Hibridizare fluorescentă in situ

(FISH)

Student: Achim Elena Irena

Specializarea: Biologie Medicala, An II
 DESCRIEREA HIBRIDIZARII
FLUORESCENTE IN SITU
 Hibridizarea fluorescenta in situ
(FISH) este o tehnica de citogenetica
moleculara utilizata in scopul identificarii
anomaliilor cromozomiale, numerice si
structurale (care nu pot fi detectate prin
cariotipare).

 Tehnica FISH permite

detectarea mozaicismelor, identificarea
rearanjarilor cromozomiale complexe. Mai
multe sindroame dismorfice.
 FISH este adesea folosit pentru a găsi
caracteristici specifice în ADN pentru a fi
utilizate în Consiliere genetică,
medicamente și identificarea speciilor.
 Pregătirea unui preparat histologic se realizează conform schemei standard: tăiere,
marcare, cablare, turnare, microtomie, așezarea tăieturii pe o lamă de sticlă și
deparafinizare.
.
 Etapele de pregatire

 Hibridarea. După denaturare, medicamentul este răcit la o anumită

temperatură și incubat într-o cameră umedă timp de câteva ore).
 Spălarea. Odată ce hibridizarea este completă, sondele nelegate
trebuie spălate, ceea ce altfel ar crea un fundal care face dificilă
evaluarea rezultatelor FISH. Pentru spălare, se utilizează de obicei o
soluție care conține citrat și clorură de sodiu (SSC).
 Contra-colorare. Cu ajutorul coloranților fluorescenți (DAPI - 4, 6-
diamidin-2 fenilindol; iodură de propidiu), se colorează tot ADN-ul
nuclear.
 Aplicatii FISH

Aceasta metoda presupune ca prima etapa de lucru, obtinerea unor culturi

celulare (limfocite din sange periferic sau amniocite recoltate prin
amniocenteza in saptamanile 15-17 desarcina), rezultatul investigatiei este
obtinut in doua saptamani.

FISH-ul interfazic permite punerea in evidenta a anomaliilor numerice,

detectia sexului genetic intr-un timp scurt (48-72 h).

FISH-ul interfazic este indicat a fi folosit ca test de screening rapid atunci

cand exista semne de alerta ecografica sau biochimica (dublu test, triplutest),
ulterior se recomanda o evaluare citogenetica completa.
Avantajele metodei FISH:
 1. Posibilitatea de a studia materialul
genetic în nuclee interfazice;
 2. Obtinerea rezultatelor obiective pe baza
da/nu este o metoda cantitativa
 3. Interpretarea relativ simpla a
rezultatelor ;rezolutie mare .

Dezavantajele metodei FISH :

 1. Colorantii fluorescenti se "decoloreaza"
rapid
 CONCLUZII

Analiza FISH este o metoda specifica,

performanta, dar laborioasa, care necesita celule
intacte; nu sesubstituie celorlalte metode de
analiza cromozomiala si are indicatii foarte
precise.
FISH-ul interfazic este indicat a fifolosit ca test
de screening rapid atunci cand exista semne de
alerta ecografica sau biochimica (dublu test,
triplutest), ulterior se recomanda o
evaluare citogenetica completa.
 Bibliografie

• https://go.zdos.ru/iibiu?q=click&p=jskqkhkf-ibiu-ibht-isri-isri-042590bf9&ref=http
s%3A%2F%2Fik-ptz.ru%2Fro%2Fexam-tests---
2014-for-literature%2Ffluorescentnaya-in-situ-gibridizaciya-flyuorescentnaya-gibri
dizaciya-in.html&sub1=207114
•  Langer-Safer PR, Levine M, Ward DC (iulie 1982). 
„Metoda imunologică de cartografiere a genelor pe cromozomii politenilor Drosop
hila”
 . Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of
America . 79 (14): 4381–4385. Bibcode : 1982PNAS...79.4381L . doi : 
10.1073/pnas.79.14.4381 . PMC  346675 . PMID  6812046 .
• ^ Amann R, Fuchs BM (mai 2008). „Identificarea cu o singură celulă în
comunitățile microbiene prin tehnici îmbunătățite de hibridizare in situ cu
fluorescență”. Recenzii despre natură. Microbiologie . 6 (5): 339–348. doi : 
10.1038/nrmicro1888 . PMID 18414500 . S2CID 22498325 .  

• https://wikicro.icu/wiki/Fluorescence_in_situ_hybridization