46,XY);
- analiza grupelor de nlnuire;
- studiul proteinelor prin electroforeza n gel;
- stabilirea defectului molecular n siclemie.

Din 1956 pn n 1991 (Congresul VIII, Washington) au aprut metode moleculare n studiul
cromozomilor umani; s-a reuit s se studieze variaiile ADN-ului.
4
 Spre 1961 deja s-au evaluat implicaiile clinice ale anomaliilor cromozomiale:
- rolul cromozomilor X i Y n sexualizare, patogenia sdr. Turner, Klinefelter; a fost
descoperit TDF testis determining factor; a fost naintat ipoteza Mary Lyon privind
activitatea cromozomilor X la cele dou sexe;
- s-a stabilit corelaia dintre cromozomul Philadelphia i LMC (leucemia mieloid
cronic) care este prima pies n teoria cancerului cu implicarea cromozomilor.

n 1966 a fost descifrat n totalitate codul genetic i se descriu erorile nnscute de metabolism;
se pun bazele diagnosticului prenatal prin amniocentez.

n 1971 se pun la punct erorile nnscute de metabolism prin studiul pe culturi celulare.

n 1980 se practic deja clonarea genelor umane. Iar din anul 1981 (Congresul de la Ierusalim)
se discut metodele de genetic molecular implicate n studiul localizrii genelor la nivel de
cromozomi, prin studiul familial a patologiilor cu transmitere mendelian. n 1985 a aprut tehnica
PCR. n 1986 la congresul de la Berlin s-a discutat despre studiul RFLPs n boala Hungtington; s-a
evideniat importana studiului molecular n aa patologii ca Granulomatoza cronic, distrofia
Duchenne, retinoblastom, leucemia mieloid cronic i limfomul Burkitt.

n 1991 s-au clonat i studiat genele implicate n patologia Duchenne, fibroza chistic,
neurofibromatoz, polipoza de colon, retinita pigmentar, cardiomiopatia hipertrofic, sdr. Marfan,
hipertermia malign; au aprut diverse concepte legate de impriting-ul genelor i disomia uniparental.

n 1994 a fost publicat Catalogul Fenotipurilor Autosomal Dominante, Autosomal Recesive i

X-lincate; acest catalog este denumit Catalogul genelor umane i a defectelor genice.

n 1996 a avut loc al XIX-lea Congres n Genetica Uman la Rio-de-Janeiro unde s-au discutat
marcherii ADN-ului; YAC-urile; rolul acidului folic n defectele aprute la nou-nscui i introducerea
acestuia ca supliment obligatoriu n perioada prenatal; diagnosticul preimplantativ al celulelor utilizate
n fertilizarea in vitro i metodele de selecie a produilor de concepie non-mutani.

Din 1996 pn n 2001 s-au descoperit mai mult de 1000 de gene implicate n patologia uman
(cu una sau mai multe mutaii); s-a studiat expresia genic, diagnosticul maladiilor genetice, s-au fcut
studii de omologie pe drojdii i drosofil.

n 2001 a demarat Proiectul Genomul Uman. n perioada 2001 - 2003 se schimb paradigmele
Geneticii:
- de la structural la studiul funcional al genelor;
- de la aranjarea genelor la nivel de cromozomi la secvenierea ADN-ului;
- de la diagnosticul unei afeciuni genetice la determinarea predispoziiei genetice n
bolile comune;
- de la etiologie la patogenie, la mecanismul producerii bolilor genetice;
- de la studiul unei gene ce cauzeaz boala la studiul familiilor de gene;
- de la genom la proteinom;
- de la Genetica Medical la Medicina Genetic; Genetica Medical se axeaz pe
studiul patologiilor mendeliene i a aberaiilor cromozomiale, pe cnd Medicina Genetic
se focuseaz pe implicarea geneticii n orice parte a medicinii clinice, factorii genetici
fiind implicai n toate bolile existente, iar predispoziia genetic exist pentru maladiile
comune ale adultului i copilului; Genetica Molecular prevaleaz n toate aspectele
Geneticii Umane i Medicale.

5
 Complexitatea studiilor din Proiectul Genomul uman, chiar n zilele noastre nc nu sunt
definitive, deoarece, dei marea majoritate a genelor sunt cunoscute, nc nu se tie cu certitudine, cum
se comport marea majoritate a acestor gene solo, darmi-te n concert cu celelalte gene din
genotipul uman.

Genetica Nou se bazeaz pe studiul secvenelor specifice de ADN cu funcie necunoscut i

corelaiile genotip fenotip. Aa dar, progresnd n ultimii 40 de ani de la fenotip la ADN, n urmtorii
30 de ani ne vom ntoarce de la ADN la fenotip determinnd funcia anumitor secvene de ADN.

O alt problem ce ine de viitor este studiul corelaiei: secvene ADN funcie variaie a
secvenelor ADN funcie. Se ateapt o nelegere a implicaiei factorilor genetici n afeciunile
multifactoriale (ex: HTA, boli psihice). Se ateapt o viziune nou asupra maladiilor genetice ale
celulelor somatice a patra mare categorie de maladii genetice (cancerul), celelalte trei categorii fiind
bolile monogenice, boli multifactoriale; anomaliile cromozomiale. Conexiunea ntre oncogenez i
teratogenez (oncogene i teratogene) deja a fost fcut pe exemplul tumorii Wilms i sindromul
cefalosindactiliei Greig. Terapia genic va deveni popular nu doar pentru maladiile ereditare, dar i
pentru cele ale celulelor somatice.
***
Trim n veacul celor dou revoluii tiinifice:
n biologie !!!
n informatic !!!

Geneticienii sunt privilegiai s lucreze ntr-un important cmp tiinific un cmp al

provocrilor intelectuale. Genetica uman este un cmp care deine fascinaii particulare, pentru c
implic aspectele fundamentale ale speciei noastre, sunt fascinaii pe care matematica, de exemplu, nu
le poate mprti.

Genetica Uman, combin fascinaiile intelectuale i antropoceutice, oportunitatea de a

contribui la bunstarea umanitii, de a fi n serviciul familiei i individului aparte prin Genetica
Medical. Dar acest privilegiu aduce cu sine i responsabiliti !!!

Proiectul Genomul Uman are semnificai etice, legale i sociale. Abilitatea de analiz a
genomului individului este acompaniat de riscul de a folosi greit informaia i de aceia trebuie de
limitat la maxim acest risc. Exist necesitatea pstrrii confideniale a anumitor studii pe indivizi,
trebuie protejat informaia pentru a nu se ajunge la un complex hazardat genetic comercial.

6
 CURS 2

APARATUL GENETIC AL CELULEI UMANE

Aparatul genetic al celulelor umane este format din structuri celulare ce conin ADN (nucleul
i mitocondriile) i care care intervin n realizarea funciilor ADN-ului (ribozomii i centrul celular).

Nucleul conine ~ 98% din ADN celular, iar numrul de molecule de ADN nuclear este corelat cu
numrul de cromozomi, care constituie o caracteristic de specie:
- n celulele somatice ale omului se conin 46 molecule lungi de ADN n cei 46 de cromozomi
(set diploid = 2n cromozomi);
- n celulele sexuale 23 molecule de ADN n 23 cromozomi (set haploid = n cromozomi).
ADN-ul cromozomial este extrem de heterogen, 25 % din secvenele polinucleotidice corespund
genelor structurale codificatoare de proteine. Totalitatea informaiei genetice (genele) din cei 46
cromozomi ai celulelor somatice formeaz genotipul, fiind n proporie de 50 % / 50% de origine
matern i patern.

Mitocondriile conin ~ 2% din ADN celular. Spre deosebire de nucleu, mitocondriile conin cteva
copii mici de ADN circular. Informaia genetic din mitocondrii constituie plasmotipul. Transmiterea
informaiei ereditare a mitocondriilor se face pe linie matern.

Ribozomii reprezint o component a aparatului de translaie a informaiei genetice, controlnd

biosinteza proteinelor expresia informaiei genetice codificate n ADN.

Centrul celular asigur formarea aparatului de diviziune responsabil de repartizarea materialului

genetic n procesul de transmitere a informaiei genetice de la o generaie de celule la alte celule n timpul
mitozei, de la prini la copii n timpul meiozei.

7
 ORGANIZAREA I FUNCIONAREA MATERILAULUI GENETIC
(date generale)

(A) ADN-ul deine informaia genetic despre:

structura organismului
particularitile lui funcionale
particularitile de dezvoltare, reproducere, rspunsului la aciunea factorilor de mediu,
interaciunea dintre diferite elemente ale aceluiai organism sau cu alte organisme.

ADN reprezint macromolecule formate din dou catene polidezoxinucleotidice complimentare,

antiparalel sub form de dublu helix. Informaia genetic n ADN este nscris sub forma unei secvene
prin succesiunea a patru tipuri de baze azotate:
A, G, C, T

Bazele azotate se combin cte trei formnd codoni - "cuvintele" codului genetic, fiecare triplet
codific un anumit aminoacid, de exemplu:
AAA Lys
CAG Gln
TGC Cys
GGA Gly
etc.

Astfel, succesiunea tripletelor dintr-un segment codant de ADN determin succesiunea

aminoacizilor dintr-un polipeptid.
Secvena codant - ...AAACAGTGCGGA...

Fragment polipeptidic - ...Lys Gln Cys Gly...

Sucesiunea aminoacizilor din polipeptid determin particularitile spaiale i funcionale ale

proteinei.
Proteinele determin (direct sau participnd n diferite lanuri metabolice) toate structurile
celulare, activitle celulare, asigur interaciunea cu alte celule, particip n aprarea celulei sau
rspunsul la aciunea diferitor factori ecologici, etc.

(B) ADN-ul transmite informaia genetic din generaie in generaie (de la celul la alte celule
sau de la o generaie de organisme la alte generaii de la prini la copii).
La baza motenirii i transmiterei I.G. st proprietatea unic a moleculei de ADN de replicare:

replicare
1 molecul de ADN 2 molecule de ADN

n timpul replicrii sau sub aciunea diferitor factori ai mediului n molecula de ADN pot aprea
modificri n secvena nucleotidic mutaii. Mutaiile pot avea catacter adaptiv sau pot fi patologice.
Pentru a se evita acumularea de mutaii patologice moleculele de ADN au alt proprietate unic
reparaia cu refacerea structurii iniiale a ADN-ului prin nlturarea nucleotidelor eronate sau
modificate i inlocuirea lor cu nucleotide normale.

(C) ADN-ul realizeaz informaia genetic n timpul sintezei moleculelor de ARN i

proteinelor.
ADN-ul poate fi transcris sub form de secvene nucleotidice de ARN: ARNm, ARNr, ARNt i
microARN care particip la translaia I.G. i sinteza lanurilor polipeptidice - viitoare proteine
structurale, enzime, receptori, reglatori, etc..
8
 ADN transcript ie
ARNm translatie
polipeptid protein funcional
ARNt
ARNr
microARN

(D) Procesele moleculare de baz din celule umane sunt:

replicarea ADN suportul transmiterii I.G.;
reparaia ADN suportul stabilitii I.G;
transcripia ADN i translaia ARNm suportul realizrii I.G..

Toate aceste procese:

(1) sunt programate se realizeaz numai ntr-o anumit perioad ontogenetic a celulei,
dependent de tipul celulei, depind de semnale exogene i endogene;
(2) se realizeaz matricial moleculele iniiale reprezint modele pentru sinteza produilor
specifici:
ambele catene ale moleculei de ADN sunt matrie pentru sinteza noilor catene de
ADN n timpul replicrii;
una din catenele moleculei de ADN este matri n timpul reparaiei celeilalte catene
de ADN;
una din catenele ADN-ului genic este matri pentru sinteza moleculelor de ARN
(ARNm, ARNt, ARNr) n timpul transcripiei ADN-ului;
molecula de ARNm este matri pentru sinteza polipeptidului n procesul translaiei
codului genetic;
(3) se desfoar dup principiul complementaritii bazelor azotate;
n timpul replicrii catenele noi de ADN sunt complementare celor vechi, matrielor;
n timpul reparaiei fragmentele reparate de ADN sunt complementare catenei
integre;
n timpul transcripiei moleculele de ARN sintetizate sunt complementare catenei
anticodogene a secvenei moleculei de ADN;
n timpul translaiei anticodonii moleculelor de ARNt adaptorii aminoacizilor
sunt complementare codonilor din ARNm.
(4) necesit factori proteici, uniti de polimerizare i energie pentru a se desfura:
a. pentru a se desfura replicarea:
ADN-polimerazele - enzime ce sintetizeaz catene noi de ADN pe baza catenelor
vechi;
dNTP nucleotide, monomeri pentru formarea noilor catene de ADN + donatori
de energie n realizarea legturilor covalente dintre nucleotide;
b. pentru a se desfura reparaia:
Endonucleaze enzime specifice ce nltur fragmentul nucleotidic defect;
ADN-polimerazele - enzime ce sintetizeaz fragmente noi de ADN pentru
inlocuirea golului;
dNTP nucleotide, monomeri pentru formarea noilor catene de ADN + donatori
de energie n realizarea legturilor covalente dintre nucleotide;
c. pentru a se desfura transcripia:
ARN-polimerazele enzime care sintetizeaz catene de ARN pe baza unei catene
a moleculei de ADN;
NTP - nucleotide, monomeri pentru formarea moleculelor de ARN + donatori de
energie n realizarea legturilor covalente dintre nucleotide;
d. pentru a se desfura translaia:
ribozomii sediul translaiei i sintezei polipeptidului;
ARNt - translatorii codului genetic i transportori de aminoacizi spre ribozomi;
9
 aminoacizi monomeri pentru formarea polipeptidului;
ATP, GTP surse de energie.
(5) necesit secvene nucleotidice reglatoare pentru interaciunea cu reglatorii procesului dat;
Pentru iniierea replicrii secvena ORI;
Pentru transcriie:
o Promotor secven reglatoare a iniierei transcripiei;
o Terminator secven reglatoare a terminrii transcripiei;
o Enhancer secven intensificatoare a transcripiei;
o Silencer secven atenuatoare a transcripiei.
Pentru translaie
o Codon de iniiere - AUG;
o Codon STOP - UAA, UAG sau UGA;
(6) necesit factori proteici i energie pentru despiralizarea ADN-ului sau ARN-ului ca s fie
acsesate matriele i citite secvenele nucleotidice:
Helicazele enzime ce denatureaz acizii nucleici, scindez legturile de H dintre bazele
complementare ale ADN sau ARNm particip la toate procesele de baz analizate;
Topoizomerazele relaxeaz i despiralizeaz dublul helix de ADN, ajutnd Helicazele
n timpul replicarii.
(7) se desfoar n mai multe etape cu cooperarea numeroilor factori proteici i n
consecin defectul sau absena unei proteine din setul necesar pot compromite calitativ sau
cantitativ replicarea, reparaia, transcripia sau translaia:
i Blocarea replicrii ADN-ului va conduce la blocarea proliferrii celulei (diviziunii
celulei) care n consecin pot duce la:
o deficiene in dezvoltarea i creterea organismului;
o deficiene n regenerarea i reinnoirea esurutilor;
o mbtrnire precoce i moarte.
ii Blocarea reparaiei ADN-ului va avea ca consecin:
o acumularea mutaiilor patologice;
o sensibilitatea sporit a organismului la aciunea radiaiei ultraviolete, radiaiei
ionizante, substanelor chimice din mediu;
o apariia i dezvoltarea rapida a tumorilor (cancerului);
o mbtrnirea precoce i moartea.
iii Blocarea transcripiei sau translaiei, fiind etape ale realizrii I.G. vor avea ca
consecin blocarea sintezei proteinei i diferite defecte la nivel celular sau organismic
dependent de:
o tipul proteinei,
o funciile ei n celul;
o tipul de celul, esut n care se sintetizeaz i / sau activeaz;
o perioada ontogenetic n care este activ,
o etc.
(8) prezint principii generale comune la diferite organisme i anumite particularitai,
unele aspecte sunt aceleai i la procariote i la eucariote, inclusiv i la om.

NIVELE DE ORGANIZARE A MATERIALULUI GENETIC

Din punct de vedere funcional se disting trei nivele de organizare a materialului genetic: genic,
cromozomial, genomic, care au urmtoarele caracteristici comune:
1. autoreproducerea, care asigur transmiterea informaiei genetice la urmai prin replicarea ADN-
ului i diviziunea celular suportul ereditii;

10
 2. autoconservarea, ce asigur stabilitatea organizrii, pstrrii i repartizrii uniforme a materialului
genetic n succesiunea generaiilor prin replicare i reparaia ADN-ului important n pstrarea
caracterelor de specie;
3. mutabilitatea, care asigur proprietatea materialului genetic de a se schimba i de a transmite
modificrile descendenilor - sursa principal a variabilitii.

Gena - unitatea elementar structuralfuncional a ereditii i variabilitii:

- reprezint o secven specific polinucleotidic din molecula de ADN;
- conine informaia despre formarea caracterului elementar proteina: succesiunea de nucleotide din
ADN determin succesiunea de aminoacizi n protein;
- asigur continuitatea material a informaiei genetice de-a lungul generaiilor, adic motenirea de
ctre descendeni a caracterelor parentale;
- modificrile ce se produc n structura genei pot determina modificri n sinteza proteinei i ale
caracterului. Existena genelor a permis descoperirea de ctre G. Mendel a legitilor de motenire a
caracterelor.

Cromozomul reprezint substratul morfologic al ereditii i variabilitii:

- este reprezentat de o molecul de ADN linear compactizat cu ajutorul proteinelor histone i
nonhistone, vizibil n timpul diviziunii celulare;
- conine multe gene, de la cteva sute (crs. Y) pn la cteva mii (crs. 1);
- asigur aranjarea ordonat a informaiei genetice n spaiu, n grupuri de nlnuire, fiecare gen are
un locus fix pe molecula de ADN;
- determin transmiterea genelor n bloc, datorit proprietilor de replicare a cromozomilor i
compactizrii lor rapide;
- controleaz recombinarea materialului genetic crossing-overul.

Genomul este nivelul superior de organizare a materialului genetic care asigur unitatea
genetic a sistemelor unui organism prin realizarea informaiei genetice n caractere fenotipice i
integrarea diferitor procese moleculare, biochimice, morfologice i fiziologice. Genomul reprezint:
- totalitatea moleculelor de ADN ce se conin n celul;
- genomul celulelor sexuale umane - 23 molecule ADN nuclear (set haploid) i cteva moleculele de
ADN mitocondrial;
- genomul celulelor somatice - 46 molecule ADN nuclear (set diploid) i cteva copii de ADN
mitocondrial;
- genomul conine setul de secvene codante, reglatoare i modulatoare care asigur dezvoltarea
tuturor caracterelor specifice individului;
- sistemul de gene care se conine n 46 molecule de ADN ale celulelor somatice se numete genotip
i include circa 25-35 mii perechi de gene;
- genele din ADN mitocondrial formeaz plasmotipul;
- setul diploid al moleculelor de ADN nuclear, organizate sub form de cromozomi (complexe ADN-
proteine) formeaz cariotipul.

11
 CARACTERISTICA GENOMULUI UMAN
Genomul este sistemul genetic complet al celulei organismului uman, care determin
dezvoltarea individual, activitatea vital i transmiterea caracterelor structurale i funcionale
descendenilor. Sistemul genetic uman complet include genomul nuclear i mitocondrial, adic 46
molecule ADN nuclear i cteva molecule circulare mitocondriale.

Genomul nuclear al celulei somatice umane reprezint 95-98% din cantitatea de ADN celular i
este fragmentat n 24 molecule de ADN distincte:
22 molecule de ADN ce formeaz cromozomii autozomi;
o molecul de ADN ce formeaz cromozomul X;
o molecul de ADN ce formeaz cromozomul Y.

n nucleu sunt aproximativ:

- 7 picograme de ADN cu o lungime de pn la 7 mld. p.n. (7x109),
- circa 30.000 perechi de gene codificatoare de proteine care:
constituie doar 25% din ADN-ul celular;
sunt dispersate neomogen pe toi cromozomii;
- 90% regiuni eucromatice ce asigur transcripia i se caracterizeaz prin alternarea:
secvenelor unice i repetitive,
codificatoare i necodificatoare;
- 10% - regiuni heterocromatice ce constau din secvene nalt repetitive necodificatoare;
Partea necodificatoare a genomului se caracterizeaz printr-un polimorfism nalt, care
nu se manifest n fenotip,
constituie baza molecular a individualitii ADN-lui uman amprent genetic.

Genomul nuclear reprezint o comunitate simbiotic de secvene nucleotidice, care const din
elemente obligatorii i facultative.

Elementele obligatorii determin formarea i transmiterea caracterelor specio-specifice i

individuale, structurale i funcionale ntr-un ir de generaii; controleaz particularitile dezvoltrii
ontogenetice ale fiecrui individ.
Elementele obligatorii ale genomului uman sunt:
genele structurale caracteristice speciei, numrul i localizarea crora sunt constante n genom;

12
 genele ARNr i ARNt produii crora asigur expresia genelor structurale, sinteza proteinelor
celulare baza tuturor structurilor i funciilor celulelor organismului uman;
secvenele inversate i palindromii care reprezint situsuri de recunoatere - reglatoare ale expresiei,
replicrii i recombinrii materialului genetic;
secvenele centromerice i telomerice care asigur integritatea materialului genetic cromozomial,
transmiterea exact a IG n timpul mitozei, meiozei.

Elementele facultative ale genomului sunt reprezentate de pseudogene, elemente mobile

(transpozoni), secvene de ADN viral, retrotranscripi (ADNc), care reprezint un substrat n evoluia
genomului.
CLASIFICAREA SECVENELOR GENOMULUI UMAN NUCLEAR

ADN nerepetitiv 60% ADN moderat repetitiv ADN nalt repetitiv

30% 10%
- gene structurale - gene de clasa I i III; ADN satelit (100-200pb)n;
Tipuri de
- pseudogene - SINEs ADN minisatelit (14-65pb)n;
secvene
- spaiatori ai genelor - LINEs ADN microsatelit (1-4pb)n.
Numrul de - secvene unice sute i mii de copii de secvene scurte Milioane de copii de secvene de 2-
copii per - familii multigenice cu de 300-1000pb 200pb
genom un numr mic de copii
dispersate neomogen pe - sunt dispersate n genom - -sateliii n regiunile de
toi cromozomii - formeaz secvene repetate n tandem heterocromatin costitutiv;
Localizare
- minisateliii au localizare specific
pentru fiecare cromozom
- codific proteine - codific ARNr, ARNt, ARNsn - sateliii au rol structural;
- separ secvenele - reprezint transpozoni - minisateliii reprezint markeri
codificatoare - secvene ORI specifici ai cromozomilor;
Funcii
- regleaz expresia - controleaz mperecherea corect a - microsateliii sunt hipervariabili -
genelor cromozomilor n timpul meiozei marcheri genetici individuali
permit dactiloscopia genomic

Genomul mitocondrial este reprezentat de 2-10 copii circulare de ADN, localizate n matricea
mitocondrial. Fiecare molecul de ADN const din 16.569 perechi nucleotide. Ambele catene ale moleculei
de ADN conin gene structurale care sunt lipsite de introni i se separ unele de altele prin gene ARNt. n
fiecare molecul de ADN sunt localizate 13 gene ce codific proteine enzime ale aparatului de respiraie
mitocondrial, 2 gene pentru ARNr i 22 gene pentru ARNt.

Genomul mitocondrial se caracterizeaz

prin:
numr variabil a copiilor per celul, care
depinde de numrul mitocondriilor i /
sau intensitatea metabolismului celular;
localizarea compact a genelor;
lipsa secvenelor necodante;
transcrierea informaiei de pe ambele
catene ale moleculei de ADN;
mutabilitatea nalt a secvenelor
nucleotidice;
mutaiile genelor mitocondriale sunt
cauzele unor boli genetice legate de
metabolismul energetic (de ex., miopatii,
encefalopatii, etc.);
transmitere pe linie matern.

13
 DINAMICA MATERIALULUI GENETIC NUCLEAR
Materialul genetic nuclear este reprezentat de cromatin sau cromozomi, care din punct de
vedere al organizrii moleculare reprezint
complexe nucleoproteice (ADN, proteine histone,
proteine nehistone, ARN). Cantitatea, forma i
activitatea materialului genetic se modific n
funcie de:
- perioada ciclului celular;
- perioada ontogenetic;
- tipul celulei;
- aciunea factorilor de mediu.
n diferite perioade ale ciclului celular
materialul genetic se poate prezenta sub form de:
- cromatin sau cromozomi, graie diferitor
nivele de compactizare;
- cromozomi mono- sau bicromatidieni,
nainte sau dup replicare;
- secvene genetic active sau inactive
transcripional.
Compactizarea ADN-ului nuclear

Dinamica materialului genetic pe parcursul ciclului celular

Perioadele Nr de mol de
Grad de condensare Procese genetice Nr de cromozomi
ciclului celular ADN
Eu- i heterocromatin Transcripie,
G1 translaie, 46 46
reparaie
Eu- i heterocromatin Replicaie,
transcripie,
S 46 4692
translaie,
reparaie
Eu- i heterocromatin Transcripie,
G2 translaie, 46 92
reparaie
Profaz Heterocromatin - 46 92
Cromozomi -
Metafaz 46 92
metafazici
Anafaz Heterocromatin - 92 92
Telofaz Heterocromatin Transcripie 46+46 46+46

(A) COMPACTIZAREA MATERIALULUI GENETIC

Materialul genetic poate fi reprezentat de cromatin n nucleul interfazic i de cromozomi n

timpul diviziunii. Cromatina constituie forma extins i despiralizat a cromozomilor. Din punct de
vedere al interaciunii cu coloranii bazici, cromatina se clasific n dou categorii: eucromatin i
heterocromatin.

14
 Eucromatina reprezint regiunea slab condensat a cromatinei care conine gene structurale
i este poriunea funcional activ a ADN-ului de pe care are loc transcripia. Astfel regiunile de
eucromatin sunt responsabile de expresia specific a informaiei genetice, reglarea proceselor vitale
eseniale prin expresia genelor house keeping. Ponderea eucromatinei poate varia de la celul la
celul datorit expresiei difereniate a genelor specifice de esut, specifice unei anumite perioade
ontogenetice sau aciunei factorilor de mediu .

Heterocromatina reprezint segmente de cromatin condensate, inactive genetic, care nu se

supun transcripiei. Se disting dou tipuri de heterocromatin: constitutiv i facultativ.

Heterocromatina constitutiv conine ADN repetitiv (ADN satelit), deci nu conine secvene
codificatoare i nu poate fi transcris. Astfel de secvene sunt implicate n idividualizarea
cromozomilor (secvenele
telomerice), reglarea mitozei sau
meiozei (centromerii), separarea
secvenelor codificatoare i aranjarea
lor funcional n nucleu. Localizarea
segmentelor de heterocromatin
constitutiv n cromozomii omologi
este identic i, de regul, nu variaz
de la celul la celul.
- Heterocromatina facultativ
conine secvene codificatoare
Reprezentarea aceluiai fragment de cromozom n diferite celule (A, B,
C). E eucromatina, Hc heterocromatina constitutiv, Hf neactive, funcia lor fiind
heterocromatina facultativ dependent de momentul
ontogenetic, tipul de esut sau
de sex. Heterocromatina facultativ n anumite condiii se poate decondensa i transforma n
eucromatin. Heterocromatina facultativ autozomal regleaz indirect expresia genelor
dependente de esut sau a genelor ce activeaz n diferite perioade de vrst. Heterocromatina
facultativ sexual cromatina sexual X - reprezint un cromozom X heterocromatinizat n
nucleele celulelor somatice cu doi cromozomi X; inactivarea cromozomului X se realizeaz
arbitrar, indiferent de originea lui matern sau patern; astfel, n unele celule (46,XX) un
cromozom X este activ (eucromatinizat) iar cellalt - inactiv (heterocomatinizat).

(B) CANTITATEA MATERIALULUI GENETIC

Cantitatea materialului genetic n

Dinamica cromozomilor pe parcursul ciclului celular
genetic ca i celula iniial (transmiterea ereditar a materialului genetic de la celul la celul).
celulele somatice depinde de perioada
ciclului celular. O celul tnr n perioada
G1 a interfazei, pn la replicarea ADN-ului,
conine 46 de cromozomi monocromatidieni
(46 molecule ADN). Pe parcursul perioadei S
are loc replicarea semiconservativ i
asincron a ADN-ului, cromozomii devenind
bicromatidieni (92 molecule de ADN). Cele
dou cromatide ale unui cromozom rmn
unite prin centromer pn n anafaza mitozei,
cnd are loc distribuia materialului genetic la
celulele fiice. n aa mod celulele nou-
formate conin aceeai cantitate de material

15
 (C) ACTIVITATEA MATERIALULUI GENETIC

Activitatea materialului genetic se exprim prin capacitatea ADN-ului de a fi transcris.

Transcripia i rata transcripiei este dependent att de perioada ciclului celular, ct i de tipul
celulei, aciunea diferitor factori genetici sau negenetici.
Pentru ca o secven de ADN s fie transcris sunt necesare urmtoarele evenimente:
- solicitarea produsului proteic respectiv n celul;
- activarea unor factori de transcripie specifici;
- eucromatizarea secvenei respective de cromozom.
Deoarece pe parcursul diviziunii celulare ADN-ul este puternic condensat, eucromatizarea i
respectiv transcripia este posibil doar n interfaz.
Sub aciunea unor inductori ai transcripiei are loc despiralizarea selectiv a unui segment
cromozomic, iniierea transcripiei i sinteza unei molecule de ARN. Tipul i cantitatea proteinei
sintetizate este dictat de necesitatea celulei sau organismului.
Produii proteici ai genelor pot fi clasificai n cteva grupe:
- proteine house keeping indispensabile activitii tuturor celulelor,
- proteine specifice pentru un anumit esut,
- proteine necesare unei anumite perioade a ontogenezei celulei sau organismului;
- proteine necesare organismelor de sex feminin sau masculin;
- proteine necesare n anumite condiii de mediu.
Astfel, concomitent ntr-o celul se expreseaz circa 10% din setul de gene motenite.

Fiecare celul? a organismului con?ine setul complet de gene

(30000 perechi gene pentru 46 mol. ADN nuclear)

Expresia genic? numai 10% din toate genele

Expresie continu? Expresie dependent? de anumite condi?ii: Non-expresie:

Gene ARNr - Gene specifice de ?esut; pseudogene
Gene ARNt - Gene specifice de perioada
Gene house keeping ontogenetic?;
- Gene specifice de perioada ciclului
celular;
- Gene specifice de factorii de mediu.

16
 CURS 3
VARIABILITATEA I FORMELE EI

Variabilitatea este proprietatea organismelor de a obine caractere sau nsuiri noi, diferite
de cele ale prinilor. Variabilitatea este un fenomen biologic complex i universal n lumea vie:
- este determinat de factori ecologici i ereditari;
- se manifest prin modificri genetice, biochimice, fiziologice i morfologice.
Variabilitatea are o importan deosebit n viaa organismului, populaiei i speciei, asigurnd:
- polimorfismul genetic i fenotipic individual;
- supravieuirea organismelor n diversele condiii ale mediului;
- susceptibilitatea diferit a indivizilor la anumii factori ai mediului;
- manifestarea unor stri patologice;
- selecia natural;
- baza material a evoluiei speciei umane.
Factorii ecologici care determin apariia variaiilor pot fi clasificai n factori externi (fizici,
chimici i biologici) i factori interni (produi intermediari ai metabolismului, diferite stri
fiziologice).

CLASIFICAREA VARIABILITII
Transmiterea sau netransmiterea ereditar este criteriul fundamental n clasificarea
variabilitii. Valoarea biologic a variaiilor este judecat n raport cu faptul dac acestea sunt
corelate cu modificri la nivelul materialului genetic. Din acest punct de vedere, variabilitatea este
de dou tipuri:
- variabilitate neereditar, numit i variabilitate fenotipic sau modificaiune;
- variabilitatea ereditar sau variabilitatea genotipic.

17
 (A) VARIABILITATEA NEEREDITAR

Variaiile neereditare sau modificaiunile reprezint reaciile organismului, determinate

genetic, de a rspunde la aciunea factorilo mediului ambiant prin schimbri morfologice, fiziologice
i biochimice, pe termeni mai scuri sau mai ndelungai.

Modificaiunile se caracterizeaz prin:

i. variaii fenotipice neereditare;
ii. poart un caracter adaptiv i favorizeaz individul n lupta pentru existen;
iii. reprezint stri reversibile de durat diferit, determinat de tipul factorului ecologic,
intensitatea i durata de aciune a acestuia i particularitile caracterului modificat;
iv. determin capacitatea organismelor de a reaciona diferit cnd sunt puse n condiii similare
de via, fiind o caracteristic ereditar (norma de reacie).

Exemple de modificaiuni la om pot fi: rspunsul la aciunea razelor ultraviolete (creterea

cantitii de melanin n epiderm bronzarea); rspunsul la eforturi fizice repetate (creterea masei
musculare); rspunsul la hipoxie (mrirea concentraiei hemoglobinei n snge); rspuns la aciunea
ndelungat a temperaturilor sczute (creterea stratului celulo-adipos subcutanat tipul arctic).

Modificaiunile se produc n anumite limite, ce sunt controlate genetic i sunt dependente de

doza i durata de aciune a factorului modificator. Pentru fiecare organism aceste limite sunt
individuale i se ncadreaz n noiunea de norm de reacie. Norma de reacie pune n eviden
raportul dintre potenialul genetic cu care individul se nate i posibilitile de manifestare fenotipic
a acestuia n diferite condiii mezologice (mediul ecologic, mediul familial, mediul social).

