1.

Introducere

O cauză importantă a bolilor non-comunicabie (NCD) OMDAND MIDDLENS Venituri

tropicale Țările sunt contaminarea micotoxinei a rooziilor în timpul infecției fungice de
depozitare a culturilor globale de capse cum ar fi grâul, orezul și porumbul în toate etapele lui
Thei Browthare devenind din ce în ce mai frecvente din cauza schimbărilor climatice și a
practicilor de stocare necorespunzătoare. Un exemplu de boală fungică semnificativă focar
este cel al bubului karnal, care este bolnav de isasoilere și avionul cauzată de Tilletia
(Neovossia Ndica, și a descoperit I931 conform evaluării Torisk în diferite țări, altele decât
apariția comună, la alimentele care conțin grâu, preocupări

Peste dinamica și naturalcooccurgenta arțioase alte micotoxine în boabe de căldură sunt

Creșterea 13 51. Unele studii au găsit efecte antagoniste sau svnergice asupra liniilor sau
animalelor celulare subiecte, în funcție de combinația de micotoxine de detectare
instrumentală ophisticată,

Utilizarea LGMS LCMSMS UPLGMSMS RLG QTOF MS, și UHPLC ESI-Q / OGITRAP,
sunt instrumente puternice în identificarea unor micotoxine neregulate, emergente și
mascate, cu toate acestea, astfel de metode sunt incomode expertiză costisitoare și reaire,
făcând acești netezi nepractici locații la distanță. În contrast, utilizarea benzii de curgere
laterală (LFS) Techbpgolosy câștigă popularitate înSpitalele, fermele, granarii și agențiile de
inspecție ca o platformă alternativă de screening analitică Datorită simplității, rapidității și
rentabilității metodei. Stripul imunotestelor a fost consideră o metodă puternică de screening
pentru detectarea pesticidelor, a antibioticelor, a metalelor grele, biomarkeri și mpcotoxine,
făcându-le neprețuit în protejarea sănătății publice Amenințări de mediu O varietate de
materiale, inclusiv nanoparticule vizuale (Aunps, AU-PT Core-carcasă, carbon
nanoparticulele și margele magnetice) și nanoparticulele de fluorescență (polistirenul UE
(L11) -doped Nanoparticulele, microsferele fluorescente, punctele cuantice), au fost utilizate
ca sonde sau sporire a semnalului reactivi în imunoteste. Printre acestea, Aunps au fost
utilizate pe scară largă și au multe avantaj În sistemul LFS, în afară de ușurința conjugării cu
anticorpi prin interacțiune fizică, banda ar putea fi citite de ochii goi (metoda semi-
cantitativă, inclusiv valorile și raportul dintre linia de testare și linia de control) sau analiza
instrumentală portabilă (metoda cantitativă). Până acum, nanoparticulele de aur (Aunps) -
Based LFS a fost comercializat cu succes datorită stabilității sale și lizibilității ochilor
Rezultatele detectării. Cu toate acestea, având în vedere cerințele actuale ale pieței pentru
detectarea multiplă a analitului, a acestora Detectarea directă și modelele de inspecție vizuale
calitative sunt rapid inadecvate.Recent, mai multă atenție sa concentrat asupra acestui lucru.
De exemplu, în domeniul diagnosticului Boli non-comunice, biomarkeri moleculari multipli
au fost utilizați pentru a detecta cu succes

Cancerul solid și cheagurile de sânge în domeniul monitorizării calității alimentelor,

imunoteste-urilor cu specificitate largă s-au dovedit a fi eficiente în detectarea simultană a
micotoxinelor multiple. O sumă @ Mary de studii legate de analiza multi-țintă prin tehnici
imunochimice au fost prezentate în mai multe recenzii și unele cercetări pentru detectarea
micotoxinei sunt enumerate în tabelul 1

În ultimii ani, eforturile mai mari și considerabile au fost îndreptate spre dezvoltarea
"inteligentă Analiza "inovații care angajează cititorilor de testare digitală autoturisme, cum ar
fi Google Sticlă și cititor bazat pe smartphone, pentru a efectua atât analiza calitativă cât și
cea cantitativă a LES cel mai mult Platformele comune utilizate în astfel de aplicații au fost
sub formă de desktop de mare viteză cititorii sau cititorii bazați pe telefonul mobil. Cu toate
acestea, aceste platforme nu oferă abilitatea de a procesați mai multe obiective Teste simultan
și auto @ Matic, folosind o singură bandă, prin urmare, necesitând analiză mai obositoare
prin calcule cu un computer sau o inspecție vizuală. Ca rezultat, există o cerere crescândă de
dezvoltare a benzilor inteligente multi-cantitative împreună cu "Smart

