2/22/2024

Genul Staphylococcus

Minidefiniţie
• coci Gram-pozitivi aşezaţi în
grămezi neregulate
• pot fi observaţi şi izolaţi, în
perechi sau scurte lanţuri
• imobili

1
 2/22/2024

Minidefiniţie
• nepretenţioşi nutritiv
• aerobi, facultativ anaerobi
• tolerează >7,5% NaCl

Minidefiniţie
• catalază pozitivi

• oxidază negativi

2
 2/22/2024

Clasificare

Testul coagulazei îi clasifică în:

- coagulazo-pozitivi:
- S.aureus (majoritatea)
- coagulazo-negativi: mai multe specii izolate de la om, dintre care
- S.epidermidis - S. hyicus
- S. saprophyticus - S. lugdunensis
- S. haemolyticus - S. schleiferi subsp. schleiferi
- S. capitis - S. sciuri
- S. cohnii - S. simulans
- S. hominis - S. pettenkoferi
- S. warneri - S. xylosus

Testul coagulazei pe lamă evidenţiază Testul coagulazei la tub evidenţiază

clumping factor (sau coagulaza legată). coagulaza extracelulară (sau coagulaza liberă).

3
 2/22/2024

Coci gram-pozitivi
facultativ anaerobi

catalaza

+ −
Staphylococcus Streptococcus

coagulaza

+ −
S.aureus Stafilococi coagulazo-negativi

Identificarea stafilococilor

a. Identificarea Staphylococcus
aureus printr-un test de latex
aglutinare care evidenţiază:

• clumping factor
• proteina A
• polizaharide capsulare

4
 2/22/2024

Identificarea stafilococilor
a.

b. Identificare biochimică
Galerie de reactii de identificare biochimică (pune în evidență activitatea enzimelor bacteriene)

c. Identificare prin spectrometrie de masă MALDI-TOF (Matrix Assisted Laser Desorbtion

Ionisation - Time-Of-Flight)

Staphylococcus aureus
• Importanţa medicală
• determină infecţii
• comunitare sau nosocomiale (IAAM)
• frecvenţă şi diversitate a localizării
• unele cu evoluţie deosebit de gravă (bacteriemii cu localizări
secundare, şoc septic, şoc toxic stafilococic)

• s-a dovedit capabil să dezvolte rezistenţă la toate antibioticele

folosite în terapie

5
 2/22/2024

Staphylococcus aureus
• Habitat
• poate coloniza mucoasa nazală
• ~ 30% purtători sănătoși nazali în populația generală
• procente mai mari la personalul din spitale
• poate coloniza mucoasa faringiană şi/sau intestinală
• prezenţă tranzitorie la nivelul tegumentului
• contaminează mediul extern prin mâini, scuame, secreţii, excrete

• Rezistenţa la factorii de mediu: foarte rezistent (uscăciune,

întuneric, lizozim, acţiunea bactericidă nespecifică a serului, acizi graşi de
pe tegument)

Caractere morfo-tinctoriale

• sunt cele caracteristice genului

6
 2/22/2024

Caractere morfo-tinctoriale

• în unele produse patologice poate

predomina dispoziţia în diplo, fiind dificilă
diferenţierea de streptococi

• pierd afinitatea tinctorială, devenind

gram-negativi, în frotiul din puroi provenit
din colecţii închise sau din culturi vechi

Caractere de cultură
• nepretenţios nutritiv
• aerob, facultativ anaerob
• colonii mari, S, de consistenţă untoasă, pigmentate în galben-
portocaliu sau nepigmentate (alb-cenuşii) pe agar nutritiv
• pe agar-sânge coloniile pot fi hemolitice
• dezvoltă colonii manito-pozitive pe mediul Chapman (mediu
hiperclorurat cu manitol şi roşu fenol)

