Reacia sumar.

Bilanul
energetic
CH3COSCoA +3NAD+FAD+GDP+Pi+2H2O
+ +
2CO2 +3NADH+H +FADH2+GTP+2H
+HSCoA
 Reglarea ciclului Krebs
Citrat sintaza:
Inhibat - succinil CoA; AG; NADH; citrat
Activat: S- OA, Acetil CoA
IzocitratDH:

Activat: ADP, Mg, Mn

Inhibat: NADH2 i NADPH2, ATP
Alfa cetoglutaratDH

Inhibat: succinil CoA; NADH2; Se mare

 Reaciile anaplerotice
Reaciile ce furnizeaz produii
intermediari ai ciclului Krebs
1. Formarea de OA
Piruvat +CO2+ATPOA+ADP+Pi
E- piruvatcarboxilaza (biotin dependent)
Asp+cetoglutarat OA+Glu
n miocard i muchi:
Fosfoenolpiruvat +CO2+GDP OA +GTP
E- fosfoenolpiruvatcarboxikinaza
 Reaciile anaplerotice
2. Formarea alfa cetoglutaratului:
Glu+Piruvat Ala + cetoglutarat +
Ala
3. Formarea lui succinil CoA din
propionil CoA (1. din oxidarea AG cu
numr impar de atomi de C; 2. din
catabolismul Val, Ile, Met)
4. Formarea fumaratului (din
catabolismul Fen i Tyr)
 Oxidarea
biologic
Lanul respirator
Fosforilarea
oxidativ
 OBIECTIVELE
Oxidarea biologic. Dehidrogenarea substratelor - sursa energetic pentru
sinteza ATP - ului. Enziniele dehidrogenni.
Lanul respirator (schema). Complexele enzimatice. Acceptorii principali de
electroni i protoni, structura lor chimic.
Potenialul de oxido-reducere a componentelor lanului respirator.
Fosforilarea oxidativ. Locurile de fosforilare. Produsele finale ale oxidrii.
Reglarea intensitii funcionrii lanului respirator. Coeficientul
P/O, controlul respirator.
Decuplarea produselor de oxidare i fosforilare, principalii ageni
decuplani. Rolul biologic al produsului de decuplare, respiraia liber.
Mitocondriile, structura i permeabilitatea selectiv a membranelor pentru
diferii cumpui.. Sistemele-navet de transport al echivalenilor de
reducere.
Ipotezele principale, care explic procesele fosforilrii oxidative. Ipoteza lui
Mitchell.
Oxidarea microzomal, rolul citocromului P450 n reaciile de oxido-
reducere.
Vitaminele i rolul lor n procesele de oxidare biologic.
Noiune de radicali liberi. Oxidarea peroxidic a acizilor grai nesaturai
din membrane. Sistemele de protecie a celulei de acumilarea radicalilor
liberi.
 Oxidarea biologic. Dehidrogenarea
substratelor. Enzimele
dehidrogenrii.
Oxidarea biologic (OB) reprezint
totalitatea reaciilor de oxido-reducere ce
decurg n celule i esuturi.
Rolul: asigur organismul cu energie
accesibil n form de ATP.
OB are loc prin reacii de dehidrogenare
donarea atomilor de H2 sub form de
protoni i electroni: H22H +2 .
Are loc sub aciunea enzimelor
dehidrogenaze, ale cror Co sunt NAD+ i
FAD
 SUBSTRATELE NAD
1. Izocitrat +NAD alfa-cetoglutarat +NADH+H
E- izocitratDH
2. Alfa-cetoglutarat +NAD succinil Coa +NADH+H
E-alfacetoglutaratDH
3.Malat +NAD OA+NADH+H
E-malatDH
4.Lactat +NAD Piruvat +NADH+H
E-lactatDH
5. Gliceraldehidfosfat +NAD +H3PO41,3
difosfoglicerat +NADH+H
E- GAP DH
6. Hidroxiacil CoA +NAD cetoacil Co-A +NADH+H
E-hidroxiacil -CoA DH
 SUBSTRATELE FAD
dependente
Succinat +FAD Fumarat +FADH2
E- succinat DH
Acil CoA + FAD enoil-CoA+FADH2