*****
Caracterele indivizilor i ale populaiei umane se manifest fenotipic n limitele normei de
reacie, a potenialului genetic nscris n structuri ereditare (genomul nuclear i mitocondrial), iar
prin educaie prin dirijarea factorilor sociali i ecologici, se pot dezvolta caracterele i trsturile
ce se nscriu n norma de reacie.
(1) Sunt indivizi cu potenial genetic favorabil, cu norm larg de reacie (talent muzical,
inteligen, capaciti fizice):
a. n mediu social-educaional nefavorabil nu se manifest posibilitile n toat
plenitudinea lor;
b. prin educaie se dezvolt posibilitile pe msura metodelor de educaie i a efortului de
perfecionare.
(2) Sunt indivizi cu norm de reacie manifestat n limite relative:
a. Fr educaie se manifest mediocru;
b. Prin educaie se manifest la valoarea lor.
(3) Sunt indivizi cu deficiene psiho-somatice determinate genetic, cu norm de reacie
manifestat n limite restrnse (oligofreni etc.) educai n instituii speciale.

*****
Unii factori ai mediului pot avea aciune distructiv asupra organismului, producnd
modificaiuni ce depesc limita normei de reacie. Drept exemple sunt anomaliile de dezvoltare
teratogene.
Factorii teratogeni de diferit natur (fizici, chimici, biologici) perturbeaz dezvoltarea
normal a embrionilor la diferite perioade ale ontogenezei, producnd anomalii morfologice,
fiziologice sau biochimice, prezente la natere. Acestea ar putea fi confundate cu defecte ereditare i
n acest caz poart denumirea de fenocopii (de ex., surditatea rubeolic, microcefalie alcoolic etc.).
18
 (B) VARIABILITATEA EREDITAR SAU GENOTIPIC

Variaiile ereditare sunt produse prin modificri ale materialului genetic modificri n
structura i /sau cantitatea materialului genetic.

Variaiile ereditare se caracterizeaz prin urmtoarele particulariti:

i. sunt determinate de modificri specifice ale materialului genetic;
ii. apar spontan sau prin aciunea factorilor fizici, chimici i biologici asupra materialului
genetic;
iii. se transmit de-a lungul generaiilor, sunt ereditare;
iv. reprezint sursa principal a evoluiei lumii vii;
v. stau la baza polimorfismului populaiei.

Sursele biologice ale variabilitii ereditare sunt mutaiile i recombinarea materialului

ereditar dou ci prin care apar caractere i / sau combinaii noi de caractere, ce au o anumit
valoare i semnificaie biologic.

1. VARIABILITATEA COMBINATIV

Recombinarea materialului genetic este asigurat n general de procesele legate de nmulirea

sexuat.
n dependen de cantitatea de material implicat n recombinare deosebim:
- recombinare genomic recombinarea materialului ereditar n procesul fecundaiei;
- recombinarea intercromozomic combinarea independent a cromozomilor neomologi n
anafaza I a meiozei;
- recombinarea intracromozomic recombinarea genelor ntre cromozomii omologi n procesul
crossing-overului.

Importana biologic a recombinrilor materialului genetic:

a. combinarea ntmpltoare a genelor de origine parental diferit i naterea unor indivizi cu
caractere comune ale ambilor prini unici din punct de vedere genetic i bioogic;
b. selecia natural prin eliminarea indivizilor cu combinaii defavorabile de gene, mutaii letale i
semiletale i supravieuirea indivizilor cu caractere normale, adaptive;
c. evoluia speciei datorit seleciei genelor evaluante.

2. VARIABILITATEA MUTAIONAL

Mutaia este fenomenul biologic de apariie a modificrilor materialului genetic, prin care
apar caractere i nsuiri noi, ci metabolice sau structuri noi i, ca rezultat, a unui fenotip nou.
Mutaia apare relativ rar i rmne destul de stabil de-a lungul generaiilor. Procesul prin
care apare mutaia se numete mutagenez. Factorii fizici, chimici i biologici care produc mutaii
se numesc ageni mutageni. Prin mutaie pot s apar gene noi (gene mutante), cu informaie
ereditar diferit de cea iniial (gen de tip slbatic).

Mutaia include modificri n structura acizilor nucleici i a genelor, schimbarea cantitii

materialului genetic (anomalii de numr ale cromozomilor); poate interesa materialul genetic
nuclear (genotipul) ct i materialul genetic citoplasmatic (plasmotipul).
n funcie de cantitatea materialului genetic modificat, sediului proceselor de mutagenez,
gen, cromozom, genom se pot descrie trei tipuri de mutaii:
i. mutaii genice ce se produc la nivelul moleculei de ADN, pot implica ntreaga gen, mai
multe nucleotide sau unul singur;
19
 ii. mutaii cromozomice (aberaii cromozomiale) sunt modificri structurale ale
cromozomilor ce constau n pierderea, ctigul sau rearangarea unor segmente din
cromozom;
iii. mutaii genomice sunt modificri ale setului diploid (46) de cromozomi, afectnd fie 1-2
perechi cromozomi (aneuploidie), fie toi cromozomii, prin adugarea a 1-2-3 seturi
haploide (poliploidie).

O alt clasificare a mutaiilor se bazeaz pe tipul de celul afectat: germinal sau somatic:
- mutaiile germinale produc gamei anormali, care dup fecundare transmit mutaia la generaia
urmtoare, rezultnd un individ n care toate celulele vor fi mutante;
- mutaiile somatice vor forma o clon celular anormal i, secundar, prin modificrile morfo-
funcionale ale organelor, sunt implicate n geneza cancerului i accelerarea senescenei
organismului.

Mutaiile genice pot fi spontane sau induse. Primul tip este determinat de factori
necunoscui, imposibil de definit sau obiectivat de un observator; al doilea tip de mutaii sunt
produse prin aciunea unor factori cunoscui: fizici (radiaii ionizante), chimici (analogi ai bazelor
azotate, ageni alchilani) sau biologici (virusuri). Mutaiile spontane ar putea fi determinate de
radioactivitatea natural (reprezentat de razele cosmice, radioactivitatea terestr permanent i
iradierea intern) i reprezent circa 1,5% din totalul mutaiilor nregistrate la om.
Modificrile materialului genetic se pot rsfrnge asupra proprietilor vitale ale organismului
mutant i pot fi:
- mutaii evaluante, pozitive, care asigur apariia unor caractere noi care-l fac pe individ mai
rezistent la factorii de mediu;
- mutaii defavorabile, negative, letale sau subletale ce determin apariia unor anomalii
incompatibile cu viaa sau stri patologice;
- mutaii neutre care nu afecteaz vitalitatea producnd polimorfisme genice i fenotipice.

POLIMORFISMUL ADN
Analiza genomurilor umane, alese la ntmplare, indic identitatea lor n proporie 99,9%, iar
0,1% prezint variante diferite ale unei secvene de ADN. Aceste variaii pot fi att n interiorul
genelor, ct i n regiunile intergenice, ultimele fiind mai frecvente deoarece nu sunt eliminate de
selecia natural.
Polimorfismul ADN se refer la variaiile nucleotidice din diferite regiuni ale ADN-ului.
Exist mai multe tipuri de polimorfisme ADN:
- variaii a unui singur nucleotid SNP (single nucleotid polymorphism);
- variaii microsatelitice di-, tri-, tetra- i pentanucleotidice STR (short tandem reapeats);
- variaii minisatelitice cu secvene de 10-15 p.n. repetate n tandem - VNTR (variable number
tandem reapeats).

Secvenele polimorfe n genomul uman sunt ntlnite cu o frecven de un situs polimorf la

300-500 nucleotide.
Polimorfisme ADN nu se manifest n fenotip i constituie baza molecular a individualitii
ADN-lui uman amprent genetic , iar situsurile polimorfe marcheri n studiile populaionale
sau n identificarea persoanelor dactiloscopia genomic.

20
 CURS 4
CROMOZOMII UMANI

Termenul de cromozom a fost propus n 1888 de Waldeyer cu referin la corpusculi colorai

ce pot fi vizualizai pe parcursul diviziunii celulare. n interfaz cromozomii sunt decondensai i se
prezint sub form de filamente, fibre sau bucle de cromatin bine organizate n nucleul celulei,
aspectul cruia depinde de tipul celulei sau perioada ontogenetic. Segmentele de cromatin active
transcripional se prezint sub form de eucromatin, iar cele ce nu se transcriu sub form de
heterocromatin. Cromozomii metafazici reprezint nivelul maximal de condensare a materialului
genetic nuclear, iar studiul cromozomilor n metafaz permite identificarea precis a fiecrui
cromozom, evaluarea morfologiei cromozomilor.

CARACTERISTICI GENERALE ALE CROMOZOMILOR

1. Cromozomii reprezint nivelul supramolecular de organizare a materialului genetic i
substratul morfologic al ereditii. Molecula de ADN este principalul component al
cromozomului, care-i specific funciile de pstrare, transmitere i realizare a materialului
genetic ce-l conine sub form de secvene polinucleotidice specifice gene.

2. Un cromozom conine de la cteva sute la cteva mii de gene: reprezint un grup de nlnuire
a genelor:
- sigur ordonarea genelor n spaiu i n timp - fiecare gen are o poziie fix pe cromozom
locus;
- activarea sau inactivarea genei este realizat strict dup necesitile celulei sau organismului;
- asigur transmiterea nlnuit a genelor i caracterelor determinate de genele unui cromozom.

3. Cromozomii se autoreproduc n perioada S a interfazei prin replicare semiconservativ a

moleculelor de ADN care i constituie. Replicarea diferitor segmente cromozomiale i diferitor
cromozomi se realizeaz asincron, dar la sfritul perioadei S toi cromozomii devin
bicromatidieni.

4. Cromozomii reprezint structuri dinamice ce i modific aspectul, forma, activitatea n

dependen de perioadele ciclului celular.

5. Cromozomii au structur neomogen de-a lungul lor datorit alternrii diferitor segmente de
ADN:
- secvene codificatoare i necodificatoare,
- secvene unice i repetitive,
- regiuni ce corespund eucromatinei i heterocromatinei;
- regiuni ce se deosebesc dup gradul de pliere a fibrei de cromatin (dimensiunile buclelor);
- regiuni cu un coninut diferit de perechi A T i G C;
- regiuni cu o cantitate diferit de proteine asociate.
Toate aceste explic polimorfismului cromozomial, colorarea difereniat a cromozomilor i
originea benzilor (Vezi Tehnici de analiz a cromozomilor).

Fiecare individ, fiecare celul conine un set diploid de cromozomi. Fiecare cromozom n
setul diploid are omologul su. Cele 23 de perechi de cromozomi ale celulei umane somatice
constituie cariotipul, care att cantitativ, ct i calitativ se implic n formarea fenotipului celulei i
organismului uman.

21
 Modificrile numrului sau structurii cromozomilor produc anomalii de dezvoltare multiple
sindroame cromozomice plurimalformative (ex. 47, XX(XY),+21 sindrom Down;
46,XX(XY),5p- - sindrom cri-du-chat) sau determin transformarea clonelor celulare aneuploide.
Genetica dispune de variate tehnici de cariotipare pentru depistarea anomaliilor de numr
sau de structur a cromozomilor cu scop: de diagnostic al sindroamelor cromozomice, de prevenire
a naterii copiilor cu anomalii cromozomiale prin diagnostic prenatal i studiul anomaliilor
cromozomiale n tumori.

ORGANIZAREA MOLECULAR A CROMOZOMILOR

Cromozomul este constituit din 1 sau 2 molecule de ADN (n dependen de perioada
ciclului celular), asociat cu proteine histone, nehistone i ARN, formnd o nucleoproteid cu diferite
nivele de compactizare:
1. molecula de ADN cu diametru de 2 nm interacioneaz cu proteinele histone determinnd
formarea primului nivel de compactizare nucleosomic; octamere histonice (2H2A, 2H2B, 2H3
i 2H4) sunt nfurate de segmente de ADN cu o lungime de 160p.n., transformnd molecula
de ADN n filament nucleoproteic polinucleosomic cu diametru de 11nm i asigurnd un grad de
compactizare de circa 6 ori;
2. n prezena H1 filamentul de cromatin de 11 nm se supraspiralizeaz i se formeaz al doilea
nivel de compactizare - solenoidul, ce se prezint sub form de fibr nucleoproteic de 30 nm,
asigurnd un grad de compactizare de circa 40 ori;
3. solenoidul se fixeaz de axul proteic longitudinal al cromozomului (scaffold), format din
proteine ale matricei nucleare; solenoidul interacioneaz specific cu scaffoldul prin intermediul
SAR regiuni situs specifice de ancorare la SAP proteine situs specifice ale axului
cromozomial i astfel apare al treilea nivel de compactizare buclele, care permit un grad de
compactizare a materialului genetic interfazic de 600 1000 de ori;
4. al patrulea nivel cromozomul metafazic se formeaz prin rsucirea buclelor n jurul axului
cromozomial dup pierderea contactului scaffold / anvelop nuclear; fiecare spir se formeaz
din aproximativ 30 de rozete (bucle), buclele sunt orientate spre exteriorul cromozomului;
stabilirea nivelului maximal de condensare de 10 000 ori are loc n metafaz.

22
23
 MORFOLOGIA CROMOZOMILOR METAFAZICI
Cromozomii sunt cel mai uor de analizat n metafaz sau prometafaz deoarece:
- se afl n acelai plan placa ecuatorial;
- sunt compactizai i pot fi uor individualizai;
- sunt bicromatidieni, iar cromatidele surori sunt unite prin centromer, ce permite diferenierea
cromozomilor dup form.

Structura cromozomilor metafazici

(A) ELEMENTELE MORFOLOGICE ALE CROMOZOMILOR sunt:

- cromatidele;
- centromerii;
- telomerii;
- constriciile secundare;
- sateliii;
- situsurile fragile.

Cromatida este reprezentat de o molecul de ADN liniar asociat cu proteine histone i

non-histone maximal compactizat. Cromozomul metafazic are dou cromatide surori, identice
genetic, rezultate prin replicarea ADN cromozomial n perioada S a ciclului celular. Cromatidele
surori rmn unite prin centromer de la perioada S pn n anafaz.

Centromerul (c) reprezint secvena de ADN specific asociat cu proteine histone

specifice ce unete cromatidele surori. ADN centromeric este reprezentat de secvene nalt
repetitive. Poziia centromerului este fix i specific fiecrui cromozom, fiecrei perechi de
cromozomi omologi. Centromerul mparte cromatidele n dou brae: bra proximal p i bra distal q.
Centromerii au urmtoarele funcii:
- controleaz formarea kinetocorilor pentru fixarea cromozomilor la fusul de diviziune;
- asigur clivarea longitudinal i disjuncia cromatidelor surori cu formarea a doi
cromozomi monocromatidieni din fiecare cromozom bicromatidian;
- asigur distribuia egal i identic a materialului genetic n timpul mitozei, transmiterea
exact a materialului genetic de la celula mam la celulele fiice.

24
 Telomerii (t) sunt secvene specifice de ADN asociate cu proteine speciale de la capetele
cromozomilor
(a) secvene scurte (TTAGGG) repetate n tandem de mii de ori i
(b) secvene de ADN specifice fiecrui cromozom.

Telomerii:
- protejeaz capetele cromozomilor de nucleaze;
- mpiedic fuziunea cromozomilor;
- asigur replicarea complet a ADN-ului nuclear i previn scurtarea progresiv a
telomerilor datorit activitii telomerazei;
- controleaz senescena celulelor i organismului pluricelular;
- contribuie la fixarea cromatinei de anvelopa nucleului interfazic, controlnd arhitectura
nucleului interfazic;
- particip la conjugarea cromozomilor omologi n meioz.

Constriciile secundare (h) reprezint regiuni de ADN repetitiv despiralizate, slab colorate,
prezente pe braele distale ale unor cromozomi (1, 9, 16, mai rar pe crs. 4,6,10 i Y) i pe braele
proximale ale cromozomilor acrocentrici 13, 14, 15, 21 i 22, ce conin organizatori nuclelolari.
Lungimea constriciilor secundare poate varia individual.

Sateliii (s) reprezint mici segmnente de heterocromatin constitutiv separate prin

constricia secundar la capetele braelor proximale ale cromozomilor acrocentrici 13, 14, 15, 21 i
22; numrul i dimensiunile sateliilor pot varia de la o persoan la alta.

Situsurile fragile reprezint nite regiuni cromozomiale decondensate, cu rezisten sczut

la aciunea mutagen ce se pot rupe uor determinnd rearanjamente cromozomiale. Situsurile
fragile sunt considerate ca marcheri genetici normali dac afecteaz regiunile de heterocromatin
constitutiv; se pot asocia cu unele stri patologice dac afecteaz regiuni crs codante (ex. FRAXA
i retardul mental familial); pot avea un rol n progresia tumoral (inactivarea unor gene supresoare
de tumori).

25
 (B) CLASIFICAREA CROMOZOMILOR UMANI

n celulele somatice umane exist cte un set diploid de cromozomi (2n=46), adic 23 de
perechi:
- 22 perechi sunt identice la femeie i brbat autosomi;
- 1 pereche este diferit la cele dou sexe (XX la femeie, XY la brbat) gonosomi.

Cromozomii identici ca morfologie (form i mrime) i coninut genic, dar diferii ca

origine (unul de origine matern, cellalt de origine patern) se numesc cromozomi omologi.
n celulele sexuale mature (gamei) exist cte un set haploid de cromozomi (n=23): n ovule 23,X
(22 autosomi+ crs. X), iar n spermatozoizi 23,X (22 autosomi+ crs. X) sau 23,Y (22 autosomi+
crs.Y).

Pentru identificarea cromozomilor se folosesc criterii morfologice, indicii autoradiografiei i

marcajul n benzi.
Criteriile morfologice se refer la dimensiunile i configuraia cromozomului. Se deosebesc
criterii cantitative (lungimea cromozomului, indicele centromeric) i calitative (prezena constriciilor
secundare i a sateliilor) de clasificare a cromozomilor.

Lungimea cromozomului lungimea absolut a cromozomului (n microni) sau lungimea

relativ este calculat dup formula:
Lungimea cromozomului studiat
X 100.
Suma lungimilor cromozomilor setului haploid
Dup lungime cromozomii se clasific n: mari, mijlocii, mici.

Poziia centromerului. Pentru a caracteriza poziia centromerului n cromozom se utilizeaz

indicele centromeric, care se calculeaz dup formula:
p
Ic X 100,
p q
unde p lungimea braului proximal,
q lungimea braului distal.

n baza acestui criteriu cromozomii se clasific n:

metacentrici: Ic = 46
p q
49%

p q
Ic = 31
submetacentrici:
45%

p q
acrocentrici: Ic = 17
30%

26
 Pe baza criteriilor morfologice cantitative (lungimea i poziia centromerului) i calitative (satelii
i constricii secundare) cromozomii se grupeaz n perechi de omologi i se clasific n 7 grupe, notate
de la A la G:

grupa A - perechile 1-3, sunt cei mai mari cromozomi metacentrici, cromozomul 1 poate prezenta
constricie secundar pe braul distal (1qh), cromozomul 2 este uor submetacentric;

grupa B - perechile 4-5 de cromozomi sunt mari, submetacentrici;

grupa C - perechile 6-12 de cromozomi i cromozomul X sunt mijlocii, submetacentrici; sunt 16

cromozomi la femeie i 15 la brbat; cromozomul 9 prezint constricie secundar pe braul distal
(9qh);

grupa D - perechile 13-15 de cromozomi sunt mijlocii, acrocentrici; prezint constricii secundare
pe braele proximale i satelii;

grupa E perechile 16-18 de cromozomi; cromozomul 16 este metacentric mijlociu i poate

prezenta constricie secundar pe braul distal (16qh); cromozomii 17-18 sunt submetacentrici mici;

grupa F - perechile 19-20 de cromozomi sunt mici, metacentrici;

grupa G - perechile 21-22 i Y de cromozomi sunt mici, acrocentrici; cromozomii 21 i 22

prezint constricii secundare pe braele proximale i satelii; cromozomul Y nu prezint satelii;
cromozomii grupei G ajut la determinarea sexului: la femei sunt 4 acrocentrici mici (2 crs 21 + 2
crs 22) / la brbai sunt 5 acrocentrici mici (2 crs 21+ 2 crs 22 + Y).

Cariotipul uman 46,XY

Cariotipul uman 46,XX

27
 STUDIUL CROMOZOMILOR UMANI
Analiza cariotipului urmrete evaluarea numrului, formei, structurii, prezena unor repere
morfologice i evideniaz polimorfisme individuale.
Actualmente exist diverse metode ce sunt utilizate n evaluarea cariotipului, depistarea
anomaliilor cromozomice de numr sau de structur, evidenierea unor markeri cromozomiali n
norm sau patologie. Mai mult ca att, unele tehnici bazate pe tehnologiile ADN recombinat, permit
identificarea unor modificri la nivel de secven de ADN cromozomial.

n dependen de scopul propus, cromozomii pot fi analizai att n interfaz, ct i n timpul

diviziunii. Aceasta permite identificarea att a unor schimbri minore n structura molecular a
ADN (microdeleii, microduplicaii), ct i modificri majore n structura i numrul cromozomilor
(aberaii cromozomiale, aneuploidii).

STUDIUL CROMOZOMILOR METAFAZICI

Etapa optim de studiu a cariotipului este metafaza, deoarece cromozomii sunt maximal
condensai i sunt dispui ntr-un singur plan, ceea ce permite identificarea lor precis. Pentru
studiul cariotipului trebuie ndeplinite urmtoarele condiii:
- s se obin celule n diviziune,
- s se blocheze diviziunea n metafaz i
- s se realizeze un preparat cromozomic care s fie examinat la microscop.

(1) Celule n diviziune pot fi analizate direct n cazul esuturilor cu proliferare activ
(mduv osoas, gonada masculin, tumori) sau dup realizarea unei culturi celulare din snge
periferic*, limfocite T, mduv osoas roie, fibroblati (piele, fascii, embrioni), celule amniotice,
celule din vilozitile coriale, tumori solide.

* Tehnica recoltrii sngelui periferic i punerea acestuia n cultur (constituie cea mai simpl tehnic de obinere a
cromozomilor umani):
se prelev snge periferic prin puncie venoas (n condiii de asepsie);
se recolteaz pe heparin, pentru a se mpiedica coagularea sngelui;
n condiii de asepsie, sngele este introdus ntr-un flacon ce conine un mediu de cultur specific, mbogit cu ser fetal
bovin sau ser uman AB;
pentru stimularea diviziunilor se utilizeaz fitohemaglutinina;
se incubeaz la 37C, timp de 72 ore.

28
 (2) Blocarea diviziunilor n metafaz se face cu substane care inhib formarea fusului de
diviziune (citostatice) colchicin sau colcemida.

(3) Realizarea preparatelor (lamelor) pentru studiul la microscop impune urmtoarele

etape:
hipotonizarea celulelor pentru dilatarea celulelor i dispersarea cromozomilor (centrifugare,
eliminarea supernatantului i resuspendare n soluie hipotonic de KCl);
fixarea celulelor pentru a ntrerupe activitatea vital a celulei, pstrnd morfologia cromozomilor
(alcool + acid acetic);
colorarea cu soluie Giemsa sau un alt colorant specific pentru cromozomi;
examinarea la microscopul optic, ce permite analiza cromozomilor pentru evidenierea eventualelor
anomalii de numr (omogene sau n mozaic) sau anomalii de structur;
fotografierea plcilor metafazice din frotiu i decuparea cromozomilor;
identificarea cromozomilor i efectuarea cariogramei (idiogramei).

Realizarea cariogramei din preparate citologice

Cromozomi metafazici umani colorai cu colorantul Giemsa (colorare uniform)

29
 MARCAJUL N BENZI AL CROMOZOMILOR
Exist un grup de tehnici speciale, prin care se evideniaz n lungul cromatidelor alternana de
zone colorate i necolorate, numite benzi. Acestea au o distribuie precis, determinat de structura
intern a cromozomului.

Cariotipul uman normal obinut prin colorare

Schema cariotipului uman (46,XY) pe baza
difereniat G a cromozomilor unei celule
colorrii n benzi G a cromozomilor
somatice (46,XX)
metafazici

Metodele de marcaj n benzi au aprut relativ recent, n anii '70, i au determinat o revoluie n
citogenetic, deoarece au o mare valoare practic:
marcajul n benzi reflect structura discontinu a cromozomilor, respectiv alternana de
eucromatin i heterocromatin, de secvene de ADN bogate n AT sau GC, de segmente de
cromatin cu concentraie diferit de proteine histone i proteine nehistone;

modelul benzilor este identic n toate celulele unui organism i la toi indivizii aceleiai specii, de
aceea efectuarea marcajului n benzi permite identificarea precis a unei specii;

marcajul n benzi permite identificarea precis a perechilor de cromozomi omologi, deoarece

acetea sunt la fel din punct de vedere genetic i au acelai model de benzi;

marcajul n benzi permite identificarea precis a fiecrui cromozom, deoarece cromozomii,

aparinnd unor perechi diferite, au alte gene i deci alt model al benzilor;

metodele de marcaj n benzi permit un diagnostic citogenetic foarte precis n multe anomalii de
structur (deleii, inversii) care nu se evideniaz sau se evideniaz foarte greu n coloraia
obinuit.

n consecin, utiliznd diverse tehnici de colorare a cromozomilor se obin benzi colorate

(pozitive) i necolorate (negative) stabile i caracteristice fiecrui cromozom. Diferite tehnici
(G,Q,R,T,C) determin o dispoziie specific a benzilor.

30
 Caracteristica diferitor tehnici de bandare a cromozomilor
Tehnica de analiz a Colorantul
Originea benzilor Rolul practic
cromozomilor utilizat
Benzi pozitive
Identificarea anomaliilor de
heterocromatin;
Metoda G Giemsa numr i de structur a
Benzi negative
cromozomilor
eucromatin.
Benzi pozitive
Identificarea anomaliilor de
Metoda Q Quinacrina heterocromatin;
numr i de structur a
(fluorescent) Benzi negative
cromozomilor
eucromatin.
Benzi pozitive
Giemsa sau Identificarea anomaliilor de
Metoda R eucromatin;
colorani numr i de structur a
(revers) Benzi negative
fluoresceni cromozomilor
heterocromatin.
Giemsa sau Benzi pozitive
Metoda C Analiza polimorfismului
colorani heterocromatina
(centromeric) cromozomial
fluoresceni pericentromeric
Giemsa sau
Metoda T Benzi pozitive Analiza polimorfismului
colorani
(telomeric) heterocromatina telomeric cromozomial
fluoresceni

Dispunerea benzilor cromozomiale obinute prin diferite tehnici de

colorare (cromozomul X)

TEHNICI DE CITOGENETIC MOLECULAR

Pe baza metodelor de analiz molecular a acizilor nucleici au fost elaborate o serie de tehnici
noi de analiz a cromozomilor interfazici, ce se caracterizeaz printr-o specificitate i precizie
nalt metode de hibridizare in situ (FISH, CGH, SKY).

Metoda FISH (fluorescent in situ hybridization) este bazat pe urmtoarele principii:

i. se utilizeaz sonde moleculare marcate fluorescent, care sunt complementare unor secvene
nucleotidice specifice ale unui cromozom sau fragment de cromozom;
ii. n preparatul microscopic in situ, supus unui tratament alcalin, ADN-ul cromozomial
denatureaz prin ruperea legturilor de hidrogen dintre cele dou catene ale moleculei de
ADN;
iii. la adugarea sondei n preparat are loc legarea ei complementar la secvena specific a
cromozomului - hibridizarea;
iv. ulterior, preparatul este prelucrat cu o substan ce se leag selectiv de biotin sau de
digoxigenin: pentru biotin este specific streptovidina, iar pentru digoxigenin sunt

31
 anticorpii antidigoxigeninici; la aceste substane se pot aduga unul sau mai muli colorani
fluoresceni;
v. cromozomii colorai se vizualizeaz la microscop pe fondul cromozomilor necolorai.

Tehnica FISH se utilizeaz pentru evidenierea:

- cromozomilor supranumerari;
- anomaliilor cromozomice de structur;
- rearanjamentelor intercromozomiale complicate;
- microdeleiilor i microduplicaiilor cromozomice;
- localizrii genelor.
Aceast tehnic este precis, rapid i econom de aceea este tot mai larg utilizat n
diagnosticul anomaliilor congenitale, sindroamelor monogenice, diagnosticul prenatal.

CGH (comparative genome hybridization). Aceast tehnic este utilizat n citogenetica

oncologic pentru determinarea regiunilor cromozomiale deletate sau amplificate ntr-un anumit tip
de cancer. Regiunile deletate, de regul, conin gene supresoare de tumori, iar cele amplificate
oncogene. Astfel, metoda este utilizat pentru cartarea i clonarea genelor implicate n
cancerogenez.

Metoda CGH const n urmtoarele: se extrage ADN-ul dintr-o tumor i dintr-un esut
normal; ADN-ul din tumor i din esutul normal se marcheaz cu diferii fluorocromi; ADN-ul
marcat (i din tumor, i din esutul normal) este hibridizat cu preparatul cromozomic obinut din
tumor; se determin regiunile cu deleii sau cu amplificri dup intensitatea marcherilor. Analiza
rezultatelor este efectuat utiliznd programe speciale computerizate.

SKY (spectral karyotyping) analiza spectroscopic a cromozomilor. Aceast tehnic se

bazeaz pe utilizarea unui set de sonde fluorescente cu colorani diferii. Fiecare sond specific un
anumit segment cromozomic. Fiecare pereche cromozomial are parametri spectrali unici.
Utilizndu-se interferometrul, analogic aparatelor utilizate n msurarea spectrului obiectelor
astronomice, este posibil depistarea unor variaii minore n componena spectral a cromozomului,
invizibile ochiului. Computerul analizeaz datele interferometrului i graie unei programe speciale
indic pentru fiecare pereche de cromozomi culori anumite. Avantajul acestei metode const ntr-o
individualizare mult mai precis a cromozomilor, datorit culorii lor specifice; depistarea unor
translocaii ce sunt greu de depistat prin alte metode citogenetice. Se utilizeaz in oncocitogenetic
pentru depistarea aberaiilor cromozomice ce se produc la nivel de tumoare, chiar i a unor
rearanjamente ce implic fragmente cromozomice foarte scurte.

NOMENCLATURA CROMOZOMILOR UMANI

Exist un sistem internaional de standardizare, care permite formularea cariotipului normal sau
anormal cu ajutorul unor simboluri i semne, ce redau numrul de cromozomi i eventualele anomalii
de structur - deficit, surplus sau rearanjamente ale materialului cromozomic.

n cazul cariotipului normal se scrie numrul total de cromozomi urmat de o virgul, dup care
se scrie structura gonosomilor:
o cariotip feminin normal - 46,XX
o cariotip masculin normal - 46,XY.

Cariotipurile anormale pot caracteriza anomaliile cromozomiale numerice sau anomaliile

structurale:
o anomalii ale autosomilor numrul total de cromozomi, virgula, gonosomii, iar dup o alt
virgul, precedat de + (cromozom suplimentar) sau - (lipsa unui cromozom) se scrie
32
 numrul cromozomului implicat (de ex..: 47, XX, +21 (trisomia 21); 47,XY,+13 (trisomia
13); 45,XX,-8 (monosomia 8); etc.;
o anomalii ale gonosomilor se scrie numrul total de cromozomi, urmat dup virgul de
gonosomii respectivi (de ex.: 45,X (monosomia X); 47,XXY (disomia X); 47,XXX
(trisomia X)).

n rezultatul colorrii difereniate pe fiecare cromozom se pot observa o serie de repere, elemente
importante pentru identificarea unui cromozom:
- benzi net conturate,
- centromerul,
- telomerele.

Dea lungul braelor cromozomilor sunt delimitate regiuni. Fiecare regiune are mai multe benzi, iar
benzile pot avea subbenzi.
Cromozomii metafazici prezint 400 - 500 benzi, n timp ce cromozomii aflai n profaza timpurie
prezint 1800-2000 benzi (metode de nalt rezoluie).

Aspectul crs prometafazici vs crs metafazici

Nomenclatura benzilor: regiunile i benzile se numeroteaz de la centromer spre telomere
pentru fiecare din brae; ex: 7q12 - cromozomul (7), braul distal (q), regiunea (1), banda (2).
Pentru desemnarea anomaliilor cromozomiale structurale se indic natura rearanjamentului i
punctele de ruptur, identificate prin banda i regiunea n care se produc. Exemple:
46,XX,del(1)(q21q31) - cariotip feminin cu deleiea unui fragment a braului distal al
cromozomului 1 de la regiunea 2, banda 2 pn la regiunea 3, banda 1.
46,XY,r(2)(p21q31) - cromozomul 2 inelar; punctele de ruptur sunt pe braul proximal n
regiunea 2 banda 1 i pe braul distal n regiunea 3 banda 1.
46,XX,inv(2)(p21q31) - inversie pericentric a segmentului cuprins ntre regiunea 2 banda 1,
braul proximal i regiunea 3 banda 1, braul distal ale cromozomului 2.
46,X,i(Xq) - isocromozom de brae distale al cromozomului X;
46,X,del(X)(q12.1-q24.3) deleia unui segment din crs X, de pe braul distal, de la regiunea 1
banda 2 subbanda 1 pn la regiunea 2 banda 4 subbanda 3.

33
 Simboluri folosite n descrierea cariotipului (standarde internaionale)
Simboluri Semnificaia simbolului
A-G Grupele de cromozomi
1-22 Numerele cromozomilor autosomi
X, Y Gonosomii (cromozomii sexuali)
/ Mozaicizm cromozomial
p Bra proximal, scurt
q Bra distal, lung
pter Captul braului proximal
qter Captul braului distal
cen centromer
del Deleie, pierderea unui fragment cromozomic
der Cromozom derivat printr-un rearanjament cromozomial
dup Duplicaie, dublarea unui fragment cromozomic
dic Cromozom dicentric, cu doi centromeri
fra Situs fragil
i Izocromozom, cu brae identice p sau q
ins Inseria unui fragment cromozomic
inv Inversia unui fragment cromozomic
mat Origine matern
pat Origine patern
r Cromozom inelar (ring)
t Translocaia unui fragment cromozomic pe alt cromozom neomolog
upd Disomie uniparental
:: Rupere cu reunire
+ naintea numrului unui cromozom adugarea cromozomului ntreg,
dup numrul unui cromozom adugarea unei pri de cromozom
- naintea numrului unui cromozom pierderea cromozomului ntreg,
dup numrul unui cromozom pierderea unei pri de cromozom

VARIAII ALE CARIOTIPULUI LA PERSOANE CU FENOTIP NORMAL

Exist uneori o serie de abateri de la regulile generale stabilite, care determin unele variante
(variaii) particulare rare, dar care nu reprezint anomalii cromozomice.