7
 2/22/2024

Agar Chapman
• 7,5% NaCl
• Manitol

Cultură de Staphylococcus aureus Cultură de Staphylococcus epidermidis

Fermentarea manitolului Absența fermentării manitolului
24h la 37°C 24h la 37°C

8
 2/22/2024

Factori de patogenitate
componente exotoxine exoenzime
structurale parietale
• peptidoglican • hemolizine (α, β, γ, δ) • coagulaza liberă
• acid ribitol • leucocidina Panton • catalaza
teichoic Valentine • hialuronidaza
• proteina A • toxine exfoliative (ETA, • fibrinolizina
ETB) • lipaze
• coagulaza legată
(clumping factor) • enterotoxine (A-E, H, G, I) • nucleaze
• glicocalix • toxina 1 a sdr. şocului toxic
(capsula) stafilococic (TSST-1)

Virulenţa S. aureus este rezultatul

efectului combinat al mai multor factori de patogenitate

Factori de patogenitate
1. Structuri parietale
• peptidoglicanul manifestă proprietăţi endotoxină-like
• acidul ribitol teichoic, cu specificitate de specie, are proprietăţi
adezive la receptorii celulari şi determină reacţii de sensibilizare
după infecţii repetate
• proteina A leagă IgG prin Fc şi împiedică opsonizarea şi fagocitoza
• adezine la proteine ale gazdei:
• fibrinogen/fibrină (coagulaza legată, “clumping factor”)
• fibronectină
• colagen
• microcapsula polizaharidică cu efect antifagocitar

9
 2/22/2024

Factori de patogenitate
2. Exoenzime
• coagulaza liberă
• se leagă de protombină şi determină conversia fibrinogenului în fibrină
• înglobează cocii în trama de fibrină, protejându-i de fagocite
• formează trombi, implicaţi în patogenia tromboflebitelor septice
• stafilokinaza
• activează plasminogenul, determinând disoluţia cheagurilor de fibrină
• hialuronidaza
• hidrolizează matricea intercelulară
• lipaze
• active pe lipidele din plasmă şi sebum, explicând tropismul pentru
unitatea pilo-sebacee

Factori de patogenitate
3. Exotoxine
• citotoxine
- hemolizine α, β, γ şi δ, active pe eritrocite provenite de la
diferite specii animale; cel mai bine caracterizată este
hemolizina α, incriminată în manifestări ale şocului septic
- leucocidina Panton-Valentine are efect leucolitic; prezentă în
special la tulpini izolate din leziuni dermonecrotice

• toxine exfoliative (A şi B)
- au activitate proteazică, determinând ruperea desmozomilor
de la nivelul stratului granulos, cu formare de bule epidermice
- implicate în sindromul pielii opărite

10
 2/22/2024

Factori de patogenitate
3. Exotoxine
• toxina 1 a sindromului şocului toxic (TSST-1)
- funcţionează ca superantigen, stimulând nespecific limfocitele T cu
eliberare de citokine în cantitate mare
- determină febră, erupţie eritematoasă cu descuamare, hipotensiune
şi insuficienţe funcţionale multiorgan
- manifestările au fost asociate cu utilizarea tampoanelor
hiperabsorbante intravaginale dar şi cu infecţii extragenitale sau cu
infecții la bărbați

• enterotoxine
- mai multe tipuri antigenice (A-E, H, G, I)
- funcţionează de asemenea ca superantigene
- termostabile
- determină toxiinfecţii alimentare; enterotoxinele B şi C pot
determina şi manifestări sistemice (şoc toxic stafilococic)

11
 2/22/2024

Superantigens and the non-specific stimulation of T cells

TSST-1, enterotoxins are superantigens

Superantigens bind directly to class II major histocompatibility complexes (MHC II) of antigen-presenting
cells outside the normal antigen-binding groove. Up to one in five T cells may be activated. Cytokines
are released in large amounts, causing the symptoms of toxic shock.

