NOIUNI DE VIRUSOLOGIE GENERAL

Virusurile sunt definite ca forme acelulare sau subcelulare de via,

metabolic inerte i lipsite de capacitatea de cretere i multiplicare nafara
organismelor vii, fiind parazite obligatoriu intracelular.
Virusologia - tiina care se ocup cu studiul virusurilor - constituie un
domeniu particular al microbiologiei prin specificitatea metodelor de cercetare,
care constau n cultivarea virusurilor pe esuturi vii, microscopie electronic,
metode chimice i imunologice proprii.
4.1. CARACTERELE GENERALE ALE VIRUSURILOR
Virusurile prezint unele particulariti care le difereniaz de celelalte
microorganisme, i anume:
1.- dimensiunile foarte reduse, cuprinse ntre 10 i 300 nanometri (nm),
care le confer urmtoarele proprieti:
- nu sunt vizibile la microscopul optic, ci numai la microscopul
electronic;
- traverseaz fitrele obinuite, care rein bacteriile;
-sedimenteaz numai prin ultracentrifugare (>10000 turaii/minut).
2.- sunt lipsite de metabolism propriu deoarece nu dispun de enzime
metabolice i prin urmare:
-nu cresc i nu se divid singure ci sunt replicate de o celul gazd
(animal, vegetal, fungic, bacterien);
- relaia cu celulele gazd este una de parazitism deoarece virusul
deviaz metabolismul acestora n sensul sintezei de noi particule virale pe
baza rezervelor nutritive i energetice ale celulei.
4.2.FORMELE DE EXISTEN A VIRUSURILOR N NATUR
Virusurile pot exista n natur sub trei forme biologice, fiecare dintre ele
reprezentnd, n acelai timp, un stadiu al ciclului ontogenetic.
Virusul complet (virionul) constituie forma matur, care posed toate
componenetele caracteristice virusului i toate atributele speciei din care face
parte. El are capacitatea de a rezista un timp limitat nafara celulei sensibile i

este dotat cu infeciozitate (posibilitatea de a ptrunde ntr-o celul gazd

receptiv, capabil s-l reproduc) i patogenitate (capacitatea de a determina
modificri morfologice i funcionale echivalente cu starea de boal).
Virusul vegetativ reprezint o form de existen intracelular a
virusului, sub form de elemente structurale dispersate n citoplasma celulei.
Conform informaiei genetice coninute n acidul nucleic viral, celula cu
aparatul ei enzimatic sintetizeaz componentele virale care, n urma
ansamblrii, formeaz noi virioni. Eliberai din celula parazitat, acetia vor
ptrunde n alte celule receptive, relund circuitul care asigur conservarea
virusului n natur. n faza de virus vegetativ, dependena virusului de celul
este total, el fiind incapabil de a supravieui nafara acesteia.
Virusul integrat sau provirusul este tot o form de existen
intracelular total dependent de celula gazd, cu deosebirea c celula parazitat
nu sintetizeaz material viral. Acidul nucleic viral se integreaz n genomul
celulei receptive, unde rmne n stare ocult un timp nelimitat, comportndu-se
ca un fragment de material genetic propriu celulei.
Aceast form de existen este bine cunoscut la bacteriofagi (virusuri
care paraziteaz bacteriile) i la virusurile tumorale. Virusul integrat se poate
transforma n virus vegetativ, de obicei sub aciunea unor factori stresani pentru
celul, n care caz genomul viral se desprinde de cromozomul celulei i ncepe
s codifice sinteza de material viral, trecnd n stadiul de virus vegetativ
4.3. MORFOLOGIA i STRUCTURA VIRUSURILOR
4.3.1. FORMA i DIMENSIUNILE
Din cauza dimensiunilor reduse ale virusurilor, morfologia i structura lor
pot fi examinate numai prin microscopia electronic a seciunilor ultrafine i
prin difracia razelor X. Virusurile se prezint ntr-o gam foarte variat de
forme, n funcie de specie: bastona drept, filament pliat, icosaedru, corpuscul
sferic, crmid cu colurile rotunjite, ghiulea, spermatozoid etc. (fig.25).
n general:
- forma rotunjit (corpuscular) este specific virusurilor patogene pentru
animale (zoovirusuri);
- forma alungit, virusurilor patogene pentru plante (fitovirusuri) i
insecte;
- forma spermatozoidic, virusurilor patogene pentru bacterii
(bacteriofagi).
Dimensiunile virusurilor difer de la o specie la alta, fiind cuprinse ntre
10-20 nanometri la virusurile mici (ex. virusul febrei aftoase) i 300-350
nanometri la virusurile mari (ex. virusurile variolice).

Fig. 25 Reprezentarea schematic a formelor i dimensiunilor

comparative ale principalelor grupe i familii de virusuri.

4.3.2. STRUCTURA VIRUSURILOR

Virusurile complete (virionii) sunt formate dintr-un singur acid nucleic
ADN sau ARN -,care constituie genomul viral i un nveli proteic n contact
direct cu acidul nucleic numit capsid , formnd mpreun nucleocapsida.
La unele virusuri, nucleocapsida este nconjutat de un nveli
suplimentar numit pericapsid (anvelop, peplos), prevzut cu o serie de
emergene numite spiculi (fig.27).

Fig.27
Structura
general
www.anisn.it/omodeo/omodeo/virus.htm).

4.3.2.1

virusurilor

Genomul viral

Genomul viral este reprezenrat de acidul nucleic viral. n funcie de

natura acestuia, virusurile se mpart n ribovirusuri (virusuri cu ARN) i
dezoxiribovirusuri (virusuri cu ADN). La virusurile fitopatogene (patogene
pentru plante) acidul nucleic este ntotdeauna ARN, n timp ce la virusurile
zoopatogene i bacteriofage, poate fi ADN sau ARN.
Configuraia acizilor nucleici virali poate fi linear sau circular iar
structura, n funcie de numrul lanurilor din care este constituit molecula,
monocatenar sau dublu catenar. De regul, dezoxiribovirusurile au o
molecul unic de ADN dublu catenar circular iar ribovirusurile, ARN
monocatenar linear divizat n segmente separate (BUIUC i col., 2003).
Genomul viral conine ntre 3 i 250 de gene i este componenta esenial
a virusului, deoarece poart informaia genetic necesar pentru propria sa
replicare i pentru devierea metabolismului celulei gazd n sensul sintezei
celorlali constituieni ai particulei virale.
Ribovirusurile constituie un unicat n biologie, n ce privete
posibilitatea pstrrii informaiei genetice de ctre ARN.
Masa molecular a genomului reprezint 5-30% din masa total a
virionului i este constant pentru fiecare specie, constituind unul din criteriile
taxonomice aplicate n clasificarea virusurilor.

