MEMBRANA PLASMATIC (MEMBRANA CELULAR) (PLASMALEMA)

Celul PK

Celul EK (celul animal)

Toate celulele vii, att PK ct i EK, au o membran plasmatic care separ mediul intracelular de mediul extracelular.

Conceptul actual al organizrii membranei plasmatice

Toate tipurile de celule din lumea vie sunt delimitate de o structur fin, cu o grosime de circa 7 nm ce poart numele de membran celular, membran plasmatic sau plasmalem. Organizarea structural i funcional a celulei este dependent de membrana plasmatic ce constituie o barier cu permeabilitate selectiv ce delimiteaz coninutul celular de mediul extracelular i mediaz schimbul de substane i informaie dintre celul i mediul extracelular.

Funciile membranei plasmatice

Membrana plasmatic este implicat n diverse procese celulare:
- regleaz transportul ionilor i moleculelor - mediaz comunicarea intercelular (n cazul organismelor multicelulare) sau ntre celul i mediul extracelular (unicelulare) - asigur adeziunea celular - ancoreaz citoscheletul intracelular

Teorii despre membran

Pn la stabilirea conceptului actual al structurii membranelor s-au emis numeroase modele privind arhitectonica molecular a membranei plasmatice. Teoria lipidic elaborat de ctre Overton (1902), conform creia plasmalema este un stat lipidic continuu ce delimiteaz suprafaa celular, venind n contact direct att cu mediul apos extracelular ct i cu cel intracelular (apa celular). Gorter i Grendel (1925) au susinut pentru prima dat dispoziia bimolecular a stratului lipidic membranar. Danielli i Davson (1935) au imaginat un model al organizrii moleculare a membranelor celulare cunoscut sub numele de modelul paucimolecular sau modelul sandwich. Acest model susine c membranele sunt alctuite nu numai din lipide pure aranjate n bistrat, ci menioneaz i prezena proteinelor dispuse att spre exterior ct i spre interiorul membranei celulare.

 Studiile de microscopie electronic au artat c membrana plasmatic prezint o structur trilamelar, fiind alctuit din dou straturi electrono-opace ce delimiteaz ntre ele un strat electrono-transparent.

 Cercetrile fcute pe diverse esuturi de la organisme diferite (animale, plante, microorganisme) au artat c toate membranele celulare, inclusiv cele ale organitelor din citoplasma celulelor eucariote prezint o organizare structural similar cu cea a plasmalemei. Examinarea electrono-microscopic relev faptul c membranele prezint o zon central, clar, marginit de dou zone dense, avnd o grosime total de 7,5 nm. Acest concept al organizrii structurale similare a membranelor poart denumirea de teoria unitii de membran (teoria membranei unitare) sau teoria trilamelar i a fost elaborat de ctre J. Robertson (1959).
ax lipidic central (hidrofob) capete polare ale lipidelor proteine

Modelul n mozaic fluid al organizrii membranelor

Modelul elaborat de Robertson nu reflect organizarea dinamic a membranelor i nici dispoziia topografic a proteinelor n membran. Aceste neajunsuri au fost nlturate prin teoria mozaicului fluid, elaborat de ctre Jonathan Singer i Garth Nicolson (1972).

Elemente de noutate aduse de modelul lui Singer i Nicolson

Moleculele lipidice sunt organizate structural sub forma unui bistrat molecular ce ntreine proprietile hidrofobe ale membranei i asigur suportul pentru integrarea proteinelor n membran (concepie similar cu a modelelor anterioare). Bistratul lipidic poate prezenta stri fizice diferite (mai vscos sau mai fluid), ceea ce favorizeaz mobilitatea componentelor de membran. Proteinele de membran sunt dispuse sub forma unor particule discontinue. Proteinele sunt considerate entiti globulare, inserate n bistratul lipidic mai mult sau mai puin adnc. O mare parte a proteinelor de membran strbat n ntregime bistratul lipidic i apar expuse pe ambele fee ale membranei (proteine transmembranare). Poriunea hidrofob a proteinelor transmembranare este plasat n miezul hidrofob al bistratului lipidic, iar domeniile hidrofile ale catenei polipeptidice sunt n contact cu mediul apos. Proteinele de membran prezint o dispoziie topografic n mozaic i au posibilitatea de a se mica n membran.

