ORGANIZAREA I DINAMICA GENOMULUI UMAN

Genomul = cantitatea total de ADN dintr-o celul haploid.

1.Genomul nuclear
2. Genomul extranuclear mitocondrii
- cloroplaste (plastidion)
Genomul poate fi definit ca setul complet de molecule diferite de ADN din celulele unei specii.
Genomul uman conine 25 de molecule diferite de ADN din care 24 n nucleu (22 de autozomi + 2
heterozomi) i o molecul diferit n mitocondrii.
Genomul eucariotelor conine mai multe tipuri de secvene:
a) secvene codificatoare acele secvene care se transcriu n diferite tipuri de ARN: ARN m, ARN rb ,
ARNt, ARN de transport; i exist i alte tipuri de ARN ele se noteaz cu ARN sn (small nucleu) sau ARNsc
(small citoplasmatic);
b) secvene necodificatoare ce ndeplinesc anumit rol:
- regleaz exprimarea genelor (promotorii genelor, enhanceri)
- au rol funcional implicate n replicarea ADN
c) secvenele necodificatoare i aparent nefuncionale
aceste secvene chiar dac ndeplinesc un anumit rol, acest rol nu depinde de succesiunea de
nucleotide;
Secvenele necodificatoare n general n genomul eucariotelor nu are poziie fix, sufer mereu
rearanjamente att la scar evolutiv, ct i rearanjamente rapide observabile n cursul vieii unui individ.
Genomul- nu este o strucur fix, este mobil evolueaz.
Datorit complexitii genomului a aptut tiina numit genomic . Genomica este o ramur a
geneticii care studiaz cartarea, secvenierea i analiza funcional a genomului.
Genomica are 3 ramuri:
1) Genomica structural- cea mai avansat
2) Genomica funcional- identific rolul tuturor secvenilor din genom.
3) Genomica comparat care pe baza asemnrii similaritii dintre secven e i prin compararea ordinii
secvenelor n genom ncearc s stabileasc relaiile filogenetice dintre diferitele organisme.
Transcriptomic va analiza setul complet de ARN transmis dintr-un genom.
Proteomic va analiza setul complet de proteine codificat de un genom.
- nu toate genele codific proteine
Metabolomic este o tiin care colereaz secvene din genom cu capacitatea funcional a
esuturilor, organelor , celulelor.
Genomica este vrful de lan al biologiei moderne. Informaiile furnizate de genomic sunt vitale n
medicin, agricultur, explicarea evoluiei.
Genomica a luat avnt ncepnd cu anul 1989 cnd a fost iniiat proiectul Genomul Uman.
Acest proiect avea un obiectiv principal i anume stabilirea constituii genetice a organismului uman
pentru a tii ce rol ndeplinete fiecare gen . Exist i obiective secundare : - dezvoltarea tehnologiei de
studiu; - studierea organismelor moderne;
Pn n prezent au fost secveniate peste 180 de genomuri de la diferite specii.
Prima schi a genomului uman a fost publicat n 2001 iar secvena complet de nucleotide din
genomul uman a fost publicat n 2005.
Pn la publicarea primei schie a genomului uman sau atins mai multe obiective secundare:
- s-au dezvoltat noi strategii de secveniere bazate pe metode nalt automatizate;
- s-a dezvoltat bioinformatica (tiina manipulrii i analizei cantitii uriae de informaie obinut prin
secveniere);
- pe parcursul derulrii procesului Genoului Uman s-a obinut foarte multe rezultate n privin a genomului
bacterian; s-a stabilit c 25% din genele bacteriene nu au omologi n genomul eucariotelor;
- bolile monongenice umane s-a descifrat genetica umana monogenic dezvoltarea unei boli din
cauza unei gene, majoritatea sunt poligene;
- dezvoltarea unei reele internaionale de studiu a genomului;

I. Cartarea
1

II. Secvenierea
I. CARTAREA GENOMULUI
Cartarea genomului reprezint realizarea de hri.
- este o etap esenial nainte de secveniere;
Realizarea de hri detaliate este important din cel puin dou motive:
1) pentru c permite identificarea i izolarea unor gene ;
2) faciliteaz secvenierea hrile genice sunt reprezentarea ordonat a diferitelor secvene din genom;
Cartarea a parcurs mai multe etape. De-a lungul timpului sau realizat mai multe tipuri de hr i.
Primele hri au fost cele citologice, a doua categorie sunt cele genetice, a treia categorie sunt cele fizice .
1. Hrile citologice se realizeaz prin tehnica de bandare. Bandarea reprezint baza cartrii
fiziologice. Exist mai multe tipuri de bandri: bandarea G (Giemsa), bandarea C (legat de centromer),
bandarea NOR (se coloreaz zonele organizator nucleare).
Bandarea G este cea mai comun presupunnd digestia enzimatic cu tripsin a proteinelor.
Tripsina distruge proteinele, rmnd ADN care este colorat cu Giemsa. Acest Giemsa se leag mai intens
n anumite zone de aceea cromozomii vor prezenta o alternan de benzi, respectiv benzile ntunecate sau
benzile G care corespund ADN-ului bogat n adenin(A) i timin(T) corespund zonelor srace n gene,
sau genele luminoase cu coninut bogat n guanin(G) i citozin(C) i corespund zonelor bogate n gene
de pe cromozom.
Modelul de bandare este reproductibil i caracteristic fiecrui cromozom.( ex. pentru genomul uman
bandarea G
se identific fiecare cromozom
cariotip; n acestea vom ntlni benzi
luminoase i ntunecate).
2. Hrile genetice furnizeaz informaii cu privire la localizarea genelor fa de anumite markeri
genetici.
Un marker genetic este orice caracteristic a genomului care variaz de la un individ la altul.
Markerii genetici pot controla anumite caractere fenotipice inclusiv anumite boli sau markeri
genetici ce reprezint o trstur observabil a nivelului de ADN dar care nu are consecine fenotipice
Hrile genetice se construiesc pe baza frecvenei recombinrii genetice dintre markerii genetici n
meioz.
Hrile genetice iau n considerare ordinea markerilor genetici i distana genetic dintre markeri
msurat prin frecvena recombinrilor.
Principiul construirii hrii genetice se ncrucieaz indivizii heterozigoi pentru doi sau mai
muli markeri genetici. Se examineaz descendenii i se determin frecvena recombinrii . Dac
frecvena recombinrii este mai mic de 50% markerii sunt situai aproape unii de al ii pe acela i
cromozom. Dac distana dintre markeri este foarte mic nu are loc recombinarea i astfel ei sunt
transmii nlnuit.
Distanele pe hrile genetice se msoar n centiMorgn (CM) 1CM=ntre0,7 i 1 mega pereche de
baze (Mpb), 1Mpb = 1000 Kpb 1000Kpb=1000000 pb .
Construcia de hri genetice a fost limitat de accesibilitatea caracterelor monogenice folosite ca
markeri genetici.
Primele hri genetice au fost construite n anii 60 prin ncruciarea unor mutante de Drosophila.
Prima hart genetic la om a fost construit n 1970, ca markeri genetici fiind folosite genele pentru
grupele sangvine.
Blocajul a fost depit cnd au fost identificate n genom eucariotelor secven ele polimorfice care
nu au efect fenotipic acestea numindu-se polimorfisme moleculare neutre. Aceti markeri genetici fr
efect fenotipic au fost pui n eviden n momentul n care s-a descoperit electroforeza.
Primii markeri genetici fr efect fenotipic au fost markerii RFLP (polimorfismul de lungime a
fragmentelor de restricie). ADN este sensibil la enzime ce se numesc enzime de restric ie, care taie ADN
n situsuri specifice.
Dac ntre situsul de recunoatere i situsul de restricie este adugat sau pierdut o nucleotid
enzima nu mai taie. Din aceast cauz se genereaz fragmente de ADN de lungimi diferite.
Prima hart RFLP la om a fost realizat n 1987, totu i hr ile genetice au o serie ntreag de limite
printre care cea mai important este rezoluia sczut. Genomul uman are 3200Mpb - ele nu corespund
2

ntotdeauna cu distanele fizice dintre gene; acestea se bazeaz pe ratele de crossing-over , dar acestea
variaz de la o regiune la alta.
3. Hrile fizice - realizeaz localizarea real secvenelor de ADN n genom. Distanele pe hrile
fizice sunt distanele moleculare exprimate n perechi de baze. n construirea hr ilor fizice se folosesc
markeri fizici; practic harta fizic se bazeaz pe distanele moleculare care separ diferii markeri fizici.
Markerul este o caracteristic ce variaz de la un individ la altul.
Pentru construirea unei hri fizice se parcurg mai multe multe etape:
a) ADN-ul izolat este fragmentat cu ajutorul enzimelor de restricie;
b) fragmentele obinute sunt clonate, aceste fragmente clonate sunt gzduite n biblioteci genomice
,acestea fiind asanblate n ordinea pe care acestea o au pe cromozom. Dou sau mai multe fragmente care
se suprapun formeaz un contig .
Fragmente de ADN ce se
suprapun
contig

Practic fiecare cromozom este un contig. n genomul nuclear uman vom avea 24 de contiguri.
n genomul unam avem 25 de cromozomi- 24 autozomi + 1 mitozondrial.
Pentru identificarea suprapunerilor dintre fragmente clonate se folosesc mai multe tipuri de markeri
fizici: STS, EST, SNP.
1. STS (sequnce tagged siter - situsuri etichetate de secvene).
- acestea sunt secvene scurte de ADN de 200-300 pb care au o localizare unic n genom;
- 2 fragmente care conin acelai STS se suprapun;
2. EST (expressed sequence tags etichete de secvene exprimate).
- la eucariote exist cantitate mare de ADN repetat din acest cauz este foarte dificil s identificm STS,
atunci a fost necesar o metod alternativ, acest metod a pornit de la faptul ca ARN m procesat nu
conine repetiii;
- metoda STS presupune izolare de ARN m urmat de revers transcrierea acestui ARN m n ADN
complemantar;
- STS sunt ADN complementar pe ARN m;
ARNm = ARN-ul n care au fost transcrise genele care se eprim i care codific proteine;
3. SNP (single nucleotid polymorphism snipuri).
- se refer de fapt la existena a 4 alternative pentru fiecare poziie din molecula de ADN;
- la om exist cte un SNP la fiecare 1000 pb;
- SNP sunt cei mai importani markeri pentru cartarea fizic ntruct furnizeaz cea mai mare densitate de
markeri;
Din combinaia hrilor fizice cu cele genetice au rezultat hrile integrate de mare rezolu ie.
Cartarea genomului uman s-a ncheiat n 1998, ulterior atenia s-a ngreptat ctre secveniere.
II. SECVENIEREA
Secvenierea reprezint determinarea ordinii sau succesiunii nucleotidelor dintr-un genom.
Determinarea succesiunii nucleotidelor nu este foarte simpl pentru c majoritatea genomurilor sunt
foarte mari, de ex la bacterii avem cteva milioane de perechi de baze iar la eucariote cteva miliarde.
Aceasta nu este foarte uoar datorit limitrii tehnice, o dat pot fi secven iate corect doar fragmete de
800 pb. Din acest cauz pentru secveniere ADN-ul trebuie mai nti fragmentat. Dup secveniere
fragmentele trebuie puse n ordine corect.
Primul genom secveniat n 1982 este genomul de la bacteriofagul Lambda. Primul organism viu la
care s-a secveniat genomul a fost Haemophilusm influence n 1995.
n 1996 a fost secveniat genomul de la Echerichia coli i primul genom de eucariot este
Sacharomites cerevisae. n 1998 sa secveniat genomul de la Caenorhabdites elegans, n 2000 genomul
de la Drosophila melanogaster i primul genom de la Arabidopsis thalianu, 2001 s-a publicat prima
schi a secvenelor de nucleotide din genomul uman secven a final a genomului uman a fost publicat
n 2005.
3