Variaii numerice:
- la femeie - dup vrsta de 60 ani, pn la 7% din celulele organismului pot pierde unul din
cromozomii X, devenind 45,X;
- la brbat - dup vrsta de 70 ani, pn la 2% din celule pot pierde cromozomul Y i devin 45,X.

Variaii structurale n heterocromatin:

- lungimea i forma cromozomilor omologi poate varia; variaiile n lungime intereseaz n special
braele scurte ale cromozomilor D, G.
- sateliii se gsesc obinuit n cromozomii acrocentrici, cu excepia cromozomului Y, dar pot fi
observai i pe ali cromozomi; pot prezenta o mare variabilitate n form i mrime.
- constriciile secundare care reprezint zone decondensate, situate n regiunile proximale ale braelor
lungi ale cromozomilor 1, 9, 16 i Y; uneori pot prezenta o mrire exagerat a constriciilor secundare
(46, XX, 1qh+; 46,XY, 1qh++...).

34
 Polimorfismele de bandare (benzile Q, G i C) sunt reprezentate de diferene n ceea ce privete
mrimea i aspectul unor zone cromozomice; cel mai frecvent, polimorfismele implic regiunile
centromerice, braele scurte i sateliii cromozomilor D i G, zona de constricie secundar de pe braul
lung al cromozomului Y.

Semnificaia polimorfismului: polimorfismul se transmite dominant dup modelul mendelian, nu

modific expresia fenotipic deoarece pare limitat numai la regiunile heterocromatiniene,
inactive genetic (produce modificri cantitative ale ADN repetitiv).
Polimorfismul cromozomic este utilizat:
- ca marcher pentru evidenierea transmiterii unor caractere de la prini la copii (de ex.: cercetarea
paternitii);
- pentru determinarea originii parentale a nedisjunciei n aneuploidii (de ex.: originea cromozomilor
suplimentari n trisomii);
- pentru identificarea cromozomilor care conin gene marcher pentru unele patologii monogenice;
- stabilirea unor grupe de nlnuire (linkage) genic;
- evaluarea frecvenei unor polimorfisme n unele forme de leucemii i la copiii cu anomalii
congenitale.

35
 CURS 5

ANOMALII CROMOZOMICE

Anomaliile cromozomice reprezint modificri ale numrului cromozomilor caracteristic

speciei (46 n celulele somatice umane) sau modificri structurale ale acestora. n literatur sunt
ntlnite noiunile de mutaii genomice (ce explic anomaliile cromozomice de numr) i mutaii sau
aberaii cromozomice (ce se refer la anomaliile de structur). Anomalii cromozomice numerice
afecteaz ntregul cromozom i cele structurale implic rearanjamente ale structurii cromozomilor.

Clasificarea anomaliilor cromozomice

Factori posibili ce produc anomalii cromozomice ar putea fi:

factori care deregleaz mitoza sau pot produce rupturi ale ADN-ului sau altereaz replicarea:
- factori chimici: citostatice, antimetabolii, radicali liberi, agenii alchilani;
- factori fizici: radiaiile ionizante;
- factori biologici: virusuri;
vrsta matern avansat, care sporete riscul erorilor n segregarea cromozomilor n meioz i a
aneuploidiilor la descendeni;
unul din prini este purttor de anomalie congenital echilibrat (translocaie, inversie);
rearanjrile intercromozomice prin crossing-over inegal sau erori de recombinare.

ANOMALIILE CROMOZOMICE DE STRUCTUR

Anomaliile cromozomice structurale pot fi clasificate n funcie de efectul fenotipic i de
mecanismul de producere.
Pe baza efectului fenotipic, anomaliile cromozomice structurale se mpart n: echilibrate
(inversiile i translocaiile), care nu modific fenotipul purttorului i neechilibrate (deleiile,
duplicaiile, etc.), care produc fenotipuri anormale.
n raport cu mecanismul de producere, anomaliile cromozomice structurale pot fi grupate n:
anomalii produse printr-o singur ruptur cromozomic (deleia terminal), anomalii produse prin
dou rupturi cromozomice n acelai cromozom (deleiile interstiiale, inversiile, cromozomii
inelari), anomalii produse prin rupturi n cromozomi diferii (cromozomii dicentrici, translocaiile
reciproce i cele robertsoniene; inseriile).

36
 ANOMALII CROMOZOMICE ECHILIBRATE

Inversia reprezint o anomalie de structur, caracterizat prin modificarea ordinii genelor de pe

un fragment cromozomic. Mecanismul de producere const n ruperea unui cromozom n dou puncte
i rotirea cu 180 a fragmentului intermediar.
Inversiile pot fi de dou tipuri: pericentrice: produse prin ruptura unui cromozom n dou
puncte situate pe brae diferite, urmat de rotaia cu 180o a fragmentului intermediar i reunirea
fragmentelor; n urma acestei rotaii se poate produce modificarea configuraiei cromozomului;
paracentrice: produse prin ruptura unui cromozom n dou puncte situate pe acelai bra, urmat de
rotaia cu 1800 a fragmentului intermediar i reunirea fragmentelor; n urma acestei rotaii nu se
modific configuraia cromozomului, ci numai ordinea benzilor.

Translocaiile sunt anomalii de structur caracterizate prin trecerea unuia sau mai multor
fragmente cromozomice de pe un cromozom pe altul, fr a determina modificri fenotipice.
Translocaiile pot fi de trei tipuri:
- reciproce - produse prin ruperea a doi cromozomi n cte un punct, urmat de schimbul
fragmentelor rupte i realipirea cromozomilor;

- cu inserii - produse prin ruperea a doi cromozomi neomologi, unul ntr-un punct i cellalt n
dou puncte de pe acelai bra, urmat de inserarea n punctul de ruptur al primului cromozom al
fragmentului intermediar din al doilea cromozom;

- robertsoniene - produse prin ruperea a doi cromozomi acrocentrici la nivelul centromerului urmat
de fuziunea braelor lungi (fuziune centric) i pierderea braelor scurte (conin doar gene pentru

37
 ARN ribosomal i, astfel, pierderea lor nu determin modificri fenotipice); acest tip de anomalii
conduce la scderea numrului de cromozomi de la 46 la 45.

Anomaliile cromozomice
echilibrate nu modific fenotipul individului,
deoarece reprezint rearanjri cromozomice, care nu determin modificri cantitative ale materialului
genetic. Dar, purttorul unei translocaii echilibrate, dei normal fenotipic, poate produce gamei
anormali datorit erorilor de conjugare i erorilor de segregare (nedisjuncii) ale cromozomilor
implicai n translocaie.

Consecinele translocaiei robertsoniene t(13q21q)

asupra gametogenezei

38
 ANOMALII CROMOZOMICE NEECHILIBRATE

Deleiile sunt anomalii structurale caracterizate prin pierderea unor fragmente cromozomice.
Anomaliile pot fi de dou tipuri:
- terminale - produse prin ruperea unui cromozom ntr-un punct, urmat de pierderea fragmentului
terminal;
- interstiiale - produse prin ruperea unui cromozom n dou puncte situate pe acelai bra, urmat
de pierderea fragmentului intermediar.

Deleiile se pot produce i prin alte

mecanisme: crossing-over inegal ntre
cromozomi omologi aliniai eronat, segregarea
cromozomilor anormali n cursul meiozei
parentale n cazul n care unul din prini
prezint o anomalie echilibrat. Deleia are ca
efect apariia unei diferene de lungime ntre
cromozomii omologi.
Duplicaiile sunt anomalii structurale caracterizate prin prezena n dublu exemplar a unui
fragment cromozomic. Anomalia se poate produce prin crossing-over inegal i segregare anormal a
cromozomilor cu translocaie.

Cromozomii inelari apar prin ruperea unui cromozom n dou puncte situate pe brae diferite,
urmat de pierderea segmentelor terminale (acentrice) i reunirea capetelor segmentului centric ntr-o
structur inelar.

Izocromozomii sunt cromozomi anormali formai fie numai din brae scurte, fie numai din
brae lungi. Mecanismul de apariie a anomaliei const n clivarea transversal a centromerului.
Anomalia are ca efect apariia unui cromozom care prezint concomitent deleia unuia din brae i
duplicaia celuilalt bra.

Cromozomii dicentrici sunt cromozomi anormali caracterizai prin prezena n acelai

cromozom a doi centromeri. Mecanismul de producere const n ruperea a doi cromozomi n cte un
punct, urmat de pierderea fragmentelor terminale i unirea celor dou segmente cromozomice, care
prezint centromere, ntr-un singur cromozom.
Anomaliile cromozomice neechilibrate determin un dezechilibru cantitativ al materialului
genetic (n plus sau n minus) ce se manifest fenotipic asemntor anomaliilor numerice (trisomii
pariale sau monosomii pariale). Trisomiile i monosomiile pariale ale unui cromozom determin
multiple caractere anormale n "tip i contratip" asemntoare cu monosomiile i trisomiile totale ale
aceluiai cromozom: trisomia 18 (sdr. Edwards) i monosomia parial determinat de 18q-; trisomia
13 (sdr. Patau) i monosomia parial determinat de r(13).

39
 ANOMALIILE CROMOZOMICE NUMERICE
Anomaliile numerice sunt clasificate n: poliploidii (prezena n plus a unor seturi haploide
de cromozomi) i aneuploidii (prezena n plus sau absena unui cromozom ntreg).

Poliploidiile, n dependen de numtul de seturi haploide prezente n nucleul celulei somatice,

pot fi: triploidii (3n) - 69,XXX sau 69,XXY sau 69,XYY; tetraploidii (4n )- 92,XXXX sau
92,XXYY; etc.

Triploidia (3n) poate rezulta prin fecundarea de ctre un gamet normal (n = haploid) a unui
gamet anormal (2n=diploid); gametul diploid este rezultatul neseparrii citelor de ordinul II n meioza
parental (de obicei, n cursul ovogenezei, neexpulzarea primului globul polar - diginie; uneori n
cursul spermatogenezei - diandrie); prin erori n cursul fecundrii: fecundarea unui ovul (n) de ctre 2
spermatozoizi (2n) dispermie.

Tetraploidia (4n) poate fi rezultatul unei erori de clivaj n cursul primei diviziuni mitotice a
zigotului i dublarea numrului de cromozomi imediat dup fecundare (endomitoz) sau prin
fecundarea a 2 gamei diploizi (2n+2n=4n). Poliploidiile intereseaz o mare cantitate de material
genetic i la om sunt, de regul, neviabile (manifestndu-se prin avort n trimestrul I de sarcin sau
nou-nscui mori).

Aneuploidile se caracterizeaz prin prezena n plus fa de numrul diploid normal sau absena a
1-2-3 cromozomi. Majoritatea aneuploidiilor sunt consecina unor erori de segregare cromozomic
sau cromatidian n cursul diviziunii celulare, numite nedisjuncii. n cazul nedisjunciilor numrul
de cromozomi din celulele fiice nu este egal. Aceste anomalii se pot produce n meioza I, meioza II
sau n mitoz. Rareori, gameii nulisomici, iar apoi embrionii monosomici, pot rezulta datorit
pierderii cromozomilor printr-o ntrziere anafazic la nivelul plcii ecuatoriale.

Aneuploidiile omogene sunt rezultatul fecundrii unui gamet normal de ctre un gamet aneuploid
produs prin erori de distribuie a materialului genetic n cursul meiozei parentale.

Aneuploidiile n mozaic sunt rezultatul erorilor de distribuie a materialului genetic n cursul

mitozei (de obicei, diviziunile de segmentare ale primelor stadii embrionare).

CLASIFICAREA ANEUPLOIDIILOR:
a) dup surplus sau lips de cromozomi:
- monosomie (2n-1) - absena unui cromozom;
- trisomie (2n+1) - prezena unui cromozom supranumerar;

b) dup tipul cromozomului implicat:

- aneuploidii autozomale
- aneuploidii gonozomale

c) dup numrul de celule afectate:

- anomalii omogene (prezena anomaliei n toate celulele organismului);
- anomalii n mozaic (prezena unor linii celulare anormale i normale n acelai organism);

d) dup asocierea sau lipsa acesteia cu anomaliile de structur:

- anomalii libere fr anomalii cromozomice structurale;
- anomalii prin translocaie prezena n plus a unor cromozomi ataai la alii fr
modificarea numrului diploid normal, sau falsa absen a unui cromozom ca urmare a

40
 fuzionrii cu un altul. Uneori termenul se folosete referitor la orice modificare cantitativ a
materialului genetic, inclusiv la anomaliile congenitale structurale:
- anomalii complete prezena n plus sau lipsa unui cromozom n ntregime;
- anomalii pariale prezena n plus sau lipsa unui segment cromozomic.

Efectele i gravitatea anomaliilor cromozomice cantitative depind de:

- tipul de anomalie i mrimea dezechilibrului genetic - cu ct defectul cantitativ este mai
mare, cu att consecinele sunt mai grave; deficitul are consecine mai grave dect excesul;
- coninutul genic i activitatea cromozomului implicat de ex., trisomia 1 nu este viabil,
trisomia 21 - da.
- tipul i numrul de celule afectate - afectarea celulelor somatice duce la modificarea
fenotipului individului; afectarea celulelor sexuale duce la apariia tulburrilor de reproducere.

Monosomiile sunt mai grave dect trisomiile. Singura monosomie viabil la specia uman este
monosomia X; monosomiile autozomale, Y i 98% din zigoii cu monosomie X se elimin ca produi
de avort, n trimestrul I de sarcin.

Trisomiile cromozomilor mari, activi genetic, sunt neviabile, producnd avort n trimestrul I de
sarcin sau nou-nscui mori. Viabile pot fi trisomiile 8, 13, 18, 21, fiind responsabile de multiple
anomalii de dezvoltare (sindroame):
- sindromul trisomiei 8 - 47, XX (XY), +8;
- sindromul Patau - 47, XX (XY), +13;
- sindromul Edwards - 47, XX (XY), +18;
- sindromul Down - 47, XX (XY), +21.

Anomaliile cromozomice viabile (sindroamele cromozomice) prezint modificri fenotipice

comune (tulburri de cretere pre- i postnatal; ntrziere n dezvoltarea psiho-motorie i debilitate
mintal; multiple anomalii viscerale, disgenezii gonadice) i modificri specifice ale cromozomului sau
cromozomilor implicai.

INDICAIILE ANALIZEI CROMOZOMILOR UMANI

Analiza cariotipului prin diverse tehnici de colorare a cromozomilor metafazici sau

prometafazici, utiliznd tehnici de citogenetic molecular (FISH) este indicat n urmtoarele
situaii:
(1) Copiii cu anomalii congenitale multiple (minore/majore) asociate cu:
- tulburri de cretere prenatal,
- ntrziere n dezvoltarea psiho-motorie postnatal,
- anamneza familial tulburri de reproducere.
(2) Debiliti mintale (indiferent de grad) de cauze nedeterminate i/sau tulburri de comportament
asociate cu:
- dismorfie facial,
- anamnez familial pozitiv ( teste pentru X fragil).
(3) Dac n situaiile (1),(2) se identific o anomalie de structur neechilibrat (monosomie sau trisomie
parial) se va studia cariotipul
- prinilor (anomalie cromozomial echilibrat);
- rudelor gr.I
(4) Stri intersexuale, pentru stabilirea sexului genetic (XX sau XY) sau anomaliilor cromozomilor
sexuali.
(5) Tulburri de dezvoltare pubertar semne de disgenezie gonadic:
- spermogram anormal (azo- sau oligospermie)
41
 - amenoree primar sau amenoree secundar precoce.
(6) Cupluri cu tulburri de reproducere ( 2 avorturi spontane i/sau nou-nscui mori/vii
plurimalformai; 5% din cazuri se identific anomalii cromozomiale echilibrat la unul dintre
partenerii).
(7) Hemopatiile maligne, mai rar n tumorile solide, pentru diagnostic pozitiv i diferenial,
prognostic sau urmrirea evoluiei tratamentului.
(8) Sindroame cu instabilitate cromozomic (sindromul Bloom, anemia Fanconi, sindromul
Nijmegen, sindromul ICF .a).
(9) Depistarea efectului mutagen al expunerii profesionale sau accidentale la radiaii ionizante i
unele substane chimice (clastogene).
(10) n DIAGNOSTICUL PRENATAL, studiul cromozomilor n celulele fetale este indicat la femeile
gravide:
- peste 35 de ani;
- unul din prini are o anomalie cromozomic echilibrat;
- copil cu o anomalie cromozomic de novo (dei cariotipul prinilor este normal este posibil
un mozaicism gonadic prenatal);
- semne ecografice de alarm sau testele de screening biochimic (triplu test) pentru sindromul
Down sunt pozitive;
- pentru stabilirea sexului genetic, n cazul mamelor purttoare de mutaii recesive gonosomale
XNXa (n care se nbolnvesc numai din biei) i nu exist o metod de diagnostic prenatal
specific.

42
 CURS

PARTICULARITILE CROMOZOMILOR X i Y

Gonosomii provin dintr-o pereche de autosomi, care n procesul evoluiei s-au difereniat
genetic i morfologic, formnd cei doi cromozomi X i Y. Acest proces s-a realizat prin
specializarea progresiv a cromozomului Y, care a pstrat genele determinismului sexual i a
pierdut aproape toate genele somatice, devenind mult mai mic ca cromozomul X, care a conservat
forma original pstrnd att genele de sexualizare, ct i cele somatice. Diferenierea celor doi
gonosomi a fost necesar pentru:
- a mpiedica schimbul de gene ntre cromozomul X i Y n meioz i permite conservarea pur a
determinanilor sexuali specifici fiecrui cromozom;
- a asigura ulterior obinerea unor zigoi cu sexe genetic distincte XX sau XY.

Cromozomii de sex (gonozomi, heterozomi) se deosebesc att dup structur (dimensiuni,

poziia centromerului, cantitatea de heterocromatin), ct i dup coninutul de gene.
Cromozomul X - este un cromozom submetacentric mediu (Grupa C). Este prezent n
celulele somatice la indivizii de ambele sexe: n dublu exemplar la femeile cu cariotip 46,XX i ntr-
un singur exemplar la brbaii cu cariotip 46,XY; este prezent ntr-un singur exemplar n ovule circa
1606 gene:
gene structurale pentru caractere somatice (de ex., grupa sanguin Xg, factorii VIII i
IX de coagulare, enzima glucozo-6-fosfat dehidrogenaza, vederea cromatic etc.);
gene reglatoare feminizante;
gene structurale feminizante;
gene structurale masculinizante.

Cromozomul Y este un cromozom acrocentric mic (Grupa G), 2/3 din braul q este
inactiv genetic, fiind heterocromatinizat. Este prezent ntr-un singur exemplar n celulele somatice
ale indivizilor de sex masculin cu cariotip 46,XY i n 50% din spermatozoizi. Cromozomul Y
conine circa 397 gene:
gene reglatoare masculinizante (SRY = Tdf);
gene care asigur fertilitatea (AZF1, AZF2);
gene structurale somatice (factorul de control al creterii dinilor, receptor
interleukin);
pseudogene (actin, Xg).

Deoarece genomul feminin conine doi cromozomi X, iar cel masculin un singur cromozom
X, produii genelor localizate pe cromozomii X ar trebui s fie ntr-o cantitate dubl la femeie fa
de brbat. Acest lucru ns nu se ntmpl datorit inactivrii unui cromozom X la femeile normale
i a cromozomilor X suplimentari la indivizii ce se abat de la normal, fapt ce determin s rmn n
stare funcional un singur cromozom X la ambele sexe, fenomen denumit compensaie de doz a
genelor X-linkate.

Ipoteza existenei unui asemenea mecanism a fost formulat n 1961 de Mary Lyon i
cuprinde trei postulate:
i. n celulele somatice este activ un singur cromozom X, restul fiind inactivai i nedisponibili
pentru transcripie. Procesul de inactivare este un proces de heterocromatinizare: cromozomul X
inactivat este puternic condensat i vizibil n interfaz sub forma corpusculului Barr; replicarea
lui se produce la sfritul perioadei S.
ii. Inactivarea se produce la nceputul vieii intrauterine, nainte de implantarea blastocistului (la
ziua a 16-18, la etapa de ~3000-4000 celule). Pn la acest moment ambii cromozomi X sunt
activi (se sintetizeaz ARNm, enzime); embrionii 46,XX i 46,XY sunt biochimic i funcional
43
 diferii; inactivarea unui din cromozomii X, odat aprut, rmne definitiv la toi descendenii
celulei.
iii. Inactivarea cromozomului X-matern sau X-patern are un caracter ntmpltor i independent n
fiecare celul. Deci fiecare femeie normal este un mozaic de celule somatice, unele avnd
activ X-ul matern, altele X-ul patern.

Consecinele genetice ale inactivrii cromozomului X

1. Compensarea dozajului genic X-lincat. Dac un X este inactivat:
- cantitatea total a produilor genelor X va fi aceeai la ambele sexe;
- procesul de inactivare a crs X nu este ntotdeauna complet i perfect;
- n aneuploidiile X
o femeile 45,X0 i brbaii XXY manifest fenotipuri anormale;
o s-a observat c fenotipul unui individ este cu att mai anormal, cu ct sunt prezeni
mai muli cromozomi X.

2. Variabilitatea expresiei la femeile heterozigote. Femeile heterozigote pentru gene X-linkate au

o variabilitate considerabil n expresia fenotipic, deoarece inactivarea cromozomului X este
ntmpltoare i ca urmare proporia celulelor n care o alel oarecare este inactiv va fi variabil (de
la 0%- 100%). Dac alela mutant este funcional ntr-o majoritate a celulelor organismului,
heterozigoii feminini pot manifesta tulburarea (heterozigotul care se manifest sau Layonizare
defavorabil ). Exemple de boli: deficitul de G-6-PD, daltonismul, hemofilia, distrofia muscular
Duchenne.

3. Mozaicismul. Femeile prezint un mozaicism pentru genele X-lincate i au deci dou populaii de
celule, una cu X- matern activ, alta cu X- patern activ. La om fenomenul de mozaicism a fost
evideniat n cazul femeilor heterozigote pentru:
form rar de albinism X-linkat, la care la fundul ochiului s-au depistat pete de celule
pigmentate i nepigmentate.
gena ce codific G-6-PD, aceasta prezint 2 alele care produc dou forme distincte ale enzimei.
La femeile heterozigote s-au izolat celule de piele n cultur i s-a demonstrat c descendenii
unei celule produc un singur tip de enzim.

MECANISME MOLECULARE IMPLICATE N LYONIZARE

Au fost semnalate gene care rmn funcional-active pe cromozomul X inactivat. O

explicaie a acestui fenomen ar fi faptul c o parte din ele au gene omoloage pe cromozomul Y, de
aceea nu necesit compensarea dozei. Genele din regiunea pseudoautozomal (PAR), cu o extindere
de 2Mb, cuprins ntre Xp22- pter sunt:
gena STS, care codific steroid-sulfataza;
gena MIC-2, din vecintatea regiunii pseudoautozomale;
genele DXS, U23E, UBEI din regiunea proximal a braului scurt;
gena RPS4X care codific proteinele ribozomale S4 din regiunea proximal a braului lung.

I regiunea pseudoautosomal (PA) cu gene comune i pe crs X i pe crs Y:

- Xpter;
- Ypter;
II regiunea cu gene specifice numai crs X;

III regiunea crs Y cu gene masculinizante;

IV regiunea crs Y (2/3Yq) cu secvene necodificatoare heterocromatin constitutiv.

44
 Cercetrile de biologie molecular au identificat pe cromozomul X un segment - (q13),
implicat n inactivare, denumit centru de inactivare a cromozomului X (XIC). La acest nivel se
gsete gena XIST, care este o gen atipic - a pierdut potenialul de codificare proteic. Ea
codific o molecul de ARN de circa 17 Kb care rmne asociat cu cromozomul inactivat genetic.

Prin experiene de transgenez s-a constatat c gena XIST integrat ntr-un autosom este
capabil s declaneze procesul de inactivare cromozomial i formarea heterocromatinei. Prin
metoda FISH s-a constatat c molecula de ARN- XIST se localizeaz pe autosomul n care s-a
integrat gena i antreneaz inactivarea in cis a genelor autozomale. De asemenea s-a constatat ca
autosomul n care este integrat gena XIST este hipoacetilat la nivelul histonei H4 i are loc
formarea unui tip nou de histone- macroH2A1. Alte cercetri relev c mecanismul de inactivare
depinde de stabilitatea moleculei de ARN-XIST pe cromozomul X inactivat. Forma stabil i
instabil de ARN se transcrie de pe promotori diferii ale aceleai gene. Reglarea expresiei genei
XIST poate fi explicat pe baza fenomenului de amprentare genomic. Amprentarea genomic
(sau imprinting-ul parental) reprezint represarea permanent, dependent de originea parental, a
activitii transcripionale a uneia din cele doua copii ale unei gene din perechea de alele; sunt
modificri suferite de gene n cursul gametogenezei i/sau embriogenezei precoce i reprezint un
mecanism de reglare a expresiei fenotipice a unor gene.

TESTUL CROMATINEI X

Cromatina X reprezint un cromocentru vizibil, n mod normal, n nucleii interfazici ai celulelor

aparinnd sexului feminin; ea rezult prin heterocromatinizarea unuia dintre cei doi cromozomi X.
Originea i semnificaia cromatinei X a fost explicat de Mary Lyon (1961).
Studiul celulelor interfazice din orice esut provenit de la organismul feminin normal permite
identificarea cromatinei sexuale X. Tehnicile uzuale folosesc frotiul din celulele mucoasei bucale
(testul Barr) i frotiul din snge periferic. Evaluarea acestor teste presupune stabilirea numrului
cromozomilor X n corelaie cu numrul de corpusculi de heterocromatin X.
Corpusculul Barr reprezint un cromozom X heterocromatinizat, puternic condensat i intens
colorat bazofil. Este situat cel mai frecvent periferic, lipit de faa intern a membranei nucleare
(intranuclear) i are o form oval, plan convex, discoidal sau triunghiular. Mrimea medie este de
1 micron ( 0,3). Cnd corpusculul Barr este situat central trebuie difereniat de cromocentri nespecifici
sau de nucleol, care se prezint ca o formaiune rotund, cu dimensiuni mai mari, ce se coloreaz n
brun-crmiziu cu verde de metilpironin.

Morfologia corpusculului Barr n celulele mucoasei bucale.

A. Microfotografia nucleilor interfazici. B. Schema unei celule.
CB corpuscul Barr. NC nucleol.
n mod normal corpusculul Barr este prezent ntr-un singur exemplar la femeie i lipsete la brbat,
deoarece brbatul are un singur cromozom X, iar acesta nu se inactiveaz, n timp ce femeia are doi
cromozomi X, din care unul se inactiveaz.
n frotiurile mucoasei bucale frecvena teoretic a corpusculului Barr este de 100%, iar practic -
aproximativ de 30-40%. Aceast frecven real se datoreaz:
- excluderii corpusculilor situai central;
45
- calitilor improprii ale unor nuclei din celulele superficiale sau profunde;
- defectelor de colorare;
- existenei reale a celulelor cromatin-negative: cromozomul X inactiv nu se condenseaz din cauza
unor condiii metabolice generale sau celulare;
- alte cauze: vrsta, ciclu ovarian, boli, tratamente.

n cazuri patologice - anomalii de numr ale cromozomilor X (disgenezii gonadice) - poate fi

prezent la brbat (47,XXY), absent la femeie (45,X) sau prezent n mai multe exemplare la ambele sexe
(polisomii X).
Mrimea corpusculului Barr depinde de mrimea cromozomului X inactivat (mai mare de 1
micron: isoXq, duplicaie pe cromozomul X; mai mic de 1 micron: deleie pe cromozomul X, crs X
inelar).
Cnd pe aceeai lam se ntlnesc celule cu un numr diferit de corpusculi Barr, se ia n
consideraie numrul maxim gsit deoarece unii ar putea s nu apar.

TESTUL CROMATINEI Y

Cromatina Y reprezint aspectul interfazic al celor 2/3 distale ale braului q al cromozomului
Y. Se evideniaz prin colorare cu quinacrin prezentndu-se un corpuscul intens fluorescent (corpuscul
F), vizibil n nucleul interfazic. Mrimea lui este de 0,25 microni i este situat liber sau lipit de
membrana nuclear. Frecvena este diferit n diferite esuturi ale organismului masculin:
70-80% n fibroblati;
45% n spermatozoizi;
Corpusculul F este prezent exclusiv la brbat ntr-un singur exemplar; poate fi prezent n dou
exemplare la persoanele cu cariotip 47,XYY.

VALOAREA PRACTIC A TESTULUI CROMATINEI SEXUALE

Testul cromatinei X este un test rapid, foarte util n multe situaii, care poate fi efectuat n condiii
de dotare minim, cu mijloace modeste:
a) prenatal: n celulele extrase prin puncie amniotic - permite stabilirea sexului genetic al
ftului n anomaliile gonosomale recesive (de exemplu hemofilie sau miopatie Duchenne) n cazul n
care femeia este purttoare a genei anormale (risc 50%).
b) la natere: n cazul ambiguitii sexuale la nou nscuii cu testicul nepalpabil - pentru precizarea
sexului genetic i punerea n concordan cu sexul civil; sexul civil are importan mai ales n
edificarea ulterioar a sexului psiho-comportamental.
c) mai trziu: n diferite anomalii de sexualizare pentru precizarea sexului genetic; diagnosticul
disgeneziilor gonadice orhitice sau ovariene prin anomalii de numr i structur a cromozomilor
sexuali.
d) n medicina legal i criminalistic pentru precizarea provenienei feminine sau masculine a
unor fragmente de esuturi, pete de snge, fire de pr.

DAR, testul cromatinei sexuale este un test subiectiv, nu poate depista toate mozaicurile i nici
anomaliile autozomilor; n multe situaii, pentru precizare necesit efectuarea cariotipului.

46
 CURS 5
TRANSMITEREA MATERIALULUI GENETIC DE LA CELUL LA CELUL

Una dintre proprietile fundamentale ale organismelor vii este autoreproducerea, asigurat
de proprietatea unic a moleculelor de ADN de a se replica. n timpul replicrii materialul genetic se
dubleaz, iar n timpul diviziunii celulare are loc distribuia lui descendenilor. Astfel, diviziunea
celular este ansamblul de evenimente genetice, biochimice i
morfologice, ce asigur, prin intermediul cromozomilor, transmiterea
informaiei genetice la generaiile urmtoare de celule sau organisme.

Transmiterea informaiei genetice de la celul la celul se realizeaz

n dou etape majore:
- dublarea ADN cromozomial;
- repartizarea egal i identic a cromozomilor celulelor
fiice.
Acurateea dublrii materialului genetic i distribuiei
cromozomilor n timpul diviziunii celulare sunt asigurate de
succesiunea evenimentelor ciclului celular (ciclului mitotic) programate
genetic. Fiecare ciclu celular cuprinde dou perioade dinamic i calitativ
distincte: interfaza i mitoza.

Nr de Nr de Dublarea Segregarea
Perioadele ciclului Compactizarea
cromozo mol. materialului materialului
celular materialului genetic
mi ADN genetic genetic

G1 46 46 - slab condensat -
INTERFAZA

S 46 92 Replicare slab condensat -

G2 46 92 - slab condensat -

Profaza 46 92 - puternic condensat -

Metafaza 46 92 - maximal condensat -

MITOZA

Disjuncia
Anafaza 92 92 - puternic condensat cromatidelor
surori
puternic / slab
Telofaza 46 + 46 46 + 46 - Citochineza
condensat
Interfaza reprezint perioada dintre diviziuni pe parcursul creia materialul genetic este
decondensat i se prezint sub form de cromatin; informaia genetic este realizat prin expresia
unor anumite seturi de gene i sinteza diferitor proteine care asigur vitalitatea celulei, creterea,
specializarea celular i integrarea ei ntr-un esut. Pe parcursul interfazei celula primete semnale
mitogene (pentru celulele esuturilor proliferative inducerea mitozei este programat). Recepionnd
semnalele mitogene, celula deruleaz procesele de pregtire ctre mitoz:
- replicarea ADN cromozomial cu dublarea materialului genetic, cromozomii devenind
bicromatidieni;
47
 - controlul calitii materialului genetic i nlturarea defectelor din moleculele de ADN prin
activarea diferitor sisteme reparative;
- dublarea centriolilor, care vor asigura formarea fusului de diviziune n timpul mitozei.

DUBLAREA MATERIALULUI GENETIC

Replicarea este procesul molecular prin care se realizeaz dublarea exact a moleculelor de
ADN (a secvenei nucleotidice), i n consecin dublarea exact a materialului genetic. Dintr-o
molecul de ADN se formeaz dou molecule identice att ntre ele, ct i cu molecula parental.
Acest proces are loc datorit particularitilor unice de organizare a moleculelor de ADN: ADN
este format din dou catene polinucleotidice complementare i antiparalele.
Principalele caracteristici ale replicrii sunt:
- sinteza replicativ a ADN-ului este semiconservativ, deoarece
fiecare din cele dou catene este folosit ca matri pentru sinteza
unei catene noi de ADN, noile molecule conin o caten matri
i alta nou;
- replicarea ADN-ului nuclear are loc numai o singur dat pe
parcursul ciclului mitotic, n perioada sintetic a interfazei;
- procesul este asincron - unele secvene de ADN se replic mai
precoce (eucromatina), iar alte secvene mai tardiv
(heterocromatina).
n rezultatul sintezei replicative a ADN-ului materialul genetic se
dubleaz i cromozomii devin bicromatidieni. Dac pn la replicare n
celul sunt 46 de cromozomi monocromatidieni (46 de molecule de
ADN) dup replicare cei 46 de cromozomi devin bicromatidieni (92 de
molecule de ADN). Moleculele de ADN obinute prin replicare rmn
unite prin centromer pn n anafaz (dou molecule de ADN identice
ntre ele reprezint cromatidele surori ale unui cromozom) .
Replicarea semiconservativ a
ADN-ului

DISTRIBUIA MATERIALULUI GENETIC PRIN MITOZ ECVAIONAL

Mitoza reprezint mecanismul de distribuie a materialului genetic replicat la doi poli ai

celulei, asigurat de fusul acromatic i de separarea masei citoplasmatice, cu formarea a dou celule
identice genetic ntre ele i cu celula mam.