Analiza "Platforme și protocoale, solicitând o stabilitate îmbunătățită a instrumentului,

uniformă și foarte Etapele de pre-tratare a probelor eficiente, game dinamice largi,
trasabilitatea probelor și datele Management. Aici, am dezvoltat o platformă de cloud
reglabilă în canal pentru mai multe site-uri detectarea micotoxinei, cu avantajele
highisensibilității, detectarea multiplexată și proba-la răspunsul la capacitatea. Utilizarea
senzorilor optici, conectivitate wireless continuă, cod QR tehnologie și accesoriu deschis
Android, am stabilit o platformă de testare cu mai multe direcții, cu Avantajele operației de
simplitate, interconnectivitate și highthroughput. Am testat acest lucru Platformă care
utilizează teste repad pentru AFB1, FB1, T2, Don și Zen. Ca carcinogeni umani, mult Testul
de micotoxină este utilizat în mod obișnuit pentru calitatea de clasificare și monitorizarea
poluării biologice a culturilor, ca precum Supravegherea Sănătății, credem că această bandă
inteligentă multi-mycotoxină este un instrument valoros pentru Formularea politicilor de
reglementare, proiectarea fonturilor de stocare și îmbunătățirea tehnicilor pentru reducere
Prezența acestor cotexine @ în culturile din locații îndepărtate sau zone de carantină

2. Secțiunea experimentală

2.1. Reactivi și aparate

Anticorpul monoclonal anti-AFB1, anticorp monoclonal anti-FB1, anticorp monocional anti-

2, anti-T-2 Anticorpul monoclonal, anticorpul monoclonal anticorp și antigenul de acoperire
(AFB1-BSA, FB1-BSA, T2-BSA, DON-BSA și ZEN-BSA) au fost achiziționate de la
Jiangsu Meizheng Biotechnology Co. Ltd. Igg anti-șoarece de capră (H + Anticorp
secundar.Was achiziționat de la Jackson Inmunoresearch Inc.Pa, SUA) Standard analitic
(AFB1, F81, T 2, Don, și Zen) au fost achiziționate de la Sigma Chemical Compania 1. Ouis,
Mo, SUA). Bovine Serum Albumin (8SA) au fost achiziționate de la Sigma Aldrich (U5A)
Nanoparticulele de aur de douăzeci de nm (Aunps) au fost sintetizate așa cum este descris
înainte de 1431 natural Probele de grâu contaminate au fost achiziționate de la Beijing
Meizherg Testing Co Ltd (Beijing, China) Foaia de polivinilclorură, tamponul de probă și
tamponul de absorbție au fost achiziționate de la ELT Biotechnology Co, Ltd. (Shanghai,
China). Nitroceluloza MERM @ Brane (membrană NC, Unizart CN140) a fost obținut de la
Sartorius Stegdim Biotech Gmbi mașina de tăiat (Z02002) și Distribuirea Pilatformului (HM
3030) au fost obținute de la Shanghai Kinbio Tech Co, TD

2.2. Pregătirea mabiectelor marcate cu Aunp

Caracterizarea anticorpului monoclonal (MABJ: Prepararea UAB-urilor marcate cu Aunp a

fost efectuată conform unei metode descrise înainte de 49]. Într-o conjugare tipică, 20-60 UL
de 0,1 m K2C03 a fost utilizat pentru a ajusta pH-ul celor 20 m Aunps (Figura S1) la Fayar
interacțiunea electrostatică.

În mod tipic, pentru 10 ml de soluție Aunps într-un tub de centrifugare de 50 ml, s-a utilizat
30 l K2C03. O alicotă de 0,1 me mabe cu o convare de 0,2 mg / ml (diluat prin soluție
tampon borat de pH 8,0) a fost adăugat prin picurare. Amestecul a fost incubat timp de 1 oră
sub agitare constantă (500 rpm) la 25 c pentru Fizionitatea de anticorpi. Pentru a stabiliza și a
preveni adsorbția nespecifică, au fost particulele modificate ulterior blocat prin adăugarea a 2
ml de soluție de blocare: 10% BSA în PBS timp de 2 ore sub A tremurarea constantă (500
rpm) la 25 ° C. Apoi, mAb marcat cu Aunp a fost centrifugată la 10.000 rpm 30 minute.
După decantarea supernatantului, particulele au fost în cele din urmă dizolvate în tampon de
stocare de 2 ml (0,1 M pH 7,2 PBS conținând O.5% BSA, 10% zaharoză, 0,5% PVP 10 kDa,
0,1% Tween 20). Cinci Conjugari (Aunp etichetate anticorp anti-AFB1, anticorp anti-FB1
Aunpelabel, etichetate cu Aunp anticorpul anti-2, anticorpul anti-Don, anticorpul anti-Don,
anticorpul anti-ZEND marcat cu Aunp), au fost toate Pregătit în funcție de proces și
amestecat.togeher. Mixilurile au fost pipetate în godeuri de microplaci de 96 de ani (50L per
val) și li s-au uscat cu un uscător de îngheț în vid. Particulele uscate În puțuri au fost imediat
sigilate pentru a proteja împotriva umidității.

