Translated from English to Romanian - www.onlinedoctranslator.

com

Semnalizarea LP Cellular Ca și indicatorii Ca

Dr. Andreas Rinne, PhD

LP 20.12.2022
 Contur
• Unele procese biologice reglate de semnale de Ca
• Tipuri de indicatori chimici de Ca

• Aplicații industriale ale măsurătorilor Ca

• Experimente pe care le vom realiza pe parcursul acestui LP
Unele procese biologice care sunt
reglementate de Ca2+
Contractiile musculare necesita Ca2+

Contractie musculara:cu cât este mai mare Ca2+, cu atât contracția este mai puternică
 Alte procese dependente de Ca

Coagularea sangelui exocitoză Reglarea ciclului celular

activarea trombocitelor fuziunea veziculelor cu tranziții între
și formarea fibrinei membrană fazele ciclului celular
este dependent de Ca este dependent de Ca sunt induse de semnalele de Ca
Homeostazia Ca celular
 Dinamica unui semnal intracelular de Ca
1

1 2

PMCA: Membrană plasmatică Ca2+ATPaza SERCA:

Reticulul sarcoplasmic-/endoplasmatic Ca2+ATPaza
Cum se măsoară Ca2+?
 Diferite metode de măsurare a Ca2+
1. În soluții: 2. În celule: Ca2+indicatori

Indicator de culoare:
Modificări ale acidului carboncarboxilic
culoarea sa când Ca2+leagă un Ca fluorescent2+colorant
în celule HEK 293

Un intracelularCa2+colorant:
modificări ale fluorescenței

Ca2+-electrod selectiv (probe

clinice): potențiometrice,
diferența de potențial dintre
probă și un Ca cunoscut2+soluţie
Proprietățile spectrale ale indicatorilor fluorescenți de Ca

1) modificarea intensității 2) Schimbarea profilului de emisie (b)

fluorescenței în același timp și modificarea intensității (c)
lungime de unda (a) coloranți („ratiometrici”)
coloranți („intensiometrici”)
Proprietățile spectrale ale colorantului Ca Fura-2
Măsurarea rationometrică a Fura-2

Raport Fura (F1/F2)

➢ Graficul de date:axa x: timp,axa y:raportul F1/F2
Cum se introduce Fura-2 în celule
 Fura-2 și Fura-2-AM

Sarea Fura-2: Fura-2-AM(ester acetoximetilic):

membrana celularaimpermeabil, membrana celularapermeabil,

pentru măsurători în soluții pentru măsurători intracelulare
Cum să „încarci” celulele cu un colorant de Ca
Parte practică a LP-ului
 Scanare de excitație

+ Ca2+ - Ca2+

➢ Utilizarea unui monocromator pentru a excita proba pe o gamă de lungimi de

undă diferite

➢ fluorescența emisă este măsurată pentru fiecare punct de date.

➢ Graficul de date:axa x: lungime de undă de excitație,axa y:intensitatea fluorescenței emise

Măsurarea rationometrică a Fura-2

Raport Fura (F1/F2)

➢ Graficul de date:axa x: timp,axa y:raportul F1/F2
Aplicații industriale ale Ca2+indicatori
 Intrare Ca operată în magazin (SOCE)

ATP: adenozin trifosfat PLC:

fosfolipaza C
PIP2:Fosfatidilinozitol bifosfat IP3:
Inozitol trifosfat IP3-RIP3receptor DAG:
diacilglicerol

ER: Reticul endoplasmatic

 Test de mobilizare a calciului (screening de droguri)

Fura-2

Substanța B Pot fi utilizate teste de mobilizare a Ca

➢ pentru farmacologia receptorului (ilustrat)

Fluorescenţă

➢ pentru a testa medicamentele pentru canalele ionice

Substanța A
➢ pentru a testa activitatea enzimatică etc.

➢ Aceste teste sunt scalabile pentru platformele

industriale de screening de mare debit (HTS).
 Experimente partea 1
Proprietățile spectrale ale Fura-2

Spectrele de excitare ale Fura-2 folosind diferite Ca2+concentratii.

Aceste scanări vor fi efectuate cu colorant în soluție (sare Fura-2).

+ Ca2+ - Ca2+
 Experimentele partea 2
2) Măsurătorile Ca intracelular2+semnale

a) Încărcarea fibroblastelor cu Fura-2-AM

b) Măsurarea ratiometrică în timp real a Ca intracelular2+semnale.