Secvenierea se bazeaz pe tehnica lui Sanger, tehnica numindu-se secveniere direct sau metoda
dideoxoribonucleotidic. Principiul metodei este replicarea ADN-ului.
Metoda presupune mai multe etape:
1) denaturarea termic a ADN-ului obinerea de ADN monocatenar;
2) ADN-ul monocatenar este amestecat cu ADN polimeraz, primeri dNTP (deoxiribonucleotide) 4
dATP, dCTP, dGTP, dTTP,
3) amestecul este repartizat n 4 eprubete diferite, n fiecare dim cele 4 eprubete fiind adugat cte o
dideoxiribonucleotid : ddATP, ddCTP, ddGTP. ddTTP;
- la captul 3 dNTP nu au o grupare OH;
4) polimerizarea- practic ultimul dNTP adugat formeaz o legtur covalent cu gruparea OH a
ultimului dNTP;
5) terminarea polimerazei ataarea ddNTP
6) electroforeza diferite fragmente se separ dup mrime
7) autoradiografierea vizualizare
Tehnica iniial a lui Sanger a fost nbuntit ulterior prin marcarea dideoxiribonucleoproteinei cu
florocrom , fiecare ddNTP se marcheaz cu un cloroform diferit, ca urmare reaciile pot fi vizualizate ntro singur linie n gelul de electroforez.
Gelul de electroforez este supus unui spot laser care excit florocromii iar citira propriu zis se
face automat. Culorile utilizate pentru T este rou, A verde, C albastru, G negru.
Ulterior i electroforeza n plac orizontal a fost nlocuit cu electroforeza capilar.
Dup secveniere fragmentul trebuie ansamblat.
Exist mai multe strategii dar cele mai cunoscute strategii de ansamblare sunt: clone by clone i
shotgun sequencing
Clone by clone necesit iniial crearea de hri detaliate. n aceast strategie genomul este
fragmentat, fragmentele sunt ordonate n ordinea real din genom apoi fiecare fragment este secven iat
iar ulterior secvenele sunt reasamblate. Este mai lent dar mai precis , fiind utilizat n fazele finale ale
secvenierii unui genom pentru c umple acele lacune.
Shot-gun sequencing genomul este fragmentat n secvene scurte, acestea sunt secven iate i cu
ajutorul programelor de calculator sunt asamblate n secvene, caracteristic fiecrui cromozom. A doua
este mai rapid , mai puin precis, majoritatea fragmentelor trebuie secven iate de 15-20 de ori pentru a
obine o secven real.
CARACTERISTICILE GENOMULUI EUCARIOTELOR
Nu exist un genom cu structur comun tuturor organismelor. Exist anumite trsturi generale
comune tuturor organismelor. Cele mai mari diferene se constat ntre genul procariotelor i cel al
eucariotelor, iar n cadrul eucariotelor ntre genomul nuclear i genomul organitelor. Genomurile
extranucleare sunt originare din genomul de procariote.
La eucariote exist diferene n ceea ce privete cantitatea total de ADN, numarul de cromozomi i
tipurile de secvene.
Mrimea genomului eucariotelor.
Mrimea genomului se raporteaz la genomul haploid, deoarece diferite celule ale diferitelor organe
au grade diferite de poliploidie,(celulele somatice sunt diploide, game ii sunt haploizi); la om
hepatocitele pot avea grade diferite de poliploidie.
Mrimea genomului este denumit n mod curent valoarea C C=concentraia de ADN.
Mrimea genomului variaz foarte mult n lumea vie, de la 3,5 x 10 3 pb la virui pn la 1011 pb la
plante i amfibieni. Cele mai mari genomuri virale sunt puin mai mari dect cele mai mici genomuri
bacteriene. Eucariotele pluricelulare au genomul de 4 ori mai mare dect al unicelularelor.
Exist o corelaie ntre mrimea minim a genomului unei ncrengturi i complexitatea genomului.
n cadrul aceleiai ncrengturi exist variaii n privina mrimii genomului. Cele mai mici varia ii se
ntlnesc la mamifere. Exist variaii mari la plante i insecte.
4

ntruct s-a constatat lipsa de corelaii ntre mrimea genomului i complexitatea organismelor, s-a
ajuns la concluzia c genomul eucariotelor conine secvene necodificatoare.
Aceste secvene necodificatoare au fost puse n eviden prin experimente de reasociere.
Experimentul de reasociere a fost iniiat n anii 60, metoda presupunnd izolarea i purificarea de ADN
urmat de fragmentare, nclzire i obinerea de ADN monocatenar. Dac se rcete lent catenele
reasociaz.
Pentru o reasociere eficient trebuie ndeplinit anumite condiii:
- o anumit concentraie de cationi;
- temperatura de incubare trebuie s fie suficient de ridicat pentru a se produce disocierea catenelor, dar
nu foarte ridicat pentru a distruge ADN-ul.
- timpul de incubare i concentraia de ADN trebuie s fie suficent de mari pentru o permite reasocierea;
- fragmentele s nu fie foarte mari dac fragmentele sunt mari rata asocierilor este sczut;
Experimentele de reasociere se finalizeaz cu curbele Cot acestea sunt
reprezentarea grafic a fraciilor care reasociaz n funcie de concentraia iniial a ADN-ului nmul it
cu timpul necesar pentru ca fracia s reasocieze.
La procariote curbe Cot arat:

T4

fracia care
reasociaz
E.coli
Cot

La eucariote curbele Cot arat:

I
%

II

- secvene unice sau numr redus de copii

- ADN moderat repetat

fracia
care
reasoziaz

III
- ADN nalt repetat

n urma experimentelor de reasociere sau pus n eviden urmtoarele aspecte: - secven ele de ADN
repetat sunt larg rspndite la eucariote;
- proporia secvenei de ADN unic raportat la ADN repetat variaz de la un organism la altul;
aa se explic paradoxul valorii C;
- lungimea secvenelor de ADN unic crete pe msura naintrii pe scara evolutiv, maxim de
secvene unice se ntlnesc la mamifere;
- prezena unor genomuri mai mari la plantele i animalele inferioare reflect o cantitate mai
mare de ADN repetat.
Concluzia final este aceea c exist o relaie direct ntre complexicitatea organismelor i ADN-ul
unic nerepetat.
Experimentele de reasociere au fost confirmate i de alte experimente: de ex de centrifugarea
fracionat ( genomul este fragmentat i supus centrifugrii n gradient de densitate. Se ob ine n general
dou benzi o band mai mare corespunztoare majoriti genomului i o band mai mic denumit band
satelit. Banda satelit are coninutul mai mare n adenin i timin, ca urmare difer ca densitate de restul
genomului. Ulterior s-a dovedit c benzile satelit sunt de fapt secven e scurte de ADN care se repet de
multe ori.)
5

Structura genomului eucariotelor.

Organizarea microscopic a genomului nuclear.
Din punct de vedere microscopic genomul nuclear este divizat n molecule individuale de ADN care
mpreun cu proteinele formeaz cromozomi.
Toate eucariotele au cel putin 2 cromozomi.
Cromozom molecule liniare de ADN eucariote
- molecule circulare de ADN procariote
ADN-ul extranuclear cu molecule circulare. Numrul de cromozomi variaz de la o specie la alta.
Nu exist o corelaie ntre numrul de cromozomi i trsturile biologice ale organismului.
Sacharomices 16 cromozomi
Drosophila 4 perechi de cromozomi
De asemenea nu exist corelaie ntre numrul de cromozomi i mrimea genomului.
Unele specii de salamandr au genomul de 30 de ori mai mare dect cel uman i doar jumtate de
cromozomi din genomul uman.
Cromozomii eucariotelor conin ADN i proteine histonice i nonhistonice n cantiti
asemntoare. De asemenea , cromozomii eucariotelor sunt mult mai scuri dect molecula de ADN pe
care o conin.
n medie cromozomii umani conin o molecul de 5 cm. Exist un sistem foarte bine organizat de
mpachetare a ADN-ului n cromozom. Acest sistem de mpachetare are un rol important n exprimarea
genelor.
mpachetarea ADN-ului se realizeaz n mai multe etape:
1)
Nucleosom format din 130-140 pb . Determin nfurarea n jurul unui octamer histonic. Cte 2
molecule de histona H2A, H2B, H3, H4. Sunt legai unii de alii prin 60 de pb care reprezint ADN linkage.
2)
Solenoidul (fibr de 30 de nanometrii) rezultatul nfurrii nucleosomilor de obicei 16-19
nucleosomi formeaz un solenoid. Un rol important n formarea solenoidului n are histona.
3)
Fibra de 700 de nanometrii- este reprezentat de fibra de 30 de nanometrii nfsurat ntr-un schelet
proteic nonhistonic.
4)
Cromozomul metafazic (fibra de 1400 nanometri cea mai condensat stare) acestia sunt forma i
din 2 cromotide surori unite la nivelul centromerului la nivelul creia se gseste o structur proteic
numit chimetocor. Centromerul are o poziie specifc fiecrui cromozom i practic mparte cromozomul
n dou brae: braul scurt P i braul lung Q.
Capetele cromozomilor se numesc telomeri cu rol n replicare i cu rol de protec ie fa de enzime
sau fa de agenii chimici.
Organizarea molecular a genomului nuclear la eucariote.
La eucariote majoritatea genomului este reprezentat de ADN necodificat. O mic fracie reprezint
genele. La procariote majoritatea genomului este codificator, doar n promotor se gsesc cteva secven e
repetate.
Gene = secvene de ADN transcrise n diferite tipuri de ARN, contribuie la fenotip.
La procariote genele nu au introni, nu au secvene intergenice, sunt mai mici ca dimensiune i sunt
reunii n operoni.
1 operon = unitatea de reglare i exprimare genic format din gene i elemente de reglare.
La eucariote genele nu sunt organizate n operoni, genele care codific enzime ale aceleia i ci
metabolice pot exista pe cromozomi diferii. Genele de la eucariote sunt formate din segmentul transcris
i o regiune de control cunoscut sub numele de up stream. Segmentul transcris este format din regiunile
codificatoare i regiunile 5 i 3 UTR (netraduse).
Segmentul codificator conine o alternan de exoni i introni i codoni de iniiere i de terminare a
traducerii.
Codonul de iniiere a traducerii - ATG
Codonul de terminare a traducerii TAA, TAG, TGA.
Regiunea 5UTR este startul transcrierii iar regiunea 3UTR conine secven a AAT, AAA, secven a
semnal pentru adugarea cozii poliadenozinice.
6

