RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI

TRANSPORTUL PROBELOR DESTINATE

EXAMENELOR DE LABORATOR
 SCOPUL RECOLTĂRII PROBELOR

1. Examinarea microscopică:
a. Examinarea sângelui (ex. bacterioscopic, ex.
parazitologic)
b. Examinarea fecalelor
c. Examinarea morfologică a organelor şi ţesuturilor (ex
citologic, histologic, imunofluorescenţă)
2. Izolarea agentului etiologic (ex. bacteriologic,
toxicologic, virusologic, parazitologic)
3. Investigaţii serologice (ELISA)
4. Teste moleculare (PCR)
SCOPUL PRELUCRĂRII PROBELOR RECOLTATE

• Confirmarea diagnosticului de suspiciune în cazul

unor cazuri clinice sau pentru animalele moarte;
• Demonstrarea indemnităţii faţă de un agent
etiologic într-o populaţie dată;
• Eradicarea unei boli dintr-o populaţie dată
• Estimarea prevalenţei unei boli sau a riscului unei
infecţii (analiza de risc);
• Certificarea indemnităţii faţă de un agent etiologic
în cazul animalelor sau produselor acestora pentru
comerţ sau transport;
• Instituirea unei terapii ţintite.
 PRINCIPII GENERALE – BUNE PRACTICI

• Protejeajă-te pe tine, alte persoane şi mediul

înconjurător.
• Foloseşte recipienţi şi instrumente curate sau
sterile.
• Colectează probele înainte de instituirea
tratamentului.
• Recoltează probe relevante pentru examenul
solicitat.
• Recoltează o cantitate suficientă de material astfel
încât să rămână o cantitate suficientă de probă în
scopul arhivării acesteia (contraprobă).
 PRINCIPII GENERALE – BUNE PRACTICI

• Foloseşte metode adecvate de contenţie pentru

animalele vii.
• Recoltează probe de la cadavre cât mai proaspete
sau de la animale în stare terminală, eutanasiate în
scop de diagnostic.
• Foloseşte recipienţi şi containere de transport
impermeabile.
• Etichetează corespunzător fiecare probă şi
elaborează un formular de inventariere a probelor
trimise către laboratorul de diagnostic.
 PRINCIPII GENERALE – BUNE PRACTICI

• Menţine probele la temperaturi scăzute, indiferent

de mijlocul de transport folosit şi de durata
acestuia (lanţul de frig).
• Furnizează laboratorului toate datele
epidemiologice care pot spijini diagnosticul
etiologic.
• Anunţă laboratorul de diagnostic când urmează să
trimiţi un număr de probe foarte mare sau doreşti
să afli informaţii suplimentare cu privire la
recoltarea probelor.
 PRINCIPII GENERALE – BUNE PRACTICI

• Probele vor fi trimise cu NOTĂ DE ÎNSOŢIRE:

- numărul probelor
- felul probelor
- data recoltării
- date clinice
- tratamente aplicate
- EXAMENELE SOLICITATE
- numele şi calitatea celui care a recoltat probele
 PRINCIPII GENERALE – BUNE PRACTICI

• Întocmeşte o listă de necesar pentru recoltarea

probelor în condiţii de teren:
– echipament de protecţie a personalului de lucru
– instrumentar pentru necropsie
– recipienţi şi materiale pentru recoltare
Echipament de protecţie a personalului de lucru
Instrumentar pentru necropsie
 Recipienţi şi materiale de recoltare

Sânge integral Ser Vacutainer cu ac

Instrumente de marcare şi etichetare
Agenţi de conservare
Materiale de contenţie
Soluţii dezinfectante
Cameră foto/video
 RECOLTAREA PROBELOR ÎN TIMPUL NECROPSIEI