MOZAIC VENEIAN

Modelul lui Singer i Nicolson

Modelul actual al organizrii membranelor

n prezent se consider c toate membranele biologice, att membrana plasmatic ct i endomembranele eucariotelor au aceeai organizare structural de baz, n acord cu modelul n mozaic fluid. Modelul actual al membranei plasmatice adaug ca elemente de noutate: (a) interaciunea plasmalemei cu citoscheletul membranar pe faa citoplasmatic, (b) rolul componentei glucidice din structura glicolipidelor i glicoproteinelor de membran (expuse la suprafaa celulei) n exercitarea funciilor membranei, cu implicaii legate de mecanismele de adeziune i recunoatere.

Modelul de organizare al membranei plasmatice

Compoziia chimic a membranelor celulare

Toate membranele celulare au o compoziie chimic similar, fiind alctuite din dou clase majore de componente: lipide i proteine. Aceste componente sunt asamblate prin legturi necovalente. n afara acestor componente ce reprezint elementele de baz, n alctuirea structurilor de membran intr i alte molecule, de ex. glucide i ioni anorganici, al cror coninut este mult inferior coninutului de lipide i proteine. Membranele diverselor tipuri de celule prezint o compoziie heterogen din punct de vedere al proporiei dintre lipide i proteine. Membrana plasmatic a unei celule animale tipice are un coninut de circa 50% lipide i 50% proteine. Cantitatea de glucide este relativ sczut (2-10%) dar glucidele intr n structura glicoconjugatelor (glicoproteine i glicolipide), ce reprezint componente deosebit de importante pentru exercitarea funciilor membranelor plasmatice. Chiar n cadrul aceluiai tip de celul pot s apar variaii ale compoziiei chimice n funcie de specie, starea fiziologic, influena factorilor de mediu, etc.

Lipidele
Proprietile fizico-chimice ale lipidelor le definesc drept molecule ideale pentru structurarea membranelor. Lipidele sunt molecule mici, insolubile n medii apoase, prezentnd tendina de asociere spontan, iar structurile ce rezult prin asamblarea lor nu sunt rigide.
Aranjamente moleculare ale lipidelor n medii apoase: bistrat lipidic i micele sferice.

Compoziia n lipide a membranelor celulare

Componenta lipidic joac rolul de barier hidrofob de permeabilitate ntre diverse compartimente celulare i ntre celul i mediul extracelular. n afara rolului structural, lipidele de membran joac un rol important n reglarea activitii proteinelor asociate de membran (enzime, receptori, molecule de adeziune), dar i n generarea unor mesageri intracelulari implicai n ci de semnalizare. Biochimia descrie o mare diversitate de clase de lipide, grupate n dou mari categorii: Lipide simple: steroli, prostaglandine i terpene Lipide complexe: acilgliceroli, fosfogliceride, sfingolipide, ceruri

n membranele celulelor animale ntlnim doar trei tipuri de lipide: fosfolipide (fosfogliceride, sfingolipide) 70-75% colesterol 20-25% glicolipide 1-10%

Fosfogliceride (Glicerolfosfatide)
Clas de lipide complexe ce au ca precursor acidul glicerol-3-fosforic.
Glicerol (glicerin, 1,2,3-propantriol) 1 2
1 3

Acid glicerol-3-fosforic

Acidului fosfatidic
Gruprile OH din poziiile 1 i 2 sunt esterificate cu acizi grai (saturai i nesaturai).

Formula structural a acidului fosfatidic (reprezentat sub forma anionului fosfatidat; denumire alternativ 1,2-diacilglicerol 3fosfat). Prezint un cap hidrofil de mici dimensiuni cu ncrcare electric negativ (2-).
Tem: Precizai caracteristicile acizilor grai din structura
fosfogliceridelor.