2.3. Fabricarea benzii de curgere laterală multiplex

După cum se arată în figura 1b, benzile de debit laterale multiplex (Malfss) au fost fabricate
prin asamblarea NC Membrană, tampon de probă, tampon absorbant și strat de card adeziv
PVC pe strat. AFB1-BSA, FB1-BSA, T-2-BSA, Dongbssa, Zen-BSA și LGG mouse-ul au
fost pulverizate pe membrana de nitroceluloză pentru a forma Liniile de testare (linia T 1,
linia T2, T Linia 3, T Linia T 4 și T 5, respectiv) și linia de control (C Linie) cu 1,0 UL / cm
de fiecare MAb pe linie, utilizând o platformă de distribuire HM 3030. Distanta între fiecare
linie a fost de 3 mm. Apoi, cardul asamblat a fost uscat într-un cuptor de uscare la 37 EC
timp de 6 ore.

În cele din urmă, cardul asamblat a fost tăiat în benzi cu o lățime de 3,8 mm și depozitat într-
un dulap uscat la temperatura camerei. După cum se specifică în GB 2761-2017, limita AFB1
în grâu și făină de grâu este de 5 El / ke, 1000 el / kg pentru Don, și 60 ug / kg pentru Zen.
Nivelurile maxime ale FB (suma FB1 și FB2)

În produsul de porumb și porumb sunt de la 200 la 2000 SUA / kg, după cum se specifică în
CE nr. 1881/2006. La fel de Specificat în RO 13078-2017, T-2 din furajele pentru animale
este limitat la cel mult 0,5 mg / kg.

În mod similar, concentrația altor mycoatoxine în diferite culturi este, de asemenea, limitată.
După cum se poate vedea Standardele active, diferite micotoxine pot exista simultan în
aceeași matrice alimentară. Ochratoxinele (OTA) și T-2 nu au fost detectate în grâul
contaminat natural achiziționat pentru acest lucru experiment. Încă mai alegem T-2 ca o țintă
de testare în experimentele ulterioare. Pentru a efectua un an Evaluarea generală a calității
grâului, cinci micotoxine comune (AFB1, FB1, T-2, Don și Zen) au fost selectate.

2.4. Principiul platformei de analiză inteligentă pentru Malfss

Proiectele mai complexe și mai compacte pentru Malfss au fost reportate în documentele
noastre anterioare și de către alți autori. În scopul detecției multi-țintă, cel mai practic design
este de a ave mai multe inuri pe bandă [15,18,21,23,27,50]. Un dispozitiv ideal multiplexat pe
site-ul are nevoie demonstrează performanțe ridicate ale senzorilor cu complexitate scăzută a
sistemului și multiplexare ridicată Performanța 120. Cu toate acestea, există încă o lipsă de
platforme eficiente concepute pentru fluxul lateral imunoteste, care augmenta performanța
unor astfel de cloturi. Aici, am proiectat un portabil și Platforma de analiză inteligentă
multiplexată acceptată de cloud așa cum se arată în figura 1a. Amestecat și uscat Sondele
Anunps în godeurile microplăciului sunt responsabile pentru detectarea celor cinci
micotoxine (figura 1b și o) atunci când o soluție de probă sau o soluție standard (de obicei,
200 de volum în volum) care conține un nivel ridicat Conicentrarea analitilor se adaugă la
godeu, analiții țintă (AFB1, FB1, T-2, Don, sau Zen sau toate acestea) ar lega în mod specific
în mod special la sondele Aunps în puț, formând analit-ul Aunps conjugate atunci, malfsa
asamblată ar fi scufundată în puț și aruncarea conjugate vwould trece prin membrana NC prin
forțele capilare. În liniile de testare (linia T 1, Tine 2, Tline 3, T Linia 4 și T Lines), sondele
la burse orientate nu ar fi capturate de acoperire Antigen (AFPB1-BSA, FB1-BSA, T-2-BSA,
DON-BSA și ZENDBSA) imobilizat în membrana NC. Analit-analit ÇonjubGatele ar
reacționa cu lg-ul anti-șoarece de capră și ar fi prins în linia de control (figura 1b și c). Dacă
analiții sunt absenți în sobluția eșantionului, toate sondele de particule ar fi curge prin liniile
de testare, reacționează cu antigene de acoperire și formează complexul Aunps-anticorp-
toxin-BSA, în timp ce sondele restul de exces vor fi capturate pe linia de control. Când a fost
soluția pe deplin răi pe bandă timp de 10 minute, intensitatea optică de la Malfss ar putea fi
citită de către Platformă de analiză inteligentă. Pe partea superioară a cititorului, zona de
operare este asociată cu AndroidSistemul, pe partea dreaptă a cititorului este un slot pentru
plasarea spațiului de stocare, conectat cu un motor de pasare.