4.3.2.2. nveliul
CAPSIDA
nveliul extern, prezent la toate virusurile, se numete capsid (gr.
kapsa=cutie) i este format din mai multe subuniti de natur proteic identice,
numite capsomere (gr. kapsa+meros=pri ale cutiei).
Capsomerele sunt riguros aranjate, conform unei arhitecturi
cristalografice, numrul i simetria lor fiind bine definite pentru fiecare virus n
parte.
Se cunosc trei tipuri principale de simetrie a capsidei virale.
1. Capsida cu simetrie icosaedric sau cubic dispus n jurul genomului
(acidului nucleic viral) pliat sub form de ghem. Icosaedrul, prin cele 20 de fee
n form de triunghiuri echilaterale, 12 vrfuri i 30 de muchii reprezint forma
ideal de dispunere a capsomerelor deoarece asigur minimum de material
pentru maximum de volum.
El are trei tipuri de axe de simetrie rotaional axe n jurul crora, prin
rotaie complet, va avea 2, 3, respectiv 5 poziii identice (fig. 28) :
- axe de tip 2 care unesc dou laturi opuse exact la jumtatea acestora;
- axe de tip 3 care trec prin punctele centrale a dou fee triunghiulare
opuse;
- axe de tip 5 care traverseaz fiecare dou unghiuri opuse.

simetrie ale icosaedrului

(www.britannica.com/ebc/art.697 )

Dispunerea capsomerelor n structura capsidei icosaedrice este

urmtoarea: feele i laturile sunt formate din hexone sau hexamere
(capsomere formate din 6 monomere sau molecule proteice, nconjurate de 6

capsomere identice) iar vrfurile, din pentone sau pentamere (capsomere

structurate din 5 molecule proteice) prevzute cu o prelungire mcicat numit
fibra pentonei (fig. 29).

Fig. 29 Model de virus cu simetrie icosaedric: poziia pentonelor i a

hexonelor
2. Capsida helicoidal, de forma unui tub cilindric, rezult din
dispunerea capsomerelor n form de spiral, asemntor unui resort n stare
comprimat. Spirala capsomerelor delimiteaz pe faa intern a tubului un an
n care este aezat, tot helicoidal, ntr-un perfect paralelism cu capsida, genomul
viral (fig. 30).

Fig. 30 Structura capsidei helicoidale a virusului mozaicului

tutunului (schem).
3.Capsida cu simetrie binar sau dubl este caracteristic bacteriofagilor
cu cap i coad (fig. 31.). Capsida capului este de tip icosaedric, iar capsida
cozii este structurat dup tipul de simetrie helicoidal (fig. 32).

Fig. 31 Structura bacteriofagului T4

www.manisfield.osu.edu/...)

Fig.32 Simetria capsidei la fagul T4

PERICAPSIDA
La unele virusuri, exterior capsidei se gsete un nveli suplimentar,
nimit pericapsid, anvelop, sau peplos (fig.2). Pericapsida deriv din
membrana celulei gazd; n cursul maturrii, virionii ,,nmuguresc" prin
membrana celular pregtit n prealabil prin inseria de glicoproteine virus
codificate. Aceste proteine vor proemina sub form de spiculi pe suprafaa
anvelopei avnd, dup caz, funcie de liganzi (ex. hemaglutininele), mai rar de
enzime (ex. neuraminidaza) sau factori de fuziune a membranelor
citoplasmatice. Virusurile lipsite de pericapsid se numesc virusuri nude.
Capsida mpreun cu pericapsida protejeaz genomul viral de aciunea
factorilor de mediu i asigur fixarea virionului de receptorii celulei gazd
4.4 MULTIPLICAREA VIRUSURILOR ZOOPATOGENE
Virusurile sunt cele mai mici structuri biologice care dispun de toat
informaia genetic necesar pentru propria lor reproducere.
Pentru virusuri, termenul de multiplicare nu reflect ntocmai realitatea
fenomenelor care au loc n celula gazd. n interiorul acesteia virusurile nu se
multiplic ci sunt sintetizate de celul prin activitatea metabolic a acesteia
redirecionat, n urma substituirii informaiei genetice a celulei cu cea a
virusului, ctre necesitile replicative ale acestuia. Acidul nucleic viral deine
informaia necesar pentru a dirija propria sa replicare, sinteza proteinelor
virale i inhibarea biosintezelor celulare normale (uneori - n infeciile
endosimbionte produse de leucovirusuri, virusul sarcomului lui Rous - se

stabilete un echilibru virus/gazd astfel nct, att genomul viral ct i cel al

celulei codific simultan sinteza de proteine).
Componentele particulei virale se constituie pe seama rezervelor
energetice i nutritive (aminoacizi, nucleotide) ale celulei parazitate.
Multiplicarea virusurilor implic urmtoarele etape succesive: adsorbia i
penetrarea virionilor n celul, decapsidarea cu eliberarea intracelular a
genomului viral, replicarea propriu-zis, morfogeneza noilor virioni i
eliberarea acestora din celula gazd (fig.33)..