Regiunea de control (up stream) este zona cu elemente de reglare. ntlnim aici promotorul, en
hancer, elemente de rspuns i silenceri.
Promotorul conine toate elementele necesare unui nivel minim sau bazal de transcriere. Este
format din secvene scurte la care se ataeaz factori de transcriere.
En hancerul este o regiune de ADN care simuleaz transcrierea unei gene peste nivelul de baz
generat de promotor. La nivelul en hancerului se leag factorii de transcriere specifici. Este localizat la
distan mai mare fa de startul transcrierii i poate poate fi localizat i down stream-ul ce va forma ni te
bucle.
Elementele de rspuns - induc activarea/exprimarea genelor ca rspuns la semnalele particulare, de
exemplu exist elemente de rspuns la ocul termic. Elementele de rspuns pot fi localizate n regiunea
promotorului, n interiorul promotorului sau la nivelul en hancer-ului de la distana mai mare.
Silenceri realizeaz controlul negatic al transcrierii adic au rolul de a inhiba transcrierea
anumitor gene n timp ce stimuleaz transcrierea altora.

SRUCTURA GENEI LA EUCARIOTE

Exprimarea genelor la eucariote.
Majoritatea genelor la eucariote codific proteine. Genele care codific proteine se numesc gene
structurale. Exist ns i gene care codific i ARN ribozomal, ARN de transfer sau alte tipuri de ARN.
Transcrierea se realizeaz cu ajutorul ARN polimerazelor. Exist mai multe tipuri de ARN
polimeraze:
a. ARN polimeraza 1 (I) care transcrie genele care transcriu genele ce codific ARN
ribozomal;
b. ARN polimeraza 2 (II) care trasncrie genele structurale ARN mesager;
c. ARN polimeraze 3 (III) transcrie genele pentru ARN de transfer i genele care codific
ARN ribozomal 5S ;
Transcrierea depinde de factorii de transcriere care se leag la elementele din regiunea up stream.
Nivelul general de transcriere este rezultatul influenei promotorului i a en hancer-ului . Unele gene se
exprim n majoritatea timpului, n majoritatea esuturilor numite gene house-keeping sunt acele gene
care rspund de funciile celulelor de baz.
Genele house-keeping pot fi transcrise doar de promotor. Alte gene sunt specifice anumitor esuturi
adic sunt tisular specifice.
Pentru ca aceste gene s se exprime este nevoie de semnale specifice. Pentru transcrierea acestor
gene este nevoie de en hanceri i elemente de rspuns.
Exprimarea genelor este supus unui mecanism complet de control. Controlul exprimrii se
realizeaz la mai multe nivele. Se realizez la nivel genic, la nivelul transcrierii, la nivelul traducerii i
postraducerii.
Controlul la nivelul genic.
Exist mai multe mecanisme prin care exprimarea genelor poate fi controlat la acest nivel. Prin
rearanjamente ale secvenelor de ADN, exemplul tipic este dat de genele care codific imunoglobuline.
Genele care codific imunoglobuline sunt supuse unor aranjamente somatice. Datorit acestor
rearanjamente somatice apare marea diversitate a anticorpilor.
Amplificarea genic adic cresterea numrului de copii ale unor gene prin aplificare selectiv. De
exemplu n timpul dezvoltrii embrionare la amfibieni apar extracopii ale genelor care codofic ARN
ribosomal.
Metilarea ADN un alt mecanism citozina este metilat obinndu-se 5 metil citozina; metilarea
are ca efect represia exprimrii genelor. Genele care se exprim nc, au n apropierea lor regiuni bogate
n dinucleotida CG pe aceiai caten, regiuni cunoscute sub numele de insule CG. n insulele CG
dinaintea genelor, citozina nu este metilat i ca urmare genele respective se exprim.
Controlul exprimrii genelor la nivelul transcrierii.
7

Se realizeaz prin intermediul factorilor de transcriere care se ataeaz la elementele up stream, iar
dup transcriere prin procesarea transcriptului primar ARN.
Procesarea transcriptului primar - include modificarea captului 5 prin adugarea 7metil-guanin.
Se formeaz n urma legturii 7metil-guanin o structur denumit cap. Structura cap este necesar
pentru iniierea traducerii. Captul 3 sufer modificri prin tierea la nivelul secvenei AAUAAA i
adugarea a 100 150 adenine formndu-se coada poliadenozin.
Eliminarea intronilor din transcriptul primar prin procesul numit splicing i reunirea exonilor.
Numeroase gene pot suferi splicing alternativ care permite obinerea din acelai transcrip primar a
mai multe tipuri de ARN care evident prin traducere va da natere la mai multe proteine.
Nivelul de traducere i posttraducere.
Dup traducere ARN mesager este degradat. La nivel traducerii sunt implicai ribozomii, ARNt i
enzimele. Traducerea are 3 etape: iniierea, elongarea i terminarea dup care rezult o protein
neterminat care sufer o serie de modificri. Este mpachetat n structur secundar dubl, tripl etc. I
se pot aduga diferite grupri metil, fosfat, glicoproteine, lipide. Poate fi tiat, de exemplu insulina este
format din 2 lanuri aminoacizi; proteina primar avea 81 de aminoacizi.
n oricare din etapele traducerii inclusiv n timpul transportului proteinei spre destina ia final pot
interveni o serie ntreag de erori afectnd expresia genei.
Genele structurale
Sunt genele care sunt transcrise n ARNm i codific proteine corespunztoare ntre codoni i
aminoacizi. Ele se pot gsi ntr-un singur exemplar, unice, sau se pot gsi n mai multe copii. Ele se
gsesc aezate unele dup altele n genom, iar ntre gene exist secvene necodificatoare numite secvene
spacer.
Secvenele spacer se modific mai rapid n evoluie pentru c nu au efect fenotipic i se caut n
evoluie modificarea genelor cu efect fenotipic.
Au mult mai des modificri n timpul evoluiei i chiar dac au funcii diferite nu au func ii
dependente de succesiunea nucleotidelor.
O mare parte din genomul eucariotelor este o form particular de ADN spacer.
De la aezarea una dup alta a genomului exist excepii :
- o gen situat n intronul altei gene;
- 2 gene se suprapun astfel nct ocup catenele opuse ale dublului helix pe acelai segment.
Numrul de gene dar i distribuirea genelor n genom variaz de la o specie la alta.
Genomul 30000 gene
Arabidopsis 28000 gene
Nevertebrate 14000 20000 gene
Zeea mays 50000 gene
Distribuirea genelor nu e regulat la distan egal. Exist cromozomi cu form mare de gene i
cromozomi sraci n gene. Pe aceti cromozomi exist regiuni bogate i srace n gene.
Genomul uman
cromozom bogat n gene C11
1500 gene : 1300 structurale codific proteine ; 200 gene codific alte tipuri de ARN
C11 prezint 2 regiuni bogate n gene: - 1 pe braul scurt
- 1 pe braul lung n apropierea centromerului.
Cromozomul Y este cel mai srac n gene are aproximativ 400 de gene importante n reproducere
i n masculinizare.
Exist variante n ceea ce privete mrimea total i numrul de introni.
La om genele care codific: - histone nu au introni
- globin au 2 introni
- factorul de coagulare 8 27 introni
- destrofin are 2,4 megabaze i 79 de introni.
Genele structurale dar i altele pot fi unice sau n mai multe copii identice sau mai putin identice,
aceast categorie formnd familiile de gene.
8

Familiile de gene
Genele care aparin unei familii de gene pot fi dispersate n ntregul cromozom sau pot fi grupate n
clustere pe anumii cromozomi. Familia actinei i tubulinei conin gene asemntoare dispersate n
genom. Genele histonelor conin gene identice sau foarte asemntor dispersate sau n clustere. Cele care
codific globine conin gene care variz mult dar se gsesc grupate n clustere.
Genele unei familii de gene apar prin duplicaie; mai multe gene copii sufer mutaii i evolu ie
divergent. Duplicaiile i mutaiile se datoreaz erorilor din timpul replicrii sau recombinrii genetice.
Familia globinelor.
Familie complex de gene. Membrii familiei globinelor sunt destul de asemntori n ceea ce
privete secvena de ADN dar destul de diferii pentru ca produsul lor proteic s aib propriet i distincte.
Se ntlnesc i la plante i la animale.
Globinele de la animale familia globinelor de la mamifere.
Globinele protein sanguin
combin
hemoglobin 2 lanuri globin i globin.
La om genele pentru (alfa) globin formeaz clustere pe cromozomul 16. Acesta ocup n jur de 30
Kbaze i conine 4 gene funcionale i 4 nefuncionale.
Genomul care codific globin sunt localizate tot n cluster pe cromozomul 11. Acesta este mai
mare de 60 de Kbaze i conine 5 gene funcionale i 1 nefuncional.
Genele din clusterul pentru globin conin gene asemntoare dar nu identice. Cele 5 gene
funcionale sunt: , A, G, , .
Cele mai diferite din punct de vedere a secvenei de nucelotide sunt , , au o similaritate de 79,1%
care e suficient pentru a considera c cele dou gene aparin aceleiai familii.
Acest procent face ca cele 2 gene s codifice proteine cu proprieti biochimice distincte.
Aceast variaie e corelat cu faptul c aceste gene se exprim n stadii diferite de dezvoltare: - gena
se exprim n embriogeneza timpurie;
- A, G - n perioda fetal, proteinele codificate de ele difer una de alta print-un
singur aminoacid;
- , la adult;
Diferenele propritilor biochimice ale proteinelor codificate de genele pentru globin reflect
modificrile n rolul pe care l are hemoglobina n cursul dezvoltrii umane .
n ambele clustere , globin, genele ocup un segment mic din lungimea acestora, restul sunt
secvene necodificatoare sau spacer.
ex: globin cluster gene reprezint 14%
Globina plantelor = leghemoglobina asemntoare hemoglobinei leag oxigenul n celulele
radiculare i protejeaj reacia de fixare a azotului atmosferic de efectele distructive ale oxigenului.
Aceast reacie de fixare e realizat de bacterii simbionte. Rolul de protec ie n aceast reac ie l are
leghemoglobina. 200 de specii de plante au gene care codific leghemoglobina.
Genele pentru leghemoglobin au 3 introni i provin dintr-un ancestor comun cu genele care
codific la animale din care sau descompus acum 1500 milioane de ani.
Genele globine animale au generat 800 milioane de ani genele care codific mioglobina, iar cele
pentru , globin au nceput s evolueze divergent acum 500 milioane de ani.
Pseudogene gene false.
n formarea de gene pot s apar copii nefuncionale ale genelor dar care au secven e similare cu
genele funcionale.
Ele apar din genele funcionale prin acumulare de mutaii.
Pot aprea prin: - mutaii nonsens (care transfer un codon ntr-un codon terminal )
proteina
mai scurt = protein truncat.
- mutaii frameshift ( modificarea cadrului de citire) inseria sau deleia unei
nucleotide
citire eronat dup codonul modificat.
Pseudogenele sunt de 2 feluri: - neprocesate
- procesate
9