Detaliile interne ale platformei de analiză inteligentă sunt afișate în figura 1D, integrând
sistemul optic și

Motorul de pasare. Ca principala parte funcțională a cititorului, sistemul opțional este

conceput optim

Pentru a se potrivi cu laserul de excitație, implicând un LED pentru a produce o lumină de

535 nm. Platforma este capabilă să profite
două (o linie de testare și o linie de control) la șase linii de detectare (cinci linii de testare și o
linie de control)

Diferitele curbe standard ar putea fi introduse prin modul de scanare a codului QR.

2.5. Mycotoxine cuantificare în grâu de către Malfss

În primul rând, probele de grâu negative confirmate au fost spicate cu o seflges de

concentrații de

Mycotoxine ca follaws: AFB1 (0, 0,1, 02, 0,5, 10, 2,0 și 5,0 ng / ml), FB1 (0, 1.0, 2.0, 5.0,
10.0, 20.0,

și 50.0 de / ml), T-2 {0,0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0 și 25,0 din / ml), DON (0,10.0, 20.0, 100.0,
200.0, 200.0,

și 500,0 ng / ml) și Zen (0, 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 20,0 și 50,0 ng / ml). Pentru a elimina

Efectele negative ale soluțiilor acide și organice asupra stabilității conjugării și anticorpului
Ntigen

Interacțiunea, făina de grâu de 5,0 g a fost extrasă cu 20 ml acetofnitril / apă (80:20, v / v)

fără un cetic

acid. După extracție și centrifugare, 1 ml din stratul superior a fost transferat la o centrifugă
de 10 ml

tub și uscat cu grijă sub un flux de azot. În cele din urmă, s-au adăugat 5 ml de PBST pentru a
dizolva

Eșantionul și 200 UL de soluția rezultată au fost utilizate pentru detectarea callFS așa cum s-a
descris mai sus. În

au fost înregistrate și utilizate

construi cinci curbe standard. Informațiile au fost apoi transformate în coduri de bare
bidimensionale

pe platforma de management al instanței de alimente și ar putea fi citită de platforma

inteligentă. Fiecare grâu
eșantionul a fost analizat de metoda de de trei ori.

2.6. Mycotoxin cuantificare în grâu de AB SCIEX Tripletof S600 Sistem

Triple TOF LE / MS / MS a fost utilizat pentru a stabili o metodă de cuantificare a co-

apariției a cinci

Mycotoxine în boabe de grâu contaminate natural. În tabelul S1, parametrii instrumentului

din

Sunt enumerate condiții cromatografice și MS pentru QTRAP5600 LC-MS / MS. În primul

rând, grâul era

omogenizată de un miller timp de 1 min și sită până la 20 mesh. Micotoxinele din grâul
zdrobit

Proba au fost extrase Acücording la metoda recomandată de SCIEX cu unele modificări [8].

În mod specific, 5,0 8 din făină de grâu a fost extrasă cu 20 ml acetopnitril / apă / acid acetic
(80: 19: 1,

v / v / v sub agitare viguroasă timp de 30 de minute. Apoi, eșantionul a fost centrifugat la

6000 rpm timp de 10 minute.

Pentru analiza instrumentală, 0,5 ml supernatant a fost diluat cu 0,5 ml apă, amestecat și

centrifugat la 8000 rpm timp de 5 minute la 4 ° C. Supernatantul (0,8 ml) a fost apoi trecut
printr-un 0,22

Filtru seringa UM Apoi, eșantionul a fost rulat prin setarea LC-MS / MS conform tabelului
Si.

Probele de grâu fără cantități detectabile din cele cinci cotoxinele mele @ au fost considerate
necompletate

matricea. Volumele diferite ale soluției standard de lucru au fost spiked pentru extractele de
grâu goale la

Stabilirea unei calibrări externe standard a curbei de matrice a fost condusă utilizând cel puțin
cinci

Standarde potrivite cu matrice pentru a compensa efectele matricei. Achiziția de date a fost
efectuată utilizând
SCIEX SOFT și cuantificarea a fost efectuată utilizând pachetul software multiplu.

Un total de 10 eșantioane de grâu au fost analizate prin metoda de mai sus și au fost repetate
experimentele

de trei ori. Valoarea medie a semnalului gol (YBlank) și deviația standard corespunzătoare

(sblank) au fost obținute prin măsurarea a 10 blanuri independente de probă. Limita de

detecție (LOD) este

estimat în mod obișnuit prin utilizarea următoarei ecuații (51): YLOD = YBLANK +
3SBLANK

2.7. Compararea rezultatelor obținute prin MFLS și LC-MS / MS

Sensibilitatea și specificitatea metodei LC-MS / MS și a metodei MLFSS au fost comparate.

În

Rezultatele analizelor OT necunoscute eșantioane de grâu prin aceste două metode au fost
evaluate.

2.8. Măsuri de siguranță

Mycotoxinele sunt cancerigene, genotoxice și teratogene la oameni și animale. Thetore

Direct.

