Metodele de analiza a derivatilor

benzodiazepinei:nitrazepam,midazolam,o
xazepam,alprazolam
Nitrazepamum
Nitrazepam
7-nitro-1,3-dihidro-5-fenil-1Н-1,4-
benzodiazepin-2-оn Galbena deschisa sau
galbena deschisa cu o nuanță
verzuie, pulbere cristalină,
inodoră. Practic insolubila în
apă, ușor solubila în etanol și
eter, greu solubila în
cloroform.
Midazolamum
Midazolam
8-Clor-6- (2-fluorofenil) -1-metil-4H-
imidazo [1,5-a] [1,4] benzodiazepină

Substanță cristalină
albă sau ușor gălbuie,
insolubilă în apă.
Clorhidratul de
midazolam este solubil
în apă.
Oxazepamum
Oxazepam
7-Clor-1,3-dihidro-3-hidroxi-5-fenil-
2H-1,4-benzodiazepin-2-on
Pulbere cristalină alba
sau alba cu o nuanță
ușor gălbuie, inodora.
Practic insolubila în
apă, ușor solubila în
etanol, cloroform, eter,
solubila în
dimetilformamidă.
Alprazolamum
Alprazolam
8-Clor-1-metil-6-fenil-4H- [1,2,4]
triazolo [4,3-a] [1,4] benzodiazepină
Pulbere cristalină fină,
albă sau cremoasă.
Insolubila în apă și
slab solubila în alcool.
Cromatografia într-un strat subțire de sorbent
Screeningul TLC permite identificarea preliminară a unui număr mare de substanțe într-un timp
destul de scurt și studii comparative ale diferitelor probe. Benzodiazepinele formează un grup
divers de substanțe chimice, cu toate acestea, atunci când sunt utilizate în combinație cu cele 3
sisteme TLC enumerate mai jos, se obțin separări bune. Gel de siliciu G activat cu absorbant pe
plăci de sticlă uscate, acoperirea (grosime 0,25 mm) conține un aditiv fluorescent care fluoresc la o
lungime de undă de 254 nm. Sunt utilizate următoarele sisteme. Sistemul A: cloroform-acetonă
(40:20); sistemul B: cloroform-metanol (90: 10), sistemul C: ciclohexan-toluen-dietilamină
(75:15:10). Detecție secvențială: radiații UV la 254 nm; Acid sulfuric 2M, încălzire până la 80 ° C,
radiație UV la 366 nm; reactiv acid iodoplatinat de potasiu (pete purpurii).
 Spectrofotometrie UV
Structura acestui grup de substanțe determină natura absorbției în regiunea UV. În spectrele
UV există 3 benzi de absorbție cu Xmax în regiunile 200-215, 220-240 și 290-330 nm.
Absorbția fluxului de lumină al derivaților 1,4-benzodiazepinici din regiunea UV variază în
funcție de pH-ul soluțiilor lor:
• într-un mediu acid - datorită protonației atomului de azot în poziția 1 sau 4;
• într-un mediu alcalin, este posibilă o schimbare a sistemului cromofor (o creștere a
conjugării datorită tautomerismului lactim-lactam al legăturii azometinice în poziția 1,2).
Capacitatea de a absorbi selectiv în regiunea UV a spectrului stă la baza identificării
compușilor din această grupă prin spectre de absorbție electronică. Pentru a aplica această
metodă de analiză, este necesară purificarea preliminară a extractului din materialul biologic
(cel mai adesea folosind TLC). Pata detectată pe cromatogramă (prin fluorescență în lumina
UV) este eluată cu un solvent adecvat și spectrul de absorbție este înregistrat.
 Spectroscopie IR

Spectrele IR ușor interpretabile sunt obținute atunci când se

lucrează cu soluții în tetraclorură de hidrocarburi. Cu toate acestea,
solubilitatea redusă a multor benzodiazepine din ea nu permite
întotdeauna obținerea unor astfel de spectre. Spectrele obținute din
probe de benzodiazepine cristaline sunt în general mai complexe
datorită interacțiunilor intermoleculare. În ele, atribuirea fiabilă
poate fi făcută numai pentru unele benzi caracteristice.
 Cromatografie gazoasă
Derivare (derivatizare)Structura chimică a multor analiți, în special polaritatea dacă sunt prezente grupări
hidroxi și amino, poate limita eficacitatea cromatografiei gazoase. Prin urmare, se utilizează o tehnică de
derivatizare. Sunt descriși derivați de silil, acil și alchil. Concentrații mari de benzodiazepine (când se introduc
1-2 cromografi în cromatograf) pot fi determinate fără derivatizare.
Derivații de silil au avantaje în spectrometria de masă datorită faptului că dau ioni stabili cu greutăți
moleculare ridicate. Cu toate acestea, extractele sililate din material biologic tind să fie murdare și, prin
urmare, nu sunt potrivite pentru un detector de azot fosfor (NPD). Sililarea nu îmbunătățește răspunsul unui
detector de captare de electroni (ECD).
Acilarea și alchilarea hidroxi și a derivaților amino se efectuează cu clorură de propionil și respectiv iodură de
propil. Acilarea / alchilarea este avantajoasă prin faptul că derivații pot fi purificați în continuare înainte de
analiză.
 Cromatografie gazoasă-spectrometrie de masa

Spectrometria de masă cromatoasă este o metodă de

confirmare foarte specifică pentru analiza
benzodiazepinelor.
Pentru identificarea benzodiazepinelor de către GC / MS,
este necesar să se înregistreze spectrele curentului ionic
total (în modul scanare completă). Identificarea se
efectuează pe baza unei comparații a timpului de retenție
și a cel puțin trei ioni principali cu substanțe standard.
 Cromatografie lichidă de înaltă performanță

Еste utilizata pentru determinarea cantitativă a benzodiazepinelor. Valoarea

screening-ului acestei metode este controversată datorită reproductibilității timpilor
de retenție de la coloană la coloană și depinde de o serie de factori. Coloanele de
fază inversă sunt utilizate pentru a analiza benzodiazepinele din probele biologice.
Fazele mobile sunt acide, un amestec de tampon fosfat și acetonitril și / sau
metanol. Este important să controlați pH-ul fazei mobile deoarece o mică diferență
afectează semnificativ rezultatele cromatografiei. Pentru amestecuri complexe de
benzodiazepine sau în analiza necunoscutului, este necesară o analiză gradientă sau
o combinație de sisteme izocratice. Majoritatea benzodiazepinelor sunt detectate la
230 nm, nitrobenzodiazepinele la 240 nm. Este necesară detectarea diodelor -
matrice pentru o mai bună identificare.