Pseudogenele neprocesate.
Apar prin duplicaii urmate de mutaii. Mutaiile pot avea loc n segmentul transcris al genei sau n
regiunile flancatoare ale genelor. Dac mutaia este n segmentul transcris pseudigenele rein promotorul
i sunt transcrise pn la poziia n care a avut loc mutaia.
Cnd mutaia are loc n regiunea 5 UTR nu se mai formeaz complexul de ini iere al transcrierii i
genele rmn netranscrise.
Descoperirea genelor neprocesate a fost prognozat de Haldone care a observat la Drosophila
prezena genelor duplicate. El a considerat c aceste duplicate pot suferii muta ii fr a genera efecte
dezastruase att ct unele copii rmn funcionale.
Pseudogenele procesate.
Descoperite mult mai trziu la sfritul anilor 70, sunt foarte asemntoare cu ARNm procesat
pentru c nu au secvene 5- 3 UTR
nu se transcriu, nu au introni, con in o serie de adenine
asemntoare cozi poliadenozinice din ARNm procesat.
Aceste pseudogene procesate se gsesc n familia de gene de la mamifere specific omului, exemplu
familia tubulinei, actinei, imunoglobulinelor. Exist proteine procesate pentru gene unice, exemplu pentru
citocromul C.
Acestea apar astfel: ARNm procesat
reverstranscrie
copie ADN complementar
inserat
n genom.
Pseudogenele procesate sunt copii ADN ale ARNm procesat.
Reverstranscrierea se face cu enzima reverstranscriptaz care nu exist n celulele eucariote, e
codificat de virusuri i de elemente transpozabile foarte des ntlnite n genomul eucariotelor.
Exist dovezi care confirm originea pseudogenelor procesate n ARNm procesat. Acestea posed la
capete secvene repetate asemntor cu secvenele ntlnite la fragmentele de ADN inserate n genomul
eucariotelor prin intermediul virusurilor.
Pseudogenele neprocesate sunt larg rspndite la eucariote, cele procesate se gsesc la mamifere
unde reprezint aproximativ 20% din genom. Acest procent foarte mare reflect frecvena mare a
infeciilor cu retrovirusuri de la mamifere. Retrovirusurile au gene care codific endonucleaze pentru a
permite inserarea pseudogenelor procesate n genomul celulei gazd.
Localizarea pseudogenelor reflect originea lor. Pseudogenele neprocesate sunt situate n apropierea
genelor funcionale din care provin. Pseudogenele procesate sunt rspndite peste tot n genom fr
tendina de localizare lng omologii lor funcionali.
Pseudogenele neprocesate apar n urma unor mutaii extinse pe periode de milioane de ani. Se
consider c sunt necesare 1-2 milioane ani pentru ca duplicatul unei gene s acumuleze suficiente mutaii
i s devin pseudogene. Majoritatea pseudogenelor neprocesate identificate pn n prezent au aprut cu
milioane de ani n urm i exist la toi membrii actuali.
Pseudogenele procesate apar instantaneu la momentul inseriei n genomul mamiferelor a copiei
ADN a ARNm procesat.
Pseudogenele procesate a citocromului C dei e copia perfect a ARNm respectiv nu are o origine
foarte recent deoarece aceleai pseudogene se ntlnesc i la organisme mai ndeprtate filogenetic
( oareci).
Gene care codific ARNr.
Din toate tipurile de ARN celular 90% sunt ARNr i ARNt.
Genele pentru ARNr sunt cele mai repetate secevene codificatoare din genomul eucariotelor (nu
fac parte din categoria genelor unice).
Pseudogenele genelor pentru ARNr sunt la fel de numeroase ca i genele funcionale sau chiar le
por depi numeric.
Exist 4 tipuri de gene pentru ARNr: - 5,8S
- 18S
reprezint genele ARNr majore
- 28S
- 5S
Genele majore.
10

Se gsesc n sute/mii de copii pe 1 sau civa cromozomi. n localizrile respective formeaz situsul
NOR. Situsul NOR este foemat din uniti transcripionale repetate care conin genele ARNr majore.
O unitate transcripional conine gene majore separate de secvene spacer.
Unitate transcripional pentru ARNr major

18S
spacer extern

5,8S

28

secvene spacer
intergenice

O astfel de unitate se gsete n n copii n situsurile NOR, exemplu cromozomii acrocentrici din
grupul D,G (13, 14, 15, 21, 22).
Un situs NOR conine repetiii ale genelor ribozomale majore ns lungimea situsului este mult mai
mare ca lungimea ocupat de gene sau de secvenele codificatoare propriu zise acest lucru se datoreaz
secvenei spacer intergenice i prezenei intronilor.
Genele pentru ARNr sunt transcrise cu ajutorul ARN polimeraza 1.
Genele pentru ARNr major aparin unei familii de gene care difer de familia genelor structurale
pentru c membrii familiei de gene ARNr major sunt identici ca secven sau aproape identici. Familia de
gene ARNr major a aprut tot prin duplicaie, dar duplicatele nu au suferit mutaii ci sau conservat foarte
bine. Acestea conin pseudogene foarte numeroase.
Genele pentru ARNr 5S pot fi situate n clustere dar n loca ii separate de obicei fa de clusterele
genelor majore. Exemplu la om genele pentru ARNr 5S sunt localizate ntr-un cluster format din aprox
2000 de gene situate pe cromozomul 1.
Exist excepii: de exemplu la dojdii i fungi aceste gene sunt amestecate cu gene majore i sunt
situate n secvene spacer ale genelor majore.
Genele pentru ARNr 5S au foarte multe pseudogene de tip neprocesat transcrise de ARN polimeraza
3.
Genele care se transcriu n ARNt.
n genomul eucariotelor acestea se gsesc rspndite pe mai muli cromozomi, pe unii cromozomi
formnd cluste care conin gene pentru unul sau mai multe tipuri de ARNt.
n genomul uman se gsesc aproximativ 500 de gene pentru ARNt. n afar de genele func ionale n
genomul eucariotelor se gsesc i pseudogene (ARNp) din acestea la eucariote unele sunt pseudogene
procesate.
Genele pentru ARNr, ARNt i genele care codific histone se gsesc n numr mare de copii n
genomul eucariotelor pentru a menine o rat ridicat a sintezelor celulare care trebuie s depeasc
consumul celular. Genele pentru ARNsn/sc se gsesc grupate n clustere dar pot exista i ca gene unice. Se
gsesc n mai multe copii dar numrul de copii este relativ redus.
Numrul de pseudogene pentru ARNsn/sc este mult mai mare i poate ajunge pn la mii de
pseudogene. Un exemplu de gen pentru ARN de mici dimensiuni sunt genele ARN 7SL. Acest ARN este
este parte a semnalului de recunoatere pentru ataarea ribozomilor la reticolul endoplasmatic. n
genomul uman exist mai puin de 10 gene funcionale dar exist sute chiar mii de pseudogene. n
genomul uman dintre pseudogenele ARN 7SL se ntlnete familia de secvene Alu (colecie de
pseudogene ARN 7SL).
ADN-ul moderat repetat.
Acesta include att secvene funcionale ct i secvene nefuncionale.
n categoria ADN-ului moderat repetat funcional intr genele pentru ARNr, ARNt, ARNsn/sc dar i
unele gene structurale care se gsesc n numr mai mare de copii, exemplu genele care codific histonele.
n cadrul ADN-ului moderat repetat funcional intr secvene spacer intergenice care conin
promotorul i en hancerul care se repet ntr-un anumit grad, i mai intr i secvena 3UTR(3 netradus).
11

De asemenea n el mai intr origini de replicare i nu n ultimul rnd intr secven a de la nivelul
telomerilor. Telomerele se gsesc la captul cromozomilor i conin un numr mare i variabil de repeti ii
ale secvenei TTTAGG. Aceast secven este foarte bine conservat la eucariote.
Telomerele cu captul 3 ieit n afar, nu este un ADN monocatenar pentru c aceast prelungire a
captului 3 formeaz o structur n ac de pr prin crearea unor legturi sau mperecheri neobinuite ntre
guanine.
Telomerele sunt sintetizate cu ajutorul unei enzime numite telomeraz. Telomeraza este o enzim
care conin ARN. Telomeraz este acticv n stadiile timpurii ale dezvoltrii embrionare i este inactiv la
aduli. ARN-ul din telomeraz folosete ca matri pentru extinderea cromozomilor la captul 3.
Telomerele ndeplinesc 2 funcii eseniale: de aprare i n replicare.
Funcia de aprare n general capetele cromozomilor sunt instabili. Telomerele stopeaz
funcionarea cap la cap a cromozomilor prin legarea unei proteine ce formeaz o structur protectoare.
Telomerele stabilizeaz capetele cromozomilor i mpiedic digestia cu exonuxleaze.
Rolul n replicare telomerele sunt implicate n replicarea moleculelor liniare de ADN, prelungirea
de la captul 3 previne scurtarea sau erodarea moleculelor ADN la fiecare rund de replicare. La fiecare
replicare se pierd nucleotide . Existena prelungirii la captul 3 face ca afectate s fie secven ele repetate
TTTAGG i nu secevene vitale din restul cromozomilor.
Din cauza rolului n replicare a telomerelor acestea sunt implicate n mbtrnire i n cancer. Legat
de mbtrnire celulele umane sunt muritoare, n culturi rezist 50 de cicluri celulare dup care mor. Pe
msura mbtrnirii celulelor telomerele se scurteaz iar moartea celulelor apare cnd telomerele sunt
prea scurte pentru a proteja i ca urmare sunt deteriorate secvene vitale din cromozomi.
n ceea ce privete cancerul telomerele teoretic ar fi un mecanism mpotriva cancerului, deoarece
telomerele erodate ar determina moartea celulelor canceroase. Din pcate s-a dovedit n culturi de celule
ca telomeraza este activ, din aceast cauz telomerele nu se mai scurteaz iar celule canceroase devin
nemuritoare. Telomeraza ar putea reprezenta o int anticancer. Dar avem i stuaia invers, prin care prin
stimularea genelor care codific telomeraza sau prin aprovizionarea celulelor cu telomeraz s-ar putea
evita mbtrnirea.
ADN-ul moderat repetat nefuncional se gsete rspndit n ntreg genomul eucariotelor de obicei
grupate n clustere. Secvenele de ADN moderat repetat nefuncionale sunt de obicei mrginite de
secvene scurte repetate. Din aceast cauz se consider ca ADN moderat repetat nefuncional este
reprezentat de elemente mobile care se inser n noi locaii n genom.
De la ADN moderat repetat a aprut noiunea de selfish DNA deoarece acesta nu contribuie la
fenotip dar sporete cantitatea de ADN din genomul eucariotelor.
n genomul uman ADN moderat repetat reprezint 45% nefuncional.
ADN moderat repetat nefuncional din genomul uman este format din 4 clase:
1 - elementele LINE
2 elementele SINE
3 retrotranspozomii LTR
4 transpozomii ADN

elemente mobile.