Expunerea și contaminarea laboratorului trebuie evitată. Cercetătorii ar trebui să poarte haina

de laborator,

Ochelari de protecție, mănuși, muffle și mască de față. Toate experimentele au fost efectuate
în fum

Hood.

3. Rezultate si discutii

3.1. Optimizarea callfsei aici, Aunps cu un diametru de aproximativ 20 nm a fost aleasă din
cauza bunului

Stabilitate și sensibilitate comparativ cu alte dimensiuni disponibile în comerț. Cinci

Didificați Anunps
mAb-urile conjugate au fost amestecate. Torether și li s-au uscat în microplăci de 96 de
godeuri, în loc de acoperire

pe Seniu @ Poarta de porți, pentru o mai bună sensibilitate și stabilitate a callfsei. Ca debit de
particule prin capilare

acțiunea este în mod obișnuit împiedicată de multi-linii pe o bandă, 15 min este recomandat
TOR Sutticient

dezvoltarea unei infrente mai stabile. În plus, a fost selectat 200 u de extract de probă

dizolvați mAb-urile conjugate mixte, deoarece un volum mai mic ar fi invizibil împotriva
celor puternici

Contextul Soler și poate duce la o dezvoltare de codificare incorporată. Sartorius CN 140 a

fost aleasă

pentru funcționalitatea sa bună în comparație cu celelalte membrane NC (Sartorius CN95 și

Millipore

180). Alți parametri au fost, de asemenea, optimizați în funcție de nivelul maxim al

micotoxinelor în

grâu și sensibilitatea anticorpilor. Concentrația antigenelor acoperite pulverizată pe NC

Membrană (AFB1-BSA, 0,2 mg / ml, FB1-BSA, O.25 mg / ml, T-2-BSA, 0,3 ml, DON-BSA,
0,5 ml,

și Zen-BSA, 0,34 mg / ml) și IgG anti-șoarece de capră (0,2 mg / ml) a fost optimizată după
percentlarea

Experimente preliminare. Concentrația de anticorpi a fost de 8 gg / ml pentru Aunp-etichetate

anti-AFB1 Mar,

anti-FBL GMAB, anti-T-2 mar, anti-don mAb și anti-Zen Mar separat. Aici, 0,5 mg / ml
Don-

BSA a fost utilizată pentru a obține o intensitate mai puternică a liniei T 4 în comparație cu
alte linii T, permițând linia T 4

Pentru a fi vizibil chiar și atunci când 1000 H8 / kg Don a fost prezent în grâu (nivelul maxim
de Don în
Grâul a fost de 1000 și / kg).

3.2. Optimizarea protocolului de pregătire a probelor

Există multe protocoale de pregătire a probelor raportate. Acetonitril, metanol și apă sunt

Mos ... comuni ... reactivi utilizați pentru extractarea culturilor de micotoxine. Aici,

Acetonitril / apa / acid acetic (80: 19: 1, v / v / v) a fost recomandat de SCIEX și a fost de
asemenea prezentat

Pentru a fi eficient conform numeroaselor studii anterioare și stanbdardizării naționale 18,52].

Cu toate acestea, acest lucru

Extractul care conține acid acetic nu este potrivit pentru callfss cu o diluție simplă. În
preliminare

experimente, am constatat că particulele au fost agitate pe tampoanele de probă indusă de

acidul

Soluții extraordinare. Acetonitril / apă (80:20, v / v) a fost, prin urmare, utilizat în prepararea
eșantionului

Protocolul pentru Malfss, iar soluționarea de extracție s-a uscat sub curent de azot pentru a
îndepărta

reactiv organic. În cele din urmă, 5 ml PBST a fost utilizat pentru a asigura cea mai mică
interferență de matrice.

3.3. Determinarea limitelor concentrațiilor de detectare și inhibare a callfsei

Probele confirmate de grâu negativ au fost spikate cu o serie de concentrații de micotoxine

și detectate de către Malfss. Reslit-urile pentru analiții diferență sunt prezentate în figura 2a.
Dupa cum

concentrația de mysebtoxine în grâu a crescut, intensitățile de culoare ale tuturor liniilor T au

scăzut

treptat. Această modificare ar putea fi citită de platforma de analiză inteligentă și datele ar

putea fi transferate
într-o imagine QR. Această conversie a fost făcută pe platforma de management al instanței
de alimente. Informatia

Despre banda multiplexă, inclusiv numele probei detectabile, tipurile de micotoxine,

concentrația

de micotoxine și intensitatea culorii corespunzătoare, factorul de diluare, metoda de montare

și poziția

din linia C sunt introduse în platforma de management și apoi a fost creat un cod QR. Acest

cod, stocarea informațiilor despre curbele standard, ar putea fi citită de platforma inteligentă
și folosită pentru

Detectarea probelor de grâu necunoscut. Lodul pentru AFB1, FB1, T-2, DON și ZEN au fost
4, 20, 10, 200,

