Electroforeza pe folie din derivai de celuloz

Membranele de acetat de celuloz au fost produse pentru filtrare, utilizarea membranelor de

acetat de celuloz ca mediu suport a fost sugerat de Kohn n 1957. Foliile de acetat de
celuloz se obin prin tratamentul celulozei cu anhidrid acetic, iar produsul, triacetat de
celuloz este cel mai des utilizat pentru electroforez.
Beneficile utilizarii foliei din derivai de celuloz:
Membrana prezint o grosime de cca. 12 m i cu un diametru al porilor de cca.
0,4 m, este un material omogen care conine numai urme de impurit i. Este de
culoare alb opac, cu suprafa neted i uniform.
La microscop se observ o structur microporoas care mpiedic difuziunea
zonelor sau a spoturilor, din acest motiv se obine o bun separare a proteinelor
plasmatice chiar la o tensiune mic.
Puritatea materialului este mare, lipsesc hemicelulozele, lignina iar metalele grele
sunt prezente numai n urme. Fa de hrtia de filtru, adsorb ia proteinelor i a
altor substane pe acest mediu suport este minim, deci fenomenul de coad sau de
aspect de comet fiind practic eliminat.
Timpul de separare este mai scurt iar membranele de acetat de celuloz sunt ideale
pentru tehnicile de imunodifuzie i imunoelectroforez.
Dintre dezavantajele utilizrii membranelor de acetat de celuloz enumerm preul mai mare
fa de hrtia de filtru, necesitatea de a acorda mai mult aten ie pentru ob inerea unor
rezultate reproductibile. n prezent s-au adus mbunt iri ale produsului ini ial prin apari ia
acetatului de celuloz gelatinizat (Cellogel).

 Foliile (strips-urile) din acetat de celuloz sunt insolubile n ap, alcooli, eteri, acizi i
baze diluate i n majoritatea hidrocarburilor, dar sunt u or solubile n fenol, acid
acetic glacial, diclorometan i aceton, i n mod particular n cloroform:etanol 90:10
(v/v) i diclorometan:aceton 50:50 (v/v).
Strips-urile pot fi transformate n translucide (transparente) prin imersia lor n ulei din
semine de bumbac, decalin, ulei de parafin ori ulei Whitemore 120, care este
important pentru scanarea optic a benzilor colorate de pe foliile de acetat de
celuloz. Ele pot fi impregnate i permanent stocate n glicerol, care previne
destrucia spoturilor colorate.Pentru separri electroforetice de proteine i acizi
nucleici s-au introdus membranele de nitroceluloz. Aceste membrane, cu o mrime
a porilor cuprins ntre 0,1-12 m, au fost utilizate n mod constant n analizele de
acizi nucleici n special a hibrizilor RNA-DNA i DNA-DNA. Ace tia prezint o
adsorbtivitate selectiv fa de proteine i acizi nucleici n condi ii adecvate.
Membranele de dimensiuni dorite sunt aezate ntr-o plac Petri cu tampon i lsate s
pluteasc pn la dispariia petelor alb-opace dup care se scufund complet.
Membranele de Cellogel nu necesit aceste precau ii, ele putndu-se scufunda timp de
10 minute. Strip-urile din nitroceluloz (5 x 1 cm), cnd sunt utilizate la electroforeza
proteinelor, trebuie mai nti tratate timp de 5 minute cu o solu ie de Tween 60, 2%
preparat ntr-un tampon compus din veronal, citrat i oxalat, pH=8,6. Astfel,
membranele de nitroceluloz tratate cu detergent nu adsorb proteine i pot fi utilizate
pentru separri de proteine n gradieni nal i de poten ial de 15-20 Vcm -1 timp de 1015 minute. Membranele mbibate se plaseaz imediat n sistemul reglabil i se aplic
probele cu ajutorul unei micropipete sau unui dispozitiv de aplicare simultan a
probelor (10-16 probe).) Volumul aplicat de prob este n func ie de grosimea
membranei i de concentraia proteic. Nigrozina) este cel mai bun colorant al
proteinelor pe folii de nitroceluloz. Un alt colorant utilizat n colorarea proteinelor
este Ponceau S.
La pH neutru i alcalin, RNA migreaz rapid n folie spre anod, n timp ce DNA nativ
rmne pe linia de start. DNA monocatenar denaturat migreaz spre anod.

Membranele de nitroceluloz cu dimensiuni variate a mrimii porilor, impregnate cu

detergeni ori soluii de albumin seric, pot fi utilizate la separri de proteine,
polinucleotide i nucleoproteine.
Membranele mbibate se plaseaz imediat n sistemul reglabil i se aplic probele cu
ajutorul unei micropipete sau unui dispozitiv de aplicare simultan a probelor (10-16
probe).) Volumul aplicat de prob este n funcie de grosimea membranei i de
concentraia proteic. Nigrozina) este cel mai bun colorant al proteinelor pe folii de
nitroceluloz. Un alt colorant utilizat n colorarea proteinelor este Ponceau S.
La pH neutru i alcalin, RNA migreaz rapid n folie spre anod, n timp ce DNA nativ
rmne pe linia de start. DNA monocatenar denaturat migreaz spre anod.
Membranele de nitroceluloz cu dimensiuni variate a mrimii porilor, impregnate cu
detergeni ori soluii de albumin seric, pot fi utilizate la separri de proteine,
polinucleotide i nucleoproteine. Sunt de preferat ca solu iile apoase de colorant fa
de soluiile alcoolice, concentraia acestora fiind deobicei mai sczut fa de cea
aplicat pentru hrtia de filtru.
Membranele din acetatul de celuloz i nitroceluloz sunt ideale pentru examinrile
absorbiometrice i fluoro-densitometrice, precum i de detec ie a substan elor
radioactive prin autoradiografie ori prin metode de scanare direct.
Sunt de preferat ca soluiile apoase de colorant fa de solu iile alcoolice, concentra ia
acestora fiind deobicei mai sczut fa de cea aplicat pentru hrtia de filtru.
Membranele din acetatul de celuloz i nitroceluloz sunt ideale pentru examinrile
absorbiometrice i fluoro-densitometrice, precum i de detec ie a substan elor
radioactive prin autoradiografie ori prin metode de scanare direct.

Derivati ai celulozei:
Nitratul de celuloza primul material plastic realizat cu success in 1869
Acetatul de celuloza
Celuloza etilica

Fracia

electroforetic Procente

analizat

Deviaie

Albumine
Alfa 1-globuline
Alfa 2-globuline

%
61%
2,5%
8%

standard
1,5
1,5
2,0

Beta globuline
Gama globuline

10%
16%

2,0
3,5

Tehnica electroforetic care implic membranele de acetat de celuloz este de asemenea util
n monitorizarea unui tratament aplicat. Ea este superioar tehnicilor imunologice n
determinarea izoenzimelor enolazei (procedeul dureaz circa 10 minute iar necesarul de ser
este de circa 10l), activitatea enzimatic fiind determinat n aproximativ 5 minute prin
bioluminiscen.
Electroforeza pe membrane de acetat de celuloz a fost i este utilizat la studiul comparativ
al unor proteine serice la om i la alte animale.
Electroforeza pe membrane de acetat de celuloz a fost i este utilizat la studiul comparativ
al unor proteine serice la om i la alte animale. Electroforeza pe membrane de acetat de
celuloz a fost i este utilizat la studiul comparativ al unor proteine serice la om i la alte
animale.