1. Elementele LINE
Sunt elemente de 6-8 kilobaze, conin un promotor pentru ARN polimeraz II care codific o
protein asemntoare reverstranscriptazei, o gen care codific o endonucleaz , la captul 3 o regiune
bogat n adenin i timin, i la ambele capete secven repetat.
5

gen asemntoare
reverstranscriptazei

gen pentru
endonucleaz
12

un set de adenin i timin

Elementele LINE se propag prin retrotranspozaie. Retrotranspozaia este micarea unei

secvene de ADN prin intermediul ARN-ului. Elementul LINE este transcris n ARNm
corespunztor care este apoi reverstranscris n ADN complementar care este inserat n genom ntr-o
nou locaie. n acelai timp ARNm este tradus n reverstranscriptaz folosit la propria
reverstranscriere i n endonucleaz care taie ADN-ul favoriznd inserarea ADN-ului complementar
sintetizat ntr-o nou localizare. ADN complementar a fost sintetizat pe matria aceluiai ARNm.

LINE

LOCAIE
INIIAL

TRANSCRIERE
ARNm LINE
TRADUCERE
endonucleaz

reverstranscriptaza

reverstranscriptaza i inserarea

LOCAIE
ARNm LINE
FINAL

ADN complementar

La eucariote exist 4 familii LINE, cea mai comun la om este LINE 1 care se gse te n mai
mult de 500.000 de copii.
2. Elementele SINE.
Sunt mai scurte, au 300-400 de perechi de baze azotate, nu au gena pentru reverstranscriptaz.
Ele sunt incapabile s se mite autonom. Elementele se mic n genom cu ajutorul
reverstranscriptazei codificat de LINE. Se pare c elementele LINE provin din gene ARNt
deoarece sunt transcrise cu ARN polimeraza III. La om exist 3 familii SINE: MIR, MIRB, Alu
(colecii de pseudogene pentru ARN 7SL).
Secvenele Alu au primit aceast denumire dup enzima de restricie alu deoarece toate
aceste secvene prezint situs de recunoatere pentru aceast enzim. n genomul uman exist mai
mult de 1 milion de secvene Alu. Acestea sunt singurele elemente SINE active n genomul uman.
Se pare c secvenele Alu sunt reverstranscrise cu ajutorul altor reverstranscriptaze care nu
provenin de la elementele LINE.
3. Retrotranspozomii LTR.
Sunt asemntoare retrovirusurilor, acetia conin genele GAP i POL. Gena gapcodific
proteinele structurale ale retrovirusurilor i genele pol codific reverstranscriptaza, proteaza,
integraz. Aceste gene sunt suficiente s realizeze retrotranspoziie autonom. Nu au gene
env caracteristic retrovirusurilor. Retrotranspozomii LTR din genomul uman sunt inactivi.
13

4. Transpozomii ADN.
Nu se mic prin intermediul ARN0-ului ci direct ca ADN, procesul se nume te transpozi ie.
Transpoziia este de 2 feluri: - conservativ
- replicativ
a)
n transpoziia conservativ transpozomul este excitat din locaia iniial i inserat ntr-o nou
locaie. n aceasta numrul de elemente transpozabile nu se modific. Nu se cunoate ce se
ntmpl cu capetele rmase libere ale donorului.
b)
Transpoziia replicativ transpozomul se replic iar copia este inserat ntr-o nou locaie.
Ca urmare numrul copiilor crete. n transpoziie este implicat o enzim numit transpozonoz
codificat dintr-o gen transpozonul ARN. Numai transpozomii ADN intaci codific transpozonaza
activ, ns transpozonaza activ a unui element intact poate fi folosit i de transpozomi care au
suferit mutaii. Ca urmare n timp se acumuleaz transpozomi inactivi iar procesul de transpoziie se
reduce.
La om exist 7 clase de transpozomi ADN care reprezint mai puin de 3% din genom i to i
sunt inactivi n ultimii 50 de milioane de ani.
ADN-ul nalt repetat.
Este format din secvene repetate de pn la 1 milion de ori n genom. ADN-ul nalt repetat
reprezint 10% din genomul uman dar la Drosophila viridis reprezint 45%.
ADN-ul nalt repetat conine repetiii n tandem (una dup alta) a unei singure secven e
repetate sau combinaii alternative a ctorva secvene repetate.
ADN-ul nalt repetat a fost descoperit n experimentul de ultracentrifugare frac ionat fiind
denumit ADN satelit datorit compoziiei diferite n nucleotide fa de restul genomului . Acest
ADN apare ca o band separat.
ADN-ul satelit variaz n ceea ce privete cantitatea de la o specie la alta i n cadrul aceleia i
specii este foarte polimorfic. Prezint variaii n ceea ce privete lungimea secven ei repetate, de la
dinucleotide de tipul AT repetate de n ori pn la secvene complicate, fiecare specie are propriul set
de secvene repetate.
ADN-ul nalt repetat (= satelit) se gsete n genomul eucariotelor localizat :grupat sau
dispersat.
ADN nalt repetat localizat grupat.
Acesta la om se ntlnete la nivelul centromerului n regiunile subtelomerice la nivelul
braelor scurte a cromozomilor acrocentrici i de asemenea la nivelul cromozomilor Y. Exist la
nivelul heterocromatinei. ADN-ul nalt repetat de la nivelul centromerulii este cunoscut sub numele
de ADN satelit , acest ADN satelit are o funcie important la nivelul centromerului, el leag o
protein cu rol important n funionarea centromerului n timpul diviziunii i nu numai.
ADN nalt repetat localizat dispersat .
Exist 2 categorii de secvene ADN nalt repetat dispersat i anume minisateli ii i
microsateliii.
Minisateliii sunt formai din secvene repetate de 10 pn la 100 perechi de baze (pb). Au o
tendin de localizare n apropierea telomerilor, dar se gsesc i n alte regiuni genomice.
Minisateliii prezint un nalt polimorfism intraspecific (se refer la numrul diferite de repeti ii de
la un individ la altul). Aceast variaie a numrului de repetiii este cunoscut sub numele de VNTR
( variable member of tandem repeats)
Tehnica care pune n eviden VNTR-urile a minisateliilor este tehnica VNTR. Aceasta este
prima tehnic de amprentare ADN folosit deoarece repetiiile VNTR se mo tenesc mendelian
jumtate de la mam jumtate de la tat.
n tehnica VNTR ADN-ul este fragmentat cu ajutorul ezimelor de restric ie, fragmentele sunt
apoi hibridizate cu sonde ADN minisatelitice iar n urma reaciei de hibridizare se ob ine un model
de benzi care ste vizualizat n electroforez. Modelul de benzi ale unui individ indiferent din esutul
din care provine ADN este motenit jumtate de la mam jumatate de la tat.
Microsateliii sunt formai din secvene de 2-13-14 pb repetate n tandem. Se ntlnesc n
literatur sub forma de STR (short tandem repeats).
14

STR (microsateliii) sunt rspndii peste tot n genom chiar i n interiorul genelor.
Microsateliii similari minisateliilor prezint polimorfism intraspecific ridicat i n prezent au
nlocuit minisateliii n amprentarea ADN, deoarece au o distribu ie mai uniform n genom i
dimensiuni mai scurte dect minisateliii.
ADN nalt repetat este responsabil pentru variaia cantitii totale de ADN de la o specie la
alta i chiar la specii nrudite. De exemplu n cazul tritonilor i broa telor; tritonii au de 7 ori mai
mult ADN dect broatele datorit ADN nalt repetat.
Exist mai multe ipoteze care ncearc s explice existena secvenelor repetate n genomul
eucariotelor :
o ipotez susine c aceste secvene rezult n urma duplicaiei i mutailor de la nivelul unor
secvene cndva funcionale.
o alt ipotez susine c ADN repetat este meninut ca material evolutiv brut, adic ca blocuri
de ADN ce pot evolua n gene funcionale.
o alt ipotez spune c ADN repetat reprezint nite secvene spacer care dein regiuni
cromozomale importante n mperecherea cromozomilor i recombinare genetic.
Genomul organitelor (extranuclear)
Pentru prima dat s-a pus problema existenei genomului extranuclear n anii 50 cnd a fost
observat un mod neobinuit de exprimare a unor gene la Saccharomyces cerevisiae (drojdia de
bere). Ulterior cercetrii din domeniul biochimiei i microscopiei electronice din ani 60, a adus
dovezi conform creia independent de genomul nuclear exist ADN n mitocondrii i cloroplaste.
Genomul extranuclear prezint nite trsturi caracteristice care le deosebesc de genomul nuclear.
Forma genomului extranuclear.
Iniial s-a considerat c forma tuturor genomurilor extranucleare sunt circulare. Microscopia
electronic a dovedit c unele organisme au att ADN circular ct i liniar. Totu i majoritatea
genomurilor organitelor sunt circulare ns exist i unele variaii, de exemplu la unele eucariote
coexist genomuri circulare cu genomuri liniare. n cloroplaste genomul circular coexist cu ADN
circular de dimensiuni mai mici. Exist i un model extrem la dino-flagelate, genomul
cloroplastelor este divizat n umeroase molecule circulare mici fiecare coninnd o singur gen.
Unele protozoare ,parameciul i unele specii de drojdii au genomul mitocondrial liniar.
Numrul de copii al genomului organitelor .
n privina mitocondriilor la om, exist c-am 10 molecule de ADNmp(ADN mitocondrial per
mitocondrie) i n mediu 800 per celul. 6000 per celul sunt la drojdiile de bere. La plante
numrul de genomuri cloroplastidiene variaz mai mult de la 1000 de molecule de ADN cp (ADN
cloroplastidian) per celul pn la 5000 la porumb. Uneori la unele specii de plante genomul
cloroplastidian ajunge s reprezinte 10% din genomul nuclear.
Dimensiunea genomului organitelor.
n privina mitocondriilor avem 2 tipuri de ADN mitocondrial : ADN mp derivat i ADNmp
ancestral.
ADNmp derivat se ntlnete la majoritatea eucariotelor animale pluricelulare inclusiv la om,
este de dimensiuni mici (la om 16,7 Kpb = 16700pb ) i are o organizare compact a genelor, gene
apropiate cu secvene foarte scurte ntre ele.
La eucariotele inferiore i plantele superioare se ntlnete ADNmp ancestral care este de
dimensiuni mai mari; poate ajunge pn la 2000 de Kpb, genele sunt mai puin compacte i pot
conine introni.
n ceea ce privete genomul cloroplastidian dimensiunea este mai puin variabil, conine
gene cu introni i are o structur similar la majoritatea plantelor.
Coninutul n gene al genomului organitelor.
15