Mitoza reprezint o diviziune ecvaional determinat de urmtoarele evenimente:

- condensarea materialuilui genetic cromatina se transform n cromozomi facilitnd distribuia
egal i identic a materialului genetic;

- toi cromozomii sunt bicromatidieni; cromatidele surori sun identice, rezultate prin replicarea
ADN-ului cromozomial, cromatidele sunt unite prin centromer de la sfritul perioadei S pn n
Anafaz;

- n regiunea centromerului fiecrui cromozom se maturizeaz cte o pereche de kinetocori, ce

asigur interaciunea cromozomilor cu firele fusului acromatic;

- organizarea aparatului de diviziune centriolii n perioada S se dubleaz, n Profaz migreaz,

formnd doi poli ai celulei de la care se asambleaz firele fusului de diviziune;

48
- microtubului fusului de diviziune se unesc cu cromozomii de ambele pri ale centromerului prin
intermediul kinetocorilor;

- cromozomii maximal condensai, se aranjeaz ntr-un singur plan ecuatorial placa metafazic,
datorit aparatului de diviziune;

- segregarea materialului genetic, replicat i condensat, se realizeaz prin:

- dublarea i clivarea longitudinal a centromerilor;
- disjuncia cromatidelor surori (din fiecare cromozom bicromatidian se formeaz doi
cromozomi monocromatidieni);
- migrarea simultan i sincron a cromatidelor surori spre polii opui ai celulei.

- procesul de repartizare a materialului genetic se finalizeaz prin formarea a doi nuclei identici
urmat de citochinez.

Dinamica cromozomilor n diferite faze ale ciclului mitotic

Astfel, materialul genetic (cei 46 de cromozomi ai celulei somatice replicai), prin mitoz se
transmite de la o celul la dou celule fiice. Celulele rezultate motenesc cte 46 de cromozomi
material genetic identic, set de gene identic. Mitoza, n aa mod, reprezint mecanismul ce asigur
proprietatea celulelor de a transmite n succesiunea generaiilor material genetic identic.

Rolul biologic al mitozei:

asigur transmiterea egal i identic a materialului genetic n succesiunea generaiilor de
celule;
reprezint mecanismul universal de nmulire a celulelor somatice la organismele
pluricelulare;

49
 asigur creterea organismelor pluricelulare la etapele prenatale i postnatal;
reprezint mecanismul prin care se rennoiesc esuturile;
intervine n procesul de regenerare a esuturilor.
CARACTERISTICA PERIOADELOR CICLULUI MITOTIC

Procese
Perioadele Forma de prezentare a
Evenimente celulare principale genetice de
ciclului celular materialului genetic
baz
Creterea celular; Transcripia Cromozomi monocromatidieni,
Specializarea celular; Translaia decondensai sub form de
G1
Controlul competenei intrrii celulei n Reparaia eucromatin i heterocromatin
INTERFAZA

perioada S.
Dublarea ADNului nuclear; Replicarea Cromozomii devin
Dublarea centriolilor. Reparaia bicromatidieni, decondensai
S
Transcripia sub form de eucromatin i
Translaia heterocromatin
Controlul competenei intrrii celulei n Reparaia Cromozomi bicromatidieni,
G2 mitoz; Transcripia decondensai sub form de
Acumularea factorilor proteici mitotici. Translaia eucromatin i heterocromatin
Disocierea membranei nucleare; - Cromozomii bicromatidieni
Condensarea cromatinei i transformarea se condenseaz
ei n cromozomi;
Profaza Formarea aparatului de diviziune;
Maturizarea kinetocorilor;
Interaciunea cromozomilor cu fusul de
diviziune.
Cromozomii sunt dispui ntr-un singur - Cromozomi bicromatidieni
plan ecuatorial; maximal condensai
MITOZA

Metafaza
Controlul interaciunii cromozomilor cu
fusul de diviziune.
Clivarea longitudinal a centromerului - Din fiecare cromozom
Disjuncia cromatidelor surori bicromatidian, prin separarea
Anafaza Migrarea simultan i sincron a cromatidelor surori, se
cromatidelor spre polii celulei formeaz doi cromozomi
monocromatidieni.
Decondensarea cromozomilor cu - Cromozomi monocromatidieni,
transformarea lor n cromatin ce se decondenseaz
Reorganizarea membranei nucleare, cu transformndu-se n cromatin.
Telofaza
formarea a dou nuclee
Citochineza cu formarea a dou celule
fiice

ERORILE MITOZEI

Erorile mitozei reprezint anomalii de distribuie a materialului genetic n timpul diviziunii

celulare. nsi distribuia materialului ereditar are loc n anafaz prin clivarea longitudinal a
centromerului, segregarea cromatidelor i migrarea lor simultan spre polii celulei, iar prin separarea
citoplasmei cele dou celule-fiice motenesc un numr identic de cromozomi. Din diverse motive
(defecte genetice, defecte metabolice, aciunea factorilor de mediu) aceste procese celulare pot fi
dereglate; se pot produce:
- asamblare anormal a fusului acromatic i interaciune defectuoas cu kinetocorii;
- depolimerizare asincron a microtubulilor, care determin migrarea neconcomitent a
cromozomilor spre polii celulei;
- defecte n structura centromerului ce mpiedic separarea cromatidelor-surori;
50
 - modificarea viscozitii citoplasmei care poate mpiedica procesul normal de deplasare a
cromozomilor spre polii celulelor, etc.
Principalele erori ce conduc la o distribuie anormal a materialului genetic sunt:
- clivarea transversal a centromerului cu producerea izocromozomilor;
- nedisjuncia cromatidian i
- ntrzierea anafazic cu producerea celulelor aneuploide (trisomii, monosomii).

CLIVAREA TRANSVERSAL A CENTROMERULUI

n anafaz, cromozomul bicromatidian se separ n doi cromozomi monocromatidieni prin clivarea

centromerului. Clivarea centromerului, n norm, se realizeaz n plan longitudinal, rezultnd doi
cromozomi identici dup mrime, form i informaie genetic, avnd un bra proximal (p) i altul distal
(q). Dar, mai rar, clivarea centromerului se poate realiza n plan transversal, rezultnd doi cromozomi
monocromatidieni diferii ca mrime, form i coninut genetic izocromozomi (iso) ce conin dou brae
de acelai fel:
- iso p (ip) cromozom format din dou brae p fiind absent braul q;
- iso q (iq) cromozom format din dou brae q fiind absent braul p.

n rezultatul clivrii transversale a centromerului i segregrii cromozomilor, cele dou celule

fiice vor moteni materialul genetic dublat al unui bra i absena altui bra al cromozomului
implicat n anomalie. Ex.:
46, XX CTCcrsX 46,X,i(Xp) / 46,X,i(Xq)
CTCcrsY
46, XY 46,X,i(Yp)/ 46,X,i(Yq)
CTCcrs 21
46, XX (XY) 46,XX (XY), i(21p) / 46,XX (XY), i(21q)
etc.
51
 NEDISJUNCIA CROMATIDIAN

Cromatidele surori ale unui cromozom, rezultate prin replicarea premitotic a ADN-ului
cromozomial, se separ una de alta dup clivarea centromerului. Acest proces reprezint momentul
cheie n distribuia materialului genetic n timpul diviziunii. n caz de neseparare nondisjuncie
cromatidele surori ale unui cromozom vor migra la acelai pol, determinnd o repartizare inegal a
materialului genetic. Ca rezultat una dintre celulele fiice va moteni un cromozom n plus (2n+1
47 cromozomi trisomie), iar n cealalt celul va lipsi cromozomul respectiv (2n-1 45
cromozomi monosomie). Ex.:
46, XX NDcrsX 45,X / 47,XXX ;
NDcrsY
46, XY 45,X / 47,XYY;
NDcrs13
46, XX 45,XX,-13 / 47,XX,+13;
NDcrs18
46, XY 45,XY, -18 / 47,XY,+18;
NDcrs 21
46, XY 45,XY,-21 / 47,XY,+21;
NDcrs8
46, XX 45,XX,-8 / 47,XX,+8;
etc.

NTRZIEREA ANAFAZIC
Dup separarea cromatidelor-surori, prin depolimerizarea fusului de diviziune, are loc migrarea
simultan a cromozomilor monocromatidieni spre poli opui. La fiecare pol ajung cte 46 cromozomi,
care vor fi separai n dou nuclee, iar prin citochinez vor rezulta dou celule cu coninut genetic
identic. Ca rezultat al defectelor de dezasambalre a microtubulilor sau a modificrii viscozitii
citoplasmatice migrarea cromozomilor poate fi asincron. n rezultat, unii cromozomi vor nimeri n
nucleul celulei-fiice, iar alii, cei ntrziai, vor forma micronuclei citoplasmatici, care vor degrada. n
consecin, celulele fiice motenesc seturi diferite de cromozomi: una dintre celule poate obine un set
normal, iar cealalt celul va fi monosomic. Ex.:
46, XX IAcrsX 45,X / 46,XX;
46, XY IAcrsY 45,X / 46,XY;
46, XX IAcrs13 45,XX,-13 / 46,XX;
46, XY IAcrs18 45,XY, -18 / 46,XY;
etc.

CONSECINELE ERORILOR DIN MITOZ

Erorile de distribuie a materialului genetic n mitoz determin apariia celulelor cu seturi diferite
de cromozomi n acelai organism - mozaicuri celulare cromozomice ce pot genera dou sau mai
multe linii sau clone celulare, care difer prin numrul de cromozomi.

n rezultatul clivrii transversale a centromerului se poate produce mozaicul de tipul:

- 46,isop / 46,isoq - cnd eroarea afecteaz diviziunea zigotului, sau
- 46 / 46,isop / 46,isoq - cnd eroarea apare n cursul diviziunii blastomerilor.

n rezultatul nedisjunciei cromatidiene, eroare determinat de nesepararea cromatidelor surori ale

unui cromozom n cursul anafazei, apar mozaicuri de tipul:
- 45 / 47 cnd eroarea afecteaz diviziunea zigotului; sau
- 45 / 46 / 47 cnd eroarea apare n cursul diviziunii blastomerilor.

n rezultatul ntrzierii anafazice - eroare caracterizat prin migrarea cu vitez redus sau blocarea
migrrii unei cromatide dup ce disjuncia cromatidian s-a produs normal, determin apariia unui
mozaic cromozomic de tipul 45/46.

52
 Evoluia clonelor celulare anormale depinde de viabilitatea celulelor care prezint anomalia
cromozomic:
a. anomaliile grave determin moartea celulelor anormale (clonele anormale se autoelimin);
b. anomaliile mai puin grave permit multiplicarea celulei anormale cu apariia unei clone
anormale.

Trisomiile sunt mai puin grave ca monosomiile, anomaliile gonosomilor sunt mai puin grave ca
anomaliile autosomilor; cromozomii mai mici au mai puine gene i anomaliile lor sunt mai puin grave
ca anomaliile cromozomilor mari.

Anomalii Erori mitotice

Anomalii Anomalii
cromozomiale cauze ale anomaliilor cromozomiale
cromosomice viabile cromosomice letale
Nedisjuncia cromatidian 47,XXX Restul trisomiilor
47,XXY autozomale
47,XYY
Trisomii
47,XX(XY),+21
(47,+?)
47,XX(XY),+13
47,XX(XY),+18
47,XX(XY),+8
Monosomii Nedisjuncia cromatidian; 45,X Toate monosomiile
(45,-?) ntrzierea anafazic autozomale

46,X,i (Xp) Restul

46,X,i (Yp) anomaliilor crs
i (?p)
46,XX(XY),i (?p)

Clivarea transversal a centromerului 46,X,i (Xq) Restul

46,X,i (Yg) anomaliilor crs
i (?q) 46,XX(XY),i (Dq) 46,XX(XY),i (?q)
46,XX(XY),i (Gq)

Consecinele fenotipice ale clonelor anormale depind de momentul ontogenetic al apariiei lor.
Dac se produc n timpul embriogenezei - este perturbat formarea normal a esuturilor i organelor
producnd anomalii congenitale (fenotip anormal la natere); n caz dac apar postnatal se produce
perturbarea structurii sau funciei anumit esut sau organ i apare o degenerare neoplazic (cancer).

SALVAREA ANEUPLOIDIILOR

Organismul are tendina de a corecta dezechilibrul genetic, ncercnd s elimine cromozomul supranumerar
n cazul trisomiilor sau s ctige un cromozom n plus n cazul monosomiilor.
Corecia unei trisomii n disomie se poate realiza prin urmtoareale mecanisme:
- nedisjuncie mitotic;
- ntrziere anafazic;
- pulverizarea cromosomului supranumerar.

Corecia monosomiei n disomie poate fi realizat prin:

- nondisjuncie mitotic;
- endoreplicare selectiv a cromosomului monosomic;
- clivare transversal a centromerului ce rezult iso q. n cazul acrosomilor.

Consecina unui mecanism de salvare a unei aneuploidii este disomia uniparental. Trisomiile ce sunt
corectate prin pierderea unuia din cei trei cromosomi, 1/3 cazuri - rezult o disomie uniparent (DUP).
Monosomiile sunt corectate prin duplicarea cromosomului monosomic, rezultnd ntotdeauna DUP.

53
 n cazul n care corecia se produce doar n anumite celule, rezult mozaicuri cromosomice:
- corecia unei trisomii prin pierderea cromosomului suplimentar determin producerea unui mozaic
47/46;
- corecia unei monosomii prin duplicarea cromosomului fr omolog determin producerea unui
mozaic 46/45.
Mozaicurile cromosomice pot fi mprite n trei categorii:
I. mozaicuri generalizate, prezente n toate esuturile organismului;
II. mozaicuri limitate la anumite esuturi embrionare;
III. mozaicuri limitate la placent.

Consecinele mozaicurilor limitate la placent sunt:

disfuncie metabolic placentar ce afecteaz dezvoltarea embrionar;
ntrziere n dezvoltare i avorturi;
mortalitate perinatal.

54
 CURS 6
TRANSMITEREA INFORMAIEI GENETICE DE LA PRINI LA COPII

Perpetuarea speciei i pstrarea caracterelor distinctive sunt determinare pe proprietatea

fundamental a organismelor vii de a se autoreproduce. Pe parcursul evoluiei lumii vii a aprut
necesitatea nmulirii sexuate care asigur diversitatea intraspecific fenomen important pentru
supravieuire: asigur recombinarea materialului genetic, determin apariia indivizilor cu
combinaii noi de caractere cu o susceptibilitate diferit la agresiunile din mediul ambiant i, n
consecin, reprezint un mecanism important n selecia natural.

La organismele cu reproducere sexuat legtura material dintre generaii, transmiterea i

conservarea informaiei genetice de la o generaie la alta este asigurat de dou procese genetice
distincte:
- gametogeneza - producerea celulelor sexuale mature cu set haploid de cromozomi (n=23),
- fecundarea gameilor i formarea zigotului cu set diploid de cromozomi (2n=46) cu o
configuraie genetic nou, unic i constant.

GAMETOGENEZA

Gametogeneza este ansamblul proceselor genetice, biochimice i morfologice, care

determin formarea i maturaia gameilor n gonade (testicule sau ovare).
Ovogeneza este mecanismul de difereniere a ovulelor haploide din celule sexuale primare
diploide (ovogonii); se desfoar n ovare; unele procese se realizeaz n perioada embrio-fetal, iar
alte numai dup pubertate pn la menopauz; populaia de ovocite nu se rennoiete, iar nsi
procesul este discontinuu, cu dou faze de ateptare (dictiotenul profazei I i metafaza II ale
meiozei).
Spermatogeneza reprezint procesul de difereniere a spermatozoizilor haploizi din celule
sexuale primare diploide (spermatogonii); are loc n testicule; se desfoar n mai multe etape, cu
rennoirea permanent a populaiilor de celule sexuale dup pubertate.

Gametogeneza se desfoar n cteva etape:

- perioada de nmulire mitotic a celulelor sexuale primare cu formarea unei populaii mari de
gametogonii (2n=2c);

- perioada de cretere cu formarea gametociilor de ordinul I (2n=46 crs) prin replicarea ADN-
ului cromozomial, sinteza componentelor necesare pentru meioz i acumularea factorilor ce
asigur formarea i dezvoltarea zigotului;

- perioada de maturaie cu formarea gameilor haploizi, realizat prin meioz proces decisiv n
gametogenez:
- pe parcursul ovogenezei dintr-o ovogonie se maturizeaz doar un ovul capabil de fecundaie
i doi/ trei globuli polari;
- pe parcursul spermatogenezei dintr-o spermatogonie se maturizeaz patru spermatide;

- !!! perioada de formare, caracteristic doar spermatogenezei, ce asigur modificrile

morfologice ale celulei sexuale masculine, transformnd spermatidele n spermatozoizi capabili
pentru fecundaie (mobilitate i capacitaie).

55
 Ovogeneza Spermatogeneza
Locul desfurrii
n ovare (gonade feminine) n testicule (gonade masculine)
Perioadele caracteristice
I. De nmulire a ovogoniilor I. De nmulire a spermatogoniilor
II. De cretere a ovocitelor de ordinul I II. De cretere a spermatocitelor de ordinul I
III. De maturaie a ovulelor (dintr-un ovocit I se III. De maturaie a spermatidelor (dintr-un
formeaz un ovul i trei globuli polari) spermatocit I se formeaz patru spermatide)
IV. De formare a spermatozoizilor
Reglarea procesului
Control neuro-endocrin dependent de factorii de Autocontrol neuro-endocrin
mediu
Tipul de gamei
Ovule - celule mari rotunde, ce conin vitelius, setul Spermatozoizi celule mici mobile, formate din
de organite celulare caracteristic i nucleul haploid cap, gt i flagel, nucleul este haploid ( 23,X sau
(23,X) 23,Y)
Perioada desfurrii
Perioada de nmulire i cretere se desfoar doar Prenatal, odat cu formarea gonadelor se formeaz o
prenatal; populaie de spermatogonii;
Ovarul nou-nscutei conine ovocite de ordinul I Dup pubertate toate cele patru perioade ale
stopate n dictioten (profaza I a meiozei); spermatogenezei se desfoar continuu, producnd
Perioada de maturaie ncepe dup pubertate, cte un numr enorm de spermatozoizi.
un ovocit (mai rar dou) se maturizeaz lunar, pn Spermatozoizii permanent se rennoiesc; perioada
la stadiul metafazei II; de rennoire este de circa 64 de zile..
Meioza se finalizeaz dup fecundarea ovulului de
ctre spermatozoid.
!!! Ovocitele nu se rennoiesc.
Riscul mutaiilor generative
Crete odat cu vrsta femeii; risc pentru anomalii Independent de vrsta brbatului, risc pentru mutaii
cromozomiale. genice.

56
 FECUNDAREA
Contopirea gameilor haploizi de origine parental diferit poart denumirea de fecundare,
iar celula rezultat ce conine materialul genetic al ambilor gamei - zigot. Gameii formai n timpul
ovogenezei i spermatogenezei sunt foarte variai, pentru c rezult n urma unor procese de
recombinare intra- i intercromozomial. Participarea ovulelor i spermatozoizilor la fecundaie este
aleatorie, asigurnd formarea diferitor variante genetice de zigoi, ceea ce reprezint recombinarea
genomic.

Fuziunea celor doi gamei haploizi reface setul diploid de cromozomi, caracteristic speciei.
Mitozele succesive ale zigotului duc la creterea i dezvoltarea organismului pluricelular. ncepnd
cu zigotul, toate celulele somatice vor avea cromozomii n perechi. Cromozomii pereche sau
omologii sunt asemntori ca morfologie i structur genic, dar diferii ca origine.

n concluzie, organismul uman matur posed dou linii celulare:

(i) celule somatice ce alctuiesc diferite esuturi i organe:
- au set diploid de cromozomi (2n=46crs);
- provin de la celula zigot prin mitoze repetate;
- 51% din materialul genetic este de origine matern i 49% de origine patern (deoarece
ADNmt este de origine matern);
- se nmulesc prin mitoz pentru a asigura creterea organismului, rennoire i regenerarea
esuturilor;
(ii) celule sexuale care asigur transmiterea materialului genetic de la prini la descendeni la
formarea zigotului;
- au set haploid de cromozomi (n=23crs);
- provin din gametogonii (celule diploide), care reprezint celule somatice specializate pentru
gametogenez;
- se maturizeaz n gonade prin meioz;
- determin stabilitatea numrului de cromozomi la specia dat.

DINAMICA CROMOZOMILOR N MEIOZ

Meioza (meiosis micorare) este un mecanism complex ce implic desfurarea
succesiv a dou diviziuni, care se termin cu njumtirea setului de cromozomi. Din fiecare
celul cu 46 cromozomi (set diploid) se formeaz 4 gamei cu cte 23 cromozomi (set haploid).
Gameii sunt extrem de variai pentru c, rezultai din meioz, sunt produi ai recombinrii intra- i
intercromozomice.

Particularitile segregrii cromozomilor n meioza

ovogenezei i spermatogenezei

57
 Meioza este precedat de o interfaz premeiotic n care are lor replicarea ADN-ului. ntre
cele dou diviziuni exist o perioad scurt interkineza n care ADN-ul nu se replic.

Prima diviziune a meiozei diviziunea reducional asigur njumtirea numrului de

cromozomi n celulele: transform gametocitele de ordin I cu 46 cromozomi bicromatidieni n
gametocite de ordin II cu 23 cromozomi bicromatidieni.
Reducerea numrului de cromozomi este determinat de:
- conjugarea cromozomilor omologi cu formarea a 23 de bivaleni (tetrade) n profaza I;
- aranjarea bivalenilor n plan ecuatorial n metafaza I;
- disjuncia cromozomilor omologi i migrarea spre polii celulei a cromozomilor bicromatidieni,
cte un cromozom din fiecare pereche n anafaza I;
- citokineza asigur separarea masei citoplasmatice cu formarea a dou celule cu numr haploid de
cromozomi dar bicromatidieni (cu cantitate dubl de ADN 1n=2c) gametocite de ordinul II.

Dinamica cromozomilor n meioz

58
 Paralel cu procesele ce asigur segregarea cromozomilor pe parcursul diviziunii meiotice
reducionale are loc recombinarea materialului genetic:

Conjugarea omologilor i recombinarea intracromozomial crossing-overul

- recombinarea intracromozomial crossing-overul, care reprezint schimbul reciproc de

fragmente (gene) ntre cromozomii omologi materni i paterni i se desfoar datorit
conjugrii lor (Profaza I);
- recombinarea intercromozomial, care reprezint asortarea independent a cromozomilor
neomologi materni i paterni la polii celulei n timpul Anafazei I, datorit aranjrii aleatorii a
bivalenilor la ecuator i migrrii spre polii celulei.

Dublarea
Perioadele ciclului Recombin Segregarea
Nr. de cromozomi Nr. de cromatide mat.
celular area mat. genetic
genetic

Interfapa 46
92 + - -
premeiotic (gametocit I)

PI 46 92 - + -

MI 46 92 - - -
reducional
MEIOZA I

AI 46 92 - + +

23 + 23
TI 46 + 46 - - Citokineza
(gametocii II)

Inerchineza 23 23 46 46 - - -

P II 23 23 46 46 - - -
MEIOZA II
ecvaional

M II 23 23 46 46 - - -

A II 46 46 46 46 - - +

T II 23+23 23+23 23+23 23+23 - - Citokineza

(gamei)

A doua diviziune a meiozei diviziunea ecvaional asigur repartizarea egal i identic

a materialului genetic n celulele-gamei. Formarea gameilor haploizi (1n=1c) din gametociii de
ordinul II (1n=2c) este asigurat de:
- maturizarea a doi kinetokori pentru fiecare centromer;
- aranjarea la ecuator a cromozomilor ntr-un singur plan;
- clivarea longitudinal a centromerului i disjuncia cromatidelor surori;
- migrarea simultan i sincron a cromatidelor (cromozomilor monocromatidieni) spre polii
celulei;
- separarea masei citoplasmatice cu formarea a cte doi gamei haploizi din fiecare gametocit I, n
total 4 din fiecare celul ce a intrat n meioz.
59
 ROLUL BIOLOGIC AL MEIOZEI
i. Meioza are un rol esenial pentru reproducerea organismelor i conservarea nsuirilor prinilor,
asigurnd legtura material ntre prini i copii;
ii. Meioza are i rolul de a produce i a menine variabilitatea genetic n populaiile umane prin
fenomenele de recombinare intra- i intercromozomic, ce se realizeaz n profaza meiozei I
schimbul reciproc de fragmente egale ntre cromozomii omologi (procesul crossing-over)
i n anafaza meiozei I asortarea independent a cromozomilor neomologi;
iii. Meioza demonstreaz corelaia dintre dinamica cromozomilor i legile ereditii ale lui Mendel
(legea segregrii caracterelor, legea motenirii independente a caracterelor).

ERORILE MEIOZEI I CONSECINELE LOR

n cursul meiozei se pot produce diferite anomalii de distribuie a materialului genetic:

- crossing-over inegal cu formarea gameilor purttori de deleii sau duplicaii cromozomice;

- nedisjuncie cromozomial sau cromatidian cu formarea gameilor nulisomici i disomici;

- ntrziere anafazic cu formarea gameilor nulisomici;

- nesepararea gametocitelor cu formarea gameilor diploizi.;

- clivarea transversal a centromerului cu formarea isocromozomilor.

CROSSING-OVERUL INEGAL se poate produce ca rezultat al unei conjugri anormale a

cromozomilor omologi i, n consecin, schimbului inegal de fragmente ntre comatidele nesurori
ale bivalentului. Aceast eroare va fi cauza apariiei unor cromozomi cu deleie i cu duplicaie, iar
gameii respectivi purttori de aberaii cromozomiale [de ex.: 23,X(Y),1p- i (23,X(Y),1p+] vor da
natere la zigoi cu monosomii i trisomii pariale [de ex.: 46,XX(XY), 1p- i 46, XX(XY), 1p+].

NEDISJUNCIA CROMOZOMIC poate avea loc n anafaza I, cnd ambii cromozomi

omologi nimeresc la acelai pol al celulei i ca urmare n acelai gametocit sau n meioza II cnd
din diverse motive nu are loc clivarea centromerului i cele dou cromatide nu se separ,
migrnd mpreun la un pol se poate produce nedisjuncia cromatidian. n ambele cazuri se
formeaz gamei cu aneuploidii cromozomice disomii i nulisomii, care dup fecundare vor da
natere unor zigoi anormali: trisomici i monosomici.

NTRZIEREA ANAFAZIC a unui cromozom sau a unei cromatide se poate produce ca

urmare a separrii anafazice asincrone a cromozomilor n meioza I sau a cromatidelor n meioza
II, urmat de ntrzierea unui cromozom la polul celulei i pierderea acestuia n momentul
citochinezei (cromozomul ntrziat rmne n afara nucleului n citoplasm i degradeaz). Ca
rezultat al ntrzierii anafazice se formeaz gamei nulisomici, ct i gamei normali.

NESEPARAREA GAMETOCITELOR reprezint fenomenul cnd dup segregarea

cromozomilor n meioz nu se separ masa citoplasmatic i ca rezultat se produc gamei diploizi
(2n), care dup fecundare cu gameii normali vor forma zigoi triploizi (3n).

CLIVAREA TRANSVERSAL A CENTROMERULUI, cauzat de defecte ale ADN-ului

centromeric sau de asamblarea anormal a proteinelor centromerice, se poate produce n Anafaza II.
Ca rezultat se vor forma gamei cu isocromozomi p i izocromozomi q. La fecundarea gameilor
23,ip sau 23,iq vor rezulta zigoi 46,ip (cu materialul genetic al braului p a cromozomului respectiv
dublat i lipsa materialului genetic al braului q a cromozomului respectiv sau zigoi 46,iq (cu
materialul genetic al braului q a cromozomului respectiv dublat i lipsa materialului genetic al
60
braului p a cromozomului respectiv), iar dup fecundare se vor forma zigoi cu monosomie parial
i trisomie parial.

Astfel toate erorile de distribuie a materialului genetic n cursul meiozei duc la formarea
gameilor aneuploizi, iar dup fecundare formeaz zigoi aneuploizi (monosomici, trisomici), care n
consecin sunt cauza tulburrilor de reproducere: sterilitate, avorturi spontane, nou nscui mori
sau malformaii, copii cu tulburri de cretere pre i postnatal, ntrziere n dezvoltarea
psihomotorie.

ERORI LA FECUNDARE
Fecundarea dubl este posibil cnd ovarul elibereaz n momentul ovulaiei dou ovule i
prin fecundare, ele vor forma doi zigoi, care pot evolua independent; sau se pot uni, formnd o
singur structur embrionar denumit himer; n ultimul caz, dac zigoii vor avea acelai sex
genetic, se realizeaz o sexualizare normal i numai unele studii a caracterelor vor evidenia o
populaie celular dubl; dac zigoii care s-au unit au sexe genetice diferite, se realizeaz o
constituie XX/XY cu tulburri de sexualizare hermafroditism adevrat.

Dispermia este posibil cnd un ovul este fecundat de doi spermatozoizi, rezultnd zigoi
triploizi (69,XXX sau 69,XXY sau 69,XYY).

Diginia sau diandria reprezint fenomenul cnd unul din gamei este diploid i cellalt este
haploid, rezultnd zigoi triploizi; zigoii triploizi evolueaz cu dereglri severe n dezvoltarea
embrionar.

Consecine Constituia Evoluie

genetic
Fecundarea dubl Gemeni 46,XX i Evoluie normal
dizigoi 46,XX
46,XX i
46,XY
Himer 46,XX/46,XX Evoluie normal
46,XX/ 46,XY Hermafroditism adevrat
Dispermie Triploidie 69,XXX sau Dereglri severe n dezvoltarea
69,XXY sau embrionar
69,XYY
Diginie Triploidie 69,XXX sau Dereglri severe n dezvoltarea
69,XXY embrionar, placent mic de form
anormal, avort precoce
Diandrie Triploidie 69,XXY sau Mol hidatiform parial, placent mare,
69,XYY polichistic, embrion malformat.

61
 CURS 7
GENELE UMANE

n conceptul clasic gena este un segment cromozomial ce controleaz expresia fenotipic a

unui caracter, iar n conceptul contemporan gena reprezint un segment polinucleotidic al moleculei
de ADN ce codific sinteza unei molecule specifice polipeptid sau ARN.

Astfel substratul molecular al informaiei genetice este molecula de ADN, iar substratul
molecular al caracterului morfologic, biochimic sau fiziologic este proteina.

Genele umane se clasific n dou categorii majore: gene structurale care codific
polipeptide i gene codificatoare de molecule de ARNr i ARNt.

62
 ORGANIZAREA GENERAL A GENELOR STRUCTURALE
Gena structural reprezint o combinaie de secvene nucleotidice reglatoare i
codificatoare:
secvene reglatoare proximale promotorul, enhanceri i silenseri, care sunt responsabili de
controlul iniierii transcripiei, ratei i vitezei transcripiei;
secvene reglatoare distale terminatorul i situsul de poliadenilare, care intervin n
controlul terminrii procesului de transcripie i maturizrii ARN-transcriptului primar;
secvena codificatoare ce este format din exoni separai de introni.

Genele sunt localizate n lungul moleculei de ADN cu o poziie fix (locus) i sunt separate
una de alta prin secvene necodificatoare spaceri. Ele nu au granie morfologice, au numai granie
funcionale, ce se stabilesc n procesul transcripiei.

n genomul uman se descriu circa 30000 perechi gene structurale ce constituie circa 25% din
genom (la 50% din ele funcia este cunoscut).

Dimensiunile genelor umane sunt diferite i au o lungime medie de 3000p.n., de ex:

- gena globinei 1, 5 kb;
- gena insulinei - 1, 7 kb;
- gena catalazei - 34 kb;
- gena distrofinei - 2,5 mb;

Clasificarea genelor umane dup dimensiuni

Dimensiunile Dimensiunile Numrul
Categoria Exemple
genei, kb ARNm, kb intronilor
-globina 0,8 0,5 2
Gene mici -globina 1,5 0,6 2
Insulina 1,7 0,4 2
Factorul IX de coagulare 34,0 2,8 7
Gene medii
Catalaza 34,0 1,6 12
Gene mari Fenilalaninhidrixilaza 90 2,4 12
Factorul VIII de coagulare 186,0 9 26
Gene gigante
Tireoglobulina ~300,0 8,7 36
Gene
Distrofina ~2000,0 16,0 60
supergigante

Repartizarea genelor umane dup lungime

Lungimea, kb % de la numrul total
pn la 10 23,3
10-25 35,6
25-50 20,2
51-100 13,0
101-500 6,7
peste 500 1,2

PARTICULARITILE GENELOR STRUCTURALE UMANE:

A. au o organizare complex:
pot prezenta mai mult de un promotor sau situsuri de iniiere al transcripiei;
pot prezenta mai muli codoni de iniiere i codoni STOP;
prezint secvene complexe de reglare a transcripiei;
asigur diferite variante de splicing alternativ;
B. se caracterizeaz prin prezena unor mecanisme de reglare combinat a activitii genelor
(complex i precis n spaiu i n timp):
n dependen de tipul celulei;
n dependen de perioada ontogenetic a celulei i a organismului;
63
 n dependen de factorii de mediu interni sau externi.