E- acil CoA DH
NADH+H+ i FADH2 rezultai n
reaciile de oxidare a acestor
substrate transfer p i n lanul
respirator.
 Lanul respirator (LR). Rolul.
Structura.
LR - un ansamblu (complex) de enzime
i sisteme de oxido-reducere, ce
particip la transferul H+ i de la Co
reduse (NADH, FADH2) la O2 cu
formarea H2O.
Este ultima etap a degradrii aerobe.
Este localizat n membrana intern a MC
Funcia LR:
1. Prin transferul protonilor i electronilor
Co se reoxideaz, putnd asigura
dehidrogenri n continuare.
2. Cnd Co se reoxideaz, se elibereaz
energie ce servete la sinteza ATP.
 Componentele LR
1. NADH+H sau FADH2
2. Flavoproteinele FP: preiau p i e- de la NADH+H
sau FADH2
FPN (NADH DH) - ca Co FMN - preia H2 de la
NADH+H
FPs (succinatDH)- ca Co FAD- preia H2 de la
FADH2
3. CoQ-ubichinona pn la CoQ sunt transportai
att p ct i e-
4. Sistemul de citocromi: b, c1, c, a i a3
- Sunt compui heteroproteici,a cror grupare prostetic
este hemul
1. Transport doar e Fe+++ + e- Fe++
2. 1 citocrom transport doar 1e- - 2 e- sunt transportai
de 2 citocromi
5. Fe-S proteinele sunt localizate :
a. ntre FP i CoQ
b. ntre cit b i citc1
Schema LR
Structura componentelor
LR
 O
C H 3 O CH 3

CH 3
C H 3 O ( CH 2 CH C CH 2 )n H
O c o e n z y m e Q
+
2 e + 2 H

O H
C H 3 O CH 3

CH 3
C H 3 O ( CH 2 CH C CH 2 )n H
O H c o e n z y m e Q H 2
 CH3

CH3 HC S CH2 protein

N
H3C CH3
N Fe N

OOC CH2 CH2 CH S CH2 protein

N
CH3

CH2 CH3

CH2

COO Heme c
 Potenialul de O/R
Transferul p i de la NADH sau FADH2 pn
la O2 se face prin intermediul mai multor
sisteme redox.
Fiecare sistem redox (O/R) este alctuit
dintr-un donor i acceptor de echivaleni
reductori.
Fiecare sistem redox din LR posed un potenial de
oxido-reducere (potenial redox), care se msoar
n voli.
Potenialul redox standard E0 mrime egal cu
fora electromotoare exprimat n voli, ce apare
n semiconductor, n care donorul de e- i
acceptorul acioneaz n concentraie de 1,0 mol,
la t =25 *c, i pH 7,0 formnd un echilibru cu
elecrodul ce adiioneaz e- de la donor i-i
transfer la acceptor.
 Cu ct potenialul redox este mai electronegativ
cu att este mai nalt capacitatea de a ceda , i
invers, cu ct potenialul este mai electropozitiv,
cu att este mai nalt capacitatea sistemului de
a adiiona electroni.
Sistemele redox sunt aranjate n ordinea creterii
potenialului de oxido-reducere.
 transferul n trepte permite eliberarea energiei n
pachete a crei valoare este n jurul lui 7,3
kcal/mol (ct necesit sinteza unui mol de ATP din
ADP i H3PO4).
Torentul de e orientat n direcia micorrii
energiei libere a sistemului
Cu ct e mai mare diferena potenialului dintre 2
redox perechi cu att mai mare e diminuarea
energiei libere la transferul .
tiind potenialul redox al fiecrei perechi se
pot calcula modificarea energiei libere standard.
G = -nFE
n-numrul de
F-constanta lui Faraday (23062 cal/Vmol)
E0-diferena de potenial
G = -223062[+0,82-(-0,32)] = -52,6 kcal
7,3 x 3 = 21,9 cal
Randamentul utilizrii energiei libere 42%
 FOSFORILAREA
OXIDATIV
reprezint sinteza ATP din ADP i Pi
(cuplat cu LR), pe seama energiei eliberate
la transferul echivalenilor reductori n LR
de la coenzimele reduse la O2.
Deoarece transferul de are loc treptat,
energia se elibereaz n pachete n
trepte . Pentru a se forma ATP diferena de
potenial trebuie s fie nu mai mic de
0,22V.
Funcionarea cuplat a LR i FO este
asigurat de 5 complexe
 Composition of Respiratory
Chain Complexes
No. of Gruprile
Complex denumirea Proteins prostetice