Fig. 33 Etapele replicrii virusurilor animale

1. Adsorbia sau fixarea virionilor pe celul
Dup o serie de ciocniri ntmpltoare ale virusurilor cu celulele animale
i dup o faz de adsorbie nespecific reversibil, urmeaz faza de adsorbie
ireversibil la nivelul unor receptori celulari specifici. Acetia sunt
reprezentai de gruprile chimice ale membranei celulare, complementare sub
aspect stereo, electrostatic i geometric cu capsida sau pericapsida virionului.
Specificitatea de receptor explic tropismul celular, tisular i de organ al unor
virusuri: virusul rabic se fixeaz pe receptorii pentru acetilcolin, virusurile
gripale pe glicoproteinele care conin acid sialic i care sunt complementare
neuraminidazei (enzima din pericapsida acestor virusuri), virusul poliomielitei,
pe receptorii de pe enterocite i neuronii sistemului nervos central etc.

Adsorbia poate fi oprit prin blocarea receptorilor n urma aciunii unor

factori fizici, chimici sau biologici. Virionul rmas extracelular este repede
distrus de factorii de aprare ai organismului.
2. Ptrunderea virionului n celul.
Dup fixare, ptrunderea virusurile nude prin membrana celular se
realizeaz printr-un proces activ de ncorporare din partea celulei, numit
viropexie. Membrana celular se invagineaz i se adncete progresiv n
dreptul virionului pn cnd acesta este complet nglobat n celul. Virusul
ptruns n celul se afl inclus ntr-o vacuol delimitat de membrana celular
invaginat (endozom), care se dezintegreaz treptat.
La virusurile cu anvelop, de regul, are loc fuziunea acesteia cu
membrana citoplasmatic i eliberarea nucleocapsidei direct n citoplasm.
Spre deosebire de virusurile zoopatogene i fitopatogene, care ptrund n
ntregime n celula sensibil, la bacteriofagi capsida rmne nafara celulei, n
care este introdus numai genomul dup o prealabil decapsidare.
3. Decapsidarea
Dup ptrunderea n celul are loc mai nti decapsidarea virusurilor sub
aciunea unor enzime produse de celula gazd sub determinismul genomului
viral.
Din momentul decapsidrii pn n momentul apariiei noilor virioni,
virusul se afl n stare vegetativ (subuniti dispersate n citoplasm) fiind
complet dependent de celula gazd i lipsit de infeciozitate. Acest interval din
replicarea virusurilor poart denumirea de perioad de eclips deoarece
virusurile, lipsite de identitate morfologic, nu sunt evideniabile prin mijloace
electronooptice.
Primele trei etape ale replicrii virale sunt relativ ineficiente deoarece:
- rata fixrii (eficiena coliziunilor) este redus (3-5 x 10 -9),raportat la
multitudinea de particule virale care ptrund n organism;
- nucleocapsidele nu sunt eliberate uneori din endozomi;
- genomurile virale sunt atacate de endonucleazele celulei gazd.
n acest context, raportul dintre numrul virionilor adsorbii i al celor
efectiv replicai de celulele receptive este subunitar.
4. Replicarea propriu-zis (Sinteza componentelor virale).
Virusurile ARN sunt replicate n citoplasm, cu excepia virusurilor
gripale la care unele faze ale procesului replicativ se desfoar in nucleu.
Virusurile ADN sunt replicate n nucleu, cu excepia poxvirusurilor al cror
genom este replicat n citoplasm.
La scurt timp dup ptrunderea n celul, acidul nucleic viral antrenat la
locul replicrii i preia atributele de material genetic autonom, programnd i
dirijnd sinteza componentelor virale care include: replicarea genomului viral,
sinteza ARNm viral i sintezele proteice.
Replicarea genomului este controlat de polimeraze (enzime ale celulei
gazd sau incluse n nucleocapsida viral) i are loc n mod diferit n funcie de

structura mono- sau dublu catenar a acidului nucleic: de regul, replicare

semiconservativ la ADN i ARN dublu catenar i replicare mai nti
complementar i apoi semiconservativ cnd acizii nucleici sunt monocatenari.
Sinteza proteinelor virale
Prin mecanisme incomplet elucidate, genomul viral scoate din funcie
ADN celular astfel nct n celul este prezent numai ARNm transcris de pe
genomul viral, care va transmite la nivelul ribozomilor un mesaj genetic nou,
oblignd celula s sintetizeze proteine virale n locul enzimelor i al celorlalte
proteine proprii.
Sinteza proteinelor virale are loc la cele mai multe virusuri (n principal,
virusurile ADN) n dou faze: precoce i tardiv.
1) Faza precoce debuteaz imediat dup infectarea celulei. Proteinele
timpurii au rolul de enzime, fiind implicate n sinteza ADN sau ARN viral i a
unor precursori ai proteinelor virale structurale precum i n inhibarea sintezelor
proprii celulei gazd.
2) Faza tardiv corespunde sintezei proteinelor virale structurale. Ea se
declaneaz n momentul cnd, n urma replicrii ADN s-a ajuns la un anumit
numr de genomuri virale, genele precoce fiind, de regul, inhibate.
Se pare c la virusurile ARN sinteza proteinelor enzimatice i a celor
structurale se desfoar simultan.
5. Morfogeneza virionilor progeni (nou formai)
La sfritul fazei de biosintez, cnd n celul s-au acumulat cantiti mari
de acid nucleic i proteine virale, are loc asamblarea virionilor progeni. La
virusurile mici, aezarea capsomerelor n jurul genomurilor virale
(ncapsidarea), se petrece spontan printr-un proces de autoasamblare. La cele
mai multe virusuri, asamblarea implic ns intervenia unor enzime. ntre
sinteza proteinelor capsidale i apariia lor n structura virionilor nou formai
exist un interval de aproximativ 20 de minute.
Morfogeneza, ca regul general, are loc pentru virusurile ARN n
citoplasm, iar pentru virusurile ADN, intranuclear, dup migrarea materialului
viral din citoplasm n nucleul celulei gazd.
Componentele virale acumulate n exces pot genera incluzii celulare
virale (Buiuc D., 2003).
6. Eliberarea virionilor din celul
Virionii nou formai pot fi eliberai din celul prin mai multe mecanisme.
1) nmugurirea sau burjeonarea este modalitatea de eliberare a
virusurilor cu anvelop.
ntr-o prim faz, virionii nou asamblai sunt inclui n nite vezicule
(cisterne) care se ataeaz de faa intern a membranei celulare pe care o
bombeaz, proeminnd asemntor unor muguri. Ulterior, virusurile se
detaeaz de celul prin mici aperturi care apar n membran.
2) Liza celulei gazd sub aciunea unor enzime sintetizate de celul n
ultima faz a morfogenezei virionilor. Acest mecanism, caracteristic