Gena distrofinei i izoformele distrofinei

Lungimea Localizarea
Tipuri Expresie
ARNm, kb promotorului
Captul 5'
Muscular 14 Inim, muchi scheletici
Dimensiuni netranscris
complete Cerebral 14 Intronul 1 Scoara Hipocamp
Cerebral 14 Intronul 1 Celulele Purkinje
Oriunde, n afar de
1-Dp71 4,5-4,8 Intronul 63
muchi
2-Dp116 5,5 Intronul 56 Nervii periferici
Forme
Oriunde, n afar de
scurte 3-Dp40 2,2
muchi
Dp140 7,5 Intronul 44 Neuroni embrionali
Dp260 Retin

PROPRIETILE GENELOR UMANE

1. Genele, fiind reprezentate de secvene de ADN, se replic, autoreproducndu-se i prin mitoze

repetate sau prin meioz se transmit la alte generaii de celule sau de organisme, asigurnd
continuitatea materialului genetic n irul generaiilor i transmitea genealogic a caracterelor -
ereditatea;

2. Gena este specific - codific o molecul polipeptidic, determin expresia unui caracter;

3. Gena are o aciune dozat asupra fenotipului prin posibilitatea sintezei unei anumite cantiti de
produs genic (ARNm i molecule polipeptidice);

4. Gena este stabil datorit particularitilor de organizare a moleculei de ADN i transmiterii din
generaie n generaie a informaiei genetice neschimbate, determinnd formarea caracterelor
asemntoare la prini i copii; dar exist n genomul uman gene nestabile, programate genetic,
ce se reorganizeaz de novo n timpul diferenierii celulare (de ex.: genele pentru lanurile grele
i uoare ale Ig, genele ce codific pentru receptorii olfactivi, pentru enzimele aparatului de
detoxifiere a xenobioticilor);

5. Unele gene sunt dependente de factorii de mediu (interni genetici i negenetici, externi) i
determin expresivitatea variabil a unui caracter la diferite persoane n diverse condiii de
mediu:
factorii de mediu pot modula (mri, micora sau bloca) expresia genei;
factorii de mediu pot modifica expresia genei (expresie patologic, non-expresie);

6. Genele pot avea aciune pleiotrop; pleiotropia sau aciunea multipl a genei este proprietatea
genei de a contribui la formarea mai multor caractere; poate fi primar - determinat de aciunea
multipl a produsului genei sau poate fi secundar determinat de consecinele secundare ale
aciunii proteinei la nivelul diferitor celule, esuturi i organe;

7. Genele pot exista n mai multe forme moleculare (diferite secvene nucleotidice), determinnd o
surs de variabilitate genetic. Prin modificarea secvenei nucleotidice ale unei gene (mutaii)
apar variante noi ale genei alele; alelele multiple controleaz diferite stri sau forme
alternative ale unui caracter; caracterul controlat de o serie de alele multiple se numete caracter
polimorf (25% din genele umane au variante alelice multiple).

64
 FUNCIILE GENELOR UMANE

Genele dein i pstreaz informaia genetic codificat despre sinteza anumitor proteine
specifice i formarea anumitor caractere fenotipice (biochimice, morfologice, fiziologice, psihice i
comportamentale).

Genele transmit informaia genetic datorit replicrii ADN-ului i reprezint legtura

material dintre generaii, asigurnd transmiterea genealogic a caracterelor de specie i de familie.

Genele realizeaz informaia genetic prin transcrierea ADN-ului pe molecule

informaionale de ARN i translaia codului genetic n timpul sintezei proteinelor substratul
material al diferitor caractere la nivel de celul, esut i organism.

Expresia genelor reprezint realizarea informaiei codificate de gene prin formarea

caracterelor - fenotipului.

(I) La nivel molecular, aceasta constituie procesul prin care informaia din ADN este
transformat n molecule polipeptidice, ARNt, ARNr. Expresia genelor ce codific polipeptide
reprezint un proces complicat, ce decurge n cteva etape:

transcripia copierea informaiei genetice din ADN i sinteza moleculelor precursoare ale
ARNm;

processingul maturizarea moleculelor ARNm: CAParea, poliadenilarea, splicingul;

transferul ARNm n citoplasm;

translaia procesul prin care secvena nucleotidelor din ARN este tradus ntr-o secven
de aminoacizi ai lanului polipeptidic.

maturizarea moleculei proteice prin conformaie +/- modificri structurale.

(II) La nivel celular expresia genei reprezint rezultatul integrrii proteinei sintetizate ntr-o
structur celular, ntr-un lan metabolic sau ntr-o reea de semnalizare celular. Fenotipul celular
morfologia i funcia este controlat de genomul celulei, dar realizat de setul specific de
proteine sintetizate proteinomul.

(III) La nivel organismic expresia genelor se manifest prin caractere morfologice i nsuiri
complexe, datorit cooperrii tuturor componentelor moleculare i supramoleculare n morfogeneza
i fiziogeneza organismului uman.

Astfel, n concept actual, expresia genic este studiat la diferite nivele:

i. molecular polipeptidul sintetizat, care constituie efectul primar al expresiei genice;
ii. celular molecula proteic i funcia ei n celul efectul secundar;
iii. organismic manifestarea fenotipic a genei efectul teriar.

CLASIFICAREA GENELOR UMANE

Exist diferite criterii de clasificare a genelor, care includ diferite puncte de vedere asupra
legturii dintre structur, localizare i funciea genelor:

65
1. dup tipul produsului genic:
- gene codificatoare de proteine gene structurale;
- gene codificatore de ARNr i ARNt.

2. dup numrul de copii n genom:

- unice - cu o singur copie;
- cu mai multe copii (repetate n tandem sau dispersate).

3. n dependen de numrul de celule n care se expresea genele:

- genele house keeping active n toate celulele;
- gene specifice de esut.

4. n dependen de perioada de expresie fenotipic:

- gene active n toate perioadele vieii;
- gene active numai n perioada embrionar;
- gene active n perioada pubertii;
- gene active la adult.

5. dup gradul de activitate:

- gene normomorfe - cu activitat normal;
- gene hipomorfe - cu activitat redus:
- gene hipermorfe - cu activitat n exces;
- gene amorfe - cu activitate blocat.

Activitatea genic se stabilete dup cantitatea de molecule de ARN transcris, cantitatea de

protein sintetizat, activitatea produsului genic proteinei.

6. dup funcia produilor genici sintetizai sunt gene ce codific:

- gene codificatoare de enzime - 31,2%;
- gene codificatoare de modulatori ai proteinelor sintetizate - 13, 6 %
- gene codificatoare de receptori;
- gene codificatoare de factori de transcripie;
- gene codificatoare de proteine ale matricei intracelulare i matricei extracelulare;
- gene codificatoare de transportori membranari i proteine canal; 50%
- gene codificatoare de molecule de semnalizare celular;
- gene codificatoare de hormoni;
- gene codificatoare de imunoglobuline, etc.

7. n dependen de aciunea modulatoare a factorilor de mediu asupra expresiei genei:

- gene stabile;
- gene plastice.

LOCALIZAREA GENELOR

Conform teoriei cromozomiale ale ereditii propus de Th. H. Morgan (1911):

genele sunt localizate pe cromozom, fiecare gen ocup un anumit locus;
genele unui cromozom sunt dispuse liniar i formeaz grupuri de nlnuire;
numrul grupurilor de nlnuire este egal cu numrul haploid de cromozomi;
ntre cromozomii omologi poate avea loc schimb de gene alele (crossing-overul);
frecvena crossing-overului este direct proporional cu distana dintre gene i este invers
proporional puterii de nlnuire;
66
 distana dintre gene se msoar n % de recombinare i 1% de crossing-over =1cM
(centiMorganid).

n loci identici ai cromozomilor omologi sunt dispuse

gene cu aceiai funcie - gene alele, iar genele cu loci diferii n
acelai cromozom sau cromozomi diferii se numesc gene
nealele.
Dac individul este purttor de alele identice este numit
homozigot, dar dac genele alele sunt diferite heterozigot.
Fiecare persoan poart circa 30 000 perechi de gene,
dup unele perechi este homozigot, iar dup altele heterozigot,

Repartizarea genelor pe cromozomi este neomogen:

- sunt cromozomi bogai n gene i cromozomi sraci n gene;
- sunt fragmente de cromozomi cu o densitate mare de gene i cu densitate redus.

Unele gene au o singur copie, altele gene au mai multe copii i formeaz familii repetitive (n
tandem sau pe diveri cromozomi) sau nerepetitive de gene.

Genele de pe un cromozom, ce sunt localizate foarte aproape una de alta formeaz haplotipuri,
care deseori au elemente reglatoare comune.

Genele localizate pe autosomi determin caractere autozomale ce se transmit de la prini

indiferent de sex, iar genele localizate pe gonosomi determin caractere sex-lincate ce se transmit
dependent de sex:
- genele i caracterele X-lincate se transmit de la mam i fiicelor i fiilor, iar de la tat numai
fiicelor;
- genele i caracterele Y-lincate (holandrice) se transmit exclusiv din tat n fiu.

HRILE GENETICE
Genomul celulei include dou sisteme de gene cu mod de organizare i motenire diferite:
genomul nuclear i genomul mitocondrial.

n nucleul celulelor umane se conin circa 30000 perechi de gene, care sunt repartizate de-a
lungul a 46 molecule de ADN, care corespund celor 46 cromozomi din setul diploid.

Fiecare cromozom conine n medie 1-2000 de gene. Genele sunt dispuse liniar n cromozom,
una dup alta, fiind separate prin secvene necodificatoare (ADN-satelit, spaceri). Genele unui
cromozom se transmit de la o generaie la alta, n bloc, fenomen numit nlnuire genic sau linkage.
Fiecare cromozom reprezint un grup de nlnuire.
Genomul mitocondrial este organizat sub form ADN inelar, conine 37 gene aranjate compact i se
transmite pe linie matern.

Astfel, la om sunt 25 de grupuri de nlnuire:

22 grupuri ale autosomilor;
un grup al cromozomului X;
un grup al cromozomului Y;
un grup genele ADN-ului mitocondrial.

67
Cromozom 1 2 3 4 5 6 7 8
Nr. gene 3511 2368 1926 1444 1633 2057 1882 1315
Lungimea, Mb 250 243 198 191 181 171 159 146

Cromozom 9 10 11 12 13 14 15 16
Nr. gene 1534 1391 2168 1714 720 1532 1249 1326
Lungimea, Mb 141 136 135 134 115 107 103 90

Cromozom 17 18 19 20 21 22 X Y
Nr. gene 1773 557 2066 857 450 855 1672 429
Lungimea, Mb 81 78 59 63 48 51 155 59

Fenomenul de linkage se manifest numai n cazul genelor plasate pe acelai cromozom, n timp ce
pentru genele plasate pe cromozomi diferii transmiterea ereditar a genelor se face independent,
mendelian.

Studiul mecanismului de transmitere ereditar a artat c nu ntotdeauna genele ce fac parte din
acelai grup linkage se transmit nlnuit. Excepiile sunt explicate prin posibilitatea recombinrii ntre
cromozomii omologi crossing-over, care are loc n meioz. n timpul crossing-overului are loc
schimbul reciproc de gene alele ntre cromozomii pereche - cromozomii omologi.
Frecvena crossing-overului este diferit pentru diveri loci, variaz de la 0% la 50% i este

Mecanismul recombinrii ntre cromozomii omologi crossing-overul

corelat cu distana dintre gene. La valori de peste 50% nu se mai consider o recombinare, ci o
segregare independent.

Pe baza observaiei c ntre genele foarte apropiate probabilitatea apariiei chiasmelor i

respectiv a fenomenului de crossing-over este mic, iar ntre genele mai ndeprtate crete spre limita
superioar de 50%, determinarea frecvenei recombinrilor genice n procente constituie modalitatea de
stabilire a localizrii genelor pe cromozom i, respectiv, a alctuirii hrilor genetice.
68
 Hrile genetice se alctuiesc innd cont de fenomenul de linkage, crossing-over, plasarea
liniar a genelor pe cromozomi, etc. Aceste hri constituie o reprezentare grafic a cromozomilor i a
genelor care alctuiesc diferite grupe de linkage, gene situate pe cromozomi la distane relative,
exprimate n procente de recombinare (1% de crossing-over = 1 cMorganid (1cM)).

Motenirea nlnuit complet i incomplet.

Formarea zigoilor nerecombinai (NR) i a celor recombinai (R) -
produi ai crossing-overului

n prezent, datorit tehnicilor de genetic molecular, s-au elaborat hrile fizice ale
cromozomilor cu distribuia exact a genelor pe cromozom, iar mrimea genelor i distana dintre ele se
prezint n perechi de nucleotide (pn).

Stabilirea unor relaii (grupe) de nlnuire ntre

gene i, deci, caractere este foarte important n
genetica medical. Se urmrete transmiterea
unor caractere patologice n comun cu un
caracter normal.
Caracterul normal servete ca marcher
(indicator) a unei patologii i este important n
special pentru bolile ce apar pe parcursul vieii.

Exemple de grupe de nlnuire:

- Rh i eliptocitoz (eritrocite cu form oval);
- AB0 i xeroderma pigmentosum (XP);
- grupa sanguin Duffy i cataracta congenital;
- grupa sanguin Lutheran, statusul secretor i miopatia;
- grupele MNSs i dentinogenesis imperfecta-1 (DI-1);
- grupa sangvin Xg i hemofilia A (HEMA), hemofilia B (HEMB), daltonismul (Dalt); etc.

69
 MUTAIILE GENICE

Mutaiile genice pot interesa genele de structur sau secvenele implicate n reglare: n primul
caz se modific structura (calitatea polipeptidului sintetizat dup informaia genei), n al doilea caz se
schimb ritmul (cantitatea) sau tipul de protein sintetizat. Ca rezultat al mutaiilor genice, se produc
forme alternative ale genei, numite alele.
Clasificarea mutaiilor genice

Mutaiile genice se pot produce prin:

- alterri ale secvenei nucleotidice - prin substituie, inversie, deleie, inserie de nucleotide;
- recombinri intragenice i crossing-over inegal;
- reversie;
- duplicaii i hiperduplicaii.

Substituia unui singur nucleotid prin alt nucleotid este cea mai frecvent posibilitate de
modificare genic. Substituiile sunt definite mutaii punctiforme i se clasific n:
transversii - tip de nlocuire (substituie) a bazelor azotate n care o baz azotat purinic este
nlocuit de o baz pirimidinic sau invers.
tranziii - tip de nlocuire (substituie) a bazelor azotate din ADN, n care o baz purinic este
nlocuit de o alt baz purinic sau o baz pirimidinic este nlocuit de alt baz pirimidinic.

70
 Substituia duce la modificarea unui singur codon (sens sau nonsens). Schimbarea unui codon sens
va determina unul din urmtoarele efecte:
- schimbarea aminoacidului ca rezultat al modificrii codonului mutaii misens;
- oprirea sintezei proteinei, n cazul n care codonul format prin substituie este un codon STOP
(UAA, UAG i UGA) mutaii nonsens;
- pstrarea structurii iniiale (normale) a proteinei deoarece codonul rezultat prin substituie este
sinonim cu cel modificat samesens mutaii.

Substituia poate implica uneori i un codon non-sens sau stop: UAA sau UAG pot deveni CAA sau
CAG, codoni care semnific glutamina. n acest caz sinteza polipeptidului continu pn la un nou
codon stop. Un exemplu de elongaie a catenei l constituie o alt Hb anormal Hb CS (Hb Constant
Spring) a crei caten alfa are 172 aminoacizi n loc de 141; secvena adiional de 31 aminoacizi
ncepe ntr-adevr cu Glutamina.
Substituia poate interesa doi sau chiar mai muli aminoacizi distinci, separai, din catena unui
lan polipeptidic . De ex: Hb C-Harlem = 2 alfa 2 beta 6 GluVal; 73 AspAsn.

Inversia va duce la modificarea unui codon i lectura sa n sens invers. Consecinele inversiei
sunt aceleai ca i ale substituiei.

Prin deleie se nelege lipsa a una sau a mai multe perechi de nucleotide din molecula de ADN.
Natura anomaliei produse va depinde de numrul de perechi de nucleotide implicat n deleie. Dac
lipsete o singur pereche de nucleotide se produce o decalare a fazei (cadrului) de lectur a codului
genetic (mutaii frame shift); lectura este incorect i se sintetizeaz o protein n care toi
aminoacizii, situai dincolo de locul deleiei, vor fi modificai (ex: Hb Wayne).
Dac numrul de nucleotide deletate este multiplu de trei, atunci n catena polipeptidic
determinat de gena mutant vor lipsi unul sau mai muli aminoacizi (n Hb Gun-Hill sunt abseni cinci
aminoacizi din catena beta: 91-95) Uneori se poate realiza deleia complet a unei gene. n alfa-
talasemii nu se produc catenele alfa ale hemoglobinei pentru c gena corespunztoare lipsete din
genom, n locul lor se sintetizeaz alte tipuri de lanuri: de ex: Hb H=4 beta sau Hb Bart=4 gama.

Inseria sau adiia nseamn introducerea unui nucleotid n secvena unei gene; din punctul de
inserie lectura codonilor se va face decalat, realizndu-se o protein cu secven anormal.

71
 Crossing-overul inegal se poate produce dac nu are loc o mperechere perfect a omologilor. n
rezultatul CO inegal se produce o rearanjare a secvenelor ADN i deci o modificate a structurii
polipeptidelor codificate de aceste secvene (ex. Hb Lepore).

Reversia (mutaia supresiv) este o mutaie care intereseaz o alt mutant, determinnd
revenirea la fenotipul normal (slbatic). Reversia adevrat transform codonul mutant n normal, iar
reversia numit supresiv produce o a doua mutaie, diferit ca poziie ca prima dar care corijeaz
efectul ei.
Ex. Hb. Harlem prezint prima mutaie n catena beta 6 Glu-Val ca i Hb S dar efectul ei de
transformare a hematiilor n secer este anulat de o a doua mutaie: beta 73 AspAsn. Situaia se repet i
n cazul Hb Memphis/S: alfa 23 GluGln; beta 6 GluVal.

Consecinele mutaiilor genice. Efectul primar al mutaiilor genice l reprezint modificarea

secvenei aminoacizilor n moleculele polipeptidice, sintetizate pe baza informaiei acestor gene (ele
sunt produsul primar al genei respective). Efectul biologic al acestei modificri depinde de tipul
aminoacidului substituit i de locul su particular n molecula polipeptidic. Dac mutaiile vor
modifica structura sau ritmul de sintez a unei enzime, atunci se produce o alterare (bloc complet sau
parial) a unei ci metabolice. Efectul primar este urmat de o mulime de efecte secundare care vor
determina un fenotip modificat.

72
 Mutaiile pot afecta partea reglatoare sau partea codificatoare a genei. Modificarea secvenei
nucleotidice a promotorului poate duce la schimbri cantitative n sinteza ARN i proteinei:
- blocarea transcripiei lipsa produsului proteic modificri fenotipice prin deficien (de ex.,
fenilcetonuria, intolerana la zaharoz);
- activarea continu a transcripiei sinteza unei cantiti mari de produs proteic modificri
fenotipice prin exces (de ex., sinteza n cantiti mari a HbF i HbA2 duce la hemoliz i
anemie).

Modificarea secvenei nucleotidice a regiunii codificatoare, n special a exonilor, poate duce la

schimbarea mesajului genetic i secvena de aminoacizi din protein, producnd schimbri calitative n
sinteza produsului final:
- sinteza unei proteine cu o activitate sczut (mutaie hipomorf);
- sinteza unei proteine cu o activitate exagerat (mutaie hipermorf);
- sinteza unei proteine inactive (mutaie amorf).

Dup valoarea adaptiv i consecinele mutaiilor genice asupra structurii i funciei

organismelor ele se pot mpri n mai multe grupe:
- mutaii neutre care produc polimorfismul biologic intraspecific, variantele normale (de ex.,
grupele sanguine, serice sau tisulare);
- mutaii deviante (defavorabile) care antreneaz un handicap mai mult sau mai puin sever i
creeaz fie o stare de boal, fie o predispoziie la boal; unele dintre ele sunt mutaii letale sau
subletale, afectnd decisiv viabilitatea i reproducerea individului;
- mutaii evoluante cu valoare adaptiv mai mare ca normalul; ele produc indivizi mai bine
adaptai, mai rezisteni la mediu.

MUTAII DINAMICE

n 1991 s-a descoperit o nou clas de alterri ale ADN, diferite de mutaiile clasice, mutaiile
dinamice. Ele sunt reprezentate de creteri ale numrului unor repetri trinucleotidice situate n
proximitatea sau chiar n interiorul genelor structurale. Mutaiile dinamice sunt caracterizate de
instabilitate, exprimat prin creterea numrului de copii ale unitilor trinucleotidice, cu ocazia
diviziunilor pe care le realizeaz celula purttoare.

Mutai
e
comple
t

Exist variaii ale numrului de repetri trinucleotidice:

- polimorfisme ADN benigne;
- premutaia secvena de ADN devine instabil, dar nu determin un fenotip patologic;
- mutaia complet - prin expansiunea repetrilor trinucleotidice determinnd fenotip
patologic.
73
 Purttorii premutaiilor sunt fenotipic normali. Expansiunea repetrilor are loc n gametogenez.
Astfel unii din gameii purttorilor sntoi vor conine mutaia complet, care la descendeni va
produce un fenotip patologic. n gametogeneza ultimilor, din cauza instabilitii acestor repetri, vor
aprea expansiuni adiionale, care la urmtoarea generaie va produce un fenotip patologic mai grav
(=fenomenul de anticipaie).

Frecvena (rata) mutaiilor

Frecvena medie cu care se produce un eveniment mutaional particular, per celul (sau individ)
i per generaie se numete rat de mutaie. Rata mutaiilor spontane variaz pentru diferii loci, ntre
anumite limite: 1:25000 (sau 4x10-5) 1:1000000 (sau 1x10-6) per gamet i generaie. Exist variaii
regionale.

- 1-2% din persoane au un efect determinat de mutaia

unei gene;

genetic
povar
- fiecare individ este heterozigot (purttor) de circa 6-
10 gene recesive;
- fiecare individ este heterozigot (purttor) de circa 3-5
gene letale tot recesive (care dac vor fi n stare
homozigot la descendeni vor produce moartea lor)

74
 CURS 8
TEHNICI DE ANALIZ A GENELOR

Tehnologia ADN recombinant a creat premisele dezvoltrii unor metode de diagnostic

molecular dotate cu capacitate de rezoluie, grad de precizie i nivel informativ net mai superioare celor
ale metodelor convenionale. Superioritatea absolut a abordrii moleculare rezult ns din faptul c
spre deosebire de toate celelalte metode de diagnostic, limitate la determinarea exclusiv a trsturilor
fenotipice, - analiza ADN, destinat nemijlocit studiului genotipului este singura n msur s
obiectiveze alterrile primare (mutaiile) care se fac direct responsabile pentru starea de boal.
Tehnicile ADN recombinant permit identificarea genelor normale i/sau a variantelor lor
mutante, stabilirea purttorilor de gene mutante, diagnosticul prenatal sau presimptomatic al
patologiilor genetice, iar n viitorul apropiat apare posibilitatea dezvoltrii terapiei genice.
Studiul molecular al genelor poate fi realizat pe mai multe ci n dependen de scopul propus:
- secvenierea ADN pentru determinarea structurii primare a genei;
- tehnica Southern-blot pentru identificarea RFLPs;
- tehnica Northen-blot pentru determinarea expresiei genelor (analiza ARNm);
- tehnica Western-blot pentru determinarea produsului proteic al genei;
- tehnica PCR pentru identificarea genei normale sau mutante, prin amplificarea specific a
secvenelor de ADN, etc.
n laboratoarele de biologie molecular se utilizeaz diverse variante ale metodelor menionate. Toate
aceste metode se bazeaz pe diferite principii de manipulare a acizilor nucleici:
- clivarea specific a ADN-ului genomic pentru obinerea fragmentelor de cercetat;
- identificarea fragmentelor de ADN sau ARN de cercetat prin hibridare cu sonde specifice
complementare secvenei int;
- identificarea genelor normale sau mutante prin procesul de amplificare specific a ADN (PCR)
reacie specificat de alegerea primerilor complementari genei / secvenei de interes;
- vizualizarea fragmentelor de interes dup rezultatele electroforezei i marcarea specific al ADN
sau ARN de cercetat, sau utilizndu-se programe computerizate de citire i interpretare a
rezultatelor;
- interpretarea rezultatelor este un proces complex, legat de fiecare tehnic i procedur n parte n
concordan cu particularitile metodei utilizate.

Pentru separarea fragmentelor de acizi nucleici se utilizeaz electroforeza n gel de agaroz sau de poliacrilamid.
Purtnd sarcin negativ, moleculele acizilor nucleici migreaz n cmpul electric, iar viteza de migrare depinde
de greutatea molecular a fragmentelor cercetate - fragmentele mai scurte migreaz mai rapid, n timp ce
fragmentele lungi migreaz mai lent. Pentru determinarea dimensiunilor fragmentelor de acizi nucleici,
concomitent cu fragmentele de interes sunt supuse electroforezei n trecuri vecine i fragmente-marker ai
lungimii. Moleculele acizilor nucleici pot fi vizualizate n gel prin colorare cu ageni chimici, marcare radioactiv
sau fluorescent. n cazul marcrii radioactive fragmentele se identific cu ajutorul autoradiografiei care const
n suprapunerea gelului cu un film fotosensibil.

75
 SECVENIEREA ADN
Secvenierea const n determinarea succesiunii nucleotidelor (bazelor azotate) dintr-un anumit
segment al moleculei de ADN. Analiza secvenei bazelor azotate din structura ADN poate fi realizat
prin dou ci: 1) calea chimic (Maxam-Gilbert), n care se folosesc reaciile chimice de clivare a
ADN-ului n baze individuale, dar fiind o metod complicat i laborioas, n ultimii ani nu se mai
utilizeaz; 2) calea enzimatic (Sanger) n care ADN-ul este sintetizat in vitro pe baza matriei ADN
studiat, n aa fel nct reacia se termin specific n poziia care corespunde unei baze anumite. Pentru a
determina o secven de nucleotide pe una din cile menionate, ADN-ul este supus seriei de patru
reacii separate, fiecare reacie fiind specific pentru una din baze. Prin electroforez produii de reacie
vor migra n patru curse paralele, pe acelai gel. Urmrind band cu band, poate fi identificat ordinea
nucleotidelor n ADN.

Tehnica Sanger (dideoxi) utilizeaz sinteza enzimatic a unei catene, complementar cu o

matri clonat. n cadrul acestei proceduri sinteza este stopat prin ncorporarea unui di-
deoxinucleozid trifosfat - un analog al dezoxiribonucleotidelor. Dideoxinucleozidtrifosfaii conin n
poziia 3' grupa H, dar nu grupa OH care mpiedic polimerizarea nucleotidelor. Folosind patru
analogi dedeoxi diferii n timpul sintezei catenei noi de ADN, se poate de identificat fiecare nucleotid
normal din catena matri. Electroforeza fragmentelor obinute permite stabilirea ordinii nucleotidelor
n molecula de ADN. n ultimii ani se utilizeaz o metod automat de secveniere, bazat pe metoda
dideoxi.
n scopuri de diagnostic a purttorilor de gene normale sau mutante se compar rezultatele
secvenierii cu datele structurii primare normale a genei din bibliotecile de ADN. Spre regret, nu se
cunoate nc secvena tuturor genelor umane, de aceea n diagnostic se utilizeaz metode indirecte:
nlnuirea cu marcheri genetici apropiai (repetiii hipervariabile de ADN mini- i microsatelitic),
determinarea situsurilor de restricie caracteristice genei date, hibridarea cu sonde alel-specifice etc.

TEHNICA SOUTHERN-BLOT
Tehnica Southern-blot se bazeaz pe analiza specific a unor fragmente de ADN genic/genomic
obinute prin secionarea ADN-ului genomic cu una sau mai multe enzime de restricie. innd cont c
enzimele de restricie nu acioneaz la ntmplare asupra ADN-ului, dar cliveaz ADN-ul bicatenar
numai n anumite situsuri de restricie, la utilizarea unei enzime de restricie se obin fragmente de ADN
bicatenar cu o lungime diferit (numrul i lungimea fragmentelor de restricie depind de harta de
restricie pentru enzima utilizat).
76
 Lund n calcul polimorfismil ADN / polimorfismul genic determinat de mutaii punctiforme, ne
putem da seama c hrile de restricie la diferite persoane se pot deosebi. Diferenele dintre hrile de
restricie obinute de la doi indivizi este numit Polimorfismul Lungimii Fragmentelor de Restricie
(RFLP Restriction Fragment Lenght Polimorphism). Acest polimorfism poate fi folosit ca marcher
genetic n evaluarea genotipului.
Pentru analiza RFPLs a unor gene e
necesar s se cunoasc localizarea specific a
situsurilor de restricie. Aceast informaie e utila
pentru compararea genelor normale cu genele
mutante, pentru identificarea precoce a
purttorilor de gene mutante patologice.
Tehnica Southern-blot se bazeaz pe
principiul RFLPs i vine cu o soluie destul de
important pentru identificarea fragmentului de
interes din amestecul de mii de fragmente
diferite obinute prin digestia specific a
ADN-ului genomic. Identificarea secvenei int
se face pe baza hibridrii ADN-int cu o
sond complimentar, radioactiv dup
transferul fragmentelor de ADN de cercetat pe un
suport solid - tehnica Southern-blot (de la
numele inventatorului Edward Southern).

Tehnica Southern-blot const din urmtoarele etape:

(1) extragerea din celule a ADN-ului genomic cu greutate molecular mare;
(2) digestia enzimatic a ADN-ului cu diferite ER, fiecare producnd fragmente de lungime diferit;
(3) separarea fragmentelor de restricie prin electroforez n gel de agaroz;
(4) denaturarea fragmentelor bicatenare cu o soluie alcalin;
(5) transferul capilar al fragmentelor de ADN pe membrane filtre de nailon sau nitroceluloz;
(6) hibridarea cu sondele monocatenare radioactive;
(7) autoradiografia pentru vizualizarea hibrizilor ADN int - ADN sond i interpretarea rezultatelor.

77
 Extragerea ADN Restric?ia ADN genomic Electroforeza FR
din celule nucleate cu ER

Denaturarea ADN ?i Hibridare cu sonda Autoradiografia

transferul FR
pe membrane

Vizualizarea ?i interpretarea
rezultatelor

Etapele tehnicii Southern-blot

Datorit tehnicii Southern-blot se poate determina prezena sau lipsa unor situsuri de restricie
caracteristice genei analizate care se asociaz cu anumite mutaii:
- detectarea mutaiilor punctiforme ce implic situsurile de restricie (dispar sau apar noi situsuri de
restricie), care se evideniaz prin modificarea numrului i lungimii fragmentelor de restricie;
- detectarea mutaiilor prin deleii, duplicaii sau inserii ale unor fragmente polinucleotidice mai mari de
50-100p.b., care se evideniaz prin modificarea lungimii fragmentelor de restricie;
- acestea permit diagnosticul prenatal sau presimptomatic al mutaiilor patologice i depistarea
purttorilor heterozigoi de gene mutante.
Metoda Southern blot are i limite: (1) nu permite detectarea mutaiilor punctiforme sau
microdeleiilor la nivelul secvenelor de ADN dintre situsurile de restricie; (2) este laborioas,
complex i scump.
TEHNICA NORTHERN-BLOT
Metoda Northern-blot const n transferul moleculelor denaturate de ARN pe filtre de nailon sau
nitroceluloz, urmat de hibridarea cu sonde marcate. Aceast metod este similar tehnicii Southern-
blot cu deosebirea c ARNm extras i purificat nu este supus scindrii cu enzime, iar electroforeza
decurge n condiii de denaturare. Tehnica Northern-blot permite identificarea transcripilor genelor
analizate, cantitii de ARNm, stabilirea lungimii lor.

TEHNICA WESTERN-BLOT
Aceast metod const n identificarea unei proteine specifice din amestecul de proteine celulare.
Pentru aceasta, proteinele sunt separate prin electroforez n condiii de denaturare. Proteinele separate dup
greutatea molecular sunt transferate pe filtre de nailon sau nitroceluloz i supuse tratrii cu anticorpi specifici
marcai radioactiv sau fluorescent. Prin aceast metod se poate identifica prezena/lipsa proteinei,
dimensiunile ei, rata de expresie a genei.

78
 TEHNICA PCR N ANALIZA GENELOR
Tehnica PCR poate fi utilizat pentru multiplicarea selectiv a unei secvene de ADN genic. Ca
rezultat, se obin populaii omogene de fragmente care pot fi utilizate n studiile de genetic molecular
sau n diagnostic.

Extragerea ADN Amplificarea ADN-int

Pregtirea componentelor
pentru PCR

Vizualizarea Autoradiografia i interpretarea

Electroforeza
produilor PCR rezultatelor
produilor PCR

Etapele analizei PCR

Pentru a realiza amplificarea unei secvene este necesar cunoaterea structurii genei normale
sau mutante i sinteza primerilor specifici complementari capetelor fragmentului de interes. Primerii
reprezint secvene oligonucleotidice monocatenare de 20-30 baze care sunt obinute prin sintez
artificial. PCR se bazeaz pe hibridarea ADN int - primer i replicarea semiconservativ a ADN.
Avantajele tehnicii PCR sunt urmtoarele: necesitatea cantitilor mici de ADN, rapiditatea ei
(n cteva ore se obin milioane copii de ADN), iar specificitatea primerilor permite amplificarea
selectiv a ADN i, de menionat c, produsele de amplificare pot fi utilizate n calitate de sonde pentru
hibridri n alte tehnici.
Aplicaiile practice ale tehnicii PCR:
- detectarea mutaiilor cunoscute la bolnavi i purttori, n diagnosticul prenatal i presimptomatic al
bolilor ereditare;
- determinarea genelor de predispoziie la bolile comune (coronaropatii, boala hipertonic, tulburri
psihice etc.);
- diagnosticul precoce i evaluarea pronosticului bolilor canceroase;
- determinarea prenatal a sexului;
- identificarea agenilor patogeni (virui, bacterii);
- dactiloscopia genomic n identificarea persoanelor, analiza filiaiei (paternitate, maternitate);
- tipizarea HLA.