• Recoltarea probelor se face în condiţii de asepsie,

folosind instrumente tăioase sterile sau scufundate
în soluţie dezinfectantă de alcool 70°.
• Fragmentele recoltate trebuie să conţină în egală
măsură ţesut integru şi ţesut lezionat.
• Fiecare fragment recoltat trebuie ambalat separat
în container/pungă.
• Segmentele de intestin se ligaturează la ambele
capete.
PROBE RECOLTATE OBLIGATORIU DE LA CADAVRE
Proba recoltată Probă proaspătă (refrigerată) Probă fixată (formaldehidă
10%)
Ser sanguin 5 ml -
Sânge integral 3 ml pe anticoagulant -
Tampon steril Encefal, articulaţie, pericard
Encefal - Imersie totală
Pulmon 6x6x6 cm, 2 fragmente 2x2x1 cm
Cord 4x4x4 cm, 2 fragmente 2x2x1 cm, din VS, VD, S
Ficat 4x4x4 cm, 2 fragmente 2x2x1 cm
Rinichi Jumătate de rinichi 2x2x1 cm
Splină Fragmente cu lungime de 5 cm
Limfonod Mandibular, sternal, traheobronşic, Mandibular, sternal,
mezenteric, inguinal traheobronşic, mezenteric,
inguinal

Ileon Segment ligaturat de 10 cm 2 cm

 PROBE RECOLTATE DE LA ANIMALE VII

1. Sânge integral: recoltat din vene uşor abordabile

- v. jugulară, v. safenă, v. brahială, v. cozii;
2. Ser sanguin: sânge lăsat la temperatura camerei până la
exprimare, recoltare în criotuburi;
3. Tampoane: din exsudate localizate în regiuni
anatomice abordabile (oro-faringe, cloacă);
4. Fecale: recoltate direct din rect sau imediat după
defecare;
5. Urină: prin cateter
6. Paraziţi externi
7. Amprente pe lamă
8. Lapte
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE
EXAMENULUI HISTOPATOLOGIC

• Cât mai aproape de momentul morţii;

• Fragmente cu latura de 1 – 1,5 cm din cele mai
reprezentative leziuni;
• Ochiul şi encefalul nu se fragmentează.
• De la marginea leziunii, astfel încât fragmentul să
conţină deopotrivă ţesut lezionat şi ţesut normal;
• Cu instrumente bine ascuţite, care nu strivesc
ţesutul recoltat;
• EVITĂ strivirea fragmentului prin folosirea
foarfecii sau pensei.
• EVITĂ recoltarea unor fragmente mici cu
electrocauterul.
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE
EXAMENULUI HISTOPATOLOGIC

• Probele vor fi ambalate în recipienţi care se

închid etanş, în soluţie fixatoare de
formaldehidă 10%
• Volumul lichidului fixator mai mare de 10-20
ori decât al fragmentelor recoltate.
• Probele destinate examenului histopatologic
NU SE CONGELEAZĂ.
• La 24 de ore probele vor fi modelate şi se
schimbă lichidul fixator.
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI BACTERIOLOGIC

• Recoltaţi în condiţii de strictă asepsie.

• Folosiţi recipienţi şi instrumente sterile, etanşe şi
impermeabile (pungi sterile Whirl-Pack,
containere de plastic, tuburi sterile, tampoane
sterile).
• Nu folosiţi substanţe antiseptice sau fixatoare sau
ambalaje tratate cu astfel de substanţe.
• Nu folosiţi mănuşi de polietilenă/latex, cotiere,
seringi.
• Evitaţi recoltarea de la animale tratate cu
antibiotice.
RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL PROBELOR
DESTINATE EXAMENULUI BACTERIOLOGIC