bacteriofagilor, se mai ntlnete la virusurile animale nude (Carp-Crare Mihai,

2001).
3)Eliberarea virionilor consecutiv morii celulei i dezintegrrii
acesteia. Aceste virusuri apar cel mai trziu, iar punerea lor n libertate se
caracterizeaz printr-o frecven moderat.
4) Trecerea virionilor direct la celula adiacent celei n care a avut loc
multiplicarea, prin porii membranei celulare.
4.5. RELAIA VIRUS GAZD.
4.5.1. TROPISMUL VIRUSURILOR
Deoarece genomul viral este extrem de simplu, virusurile nu dein
informaia genetic necesar sintezei enzimelor metabolice (de ex. enzimele
necesare catabolizrii glucidelor, enzimele care catalizeaz reaciile de
biosintez a proteinelor etc.). Fiind lipsite de metabolism propriu, ele sunt
obligate s paraziteze diverse gazde celulare. Virusurile sunt, prin urmare,
parazii ai celulelor animale, vegetale, fungilor, protozoarelor sau bacteriilor.
Celulele receptive le furnizeaz att energia i precursorii necesari sintezei
acidului nucleic i proteinelor virale ct i aparatul de biosintez al acestora.
Virusurile animale ptrund n organism pe diverse ci: digestiv (ex.
virusul hepatitei A, enterovirusurile), respiratorie (ex. virusurile gripale),
transcutanat (ex. virusul rabic), genital (virusul Herpes simplex tip 2, virusul
verucilor umane). Unele virusuri rmn cantonate la poarta de intrare, care
poate constitui n acelai timp i organul int (n virozele respiratorii,
enteritele virale, virozele genitale) iar altele sunt diseminate n organism prin
intermediul sngelui (diseminare hematogen) sau pe cale nervoas (diseminare
neurogen).
Diseminarea hematogen sau viremia const n trecerea virusurilor n
snge la nivelul capilarelor i vehicularea lor prin intermediul leucocitelor
polimorfonucleare neutrofile.
Diseminarea neurogen (neuroprobazia) se realizeaz de-a lungul
axonilor neuronali i poate fi centrifug (ex. virusul herpetic) sau centripet (ex.
virusul turbrii).
Virionii diseminai n organism se localizeaz n anumite esuturi fa de
care prezint un tropism special (histotropism) sau numai n anumite celule
(citotropism). Virusurile manifest, de asemenea , genotropism sau afinitate
pentru o anumit specie biologic.
Genotropismul a permis mprirea
virusurilor n monopatogene (patogene pentru o specie) i polipatogene
(patogene pentru dou, trei, sau mai multe specii), n zoovirusuri, fitovirusuri,
bacteriofagi i micofagi.
n funcie de histotropism, virusurile pot fi grupate n :

- virusuri epiteliotrope (dermatotrope), care au afinitate pentru piele i

mucoase (ex. virusurile variolice , virusul febrei aftoase, virusurile herpetice);
- virusuri neurotrope, cu afinitate pentru esutul nervos (ex. virusul rabic,
virusul poliomielitei);
- virusuri organotrope (viscerotrope), cu afinitate pentru anumite organe
interne, care, la rndul lor, pot fi clasificate n: pneumotrope (ex. virusurile
gripale, virusul jigodiei), enterotrope (ex. virusul diareei virale bolii
mucoaselor); hepatotrope (virusurile hepatitelor);
- virusuri pantrope (mezenchimotrope), cu afinitate pentru toate
esuturile i organele bogate n celule mezenchimale.(ex. virusurile pestelor la
diferite specii animale).
Citotropismul reprezint afinitatea virusurilor pentru anumite celule din
cadrul aceluiai esut. Virusul rabic, de exemplu se multiplic de preferin n
neuronii piramidali din cornul lui Amon, iar virusul poliomielitei, n neuronii
motori din coarnele anterioare ale mduvei spinrii.
4.5.2. TIPURI DE INFECIE VIRAL
Virusurile ptrunse n organism determin din partea gazdei reacii de
rspuns numite generic infecii virale sau viroze, care pot evolua diferit din
punct de vedere clinic.
1.Infeciile virale acute (manifeste clinic) apar atunci cnd multiplicarea
virusului n organism determin modificri morfologice i funcionale care se
manifestat prin semne clinice evidente, corespunztoare strii de boal.
Gravitatea bolii virale clinice este condiionat de o serie de factori ca:
numrul de virioni infectani, rezistena general a organismului, vrsta, sexul,
alimentaia, igiena, etc.
Un aspect particular al patogenezei infeciei virale l constituie asocierea
sinergic virus-bacterie. Aceast asociere este frecvent ntlnit n virozele
respiratorii, n care leziunile produse de virus constituie pori de intrare pentru
bacteriile oportuniste prezente n mod normal pe mucoasele cilor respiratorii
anterioare.
2. Infeciile virale persistente, inaparente clinic
n unele infecii virale, dup un episod acut sau chiar n lipsa acestuia,
virusurile pot rmne n organismul animal, perioade lungi de timp, chiar toat
viaa, ducnd la instalarea infeciilor persistente. Acestea se caracterizeaz prin
lipsa semnelor clinice i pot fi lente, cronice sau latente .
Infeciile lente se caracterizeaz printr-o perioad lung de incubaie (ani
de zile) ca urmare a stabilirii unui echilibru ntre virus i organismul gazd.
Acest tip de infecie se ntlnete n anemia infecioas a calului, leucozele
aviare i mamifere, sindromul imunodeficienei umane (SIDA) .a. Unii factori
de mediu (radiaiile, temperatura, umezeala etc.), sau factori interni (infecii
intercurente, stimuli endocrini) pot determina ruperea acestui echilibru, care
este urmat de replicarea virusului i instalarea bolii clinice.