Acizi grai
cel mai frecvent ntlnii n compoziia membranelor
14:0 16:0 18:0 18:1 cisD9 18:2 cisD9,12 18:3 cisD9,12,15 20:4 cisD5,8,11,14 acid miristic acid palmitic acid stearic acid oleic acid linoleic acid linolenic acid arachidonic

20:5 cisD5,8,11,14,17

acid eicosapentaenoic

Acidului fosfatidic
Gruparea OH din poziia 3 este esterificat cu acidul fosforic, iar cele din poziiile 1 i 2 cu acizi grai.

1 2 3

Acidul fosfatidic funcioneaz ca precursor metabolic pentru formarea altor tipuri de fosfogliceride. La gruparea fosfat se poate ataa un alcool X-OH (aminoalcool) printr-o legtur fosfo-esteric secundar.

Clasificarea fosfogliceridelor
fosfatidilcolina (prescurtare internaional PC, denumire uzual lecitin), cnd X este colin fosfatidiletanolamina (PE), X fiind etanolamin; fosfatidilserina (PS), la care X este serin; fosfatidilinozitol (PI), n care X este inozitol;

Identificai principalele tipuri de fosfogliceride i sarcina electric net a acestora:

Caracterul amfipolar (amfipatic) al fosfolipidelor: regiunea hidrofil (cap polar/hidrofil) i regiunea hidrofob (cozile apolare/hidrofobe).
Cap hidrofil
Cozi hidrofobe

Caracterul amfipolar al fosfogliceridelor i aranjamentul sub form de bistrat, cu capetele hidrofile la exterior i cozile hidrofobe n interior.

Dispunerea sub form de bistrat a lipidelor membranei plasmatice

n constituia membranei plasmatice, pe lng fosfogliceride mai sunt prezente colesterolul i sfingolipidele (de ex. sfingomielina).

Starea fizic (fluiditatea) bistratului lipidic

Bistratul lipidic este fluid, ntr-o continu dinamic. Fluiditatea bistratului lipidic depinde de compoziia n acizi grai saturai/nesaturai din structura fosfogliceridelor. Fluiditatea bistratului lipidic este o rezultant a diverselor posibiliti de micare a lipidelor din componena sa.

Stri fizice ale bistratului lipidic

Lipidele membranare pot executa micri intramoleculare i micri intermoleculare

1. Micri intramoleculare, pe care lipidele le realizeaz n raport cu
propria lor structur (n raport cu propria lor ax). Aceste micri pot fi:

Micri de rotaie, cu o frecven de 109 rotaii/s; aceste micri sunt determinate de capacitatea lanurilor acizilor grai de a se roti n jurul legturilor C-C, capacitate care se rsfrnge asupra comportamentului ntregii molecule, prin cuplurile de fore pe care le induc; rezultanta acestui zbucium intern molecular este micarea de rotaie a moleculei lipidice n ansamblu. Micri de flexie a cozilor hidrofobe, cu o frecven de 108 flexii/s; aceste micri trebuie nelese tot ca rezultat al micrilor din interiorul moleculelor de lipid, la nivelul cozilor hidrofobe ale acizilor grai. Cei nesaturai, nu pot executa de regul, dect micri asemntoare tergtorului de parbriz.

2. Micri intermoleculare, care implic schimbarea poziiei moleculelor lipidice unele n raport cu altele. Acestea pot fi: Micri de translaie (difuzie lateral), micri ale lipidelor n planul membranei, n aceiai foi a bistratului, unele printre altele; frecvena acestei micri este de 107 schimbri de direcie/s. Trebuie menionat faptul c prezena colesterolului n bistrat determin o diminuare a mobilitii laterale.

Micri de interversiune sau de flip-flop, adic micri de trecere a lipidelor dintr-o foi a bistratului n cealalt; aceste micri presupun o rsturnare a moleculei n planul membranei, pentru a-i pstra capul hidrofil la exteriorul structurii, adic trecerea capului hidrofil prin poriunea hidrofob a membranei; frecvena acestor micri este foarte mic, aproape neglijabil (o dat pe lun pentru fiecare molecul individual). n membranele celulare micrile de interversiune ale lipidelor sunt facilitate de proteine specifice denumite translocatori fosfolipidici sau flipaze fosfolipidice.

