Proteine

Proteinele sunt substante organice macromoleculare formate din lanturi simple sau complexe de
aminoacizi.
Separarea proteinelor este o etapa premergatoare analizei cantitative si calitative a acestora. Sarurile
neutre ((NH4)2SO4, NaCl, MgSO4) in concentratii mai mari scad solubilitatea proteinelor, determinand
precipitarea lor. Precipitarea proteinelor prin salifiere este reversibila. La diluare cu apa precipitatul se
redizolva. Nu se produc modificari ale structurii, deci salifierea nu denatureaza proteinele.

Dializa unor suspensii de proteine

Dializa este o metoda de indepartare a substantelor micromoleculare dintr-un amestec prin
difuziunea lor printr-o membrana semipermeabila sub actiunea unui gradient de concentratie. Datorita
greutatii si dimensiunii moleculare mari, proteinele nu pot strabate porii membranelor semipermeabile, si
nu pot fi purificate prin dializa, de electroliti si de alte substante cu molecule mici.
Pentru a putea fi folosite, albuminele separate prin salifiere este necesar sa se indeparteze sulfatul de
amoniu retinut in precipitat. Aceasta se realizeaza prin dializa.

Salifierea proteinelor
Reactivi
-soluție ovalbumină (albuș de ou)
-cristale de (NH4)2SO4

Modul de lucru

La 5-6 ml soluție albuș de ou se adaugă, în porțiuni mici, cristale de (NH 4)2SO4. În momentul saturării
apare un precipitat abundent de ovalbumină. Suspensia obținută se diluează cu apă. Se observă dizlvarea
precipitatului.

Identificarea proteinelor

• Proteinele participă la diverse reacții care permit identificarea lor

• Unele dintre aceste reacții sunt comune tuturor proteinelor, cum sunt reacția biuretului și reacția cu
ninhidrină
• Alte reacții sunt datorate unor grupări din resturile aminoacizilor, cum sunt grupările fenolice, tiolice,
aromatice etc. După natura și abundența grupărilor respective cuprinse în proteina cercetată, intensitatea
acestor reacții este mai mare sau mai mică.

Reactia biuretului

• Principiul metodei: Este una dintre cele mai specifice reacții de identificare a proteinelor, în urma reacției
rezultând compuși colorați violet
• Deoarece biuretul în aceleași condiții formează un acid cupric colorat violet, reacția a căpătat denumirea de
reacția biuretului.
• Reactivi:
• -reactiv biuret (1,5g CuSO4:5H2O, 6g sare Seignette), se dizolvă în 500 ml apă. Se adaugă 300ml soluție
NaOH 10%. Se completează volumul soluției la 1000 ml, cu apă distilată
-soluție de ovalbumin
• Mod de lucru

Într-o eprubetă se pipetează 1ml soluție ovalbumină și 1 ml soluție din reactivul biuretului. Apare colorație
albastru-violet.

Reactia cu ninhidrina

• Proteinele reacționează cu ninhidrina la cald asemănător aminoacizilor, formând un compus albatru violet,
datorită grupării aminice libere sau eliberate după hidroliză.
• Reactivi
-soluție de ninhidrină 0,1% (soluție alcoolică)
-soluție de ovalbumină

Modul de lucru

Într-o eprubetă se pipetează 1-2 ml soluție de ovalbumină și 1-2 ml soluție de ninhidrină. Se incălzește la
fierbere 2 minute. Apare o colorație albastru violet.