n infeciile cronice, dup un episod acut, virusul infecteaz organismul

n mod cronic, adic pentru o lung perioad de timp n care simptomele lipsesc
sau sunt slab exprimate dei infecia evolueaz. Exemplul tipic de infecie
cronic evolutiv l constituie hepatitele umane cu virus B i C .
n infeciile latente, cum sunt cele produse de virusurile herpetice
(virusul Herpes simplex, virusul varicela-zoster), genomul viral se inser n
genomul anumitor celule unde rmne n stare ocult o perioad nelimitat. n
acest timp, virusul nu este multiplicat iar prezena lui n organism este lipsit de
expresie clinic. Ocazional, n situaii stresante care induc imunosupresie dar i
n condiii necunoscute, aceste infecii se pot activa.
3. Infeciile transformante sunt determinate de virusurile oncogene
(citochinetice) i se caracterizat printr-o multiplicare anarhic a celulelor
infectate, cu apariia de formaiuni tumorale.
Ipoteza originii virale a unor tumori este veche (Mecinikov i Borrel,
1903) iar capacitatea unor virusuri de a produce tumori n condiii naturale i
experimentale a fost evideniat n anul 1908 de Ellerman i Bang , care au
demonstrat c leucozele aviare pot fi transmise n serie prin filtrate acelulare.
Dintre virusurile identificate pn n prezent la animale, aproximativ
prezint potenialul oncogen.
Mecanismul oncogenezei virale nu este complet elucidat; se pare c
integrarea unor gene virale n genomul celulei gazd determin transformri
care duc la pierderea controlului reglator asupra multiplicrii celulare i implicit
apariia de tumori benigne sau maligne.
4.6. CULTIVAREA VIRUSURILOR N LABORATOR
Diagnosticul de certitudine n viroze se bazeaz pe cultivarea, izolarea i
identificarea virusurilor. Din cauza lipsei echipamentului enzimatic, deci a unui
metabolism propriu, virusurile nu pot fi cultivate pe medii artificiale ci numai
pe gazde vii: culturi de celule, embrioni de gin, animale de laborator. Pentru
reuita izolrii se va ine seama de tropismul virusului a crui izolare se
urmrete, adic de prezena celulelor receptive capabile s-l replice.
4.6.1 Cultivarea virusurilor pe culturi celulare
Relaiile virus-gazd n infecia natural sau experimental au putut fi
explicate n mare parte prin studiul relaiilor virus-celul gazd ,,in vitro" (n
culturi de celule).
Culturile celulare se obin din esuturi sau organe proaspt prelevate
(culturile primare), din esuturi embrionare (liniile de celule diploide) i din
tumori canceroase (liniile celulare permanente).
Cultivarea virusurilor pe linii celulare permanente (denumire atribuit
datorit faptului c pot fi subcultivate indefinit) are avantajul c sensibilitatea
celulelor respective fa de un anumit virus este stabil I cunoscut, iar
rezultatele obinute n diferite laboratoare sunt comparabile. Dou dintre cele

mai utilizate linii celulare permanente sunt linia HeLa obinut dintr-un
carcinom de col uterin i linia KB din carcinom rinofaringian.
esuturile sau organele din care se prepar culturile celulare sunt mai
nti fragmentate n piese mici, apoi sunt disociate cu tripsin n celule
individuale. Acestea se introduc n recipiente de sticl sau plastic cu medii
nutritive speciale (fig.34). Celulele ader la pereii interni ai recipientului i se
multiplic formnd un film continuu de cultur (monostrat de celule)- fig.35.
Cultura confluent este inoculat cu suspensia viral obinut din prelevatele
patologice prin omogenizare (pentru eliberarea virusurilor din celule),
centrifugare (pentru ndeprtarea resturilor celulare i a eventualelor celule
bacteriene) i tratare cu antibiotice (pentru a preveni creterea bacteriilor i a
fungilor contaminani).

Fig.34 Plci Coli cu medii pentru culturi celulare. (www. Koihealth. org)

Fig.35 Monostrat de celule neinfectat. Coloraie hematoxilin-eozin (100x).

Dup o perioad de incubaie, necesar replicrii virusului, culturile
celulare sunt examinate pentru detectarea prezenei acestuia pe baza efectelor
produse asupra celulelor parazitate.
1.Efectul citopatic const ntr-o serie de modificri morfologice ale
celulelor infectate cu virusuri:
- ratatinarea celulelor devierea de la forma normal - (arbovirusuri);
- formarea de sinciii (celule gigante cu numeroi nuclei) prin fuzionarea
celulelor din monostrat (paramixovirusuri) fig.36;
- vacuolizarea citoplasmei (virusurile vacuolizante);

Fig. 36 Efect citopatic (sinciii) produs de virusul Measles (v. rujeolei

umane) n filmul liniei celulare permanente HeLa . Coloraie hematoxilineozin (200x).
2. Efectul citolitic este o form particular a efectului citopatic,
caracterizat prin liza celulelor i desprinderea lor de pe suport. Zonele de liz,
care se pot observa cu ochiul liber fiind distincte de restul filmului celular
normal, poart denumirea de ,,plaje".
3. Hemadsorbia const n adsorbia hematiilor sau eritrocitelor pe
suprafaa celuleor din monostrat, care au replicat virusuri prevzute cu
hemaglutinine (virusurile gripale, paragripale). Hemadsorbia poate fi mai
precoce dect efectul citopatic i poate s se produc chiar n absena lui.
4. Hemaglutinarea este produs de supernatantul i omogenatul
culturilor celulare infectate cu virusuri posesoare de hemaglutinine, fiind
consecina adsorbiei virionilor pe suprafaa globulelor roii, la nivelul crora
produc modificri de natur electrostatic.
Identificarea acestor virusuri se poate face prin reacii serologice de
inhibare a hemadsorbiei sau a hemaglutinrii folosind seruri antivirale
specifice. Metoda se bazeaz pe pierderea capacitii de hemadsorbie,
respectiv, hemaglutinare a virusului izolat, dup neutralizarea acestuia cu
anticorpi specifici.
5. Interferena viral. Unele virusuri (ex., virusul rubeolei), fr a
produce efect citopatic determin un efect de interferen, astfel nct replicarea
lor n culturi celulare se depisteaz n mod indirect prin incapacitatea culturilor
de a replica un virus cunoscut ca fiind citopatogen.
6. Transformarea neoplazic (transformarea celulelor normale n celule
canceroase) este efectul multiplicrii virusurilor oncogene (ex., virusul
sarcomului Rous). Celulele transformate au tendina de rotunjire, metabolism
modificat, se divid anarhic ntr-un ritm accelerat i se aglomeaz n straturi
supraetajate formnd tumori miniaturale ca urmare a pierderii inhibiiei de
contact.
7. Efectul incluziogen.