și 40 h / kg. Factorul de diluare nu a putut fi mai mare ca lodul AFB1 și Zen sunt doar
enumiați

Detectați-le în grâu cu concentrație în jurul valorii de niveluri maxime. Desigur, pretratarea

Procesul ar putea fi ajustat pentru a îmbunătăți sensibilitatea la eșantioane cu o concentrație

scăzută a

Mycotoxine. Din figura 2a, valorile vizuale de tăiere obținute prin ochi goi au fost de 20,
1000, 200, 4000,

și 400 hs / kg pentru AFB1, FB1, T-2, Don și Zen. După cum sa arătat în Tabelul 1, lodul
obținut sau tăiat

Valorile pentru cinci micotoxine au fost comparabile cu cele raportate de unii Reüsearchers
31-34]: Acolo

sunt, de asemenea, unele rezultate cu o mai bună sensibilitate obținută în soluție standard sau
eșantioane de cultură [27-301

Unele metode au valori bune de tăiat în condiții optimizate, totuși, rezultatele au fost doar

calitativ, cu discriminare negativă și pozitivă

După cum se poate observa din figura 26, platforma era mai sensibilă decât ochiul liber la
schimbare
Intensitatea solilor. Sub intensitatea de 2200 (zona de fundal roșu), solorul de cinci linii t

Nu fi văzut vizual, dar platforma a reușit să detecteze analitul. Interesant, minimul

intensitatea la care T Linia 1 ar putea detecta AFB1 a fost de 100, în timp ce celelalte patru
linii posedate

intensitatea minimă detectabilă de 1800. Aceste rezultate indică o diferență în meniul din
spatele

Diferitele dispariția conducătorilor, eventual datorită selecției antigenului de acoperire și a

sensibilității

din anticorpi

3.4. Determinarea reactivității încrucișate

Pentru a se asigura că nu există o reactivitate încrucișată (CR) între cele cinci micotoxine, o
singură etichetă a lui Aunp

MAL (Aunp-AFB1 AL sau anti-FB1 mAb sau anti-T-2 mak sau anti-don mAb sau anti-zen

mAb a fost folosit. După cum se arată în fig. 3, numai linia T corespunzătoare a apărut fără
nici o linie roșie

alte micotoxine. Aceasta confirmă faptul că antizbodii au fost specifice analizelor testate și
acolo

nu a fost oficialitate între ei. Pe de altă parte, după cum se arată în tabelul de 2 $, am evaluat

reactivitatea încrucișată față de alte micotoxine prin ELISA conform unei metode anterioare
[53] și găsită

că majoritatea anticorpilor, în special mAb anti-ZEN, au prezentat o reactivitate transversală

ridicată la clasă

analogi specifici [231. Pentru Zen și analogii săi, SIR înalte au fost observate cu alfa-zal
(104,66),

beta-zal {114%), alfa-zol (146,2%), beta-zol [86,7%) și Zeralananons (259,5%). Pentru AFS,
înalt
SCR pentru AFB2 (60%), dar s-au observat CRS scăzut pentru AFG1, AFG2 și AFM1.
Pentru Don și analogii săi,

S-au observat și CRS cu 3 AC-Don (70%), dar mai puțin de 1% pentru 15-AC-Don și
Nivalenol.

Anti-FB1 Gmah are 70% CR pentru FB3 și Mab anti-T-2 au 118% CR pentru HT-2.
Mycotoxinele mascate

nu au fost testate. Din rezultate, am observat că anticorpii utilizați în dezvoltarea

Malfss au fost specifice de clasă. În aplicarea determinării multi-micotoxinei, metoda este

valoroasă

într-o oarecare măsură pentru screeningul probelor de grâu care conțin analogi de micotoxină.

3.5. Aplicarea metodei Malfss pentru screeningul grâului contaminat natural

Analiza a 10 probele de grâu contaminate natural a fost efectuată utilizând cartonașul

dezvoltat

Metodă și rezultatele au fost prezentate în tabelul 2. Valorile lodului ale Malfss pentru AFB1,
FB1, T-2, DON și

Zen în grâu au fost de 4, 20, 10, 200 și 40 H8 / kg, care sunt mai mici decât cele admise
maxime

niveluri în conformitate cu reglementările. Pe de altă parte, rezultatele din figura 4 pot fi

comparate cu cele din Fig

2 și estimați contaminarea cu micotoxină în probele de grâu. Similare. Pentru benzi de testare

pH, calitativ

Estimarea va fi valoroasă ca o metodă de verificare senzorială.