• Recoltaţi toate probele necesare de la cadavru

înainte de deschiderea tubului digestiv.
• Puneţi fiecare probă în ambalaj individual.
• Nu recoltaţi lichidele biologice pe vacutainere cu
dop violet (EDTA – toxicitate mare pentru
aproape toate speciile bacteriene).
• Trimite probele în cutii sau genţi frigorifice, cu
suficiente pachete cu gheaţă care să menţină
temperatura scăzută cel puţin 48 ore.
• Precizează suspiciunea de boală care să orienteze
medicul de laborator asupra metodelor şi mediilor
de cultură.
RECOLTAREA PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI
BACTERIOLOGIC
Probe recoltate
Cadavre, animale în agonie, animale
cu semne clinice, în fază terminală
eutanasiate în scop de diagnostic
Organe parenchimatoase
Organe cavitare
Os lung nedeschis
Sânge
Lichide fiziologice/patologice
Specificaţie
Se pretează mai ales pentru
animalele de talie mică şi mijlocie
Recoltare integrală sau cel puţin
două fragmente din fiecare organ
Ligaturate la ambele capete, piesa
trebuie sa conţină peretele organului
şi conţinutul lumenal
-
Fără anticoagulant (pentru obţinerea
serului sanguin)
Urină, transsudat, exsudat recoltate
prin metode sterile
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI BACTERIOLOGIC

• Situaţii în care examenul bacteriologic nu are

relevanţă sau prezintă relevanţă limitată:
– Infecţii cu anaerobi – Clostridium spp. (probe
recoltate în cel mult 1-4 ore de la momentul morţii pe
medii speciale); alternativă ex. histopatologic, PCR.
– Infecţii cu Bordetella spp. (probele se livrează în cel
mult 12 ore de la recoltarea pe tampon steril).
– Infecţii cu Campylobacter spp. – recoltare pe medii
speciale.
– Infecţii cu Lawsonia spp. – bacterie care nu se cultivă
(alternativă ex. histopatologic, serologic, PCR)
RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL PROBELOR
DESTINATE EXAMENULUI VIRUSOLOGIC

• Izolarea şi identificarea virusurilor este adesea

dificilă.
• Recoltarea se face în condiţii de strictă asepsie.
• Instrumentele şi recipienţii vor fi sterile, etanşe
şi impermeabile.
• Transportul probelor se face în condiţii de
refrigerare.
• Tipul probelor va fi adaptat bolii suspicionate.
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI VIRUSOLOGIC

• Metodele de recoltare, selecţia specimenelor,

necesitatea fixării probelor este corelată cu
suspiciunea unei anumite boli virale:
– ex. serologic pentru identificarea antigenelor virale
(ELISA)
– histopatologie şi/sau imunohistochimie
– microscopie electronică
– imunofluorescenţă
– izolarea virusului
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI VIRUSOLOGIC

• Tampoanele sterile
recoltate de la nivel
conjunctival, nazal,
oral, anal sau vaginal
se recoltează pe tuburi
cu mediu de transport
universal.
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI VIRUSOLOGIC

• Se recoltează:
– sânge recoltat pe anticoagulant (heparină sau EDTA)
– ser sanguin (ELISA)
– fecale (marea majoritate a virozelor digestive)
– exsudate recoltate pe tampoane sterile de la nivelul
mucoaselor sau leziunile cutanate veziculare
– organe cavitare sau parenchimatoase în stare
proaspătă (izolare virus, ELISA) sau fixate (detectarea
antigenului în ţesut fixat prin imunohistochimie)
– placentă, fetuşi sau organe fetale
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI
PARAZITOLOGIC ŞI MICOLOGIC

• Fecale: proaspete, recoltate cât mai rapid după

defecare. NU CONGELAȚI PROBELE.
• Transportul se face în lăzi izoterme pe pungi cu
gheaţă, într-un interval de 24-48 ore.
• Probele de fecale recoltate pentru identificarea
protozoarelor din genurile Coccidia,
Cryptosporidium, Giardia se trimit la laborator
imediat după recoltare.
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI
PARAZITOLOGIC ŞI MICOLOGIC

