LIZOZOMII

Definiie i caracteristici. Etimologic denumirea de lizozomi deriva de la grecescul: lysis a liza i soma - corp, adic corpi litici (sinonime: sistem vacuolar, sistem lizozomal). Din punct de vedere filogenetic lizozomii i au originea in vacuolele protozoarelor (Amoeba). Au fost descoperii de Christian de Duve. Lizozomii sunt organite ale digestiei intracelulare, prezeni n toate celulele, cu excepia hematiei adulte. Se gsesc n numr foarte mare n hepatocite i macrofage. ntr-o singur celul pot exista cteva sute de lizozomi, ocupnd aproximativ 0,5 5% din volumul celular. Cea mai mare parte a lizozomilor este dispus n regiunea juxtanuclear n strns vecintate cu aparatul Golgi, centrul organizator al microtubulilor i endozomii secundari n faz avansat de evoluie. Lizozomii sunt delimitai de o membran de natur fosfolipidic i conin enzime hidrolitice (peste 50) implicate in degradarea tuturor tipurilor de polimeri biologici: proteine - proteaze, lipide lipaze, carbohidrai - glicozidaze i acizi nucleici- nucleaze, toate active n mediu acid. Enzimele au i funcia de a ndeprta de pe anumite molecule gruprile fosfat, sulfat i glicozil. Principala caracteristic a lizozomilor este lumenul cu pH acid asigurat de o pomp protonic membranar ATP-dependent care schimb Na+ cu H+ asigurnd astfel un mediu optim pentru aciunea hidrolazelor pH 5 (pH-ul citoplasmei este 7,2). Membrana lizozomilor deine componeni unici care asigur rezistena la aciunea hidrolazelor. Proteinele membranare au greuti moleculare variate ntre 20 i 150 kDa, mai importante fiind 2 proteine integrale unipass de tip I : lgp A i lgp B (100 120 kDa), cu cea mai mare parte a domeniului orientat ctre lumen i extensiv glicozilate (cu ct este mai mare

procentul de carbohidrai al unei proteine, cu att este mai greu digerat). De aceea, cele mai multe

1
Dr. Sanda Maria Creoiu

proteine lizozomale membranare implicate n asigurarea funciei lizozomilor (transportul moleculelor digerate n afara lizozomilor) sunt nalt glicozilate. Originea i formarea lizozomilor. Formarea lizozomilor reprezint o intersecie ntre calea secretorie i endocitoz. Lizozomii se formeaz n aparatul Golgi. Proteinele membranei lizozomale sunt sintetizate n RE i transportate apoi la aparatul Golgi pentru o glicozilare extensiv. Enzimele intralizozomale sunt sintetizate i ajung n lizozomi n urma unor procese elucidate de curnd. Proteina pe cale de a fi sintetizat este co-translatat i transportat vectorial prin membrana RE, peptidul semnal de la captul N- terminal este clivat i apare N-glicozilarea n lumenul RE. Complexul Golgi sorteaz n regiunea trans enzimele primite de la reticulul endoplasmic rugos prin regiunea cis. n aceast regiune precursorului hidrolazelor lizozomale i se ataeaz (sub aciunea unor glicotransferaze) un radical fosfat la reziduul de manoz. Gruparea manozo-6 fosfat formez semnalul de sortare, enzima fiind transportat prin cisternele aparatului Golgi spre regiunea trans unde se leag la unul sau doi receptori de manozo 6-fosfat distinci care direcioneaz enzimele spre lizozomi. Dup legare ncepe formarea unei vezicule care se acoper cu clatrin, se desprinde i va fuziona cu lizozomul n formare. Lizozomul are pe suprafa o pomp protonic cu rol de acidifiere a interiorului, ducnd la ndeprtarea gruprii fosfat i la disocierea hidrolazei de pe receptor. Receptorul va fi reciclat napoi n complexul Golgi. Dintre acesti doi receptori cel mai bine studiat este receptorul cation independent (M= 215.000 - 300.000 Da) care leag liganzi fosforilai la manoz la pH usor acid care apare n lumenul aparatului Golgi i i elibereaza la pH<5,5. Acest receptor este o proteina transmembranara de tip I. Receptorul sorteaz enzimele lizozomale (fosforilate la manoz) din reeaua trans-Golgi n vezicule acoperite care conin clatrina si adaptina. Studii de imunoelectronomicroscopie au aratat ca receptorul manozo-6-P cation-independent nu este prezent n lizozomi, ci este concentrat ntr-un compartiment delimitat de membrane i denumit compartiment pre-lizozomal care este un compartiment endozomal trziu. Enzimele 2
Dr. Sanda Maria Creoiu