n celulele n care se multiplic un virus apar frecvent structuri

corpusculare (acumulri de virioni sau componente virale) de dimensiuni
variabile, numite incluzii virale. Ele au fost descrise cu mult nainte de
descoperirea virusurilor i poart numele celor care le-au observat i descris
pentru prima dat: incluziile Babe-Negri n turbare; incluziile Bollinger, n
variola aviar; incluziile Guarnieri, n infeciile cu virus vaccinal etc.
Evidenierea incluziilor prin coloraii speciale n preparate histologice,
prin imunofluorescen n amprente de organe i prin alte tehnici reprezint o
metod frecvent utilizat n diagnosticul virozelor. Specificitatea incluziilor
pentru un anumit virus este dat de prezena lor n esutul pentru care virusul
manifest tropism i de poziia lor: n citoplasm sau n nucleu. La noi n ar, la
nivelul laboratoarelor veterinare judeene, evidenierea incluziilor Babe-Negri
n neuronii piramidali din cornul lui Ammon (fig.37 A i B), constituie o
metod curent n diagnosticul turbrii.

A
B
Fig. 37 Incluzii Babe-Negri (granulele de culoare roz) n citoplasma
neuronilor piramidali din cornul lui Ammon (A - 100x; B 400x). Coloaia
hematoxilin-eozin. (www.pathguy.com/lectures/rabies.jpg)
4.6.2 Cultivarea virusurilor pe embrioni de gin
Oul embrionat constituie un mediu optim pentru cultivarea virusurilor
deoarece este constituit din esuturi n dezvoltare, cu multiplicare activ, este
steril i lipsit de mijloacele de aprare antiinfecioas existente la animalele
adulte (Ivanof A. i col. 1982).
nainte de inoculare oule incubate se verific la ovoscop, n camer
obscur, pentru a le elimina pe cele neembrionate sau cu embrioni mori.
Suspensia viral preparat din prelevatele patologice se inoculeaz innd
cont de vrsta optim a embrionului (6-15 zile) i de calea optim de inoculare
pentru diverse virusuri: pe membrana corioalantoidian (virusurile herpetice,
poxvirusurile), n cavitatea amniotic sau alantoidian (ortomyxo- i
paramyxovirusurile), n sacul vitelin i mai rar intavenos sau intracerebral (fig.
38).

Fig 38 Structura oului embrionat . Cile de inoculare a suspensiei

virale (n chenare).(www studentsguide. in/microbiology/ viruses-vir)
Dup 4-7 zile de incubare la 35-37C, multiplicarea virusului poate
determina moartea embrionului, apariia de pustule (pocks) pe membrana
corioalantoid sau acumulare de hemaglutinine n lichidul amniotic sau
alantoidian
2.6.3 Cultivarea virusurilor pe animale de laborator
La ora actual, cultivarea virusurilor pe animalele de laborator este o
metod la care se apeleaz numai n cazul unor virusuri care nu se pot izola n
alte sisteme celulare (ex., arbovirusurile se izoleaz pe oricelul nou-nscut prin
inoculare intracerebral, deoarece culturile celulare sunt mai puin sensibile).
Pe lng problema proteciei animalelor, experimentarea pe animale de
laborator (oareci albi, obolani, hamsteri, iepuri etc.) prezint o serie de
inconveniente de ordin practic, cum ar fi specificitatea de gazd a unor virusuri
i reactivarea unor infecii virale latente ale animalelor n cursul
experimentului. Ultimul inconvenient poate fi evitat prin utilizarea animalelor
germ free (sterile din punct de vedere microbiologic).
Replicarea virusului pe animalele inoculate este atestat de: apariia
simptomelor caracteristice i eventual, moartea acestora; prezena virusului n
organele sau esuturile int, evideniat prin examene histopatologice,
activitatea hemaglutinant a omogenatelor sau prin infeciozitatea acestora
(capacitatea de a transmite boala prin reinoculare).
Ca regul general, modificrile aprute la gazdele inoculate pentru
detectarea virusurilor (culturi celulare, ou embrionate, animale de experien)
dau indicaii asupra grupului de virusuri (familie, gen) cruia aparine virusul
inoculat, identificarea speciei fcndu-se prin reacii antigen-anticorp.
4.7 ACIUNEA UNOR AGENI FIZICI i CHIMICI ASUPRA
VIRUSURILOR
Cunoaterea comportamentului virusurilor fa de factorii fizici i chimici
are implicaii practice att pentru identificarea unui virus, ct i pentru msurile
de profilaxie nespecific a bolilor virale.