• Raclaj cutanat: pe lame de sticlă acoperite cu

lamelă sau în containere cu alcool glicerinat
10% (metodă mai puţin preferată, datorită
recuperării dificile a paraziţilor).
• Paraziţi: helminţii adulţi sau larvele acestora se
ambalează în flacoane etanşe, fixate cu
formaldehidă 10% sau alcool izopropilic 70%.
• Paraziţii externi: flacoane, fixare cu alcool
izopropilic 70%.
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI PARAZITOLOGIC
ŞI MICOLOGIC

• Pentru examenul micologic:

– raclaj cutanat pentru diagnosticul micozelor cutanate; pielea
se dezinfectează cu alcool 70°, din regiunile active ale
leziunilor (marginal). Se ambalează în containere sterile.
– păr: porţiunea bazală a firelor, smulse din rădăcină
– exsudate sau ţesuturi: pentru culturi micologice, ambalaje
aseptice, trimise în cutii izoterme, pe pungi de gheaţă.
• Recomandări: probele pentru examenul micologic vor fi
dublate de cele pentru examenul histopatologic (viscere),
rezultatele acestui examen fiind importante pentru
evaluarea iniţială şi orientarea investigaţiilor ulterioare.
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI TOXICOLOGIC

• Este examenul cu cele mai multe implicaţii medico-

legale.
• Presupune căutarea unor substanţe toxice în diverse
medii (cadavre, sol, apă, momeli, furaje etc);
• Presupune o anchetă epidemiologică complexă;
• Nota de însoţire va conţine rezultatele anchetei
epidemiologice şi modificările anatomopatologice
observate la necropsie;
• Dacă este posibil, se recoltează două probe din fiecare
ţesut sau organ.
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI TOXICOLOGIC

• Probele vor fi expediate în stare proaspătă,

refrigerate sau congelate (după tipul de probă)
niciodată conservate în alcool, formol sau alt gen
de fixator.
• Se evită contaminarea probelor. Se recomandă
schimbarea obligatorie a instrumentelor de
recoltare, a mănuşilor şi ambalarea fiecărei probe
în ambalaj separat.
• Transportul se face în cutii izoterme pe pungi cu
gheaţă.
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI TOXICOLOGIC
Animale vii

Probe recoltate Cantitate Ambalare

recomandată
Sânge integral 5-10 ml Anticoagulant (vacutainere cu capac violet)
Ser 5-10 ml Congelare
Urină 25-50 ml Containere de plastic cu capac
Fecale 100 g cel puţin Proaspete, containere de plastic cu capac
Păr 2 g cel puţin Plicuri hârtie, containere de plastic
Lapte 30 ml Containere de plastic
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI TOXICOLOGIC
Animale moarte
Probe recoltate Cantitate recomandată Ambalare
Sânge integral, ser, urină La fel ca pentru animalele vii La fel ca pentru animalele vii
Ficat 100-250 g Containere plastic
Rinichi 100-250 g Containere plastic
Encefal Jumătate, secţiune sagitală Containere plastic
Ţesut adipos 100 g Folie plastic
Conţinut gastro- 100 g sau mai mult, Containere de plastic pentru
intestinal reprezentativ din fiecare fiecare segment abordat
segment (gatric, rumenal, pentru recoltare
intestinal, rectal)
Os, splină, pulmon La fel ca pentru ficat La fel ca pentru ficat
Fluide oculare sau glob Umoarea apoasă este cea
ocular integral reprezentativă
Păr, piele La fe ca la animalele vii Dacă se suspectează
contaminare cutanată
 RECOLTAREA, AMBALAREA ŞI TRANSPORTUL
PROBELOR DESTINATE EXAMENULUI TOXICOLOGIC
Probe din mediu
Probe recoltate Cantitate recomandată Ambalare
Momeli, surse Cel puţin 200 g Borcan din sticlă transparentă,
potenţiale containere plastic, pungi
plastic
Alimente, furaje Cel puţin 500 g Recoltare din fiecare lot
disponibil
Plante Planta integrală, parte Proaspete şi congelate, uscate
reprezentativă, inclusiv
rădăcina
Apă Cel puţin 1 litru Borcan din sticlă transparentă,
containere plastic