lizozomale sunt gsite la concentraii reduse fa de lizozomi n compartimentul pre-lizozomal, sugernd c acesta ar fi un compartiment intermediar ntre regiunea trans a aparatului Golgi i lizozomi, cei care primesc noile enzime lizozomale sintetizate i asociate cu receptorii manozo-6-P derivai din veziculele acoperite ale trans-Golgi. Reciclarea membranelor apare att ntre lizozomi i compartimentul pre-lizozomal, ct i ntre acesta i trans-Golgi. Al doilea receptor are specificitate de legare similar, dar legarea oligozaharidelor fosforilate este cation dependent. De aceea se neumeste receptor de manozo-P cation dependent (M = 46.000Da) i este o protein transmembranar tip I glicozilat, cu o distributie celular mai bogat n compartimentul prelizozomal. Tipuri de lizozomi. Studii recente sugereaz existena a 2 tipuri de lizozomi: secretori i convenionali. Lizozomii secretori sunt gsii, dei nu singuri, n diferite celule ale sistemului imun derivate din linia hematopoietic (ex. limfocitele T). Lizozomii secretori sunt o combinaie ntre lizozomii convenionali i granulele secretorii. Ei difer de lizozomii convenionali deoarece conin produsul de secreie specific tipului celular n care se afl. Spre exemplu limfocitele T conin produi de secreie cum ar fi perforina i granzimele care atac att celulele tumorale ct i celulele infectate viral. Lizozomii secretori conin i

hidrolaze, proteine membranare, i au aceleai faciliti n meninerea pH-ului ca i lizozomii convenionali. n acest mediu acid produii de secreie sunt meninui ntr-o form inactiv. Lizozomii secretori maturi se deplaseaz pn n vecintatea membranei plasmatice unde rmn n stand by cu secreiile pregtite i gata de atac. Cnd limfocitul T este perfect orientat ctre celula int secreiile sunt eliberate, iar factorii de mediu, modificarile chimice locale, inclusiv cele de pH activeaz secreiile nainte ca acestea sa actioneze. Totul se face cu o precizie maxim n ceea ce privete locaia i timpul pentru a avea un efect maxim asupra intei i minim asupra celulelor nconjurtoare nepatologice. 3
Dr. Sanda Maria Creoiu

Lizozomii convenionali Lizozomii sunt considerai ca organite refolosibile i cnd celula se divide fiecare celul fiic primete un numr de lizozomi. Mecanismul prin care numrul acestora crete intracelular nu este elucidat. n ultimii ani cercettorii au emis ipoteze noi privitoare la modul de interaciune i aciune al lizozomilor urmrind traseul substanelor endocitate i eventual, i degradarea acestora. Cea mai mare parte a activitii acestora a fost centrat pe studiul endozomilor primari i secundari. Cu anumite rezerve, se pot considera fagozomii, autofagozomii i endozomii secundari ca fiind toi endozomi secundari n scopul de a nelege noiunea de sistem endolizozomal. Exist dovezi care arat c: 1. sediul proteolizei nu este n lizozomi ci ntr-un organit care seamn mai degrab cu