Temperatura
n general, virusurile sunt sensibile la cldur, unele inactivndu-se n
mediul extern la temperatura de 20-22C, n decurs de cteva ore. Inactivarea
virusurilor are loc n majoritatea cazurilor la 56C n 30 minute, iar la 100C n
cteva secunde.
Temperatura optim pentru multiplicarea virusurilor coincide, n marea
majoritate a cazurilor, cu temperatura optim pentru celula gazd. De aceea
reacia febril a organismului n cursul infeciei trebuie privit ca un mijloc de
aprare antiviral, avndu-se n vedere c temperatura corporal realizat prin
hipertermie este de cele mai multe ori nefavorabil multiplicrii virusului, fr a
fi nociv pentru celula gazd.
Temperaturile sczute au proprieti conservante, metoda folosit pentru
pstrarea virusurilor n colecii, luni sau chiar ani de zile, fiind congelarea la
40 pn la 196C .
Variaiile de pH
Limitele de pH n care virusurile i menin viabilitatea se situeaz ntre
5-9, cu unele excepii cum ar fi enterovirusurile care i pstreaz infeciozitatea
i la pH 2,2 (dup Buxton i col. citai de Carp-Crare M., 2001).
Energia radiant
Radiaiile cele mai active fa de virusuri sunt ultravioletele n doze mari.
Efectul acestora este ns diminuat proporional cu protecia pe care o exercit
asupra virusurilor materia organic n care sunt incluse (secreii, excreii,
cadavre).
Substanele chimice
Diversele substane dezinfectante i antiseptice ca formolul, soda
caustic, sublimatul de mercur, soluiile de iod, soluiile srurilor de argint, etc.,
distrug virusurile, viteza de aciune fiind n funcie de durata de contact i de
concentraia soluiei.
Hidroxidul de sodiu (soda caustic) exercit un puternic efect virulicid
mai ales n soluie ferbinte.
Formaldehida este activ dar aciunea ei antiviral este mai lent. Ea se
utilizeaz ns n mod curent la prepararea vaccinurilor inactivate (omorte),
deoarece nu modific structura antigenic a virusurilor.
Eterul i cloroformul au o aciune electiv, n sensul c sunt inactivante
pentru unele virusuri i inofensive pentru altele, astfel nct sensibilitatea la cele
dou substane reprezint pentru virusuri, un criteriu taxonomic.
Glicerina n soluie salin 50% constituie un bun conservant pentru
majoritatea virusurilor, asigurndu-le infeciozitatea luni i chiar ani de zile.

Antibioticele i chimioterapicele de uz curent n terapia antibacterian i

antimicotic
(penicilina,
streptomicina,
tetraciclinele,
sulfamidele,
cefalosporinele etc., respectiv, stamicina, nistatinul, nizoralul .a.), sunt inactive
fa de virusuri.
Utilizarea n practica medical a compuilor chimici cu aciune antiviral
este limitat de toxicitatea neselectiv a acestora; deoarece virusurile utilizeaz
mecanismele de biosintez ale celulei gazd, este dificil de selectat agenii care
s interfereze specific replicarea viral fr s altreze integritatea morfofuncional a celulei parazitate.
Agenii antivirali folosii n terapie pot fi clasificai n dou categorii:
naturali i de sintez.
Agenii antivirali naturali sunt interferonii (IFN) - proteine sintetizate n
cursul infeciei virale de unele celule ale organismul gazd. Se cunosc trei tipuri
de interferon: IFN , sintetizat, n principal, de leucocite, IFN produs de
fibroblati i IFN sintetizat numai de limfocitele T. Eliberai din primele
celule parazitate de virus, interferonii recunosc receptori specifici pe suprafaa
celulelor nvecinate, de care se fixeaz, protejndu-le. IFN nu exercit o aciune
antiviral direct, ci prin intermediul unor proteine i enzime a cror sintez
este indus de cuplarea IFN cu receptorii celulari. Acestea blocheaz replicarea
viral prin inhibarea traducerii ARNm.n proteine virale, fr s afecteze sinteza
proteinelor normale ale celulei gazd.
Interferonii au un spectru larg de aciune, n sensul c inhib replicarea a
numeroase alte virusuri , nu numai a virusului care a indus sinteza lor, dar au o
strns specificitate de specie (ex., protecia omului este realizat numai de IFN
uman).
Dei la ora actual interferonii sunt produi n cantiti mari prin
inginerie genetic (gena uman care codific sinteza IFN este clonat n celule
bacteriene), din cauza efectelor secundare i a preului prohibitiv, ei sunt
utilizai doar n terapia unor viroze umane cronice, agresive cum sunt hepatitele
virale B i C.
Agenii terapeutici antivirali de sintez au ca mecanism de aciune
inhibarea uneia din fazele replicrii virale: blocarea penetrrii n celula
receptiv i a decapsidrii (amantadina i rimantadina), sinteza acidului nucleic
viral (aciclovir, farmciclovir, zidovudina .a.), sinteza proteinelor virale
(indinavir, ritonavir). Aceste substane au o utilizare restrns din cauza
fenomenelor adverse multiple i a capacitii virusurilor de a dezvolta
rezisten prin selecia de mutani (Buiuc D., 2003).
4.8 BACTERIOFAGII
Bacteriofagii sunt virusuri adaptate parazitrii celulelor bacteriene. Ei au
o larg rspndire n natur, fiind prezeni n toate mediile naturale unde exist

bacterii, deoarece aproape toate speciile bacteriene pot fi gazde pentru unul sau
mai muli bacteriofagi.
Bacteriofagii sau fagii sunt denumii dup gazda natural i poart un
simbol (de exemplu, T1, T2, T3T7, , x 174 sunt bacteriofagi care
paraziteaz celulele speciei Escherichia coli). Majoritatea bacteriofagilor
prezint o specificitate de gazd limitat la tulpinile unei specii bacteriene sau
ale unui gen. Uneori spectrul se extinde la genurile bacteriene nrudite (de
ex.,exist bacteriofagi care infecteaz tulpini de Shigella i Escherichia), sau,
dimpotriv, se reduce la anumite tulpini din cadrul unei specii bacteriene sau
doar la celulele bacteriene posesoare de pili sexuali organite care constituie
receptorii specifici pentru anumii bacteriofagi (fagii de sex).
Compoziia chimic i structura
Bacteriofagii au o compoziia chimic i o arhitectur asemntoare cu a
virusurilor animale, cu excepia unor fagi (de ex. bacteriofagii T2, T4, T6 ai
bacteriei Escherichia coli) care prezint ca particularitate, alctuirea din dou
pri distincte: capul i coada (fig. 39).
Capul este icosaedral i conine ADN viral (genomul), nconjurat de un
nveli proteic format din capsomere (capsida).
Coada este n exclusivitate de natur proteic i este format din
urmtoarele structuri:
a.
la exterior, teaca cozii - un manon format din capsomere
dispuse helicoidal i care are proprieti contractile, putndu-i
reduce lungimea la jumtate din cea iniial;
b.
tija cozii (gtul, cilindrul axial) formaiune strbtut de
canal central;
c.
gulerul cozii ,de form hexagonal, situat n partea proximal a
tecii cozii;
d.
placa bazal, situat n partea distal a cozii, are form
asemntoare cu gulerul, de colurile ei fiind ataate croetele.
Acestea sunt subuniti proteice care, mpreun cu nite
filamente numite fibrilele cozii, realizeaz fixarea fagului pe
suprafaa bacteriei.