Complexul I NADH 46 FMN,

Dehidrogenaza Fe-S

Complexul Succinat-CoQ 5 FAD, cit b560,

II Reductaza Fe-S

Complexul CoQ-cit c 11 cit b562, cit b566,

III Reductaza Fe-S, cit c1,

Complexul Citochrom 13 cit a, cit a3, Cu

IV Oxidaza
 Complexul I- NADH CoQ
reductaz
Cderea de potenail 0,42V
G0 = -19,4 kcal/mol - 1mol ATP, restul se
degaj sub form de cldur
Inhibat: rotenon(otrav pentru peti), Na
amital (barbiturat); pericidin (antibiotic)
Complexul II- succinat - CoQ-
reductaza
Variaia de potenial este de 0,07V;
G0 = -3,2 kcal/mol nu se sintetizeaz
ATP
Inhibat malonat (inhibiie competitiv)
 Complexul III- CoQ- citocrom c
reductaza
Variaia de potenial este de 0,21V;
G0 = -7,75 kcal se sintetizeaz 1mol de ATP.
Inhibat antimicina A
 Complexul IV-
citocromoxidaz
Catalizeaz adiia a 4 la O2 molecular (a 2 la O).
O2 + 4 + 4H+ 2H2O
Cderea de potenial de 0,54V.
G = -24,8 kcal se sintetizeaz 1mol de ATP
Inhibat: CO, ozide, cianide.
 Complexul V ATP-
sintetaz
alctuit din:
1. F0 strbate membrana intern a MC, const din
4 tipuri de protein ce formeaz un sistem de pori
transmembranari prin care trec protonii- canal de
protoni
2. F1- partea catalitic - factor de cuplare 1:
a. se afl n intregime n matrixul mitocondrial (form
de sfer).
b. e alctuit din cinci tipuri de proteine (3),
(3), , , .
c. la acest nivel are loc reacia de condensare a ADP
+ Pi ATP+H2O
Inhibat: oligomicin, atractilatul (glicozid)
 Mitochondrial ATP Synthase E. coli ATP Synthase
These images depicting models of ATP Synthase subunit
structure were provided by John Walker. Some equivalent
subunits from different organisms have different names.
Toate componentele LR sunt dispuse n
membrana intern a mitocondriilor.
CoQ i cit c funcioneaz individual, iar
celelalte componente se grupeaz n
complexe.
 Locusurile unde are loc sinteza ATP
se numesc puncte de fosforilare.
n LR (lanul respirator)
deosebim 3 puncte de fosforilare:
1. NADH+H----CoQ
2. Cit b----citc
3. cita--cita3
 Lanul respirator
MalOAA Suc Fum 3H +
MDH H+ ATP
2H+ 2H+
2H+
matrix NAD NADH
+
2H+ O2 H2 O
FAD
FADH2
CI C II C III C IV
SDH
membran NADHDH Cyt bc1 Cyt c ox ATPase
a
intern 2e- QH2

