CITOGENETICA

Citogenetica uman modern a aprut abia dup 1956 cnd Tjio i Levan au stabilit c numrul corect, diploid de cromozomi ai speciei umane este de 46. Tot ei au fost aceia care au descris principalele caractere morfologice ale cromozomilor umani. Ca urmare a mbuntirii tehnicilor de lucru a devenit posibil nu numai numrarea cromozomilor ci i studierea trsturilor morfologice ale fiecrui cromozom n parte. In felul acesta s-a putut stabili cauza sindroamelor de trisomie 21, 13 i 18 precum i a sindroamelor Turner i Klinefelter. In anul 1970 au aprut tehnicile de bandare cromozomial datorit lucrrilor de pionierat ale lui Cassperson i colab. care au demonstrat c prin colorare cu quinacrin i examinare n UV se obine o difereniere longitudinal a cromozomilor sub forma unei succesiuni de benzi clare i ntunecate. Modelul de bandare este caracteristic pentru fiecare pereche de cromozomi omologi n parte.

CROMOZOMII UMANI STRUCTURA SI NUMAR

Celulele tinere (inainte de faza de replicare a ADN) dein o singur macromolecul de ADN bicatenar, formnd cromozomii monocromatidici. Dup faza S de replicare a ADN, cromozomii devin bicromatidici, posednd dou macromolecule de ADN bicatenar. Cele dou cromatide ale unui cromozom dispuse aproape paralel, sunt reunite in regiunea centromerului, regiune denumit i constricie primar.

 Centromerul mparte cromozomul n dou: braul lung (q) i braul scurt (p).i are o pozitie variabila dar constant pentru acelai cromozom.

In funcie de poziia centromerului cromozomii pot fi:

metacentrici cnd centromerul este localizat median iar cele dou brae sunt de lungimi aproape egale; submetacentrici cnd centromerul este plasat nafara regiunii mediane iar unul din brae este mai lung dect cellalt acrocentrici cnd centromerul este plasat foarte aproape de unul din capete i cromozomul apare format din dou brae inegale dintre care unul foarte lung i altul foarte scurt.

 Extremitatea fiecrui cromozom poart numele de telomer. Telomerele joac un rol esenial n meninerea stabilitii i integritii cromozomilor. La om, acestea sunt formate din mai multe secvene TTAGGG, repetate n tandem, care sunt meninute de enzime denumite telomeraze. Se apreciaz c reducerea nivelului telomerazelor asociat cu scderea numrului de secvene TTAGGG joac un rol important n procesele de mbtrnire i moarte celular. Nucleul fiecrei celule somatice conine dou seturi de cromozomi, fiecare motenit de la un printe. Membrii unei perechi de cromozomi sunt numii cromozomi omologi. Materialul din care sunt formai cromozomii, ADN i proteine histonice, poart numele de cromatin. Gradul de condensare colorare a cromozomilor nu se realizeaz uniform. Acest lucru se observ mai ales n profaz i teleofaz. Ca urmare se apreciaz c cromatina prezint dou stri funcionale alternative i reversibile: eucromatina i heterocromatina.

 La om, nucleul celulelor normale conine 46 de cromozomi mprii n perechi, existnd astfel 22 de perechi de autosomi i o singur pereche de cromozomi de sex XX la femeie i XY la brbat.
Celulele somatice sunt denumite diploide coninnd toi cei 46 de cromozomi. gameii (ovulul i spermatozoidul) sunt haploizi coninnd doar 23 de cromozomi.

La femeie fiecare ovul poart cte un cromozom X, pe cnd la brbat spermatozoidul poate purta ori X ori Y.
Sansa ca un spermatozoid ce poart cromozomul X sau Y s fecundeze un ovul este aproximativ egal, aa cum i numrul de produi de concepie de sex masculin i feminin este aproximativ egal. In realitate, se nasc mai muli copii de sex masculin ca i cei de sex feminin dei n timpul copilriei i maturitii sex ratio-ul ajunge 1:1

METODE DE ANALIZA CROMOZOMIALA

Cu unele mbuntiri, metodele folosite de Tjio i Levan sunt folosite i astzi n aproape toate laboratoarele de citogenetic n scopul realizrii unei analize a constituiei cromozomiale a unui individ. In acest sens se realizeaz cariotipul, adic aranjarea sistematic standardizat a cromozomilor unei celule, fotografiai la microscop n timpul metafazei mitozei. Prin tehnicile de bandare de-a lungul cromozomilor apare o succesiune de benzi transversale. Aceast alternant de benzi clare cu benzi ntunecate este identic la cromozomii omologi si diferit pentru cromozomii aparinnd diferitelor perechi de cromozomi omologi.