79
Utilizarea tehnicii PCR pentru identificarea mutaiilor Utilizarea tehnicii PCR pentru identificarea deleiilor
punctiforme cu primeri specifici pentru gena normal

Hibridarea in situ

Hibridarea in situ reprezint o tehnic molecular, n care o sond specific marcat poate
identifica direct pe preparatele celulare:
(1) o gen pe un anumit cromozom sau fragment de cromozom;
(2) un ARNm ntr-o celul particular sau esut;
(3) numrul moleculelor de ARNm n dependen de perioada ontogenetic sau tip tisular;
(4) ADN viral;
(5) deleiile cromozomiale submicroscopice;
(6) genele responsabile de producerea cancerului, localizarea i nivelul lor de expresie.
n ultimii ani se utilizeaz metoda FISH (Fluorescence In Situ Hibridization) care utilizeaz
sonde fluorescent marcate. Metoda FISH este simpl, poate fi aplicat pe preparate celulare arhivate,
este rapid, nu modific morfologia celulelor.

Tehnica FISH

80
 CURS 9
CARACTERE EREDITARE
RELAIA GENOTIP - FENOTIP

Definirea biologic a unui individ este determinat de ansamblul unor caractere morfologice,
fiziologice, biochimice, psihice i comportamentale fenotipul, controlate de aciunea, n diferite proporii,
a factorilor ereditari i a celor de mediu. Sistemul de gene din setul diploid de cromozomi al unui individ,
care determin formarea unui anumit fenotip se numete genotip. Caracterele, la formarea crora genotipul
particip ntr-o proporie mai mare de 50% poart denumirea de caractere ereditare. Caracterele ereditare
pot avea determinism monogenic sau poligenic (multifactorial).

CARACTERISTICA GENELOR ALELE I NEALELE

Genele alele sunt localizare n loci identici pe cromozomi omologi i controleaz acelai
caracter sau forme alternative ale aceluiai caracter. Genele alele se pot prezenta n mai multe forme
moleculare diferite polialelism, dar n genotip, la o persoan, sunt prezente numai dou alele o
pereche (excepie - pe cromozomii X i Y la brbai este prezent doar o alel pentru fiecare gen).
Fiecare individ poart circa 30 mii perechi de
gene alele, dup unele este homozigot - purttor de
gene alele identice, dup altele este heterozigot -
purttor de gene alele diferite i hemizigot dup
genele nlnuite cu cromozomul X la brbai. n cazul
heterozigoiei se manifest alela cu o activitate mai
mare (gena dominant) fa de a doua (gena
recesiv). Astfel sunt alele:
- cu activitate moderat normomorfe;
- cu activitate mrit hipermorfe;
- cu activitate mic hipomorfe;
- neactive amorfe;
- cu funcie nou neomorfe.

Manifestarea fenotipic a unei alele depinde i

de alte gene nealele i de factorii de mediu.

n timpul transmiterii: n meioz, genele alele

se separ n gamei diferii segreg, iar la fecundare se combin ntmpltor formnd diferite
genotipuri, determinnd segregarea caracterelor ce reprezint baza legilor ereditii mendeliene. Alelele
unui individ una este de origine matern i alta de origine patern. Individul homozigot produce
gamei identici dup alela dat, iar individul heterozigot produce gamei diferii 50% vor conine o
alel i 50% vor conine cealalt alel.

Gene nealele sunt localizate n loci diferii ai cromozomilor i, de regul, controleaz caractere
diferite sau coopereaz pentru formarea unui caracter complex. Se manifest fenotipic independent una
fa de alta sau interacioneaz determinate de:
o efectul poziiei genelor dintr-un haplotip;
o epistazie;
o aciunea complimentar;
o poligenia aditiv.
Genele nealele se transmit:
- n bloc nlnuit, dac se afl pe acelai cromozom i formeaz grup de nlnuire, haplotipuri;
- independent, dac se afl pe cromozomi diferii.

81
 Combinarea independent a genelor nealele Transmiterea nlnuit a genelor
din cromozomi neomologi localizate ntr-un cromozom

CARACTERE MONOGENICE MENDELIENE

Caracterele monogenice sunt caracterele controlate de o singur pereche de gene alele (conform
dogmei genetice: o pereche de gene un caracter). Exemple de caractere monogeneice normale pot fi:
- grupele de antigene eritrocitare (AB0, Rh, MN, Xg, etc.);
- grupele serice (haptoglobine, transferine, etc.);
- grupele enzimatice;
- antigenii tisulari (HLA).
Caracterele monogenice reprezint produsul interaciunii a dou alele, ntre care pot exista relaii de
dominan / recesivitate sau codominan; se transmit mendelian i respect legile monohibridrii.

Exprimarea fenotipic n populaie a caracterelor monogenice este de regul bimodal (de ex., 75%
din populaie are Rh+, iar 25% - Rh-). Unele caractere monogenice prezint mai multe forme alternative
polimorfisme determinate de existena alelelor multiple i/sau interaciunea cu ali factori ereditari sau
neereditari (de ex., mai multe variante de grupe sangvine dup sistemul AB0 I [0], II [A1 sau A2], III [B],
IV [A1B sau A2B]).
Caracterele monogenice pot fi att normale (de ex., grupele sangune, grupele serice, antigenii
tisulari, etc.), ct i patologice (de ex., polidactilia, albinismul, fenilcetonuria, hemofilia, daltonismul, unele
forme ale displaziei smalului dentar, etc.).

82
 DETERMINISMUL UNOR CARACTERE EREDITARE NORMALE

Localizare pe Relaiile dintre

Caracterul Alele Genotipuri Fenotipuri
cromozom alele
Dominan / DD, Dd Rh+
Factorul Rhesus D, d 1
recesivitate dd Rh-
Dominan / GG, Gg Gusttor
Gusttor G, g ?
recesivitate gg Negusttor
Dominan / SeSe, Sese Secretor
Secretor Se, se 19
recesivitate sese Nesecretor
Dominan / 00 0 (I)
recesivitate A1A1, A1A2, A10 A1 (II)
Grupe sangvine A2A2, A20 A2 (II)
0, A1, A2, B 9 BB, B0 B (III)
AB0
A1B A1B (IV)
Codominan
A2B A2B (IV)
MM M
Grupe sangvine
M, N 4 Codominan MN MN
MN
NN N
Hp1Hp1 Hp1-1
Haptoglobine Hp1, Hp2 16 Codominan Hp1Hp2 Hp1-2
Hp2Hp2 Hp2-2
Xg(a+)Xg(a+),
Grupe sangvine Xg(a+), Dominan / Xg+
X Xg(a+)Xg(a-), Xg(a+)Y
Xg Xg(a-) recesivitate
Xg(a-)Xg(a-), Xg(a-)Y Xg-

Unele gene au aciune unic (o gen un caracter), altele au aciune multipl, pleiotrop (o

gen controleaz formarea mai multor caractere).

n dependen de capacitatea de manifestare fenotipic caracterele pot fi: dominante,
intermediare i recesive. Gena ce se manifest att la homozigoi ct i la heterozigoi se numete alel
dominant (A), iar cea care se manifest doar n stare homozigot alel recesiv (a). Fiecare individ
este heterozigot pentru unii loci i este homozigot pentru alii. ntre genele alele pot exista mai multe
tipuri de relaii interaciuni alelice:
- dominare complet la heterozigoi se manifest alela dominant (de ex., indivizii DD sau Dd
prezint Rh+, iar dd prezint Rh-);
- dominare incomplet la heterozigoi se formeaz un caracter intermediar (de ex., HbAHbA
hemoglobin normal 100% eritrocite normale; HbAHbS anemie form uoar, 50% eritrocite
normale i 50% eritrocite n form de secer; HbSHbS anemie form letal, 100% eritrocite n
form de secer);
- codominare la heterozigoi se manifest ambele alele (de ex., grupa sangvin IV A1B sau A2B).
Manifestarea fenotipic a caracterelor monogenice poate fi influenat i de gene nealele din
acelai grup de nlnuire sau din grupuri diferite interaciuni nealelice:

83
- epistazia fenomenul cnd o gen (epistatic) influeneaz activitatea unei alte gene nealele
(hipostatic). De ex., gena h n stare homozigot blocheaz expresia genelor sistemului AB0
fenotipul Bombay:
o persoanele cu genotip HHBO sau HhBO prezint antigeni B pe eritrocite, iar
o persoanele cu genotip hhBO nu prezint antigeni B pe eritrocite.
- aciunea complementar a genelor pentru formarea unui caracter coopereaz diferite gene prin
aciunea concomitent a produilor lor (de ex., hemoglobina A este rezultatul expresiei genelor -
globinei de pe cromozomul 16 i -globinei de pe cromozomul 11);
- efectul poziiei - activitatea unei gene este influenat de alte gene sau secvene nvecinate;
modificarea secvenelor nvecinate pot duce la inhibarea sau activarea defectiv a genei.
Genotipul se afl sub influena diferitor factori genetici sau negenetici, interni sau externi ce pot
influena capacitatea de manifestare fenotipic a genei:
- penetrana reprezint frecvena cu care o gen se manifest fenotipic la indivizii heterozigoi;
penetrana poate fi complet (toi heterozigoii prezint caracterul dominant) sau incomplet (doar o
parte dintre heterozigoi prezint caracterul dominant);
- expresivitatea reprezint gradul sau severitatea de manifestare fenotipic a unei gene (de ex.,
forme complete sau incomplete ale unui sindrom, forme uoare sau forme grave ale unei patologii).

CARACTERE MONOGENICE NON-MENDELIENE

Majoritatea caracterelor monogenice normale sau anormale se transmit dup regulile lui Mendel
avnd o manifestare distinct n dependen de genotipul persoanei, prezentnd i unele excepii
determinate de interaciuni cu alte gene sau cu factorii de mediu penetrana incomplet sau
expresivitatea variabil. Dar exist caractere ce prezint abateri de la regulile mendeliene care sunt
determinate de fenomene genetice neobinuite:
- instsbilitatea genelor;
- amrentarea genomic;
- disomia uniparental;
- mozaicizmul,
- ereditatea mitocondrial.
Penetrana reprezint frecvena cu care o gen se manifest fenotipic la indivizii heterozigoi.
Penetrana poate fi complet (toi heterozigoii prezint caracterul dominant) sau incomplet (doar o
parte dintre heterozigoi prezint caracterul dominant). Cauzele non-penetranei unei gene pot fi
interaciunile genelor nealele de tipul epistaziei, efectului poziiei sau pot fi factorii de mediu.

Un exemplu de non-penetran a genei B, fenotip Bombay, n

cazul epistaziei recesive ntre genele H i ABO.

Expresivitatea reprezint gradul sau severitatea de manifestare fenotipic a unei gene la diferii
indivizi cu acelai genotip. Cauzele expresivitii variabile pot fi interaciunile genice sau factorii de
mediu i se manifest prin forme complete sau incomplete ale unei patologii, forme uoare sau forme
grave ale unei patologii, etc..

84
 Expresivitatea variabil a genei polidactiliei la indivizii
heterozigoi: I-1 are ase degete la piciorul drept, II-4 are cte
ase degete i la mni i la picioare, II-5 numai la picioare, III-4
la piciorul stng, III-5 la mna i piciorul stng, III-6 la
ambele mni i III-8 are ase degete numai la mna dreapt.

Instabilitatea genelor n irul generaiilor este determinat de mutaii dinamice. Ele sunt
reprezentate de creterea numrului de copii ale unor repetri trinucleotidice situate n proximitatea sau
chiar n interiorul genelor structurale, cu ocazia diviziunilor pe care le realizeaz celula purttoare.
Exist variaii ale numrului de repetri trinucleotidice:
- polimorfisme ADN benigne;
- premutaia secvena de ADN devine instabil, dar nu determin un fenotip patologic;
- mutaia complet - prin expansiunea repetrilor determinnd fenotip patologic.

Purttorii premutaiilor sunt fenotipic normali. Expansiunea repetrilor are loc n gametogenez.
Astfel unii din gameii purttorilor sntoi vor conine mutaia complet, care la descendeni va
produce un fenotip patologic.
n gametogeneza ultimilor, din cauza instabilitii acestor repetri, vor aprea expansiuni adiionale,
care la urmtoarea generaie va produce un fenotip patologic mai grav (=fenomenul de anticipaie).

Mutaie
complet

Amprentarea genomic este un proces genetic implicat n reglarea activitii genelor, n special
prenatal, controlnd dozajul genetic prin inactivarea selectiv a genelor de origine matern sau patern.

85
Mecanismele amprentrii gnelor nu sunt pe deplin elucidate. Unul din acestea ar putea fi determinat de
metilarea ADN proces asociat cu inactivarea genei.
De exemplu, gena Igf-2 ce controleaz sinteza
unuia dintre factorii de cretere poate fi implicat n
procesul de cretere (talia). Mutaia acestei gene este
implicat n apariia nanismului, n cazul dac este
motenit pe linie patern. Astfel indivizii heterozigoi
(Na) pot avea fenotip normal dac gena mutant (a)
este de origine matern sau sunt cu hipostatur (pitici)
dac gena (a) are origine patern. Duplicaia genei
normale (N NNa) poate cauza supracreterea dac
este motenit pe linie patern sau prezint fenotip
normal dac motenete pe linie matern.
Disomia uniparental este fenomenul, cnd
zigotul conine doi cromozomi omologi motenii de la
acelai printe. Ea apare ca rezultat al nedisjunciilor cromozomilor n meioza matern sau patern,
urmat de eliminarea postzigotic a cromozomului supranumerar de cealalt origine. O alt cauz a
apariiei disomiei uniparenatale ar putea fi translocaia robertsonian. Astfel, persoanele cu disomie
uniparental motenesc de la un singur printe alelele pentru anumite caractere, nlnuite cu
cromozomul disomic. Dar, n dezvoltare exist o contribuie difereniat a informaiei din cromozomii
materni i paterni (dozaj genetic). Totodat prezena ambelor genomuri parentale este esenial pentru
dezvoltarea feilor viabili. Necesitatea existenei materialului genetic a ambilor prini a fost
demonstrat prin consecinele disomiei uniparentale. Sindromul Prader Willi i sindromul Angelman
sunt determinate de amprenarea genei Snrpn cu localizare n cromozomul 15q11-13. n cazul
sindromului Prader Willi s-a identificat disomia uniparental matern a cromozomului 15, care se
manifest fenotipic prin retard mintal moderat, obezitate i hipostatur. Sindromul Angelman rezult
prin disomie uniparental patern, manifestndu-se fenotipic prin retard mintal sever i ataxie. n
disomia uniparental matern a cromozomului 7 au fost depistat retard de cretere.

CARACTERE EREDITARE NORMALE POLIGENICE

Caracterele poligenice sunt controlate de mai multe gene nealele, care acioneaz independent unele
de altele (nu exist relaii de dominan / recesivitate sau epistazie), care, de regul, au efecte cantitative
mici aditive. Caracterul poligenic prezint o
distribuie continu n populaie (distribuie
normal gaussian) i nu exist clase
fenotipice distincte, specifice transmiterii
monogenice. Fiecare individ din populaie
difer, uneori aproape imperceptibil, de toi
ceilali. Expresia caracterelor poligenice
este influenat de mediu, de aceea pot fi
numite caractere multifactoriale. Exemple
de caractere poligenice normale pot fi
menionate: distribuia pigmentaiei pielii,
talia, masa corpului, inteligena,
Modelul de motenire a pigmentaiei tegumentelor la om
pe exemplul a trei perechi de gene dermatoglifele, etc.

86
 Culoarea pielii depinde de mai muli factori: grosimea i
transparena epidermei; starea circulaiei la nivelul vaselor
subepidermice; cantitatea de pigment melanic i distribuia acestuia
(cel mai important). Cantitatea de melanin din piele este
determinat de 2-6 perechi de gene. Modelul de motenire a
pigmentaiei tegumentelor este reprezentat n figurile alturate.
Fiecare alel dominant (A, B, C) determin sinteza unei anumite
cantiti de melanin, iar alele recesive (a, b, c) sunt inactive.
Cantitatea de melanin, i ca rezultat intensitatea pigmentaiei,
depinde de sumarea dozelor genelor dominante, fenomen numit
poligenie aditiv (cumulativ).

Distribuia normal (Gaussian) n populaie

pigmentaia pilelii

VALOAREA CUNOATERII CARACTERELOR EREDITARE NORMALE

Din punct de vedere teoretic, cunoaterea ereditii caracterelor normale la om permite:
- demonstrarea valabilitii legilor lui Mendel;
- studiul funciei genice;
- evidenierea unor fenomene genetice cunoscute la alte specii (himerele, dubla fecundare, recombinarea
genetic, nedisjuncia meiotic);
- investigarea localizrii genelor pe cromozomi i stabilirea "hrilor genetice" (utilizarea caracterelor
normale ca marcheri i analiza fenomenelor de nlnuire genic ntre genele normale care le determin
i alte gene, normale sau anormale);
- elucidarea unor aspecte de genetic a populaiilor.
Din punct de vedere practic, cunoaterea ereditii caracterelor normale la om permite:
- elaborarea testelor de identificare a persoanei (fiecare individ are o combinaie specific, unic, de
caractere ereditare normale - ex. dermatoglife unice, combinaie HLA specific, etc.);
- stabilirea compatibilitatii ntre donator i recipient (grupe sanguine - pentru transfuzii; grupe tisulare,
sanguine - pentru transplanturi);
- expertiza filiaiei i paternitii, diagnosticul gemenilor monozigoi (concordan 100% pentru
caracterele monogenice, 95% pentru dermatoglife) i dizigoi;
- elaborarea testelor de diagnostic n diferite boli:
diagnosticul unor afeciuni prin studiul nlnuirii genelor anormale cu anumite gene normale
(ex. elipsocitoza - locus nlnuit cu locusul Rh);
relaii ntre sistemul HLA i predispoziia sau rezistena fa de anumite boli;
prezena unor modificri ale dermatoglifelor n unele anomalii cromozomice (de ex. sindromul
Down - pliu palmar transvers unic, triradius axial t' sau t", exces de bucle cubitale).

87
 CURS 10

STUDIUL CARACTERELOR EREDITARE

Caracterele ereditare normale sau anormale (bolile genetice) se caracterizeaz prin determinism
monogenic, poligenic sau multifactorial. De regul, determinismul genetic al caracterelor se stabilete
odat cu formarea genotipului individului la fecundare. Astfel, caracterele ereditare au un ir de
particulariti prin care se deosebesc de cele neereditare:
- sunt produse prenatal;
- au manifestare congenital;
- se transmit genealogic;
- sunt familiale;
- sunt concordante la gemenii monozigoi;
- se asociaz cu marcheri genetici;
- au o distribuie populaional specific.
De fapt aceste particulariti luate fiecare n parte, nu au o valoare absolut deoarece unele dintre ele se pot
ntlni i la caracterele i bolile neereditare dar, atunci cnd ele se asociaz mai multe deodat la un
caracter, semnific, de obicei, natura ereditar.

PARTICULARITILE CARACTERELOR EREDITARE

1. Determinismul genetic
Fiecare caracter ereditar este determinat de interaciunea genotip factorii de mediu. Gena sau
genele motenite determin un caracter fenotipic prin:
- sinteza unor proteine specifice (caracter elementar);
- realizarea funciei specifice a proteinei la nivel de celul i/sau esut;
- manifestarea unui anumit caracter (normal sau patologic) la nivel de organism caracter
fenotipic.
2. Determinismul prenatal
Constituia genetic a fiecrui individ se stabilete n momentul formrii zigotului, iar fenotipul se
formeaz prin expresia difereniat a genelor motenite (caractere de specie, caractere normale individuale,
anomalii). Caracterele ereditare sunt determinate pn la natere, dei se pot manifesta la diferite etape ale
ontogenezei. Dar, n perioada prenatal, organogeneza poate fi influenat i de factorii mediului,
producnd anomalii de dezvoltare neereditare (de ex., fenocopiile).
3. Manifestarea congenital
Manifestarea congenital reprezint prezena caracterului sau a bolii nc de la natere. Majoritatea
caracterelor i bolilor ereditare sunt prezente la natere, dar exist i excepii, cnd ele se manifest mai
trziu la o anumit vrst, mai precoce sau mai tardiv (de ex., hipodonia, miopatia, coreea Huntington
etc.). Dar, exist i afeciuni neereditare cu manifestare congenital (de ex., fetopatia rubeolic, fetopatia
alcoolic, boala constriciilor amniotice).

4. Transmiterea genealogic
Transmiterea genealogic reprezint motenirea unui caracter de la prini i transmiterea lui la
descendeni. Este cunoscut c caracterele i bolile ereditare se transmit din generaie n generaie. Dar
exist i unele care nu se transmit:
- datorit decesului precoce a persoanelor afectate (bolnavii cu hemoglobinopatii severe);
- datorit sterilitii persoanelor afectate (de ex., sindromul Morris - testicul feminizant);
- apariia unor mutaii noi care ar putea s se transmit generaiilor urmtoare;
- boli recesive rare.
Exist i boli neereditare care se pot transmite de la o generaie la alta (de ex., transmiterea mam - ft a
sifilisului, SIDA etc.).
Analiza transmiterii genealogice este un lucru esenial n stabilirea naturii ereditare a unui caracter
sau a unei boli deoarece transmiterea ereditar se face dup nite reguli stricte, matematice (ex: legile lui
88
Mendel), n timp ce transmiterea neereditar are un caracter aleator, n funcie de condiiile momentane de
mediu.
5. Distribuia familial
Distribuia familial reprezint frecvena crescut a anomaliei / caracterului la membrii nrudii ai
aceleiai familii, comparativ cu frecvena din populaia general (concentrare familial a caracterului).
Majoritatea bolilor ereditare prezint o net distribuie familial, dei exist i boli ereditare cu apariie
sporadic (de ex., anomaliile cromozomice care apar sporadic deoarece de obicei determin anomalii de
reproducere). Exist i boli neereditare care pot prezenta distribuie familial atunci cnd membrii familiei
sufer influena unor condiii similare de mediu (de ex., gua endemic, tuberculoza, intoxicaiile, unele
infecii etc.).

6. Concordana caracterului la gemenii monozigoi

Caracterele monogenice, pur ereditare sunt totdeauna identice la gemenii monozigoi (100 %
concordan), iar cele neereditare sau multifactoriale pot fi discordante. Cnd concordana unui caracter
este regula, iar discordana excepie, se vorbete despre caractere determinate parial ereditar (caractere
multifactoriale). In cazul caracterelor ecologice, concordana este egal cu discordana la gemenii
monozigoi.

7. Frecvena diferit n populaii diferite

Anumite caractere ereditare prezint frecvene diferite n populaii genetic diferite. Aceasta se
explic prin concentrarea anumitor gene ntr-o anumit regiune. De exemplu:
- deficiena n G6PD (glucozo-6-fosfat-dehidrogenaza) sau unele hemoglobinopatii (de ex.,
sicklemia) sunt mai frecvente n zonele cu malarie, deoarece heterozigoii pentru aceste afeciuni
sunt rezisteni la plasmodiul malariei;
- n izolatele umane (geografice, etnice sau religioase), prin cstorii consangvine se creeaz un
fond crescut de alele comune (de ex., n majoritatea populaiilor din Europa frecvena albinismului
este 1:20000, iar ntr-un izolat din regiunea Bihorului, Romnia este de 1:100).

8. Prezena anomaliilor cromozomice

Toate afeciunile care se nsoesc de anomalii cromozomice de numr sau de structur (vizibile la
analiza cariotipului) sunt anomalii genetice (ereditare). Dar nu toate bolile ereditare se nsoesc de anomalii
cromozomice (de ex., bolile ereditare produse prin mutaii genice sau poligenice se nsoesc de un cariotip
normal). Cariotipul normal nu exclude deci existena unui caracter ereditar anormal la subiectul cercetat.

9. Asocierea cu marcheri genetici

Unele caractere fenotipice anormale se pot asocia cu marcheri genetici specifici uor detectabili, de
obicei caracteristici pentru o familie, la care se refer:
- o anumit secven ADN, reprezentnd o gen normal, localizat n vecintatea genei patologice;
- un microsatelit aflat n vecintatea sau interiorul unei gene patologice;
- un situs de restricie.
Asocierea se poate explica prin urmtoarele fenomene:
- transmiterea nlnuit a genelor ce formeaz haplotip (de ex., asocierea Rh - eliptocitoz);
- o gen favorizeaz apariia unei anumite tulburri (ex. asocierea HLA-B27 - spondilit
anchilozant).

Numai asocierea criteriilor prezentate permite stabilirea naturii ereditare a unui caracter. Criteriile
luate separat, nu au valoare practic.

89
 METODE DE STUDIU UTILIZATE N GENETICA UMAN
n genetica uman, pentru a stabili natura ereditar a unui caracter se utilizeaz mai multe metode
ce au ca int urmtoarele:
- analiza materialului genetic cu depistarea direct sau indirect a mutaiilor, analiza marcherilor
genetici (metode molecular-genetice, metode citogenetice);
- analiza produsului genic primar (proteina), depistarea defectelor de metabolism (metode
biochimice);
- studiul transmiterii ereditare a caracterelor normale i patologice n familie (metoda
genealogic);
- stabilirea ponderii factorilor genetici i factorilor de mediu n geneza unui caracter normal sau
patologic (metoda gemenilor);
- stabilirea structurii genetice a populaiei (metoda populaional-statistic).

METODE MOLECULAR GENETICE

Metodele molecular-genetice sunt bazate pe tehnologia ADN recombinant i include mai

multe tehnici de studiu a secvenei nucleotidelor n ADN i expresiei genice la nivel de ARN. Acestea
au ca scop depistarea genelor normale sau mutante responsabile de un anumit caracter, modificrile
genice asociate cu un anumit fenotip, unele particulariti de organizare a ADN-ului asociate cu anumite
anomalii marcheri genetici (minisatelii, situsuri de restricie, metilarea ADN-lui etc.), analiza
expresiei genelor (expresia specific de esut, ntr-o anumit perioad a ontogenezei, rata expresiei). n
dependen de scopul studiului se pot folosi mai multe metode bazate pe:
- secvenierea ADN;
- tehnica PCR;
- tehnica Southern-blot;
- tehnica Northern-blot, etc.
Analiza acizilor nucleici este util n:
- depistarea purttorilor de mutaii genice;
- diagnosticul prenatal sau postnatal a unor boli genice;
- depistarea genelor de predispoziie la boal;
- analiza filiaiei (maternitate / paternitate);
- stabilirea identitii biologice (criminologie);
- depistarea ADN-ului (ARN-ului) strin n diagnosticul infeciilor.

n figura din stnga se prezint:

A. o familie cu dou generaii, unde ambii prini sunt sntoi
i au 5 copii dintre care doi prezint semnele clinice ale
fenilcetonuriei (afeciune autozomal rcesiv);

B. rezultatele electroforezei produilor PCR a tuturor

membrilor familiei respective; I-1, I-2, II-3, II-5 sunt
heterozigoi (Na), II-2 i II-4 sunt homozigoi dup alela
recesiv patologic (aa), iar II-1 este homozigot dominant dup
alela normal (NN).

90
 METODE CITOGENETICE

Metodele citogenetice includ diverse tehnici de analiz microscopic a materialului geneic la

nivel de celul:
- analiza cromozomilor metafazici i prometafazici (cariotiparea);
- teste de citogenetic molecular pe cromozomi interfazci (FISH, mFISH, SKY);
- testul Barr pentru analiza cromatinei sexuale X;
- testul F pentru analiza cromatinei sexuale Y.
Cariotiparea reprezint analiza setului de cromozomi din celulele somatice n diviziune pentru
aprecierea numrului, formei i mrimii cromozomilor, utiliznd diferite tehnici de colorare /
vizualizare. Astfel, analiza plcilor metafazice sau prometafazice permite depistarea diferitor anomalii
cromozomice de numr sau de structur implicate n sindroame plurimalformative, neoplazii, stri
intersexuale.
Analiza cromozomilor interfazici, bazat pe hibridizarea in situ permite stabilirea unor
anomalii cromozomice submicroscopice (microdeleii sau microduplicaii) sau stabilirea poziiei unor
gene n cromozomi.
Testul cromatinei sexuale permite diagnosticul sindroamelor cromozomiale cu implicarea
heterozomilor X sau Y i stabilirea sexului genetic. Cromatina sexual X (corpusculul Barr) poate fi
uor vizualizat pe preparate citologice n interfaz (numrul corpusculilor Barr + un cromozom X =
numrul cromozomilor X n celula analizat).

METODE BIOCHIMICE
Spectrul de metode biochimice presupune analiza produsului primar al expresiei genice
proteina, precum i a metaboliilor controlai de aceast protein. Sunt utilizate metode calitative i
cantitative specifice unui anumit tip de metabolii. Aceste tehnici sunt indicate n:
- diagnosticul unor boli monogenice enzimopatii;
- diagnosticul unor boli multifactoriale;
- stabilirea unei predispoziii la boal.
De exemplu, prin analiza electroforetic a proteinelor serice se poate stabili polimorfismul individual i,
indirect, constituia genetic a individului (genotip homozigot sau heterozigot).

METODA GENEALOGIC
Una dintre particularitile caracterelor ereditare este concentrarea lor familial i transmiterea
de la o generaie la alta. Metoda genealogic presupune analiza familial, identificarea persoanelor cu
un anumit caracter i urmrirea acestuia pe parcursul mai multor generaii. Aceasta este important
pentru stabilirea tipului de transmitere a caracterului i calcularea probabilitii de reapariie a
caracterului ereditar la descendenii unui cuplu.
Studiul genealogic se realizeaz n mai multe etape:
- anamneza familial;
- analiza clinic i paraclinic a membrilor familiei;
- ntocmirea arborelui genealogic;
- analiza tipului de transmitere a caracterului;
- stabilirea genotipurilor persoanelor din familia studiat i calcularea probabilitii de
manifestare a unui fenotip normal sau patologic;
- sfat genetic.
Anamneza familial este primul pas n obinerea informaiilor despre prezena unui anumit
caracter ntr-o familie. De regul, informaia este obinut de la proband (cazul princeps persoana ce
se adreseaz dup sfat genetic). Datele despre structura familiei sunt nregistrate n fie speciale de
consult genetic i sunt completate pe baza informaiilor obinute din analiza familial.

91
 Analiza familial include chestionarea rudelor probandului (cel puin 2-3 generaii), analiza
clinic i paraclinic a probandului i a rudelor afectate i sntoase, analiza fielor medicale personale,
efectuarea testelor genetice (n dependen de caz cariotip, cromatin sexual, analiza ADN, studiul
nlnuirii cu marcheri genetici). Toate aceste informaii pe de o parte completeaz istoricul familiei, pe
de alt parte concretizeaz tipul anomaliei sau afeciunii (diagnostic clinic precis). Fiele de consult
genetic includ urmtoarele date:
(a) dac probandul este copil evoluia sarcinii, boli acute sau cronice ale mamei i medicamente
administrate n timpul sarcinii, expunerea la ageni teratogeni sau mutageni; vrsta prinilor; prezena
consangvinitii; naterea la termen sau prematur, durata travaliului, natere natural sau prin manevre
obstetricale; date despre nou-nscut greutatea i talia la natere, scor Apgar; evoluia postnatal.
(b) dac probandul este adult evoluia pubertii, funcia reproductiv (normal sau perturbat:
sterilitate, avorturi spontane, nou-nscui mori sau nou-nscui vii malformai); locul de munc,
expunere la noxe.
Analiza familial este util pentru diferenierea unei anomalii congenitale neereditare de o boal
ereditar propriu-zis.
ntocmirea arborelui genealogic. Arborele genealogic este reprezentarea grafic, cu ajutorul
unor semne convenionale, a rezultatelor anchetei familiale i servete la stabilirea tipului de
transmitere n cazul n care acesta este ereditar.
Stabilirea tipului de transmitere a caracterului n cazul cnd acesta este ereditar, se
efectueaz n conformitate cu criteriile de recunoatere (prezena caracterului n fiecare generaie sau
discontinuitate n transmitere; raportul prezenei caracterului la cele dou sexe). Transmiterea poate fi
monogenic sau poligenic, autozomal, sau lincat cu cromozomii sexuali, determinat de alele
dominante sau recesive. n dependen de tipul de transmitere, se stabilete genotipul persoanelor
sntoase i afectate, se calculeaz riscul de recuren (probabilitatea apariiei anomaliei analizate la
descendeni).
Rezultatele analizei genealogice a familiei stau la baza unui consult genetic adecvat pentru:
- informarea obiectiv a familiei;
- planificarea familiei;
- opiuni pentru diagnosticul prenatal n scop de prevenire a naterii copiilor cu anomalii;
- prevenirea manifestrii unor complicaii n cazul bolilor genetice cu manifestare la adult.

METODA GEMENILOR
Prin analiza comparativ a unui caracter la gemenii monozigoi i gemenii dizigoi se poate
urmri o concordan sau discordan care poate fi asociat cu ponderea factorilor genetici i de mediu
n manifestarea unui fenotip.
Gemenii monozigoi (GMZ) provin din acelai zigot i ca urmare sunt genetic identici. De
regul GMZ, avnd genotip identic, au caractere ereditare asemntoare (concordan) i difer doar
dup caracterele influenate de mediu (discordan).
Gemenii dizigoi (GDZ) sunt gemeni provenii din fecundarea a dou ovule diferite de ctre doi
spermatozoizi, ei difer genetic ca oricare membru al unei fratrii fa de ceilali.
Pentru stabilirea cotei factorilor genetici i celor de mediu n formarea unui caracter, se
calculeaz coeficientul de ereditate (H):
ConcordanaGMZ ConcordanaGDZ
H x100%
100% ConcordanaGDZ
Concordana GMZ sau GDZ reprezint procentul de asemnare dup un anumit caracter la mai
multe perechi de gemeni (valori statistice veridice). Cu ct raportul este mai apropiat valoric de 100%,
participarea factorilor genetici n determinismul caracterului este mai mare. Coeficientul are valoarea 100%
pentru caracterele pur ereditare (concordana la gemenii monozigoi este de 100%).
La valorile H cuprinse ntre 100-70% factorul ereditar are rol major, preponderent; ntre 70-40%
caracterul este format sub influena mediului dar cu predispoziie genetic; mai puin de 40% - caracterul este
ecologic.