Micarea de difuzie lateral i de flip-flop

Mobilitatea fosfolipidelor membranare

Tipuri de micri posibile ale moleculelor de fosfolipide n bistratul lipidic

Capacitate de micare a lipidelor n cadrul membranei determin proprietatea membranelor numit fluiditate. Fluiditatea membranelor poate fi modulat (modificat, reglat) de mai muli factori. Aceti factori pot fi de natur fizic, sau chimic. Factori fizici: temperatura i presiunea (fluiditatea membranelor este direct proporional cu temperatura i invers proporional cu presiunea). Factori chimici:(i) factori chimici intrinseci, sau (ii) factori chimici extrinseci. Factorii chimici intrinseci, pe care celula i folosete n modularea fluiditii membranei n funcie de necesiti, sunt cantitatea de acizi grai nesaturai din structura fosfolipidelor i cantitatea de colesterol. Factorii chimici extrinseci se clasific la rndul lor n (a) fiziologici (hormoni sau mediatori chimici liposolubili), (b) patologici (metabolii liposolubili ai unor ageni patogeni, substane chimice toxice liposolubile), sau (c) terapeutici (medicamente liposolubile).

Rolul lipidelor membranare

Principala funcie a a lipidelor membranare organizate n bistrat este funcia structural, conferind membranei celulare rolul de barier ntre mediul intracelular i extracelular. Lipidele membranare sunt implicate n importante funcii metabolice.
Lipidele membranare sunt implicate n fenomene de recunoatere i semnalizare intercelular.

Rolul metabolic al lipidelor membranare

Rolurile metabolice ale lipidelor sunt bine cunoscute pentru fosfogliceride. Acestea pot fi modificate de enzime specifice numite fosfolipaze. Exist mai multe tipuri de fosfolipaze, care au proprietatea de a elibera diverse molecule din structura complex a fosfogliceridelor. Tipuri de fosfolipaze: (i) Fosfolipaza A1, care elibereaz acidul gras din poziia 1 a glicerinei; (ii) Fosfolipaza A2, care elibereaz acidul gras din poziia 2 a glicerinei. Aciunea fosfolipazelor A1 i A2 conduce la formarea de lisofosfogliceride; (iii) Fosfolipaza B, care poate scoate ambii acizi grai din structura fosfolipidelor; acioneaz n general asupra lisofosfogliceridelor; (iv) Fosfolipaza C, care desface legatura dintre glicerin i fosfat, cu eliberarea diacilglicerolilor (DAG); (v) Fosfolipaza D, care elimin restul hidrofil X, cu eliberarea acidului fosfatidic.

Locurile specifice de aciune ale diferitelor tipuri de fosfolipaze, la nivelul moleculelor de fosfogliceride:
PLA1 fosfolipaza A1 PLA2 fosfolipaza A2 PLC fosfolipaza C PLD fosfolipaza D

PROTEINELE DIN MEMBRANA PLASMATIC

Proteinele din membran sunt dispuse n bistratul lipidic sub form de proteine individuale sau asociate n agregate multimoleculare. Similar lipidelor, proteinele de membran sunt molecule amfipatice: prezint regiuni hidrofile ce interacioneaz cu mediul apos i cu capetele polare ale lipidelor de la suprafaa membranei, i regiuni hidrofobe care interacioneaz cu acizii grai din structura fosfogliceridelor din interiorul bistratului lipidic.
E - spaiul extracelular P - membrana plasmatic I - spaiul intracelular

Principiile generale de organizare tridimensional a proteinelor

-helix

Catenele polipeptidice prezint structuri sub form de -helix i structuri -pliate. Structura beta este plan, iar structura alfa structur -pliat helix este o structur cilindric. Proteinele mari, cum sunt cele membranare conin combinaii de structuri alfa i beta. Structura favorabil din punct de vedere termodinamic pentru o secven de aminoacizi hidrofobi este structura alfa-helix i prin urmare segmentele proteinelor care strbat bistratul lipidic au aceast conformaie, ce se acomodeaz cu hidrofobicitatea din profunzimea bistratului lipidic. Un segment de circa 20 de aminoacizi este suficient de lung pentru a strbate complet bistratul lipidic dac este dispus perpendicular n bistrat.