Este meninut mai redus comparativ cu genomul nuclear.

n mitocondrii ADN-ul variaz n coninutul de gene de la 9 gene la Plasmodium malarie la
92 de gene la unele specii de protozoare. Omul are 37 de gene n ADN mitocondrial = 13 codificnd
proteine implicate n procesele respiratorii celulare, 2 gene codificnd ARN ribozomal i 22 de gene
ARN de transfer.
n ceea ce privete ADN cloroplastidian, acesta la majoritatea speciilor de plante, con in
aproximativ 200 de gene care codific ARN ribozomal, ARNt, proteine implicate n fotosintez.
Genomul organitelor nu codific toate proteinele din organite, restul de proteine sunt
codificate n nucleu, sintetizate n citoplasm i transportat n organite. Proteinele care sunt
sintetizate n organite sunt extrem de hidrofobe i nu ar putea fi transportate prin citoplam,
membran.
Originea genomului organitelor.
Este conform cu teoria sinbiozei care se bazeaz pe asemnarea n ceea ce privete
exprimarea genelor n organite i la procariote. n plus genele din ADN-ul organitelor sunt similare
n ceea ce privete secvena cu genele de la procariote .
Teoria endosimbiotic mitocondriile i cloroplastele provin din bacterii libere care au format
asociii simbiotice cu celulele eucariote aflate n stadii timpurii al evoluiei.
n ajutorul acestei teorii sau adus numeroase dovezi. Au fost descoperite organisme care
prezint stadii ale endosimbiozei mai puin avansate, de exemplu un protozoar - Ganophora
paradoxa are nite structuri fotosintetice asemntoare cu cianobacteriile care difer practic de
cloroplastele actuale. De obicei s-a tras concluzia c cloroplastele provin din cianobacterii.
n privina mitocondriilor se consider c provin din alfa-proteobacterii asemntoare cu
rickettsia. Cloroplastele au pierdut multe de la strmoi, aceste pierderi se reflect asupra genomului
din mitocondrii i cloroplaste.
Studiile de genomic au dovedit existena unui transfer intens de gene ntre organite i nucleu,
ntre mitocondrii i cloroplaste dar i dintre nucleu i organite.
GENOMICA FUNCIONAL
ADN + proteine (histonice i non-histonice) = cromatin.
Structura cromatinei este ierarhizat de la cele mai mici nivele de mpachetare pn la
cromozomul metafazici
Noiuni generale despre cele 2 tipuri de cromatin (heterocromatina i eucromatina).
Heterocromatina.
Apare condensat la periferia nucleului n interfaz, avnd o organizare compact.
Heterocromatina este de 2 feluri : heterocromatin constitutiv i hetrocromatin facultativ.
a)
Heterocromatina constitutiv este o trstur permanent. La nivelul ei nu exist gene i
rmne compact pe tot parcursul ciclului celular. Corespunde ADN-ului nalt repetat gsit grupat,
care se gsete n regiunile subtelomerice, n regiunea centromerilor, n regiunea cromozomilor
acrocentrici, n cromozomul Y .
b)
Heterocromatina facultativ nu e trstur permanent i se observ n anumite celule, n
anumite momente. Conine gene ce sunt inactive n anumite celule i anuite perioade ale ciclului
celular.
Organizarea compact a heterocromatinei face ca proteinele implicate n exprimarea genelor
s nu poat accesa ADN.
Eucromatina.
Este o stare mai lax a cromatinei care permite accesul proteinelor implicate n exprimarea
genelor la nivelul macromoleculelor ADN. La microscopul electronic s-a constat c cromatina e
alctuit fibr de 30 de nanometri care formeaz bucle ataate la proteinele non-histonice nucleare.
16

Ataarea buclelor la scheletul proteinelor se face prin nite segmente bogate n adenin i timin ce
se numesc regiuni asociate matricei nucleare-MAR.
Buclele dintre 2 MAR-uri formeaz un domeniu structural. Experimentele efectuate cu
ajutorul deneazelor au dovedit existena unor domenii funcionale. Domeniul funcional reprezint
regiunea n care gene se exprim; aici cromatina este permisiv i permite exprimarea genelor.
Nu exist o coresponden perfect ntre domeniile structurale i cele funcionale astfel exist
situaii n care aceste MAR-uri delimiteaz att domeniul structural ct i cel funcional.
Exist situaii n care graniele domeniului structural se gsesc n interiorul unor gene. Exist
situaii n care domeniile structurale conin gene necorelate funcional.
Domeniile funcionale au 2 caracteristici eseniale:
- sunt delimitate de izolator;
- pot conine LCR regiune de control a unor loci;
Izolatorii
Sunt secvene descoperite la Drosophila prima dat. Prezint 2 proprieti importante: anihileaz efectul poziional: cnd o gen se afl
ntr-o zon cu comatin strns mpachetat, gena nu se exprim i invers, dac gena este flancat de
izolatori atunci ea e nalt exprimat indiferent unde se gsete. Izolatorii modific mpachetarea
cromatinei i induc formarea unui domeniu funcional.
- menin independena fiecrui domeniu funcional. mpiedic ca genele dintrun domeniu funcional s fie influenate de elementul reglator din domeniile nvecinate.
i ndreapt rolul prin ataarea unor proteine la secvenele de ADN specifice lor.
LCR (regiuni de control a unor loci ).
Are rol n formarea i meninearea a unor domenii funcionale. Anihileaz efectul poziional
al izolatorilor i stimuleaz expresia genelor din domeniul funcional crora le este ata at.
Descoperite la genele din familia Betaglobinelor.
Aceste gene posed LCR responsabile de exprimarea lor n anumite stadii de dezvoltare i n
anumite esuturi. Face ca ADN s fie accesibil unor anumite proteine cu rol n modificarea structurii
cromatinei i n formarea complexului de iniiere al transcrieri.
Activarea cromatinei.
Nucleosomii sunt principalii determinani aiactivrii genomului la eucariote. Acest lucru se
datoreaz histonelor ce fac parte din nucleosomi dar i poziionrii acestora pe o singur caten
ADN.
Aceast activare implic acetilarea histonelor dar i remodelarea nucleosomilor.
Acetilarea histonelor reprezint ataarea unui grup acetil la lizin din regiunea N-terminal a
histonelor. Prin acetilare se reduce afinitatea histonelor pentru ADN i interaciunea dintre
nucleosomi. Logic hitonele n heterocromatin sunt neacetilate iar n domeniile func ionale sunt
acetilate.
Acetilarea histonelor are loc cu ajutorul unor enzime ce se numesc histon acetil transferaze
=H.A.T. Nu exist o singur enzim HAT, multe proteine au activitate HAT, aceste proteine
acioneaz n complexe multiproteinice i induc acetilarea histonelor.
Histonele din nucleosomi sufer i late modificri chimice n afar de acetilare, ele au situsuri
de legare pentru metil, fosfat i ubiquitin.
Acestea au adus la concluzia c exist un cod al histonelor, prin acest cod practic se
regleaz care din regiune din genom se exprim i care nu.
Remodelarea nucleosomilor reprezint modificarea sau repoziionarea nucleosomilor ntr-o
regiune restrns din genom i accesul la ADN a proteinelor implicate n exprimarea genelor. Nu
presupune modificarea chimic a histonelor.
Acestea sunt procesele dependente de energie care slbesc contactul dintre histone i ADN.
nseamn dublarea volumului acestora, alunecarea nucleosomilor sau transferul pe alt molecul
ADN.
17

Cele 2 procese ( acetilarea i remodelarea histonelor) acioneaz de obicei mpreun i au ca

efect activarea genelor dintr-o regiune din genom.
Silenierea genomului .
Este represarea exprimrii genelor a cror produi nu sunt necesari. Se realizeaz prin
deacetilarea histonelor i metilarea ADN.
Deacetilarea histonelor.
Reprezint ndeprtarea gruprii aceli de la nivelul lizinei din histone. Se anihileaz efectul
enzimei cu activitatea HAT. n ndeprtarea acestei grupri este implicat o histin-deacetilaz
(HDAC) care acioneaz n complexe multiproteinice.
Legtura dintre HDAC i silenierea genomului a fost descoperit n 1996 cnd sa constatat c
enzima HDAC 1 de la mamifere este nrudit cu o protein de la drojdii cunoscut ca fiind
implicat n represarea genelor.
Metilarea ADN
Are rol de a represa exprimarea genelor i mult timp s-a considerat c e un proces distinct
fa de deacetilare, ulterior s-a dovedit c ntre cele 2 procese e o strns legtur.
Acest proces reprezint adugarea unei grupri metil la citozin cu formarea de 5-metilcitozinei. Metilarea ADN e rar la organismele inferioare, la vertebrate afecteaz 10% din citozine,
la plante ajunge la 30%. Patternul de metilare nu e randomic : -la animale este metilat citozina din
dinucleotidele C-G ( vorbim despre C-G de pe aceiai caten i nu de pe catene complementare);
- la plante n principal e metilat citozina din trinucleotidul
CNG;
Exist 2 tipuri de metilare : - de meninere
- de novo
a)
Metilarea de meninere urmeaz dup replicare i const n adugarea unei grupri metil la
catena nou sintetizat n poziie opus situsurilor de metilare de pe catena parental. Practic se
asigur pstrarea modelului de metilare la cele 2 catene fiice.

