Tehnica FISH

CONȚINUT

01 Introducere

02 Cum funcționează tehnica FISH?

03 Pentru ce se utilizează tehnica FISH?

04 Aplicații ale tehnicii FISH

05 Concluzii
 INTRODUCERE

Hibridizarea fluorescentă în situ(F.I.S.H) este o

tehnică citogenetică moleculară de laborator
utilizată pentru a detecta si localiza o secventă
specifică de ADN de pe un cromozom. Tehnica se
bazează pe formarea unei legături între o sondă de
ADN marcată fluorescent si o secventă tintă de
ADN , prezentă in proba analizată.
 CUM FUNCȚIONEAZĂ TEHICA FISH

F.I.S.H. utilizează o sondă de hibridizare marcată

fluorescent care se va atasa exact la fragmentul
de ADN ce se doreste a fi vizualizat. Sonda de hib-
ridizare este un fragment scurt de ADN
care are atasat un col-
orant fluorescent. O
sondă tipică de
F.I.S.H. are o lungime de
10 – 100 kb (mii de perechi
de baze).
PENTRU CE SE UTILIZEAZĂ TEHNICA FISH?

Tehnica de hibridizare fluorescentă in situ per-

mite clinicienilor să poată verifica existenta
unor modificări cromozomiale specifice care pot
provoca o afectiune genetică. Testul F.I.S.H.
poate fi efectuat pe celulele aflate în diviziune
(metafază) unde cromozomii individuali
pot fi distinsi sau pe celulele care nu se divid (in-
terfazice). Acest lucru grăbeste obtinerea de
rezultate comparativ cu alte tehnici, cum ar fi
cariotiparea.
Analiza se bazează pe identificarea celulelor în care cromo-
somii sunt bine etalaţi, iar semnalele fluorescente sunt bine
evidenţiate.
-Identificarea unui
singur semnal fluorescent
corespunzător fagmentului
cromosomic implicat în anoma-
lie indică
prezenţa microdeleţiei,
-Identificarea a două semnale
confirmând supoziţia
fluorescente de diag-
corespunzătoare
nostic. fagmentului cromosomic
implicat în anomalie atestă ab-
senţa microdeleţiei, infirmând
supoziţia de diagnostic.
APLICAȚII ALE TEHNICII F.I.S.H.

-Identificarea deletiilor genice

-Monitorizarea efectelor unor terapii
-Identificarea markerilor cromozomiali
-Detectarea anormalităților numerale sau
structurale ale cromozomilor
Cele mai frecvente microdeleţii ce sunt identificate prin această
metodă sunt:
-22q11.2 – asociată cu sindromul velo-cardio-facial
-15q11-13 – asociată cu sindroamele Prader-Willi şi Angelman
-7q11.23 – asociată cu sindromul Williams
-5p15 – asociată cu sindromul cri du chat
-4p16 – asociată cu sindromul Wolf-Hirschhorn
Metoda are o specificitate şi sensibilitate de 100%, dar are apli-
cabilitate ţintită pentru cazuri în care suspiciunea clinică este
foarte exactă, fiindcă impune folosirea de sonde specifice.
Astfel, dacă nu este aplicată sonda corectă, metoda va da rezul-
tate fals negative, fiind identificate două semnale fluores-
cente.
 CONCLUZII

Metoda FISH
-este utilizată pentru analiza ADN prin vizualizare directă pe
preparate microscopice celulare sau cromozomiale
(cromozomi prometafazici)
-se vizualizează simulatan caracteristicile genotipice și fenotipice a
celulelor și ale cromozomilor
-se utilizează moleculele de ADN monocatenar specific marcat
radioactiv sau chimic (un nucleotid fluorescent) cu fluorocromi
=sonda ADN
-sonda ADN are capacitatea de a se atasa de secvența ADN
complementară indiferent unde este situată aceasta in genom
-sonda marcată poate fi asociată cu anticorpi monoclonali =>
utilizarea mai multor fluorocromi , creșterea intensității
semnalului (ADN=antigen). Poate marca : cromozomi
 Proiect realizat de:
Vrîncianu Vlad-Ioan