Factorii de virulență ai Staphylococcus aureus

12
 2/22/2024

Patogeneza infecţiilor cu S. aureus

S. aureus este o bacterie oportunistă.
Factori care favorizează infecţiile stafilococice:
• deficienţele chemotaxiei leucocitare:
• congenitale – sdr. Down
• dobândite – diabet, artrita reumatoidă
• deficienţe ale opsonizării prin Ac – hipogamaglobulinemia
• deficienţe ale distrugerii i.cel. a bacteriilor secundar fagocitozei – boală
granulomatoasă cronică
• leziuni cutanate – arsuri, incizie chirurgicală, eczeme
• corpi străini – suturi, proteze intratisulare
• infecţii cu alte microorganisme
• boli cronice – neoplazii, boli cardiace, alcoolism
• administrare preventivă sau terapeutică a AB

13
 2/22/2024

Pathogenesis of S. aureus infections

Infecţii cu S. aureus
• Infecții localizate supurative • Infecții generalizate
• Infecţii cutanate • Bacteriemie
• Foliculita • Endocardită
• Furuncul
• Tromboflebită
• Carbuncul (furuncul antracoid)
• Hidrosadenita • Toxiinfecţii alimentare
• Panariţii • Sindromul şocului toxic
• Impetigo / impetigo bulos stafilococic
• Infecţii ale plăgilor
• Sindromul pielii opărite
• Infecţii ale mucoaselor (otite, sinuzite, ITU,
infecţii uterine postabortum)
• Mastită puerperală, pneumonie, artrită
• Osteomielită post-operatorie/post-traumatică

14
 2/22/2024

Foliculită

Furuncul

15
 2/22/2024

Carbuncul

Hidrosadenită

16
 2/22/2024

Panarițiu

Impetigo

17
 2/22/2024

Impetigo bulos

Sindromul pielii opărite versus Impetigo bulos

18
 2/22/2024

Abces

Orjelet

19
 2/22/2024

Imunitate
• fagocitoza este mecanismul major de apărare
• rol limitat al imunității adaptative

Diagnostic de laborator
• diagnosticul de laborator al infecţiilor supurative se bazează pe examen
bacteriologic
• produsul patologic variază în raport cu localizarea infecţiei
• examenul microscopic are în special valoare în cazul produselor provenite din
zone normal sterile
• izolarea S.aureus
• prin însămânţare pe agar-sânge
• în cazul produselor contaminate, pe mediul selectiv Chapman
• identificarea se bazează pe caracterele microscopice, de cultivare, testul
catalazei şi coagulazei
• în investigaţii epidemiologice (izbucniri epidemice) se poate recurge la tipare moleculară
• enterotoxinele și TSST-1 pot fi evidențiate prin metode imunologice/biologie moleculară

20
 2/22/2024

Diagnostic de laborator
Frotiu din puroi, colorat Gram, X1000

S.aureus – colonii pe agar-sânge

21
 2/22/2024

Tratament
• purtători sănătoşi – antibiotic (de ex., mupirocin) local (mucoasa
nazală)

• infecţii minore
• drenajul chirurgical este esenţial
• antibiotic topic (bacitracină, acid fusidic, mupirocin, clorhexidină)
• toaleta corespunzătoare a plăgii şi aplicarea unui antiseptic microbicid (e.g.,
săpun antiseptic, alcool iodat, clorhexidină)

Tratament
• infecţii severe - drenaj chirurgical + antibioterapie:
• penicilină – doar în cazul tulpinilor care nu produc penicilinază
• majoritatea tulpinilor de S. aureus produc penicilinază (95%)
• oxacilină – tratamentul infecțiilor cu S. aureus producător de penicilinază
• S. aureus rezistent la oxacilină se numește MRSA (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus)
• În România, incidența MRSA în infecții sistemice este >40%
• Cel mai frecvent, rezistența la oxacilină se datorează sintezei unei PLP suplimentare (PLP
2a, codificată de gena mecA)
• MRSA este rezistent la toate beta-lactaminele
• vancomicină – tratamentul infecțiilor cu MRSA
• rezistența S. aureus la vancomicină este rară
• linezolid, daptomicină, quinupristin-dalfopristină – infecții cu tulpini cu sensibilitate
modificată la vancomicină (VISA/VRSA)
• alternative: clindamicină (infecţii osoase), cotrimoxazol, aminoglicozide, eritromicină

