Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
LP 9 Microbiio Reactia Ag Ac
LP 9 Microbiio Reactia Ag Ac
CATEDRA DE MICROBIOLOGIE
LP9
REACŢIA DE AGLUTINARE
Din latină: agglutinatio – încleiere
Ac. omologi
• Indicatii:
– confirmarea rezultatelor aglutinarii pe
“lama” sau transarea lor cand sunt
incerte (aglutinari cu mai multe seruri,
aglutinari tardive)
– titrarea aglutininelor pentru Dg.
seroimunologic
REACŢIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI
Necesar:
a. Pentru confirmarea identitatii antigenice:
Suspensia Ag.-ica preparata diferentiat cu
tipul Ag. Implicat:
Ag. H (ex. Salmonella): cultura de 8 h. in bulion, cu
mobilitate verificata microscopic, formolata 0,2%)
Ag. O: suspensie din cultura de 20 h. pe agar nutritiv
inactivata 1 – 2,5 h. la 100° C daca bacteria este
mobila sau are Ag. de invelis care o pot face
inaglutinabila prin seruri anti – O (ex.: Ag. K la Shigella
subgrup A, C, D, Ag. L si B la E. coli, Ag. Vi la
Salmonella). Bacteriile imobile sau fara Ag. K pot fi
folosite in suspensii vii.
REACŢIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI
Ag. de invelis K si variantele sale: suspensie
din cultura de 20 h. pe agar nutritiv, formolata
0,2%.
Serul de referinta – indicat de rezultatul
aglutinarii pe lama.
b. Pentru Dg. Imunoserologic:
probe de ser prelevate in dinamica
Ag. de referinta
REACŢIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI
• Citire si interpretare:
– se interpreteaza comparativ cu tubul martor,
pentru stabilitatea suspensiei de Ag., se
observa supernatantul, si cu ajutorul oglinzii,
fundul tubului.
– Aglutinatul H – apare floconos, usor disociabil
prin agitare
– Aglutinatele O si K – dense, grunjoase.
REACŢIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI
• Se folosesc urmatoarele simboluri pentru
intensificarea reactiei:
• 0 = aspect identic cu martorul
• 1+ = depozit absent, aglutinare vizibila numai la
marire cu oglinda concava
• 2+ = supernatant usor opalescent, aglutinat depus,
cvasifloconos sau grunjos, vizibil cu ochiul liber
• 3+ = supernatant foarte usor opalescent, depozit
floconos, respectiv grunjos, cu tendinta de formare
de pelicula
• 4+ = supernatant perfect clar, depozit floconos
bogat, respectiv pelicula continua, omogena de
aglutinare, care acopera fundul tubului (“umbrela”).
REACŢIA DE AGLUTINARE
IN TUBURI
• Titrul este indicat de tubul de aglutinare +2.
• Indicatii:
• Identificarea Ag. specifice de grup
• Pentru seroDg., cand cu baterii de Ag. cunoscute,
putem titra Ac. fixatori de C’, care, de regula,
persista pana la un an de zile.
Acesti Ac. Apar precoce in cursul infectiilor, deci
semnificatia prezentei lor este de infectie acuta
sau recenta; exceptie fac unele infectii ale SNC
cand apar tardiv.
RFC – REACTII DE FIXARE A C’
• Utilitate:
• Dg. infectiilor respiratorii acute: gripa, pneumonii
interstitiale
• Dg. rickettsiozelor
• Dg. leptospirozelor
REACTII PRIMARE
RIA – RADIOIMUNODOZARE
• Ag. pot fi marcate cu izotopi radioactivi (3H, 125I, 14C).
• Exista o competitie specifica pentru Ac. intre o cantitate
cunoscuta de Ag. radioactiv si Ag. nemarcat pe care il
dozam.
• Dupa reactie masuram radioactivitatea complexului Ag. –
Ac. Pentru aceasta, fie Ac. este in prealabil fixat pe un
suport insolubil, fie complexul este precipitat cu ser anti
– Ig.
• [Ag. nemarcat] o aflam comparand radioactivitatea
complexului cu o curba standard.
• Metoda foarte sensibila pentru cuantificarea Ag. si
haptenelor.
REACTII PRIMARE
RIA – RADIOIMUNODOZARE
• Indicatii:
• Dozarea hormonilor
• Dozarea medicamentelor
• Dozarea markerilor specifici infectiei cu v. hepatitei
B (Ag. HBs, Ac. anti – HBs, Ac. anti – HBc,
Ag. HBe, Ac. Anti – HBe)
Dezavantaje:
cost ridicat al materialelor
riscul manipularii substantelor radioactive
REACTII PRIMARE
ELISA – Enzyme Immunoassay –
EIA)
• Principiu: prezenta complexelor Ag – Ac
poate fi vizualizata si cuantificata prin
adaugarea in mediul de reactie:
• a conjugatului – fie Ag., fie un Ac. cunoscut cuplat
cu o enzima
• a substratului cromogen specific enzimei de
marcare
REACTII PRIMARE
ELISA – Enzyme Immunoassay –
EIA)
• Indicatii: identificarea unor Ag. sau Ac.
• In functie de modificarea activitatii
markerului enzimatic, EIA pot fi clasificate
in:
– Reactii de “faza omogena”
– Reactii de “faza heterogena”
REACTII PRIMARE
IMUNOFLUORESCENTA
• Principiu: conjugate imunofluorescente
realizate cu Ac. specifici recunosc Ag.
dintr-un mediu de reactie, permitand
evidentierea lor microscopica.
• Reactia de culoare obtinuta difera in
functie de fluorocromul utilizat.