Pentru detectarea AFB1 în 10 eșantioane, putem constata că intensitatea liniei T 1 a

eșantionului 1 și 4 a fost

Aproape de rezultatele 1 ng / ml de AFB1 (care este egal cu 20 g / kg AFB1 în grâu conform

Factorul de diluare și conversia unității). Astfel, AFB1 în proba 1 și 4 ar putea fi estimată la

20 HE / kg la
cel mai puţin. Apoi AFB1 în proba 3 și 6 ar putea fi, de asemenea, estimată, variind de la 10 e
/ ke la 20 HE / KE. În

Restul eșantioanelor poate fi considerat negativ. Pentru detectarea FB1, intensitatea liniei 2 a
eșantionului 4

și 6 era aproape de rezultatul a 10 ng / ml de FB1 (care este egal cu 200 hg / kg FB1 în grâu).
Eșantionul 1.

ar putea avea o ușoară contaminare FB1, iar restul eșantioanelor pot fi considerate negative.
Pentru T-2

Detectarea, concentrația de T-2 în grâu se presupune a fi foarte scăzută. Pentru detectarea

Don, o serie

de concentrații (2000, 1000, 200 și 200 HE / KB) pot fi eventual atribuite eșantionului 8, 410
și

6. Pentru detectarea Zen, eșantionul 4 ar putea avea mai mult de 100 HE / kg Zen și mai puțin
decât cel pentru eșantionul 6.

În comparație cu rezultatele obținute de platforma inteligentă, datele de estimare au fost în

concordanță cu

că în Tabelul 2. Aceasta indică faptul că banda multiplexă ar putea fi utilizată

in.particular.Situații atunci când numai

Ochii liberi sunt disponibili.

3.6. Ocurrența micotoxinelor în grâu analizată de LC-MS / MS

Co-apariția micotoxinelor a ridicat preocupări datorită posibilei efecte sinergice. Mulți

Metodele instrumentale au fost dezvoltate și au arătat o bună sensibilitate și o mare viteză

Sarabați: În această lucrare, am cuantificat concentrația de miocatoxine în mod natural

Probele de grâu contaminate. Calibrarea externă a fost efectuată și aceste standarde de lucru
(Zen,

FB1 și T-2: 0,0,5, 1, 2,5, 10, 20, 50, 100 și 200 ng / ml, AFB1: 0,0,25, 0,5, 1, 2,5, 5, 10, 25,
50 , 100.
de la / m, acolo: 0, 0,2, 0,5, 1,2, 5, 10, 20, 50, 100, 100 de / ml) au fost produse prin extracte
de grâu spațios

cu volume diferite de soluție standard de lucru. După cum se arată în figura $ 2, caracteristica
MS / MS

model de ioni de fragmente din bibliotecă se potrivesc bine cu spectrul experimental MS /

MS,

condamnarea identităților lor, ionii de precursori și de produs au fost în concordanță cu alții

Papers publicate [8. După cum se arată în figura 5, a fost coeficientul de regresie (R2) de
cinci curbe standard

Toate valorile de 0,999 și LOD au variat de la 0,12 la 3,4 ng / ml cea mai mică valoare a
lodului pentru AFB1

a fost 0,12 NE / ml Valorile LD în grâu au fost calculate a fi 0,96, 18,4, 2,48, 27,2 și 7,28
HE / kg

Pentru AFB1, FB1, T-2, DON și ZEN. Având în vedere factorul de diluare și nici o coloană
curată folosită în noi

Experimentul, rezultatele LOD obținute au fost comparabile cu cele obținute de alte raportate

Metode 8,9]. Rezultatele analizei probelor de grâu utilizând această metodă nou dezvoltată
pentru

Identificarea micotoxinelor în grâul contaminat natural este prezentată în tabelul 2 și

comparată

cu identificarea și cuantificarea LC-MS / MS. În eșantionul de grâu numărul 4, AFB1, FB1,

DON, și

Zen a fost găsit simultanousty (18,8, 141,9, 396 și, respectiv, 123,8 h / kg) și

Concentrațiile AFB1 și ZEN au depășit nivelurile maxime prevăzute în Regulamentul

Comisiei

(De exemplu, nr. 1881/2006. Concentrația de don în eșantionul de grâu numărul 8 a fost
considerată a fi 1401.8
HBKE, care nu sunt adecvate pentru consumul uman direct sau pentru utilizarea ca ingredient
în produsele alimentare.

Concentrarea celor cinci micotoxine au fost toate mai mici decât lodulul din proba de grâu
numărul 2, 5,

7 și 9, care au fost considerate eșantioane negative. În plus, toxina T-2 nu a fost detectată în

oricare dintre probele de grâu.