Proteinele mari, cum sunt cele membranare conin combinaii de structuri alfa i beta.

Clasificarea proteinelor membranare

Clasificare a proteinelor membranare se face n funcie de poziia lor fa de bistratul lipidic: Proteine periferice, sau extrinseci: proteinele care sunt ataate de o parte i de alta a bistratului lipidic, interacionnd cu capetele hidrofile ale lipidelor sau cu domenii aparinnd altor proteine membranare; Proteine integrale, sau intrinseci: proteinele care sunt cufundate n bistratul lipidic, strbatndu-l complet sau parial.

Proteinele membranare: periferice i integrale. O alt categorie sunt proteinele ancorate covalent de lipide (cu ancor lipidic).

Proteinele periferice reprezint aproximativ 25% din proteinele unei membrane. Ele pot fi extrase din membrane cu soluii saline sau prin modificarea pH-ului. n funcie de partea bistratului lipidic cruia i sunt asociate se clasific n: - ectoproteine (proteine periferice asociate feei externe a bistratului, aadar expuse la exteriorul membranei celulare) - endoproteine (proteine periferice asociate feei interne a bistratului, expuse spre mediul intracelular). Proteinele integrale reprezint aproximativ 75% din proteinele unei membrane. Pot fi extrase din membrane numai prin folosirea de detergeni. Proteinele integrale care traverseaz complet bistratul lipidic sunt denumite proteine transmembranare. Cele care sunt parial cufundate n bistratul lipidic nu au primit o denumire specific.

Proteine periferice (extrinseci) i proteine integrale de membran (intrinseci)

(ectoprotein)

CITOSOL

(endoprotein)

Proteinele transmembranare
Proteinele transmembranare, au trei domenii structurale: (i) ectodomeniul (poriunea expus pe faa extern a membranei), (ii) domeniul transmembranar (poriunea ce strbate bistratul lipidic) (iii) endodomeniul, sau domeniul citoplasmatic (poriunea expus pe faa intern a membranei). Proteinele transmembranare se pot clasifica n funcie de numrul de treceri ale lanului polipeptidic prin planul membranei n: (i) unipas (au un singur domeniu transmembranar) (ii) multipas (sunt alctuite din mai multe segmente transmembranare unite prin secvene sub form de bucle).

Proteine transmembranare: - unipas (un singur segment TM) - multipas (mai multe segmente TM)

Glicoforina
(exemplu de protein transmembranar unipas)
Glicoforina - protein din MP a eritrocitelor, alctuit din 131 de aminoacizi, dintre care 23 (din poziiile 73-95) formeaz un segment hidrofob transmembranar cu structur n alfa-helix. Capetele catenei polipeptidice sunt reprezentate de segmente hidrofile expuse spre faa extracelular (captul amino terminal reprezint ectodomeniul) i respectiv spre faa citoplasmatic (captul carboxil formeaz endodomeniul). Glicoforina este de fapt o glicoprotein pentru c de structura proteic, la nivelul ectodomeniului, sunt ataate 16 lanuri glucidice (alctuite din peste 100 de resturi de monozaharide).

Rodopsina - exemplu de protein transmembranar

multipas, cu 7 segmente TM. Rodopsina este pigmentul vizual (purpur retinian) din celulele fotoreceptoare ale retinei (celule cu bastonae).

Mobilitatea proteinelor membranare

Mobilitatea proteinelor membranare const n capacitatea de a executa micri de rotaie i micri de translaie. Micarea de rotaie a proteinelor membranare n jurul propriei axe, denumit i difuzie rotaional, este de cel puin 1000 de ori mai lent dect cea a lipidelor. Micarea de translaie, denumit i difuzie lateral, este i ea mult mai lent dect a lipidelor, fiind n medie de 1m/s. Proteinele membranare nu pot executa micri de rsucire n planul membranei (flip-flop), micri ce au fost semnalate n cazul lipidelor membranare.