22
 2/22/2024

Epidemiologie
• Rezervor de infecţie
• pacienţi cu infecţii cu S. aureus
• purtători sănătoşi de S. aureus (pacienţi sau personal de spital colonizaţi)

• Transmitere
• direct, de la purtători nasali, prin picături Flügge
• pacienţi → personal medical (70-80% purtători sănătoşi) → alţi pacienţi
• indirect (aer, pulberi, obiecte, mâini, alimente, insecte)

• S. aureus produce frecvent infecții asociate asistenței medicale

(IAAM)

S. aureus produce frecvent infecții asociate asistenței medicale (IAAM)

23
 2/22/2024

Profilaxie
• Generală
• igiena mâinilor, antisepsie, asepsie
• TI, arsuri, chirurgie cardiovasculară, neonatologie

• Specială
• purtătorii nazali de S. aureus trebuie carantinaţi faţă de pacienţii cu risc crescut
până la eradicarea portajului
• screening pacienți înaintea intervenției chirurgicale

• Specifică
• Nu exista vaccin eficace
• Vaccinul autolog (autovaccin), preparat din tulpina infectantă a unui pacient, are
eficacitate discutabilă

Stafilococii coagulazo-negativi (SCN)

• cei mai frecvenți constituienţi ai florei bacteriene rezidente de la nivelul
tegumentului şi a mucoaselor colonizate
• contaminanți frecvenți ai hemoculturilor
• pot determina infecţii legate de prezenţa unor implanturi
protetice/catetere, grave în special la imunodeprimaţi, vârste extreme
• sinteza unor exopolizaharide favorizează ataşarea la suprafaţa acestor
dispozitive
• cea mai frecventă specie implicată este S.epidermidis
• diagnosticul bacteriologic impune criterii care să stabilească semnificaţia
clinică a izolatului, eliminand o posibilă contaminare
• stafilococii coagulazo-negativi sunt frecvent meticilino-rezistenţi

24
 2/22/2024

Infections associated with indwelling devices

Stafilococi coagulazo-negativi

• S. epidermidis
• S. haemolyticus
• S. saprophyticus
• S. lugdunensis
• S. schleiferi subsp. schleiferi

25
 2/22/2024

S. epidermidis
• cea mai frecventă specie din flora normală a tegumentului
• produce glicocalix (biofilm) → aderenţă
• protecție împotriva antibioticelor
• protecție împotriva efectorilor imunitari
• focare din care SCN se deversează în sânge → bacteriemie
• infecţii:
• infecţii de cateter
• infecţii asociate cu implanturi (e.g., pace-maker, grefă vasculară, şunt LCR,
proteze articulare, dispozitive ortopedice, dializă peritoneală ambulatorie
cronică)
• endocardită subacută a valvelor protezate
• ITU

S. saprophyticus
• oportunist
• cauza unor infecţii necomplicate ale tractusului urinar, în special la
femeia tânără, activă sexual
• mai rar, este responsabil pentru pielonefrită acută, uretrită, epididimită și
prostatită
• SCN cu rezistenţă naturală la novobiocină
• tratament ITU necomplicată: nitrofurantoin, cotrimoxazol

26
 2/22/2024

S. haemolyticus
• este răspândit în mediul spitalicesc
• se găsește pe mâinile personalului medical
• infecții:
• meningită
• endocardită
• infecții asociate cu protezele articulare
• bacteremie

Alți SCN
• S.lugdunensis
• endocardită pe valve protezate/ native, infecţii de cateter,
bacteriemie, abces cerebral, osteită, infecţii proteze vasculare,
infecţii cutanate/ plăgi, peritonite

• S. schleiferi
• empiem cerebral, infecţii plăgi, bacteriemie, osteită, infecţii
cateter

27
2/22/2024

28