cyt coxcyt cred H+ ATP

2H +
2H +

spaiul 2H + 3H+
intermembran 2H+ 2H+
ar
10H+ims/4H+m = 2.5H+ per ATP
 Bilanul general n
procesele LR-FO.
NADH + H+ + O2 + 3ADP + 3Pi NAD+ + 3ATP +
4H2O
FADH + H+ + O2 + 2ADP + 2Pi FAD + 2ATP +
3H2O
Raportul ntre numrul de moli de ATP produi i O2
consumat este numit ct de fosforilare P/O.
De la NADH+H pn la O2 - P/O = 3/1 ramura
lung,
De la FADH2 pn la O2 - P/O = 2/1 ramura medie.
P/O reflect cuplarea transportului H+ i (respiraia)
i fosforilarea (sinteza ATP). Coeficient indic ce
cantitate de P anorganic (H3PO4) se transform n P
organic (ATP) la transportul unei perechi de H+ i n
LR.
 Ipoteze principale cu privire la
procesele de FO. Ipoteza lui Mitchell
Prin ce mecanism energia eliberat n LR
este cuplat cu formarea ATP?
Teoria chimic, numit i a
intermediatorilor comuni (produi
intermediatori macroergici, precursori de
ATP).
Teoria conformaional (energia este
preluat de o protein ntr-o conformaie
activ, ce stimuleaz ATP).
Teoria chemiosmotic (Mitchell, 1961).
 Ipoteza lui Mitchell
Ce postuleaz c starea intermediar
energetic care determin sinteza ATP din
ADP+Pi e reprezentat de gradientul de
protoni, ce se stabilete ntre faa interioar i
cea exterioar a membranei interne a MC n
timpul transferului de electroni.
la transferul unei perechi de (energia
eliberat) pompeaz 3 perechi de H2+ din
interiorul MC spre exterior(spaiu
intermembranar).
Astfel partea extern a membranei interne a
MC pozitiv, dar cea intern negativ
apare gradient de c%/ potenialul
transmembranar
Gradientul protonilor are 2 componente :
1. Electric (potenial de membran -
2 de pH ( pH)gradientul H+
Protonii revin din spaiu intermembranar n mitocondrii
prin partea F0 (deoarece restul membranei este
impermiabil).
Acest flux de protoni este fora morice care determin
la nivelul subunitii F1 sinteza de ATP din ADP+Pi
Unul din postulatele teoriei chemiosmotice prevede c apa
rezultat n reacia de formare a ATP din ADP i Pi se
ionizeaz spontan, ionii H+fiind dirijati spre interiorul
mitocondriei (ei urmnd s creeze gradientul protonic) n
timp ce ionii OH- snt dirijati spre spapul intermembranar
 Datele experimentale ce
confirm:
S-a confirmat generarea gradientului de
protoni n cele 3 puncte ale LR. Anume
gradientul de protoni se utilizeaz la
sinteza ATP.
S-a demonstrat ca pH matrixului
mitocondrial crete, iar cel al mediului
extern al membranei MC scade (acid).
S-a argumentat c transferul H+ din MC
n timpul transportului de i revenirii
lor prin ATP-sintetaza sunt comparabile
cu viteza lor din cadrul FO n MC
intacte.
Transportul mitocondrial al
ATP i ADP
ATP/ADP-
translocazei- ADP + Pi ATP matrix
lower [H+]
asigur transferul ATP4
ADP din citozol n __
MC n schimbul ATP
din MC- citozol. ++
3 H+ ATP4 ADP3 H2PO4 H+
Fosfattranslocaza
energy
transfer Pi n MC, requiring higher [H+]
nsoit de deplasarea reactions ADP + Pi cytosol
ionilor de H2.
 Controlul respirator

Organismele vii sintetizeaz ATP n raport cu

necesititatea lui de aceea FO cuplat cu LR este
riguros controlat.
Deoarece LR i FO etapa final a degradrii G, L, P
controlul respirator se poate efectua att prin
compui direct implicai n LR i FO, ct i prin
intermediatorii degradrii celor 3 clase.
Rolul primordial i revine ADP.
1. F1 din ATP - sintetaz rmne blocat n lips de ADP.
2. Intensitatea transferului de protoni prin F0
deasemenea e determinat de nivelul ADP.
3. ADP reglator alosteric (+) pentru mai multe E ce
sunt implicate n degradarea G, L i P.
 Controlul respirator
Controlul respiraiei se nfptuiete
prin intermediul acceptorului - ADP.
Lipsa de ADP - inhib respiraia i
stopeaz fosforilarea. La adugarea
de ADP crete brusc consumul de 02
---- se activeaza lantul respirator i
ADP se fosforileaz la ATP.
 Decuplarea produselor de oxidare i
fosforilare, principalii ageni decuplani.
La FO contribue:
1. Integritatea membranei interne a MC orice
leziune duce la perderea capacitii de FO (n
timp ce transferul de poate continua).
2. Impermeabilitatea membranei interne pentru
ionii H+ OH- K+ Cl-.
FO poate fi decuplat cu ajutorul unor
substane chimice, ce inhib sinteza ATP dar
neafectnd decuplani ageni decuplani. La
aciunea lor respiraia crete, iar FO este
inhibat.
protonofori
AD
ionoforele
 Protonoforii mresc permeabilitatea
membranei pentru protoni(H+), lichidnd
potenialul transmembranar.
1. a.g. liberi
2. 2,4 dinitrofenol
3. salicilaii (antiinflamatoare)
4. dicumarol (anticoagulant)
5. T3 i T4 (h.gl.tiroide)
Ionoforele ei leag i transfer ionii prin
membran:
- valinomicina ( K+) , nigericina ( K+),
gramicidina A Na+, K+; H+.
Decuplanii
H+
2,4-
Dinitrophenol
OH