un endozom secundar i conine 20% din hidrolaze. 2. 3. lizozomii conin aproximativ 80% din enzimele necesare digestiei intracelulare. lizozomii sunt probabil organite care stocheaz hidrolaze pe care le in ntr-o form

inactiv la un pH aprox. 5.0. 4. lizozomii nu acioneaz ca organite de sine stttoare ci se intlnesc cu endozomii

secundari i acioneaz ca un system endolizozomal. Aceste dovezi au condus la dezvoltarea unor modele bazate pe tipurile de interaciuni dintre endozomi i lizozomi. Unul din aceste modele se numete srut i fugi ('kiss and run') iar cellalt fuziune 'fusion'. Modelul Kiss and Run. Acest model dup cum sugereaz i numele este bazat pe un scurt contact ntre endozomul secundar i lizozom, pentru a schimba ntre ei coninutul chimic. Dup separate lizozomul este dsponibil pentru a sruta un alt endozom.secundar. Fuziunea. Este ipoteza bazat pe fuziunea complet dintre un endozom secundar i un lizozom n urma creia rezult un organit hibrid. n tipul fuziunii are loc dezasamblarea molecular 4
Dr. Sanda Maria Creoiu

a coninutului endocitat. Aminoacizii i alte molecule rezultate sun preluati de transportori i trec din organitul hibrid n citoplasm. Dup aceste procese de dezasamblare i reciclare, coninutul organitului hibrid se condenseaz, lizozomul se reformeaz i este disponibil pentru o nou fuziune cu alt endozom secundar. Uneori rmne un mic reziduu care este eliminat din celul prin exocitoz sau este sigilat intr-o granul pigmentar pe toat durata vieii organismlui. Modele ale sistemelor de maturare Modelele bazate pe principiul unor structuri care se matureaz pentru a forma lizozomi nu sunt populare n prezent, dar dou ar tebui menionate. Modelul maturrii un endozom primar este format din vezicule cu originea n membrana plasmatic care fuzioneaz ntre ele. Alte vezicule aduc i preiau substane chimice pn cnd se transform n endozom secundar i apoi atinge stadiul de lizozom. Modelul transportului vesicular endozomii primari i secundari sunt organite separate i stabile legate prin vezicule care transport substane de la endozomii primari spre cei secundari care se maturez pentru a deveni lizozomi. Digestia lizozomal. Materialele cu care intr n contact lizozomii necesit procese de dezasamblare i reciclare i provin din 3 surse : 2 extracelulare i 1 intracelular. 1. Sursele extracelulare. Includ procesele de endocitoz, inclusiv pinocitoza, prin care

sun introduse lichide i mici particule datorit formrii unor mici invaginri membranare acoperite de proteine. Acestea vor forma in final vezicule acoperite de proteine (clatrin, coatomer i caveolin). Fiecare vezicul se dezvolt formnd un endozom primar 'early endosome' i apoi un endozom secundar 'late endosome'. 2. Tot din surse extracelulare, prin fagocitoza se introduc particule mari , n general

>250 nm inclusiv bacterii i detritusuri celulare. Fagocituza poate avea loc n orice celul, dar este specific macrofagelor care conin peste 1000 de lizozomi. Structura rezultat n urma fagocitozei se numete fagozom. 5
Dr. Sanda Maria Creoiu

3.

Sursele intracelulare sunt reprezentate de autofagozomi responsabili de ndeprtarea

