Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
LP Reactii Ag Ac 4 Reactii de Precipitare 1
LP Reactii Ag Ac 4 Reactii de Precipitare 1
LP IMUNOLOGIE
REACTII Ag-Ac DE PRECIPITARE
Reactiile de precipitare se pot realiza in mediu lichid sau semisolid (gel de agar).
In trecut se folosea o metode de determinare cantitativa prin masurarea cantitatii de precipitat. Se folosesc
mai multe eprubete in care se pune serul pacientului – o cantitate fixa si necunoscuta de Ac – si apoi cantitati
de Ag cunoscute, variabile, din ce in ce mai mari. Dupa formarea precipitatului eprubetele se centrifugheaza, si
concentratul obtinut din precipitat (supernatantul este scos) este masurat. Se face o curba cantitate de
precipitat functie de cantitate de Ag = curba de precipitare.
2
Curba de precipitare:
(Imuno)Nefelometrie
= o reactie de precipitare in mediu lichid in care se masoara numarul de complexe Ag-Ac prin evaluarea luminii
dispersate de acestea.
In practica se foloseste in general pentru evaluarea cantitativa unui Ag din serul pacientului prin folosirea unor
seruri specifice anti-Ag standardizate.
Peste serul pacientului in care se gaseste proteina de dozat se adauga serul specific anti-Ag; se formeaza
complexe imune. Prin cuva in care se desfasoara reactia trece o raza laser cu lungime de unda cunoscuta;
lumina este dispersata de complexele imune formate; aceasta dispersie este citita de un nefelometru si, prin
comparatie cu valori ale unor probe standard, se cuantifica cantitatea de Ag din proba de ser.
Proba se efectueaza in dinamica?
Prin acest tip de reacti se pot doza Ig (inclusiv FR), componente ale complementului, complexe imune s.a.
tipuri de protine serice ( ceruloplasmina, α1 anti-tripsina, CRP).
Sistem de difuzie: proteinele difuzeaza in lichid/semisolid (gel) in functie de marime si concentratie (cantitate).
Moleculele mari, ex. Ac, difuzeza mai greu.
Imunodifuzia simpla
= Ac este incorporat in gel iar Ag de determinat este lasat sa difuzeze in mediu
2. Prin aceeasi metoda se pot evalua in paralel 2 Ag pntru a evalua daca sunt similari sau nu?
Este o metoda calitativa ( eventual semicantitativa, grosimea bandei de precipitare putand sugera concetratia
de Ag).
Poate fi folosita pentru a diagnostica prezenta in serul pacientului a unor autoAc asocieti cu : PR, sd. Sjorgen,
LES, sclerodermie, vasculite.
Imunoelectroforeza
Apoi se face un sant in gel, paralel cu directia de migrare electroforetica, in care se pune Ac. Ag si Ac migreaza
in gel (dubla difuzie) si la locul de intalnire + echivalenta se formeaza un arc de precipitare.
Acest arc de precipitare se poate compara cu un arc de precipitare normal ( sau investigatorul experimentat
poate evalua daca arcul este corespunzator sau nu ).
In functie de aspectul arcului de precipitare se evalueaza proteina de investigat:
Proteina poate fi deficitara sau absenta: ex. deficit de α1 anti-tripsina
Proteina anormala/in exces: lanturi usoare libere λ sau κ; exces de IgG – de ex intr-un mielom multiplu
Contracurent imunoelectroforeza
Este o dubla difuzie accelerata de punerea placii cu mediul de difuzie si a reactivilor intr-un camp electric care
accelereaza difuzia; metoda calitativa.
In functie de Ag analizat se ajusteaza pH-ul mediului ( de obicei > 8?).
Ag migreaza spre anod (A+) si Ac spre catod (C-).
In zona de echivalenta se formeaza un arc de precipitare.
Se poate folosi pentru detectia unor autoAc ( impotriva ENA = extractable nuclear antigens; Ac anti-RNP
[ribonucleoprotein], Ac anti Sm [Smith] – apar in LES), Ac impotriva unor Ag bacteriene, unor Ag bacteriene,
αfetoproteina?
Electrforeza-rocket
Combina migrarea in camp electric cu imunodifuzia simpla.
Metoda cantitativa, pentru Ag incarcate negativ.
Mediul contine (pe langa gerul de agar ) Ac specifici pentru Ag de dozat. Se pune proba biologica de evaluat
intr-o gaura standard care se face in gel. Se pune apoi in camp electric. Ag difuzeaza in gel, difuzie care e
accelerata de campul electric. La locul de echivalenta se formeaza un arc de precipitare in forma de racheta.
Inaltimea maxima a acestei “rachete” este proportionala cu concentratia Ag in proba de evaluat.
Limitele probei: nu poate fi folosita pentru dozarea imunoglobulinelor; nu poate fi masurat decat un singur
Ag/proba.