Fig. 39. Structura unui bacteriofag cu cap i coad schem.

Relaii bacteriofag bacterie (multiplicarea fagilor)

Exist dou tipuri de relaie fag-bacterie infectat (Debeleac Lucia, 2003,
Ivanof I., 1982 ).
A.Ciclul litic de multiplicare (ciclul productiv, infecia litic) duce la
formarea de noi virioni, care sunt eliberai n mediu prin liza bacteriei.
Infecia litic se realizeaz n mai multe etape:
1. Adsorbia bacteriofagului la receptorii de pe suprafaa celulei
bacteriene. Mai nti se fixeaz fibrele cozii apoi are loc o ancorare mai
ferm, prin intermediul croetelor. Acestea elibereaz muramidaz
enzim care determin liza peretelui celular n zona de ataare.
2. Injectarea genomului fagic prin contractarea tecii, strpungerea
peretelui bacterian de ctre tija cozii i trecerea acidului nucleic viral prin
canalul acesteia, din capul bacteriofagului n celula bacterian. nveliul
proteic rmne la exterior i poart denumirea de ,,fag fantom".
3.Multiplicarea bacteriofagului. Imediat dup ptrunderea ADNului fagic, apare o scurt perioad de eclips. Apoi, treptat, ADN-ul
bacteriei este blocat, fiind substituit funcional de ADN-ul fagic care se
va autoreplica i va induce sinteza de proteine virale pe seama rezervelor
bacteriene. Fagul n multiplicare poart numele de fag vegetativ.
4. Maturarea fagilor. Genoamele fagice i proteinele structurale se
ansambleaz formnd bacteriofagii maturi viruleni.
5. Eliberarea bacteriofagilor. nainte de sistarea metabolismului ,
celula bacterian parazitat sintetizeaz o enzim (endolizina), care
lizeaz peretele bacterian permind eliberarea fagilor maturi.
B. Ciclul lizogen (reductiv)
Lizogenia const n integrarea genomului fagic n cromozomul
bacteriei infectate.
Integrarea este consecina aciunii unei proteine bacteriene cu efect
represor care inhib exprimarea funciilor vegetative ale fagului
(replicarea acidului nucleic, sinteza proteinelor fagice, ansamblarea n
virioni) i a unor gene fagice i bacteriene care asigur recombinarea
situs-specific (integrarea ntr-un locus unde exist omologie de baze
azotate ntre ADN-ul fagic i cel bacterian). Bacteria se reproduce
normal, transmind descendenilor gena reprezentat de fag, uneori,
implicit un caracte nou codificat de aceasta. Producerea de toxin
difteric, de exemplu, este consecina lizogenizrii bacilului difteric cu
bacteriofagul -tox). . Fagul integrat n genomul bacterian se mai
numete profag, fag latent, fag endogen sau fag temperat.
Odat instalat, starea de profag este stabil. Totui, ntr-o
populaie bacterian cu fag latent (lizogen), la un numr mic de celule
(10-5-10-4) acesta trece spontan n fag vegetativ, multiplicndu-se. n

contact cu o populaie bacterian lipsit de profag (lizosensibil) fagii

eliberai de bacteriile lizogene vor produce liza acesteia.
Aplicaiile bacteriofagiei
n medicin, aplicaiile practice ale bacteriofagiei sunt lizotipia i
tratamentul infeciilor.
Lizotipia.
Existena unei specificiti restrnse fag - bacterie a constituit premiza
utilizrii fagilor n crearea de diviziuni taxonomice n cadrul unor genuri i
specii bacteriene numite lizotipuri. Lizotipia sau tipizarea fagic (operaiunea
de ncadrare a unei tulpini bacteriene n lizotip cu ajutorul bacteriofagilor
cunoscui) prezint importan practic n stabilirea filierei epidemiologice a
bolilor contagioase i n toxiinfeciile alimentare.
Tratamentul prin bacteriofag are o utilitate restrns deoarece efectul este
inconstant i imprevizibil.
4.7. CLASIFICAREA VIRUSURILOR
Problema clasificrii virusurilor este nc nerezolvat; ea formeaz
obiectul de studiu al unui comitet internaional. Principalele criterii care stau la
baza clasificrii virusurilor sunt:
- natura chimic a acidului nucleic (ADN sau ARN);
- simetria nucleocapsidei (cubic, helicoidal, binar);
- prezena sau absena unui nveli pericapsidal;
- numrul de capsomere pentru virusurile cu simetrie cubic sau
diametrul nucleocapsidei pentru virusurile cu simetrie helicoidal.
Pe baza acestor criterii, virusurile au fost ncadrate n phylum VIRA
mprit n dou subphyla pe baza naturii chimice a genomului viral:
- DEZOXIVIRA,
- RIBOVIRA
n funcie de simetria capsidei helicoidal sau cubic - , virusurile se
grupeaz n clase:
- dezoxihelica i dezoxicubica;
- ribohelica i ribocubica.
Ordinele se bazeaz pe prezena sau absena unui nveli pericapsidal, iar
familiile, n principal, pe numrul de capsomere i diametrul nucleocapsidei.
Pe baza unor criterii suplimentare, n cadrul familiilor au fost
individualizate subfamilii i genuri virale, iar n cadrul fiecrui gen, una sau mai
multe specii.
Virusurile au o nomenclatur latin cu terminaiile:
- viridae, pentru familii;
- virus, pentru gen .

Exemple: familia Coronaviridae

Parvoviridae,genul Parvovirus.

genul

Coronavirus;

familia