unor organite degradate cum ar fi mitocondriile sau ribozomii. Fiecare organit a crui via a expirat este nconjurat de o structura membranar formnd un autofagozom care fuzioneaz cu lizozomul pentru a forma un organit hibrid. Aciunea digestiv a lizozomilor poate fi sistematizat n urmtoarele direcii: 1. Autofagia materialul are origine intracelular. a. Macroautofagia este procesul normal de turn over al organitelor. Organitul este nconjurat de o membran REN formnd o vacuol autofagic ce va fuziona cu lizozomul primar pentru a forma autofagozomul n care are loc digestia. b. Microautofagia este procesul care implic pinocitoza unor proteine citoplasmatice. 2. Autoliza este distrugerea intern a ntegii celule. a. Este o parte a apoptozei (moarte celular programat). b. celulele bolnave pot fi ndeprtate prin acest proces. Este prevalent n esuturile care necesit resorbie (viaa embrionar). 3. Heterofagia implic endocitoza (fagocitoza i pinocitoza) de materiale extracelulare. a. Fagocitoza este procesul prin care sunt ncorporate particule strine formndu-se fagozomi ce vor fuziona cu lizozomii primari dnd natere lizozomilor secundari. b. Pinocitoza este procesul prin care sunt nglobate macromolecule n soluie formndu-se pinozomi.Acetia vor fuziona i ei cu lizozomii primari. c. Dup digestie lizozomii ajung ntr-un stadiu n care materialul coninut nu mai poate fi degradat n continuare datorit epuizrii echipamentului enzimatic. Astfel apar corpii reziduali sau lizozomii teriari. 4. Crinofagia digestia produilor e secreie n celulele endocrine, prin care celula i controleaz calitatea i cantitatea substanelor secretate.

6
Dr. Sanda Maria Creoiu

PEROXIZOMII Definiie. Peroxizomii sunt organite mici (0,5-1,5 m), sferice, delimitate de endomembrane, gsite n majoritatea celulelor eucariote. Au fost iniial caracterizai morfologic de J. Rhodin n 1954, n celule renele de oarece, primind denumirea de microcorpi. n 1965, Christian De Duve a propus denumirea de peroxizomi pentru a sublinia implicarea lor n metabolismul peroxidului de oxigen. Sunt sediul princpal al utilizrii oxigenului. Numele de peroxizomi provine de la coninutul crescut n oxidaze care produc peroxidul de hidrogen, toxic pentru celule. Aceast reacie este:

RH2+ O2

R+H2O2.

Catalaza, enzima marker a peroxizomilor degradeaz peroxidul de hidrogen n oxigen i ap. Peroxizomii conin aproximativ 50 de enzime implicate n diferite ci metabolice: Daminoacid oxidaza, urat oxidaza, HMG-CoA reductaza, inta principal a medicamentelor numite statine, responsabile de scderea colesterolului. Examinai la microscopul electronic de transmisie, peroxizomii sunt delimitai la exterior de o membran simpl, de circa 6 nm grosime, iar n interior conin o matrice granular, amorf sau fibrilar. n matrice, se observ uneori, una sau mai multe structuri cristaline nconjurate de material amorf mediu electronodens. Aceste structuri denumite cristaloizi (miez de urat oxidaz) se observ n special la regnul animal, dar sunt absente n peroxizomii umani. Biogeneza peroxizomilor. Procesul prin care se formeaz membrana peroxizomilor este puin cunoscut. Acesta implic formarea bistratului lipidic i apoi importul proteinelor specifice n bistrat. Exist 3 proteine implicate n procesul de formare a membranei peroxizomilor, numite peroxine PEX3, PEX 16, PEX 19 Modelul biogenezei membranei peroxizomale implic: 1. Formarea bistratului lipidic. Desi numeroase organite se formeaz n reticulul endoplasmic, rolul acestuia n formarea peroxizomilor este incert. Se presupune c aici ar avea loc 7
Dr. Sanda Maria Creoiu

