Determinarea atrazinei din lapte

Budeanu Anamaria M.I.C.C.P.A.A.S.P. Anul I grupa 1a

Determinarea atrazinei din lapte folosind metoda ELISA si validata prin HPLC

Atrazina este un erbicid folosit pentru combaterea buruienilor, in special in culturile de

porumb. Este unul dintre cele mai folosite erbicide din USA, unde 29-34 milioane Kg sunt aplicate pe an.

Atrazina persista in solsi in mediul acvatic datorita biorezistentei sale. Aceasta poate cauza potentiale efecte adverse, atat asupra organismelor fotosineptice, cat si asupra dezvoltarii vertebratelor si este considerata ca un distructor endocrin. Desi afostinterzisa utilizarea sa in UE din 2007, acest erbicid reprezinta inca o amenintare pentru mediu. Expunerea umana la atrazina are loc in principal prin consumul de produse alimentare si in special de lapte. Animalele producatoare de lapte acumuleaza reziduuri de pesticide din furaje contaminate, apa si aer. Din acest motiv monitorizarea calitatii laptelui este efectuata la nivel mondial. In UE, conform cadrului legislativ, concentratia pesticidelor nu trbuie sa depaseasca 50 g/Kg.

Materiale si metode

de trei ori in timpul mulsului seara si dimineata (294 de probe ). Mai multe detalii sunt prezentate in Tab.1.

Probele de lapte au fost colectate in Polonia de la 49 de vaci, de la trei ferme

Animalele au fost hranite in dua moduri diferite. Vacile di fermele 1 si 2 au foest tinute in grajdi iar cele din ferma 3 au fost pascute pe camp. Tab.2

Apratura

Analiza HPLC a fost efectuata folosind un cromatograf de lichide L-6200 si un detector cu dioda arrey L-4500.

Prepararea probelor de lapte

Probele au fost diluate 1:18 v/v pentru testul ELISA .

Pentru HPLC probele au fost pregatite dupa cum urmeaza: hexan-acetona 2:1 v/v a fost adaugata in ficare proba de lapte. Dupa 30 min. de agitare faza lichida a fost separata. Un supliment de 20 ml din laptele de proba a fost adaugat in faza organica si amestecul a fost agitat 30 min. Dupa separare faza organica a fost uscata prin evaporare si reziduul a fost diluat in 5 ml acetonitril si filtrat printr-un filtru de 0,45m. Extracutul a fost amestecat cu 25ml acid acetic: apa 1:99 v/v si aspirat pe coloana. Apoi a fost uscat sub vacuum 2min. si spalat cu 1ml acetonitril, 3ml apa, 1ml K2HPO4 0,1 M. Fiecare proba analizata de doua ori. Separaea cromatogarafica a fost efectuata cu solutie apa: metanol 50:50 v/v cu debitul de 10ml/min. S-a folosit un detectot cu dioda arrey. Masuratorile au fost efectuate la 224 nm.

Rezultate
Limita de detectie pentru atrazina di lapte a fost identificata folosin o curba de calibrare din Fig.1.

Corelarea rezultatelor obtinute prin ELISA si HPLC sunt prezentate in Tab.5

Concluzii

20 de probe au fost alese aleatoriu. 3 au fost detectate cu atrazina prin HPLC. Atrazina a fost detectata in alte trei probe cu ELISA dar care nu au dat rezultat pozitiv la HPLC, respectiv 0,33; 0,16; 0,09 ng/ml. In cele trei probe care au dat rezultate pozitive la ambele proceduri valorile au fost intre1-2% ceea ce arata sensibilatatea acestei proceduri.