ANALIZA CROMOZOMIALA
In vederea realizrii cariotipului cromozomii trebuie mai nti identificai cu precizie i aranjai n perechi. Caracterizarea morfologic a cromosmilor metafazici are la baz o serie de criterii stabilite de ISCN-International System for Human Cytogenetic Nomenclature.
1.Lungimea relativ a unui cromozom este reprezentat de raportul dintre lungimea cromozomului(reprezentat de suma lungimii braelor (p+q) i lungimea total a unui set haploid de cromozomi(22 de autosomi +X). 2. Indicele centromeric este definit prin raportul dintre braul scurt (p) i lungimea total a cromozomului. IC=p/(p+q) 3. Raportul braelor este reprezentat de dimensiunea braului lung (q) raportat la dimensiunea braului scurt (p). B=q/p La cromozomii metacentrici raportul este de 1.0-1.7, la cei submetacentrici 1.73.0, la subtelocentrici 3.0-7.0 iar la cei acrocentrici 7.0-.

 4.Existena sateliilor. Sateliii sunt prezeni la cromozomii acrocentrici i sunt reprezentai de mase mici de cromatin. Ei se gsesc la extremitatea terminal a braelor scurte a cromozomilor de care sunt separai prin constricii secundare
5.Constricii secundare. Termenul de constricie primar poate fi considerat sinonim cu cel de centromer. Unii cromozomi prezint ns constricii i n alte regiuni ale braelor, denumite constricii secundare. 6.Replicarea asincron a cromozomilor. Evidenierea replicrii asincrone a cromozomilor umani n cadrul perioadei S a ciclului celular a fost posibil n urma administrrii de H3 timidin i urmrirea ncorporrii acesteia n cromozomi n funcie de momentul replicrii. Metoda a permis deferenierea cromozomilor din grupele B, D i E. De asemenea, s-a pus n eviden replicarea tardiv a unuia din cei doi cromozomi X la femei. 7.Modelul de benzi cromozomiale se refer la obinerea unor coloraii difereniale ale cromozomilor.

Tehnica SKY

HIBRIDIZARE FLUORESCENTA IN SITU (FISH)

Metodele noi de diagnostic combin tehnicile citogenetice convenionale cu cele de inginerie genetic molecular. Tehnica FISH se bazeaz pe capacitatea unei poriuni de ADN monocatenar de a se lega de o secven complementar care poate fi localizat oriunde pe o plac metafazic. Spre deosebire de alte metode folosite n analiza cromozomilor tehnica FISH poate s fie aplicat i celulelor aflate n interfaz. In aceast tehnic proba de ADN este conjugat cu nucleotide modificate care dup hibridizare cu ADN provenit de la pacient permite regiunii unde a avut loc hibridizarea s devin vizibil n lumin UV. Aceast tehnic este larg folosit astzi n scopul diagnosticrii clinice i datorit faptului c rezultatele se obin foarte rapid.

POLIMORFISMUL CROMOZOMILOR UMANI

Studiile au artat c anumite regiuni ale cromozomilor prezint variaii ale dimensiunii sau ale afinitii fa de colorani. Intruct acest polimorfism nu are o expresie fenotipic deci nu exercit nici o influen asupra fenotipului, diferenele structurale menionate sunt considerate variante normale. Variabilitatea cromozomial implic regiunile constriciilor secundare, poriunea distal a cromozomului Y i sateliii. Benzile C i Q pot prezenta variaii ale lungimii n cadrul diferitelor grupe de cromozomi, fiind caracteristice pentru fiecare individ n parte. Cromozomii 1, 9, 16 au benzi care variaz att n lungime ct i n localizarea lor n regiunea centromeric i a constriciilor secundare.

Cromozomul Y are o band heterocromatic foarte ngust la nivelul centromerului, pentru care diferenele de lungime de la un cromozom la altul sunt dificil de raportat. Segmentul distal al braului q poate ns varia considerabil n lungime.

 Au fost semnalate urmtoarele tipuri de variante cromozomiale: Constricie secundar alungit la cromozomii 1, 9, 16. Se consider constricia secundar ca fiind alungit atunci cnd are o lungime cel puin dubl fa de lungimea constriciei secundare a cromozomului omolog. Braul p alungit la cromozomii acrocentrici. Braul p se consider alungit atunci cnd este egal sau mai lung dect braul scurt al unui cromozom din perechea 18. Satelii proemineni. Sunt definii astfel cnd sunt mai mari dect braul scurt de la acelai cromozom. Satelii dubli se remarc prin colorare doi satelii n tandem. Cromozom y mare sau mic. Cromozomul Y este considerat mare atunci cnd Y/F>1,00 i mic atunci cnd raportul este de sub 0,7. Prezena sateliilor pe braul scurt al cromozomului 17 (17ps). Aceast variant se ntlnete foarte rar, semnalndu-se n cteva cazuri printre pacienii internai n clinicile de psihiatrie. Prezena sateliilor pe braul q al cromozomului y. Este o variant foarte rar ntlnit fiind semnalat fie la pacieni normali fie la pacieni cu sindromul Klinefelter.Acest caz particular se pare c rezult n urma translocaiei sateliilor unui cromozom din grupele D sau G pe braul q al cromozomului Y.