formarea bistratului lipidic nainte de importul PEX3, 16, 19, proces dependent de proteine necunoscute nc. 2. Importul PEX16 i PEX3. Aceste 2 proteine necesare formrii membranei peroxizomale sunt importate n funcie de prezena PEX 19 singura peroxin despre care se tie c intervine direct n legarea proteinelor din membrana peroxizomilor, fiind absolut necesar n geneza acestora. Importul proteinelor matricei peroxizomale Proteinele matricei peroxizomale sunt codificate de gene aflate n nucleu i sintetizate pe ribozomii liberi apoi importate post-translaional n citoplasm. Proteinele specifice peroxizomilor au 2 peptide semnal care direcioneaz aceste proteine spre matricea peroxizomal, numite PTS1 i PTS2 (peroxisomal targeting signal) Importul proteinelor matricei peroxizomale are 5 etape: 1. Legarea ligandului la receptor PEX5 recunoate PTS-1, iar PEX7 recunoate PTS-2. Se presupune c n acest proces intervin i proteine chaperone. 2. Transportul spre peroxizom este foarte puin cunoscut. 3. Andocarea receptorilor. PEX5 i PEX7 se asociaz cu PEX13,PEX14 i PEX17 constitueni ai complexului de andocare. 4. Disocierea i translocarea. PEX10 iPEX12 sunt proteine integrale din membrana peroxizomilor care interacioneaz direct cu PEX5. Procesul de import al proteinelor n matricea peroxizomilor este ATP-dependent. 5.Reciclarea receptorului . PEX5 este un receptor care efectueaz cicluri, fiind reciclat de peroxine cu rol de ATP-aze: PEX1 i PEX6. Funcii. Peroxizomii sunt eseniali pentru ca o celul s funcioneze nomal, deoarece: intervin n oxidarea excesului de acizi grai cu lan lung de atomi de carbon

rezultnd fragmente cu 2 atomi de carbon care, fie sunt convertite la acetilcoenzima A, fie sunt exportate din peroxizomi i folosite la noi sinteze de compui celulari; 8
Dr. Sanda Maria Creoiu

descompun purinele AMP i GMP la acidul uric i aminoacizi; produc i export n citoplasm colesterol; conin primele 2 enzime necesare sintezei plasmalogenilor (un grup important de

fosfolipide) care reprezint 19% din fosfolipidele organismului (se gsec concentrate n creier i cord); La plante exist peroxizomi specializai denumii glioxizomi, care convertesc acizii grai i lipidele n glucide. La insecte (licurici) intervin n atragerea partenerului prin enzima numit luciferaz. Organit semiautonom. Organitele celulare semiautonome sunt definite ca organitele aflate n relaie de simbioz cu celula, capabile de autoreplicare prin fisiune binar. In aceast categorie sunt incluse mitocondriile, cloroplastele i mai nou peroxizomii, care spre deosebire de primele nu posed material genetic propiu, dar sunt capabili de autoreplicare i se afl n interrelaie cu reticulul endoplasmic neted i cu mitocondriile. Peroxizomii sunt capabili de a se divide dei nu posed material genetic. Proliferarea peroxizomilor este o adaptarea la stimulii de mediu care semnalizeaz necesitatea unor enzime lizozomale. Inducerea proliferrii se face n 2 faze: 1. 2. Proliferarea prin nmugurire din peroxizomii preexisteni Creterea organitului prin importatrea de proteine ale matricei peroxizomale

Biogeneza peroxizomilor i formarea membranei peroxizomilor Proliferarea peroxizomilor este un proces dependent de o alt peroxin, PEX11. PEX11 este exprimat n mod normal i responsabil de meninerea numrului de peroxizomi, iar PEX11 poate fi indus ca rspuns la stimuli externi, determinnd proliferarea peroxizomilor. Boli peroxizomale. La om exist o varietate rar de boli peroxizomale motenite, care implic existena unor variante mutante a uneia sau a mai multor enzime peroxizomale.

9
Dr. Sanda Maria Creoiu

Adrenoleukodistrofia X-linkat (X-ALD) este o boal n care acizii grai nu sunt metabolizai corespunztor, consecina fiind o deteriorare a tecii de mielin a neuronilor. Boala apare la biei, deoarece gena este x-linkat. Alte boli sunt urmarea producerii unor peroxizomi nefuncionali. Sindromul Zellweger este consecina motenirii a 2 gene mutante, pentru receptorii care sunt responsabili de importarea proteinelor n matricea peroxizomului.

10
Dr. Sanda Maria Creoiu