92
 n prezent metoda gemenilor se utilizeaz pentru stabilirea rolului factorilor genetici i de mediu n
longevitate, manifestarea talentului, sensibilitatea la medicamente, etc.

Caracterul Concordana la Concordana la Tipul

H (%)
analizat GMZ (%) GDZ (%) caracterului
Sexul 100 58 100 Genetic
ABO 100 65 100 Genetic
Dermatoglife 95 60 88 Genetic
Cu predispoziie
Reumatism 60 34 40
genetic
Diabet zaharat 30 16 17 Ecologic

METODA POPULAIONAL-STATISTIC

Populaia uman reprezint totalitatea indivizilor ce locuiesc pe un anumit teritoriu, ntre care are
loc schimb permanent de informaie ereditar. Structura genetic a unei populaii se poate deosebi de alta
datorit existenei unui genofond particular determinat de suma genotipurilor indivizilor din aceast
populaie. S-a stabilit c genofondul unei populaii este relativ constant de-a lungul mai multor generaii.
Stabilitatea genetic este valabil pentru populaia ideal care se caracterizeaz prin urmtoarele
particulariti:
- este numeroas (peste 1,5 mii indivizi);
- este panmictic (cstorii la ntmplare);
- lipsa fluxului interpopulaional de gene (lipsa migraiilor);
- rata mutaiilor rmne constant;
- lipsa seleciei n favoarea sau defavoarea unui genotip;
- lipsa undelor populaionale.

Echilibrul genetic al unei populaii ideale este caracterizat de legea Hardy-Weinberg, valabil
pentru caracterele monogenice:
1. ntr-o populaie ideal frecvena alelelor rmne constant de-a lungul generaiilor:
p+q=1, unde
p frecvena alelei dominante (A)
q frecvena alelei recesive (a)

2. ntr-o populaie ideal frecvena genotipurilor rmne constant de-a lungul generaiilor:
p2+2pq+q2=1, unde
2
p frecvena homozigoilor dominani (AA)
2pq frecvena heterozigoilor (Aa)
q2 frecvena homozigoilor recesivi (aa).

Factorii care ar putea modifica genofondul populaiei sunt: izolatele, cstoriile consanguine sau
asortative, migraiile, mutageneza, selecia, deriva genic etc.

Valoarea practic a metodei populaional statistice const n cunoaterea genofondului

populaiei, estimarea frecvenei unor alelele mutante, calcularea numrului aproximativ al persoanelor
afectate i purttoare de mutaii patologice etc. Datele statistice pot fi utile n planificarea activitii
instituiilor medicale, iniierea unor programe de profilaxie a patologiilor genetice.

93
 CURS 11
INTRODUCERE N PATOLOGIA GENETIC UMAN

Bolile genetice reprezint stri patologice determinate sau condiionate de modificri specifice
ale materialului genetic (mutaii). Bolile genetice sunt numeroase i variate att dup cauza apariiei,
momentul manifestrii, ct i tabloul clinic.

ETIOLOGIA BOLILOR GENETICE

Cauzele producerii bolilor genetice pot fi clasificate n trei grupe:

- anomalii cromozomice de numr sau de structur, ce determin un deficit sau surplus al
materialului genetic i ca consecin, n dependen de dezechilibrul genic sindroame
plurimalformative viabile sau letale;
- mutaii genice cu efect patologic major, ce determin anomalii calitative sau cantitative n sinteza
unei proteine (enzim, receptor, canal, etc.) i producerea unei boli monogenice sau unui sindrom
monogenic;
- mutaii poligenice cu efect patologic minor, dar aditiv, ce reprezint predispoziia la boal, iar
aciunea unor factori de mediu determin apariia unor boli multifactoriale.

Mutaiile reprezint modificri anormale ale materialului genetic la diverese nivele:

- substituii nucleotidice n secvenele codificatoare sau necodificatoare ale moleculei de
ADN;
- deleii sau adiii nucleotidice;
- deleii sau duplicaii a unor fragmente cromozomiale;
- monosomii sau trisomii cromozomiale.

Mutaiile pot afecta att materialul genetic nuclear, ct i ADN-ul mitocondrial; pot afecta
materialul genetic al celulelor generative i se pot transmite genealogic, sau pot afecta materialul
genetic al celulelor somatice realizndu-se o clon celular mutant cu consecine patologice doar
asupra fenotipului purttorului, fr transmitere genealogic.

Mutaiile pot fi ereditare (motenite), manifeste sau nu la alte generaii, sau pot fi de novo -
spontane sau produse sub aciunea unor factori de mediu mutageni (radiaii, virusuri, noxe profesionale,
diverse substane chimice toxice).

CLASIFICAREA BOLILOR GENETICE

Bolile genetice sunt determinate sau condiionate de mutaii la nivelul moleculelor de ADN
(modificri calitative sau cantitative ale materialului genetic). n dependen de cota de participare a
factorilor genetici bolile genetice se clasific n:
- boli cromozomiale determinate de anomalii de numr sau structur a cromozomilor;
- boli monogenice sau monofactoriale, determinate de mutaii dominante sau recesive, manifestarea
crora nu depinde de anumite condiii de mediu;
- boli poligenice sau multifactoriale care sunt condiionate de mutaii mai multe gene cu efect minor
sau aditiv i determinate de aciunea patologic a factorilor de mediu.

n dependen de perioada ontogenetic de manifestare, bolile genetice pot fi clasificate n:

- anomalii sau malformaii congenitale;
- boli i sindroame congenitale;
- boli i sindroame ale adultului.

Bolile genetice sunt rezultatul modificrii materialului ereditar, dar pot fi:
94
- ereditare, cu transmitere genealogic mendelian sau nonmendelian;
- neereditare, produse prin mutaii spontane, dar care se pot transmite la generaiile urmtoare;
- anomalii de reproducere, ca rezultat al mutaiilor letale sau mutaiilor sterile;
- boli genetice ale celulelor somatice, ca rezultat a apariiei postnatale a unei clone celulare mutante.

Specialitii din domeniul geneticii medicale insist asupra clasificrii etio-patogenetice a bolilor
genetice:
boli cromozomiale sau sindroame cromozomiale plurimalformative;

boli monogenice sau moleculare;

boli poligenice sau multifactoriale, boli cu predispoziie genetic;

boli mitocondriale;

boli genetice ale celulelor somatice (boala canceroas);

boli de incompatibilitate materno-fetal.

n prezent sunt cunoscute peste 1000 sindroame cromozomiale. Dup datele Dr. Mc.Kusick au
fost descrise i nregistrate peste 9000 de boli i sindroame monogenice. Luate fiecare n parte, au o
frecven populaional mic, dar n ansamblu reprezint o categorie de patologie uman important, n
special lund n consideraie impactul lor medico-social:
- 50% din toate avorturile spontane cunoscute n primul trimestru de sarcin prezint o anomalie
cromozomial;

- 2-3% dintre nou-nscui au o anomalie congenital major;

- 0,6% din toi nou-nscuii au o anomalie cromozomial;

- 50% din toi copii cu retard mintal sever, cecitate sau surditate prezint o cauz genetic;

- 30% din toi copii spitalizai prezint o maladie genetic;

- 40-50% din mortalitatea infantil au cauz genetic;

- 1% din toate cazurile de malignitate sunt direct determinate de factorii genetici;

- 10% din cazurile comune de cancer (CR de sn, CR de colon sau CR ovarian) au o component
important genetic;

- 5% din populaia cu vrste < 25 ani va manifesta o maladie genetic;

- 10% din aduli prezint fie o maladie pur genetic, fie o maladie cu predispoziie genetic.

95
 ASPECTE COMUNE N PATOGENEZA BOLILOR GENETICE

Specificitatea mecanismului patogenic al bolii este determinat de caracterul lezrii materialului

genetic, dar se formeaz la nivelul ntregului organism determinnd particularitile individuale de
desfurare a procesului patologic.

n bolile cromozomiale dereglrile fenotipice coreleaz cu gradul de dezechilibru cromozomic,

cu ct mai mult material genetic este implicat n mutaie, cu att mai precoce apar defectele de
dezvoltare n ontogenez i mai grave sunt consecinele. Bolile cromozomiale se caracterizeaz prin
anomalii multiple de dezvoltare (dismorfii cranio-faciale, anomalii scheletice, anomalii cardio-
vasculare, anomalii ale sistemului nervos, anomalii ale aparatului urinar etc.).

Mecanismele patogenetice n bolile monogenice sunt diverse i depind de caracterul

modificrilor biochimice determinate de mutaie:

Gen mutant (ADN)

ARNm mutant

Protein anormal

Funcie celular dereglat

Simptoame

Patogeneza multor boli ereditare i neereditare poate fi influenat de ali factori interni: starea
sistemului imun i endocrin, vrsta i sexul pacientului, particularitile metabolismului.

Tabloul clinic al bolilor genetice este foarte polimorf. Polimorfismul clinic este definit prin
varietatea manifestrilor clinice i de laborator a unei boli, determinat de:
- heterogenitatea genetic;
- penetrana incomplet a unor gene dominante;
- expresivitatea variabil a genelor patologice, pleiotropie, interaciunea factorilor genetici cu
factorii de mediu.

Cauzele genetice ale polimorfismului clinic sunt determinate de unicitatea biologic a fiecrui
individ. Un rol important n expresivitatea bolii genetice l au factorii de mediu ce pot interaciona cu
cei ereditari la orice etap de dezvoltare prenatal i postnatal.
Bolile cu predispoziie genetic se caracterizeaz printr-un polimorfism mai accentuat, manifestndu-se
prin continuitatea distribuirii de la formele uoare, pn la formele grave.

EREDITATEA I CONSECINELE BOLII

1. Unele mutaii (genice sau cromozomiale) sunt letale, fiind responsabile de moartea prenatal,
perinatal i infantil. Se cunosc peste 150 gene ce provoac moartea prenatal, printre nou-
nscuii mori 1:5 are un defect genetic. Factorii externi cu aciune distructiv (hipoxia, trauma
la natere, intoxicarea, hipotrofia, infeciile) produc mai frecvent moartea copiilor cu genotip
anormal, dect la cei cu genotip normal. Cele mai frecvente cauze ale mortalitii infantile sunt
bolile cromozomice, fibroza chistic, fenilcetonuria, sindromul adreno-genital, hipotireoza.

96
 2. Mutaiile patologice, ca factori etiologici, pot fi cauza bolilor cronice. Evoluia cronic i
progresiv n bolile genetice este o caracteristic, cu excepia celor letale.

3. Mutaiile genice se manifest nu numai cu semne specifice, dar i cu diminuarea rezistenei

nespecifice a organismului la bolile asociate, determinnd cronizarea ultimelor.

4. Constituia genetic a pacientului:

- poate modifica eficacitatea msurilor terapeutice,
- poate determina reacie patologic a unor indivizi la anumite medicamente,
- determin un polimorfism n viteza de eliminare sau oxidare a unor preparate
medicamentoase, sau a metaboliilor care pot modifica farmacocinetica unor
medicamente.

5. Unele mutaii sau asocierea lor duc la scderea capacitii organismului de a rezista la
aciunea distrugtoare a factorilor de mediu, astfel i nsntoirea bolnavului va fi
problematic. Aciunea genelor asupra cronizrii proceselor patologie poate fi explicat prin
modificarea direcionrii unor procese biochimice, modificarea statusului hormonal, deficiene
ale rspunsului imun.

PARTICULARITILE BOLILOR GENETICE

Fiecare caracter ereditar este determinat de interaciunea genotip factorii de mediu. Gena sau
genele mutante determin un fenotip patologic prin:
- sinteza anormal a unor proteine specifice (efectul patologic primar al mutaiei);
- dereglarea structurii sau funciei specifice la nivel de celul i/sau esut (efectul patologic
secundar al mutaiei);
- manifestarea unui anumit caracter patologic sau sindrom la nivel de organism simptoamele bolii
(efectul patologic teriar al mutaiei).

Bolile i sindroamele genetice se caracterizeaz prin determinism monogenic, poligenic, multifactorial

sau apar n rezultatul anomaliilor cromozomiale. De regul, determinismul genetic al bolii se stabilete
odat cu formarea genotipului individului la fecundare. Astfel, afeciunile ereditare au un ir de
particulariti prin care se deosebesc de cele neereditare:
- sunt produse prenatal i se pot manifesta congenital sau n orice perioad de via;
- se transmit genealogic i au o agregare familial; dar pot aprea spontan prin mutaii de novo;
- se asociaz cu marcheri genetici (anomalii cromozomice sau secvene nucleotidice specifice);
- sunt concordante la gemenii monozigoi i au o distribuie populaional specific;
- au evoluie cronic, progresiv i recidivant determinate de aciunea permanent a genei
mutante, cu manifestare variabil de la pacient la pacient, chiar i n cadrul aceleai familii;
- se manifest cu modificri patologice a mai multor organe i sisteme, datorit efectului
pleiotrop al genei mutante;
- sunt rezistente la metodele de tratament tradiionale.

METODELE STABILIRII NATURII GENETICE A UNEI BOLI

Pentru a stabili implicarea factorilor genetici n bolile umane i ponderea lor n producerea unei
patologii se urmrete:
- studiul transmiterii genealogice a bolii sau anomaliei i determinarea tipului de motenire,
calcularea riscului de manifestare sau de recuren;

- evidenierea unor anomalii cromozomice sau mutaii genice ce ar putea fi responsabile de

fenotipul patologic;

97
- determinarea defectului biochimic primar la nivel de sintez proteic sau efectele acestuia asupra
unui proces biochimic controlat de gena/proteina modificat.

- identificarea unor marcheri genetici specifici asociate cu fenotipul patologic;

- calcularea indicelui de ereditate n cadrul patologiei multifactoriale;

- studiul distribuiei populaionale a bolilor genetice i calcularea frecvenei genelor patologice,

purttorilor heterozigoi de gene mutante.

BOLI CROMOZOMIALE

Bolile cromozomiale sunt rezultatul unor modificri specifice ale numrului cromozomilor
caracteristic speciei (46 n celulele somatice umane) sau modificri structurale ale acestora. Efectele i
gravitatea anomaliilor cromozomice depind de tipul de anomalie i mrimea dezechilibrului genetic - cu
ct defectul cantitativ este mai mare, cu att consecinele sunt mai grave.
Sindroamele cromozomice prezint modificri fenotipice comune (tulburri de cretere pre- i
postnatal; ntrziere n dezvoltarea psiho-motorie i debilitate mintal; multiple anomalii viscerale,
disgenezii gonadice) i modificri specifice ale cromozomului sau cromozomilor implicai.

SINDROMUL DOWN (TRISOMIA 21)

Sindromul Down este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena medie de 1:700
nou-nscui, dar dependent de vrsta matern:
- la 20 ani 1:1500;
- la 30 ani 1: 900;
- la 35 ani 1: 400;
- la 40 ani 1:100;
- la 45 ani 1:30.
Cauza sindromului Down este trisomia 21:
95% - trisomia 21 omogen liber, avnd ca origine nondisjuncia meiotic;
5% - trisomia 21 mozaic sau translocaional.

Cariotipuri asociate n sindromul Down:

47, XX (XY), +21;
47, XX(XY), +21/ 46,XX(XY);
46, XX(XY), rob (21;13);
46, XX(XY), rob (21;14);
46, XX(XY), rob (21;15);
46, XX(XY), rob (21;21);
46 ,XX(XY), rob (21;22);
46, XX(XY), i(21q).

Manifestrile clinice majore sunt determinate de anomalii multiple de dezvoltare:

- hipotonie generalizat;
- dismorfism cranio-facial;
- malformaii cardiace;
- retard mintal i fizic;
- imunitate sczut;
- risc crescut pentru leucemii.
Evoluie:
- n cazul de malformaii severe decesul n perioada de sugar;

98
 - n celelalte cazuri evoluia i gradul de retardare mental i somatic depinde de menegementul
medical i social, dar longevitatea este redus.

Riscul de recuren depinde de forma trisomiei i variaz ntre 1 i 100%;

Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor (cariotip, FISH).

SINDROMUL PATAU (TRISOMIA 13)

Sindromul Patau este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena medie de 1:5000 -
7000 nou-nscui i dependent de vrsta matern. Cauza: 75% - trisomia 13 omogen liber,
avnd ca origine nondisjuncia meiotic; 20% - trisomia 13 prin translocaii reobertsoniene; 5%
- trisomia 13 forma mozaic. Cariotipuri asociate n sindromul Patau:
47, XX (XY), +13;
47, XX(XY), +13/ 46,XX(XY);
46, XX(XY), rob (13;13);
46, XX(XY), rob (13;14);
46, XX(XY), rob (13;15);
46, XX(XY), rob (13;21);
46 ,XX(XY), rob (13;22);
46, XX(XY), i(13)q.
Manifestrile clinice majore sunt determinate de anomalii multiple de dezvoltare:
- dismorfism cranio-facial: microcefalie, holoprosencefalie, microftalmie, despictur labio-
palatin, defecte ale scalpului;
- polidactilie;
- criptorhidie;
- malformaii cardiace;
- retard mintal i fizic;
- imunitate sczut.
Evoluia sdr Patau este determinat de prezena malformaiilor viscerale: 50% din cazuri se
termin cu deces n prima lun de via; 70% - deces naintea vrstei de 6 luni de via, 70% - deces
nainte de 6 luni; 10% - supravieuiesc vrstei de 1 an.
Riscul de recuren depinde de forma trisomiei i variaz ntre 1 i 100%.
Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor (cariotip, FISH).

SINDROMUL EDWARDS (TRISOMIA 18)

Sindromul Edwards este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena medie de 1:3000
nou-nscui i dependent de vrsta matern. Cauza sdr Edwards este: n 89% din cazuri - trisomia 18
omogen liber, avnd ca origine nondisjuncia meiotic; 1% - duplicaii ale cromozomului 18; 10% -
trisomia 8 forma mozaic. Cariotipuri asociate n sindromul Edwards:
47, XX (XY), +18;
47, XX(XY), +13/ 46,XX(XY);
46,XX(XY), 18p+;
46,XX(XY), 18q+.
Manifestrile clinice majore sunt deteminate de asocierea anomaliilor multiple de dezvoltare:
- dismorfism cranio-facial;
- stern scurtat,
- criptorhidie;
- malformaii cardiace i renale;
- retard mintal i fizic;
- imunitate sczut.

99
 Evoluie: 30% din cazuri deces n prima lun de via; 10% - supravieuiesc vrstei de 1 an cu
retard sever mental i somatic. Riscul de recuren 1%. Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor
(cariotip, FISH).

SINDROMUL TRISOMIEI 8
Sindromul trisomiei 8 este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena medie de
1:5000 nou-nscui i dependent de vrsta matern, mai frecvent sun afectai indivizii de sex masculin.
Cauza trisomia 8: 90% din cazuri sunt rezultatul unei nedisjuncii postzigotice, determinnd forme
mozaice ale trisomiei 8; 10% - sunt trisomii pariale determinate de rearanjamente strucrurale ale
cromozomului 8 (duplicaii). Cariotipuri asociate n sindromul Patau:
47, XX (XY), +8;
47, XX(XY), +8/ 46,XX;
46, XX(XY), 8p+;
46, XX(XY), 8q+.
Manifestrile clinice majore sunt deteminate de asocierea anomaliilor multiple de dezvoltare:
- dismorfism cranio-facial: frunte proieminent, strabism, epicant, hipertelorism, palatin arcuit,
despictur palatin, buze ngroate, urechi mari malformate;
- contracturi articulare, camptodactilia, aplazia rotulei, pliu palmar transvers unic;
- anomalii ale anusului;
- malformaii cardiace i renale;
- retard mintal i fizic;
- imunitate sczut.
Evoluie: Trisomia 8 total este letal, iar n formele pariale sau mozaice pacienii au
longevitate sczut. Riscul de recuren 1 %. Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor
(cariotip, FISH).

SINDROMUL TURNER
Sindromul Turner este un sindrom plurimalformativ congenital cu incidena medie de 1:2000
1 : 5000 nou-nscuii de sex feminin. Cauza : 50% - 69% - monosomia X total i omogen, 30-40% -
forme mozaice i restul cazurilor, mult mai rare, sunt rezultatul unor monosomii X pariale (deleii,
izocromozomi, cromozom X inelar). Cariotipuri asociate n sindromul Turner:
45,X;
45,X / 46,XX;
46, X, Xq-;
46, X, i(X q);
46, X, del(Xp);
46, X, r(X);
Manifestrile clinice majore sunt determinate de anomalii multiple de dezvoltare:
o la nou-nscut piele abundent n exces la nivelul gtului, pterigium coli, limfedem
periferic localizat mai ales pe faa dorsal a piciorului;
o malformaii cardiace (DSA);
o hipostatur disproporionat;
o impubertizm, amenoree primar.
Evoluie: statura final a adultelor este ntre 125-145 cm; intelegena i sperana de via
sunt, n general, normale; tratamentul de substituie cu hormaoni estrogeni de la adolescen induce
dezvoltarea caracterelor sexuale secundare i previne osteoporoza, dar nu influieneaz statura i
infertilitatea. Riscul de recuren 1 %. Diagnosticul este bazat pe studiul cromozomilor (cariotip,
FISH); testul Barr, de regul, este negativ.

100
 SINDROMUL KLINEFELTER
Sindromul Klinefelter este un sindrom cu infertilitate masculin, cu incidena medie de
1:1000 nou-nscuii de sex masculin; 1 : 10 din brbaii infertili; 1 : 100 din bieii din instituiile
pentru retard mintal. Cauza: 85% - disomie X total i omogene (47,XXY), 15% - forme mozaice sau
polisomii X totale sau pariale. Cariotipuri asociate n sindromul Klinefelter:
47, XXY
47, XXY / 46,XY
48, XXXY
48, XXYY
49,XXXXY
etc.
Manifestri clinice majore:
o Talie nalt;
o Constituie de tip feminin;
o Ginecomastie;
o Pilozitate sczut de tip feminin;
o Testicule mici (sub 2 cm la adult), incapabile de a secreta testosteron;
o Oligo- sau azoospermie;
o Sterilitate primar;
o Retard mintal moderat.
Evoluie: Tratamentul de substituie cu testosteron induce dezvoltarea caracterelor sexuale
secundare i previne osteoporoza. De regul, indivizii cu sindrom Klinefelter sunt infertili, dar n
cazurile cu mozaicizm ar putea fi fertili. Riscul de recuren 1 %. Diagnosticul este bazat pe studiul
cromozomilor (cariotip, FISH); testul Barr este pozitiv.

Alte sindroame cromozomice

Sindromul Cauza Manifestri clinice majore
Cri-du-chat 5p- Sindrom plurimalformativ congenital: microcefalie,
deficien mintal, hipertelorizm, epicant, fante
palpebtale de tip antimongolian, ipt specific datorat
malformaiilor laringelui, malformaii viscerale i
scheletice.
Wolf-Hirschhorn 4p- Sindrom plurimalformativ congenital: microcefalie,
hipotrofie staturo-ponderal, dismorfie facial
caracteristic, malformaii cardiace grave, retard
mintal sever.
Prader - Willi del (15)(q11-q13), Hipotonie neonatal, dismorfie craniofacial
crs patern caracteristic, obezitate, hipogonadism, retard mintal
moderat, tulburri de comportament.
Angelman del (15)(q11-q13), Microcefalie, retard mintal sever, tulburri de mers i
crs matern echilibru, absena vorbirii, tulburri de comportament
Williams Del (7) (q11.23) Dismorfie facial caracteristic, stenoz aortic,
laxitate articular, hipostatur, retard mintal, dereglri
psihice
Velo-cardio-facial Del 22(q11.2) sau Despictur palatin, malformaii cardiace, dismorfie
DiGeorge Del 10(p13) facial caracteristic, hipoplazia paratiroidei i
timusului.

BOLI MONOGENICE
Bolile i sindroamele monogenice sunt strile patologice determinate de mutaii dominante sau
recesive ntr-o singur gen cu efect major, ce determin o sintez anormal a lanului polipeptidic
codificat i, prin efect pleiotrop, anomalii de structur sau funcie celular. Acestea la rndul lor vor
101
determina manifestarea fenotipic cu o simptomatologie specific genei date i diverse simptome
secundare. Patologia monogenic mai este numit monofactorial datorit independenei manifestrii
genelor mutante de factorii de mediu. Dar, factorii de mediu pot modula expresia genic i determina o
expresivitate variabil a bolii la diferii pacieni. O caracteristic a bolilor monogenice este transmiterea
lor genealogic mendelian cu posibilitatea calculrii riscului de recuren. Dup tipul transmiterii
bolile monogenice se clasific n 5 categorii:
- dominante-autozomale
- dominante X-lincate;
- recesive-autozomale;
- recesive X-lincate;
- mitocondriale.

n general bolile monogenice sunt rare i pot aprea att prin mutaii motenite ct i mutaii de
novo. n ansamblu bolile monogenice sunt numeroase (peste 9000 entiti nozologice) i au implicaii
deosebite pe plan medical i social. Majoritatea din ele nu sunt posibil de tratat iar prevenirea lor
necesit teste genetice specifice pentru diagnosticul prenatal.

Distribuia bolilor monogenice n dependen de tipul de transmitere

conform catalogului lui Mc. Kusick
Boli a. 1966 a. 1975 a. 1986 a. 1994 a. 1998 a. 2012
Autozomal 837 1218 2201 4458
dominante
8005 19769
Autozomal 531 947 1420 1730
recesive
X-lincate 119 171 286 412 495 1172
Y-lincate - - - 19 27 59
Mitocondriale - - - 59 60 64
Total 1487 2336 3907 6678 8587 21064

Afeciuni cu transmitere autozomal dominant

Principalele afeciuni cu transmitere autozomal dominant sunt:
hipercolesterolemia familial;
sindromul Marfan;
coreea Huntington;
boala polichistic renal;
neoplazia multipl endocrin;
miotonia congenital Thomsen;
neurofibromatoza Recklinghausen;
retinoblastomul;
sindroamele Wiliams, Noonaan i velocardiofacial;
afeciunile de colagen (osteogeneza imperfecta i sindromul Ehlers-Danlos).

HIPERCOLESTEROLEMIA FAMILIAL

- Este cea mai frecvent afeciune cu transmitere autozomal-dominant;

- are o inciden de 1 : 500;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect al
receptorului lipoproteinelor cu densitate
joas (LDL), determinat de mutaia genei
situate n locusul 19p13;
- vrsta de debut dup 30-40 ani;

102
- se caracterizeaz prin urmtoarele particulariti clinice:
- xantelasme la nivelul feei, palpebral, xantoame pe tendoanele extensorilor) tendonul lui Achile);
- cardiopatie ischemic precoce (crize anginoase, infarct de miocard);
- deces prematur prin cardiopatie ischemic (50% din brbai decedeaz fr tratament pn la
vrsta de 60 ani);
- valori mari ale colesterolemiei 300-600mg/dl; LDL peste 200mg/dl;
- anamnez familial pozitiv (ali cardiaci n familie);
- diagnostic prenatal prin analiza ADN.

SINDROMUL MARFAN
- Sindrom autozomal-dominant ce afecteaz esutul conjunctiv cu expresivitate variabil, dependent
de factorii de mediu;
- are o inciden de 1 : 10000 1 : 15000;
- etiologia: apare ca urmare a unei mutaii n gena fibrilinei care este situat n locusul 15q21;
- debuteaz n primii ani de via prin:
- creterea rapid a membrelor cu aspect de arahnodactilie;
- subluxaia de cristalin, cataract, strabism,
- articulaii laxe cu scolioz i cifoz;
- pectus excavatum sau carinatum;
- afeciuni cardiace (anevrism de aort);
- sperana medie de via 40-50 ani;
- diagnosticul presiptomatic se bazeaz pe analiza ADN.

COREEA HUNTINGTON
- Afeciune neurovegetativ cu transmitere atozomal-dominant ce se manifest la indivizii de peste
30-40 ani;
- are o inciden de 1 : 18000;
- etiologia: apare ca urmare a unei mutaii dinamice n gena ce codific proteina huntingtina, situat
n locusul 4p16.3;
- mutaia produce atrofia de nucleu caudat, putamen i globus palidus;
- manifestri clinice majore:
- tulburri neurologice motorii progresive (coree, distonie);
- n timp apar tulburri de personalitate i demen;
- decesul se produce la 15-20 ani de la debutul clinic;
- agregare familial, afecteaz mai frecvent brbaii;
- diagnosticul presiptomatic se bazeaz pe analiza ADN.

ADPKD
- Boala Polichistic Renal de tip Autozomal Dominant este o afeciune multisistemic, caracterizat
prin scderea rezistenei esutului conjunctiv i astfel apar modificri structurale ale organelor
supuse stres-ului presional: tubii nefronali, conducte biliare, perete vascular, ducte pancreatice,
aparat valvular cardiac;
- are o inciden de 1 : 1000;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena PKD1 situat n locusul 16p13.3 (85%) sau PKD2
din locusul 4q21-22 (15%);
- manifestri clinice majore:
- dezvoltarea progresiv i difuz de chiti renali multipli, bilaterali, n toate segmentele tubilor
uriniferi;
- asocierea variabil cu alte anomalii extrarenale (cardiovasculare, digestive) - n special chiti
hepatici;
- manifestat de obicei la adult i evolund frecvent spre IRC;
103
- 6-10% din pacienii cu IRCT, admii n dializ, au ADPKD;
- vrsta medie la care se atinge IRCT este 55 ani, dar exist variaii individuale;
- diagnosticul presimptomatic se bazeaz pe analiza ADN.

MIOTONIA CONGENITAL THOMSEN

- Afeciune muscular nondistrofic cu transmitere autozomal-dominat i manifestare congenital;
- frecvena 1:20000-50000 nou-nscui;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena ce codific canalul de clor tip 1 din muchii
scheletici (localizare 7q35);
- manifestri clinice majore:
- afectarea muscular n special la nivelul centurilor scapular i pelvian;
- slbiciune muscular, astenie fizic marcat;
- diagnosticul este susinut prin electromiogram;
- diagnosticul prenatal bazat pe teste ADN.

NEUROFIBROMATOZA RECKLINGHAUSEN
- Este o afeciune cu transmitere autozomal-dominant cu expresivitate variabil;
- are o inciden de 1 : 3000;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n proteina neurofibromina o GTP-az ce regleaz
expresia proteinelor RAS, acionnd ca o protein supresoare de tumori; gena NF1 este situat n
locusul 17q11.2;
- debutul clinic n copilrie i pubertate, boala evolueaz n timp;
- manifestrile clinice majore:
- prezena de pete cafe au lait cutanate ce apar nc din copilrie;
- neurofibromatoz cutanat i subcutanat;
- modificri ale irisului noduli Lisch;
- tumori benigne pe traiectul unor nervi;
- anomalii de cretere i dezvoltare, retard mental, HTA secundar (frecvent de natur renal
displazie de arter renal);
- copii cu neurofibromatoz au un risc crescut pentru leucemia mielomonoclonal tipul juvenil i
pentru mielodisplazie;
- testul prenatal sau presimptomatic este bazat pe analiza ADN.

RETINOBLASTOMUL
- Este cea mai frecvent tumor intraocular cu transmitere autozomal-dominant, exprimat n
copilrie;
- are o inciden de 1 : 18000 1 : 30000;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena RB1, localizat n 13q14.3, produsul creia
intervine n reglarea ciclului celular i a transcripiei;
- manifestri clinice majore:
- tumoare embrionar cu origine n celulele retinei;
- la aduli se asociaz cu alte neoplazii sarcomul osteogenic, sarcoamele de pri moi sau
melanoamele;
- diagnostic prenatal se bazeaz pe testele ADN.

OSTEOGENEZA IMPERFECT (TIP I IV)

- Este o afeciune cu transmitere autozomal-dominant cu expresivitate variabil ce determin o
predispoziie la deformaii scheletice i fracturi osoase n urma unor traumatisme minime;
- are o inciden de 1 : 10000;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena ce codific pentru sinteza colagenului tip I (locus:
17q21.31-q22) sau n alte gene ce codific lanurile procolagenului;
- manifestri clinice majore:
104
- Tip I (Boala Lobstein) forma uoar;
- fragilitate osoas;
- sclere albastre;
- surditate presenil;
- Tip II (Boala Vrolik) forma sever, letal n perioada neonatal;
- fracturi osoase;
- deformaii scheletice;
- sclere de culoare nchis;
- Tip III fracturi prezente la natere;
- deformaii osoase progresive;
- hipostatur;
- sclere albastre;
- tulburri ale dentiiei;
- surditate;
- Tip IV deformaii osoase uoare sau moderate;
- susceptibilitate la fracturi;
- surditate;
- sclere de culoare normal;
- anomalii ale dentiiei;
- diagnosticul prenatal prin teste ADN.

SINDROMUL EHLERS-DANLOS
- Reprezint un grup de boli genetice ale esutului conjunctiv cu transmitere autozomal-dominant;
- are o inciden de 1 : 5000 1 : 50000;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena ce codific colagenul tip V (2q31);
- manifestri clinice majore:
- manifestri cutanate aspectul hiperextensibil (cutix laxa); textur moale, catifelat; apariia
unor escare atrofice i a echimozelor;
- manifestri articulare hipermobilitate articular;
- cifoscolioz;
- anomalii oculare keratoconus; sclere albastre; subluxaie de cristalin; dezlipirea retinei;
- complicaii ruptura prematur a membranelor i hemoragiile pre- sau postpartum;
- ruperea vaselor ce reprezint o cauz frecvent de deces;
- diagnostic prenatal pe baza testelor ADN.

AFECIUNI CU TRANSMITERE AUTOZOMAL-RECESIV

Principalele afeciuni genetice cu transmitere autozomal-recesiv sunt:
- fenilcatonuria;
- fibroza chistic;
- boala Wilson;
- surditatea nonsindromic recesiv;
- hemoglobinopatiile;
- atrofia muscular spinal acut infantil;
- atrofia muscular progresiv a copilului;
- trombastenia Glanzmann.