NO2 NO2 H+

X
O
-
H+
+ H+
NO2 NO2
 Inhibitorii ai fosforilrii acioneaz asupra
ATP-sintetazei. Oligomicina blocheaz
ptrunderea H+ prin FO (nchide canalul)
cu ncetul slbete respiraia
ntrerupere.
 Inhibitorii
Fosorilrii de
ADP X
Oligomycin

Atractyloside

X
 Fosforilarea oxidativ este influenat de o
serie de ageni clasai n 3 grupe :
- agenti de decuplare- permit transportul
electronilordar blocheaz fosforilarea. Ex.2,4
dinitrofenolul faciliteaz trecerea prin
membran a H+
- inhibitorii fosforilrii oxidative Ex Oligomicina
-mpedic i transportul i fosforilarea
oxidativ.
- Ionoforii - formeaz complexe liposolubile cu
cationi specifici trecndui prin membran.
 Respiraia liber
are loc decuplarea FO de LR i toat
energia este convertit n cldur, care nu
se utilizeaz la executarea funciilor
celulare.
Astfel MC devin o sob, ce produc cldur.
E necesar n situaii, cnd necesitatea
cldurii este mai mare dect ATP.
n esutul adipos brun MC sunt
specializate la producerea cldurii (nou-
nscui, animale n hibernare)
termogenina.
 Oxidarea microsomal
Un alt tip de reacii de OB este cel oxigenazic.
Acestea sunt catalizate de monooxigenaze.
Lanurile monooxigenazice de oxidare sunt
lanuri scurte de transport al H+ i a cror
surs sunt NADPH+H
SH + O2 +NADPH + H+ S-OH + H2O +
NADP+ reducerea O2 i incorporarea lui n
anumii compui chimici (include un atom de O,
cellalt este redus la H2O).
un asemenea lan este microsomial - localizat
n RE al celulelor hepatice i suprarenale. Rol
esenial l are cit P450 (activatorul O2). El
cuprinde o FP (FAD) la nivelul creia H2 este
disproporionat n H+ i .
 Rolul OM
Rolul: plastic i dezintoxicare.
n ficat hidroxilarea medicamentelor,
neutralizarea toxinelor, hormonilor
(sunt eliminai).
n medulosuprarenale sinteza
noradrenalinei i adrenalinei.
n corticosuprarenale sinteza
colesterolului, hormonilor gluco- i
mineralocorticoizi.
 Noiune de radicali liberi. Oxidarea
peroxidic a AG nesaturai. Sistemul de
protecie.
La reducerea incomplet a O2 se
formeaz forme reactogene i
agresive ale substanei cum ar fi:
superoxidanionul, peroxid; hidroxil
sau peroxidul de hidrogen.

 Aceti produi iniiaz OPL, ce se petrece n lan cu

generarea de peroxizi a AG nesaturai.
n condiii fiziologice ORL i OPL sunt implicate n
rennoirea membranelor biologice, degradarea
substanelor fagocitare; biosinteza icosanoizilor.
Amplificarea lor poate condiiona moartea celulei
(lezarea membranelor).
SAO sistem de protecie AO (enzimatic,
neenzimatic)
SOD transformarea O2- n H2O2
2 O2- +2H+ O2- + H2O2
Catalaza 2H2O2 2H2O + O2
Glutation reductaza
glutationperoxidaza
 Oh my!
Now what?
Alcohol Metabolism
EtOH
Peroxisome Cytosol
H2 O2 O2 ER NAD+
CAT NADPH MEOS ADH
H2 O P450 Pyrazole
Aminotriazole NADP+ NADH

Acetaldehyde
NAD+ Mitochondrion
AlDH
NADH Disulfiram Chlorpropamide
(antabuse) (diabetes)
Acetate

Extra-hepatic tissue
Eric Niederhoffer