Rolul proteinelor membranare

Proteinele membranare au att rol structural, ct i rol metabolic. Rolul structural. O exemplificare a rolului structural al proteinelor membranare l constituie medierea aderenei celulelor la matricea extracelular sau la celulele adiacente (stabilirea jonciunilor dintre celule la nivelul esuturilor). Un alt exemplu legat de rolul structural l reprezint participarea proteinelor membranare la realizarea conexiunii dintre membrana plasmatic i componentele citoscheletului. Rolurile metabolice ale proteinelor membranare se manifest n ceea ce privete schimburile de informaii i substan dintre celule, sau dintre celule i mediu. Astfel, proteinele membranare pot fi receptori sau transportori prin membran. Proteinele membranare mai pot funciona ca enzime, sau ca proteine implicate n semnalizarea intracelular. n exercitarea acestor funcii asimetria membranei este deosebit de important.

Proteinelor membranare realizeaz conexiunea dintre membrana plasmatic i componentele citoscheletului.

Asimetria membranelor celulare dispoziia asimetric a lipidelor

Anumite tipuri de lipide membranare au o dispoziie asimetric n bistratul lipidic. De exemplu, fosfogliceridele cu grupri amino libere n structura capului polar (fosfatidilserina i fosfatidiletanolamina) sunt localizate preponderent pe faa citosolic a MP.
Extracellular space

 Proteinele, la fel ca i lipidele, au o dispoziie asimetric n membrana plasmatic. Aceast asimetrie permite membranei s exercite funcii diferite pe cele dou fee ale sale. ntruct nu pot executa micarea de flip-flop dispoziia asimetric a proteinelor n membrane este absolut. De exemplu, glicoforina are ntotdeauna domeniul aminoterminal de care este ataat poriunea glucidic expus spre exteriorul celulei.

Asimetria membranelor celulare dispoziia asimetric a proteinelor

Asimetria lipidelor membranare

Asimetria proteinelor membranare

PLUTELE LIPIDICE (engl. lipid rafts) sunt microdomenii membranare bogate n anumite tipuri de lipide (colesterol, glicolipide) la nivelul crora sunt concentrate anumite proteine Servesc drept platforme pentru diverse funcii celulare (de exemplu, traficul vezicular, traducerea semnalelor). Aceste microdomenii au o fluiditate mai sczut dect bistratul lipidic care le nconjoar. Existena lor a fost pus n eviden datorit faptului c sunt insolubile la 4oC n prezena detergentului neionic Triton X-100.

COMPONENTA GLUCIDIC A MEMBRANEI

n membranele celulare glucidele nu se gsesc ca entiti moleculare individuale, ci sunt grefate pe un purttor lipidic sau proteic, sub form de structuri oligozaharidice sau polizaharidice, formnd entiti chimice numite glicoconjugate (glicolipide i glicoproteine). Structurile glucidice sunt dispuse ntotdeauna pe faa extern a membranelor celulare formnd glicocalixul (nveliul glucidic de pe suprafaa celular). Grosimea glicocalixului este, n medie, cuprins ntre 20 i 50 nm, variind de la un tip de celul la altul, dar i pentru aceeai celul de la un domeniu membranar la altul.

GLICOCALIX
Glicocalixul reprezint nveliul glucidic al celulelor, constituit din structuri oligozaharidice inserate pe lipidele feei externe a bistratului, sau pe proteine (pe ectodomeniile proteinelor transmembranare).

Rolul glicocalixului
Glicocalixul protejeaz membrana celular mpotriva agresiunilor fizico-(bio)chimice i intervine n procesul de recunoatere celular. De exemplu, glicocalixul protejeaz celulele din vasele sanguine de agresiunea mecanic a fluxului sanguin, celulele tubului digestiv de agresiunea chimic (aciditatea gastric) i enzimatic (de aciunea proteazelor).

Glicocalixul endotelial (glicocalixul vaselor de snge)

Glicocalixul epiteliului intestinal