FENILCETONURIA
- Reprezint o hiperfenilalaninemie sever cu transmitere autozomal-recesiv;
- are o inciden de 1 : 10000 nou-nscui;

105
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena pentru fenilalaninhidroxilaz (PAH), cu localizare
12q24.1;
- manifestri clinice majore:
- tulburri neorologice;
- retard somatic i mintal;
- demen n formele netratate;
- miros particular al urinei;
- dermatit cronic descuamativ;
- boala se manifest n copilrie i depinde de dietoterapie (excluderea fenilalaninei din produsele
alimentare);
- diagnosticul prenatal sau neonatal prin dozarea fenilalaninei plasmatice sau analiza ADN.

FIBROZA CHISTIC (MUCOVISCIDOZA)

- Reprezint o alterare a funciei exocrine cu producerea de secreii glandulare vscoase ce conduc la
afectare pulmonar cronic i insuficien pancreatic; patologia are o transmitere autozomal-
recisiv;
- are o inciden de 1 : 2500;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena CF (locus 7q31.2) ce codific pentru un canal de
clor la nivelul polului apical al celulelor apicale;
- manifestri clinice majore:
- la nivel-pulmonar infecii recurente cu evoluie spre insuficien pulmonar;
- la nivelul pancreasului obstrucia canalelor pancreatice, deficiena enzimelor pancreatice i ca
rezultat afectarea digestiei;
- creterea concentraiei de sodiu i clor n secreiile sudorale;
- tulburri gastrointestinale ileus meconeal (la 10-25% dintre nounscuii cu FC);
- absena congenital bilateral a vaselor deferente la biei (95% de cazuri);
- supravieuirea medie este de 25 30 de ani;
- diagnosticul prenatal prin teste de ADN.

BOALA WILSON
- reprezint o degenerescen hepato-lenticular cu tansmitere autozomal recesiv.
- Are o inciden 1 : 100000;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena localizat pe crs. 13q14.3, ce determin tulburri n
transportul cuprului cu scdere a capacitii de ncorporare a cuprului n ceruloplasmin i scderea
secreiei biliare; cuprul se acumuleaz n ficat producnd leziuni la acest nivel; se depune n creer,
rinichi.;
- manifestri clinice majore:
- debuteaz la persoanele tinere cu afectare hepatic i tulburi neurologice;
- afeciunea hepatic are o evoluie ciclic cu caracterul unei hepatopatii cronice (icter, astenie,
inapeten) cu citoliz;
- poate asocia anemie hemolitic;
- manifestrile neurologice tremor fin al extremitilor, coree, dizartrie, imposibilitate de a
coordona micrile;
- manifestri psihice cu alterarea personalitii (schizofrenie), scderea performanelor colare la
copii;
- semn specific prezena inelului Kayser-Fleischer.
- supravieuirea depinde d gradul de afectare a ficatului; ciroza hepatic cauz frecvent de deces;
- diagnosticul prenatal prin teste de ADN.

HEMOGLOBINOPATIILE
- Reprezint un grup heterogen de patologii, cu transmitere autozomal - recesiv, determinate de
diverse variante ale Hb, care induc tulburri prin afectarea structurii i funciei hematiilor;
106
- etiologia: apar ca urmare a unor mutaii n dou familii de gene:
- familia alfa-globinelor localizat pe crs. 16p, format din 4 gene funcionale ( 2, 2, 1, 1);
- familia beta globinelor pe crs. 11p, cuprinde 5 gene funcionale
- se disting diferite forme de hemoglobinopatii - hemoglobinoza S, hemoglobina C, talasemiile.
Hemoglobinoza S apare ca urmare a nlocuirii acidului glutamic din poziia 6 a lanului cu
valina. Boala se poate manifesta la homozigoi i heterozigoi prin anemie drepanocitar. Clinic
copiii aa sunt icterici, cu ntrziere de cretere, dureri osoase, peste 50% au splenomegalie. Pacienii
prezint eritrocitele n form de secer, viscozitate sanguin, staz i risc de tromboze vasculare.
Diagnosticul pe baza datelor clinice, hematologice, electroforezei Hb, diagnosticul prenatal analiza
ADN.
Hemoglobina C apare prin nlocuirea acidului glutamic (6, lan ) cu lizina, se caracterizeaz
printr-o solubilitate sczut, clinic anemie hemolitic grav, splenomegalie i icter cutaneo-mucos,
hematologic-eritrocite n int.
Talasemiile detrminate de afectarea sintezei lanului sau a Hb, ce reprezint modificri
cantitative. n dependen de defectul molecular se manifest de la forme uoare pn la forme grave,
letale de anemie. Beta talasemia major Cooley - se manifest precoce, n primul an de via cu retard
de cretere, paloare a tegumentelor, hepatosplenomegalie compensatorie, hiperplazia medular, n
special la nivelul oaselor feei i craniului - aspect caracteristic de craniu n perie, la nivelul oaselor
lungi - subiere a corticalei cu risc crescut de fractur, pacienii fac uor infecii intercurente.
Diagnosticul clinic, hematologic, anamneza familial (prini heterozigoi cu semne uoare de anemie),
diagnostic prenatal teste ADN.

ATROFIA MUSCULAR SPINAL ACUT INFANTIL

- Afeciune grav, ce se manifest precoce prin hipotonie muscular, retracia spaiului intercostal n
timpul inspiraiei, tuse ineficiente, areflectivitate, cu transmitere autozomal-recesiv;
- etiologia: apare ca urmare a unui defect n gena localizat pe crs. 5q13.2;
- moartea survine n primii doi ani de via;
- diagnosticul pe baza biopsiei musculare i electromiogramei;
- diagnosticul prenatal pe baza testelor ADN.

AFECIUNI CU TRANSMITERE RECESIV X LINCAT

DISTROFIA MUSCULAR DUCHENNE (DMD) afeciune cu debut n prima copilrie, de obicei

sub vrsta de 5 ani, cu afectarea muchilor centurilor, se asociaz cu retard mental. Criteriile de
diagnostic sunt dozarea creatinkinazei (crescut), electrocardiograma i biopsia muscular.
DISTROFIA MUSCULAR BECKER (DMB) afeciune cu debut n a doua copilrie, fiind
asemntoare simptomatic cu DMD, dar cu o supravieuire mai mare i fr retard mental.
DMD i DMB se transmit XR, gena afectat fiind localizat pe braul p (Xp21). Proteina codificat de
aceast gen se numete distrofina: face parte din clasa spectrinei (din citoscheletul celular).
Studiile electroforetice in vitro pe biopsiile musculare de la pacienii cu DMB au artat o
diminuare a conductanei clorului sarcolemal. Repausul n conductana clorului pentru fibra muscular
sintetic contribuie la repolarizarea potenialelor de aciune n esutul dat, iar reproducerea lor conduce
la instabilitate electric.
Astfel, genele canalelor de clor din fibra muscular par a fi cele mai indicate n explicarea
acestor modificri.
Fiind o maladie XR, se manifest n special la biei, mama fiind purttoare de gen patogen. n
astfel de cazuri diagnosticul prenatal se poate face prin detectarea genei mutante n vilozitile coriale,
folosind RFLP intra- i extragenic.

107
 HEMOFILIILE A I B
Hemofiliile A i B sunt afeciuni XR; genele
mutante responsabile sunt localizate pe braul lung
(Xq28), avnd ca urmare deficitul factorilor VIII i
respectiv IX, componente ale cii intrinseci a
coagulrii.
Boala afecteaz 1 din 5000 de biei.
Hemofilia A este de 10 ori mai frecvent ca
hemofilia B.
Aspectul clinic al hemofiliei A depinde de gradul de activitate a factorului VIII i se exprim n
4 forme:
Forma Concentraia Manifestri clinice
factorului VIII
Sever 1% Sngerare spontan i dup circumcizie. Hemartroze
repetate. Deformri articulare.
Moderat 1-5% Hemartroze ocazionale. Deformri articulare rare.
Uoar 5-20% Sngerare rar: dup intervenii chirurgicale,
stomatologice, dup traumatisme.
Ascuns 25% Se includ i purttoarele genei patologice.
Diagnosticul prenatal al hemofiliilor se bazeaz pe stabilirea sexului, analiza ADN n vilozitile
coriale i dozarea factorului VIII sau IX n sngele fetal.

PROFILAXIA BOLILOR EREDITARE

Profilaxia primar const n evitarea concepiei sau naterii copilului cu anomalie grav,
incurabil prin diverse msuri ce intesc:
micorarea procesului mutaional;
limitarea concepiei n cazurile cu risc 100% sau ntreruperea sarcinii dup diagnosticul
prenatal;
diagnosticul preimplantiv cu selecia produilor de concepie mutani n cazurile de
fertilizare in vitro;
terapie genic germinal sau somatic cu revenirea la genotip normal.
Profilaxia secundar cuprinde o serie de inrervenii pentru prevenirea / atenuarea maniferstrii
complicaiilor la indivizii cu mutaii patologice:
msuri terapeutice perinatale i n timpul sarcinii;
diagnosticul preclinic cu aplicarea terapiei de prevenire a complicaiilor;
excluderea factorilor ce pot provoca apariia bolilor cu predispoziie genetic;
terapie de substituie / dietoterapie / transplant de esut .... pentru fiecare caz n
particular.
Profilaxia eficient poate fi relizat n cadrul unui centru specializat de consult genetic.

Diagnosticul prenatal cu scop de prevenire a bolilor genetice sau AC grave are ca scop
depistarea anomaliilor congenitale sau a bolilor genetice la embrion sau ft. Se realizeaz n cazurile de
sarcini cu risc teratogen sau genetic (anamnez familial sugestiv) i poate fi ca metod de screening
populaional.
Diagnosticul prenatal necesit respectarea principiului de siguran i precizie i se poate
realiza numai n cadrul unui centru specializat de consult genetic.

Strategii de terapie a bolilor genetice

Pentru atenuarea consecinelor patologice a unor mutaii se aplic diverse strateii de tratament
simptomatic, corecie a tulburrilor metabolice, ce acioneaz asupra proteinei deficitare, transplante
108
 de organe, terapii celulare. Terapia genic are ca scop corecia cauzei bolii mutaiei genice.
Terapia genic reprezint modificarea genetic a celulelor afectate prin substituia genei mutante
amorfe cu o gen normal sau inhibarea unei gene patologice sau ARNm mutant. Terapia genic
poate fi realizat la nivelul celulelor somatice sau celulelor germinale (interzis). Boli candidate
pentru terapia genic sunt:
- Deficiena ADA SIDC (deficiena de adenozindezaminaz implicat n
sindromul imunodificienei combinate);
- Hemofilia B;
- Fibroza chistic;
- FH (hipercolesterolemia familial);
- Cancerul.

SFATUL GENETIC
Sfatul genetic este actul medical specializat i complex prin care se determin probabilitatea
(riscul) ca o boal ereditar sau parial ereditar s se manifeste sau s reapar ntr-o familie. Sfatul genetic
este atribuia medicului genetician i se acord la solicitarea persoanelor interesate, deoarece prin
calcularea riscului i stabilirea conduitei ulterioare, sfatul genetic are rol important n profilaxia bolilor
genetice. Dup calcularea riscului de recuren i comunicarea acestuia, trebuie avut n vedere
posibilitatea efecturii diagnosticului prenatal, precum i ntreruperea sarcinii cnd se consider c riscul
este prea mare.
Necesitatea actual a sfatului genetic este determinat de 2 condiii:
1. Diferitele substane poluante din mediul urban, precum i iradierea accidental, profesional sau
diagnostic n timpul sarcinii pot duce la apariia de mutaii i deci a bolilor genetice. Datorit creterii
frecvenei bolilor genetice, cresc i morbiditatea, mortinatalitatea i mortalitatea infantil prin boli
genetice.
2. Datorit interveniei medicinii moderne persoanele cu boli genetice pot supravieui pn la vrsta de
adult i deci pot transmite boala genetic la descendeni.
Ideal, sfatul genetic ar trebui solicitat n urmtoarele situaii:
* Premarital:
1. Unul sau ambii parteneri au anomalii congenitale sau boli genetice;
2. Parteneri sntoi, dar unul sau ambii au rude apropiate cu boli genetice (frai, prini, bunici,
unchi-mtu, verior);
3. Parteneri sntoi, dar doresc o cstorie consangvin;
4. Persoane expuse accidental, profesional sau terapeutic la ageni teratogeni sau mutageni;
5. Cupluri care se cstoresc trziu sau planific s aib copii la mai mult de 35 ani;
* Postmarital (cele mai frecvente solicitri):
1. Naterea unui copil malformat sau cu o boal genetic;
2. Cupluri cu copii nscui mori sau avorturi spontane repetate;
3. Femei care necesit:
a. doze mari de medicamente care pot afecta dezvoltarea ftului;
b. femei care au avut boli infecioase virale (rubeol);
c. radiografii pe micul bazin, vaccinri.
Sfatul genetic se acord n centre specializate de genetic medical, de ctre o echip complex de
specialiti (genetician, obstetrician, pediatru, chirurg pediatru, endocrinolog etc). Centrul trebuie s fie
dotat cu un laborator bine utilat pentru a efectua investigaiile necesare unui diagnostic corect i complet.

Metodologia sfatului genetic

Stabilirea diagnosticului precis clinic i paraclinic (date biochimice, radiografii, echografie, ECG,
EEG etc) ;
Stabilirea autenticitii filiaiei i a caracterului genetic al bolii prin:

109
 Ancheta familial, care va ncerca att depistarea bolnavilor, ct i a purttorilor de gen
anormal pe baza analizei arborelui genealogic;
Explorri genetice (msurtori antropometrice, cromatin sexual, cariotip, Southern blot, PCR
etc).
Cunoaterea datelor din literatura de specialitate, mai ales frecvena de apariie a bolii n populaia
respectiv.
Calcularea riscului de recuren presupune folosirea unor noiuni de calcul al probabilitilor.

Tipuri de risc:
a. Total 100% n:
Boli monogenice: - bolnav + bolnav n anomalii recesive;
Boli cromozomice: - translocatii reciproce echilibrate ntre cromozomi omologi

b. Foarte mare 50-75% n:

Boli monogenice: - bolnav + sntos heterozigot n anomalii recesive (50%);;
- bolnav + bolnav n boli dominante autozomale cu penetran
complet (75%);
- bolnav + sntos n boli dominante autozomale cu penetran
complet (50%);

c. Mare - 25% - n boli monogenice: - heterozigot + heterozigot n anomalii recesive;

d. Moderat 10 - 25% n:
Boli monogenice: - boli dominante cu penetran redus;
Boli poligenice: - n situaia cnd exist mai multe persoane afectate n familie;
Boli cromozomice: - translocaii ntre cromozomi diferii;

e. Mic, mai puin de 5% n:

Boli poligenice: - n situaia cnd exist o singur persoan afectat n familie;
- malformaii;

Risc 0% nu exist. Riscul minim este de 3,2% .

Acordarea sfatului genetic

Sfatul genetic trebuie s precizeze:
a. Natura i consecinele bolii;
b. Riscul de recuren;
c. Mijloacele de modificare a consecinelor;
d. Mijloacele de prevenire a recurenei (diagnostic prenatal, sfat).
Rspunsul celui care d sfat genetic trebuie s fie explicit, obiectiv, personalizat n funcie de
pacient, modulat dup contextul psihologic creat de gravitatea handicapului, vrsta de procreere, vrsta
sarcinii, prezena altor copii normali sau anormali, echilibrul psihologic al cuplului.
Medicul trebuie s informeze, nu s decid.
Latura psihologic a sfatului genetic este deosebit de important.
Dup acordarea sfatului genetic pot fi stabilite msuri de ngrijire ulterioar:
a. Trimitere la specialiti corespunztori, agenii de sntate, grupuri de susinere;
b. Continuarea evalurii clinice dac este indicat;
c. Continuarea susinerii prin sfat genetic dac este indicat.

In boli monogenice calcularea riscului de recuren se face pe baza legilor ereditii (gene mutante
cu efecte majore ce se transmit dominant sau recesiv, autozomal sau gonosomal).
In boli poligenice se calculeaz "riscul empiric", stabilit pe baza studiilor populaionale.
110
 In boli cromozomice n aprecierea riscului de recuren trebuie inut cont de mecanismul de
producere (nedisjuncie, translocaie ntre cromozomi omologi sau neomologi etc). (Vezi Cap.Anomalii
cromozomice).
APARITIA UNOR COPII BOLNAVI DIN PARINTI SNTOI
Apariia unor copii bolnavi din prini sntoi determin adesea o adevrat dram familial fiind
o situaie frecvent ce implic sfat genetic n practica obinuit a geneticii medicale. Cauzele acestui
eveniment nedorit pot fi foarte diverse i explic riscul diferit de recuren n diferite familii.
1. Boli recesive autozomale sau gonosomale cu prini sntoi, dar purttori (risc 25 % sau 50 %).
Se ntlnete ntmpltor, dar mai frecvent n legturile consanguine.
2. Boli dominante cu penetran incomplet (dominan neregulat) n care unul din prini este
heterozigot nemanifest (risc variabil 20 - 30 %).
3. Boli recesive cu heterogenitate genetic (gene diferite determin acelai aspect fenotipic). Ex:
surditatea congenital (surdomutitatea), retinit pigmentar etc. Riscul este de 50 % iar transmiterea
mimeaz o transmitere dominant neregulat.
4. Anomalii poligenice n care prinii sunt sntoi, dar copilul motenete un numr de gene de
risc ce depete pragul. Riscul variabil este de 4 - 10 % .
5. Mutaie nou. Riscul este variabil de la neglijabil pn la foarte mare n funcie de existena
aciunii factorului mutagen.
6. Factorii de mediu teratogeni (medicamente, substane chimice, infecii) pot determina anomalii
(malformaii) neereditare dar cu manifestare congenital. Riscul poate fi neglijabil n cazul n care
se elimin agenii teratogeni.

ROLUL CONSANGVINITII N TRANSMITEREA RECESIVA

Consangvinitatea (cstorie ntre rude de snge) crete riscul ntlnirii a doi prini sntoi dar
purttori ai unei gene recesive anormale i duce la apariia unor copii bolnavi de boli recesive. Acest lucru
se explic deoarece ntr-o familie n care exist o persoan cu o anomalie recesiv, frecvena heterozigoilor
pentru aceast gen anormal este mult mai mare dect n populaia general datorit fondului genetic
comun al persoanelor nrudite.
In bolile recesive este important a se calcula:

COEFICIENTUL DE NRUDIRE:
reprezint probabilitatea a doi indivizi de a prezenta o anumita gena motenita de la un strmo
comun:
coeficientul de nrudire se noteaz cu r;
el se calculeaz folosind urmtoarea formul:

r = coeficient de nrudire;
n1 = numrul de generaii situate ntre unul dintre cei doi indivizi i strmoul comun;
n2 = numrul de generaii situate ntre al doilea individ i strmoul comun.

exemple de coeficieni de nrudire:

- rude de gr. I - prini/copii; frate (sor)/frate (sor) - au r = 1/2
- rude de gr. II - bunici, mtui, unchi - au r = 1/4
- rude de gr. III - veri primari - au r = 1/8.

COEFICIENTUL DE CONSANGVINITATE:
Coeficientul de consangvinitate se calculeaz pentru indivizii rezultai n urma cstoriei a
dou persoane nrudite.

111
 Coeficientul de consangvinitate al unui individ este probabilitatea acestuia de a prezenta
pentru un locus dat din genomul su dou gene alele identice motenite de la un strmo
comun.
Coeficientul de consangvinitate se noteaz cu F
Coeficientul de consangvinitate se poate calcula prin dou formule:
n cazul n care membrii cuplului consanguin prezint un singur cuplu de strmoi
comuni:

,
F = coeficient de consangvinitate;
r = coeficient de nrudire.

n cazul n care membrii cuplului consanguin prezint mai multe cupluri de strmoi
comuni:

,
F = coeficient de consangvinitate;
n = numrul de indivizi prezeni ntr-o bucl care ncepe la nivelul unui
strmo comun, merge pe linie descendent pn la copilul rezultat n urma
unei cstorii consanguine, trecnd pe la unul dintre membrii acestui cuplu
consanguin i se ntoarce pe linie ascendent pn la acelai strmo comun,
trecnd pe la al doilea membru al cuplului consanguin.
NOT:
n se calculeaz pentru toi strmoii comuni

De obicei cu ct o boal recesiv este mai rar cu att consangvinitatea la prini este mai
frecvent.

TESTAREA GENETIC
Testarea genetic este o metod de studiu ce identific genotipurile asociate cu o anumit
afeciune sau predispoziie la boal sau care pot duce la apariia unor boli la descendeni. Scopul testrii
genetice const n identificarea urmtoarelor categorii:
- Persoane afectate (ct mai precoce pentru o ct mai prompt intervenie terapeutic);
- Purttori sntoi heterozigoi (pentru afeciuni recesive);
- Purttori sntoi de gen mutant dominant (pentru afeciuni dominante cu debut tardiv);
- Persoane cu predispoziie genetic pentru boli cu determinism multifactotial.
n dependen de caz, scopul final al acestei identificri este alegerea unei opiuni reproductive
optime sau acolo unde este posibil un tratament precoce. Testarea genetic este parte component a
screeningului neonatal, populaional sau familial.

Screening-ul neonatal
Reprezint programul de depistare presimptomatic i de prevenire a unor boli genetice. Are
drept scop depistarea nou-nscuilor cu anumite boli genetice nemanifestate la natere, boli a cror
evoluie poate fi controlat i eventual oprit prin terapie adecvat i iniiat precoce. Constituie o
strategie eficient de sntate public, aplicabil pentru unele afeciuni tratabile precum fenilcetonuria,
hipotiroidismul congenital i galactozemia.

112
 Pentru alte tipuri de afeciuni, programele de screening variaz de la o ar la alta, n funcie de
prevalena afeciunilor ce pot beneficia de ameliorri terapeutice prin depistare precoce: mucoviscidoza
(frecvent n Europa), anemia falciform (frecvent la afro - americani), maladia Ta Sacks (frecvent
la evreii ashkenazi); thalasemia (frecvent la populaia circum - mediteranian); depistate neonatal,
acestor afeciuni li se poate influiena evoluia, depistarea lor putnd constitui factor de decizie pentru
sarcinile ulterioare.
Exist deja protocoale specifice pentru o serie de afeciuni:
Screening-ul pentru fenilcetonurie, aplicabil nou-nscuilor, se realizeaz prin testarea nivelului
fenilalaninei n ser n primele 4-5 zile dup natere, sensibilitatea testului fiind de 98%, iar specificitatea
practic de 100%.
Screening-ul neonatal n hipotiroidia congenital se bazeaz pe: detectarea imunologic a
hormonilor tiroideni sanguini care prezint valori sczute; testele moleculare de screening neonatal i de
depistare a heterozigoilor sunt cel mai frecvent aplicate.
Efectuarea screening-ului neonatal la anemia falciform n zonele afectate cu predilecie se
realizaeaz pe baza tabloului hematologic i prin diagnostic ADN.

DIAGNOSTICUL PRENATAL
Este necesar n cazul sarcinilor cu risc crescut, identificate prin screening sau n urma consilierii
genetice a cuplurilor parentale cu risc. Un diagnostic prenatal complet va impune consultri
interdisciplinare (obstetrician, pediatru, genetician, neonatolog etc.).

Dei diagnosticul prenatal constituie o surs de disconfort pentru mam i chiar o surs de risc
vital pentru ft, acesta rmne un instrument predictiv extrem de eficient n epidemiologia bolilor
genetice, permind n unele situaii evitarea naterii unui copil malformat.
Existnd riscurile citate mai sus, efectuarea diagnosticului prenatal impune ndeplinirea unor
criterii clar definite:
- severitatea malformaiei: nendoielnic n cazul prezumpiei de sindromDown (sau alte anomalii
trisomice), defecte de tub neural deschis sau boli metabolice neurodegenerative, decizia rmne
discutabil n alte situaii (defecte ale membrelor, despictur labio- maxilo palatin), n care
intelectul i durata de via pot rmne neafectate; zona geografic poate fi decisiv pentru unele
afeciuni, impactul malformaiei fiind diferit receptat n funcie de particularitile socio-culturale
zonale;

113
- existena unui tratament satisfctor: astfel, fenilcetonuria poate rmne fr consecine
neuropsihice n rile n care exist posibilitatea deteciei prenatale prin analiza molecular i a unei
diete specifice corespunztoare, n timp ce galactozemia afecteaz sever ficatul n majoritatea
cazurilor;
- acceptarea prealabil de principiu a ntreruperii sarcinii de ctre cuplu i comunitate ca sanciune
terapeutic n cazul confirmrii unei malformaii grave;
- existena unui test diagnostic prenatal cu dezabilitate satisfctoare; stabilirea existenei unui risc
genetic semnificativ la consilierea genetic prealabil sarcinii.
Metoda utilizat poate varia n funcie de vrsta sarcinii i tipul afeciunii implicate (boala
cromozomic, monogenic sau alt tip de anomalie congenital). Pot fi necesare att metode invazive
care comport risc abortiv (caz n care acordul ambilor prini este obligatoriu).
Indicaiile pentru diagnostic prenatal:
- vrsta matern gestaional peste 35 de ani (risc de nondisjuncie cromozomic meiotic-gamei
anormali);
- istoric familial pozitiv (defecte de tub neural, boli cromozomice, boli monogenice depistabile prin
diagnostic enzimatic/ ADN, anomalii morfologice congenitale);
- sarcini anterioare cu anomalii cromozomice;
- teste screening pozitive sugestive;
- un printe cu anomalie cromozomic echilibrat cunoscut;
- expunere la ageni teratogeni cunoscui n cursul sarcinii (n special n trimestrul I);
- boli cronice materne cu posibil impact asupra ftului (prin deficienele funcionale organice sau
prin medicaia folosit).

Diagnosticul prenatal cuprinde att metode noninvazive, ct i metode invazive, acestea din urm
avnd ns risc abortiv.

METODE NONINVAZIVE
Echografia are ca scop identificarea unor anomalii fetale structurale: defecte de tub neural,
malformaii congenital de cord, anomalii scheletice, renale etc.
Detecia celulelor fetale n circulaia matern, metod la limita dintre cercetare i practica
medical, se bazeaz pe apariia n sngele matern a anticorpilor fa de celulele trofoblastice sau
sanguine (trombocite, leucocite) nc din primul trimestru de sarcin. Metologia poate fi util att n
determinarea sexului produsului de concepie (important n transmiterea bolilor legate de cromozomul
X), dar i n boli monogenice cu transmitere autozomal precum i n anomalii cromozomice de tip
aneuploidie. Poate fi utilizat ca test screening n grupuri int speciale cu risc crescut .
Detecia ADN-ului fetal n plasma matern acest ADN, provenind din apoptoza celulelor
fetale, ar fi n cantitate mai mare dect cel izolat din celulele fetale i n consecin, mai uor de detectat.

METODE INVAZIVE SUB CONTROL IMAGISTIC

Fetoscopia - efectuat n sptmnile 17-20 de sarcin permite vizualizarea endoscopic a ftului,
recoltarea de snge ombilical din cordon, biopsia tegumentar (n suspiciunea de epidermoliz buloas,
ichtioza, hiperketatoz, n afara acestor faciliti diagnostice, metoda permite i proceduri terapeutice
precum transfuzia sanguin n vena ombilical n caz de necesitate. Prezint ns risc semnificativ (5-
10%) de avort spontan, natere prematur, pierdere de lichid amniotic, infectare de lichid amniotic.

Cordonocenteza prin PUBS (percutaneous umbilical blood sampling) const n puncionarea

transabdominal echoghidat a cordonului ombilical nc din sptmna 17 de gestaie. Se practic n
urmtoarele situaii:
- boli cromozomice ce necesit o analiz cromozomic rapid (prin amniocinteza sunt necesare
culturi celulare, ceea ce ntrzie diagnosticul);

114
 - boli monogenice caracterizate prin sinteza de proteine anormale specifice: hemoglobinopatii (tip
thalasemie), hemofilie;
- suspiciune de infecie fetal (n caz de infecie matern viral rubeol, virus citomegalic sau
bacterian);
- incompatibilitate de grup sanguin (n cazul confirmrii fiind posibil transfuzia sau
exsanguinotransfuzia n utero);
- deficite imunologice.
Riscul de avort spontan i natere prematur este mai redus n cazulfetoscopiei, dei rmne
semnificativ (aproximativ 2% deoarece se practic cu ac subire, motiv pentru care aceast metod tinde
s nlocuiasc fetoscopia.
Amniocenteza - const n aspirarea transabdominal de lichid amniotic sub ghidaj echografic.
Permite efectuarea de cariotip (rezultat tardiv ns, deoarece implic culturi celulare), analiza ADN,
determinri biochimice. Celulele amniotice prelevate permit
studierea cromozomilor (cariotipului) pentru identificarea
rearanjamentelor structurale, a mozaicurilor i a aneuploidiilor,
cu interpretare viciabil ns prin contaminarea cu celule
materne sau, n cazul sarcinilor gemelare, prin confuzie cu
celulele celuilalt ft, datorit puncionrii din greeal a sacului
amniotic al acestuia. Alte surse de eroare in de tehnic sau de
prezena mozaicurilor cromozomice, linia anormal innd, n
acest din urm caz, nu de celulele fetale ci de cele
extraembrionare. n plus, prelevarea de celule amniotice face
posibil studiul ADN, necesar n unele boli genice, cum ar fi: fibroza chistic de pancreas, hemofilia,
distrofia muscular Duchenne, sindromul X fragil, rinichiul polichistic etc. Din lichidul amniotic se pot
face analize biochimice n vederea identificrii de proteine anormale caracteristice unor enzimopatii
(fenilcetonuria, tirozinemia galactozemia, polizaharidozele etc.).
Riscurile fetale ale amniocentezei sunt reprezentate de:
- avort 1% (n caz de manevre repetate poate atinge 10%);
- chorioamniotit;
- pierderi de lichid amniotic.
Riscurile materne nu sunt neglijabile:
- hemoragii vaginale;
- izoimunizare Rh.

Puncia vilozitilor choriale (CVS) -

placenta primitiv (corionul) derivnd din
blastocist ca i embrionul, puncia vilozitilor
choriale efectuat n sptmnile 9-11 de sarcin,
(niciodat mai devreme) sub control ecografic,
transabdominal sau transcervical, permite, prin
studierea biopunctatului obinut, diagnosticul n
caz de:
boli cromozomice prin metoda FISH (pe
celule interfazice, identificndu-se eventuale mozaicuri cromozomice, precum i aneuploidii ce
intereseaz cromozomii 13, 18, 21, X, Y) sau prin PCR pentru identificarea unor marcheri specifici
cromozomici.
boli moleculare prin analiza ADN-ului ce permite fie detecia direct a mutaiei (distrofia
amiotrofic, mucoviscidoza, sindromul X fragil, sicklemia), fie detecia indirect (prin analiza de
nlnuire n hemofilie), fie combinarea ambelor metode (neurofibromatoza, coreea Huntingron,
distrofia muscular Duchenne, cancerul mamar familial, hemocromatoza).
Avantajele metodei:
- diagnostic precoce (trimestrul I de sarcin);
115
- decelarea (n 1-3% din cazuri) de mozaicuri cromozomice adevrate (dar celulele fetale pot fi
contaminate cu celulele materne ceea ce preteaz la confuzii; n plus, pot exista alte facte derutante);
se impune monitorizarea sarcinii i efectuarea cariotipului din celulele fetale obinute prin
amniocentez i cordono-centez.
Riscurile constau n:
- avort (risc superior amniocentezei);
- anomalii ale membrelor (de aceea metoda este interzis nainte de sptmna a 9-a de gestaie);
- pierderi de lichid amniotic,
- sngerri vaginale.

Placentocenteza transabdominal - este un echivalent al punciei vilozitilor coriale, util n

trimestrele II i III de sarcin n caz de oligohidraminos, cnd celelalte metode (amniocenteza,
cordiocenteza, PUBS) sunt practic contraindicate. Puncia vilozitilor choriale avnd indicaii
asemntoare amniocentezei (dar un termen diferit), s-ar impune o contrapunere amniocentez versus
CVS.

PROBLEME ETICE N TESTAREA GENETIC

Testarea genetic este una din cele mai importante aplicaii ale cunotinelor obinute din
Proiectul Genomului Uman i reprezint analiza ADN-ului, cromozomilor, proteinelor i a unor
metabolii umani pentru detectarea bolilor transmise ereditar, mutaiilor, identificarea purttorilor,
stabilirea diagnosticului sau prognosticului prenatal i clinic, monitorizarea i screeningul prenatal i al
nou-nscuilor.
Principiile eticii identificate de Comitetul de Apreciere a Riscului Genetic din USA. (CommiTTee
on Assessing Genetic Risks) se refer la dreptul la autonomie, intimitate, confidenialitate i echitate.
Pe baza acestor principii, Comitetul a emis urmtoarele recomandri:
- Screeningul nou-nscuilor nu poate fi avizat fr dovada necesitii lui pentru detecia i
tratamentul efectiv al bolilor specifice.
- Testarea copiilor se face numai n cazul bolilor pentru care exist i este necesar tratament curativ
sau preventiv.
- Confidenialitatea poate fi elucidat, prin dezvluirea diagnosticului la rude, numai cnd ne
ateptm la lipsa unei dezvluiri voluntare i numai n situaiile cnd exist o nalt probabilitate de
afectare ireversibil sau/i fatal a rudelor n lipsa acestei dezvluiri
- Falsa paternitate poate fi relevat exclusiv mamei (nu i partenerului acesteia).
- Informaia genetic, privitoare la statusul de purttor al solicitantului / consultantului nu poate fi
dezvluit partenerului fr consimmntul consultantului.
- Legislaia ar trebui astfel adoptat nct riscurile genetice s nu fie luate n considerare la luarea
deciziei de asigurare medical sau privind costul acesteia.
- Legislaia ar trebui astfel adoptat nct informaia genetic s nu poat fi accesat de ctre
angajatorul prospectiv sau existent, dect n cazul n care poate influena exercitarea atribuiilor
profesionale.

116