b)
Metilarea de novo adaug gruparea metil ntr-o nou poziie. Se modific patternul de
metilare dintr-o anume regiune din genom.
n metilarea sunt implicate enzime ce se numesc metil- transferaze ( DNMT) DN= ADN
MT= metil transferaze.
ADN metil-transferaza 1 (DNMT1) decoperit la mamifere este implicat n metilarea de
meninere dar i n cea de novo.
ADN metil-transferaza 3a i 3b sunt implicate n metilarea de novo.
18

Metilarea determinnd represia exprimrii genelor, s-a constatat c genele metilate sunt
inactive, n timp ce genele care se exprim sunt situate n zone nemetilate.
La om 40-50% dintre gene sunt situate n proximitatea insulelor C-G, aceste insule
corespunznd zonelor n care C nu este metilat. Aceste gene fac parte din categoria genelor house
keeping.
Genele tisular specifice se gsesc n regiunile nemetilate doar n esuturi n care se exprim.
Exist anumite corelaii ntre anumite maladii umane i metilare, exemplu sindromul ICF ( I
imunodeficien, C instabilitatea centromeric, F anomalii faciale). Acest sindrom este datorat
submetilrii unor regiuni genomice extinse. Aceast submetilare ste cauzat de muta ii la nivelul
genei care codific ADN metiltransferaza 3b (DNMT3b).
Anumite forme de cancer sunt asociate cu hipermetilarea la nivelul insulelor CG, ceea ce duce
la alterarea exprimrii pentru multiple gene. Mecanimul prin care metilarea influeneaz exprimarea
genelor a fost mult timp necunoscut.
Se tie c dinucleotidele CG sunt situsuri int pentru ataarea deacetilazelor histonice, acest lucru
modificnd structura cromatinei n zonele adiacente i practic duc la silenierea genei.

Implicarea metilrii n imprintingul genomului i inactivrii cromozomului X.

Imprintingul genomului
Este o trstur nu foarte comun dar important. Este situaia n care doar una dintre cele 2
alele ale unei gene se exprim, cealalt este represat prin metilare. ntotdeauna aceeai alel este
imprintat i deci inactiv. Pentru enele gene este imprintat alela de origine feminin sau pentru
altele cea de origine masculin.
n genomul uman exist aproximativ 300 de gene ce prezint fenomenul de imprinting.
Exemplu sindromul Angelman i sindromul Prader- Willi n care este afectat aceeai regiune
cromozomal.
Nu se cunoate rolul imprinting-ului , unii zic c are rol n dezvoltare, al ii zic c imprintingul
a aprut datorit conflictelor evolutive dintre mascul i femela la eucariote.
b)
Inactivarea unui cromozom X
Este o form special de imprinting ce const n inactivarea total a unui cromozom n
celulele de la femela de la mamifere. Rol - pentru a nu exista o supradezvoltare a femelei dintr-o
specie, astfel s nu mai existe posibilitatea mperecherii dintre femela i masculul aceleiai specii.
Inactivarea unui cromozom X ncepe din embriogenez i e controlat de un centru de
inactivare XIC ( inactivation center) situat pe cromzomul X. XIC iniiaz formarea
a)

19

heterocromatinei care se extinde apoi pe tot cromozomul X cu excep ia ctorva segmente scurte
care menin active cteva mici clustere de gene.
Mecanismul implic gena XIST care codific un ARN de mici dimensiuni care nvele te
cromozomul pe msur ce acesta condenseaz.
Inactivarea unui X implic nlocuirea histonei H2A cu o histon special macro-H2A1: - are
loc deacetilarea histonei 4
- i hipermetilarea ADN.
Cromzomul X inactiv se motenete de ctre toate celulele descendente, motenindu-se
clonal.
EVOLUIA GENOMURILOR
Genomurile nu sunt structuri fixe, ele sunt supuse frecvent mutaiilor i recombinrilor.
Cunoaterea evoluiei nu se poate realiza prin studiul mutaiilor recombinriilor, pentru n elegerea
evoluiei genomului trebuie combinate cunotinele despre mutaii i recombinri cu comparaii
ntre genomurile provenite de la organisme mei nrudite sau nu.
Originea genomului.
Aproximativ acum 4,6 miliarde de ani Terra a aprut, viaa a aprut acum 3,5-3,6 miliarde de
ani, vrsta celulelor este ns mai trzie.
Pn la apariia vieii, cu particularitile cunoscute astzi, s-au parcurs urmtoarele etape:
1. sinteza abiotic i acumularea de monomeri organici;
2. polimerizarea monomerilor organici cu formare de compui de tipul proteinelor i acizilor
nucleici.
3. agregarea compuilor rezultai prin polimerizare n protobioni izolai de mediul
nconjurtor;
4. reproducerea protobionilor, etapa corespunztoare originii ereditii.
Etapele 3 i 4 nu au avut loc neaprat n aceast ordine i nu pot fi separate ntre ele.
Iniial se consider c polinucleotidele i polipeptidele trebuie s funcioneze ntr-o anumit
ordine: proteinele pentru a cataliza reaciile biochimice, nu se pot replica; acizii nucleici codific
sinteza proteinelor, se pot replica dar nu au activitatea catalitic.
ns s-a descoperit ca ARN are activitate catalitic (enzimele care con in ARN se numesc
ribozime). Ribovirusurile sunt implicate n excizia intronilor din ARNm, adic n procese de slicing,
i n catalizarea sintezei tuturor tipurilor de ARN celular. Descoperirea propritii catalitice a ARNului a generat ipoteza conform creia primele sisteme biochimice erau centrate pe ARN ipoteza
primordialitii ARN = Lumea ARN.
Caracteristici ale Lumii ARN.
Moleculele de ARN se replicau se pare iniial lent iar replicarea era cu foarte multe erori, ca
urmare a aprut o a mare diversitate de molecule de ARN, printre aceste molecule putnd exista
unele cu caracteristici catalitice.
Aceste molecule de ARN cu proprieti catalitice au putut determina ulterior o autoreplicare
mai fidel a ARN-ului. Printr-un mecanism similar seleciei, moleculele de ARN cu proprit i
catalitice au nceput s predomine.
Genomurile ARN poart denumire de protogenomuri i sunt de fapt molecule de ARN care se
autoreplic i sunt capabile s catalizeze reacii biochimice simple. n categoria reaciilor
biochimice simple pot intra i reaciile biochimie specifice metabolismului energetic. n timp
reaciile biochimice simple ajung s fie compartimentalizate n interiorul unor membrane lipidice.
Acest lucru coincide cu apariia structurilor similare celulelor i cunoscute ca protobioni.
Lumea ADN
Exist mai multe etape n apariia genomurilor ADN.
1)
Prima etap (sau prima modificarea) major survenit n apariia genomului ADN este
dezvoltarea enzimelor proteinice. Enzimele proteinice au suplimentat iniial i apoi au nlocuit
20

majoritatea activitilor catalitice ale ribozomilor. Acest lucru s-a produs ntru ct proteinele au
structur mai flexibil dect perechile de baze din ARN, crescnd eficien a catalitic realizat de
protein.
Tranziia de la catalizarea realizat de ARN la cea realizat de proteine reprezint cea mai
mare ruptur n funcionarea protogenomurilor ARN.
2)
A doua etap protogenomurile devin molecule codificate a cror principal funcie este
determinarea sintezei proteinelor cu funcie catalitic. Nu se cunoate dac ribozimele au devenit
ele molecule codificatoare sau dac moleculele codificatoare au fost sintetizate de ribozime.
Abandonarea rolului catalitic i prelucrarea de ctre ADN a funciei codificatoare pare n
prezent nepotrivit ntr-u ct ARN este instabil.
3)
A treia etap transferul funciei codificatoare de la ARN la ADN. ADN-ul este o molecul
mai stabil. n primul rnd a avut loc o reducere ribonucleotidelor cu formare de
deoxiribonucleotide. Dup formarea deoxiribonuceotidelor
a avut loc polimerizarea
deoxiribonuceotidelor , practic sau obinut copii ADN ale protogenomului ARN. Aceste reacii de
polimerizare pot fi catalizate de ctre enzime asemntoare reverstranscriptazelor.
4)
O alt modificare uracilul a fost nlocui cu timina ceea ce a oferit o stabilitate i mai mare
moleculei de ADN i apariia ADN-ului dublu catenar ofer capacitate de reparare.
Primele genomuri ADN includeau numeroase molecule separate fiecare codificnd practic o
singur protein. Unirea mai multor gene ntr-un singu cromozom a mbunt it ulterior eficien a
distribuirii genelor n procesele de diviziune. Toate aceste etape n apariia i evolu ia ADN sunt
ipoteze.
Experimentele au sugerat c stadiile iniiale ale evoluiei biochimice au aprut n paralel de
mai multe ori n oceanele i atmosfera pmntului primitiv, acest lucru a condus la ipoteza conform
creia viaa are origini multiple, totui organismele actuale par s aib o singur origine. ntre
bacterii, arheobacterii i eucariote exist o foarte mare similaritate n privin a mecanismelor
biochimice de baz.
Cenancestor = strmoul tuturor organismelor actuale.
Exist posibilitatea ca originea multipl vieii s fie cea real. Viaa cu caracteristicile pe care
le cunoatem noi astzi poate s provin dint-un sistem biochimic care a devenit predominant i
care i-a dezvoltat capacitatea de sintez a proteinelor cu funcie enzimatic i care a adaptat
genomul ADN. Acest sistem a prezentat avantaje fa de sistemele biochimice protogenomului
ARN.
Achiziionarea de noi gene.
Se consider c primele celule asemntoare celulelor bacteriene actuale au aprut acum
aproxomativ 3,5milioane de ani. Primele celule aveau genom ADN dublu catenar, genom organizat
ntr-un numr redus de cromozomi probabil unul singur care coninea cteva gene.
Prima celul eucariot a aprut acum 1,4 miliarde de ani, fiind asemntoare algelor
unicelulare. Primele alge pluricelulare au aprut acum 900 milioane de ani, iar primele animale
pluricelulare acum 600-650 milioane de ani.
n evoluia genomului un aspect foarte important l reprezint creterea numrului de gene.
Ea a avut loc ntre 100 de gene la unele bacterii pn la 30-40 de mii de gene la vertebrate sau chiar
mai multe n jur de 50 de mii de gene la plante. Cre terea numrului de gene nu este gradat ci n
salturi, exist perioade n care numrul de gene a crescut foarte mult. Sunt cunscute 2 perioade de
expansiune puternic a numrului de gene.
Prima expansiune a avut loc n momentul de la procariote la eucariote. Majoritatea
eucariotelor au peste 10.000 de gene.
A doua expansiune este legat de apariia vertebratelor. Numrul de 30.000 de gene este de
fapt un numr mediu specific oricrui grup major de vertebrate.
Achiziia de noi gene poate aveea loc n cel puin trei moduri :
I) prima modalitate duplicarea unora sau tuturor genelor dintr-un genom;
II) a doua modalitate prin rearanjamente a genelor existente;
III) a treia modalitate prin achiziionarea de gene de la alte specii;
21