3.7. Comparația de MFLS și LC-MS / MS pentru detectarea de grâu a micotoxinelor

Pentru detectarea unică a micotoxinei, valorile LOD sunt de obicei comparabile sau chiar mai
bune decât cele ale

Analiza instrumentală așa cum se arată în tabelul 2. În contextul detectării simultane,

pretratarea

Procesul de cinci micotoxine este realizat împreună, iar valorile Lod de Malfss sunt toate mai
mari decât

cea a analizei instrumentale, cu excepția faptului că a FB1. În ansamblu, pentru 50 de date de

concentrare a micotaxinei

obținută de către Mlfss, 37 dintre ele sunt sub limita de detecție, care a fost în concordanță cu
LC-MS / MS

măsurători. Pentru Zen în proba 6, AFB1 în proba 4, 6 și Don în eșantionul 4,6 și 10,
micotoxină

Datele de concentrare obținute prin Malfss au fost în acord cu Măsurători LC-MS / MS

Datele MUF au variat de la 87,1% la 118,7% comparativ cu rezultatele LCAMS / MS, care
sunt acceptabile

Celelalte date au consisință scăzută, cu toate acestea, această contradicție poate fi explicată.
Comparat cu

Rezultatele obținute de LC-MS / MS, există mai multe GBMServari demn de remarcat () deși

Proba de grâu Numărul 1 a fost considerat a fi AFB1 pozitiv datorită unei concentrări de 41,5
HS / kg așa cum este detectat de L-MS / MS, concentrația AFB1 în aceeași probă de grâu
măsurată de

Malfss a fost semnificativ mai mic la 26,6 hg / k. Acest lucru ar putea fi datorită faptului că
concentrația AFB1 a fost

Mai mult decât valoarea tăiată a câmpului de schimb pentru AFB1 (20 ug / kg). Aceste
rezultate ar putea fi, de asemenea, confirmate de la

Inspecția vizuală a benzilor din figura 4. În funcție de caracteristicile de bazine, standardul

sigmoidal

Curbele au fost selectate pentru intervalul de lucru eficient și au fost obținute prin utilizarea
unui parametru 4

Funcția Lobgistică pentru a redefini intervalul de lucru optimizat al curbei standard, așa cum
se arată în figura

S3. Domeniul de aplicare a determinării cantitative a micotoxinelor în grâu este de 4-20, 100-
1000, 20-200, 200

2000 și, respectiv, 40400 HE / kg. De exemplu, platforma nu a putut identifica diferența

între intensitatea culorii de 20 hg / kg AFB1 în grâu și cea de 40 ųg / kg

Performanța platformei a fost slabă în intervalul indicat de fundalul roșu din figura 25,

și valorile mai mari sau mai mici pot fi detectate deoarece intensitatea liniilor T este foarte
ușoară, așa cum se arată în fig

2a. De fapt. Pentru concentrații deasupra tăierii Välue ale Malfsei, inspecția vizuală a fost

recomandat. (in) Procentarea FB1 în numerele eșantionului de grâu 1, 4 și 6 măsurate

folosind

MFFS (71,3, 210,8 și 143,3 HE / KB) sa dovedit a fi mai mare, comparativ cu LC

corespunzătoare

Măsurarea MS / MS (K184 141,9 și <18,4 ug / kg). Acest lucru se poate datora existenței
FB2 și FB3

în aceste trei eșantioane. FB2 și FB3 au reactivitate încrucișată de 14% și 70% cu anticorpul
FB1,
respectiv. Acest lucru ar putea explica, de asemenea, concentrația mai mare a AFB1 măsurată
prin intermediul milei comparativ

Tolg-MS / MS în eșantionul de grâu numărul 3, care ar fi putut fi cauzat de Tatactivitatea

încrucișată cu AFB2.

0 Unele rezultate că concentrațiile de micotoxine detectate de MSLES sunt de obicei mai

mari,

cum ar fi 146,4% pentru Zen în proba 6 și 131% pentru Don în proba 8, comparativ cu cea a
LC-MS / MS.

Aceste rezultate pot fi probabil datorate existenței micotoxine mascate și reactivității

încrucișate cu

Alte analaloguri de micotoxină. După cum sa arătat în tabelul de $ 2, Mab anti-ZEN are o
reactivitate mare cu altele

Cinci analogi, iar anti-Don Mab are o reactivitate încrucișată de 70% cu 3-AC-Don. Cu toate
acestea, aceasta este

acceptabilă deoarece eșantioanele pozitive nu vor ocoli accentul procesul de screening.

Concluzie

În concluzie, am dezvoltat o platformă de analiză inteligentă multiplexată pentru integrarea

bazate pe Aunps

Malfss pentru screening-ul micotoxinelor. Platforma multiplex poate cuantifica simultan

AFB1, FB1, T

2, Don și Zen în decurs de 15 min: A fost folosiți anticorpi de clasă specială, miiles ar putea
fi de asemenea folosit

pentru monitorizarea a cinci clase de toxine într-un singur test. Platforma inteligentă a fost
sensibilă, costă

Eficacitate, simplu și utilizat cu succes pentru detectarea de grâu contaminată naturală.

LCEMS / doamnă

Metoda a fost, de asemenea, utilizată pentru validarea rezultatelor metodei MLFSS. În

Thefuture, platforma va
Echipat cu fiauorescență sau alt senzor optic pentru a extinde aplicarea platformei.