Lucrare practica

nr. 6

e
i
g
o
l
o
Bi
i
s
a
r
a
l
u
l
Ce
a
r
a
l
u
c
e
l
Mo

Sortarea celulelor
Culturi celulare
Criofracturare
Tehnici de fracturare
Centrifugare

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

CE ESTE CITOMETRIA DE FLUX?

Citometria de flux permite determinarea simultan a mai
multor parametri fizici i chimici caracteristici unei singure
celule aflate n micare ntr-un curent lichid.

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

ETAPE
1.

Prepararea suspensiei de celule

2.

Marcarea celulelor - suspensia de celule este pus n contact cu un

set de anticorpi monoclonali marca i cu anumite substante
fluorescente.

3.

Suspensia trece printr-un dispozitiv de reglare a fluxului,

respectiv camera de curgere, care determin o aliniere a celulelor
ntr-un curent unicelular.

4.

Inseria celulelor cu un fascicul laser, ce se soldeaza cu dispersia

luminii i emisia de fluorescen .

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

5.

Folosirea unui sistem de detec ie ce analizeaz semnalele

rezultate, obinndu-se date despre dimensiunile i
complexitatea structural a celulei i respectiv despre prezen a
unor structuri antigenice corespondente anticorpilor marca i.

6.

Curentul fluid este fragmentat n picturi, ce con in celule,

prin aplicarea energiei sonice la nivelul camerei de curgere.

7.

ndeplinirea de ctre celul a unor condi ii predefinite, prin

programare, determinnd plasarea unei sarcini electrice, pe
pictura care o conine.

8.

Picturile ncrcate electric sunt deflectate ntr-un cmp

electrostatic.

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

Principiul general al
unui flux-citometru
(dup C.Voiculescul)

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

Un citometru de flux ofer posibilitatea de a sorta din

totalul celulelor din prob, o populaie de interes.

Procedura presupune instalarea unor eprubete pentru

colectarea celulelor dorite; activarea unui meniu de
sortare din cadrul etapei de achiziie a programului;
alegerea modului de sortare, a numrului de celule dorite
i identificarea populaiei prin intermediul unei a a
numite pori logice.

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

Principiul sortrii celulelor ( dup C.Voiculescu, 1996)

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

Sunt in principal trei moduri de sortare:

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

Aplicaiile metodei sunt n:

imunodiagnostic i n monitorizarea unor afec iuni, ca boli de

autoagresiune sau imunodeficiene (HIV/SIDA, neoplazii);

dimensiune, structura interna a celulei

continutul de AND

continutul de ARN

analiza si sortarea cromozomilor

extensia si localizarea proteinelor

antigene de suprafata, intracelulare si nucleare

viabilitatea celulara

n imunologia experimental (cercetri cu celule sortate)

studierea gestaiei fiziologice

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

Citometrul Becton Dickinson FACS Canto II cu 3 lasere,

folosit pentru analiza multiparametric (8 culori) a celulelor de interes

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX
Citometrie

in

flux

cu

laser

semiconductor combinata cu tehnica de

colorare citochimica, tehnica impedantei
si colorimetrie ecologica non-cianidca

Transfer: 60 probe/ora
Sange intreg, sange prediluat
Are o capacitate de stocare de 100000 rezultate ale pacientilor, incluzand
diagrama de dispersie, histograma si informatiile pacientilor.
O varietate de formate de printare pot fi preprogramate.
Formatele definite de utilizator sunt de asemenea disponibile
Prelevarea automata cuplata cu pozitii de acces de urgenta (4 tipuri de tuburi
sunt accesibile)

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

Citometria in flux fertilizare in vitro

Citometria in flux (FC) este o alta tehnica de sortare a spermatozoizilor.
Foloseste substante fluorescente pentru a ilumina spermatozoizii ce contin
cromozomi X. Aceasta substanta fluorescenta adera de materialul genetic din
spermatozoizi.
Deoarece spermatozoizii ce contin cromozomi X au mai mult material
genetic, acestia vor colecta mai multa substanta fluorescenta decat
spermatozoizii ce contin cromozomi Y. Un aparat laser este folosit apoi,
pentru a separa cele doua tipuri de spermatozoizi. Spermatozoizii cu
cromozomi apropiati, sunt folositi apoi in IUI (Inseminarea artificiala
intrauterina) sau FIV.
Rata de succes a citometriei in flux este mare: exista 6070% sanse sa
concepi un copil de sexul dorit.

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

Fragment histologic de polip

adenomatos colonic vilos

Fragment histologic al polipului

adenomatos colonic vilos malignizat
cu zone de displazie sever

Fragment histologic de polip

adenomatos colonic vilos

Fragment histologic al polipului

adenomatos colonic vilos malignizat
cu zone de displazie sever

SORTAREA CELULELOR PRIN

CITOMETRIE DE FLUX

Fragment histologic de polip

adenomatos mixt tubulo-vilos

Fragment histologic al polipului

adenomatos mixt tubulo-vilos
malignizat

Fragment histologic de polip

adenomatos mixt tubulo-vilos

Fragment histologic al polipului

adenomatos mixt tubulo-vilos
malignizat

V mulumim pentru atenie!

Proiect realizat de :
Bodnar Ana-Maria
Boriceanu Andreea-Nicoleta
Facultatea de Medicin , specializarea Medicin
Anul 1, Grupa 1