I)
Prima modalitate prin duplicarea unor gene sau a tuturor genelor este un proces de cretere a
numrului de gene. Putem ntlni situaii posibile:
- 1) duplicarea ntregului genom;
- 2) duplicarea unui singur cromozom;
- 3) duplicarea unei gene sau a unui grup de gene;

cel de-al doilea este posibil dar nu crete numrul de gene;

1)

Duplicarea ntregului genom

Este cel mai rapid mod de cretere a numrului de gene. Acest lucru apare datorit eruorilor
din meioz cnd rezult gamei diploizi. Din fuzionarea a 2 gamei diploizi rezult un tetraploid.
Acest mecanism este cunoscut de obicei ca autopoliploidie. Autopoliploidizarea este frecvent la
plante. Autopoliploizii sunt viabili pentru c fiecare cromozom are un omolog. Nu se pot
mperechea cu organismul iniial din care provin.
Autopoliploidia este un mecanism ce a dus la apariia de noi specii la plante. La animale
aceasta este mai putin comune.
Autopoliploidia nu determin direct expansiunea genelor pentru c tetraploidul iniial posed
extracopii ale acelorai gene i nu noi gene.
Organismele autopoliploide cu extracopii pentru aceiai gen au potenial pentru expansiunea
genelor. Extragenele sau extracopiile pot suferii mutaii fr a afecta viabilitatea organismului.
Majoritatea mutaiilor generaz pseudogene. Totui unele mutaii pot duce la apariia unor gene cu
frecvene noi utile pentru celule.
n prezent este dificil de evideniat existena duplicaiilor ntregului genom asta pentru c
unele gene au devenit pseudogene iar cellalte care au cptat funcii noi sunt vizibile, ns nu se
tie dac provin din duplicarea ntregului genom sau a unui gene. Singura modalitatea de
evideniere la speciile actuale a duplicaiei ntregului genom este identificarea setului de duplicate
de gene cu aceiai ordine a genelor n fiecare set.
3)

Duplicarea unei gene sau a unui grup de gene.

Acest mecanism este mecanismul principal de cretere a numrului de gene. n sprijinul
acestei afirmaii vin dovezile legate de existena familiilor de gene. Duplicaiile genelor pot aprea
prin mai multe mecanisme i anume crossing-over inegal, schimb inegal de material genetic la
organisme poliploide.
Rezultatul iniial al acestor mecanisme este apariia a 2 gene identice. Ulterior datorit
constrngerilor selective una dintre gene i pstreaz secvena nucleotidic iniial iar ce a de-a
dou nefiind supus aceleiai constrngeri selective poate s acumuleze mutaii. Majoritatea
mutaiile sunt duntoare ca urmare genele devin pseudogene i i pierd funcia.
Rar unele mutaii determin apariia de noi funcii utile organismului. Modelele asemntoare
de evoluie cu cel a familiei globinelor se ntlnesc i la alte gene, gene care codific tripsin i
chemotripsin, ce provin dintr-un ancestor comun la care au avut loc duplica ii acum 1,5 milioane
de ani.
II)

A doua modalitate prin rearanjamente a genelor existente.

Rearanjarea genelor existente este posibil ntruct proteinele sunt formate din domenii
structurale fiecare coninnd un segment de lan polipeptidic.
Exist dou consecine pentru proteinele rearanjamentelor genice: o prim consecin este
duplicarea anumitor domenii i a doua este amestecarea domeniilor structurale. Ambele procese
confer proteinelor no propriti funcionale.
Duplicarea domeniilor structurale reprezint de fapt rezultatul crossing-overului inegal.
n urma duplicrii domeniilor crete stabilitatea proteinelor iar domeniul structural duplicat se
poate modifica n timp dac i secvena de nucleotide care l codific sufer mutaii.

22

Duplicarea domeniilor au ca efect elongarea genei. n evoluia genomului genele nu numai c

au crescut numeric dar au devenit i mai lungi. Genele de la eucariote superioare sunt mai lungi
dect cele de la eucariotele inferioare.
A doua consecin este amestecarea domeniilor, apare atunci cnd segmentele codificatoare
aparinnd la dou sau mai multe gene diferite se unesc i formeaz o nou secven codificatoare ,
aceast secven codificatoare va determina sinteza unei proteine hibrid care poate conferi o nou
funcie celulei care-i aparine.
Exist i amestecarea domeniilor datorat amestecrii exonilor n procesul de splicing.
III) A treia modalitatea prin achiziionarea de gene de al alte specii.
S-a constatat c n mod frecvent la bacterii i arheobacterii se ntlnete un transfer
lateral/orizontal de gene. Exist cteva mecanisme prin care genele pot fi transferate ntre specii
diferite de procariote:
a)
Conjugarea prin aceasta plasmidele por trece de la o bacterie la alta. Ca urmare are loc
achiziionarea de noi gene. Totui importana conjugrilor n evolu ia genomurilor este discutabil
deoarece genele transportate prin conjugare nu devin n general membrii permaneni ai genomului
procariotelor.
b)
Transformarea preluarea direct de ADN din mediul nconjurtor.
Este valabil pentru
puine specii bacteriene, este posibil ca acest mecanism s aib o influen ceva mai mare asupra
genomurilor. Transformarea poate s aib loc ntre bacterii i arheobacterii i ntre bacterii i
eucariote.
La plante achiziionarea de gene de la alte specii poate avea loc prin alopoliploidizare.
Aceasta este o combinaie ntre duplicarea genomului i transferul de gene ntre specii.
La animale este mai greu de depit bariera dintre specii. Unele gene de la eucariote au
trsturi similare cu secvene de la bacterii i arheobacterii. Unii consider c aceste secven e au
aprut ca rezultat al unui transfer lateral de gene iar alii consider c acestea sunt secvene foarte
bine conservate. Majoritatea cercettorilor consider c la procariote, achiziionarea de gene de la
alte specii se bazeaz pe retrovirusuri i pe elemente mobile.
EVOLUIA RECENT A GENOMULUI UMAN

Cele mai apropiate rude dintre primate sunt cimpanzeii. Cel ami recent ancestor comun pentru
om i cimpanzeu a trit acum 5 , 7 milioane de ani. Deosebirile dintre genomul cimpanzeilor i a
lui Homo sapiens reprezint aproximativ 1,5%. Se pare c la nivelul secevenei codificatoare
diferenele sunt mai mici de 1,5% iar n regiunea necodificat n jur de 3%.
Pn n prezent au fost descoperite doar cteva diferene clare ntre genomurile de la om i
cimpanzeu :
genomul de la oom i cimpanzeu prezint cteva duplicaii ale unor gene, aceste duplicaii
avnd potenial de a evolua n gene specifice pentru om respectiv pentru cimpanzeu. Deoarece
timpul scurs de la momentul divergenei om-cimpanzeu este relativ scurt aceste gene nu au
acumulat suficiente mutaii pentru a fi considerate noi gene.
omul nu poate sintetiza o substan prezent pe suprafaa celulelor de la cimpanzeu acid
glicolil-neuraminic- lipsa acesteia de pe suprafaa celulelor umane permite anumitor patogeni s
ptrund n celule i de asemenea lipsa acestei substane este corelat cu anumite interac iuni
celulare la nivelul esutului nervos.
o alt diferene este legat de secvenele necodificatoare. Unele secvene de ADN
necodificatoare au evoluat semnificativ la om comparativ cu cimpanzeii. Cea mai mare diferen
este la ADN satelit la nivelul centromerului i n cazul secvenelor Alu.
o alt diferen genomurile de la om i cimpanzeu au suferit rearanjamente cromozomiale
cromozomul 2 de la om care la cimpanzeu este separat n 2 cromozomi.
Prin tehnici de bandare sau difereniat diferene la nivelul perechilor de cromozom V, VI, IX,
XII restul perechilor fiind foarte asemntoare sau identice.
23

Nu genomul ne face umani ci modul cum funcioneaz, diferenele dintre om i cimpanzeu

sunt de fapt corelate cu modul de exprimare ale unor gene implicate n special n interconexiunile
de la nivelul sistemului nervos.
Caracteristici ale genomului uman.
Genomul uman include genomul nuclear i mitocondrial.
Genomul nuclear conine: - 1,5% secvene codificatoare(exonii genelor secvene foarte bine
conservate);
- 3% secven e netraduse dar cu rol reglator i acestea sunt secven e
foarte bine conservate;
- 45% conine ADN moderat;
- 10% conine ADN nalt repetat;
- iar restul alte secvene neconservate cu rol neidentificat;
Genomul nuclear corespunde la 24 de molecule diferite de ADN i conin un numr de
aproximativ 30.000 de gene.
Genomul mitocondrial conine: - 93% secvene codificatoare;
- 5% secevene necodificatoare dar foarte bine conservate;
- 2% secvene neconservate;
Genomul uman are 3200 de megabaze , din care 3000 este eucromatina i 200 de kilobaze
este heterocromatina.
Genomul mitocondrial are 16,7 kilobaze i conine 37 de gene ( 12 codific ARNt, 2 gene
codific ARNr, 13 gene codifc proteine)
S-a constatat rata mutaiilor este de dou ori mai mare la brbai dect la femei, acest lucru
fiind corelat cu modul n care se desfoar spermatogeneza. Muta iile din timpul spermatogenezei
sunt mutaii punctiforme.
Recombinarea genetic la nivelul genomului uman are loc la nivelul telomerilor i bra elor
scurte, rata cea mai mare de recombinare se ntlnete la cromozomul X.
O alt caracteristic a genomului uman este legat de coninutul n citozin i guanin. S-a
constat c n genomul uman n apropierea genelor exist regiuni bogate n citozin i guanin n
care citozina este nemetilat aceste regiuni avnd n medie 1 kilobaz i sunt cunoscute sub
denumirea de insule CG.
Prezena elementelor mobile 89% din cromozomul X este reprezentat de elemente mobile,
pe cnd cromozomul Y conine cea mai mare bogie de elemente mobile de tip LINE, bog ia n
elemente LINE a cromozomului Y este o consecin a srciei n gene.
Este posibil ca 50 de gene din genom uman s devin din elemente mobile unele gene cu rol
imunologic.
n genomul uman au fost identificate segmente cromozomale duplicate iar deleiile de nivelul
genomului uman sunt asociate cu maladii genetice.

24