Obiectivele: Noiune despre enzime, natura chimic i rolul biologic al enzimelor. Diferena dintre aciunea enzimelor i catalizatorilor nebiologici.

Dovezile naturii proteice a enzimelor. Structura enzimelor. Proenzimele (zimogenii). Noiune despre centrul activ i centrul alosteric al enzimelor. Izoenzimele i rolul lor. Cofactorii enzimelor. Coenzimele i ionii metalici. Funciile de coenzime a vitaminelor i microelementelor. Natura chimic (structura) vitaminelor B1, B2, B6, PP i rolul lor ca coenzime. Mecanismul de aciune al enzimelor. Centrul activ al enzimelor i rolul lui n formarea i transformarea complecilor intermediari dintre enzim i substrat. Rolul modificrilor conformaionale reciproce ale moleculei enzimei i substratului la favorizarea catalizei (reaciei). Nomenclatura (denumirea) i clasificarea enzimelor. Caracteristica general a claselor i subclaselor principale de enzime. Numrul de cod al enzimei.

Enzimele - cea mai imens imens i i specializat specializat clas clas de proteine, care regleaz regleaz i i coordoneaz coordoneaz decurgerea armonioas armonioas a reac reaciilor chimice. - reprezint reprezint catalizatori biologici, biologici, care mresc viteza reac reaciei chimice i i rezult rezult la sf sfrit nemodifica nemodificai cantitativ i i calitativ. calitativ. - ac acioneaz ioneaz strict ntr-o anumit anumit consecutivitate i cu o anumit anumit specificitate. - energia substan substanelor reagente trece dintr-o form form n alta cu o eficacitate mare. Se acumulez n ATP ce este utilizat utilizat n procesele vitale. Particularitile comune pentru E i catalizatori nebiologici. Ambii respec aceleai legi ale catalizei: 1. catalizeaz numai reaciile posibile din punct de vedere termodinamic; termodinamic; 2. nu modific direcia reaciilor; ; reaciilor 3. nu modific echilibrul reaciei dar conduc la instalarea mai rapid a strii de echilibru; 4. nu se consum n procesul reaciei, reaciei, deci se regsesc, din punct de vedere cantitativ i calitativ, ntr-o stare chimic neschimbat, putnd participa la un nou act catalitic. Enzimele au particulariti prin care se deosebesc de catal catalizatorii nebiologici 1.Viteza reaciei enzimatice crete de milioane de ori. Ex: Atomul de Fe posed posibiliti peroxidazice 1 mg de Fe n componena catalazei poate nlocui o ton de Fe metalic. 2. Enzimele posed o nalt specificitate de aciune. Deci fiecare E catalizeaz, un anumit tip de reacii sau transformarea unui anumit S. 3. E.catalizeaz reaciile far formarea produselor intermediare adic randamentul este de 100%. 4. Enzimele, reacioneaz n condiii bl blnde- parametri optimi de aciune a enzimei - soluii apoase diluate, pH valorii fiziologice, t anumita i presiune adecvat. 5. Activitatea E i de aici i viteza reaciilor sunt reglate. 6. E catalizeaz reaciile n ambele direcii 7. Viteza reaciei enzimatice este direct proporional cu cantitatea E 8. Exist o anumit dependen a vitezei reaciei enzimatice de concentraia S. Cu creterea concentraiei substratului are loc mrirea proporional a vitezei reaciei Ajung nd la o concentraie maxim mai sus de care viteza nu mai crete. Natura chimic Enzimele sint proteine i ile fizico, i posed posed toate propriet proprietile fizico-chimice, chimice, specifice acestor macromolecule (solubilitate (solubilitate, propriet propriet osmotice, osmotice, sarcin sarcin electric electric net, net, denaturare termic, termic, reac reacii chimice .a .a.) Activitatea lor e dependent de pstrarea structurii native a proteinei. Dovezile experimentale: 1. Sunt alctuite din AA 2. Prezena macromolecule. 3. n apa formeaz substane coloidale cu proprietdtile sale specifice 4. Prezintd electroliti amfoliti s. Sunt termolabili i anume: distrug distrugerea lan lanului polipeptidic prin fierbere n solu soluii acide sau bazice (hidroliza) sau denaturarea lor. 6. Enzimele, fiind proteine sunt supuse aciunii altor E care scindeaz proteinele Ex: Pepsina n mediu acid scindeaz amilaza. 7. Cel mai solid argument este c in condii de laborator din AA au fost sintetizate: ribonucleaza scindeaz acizii nucleici lizozima - ce distruge capsulele microorganismelor.

Enzimele Enzimele pot fi : Proteine simple sau conjugate. Cele simple sint alctuite numai din AA Cele conjugate sint asociate cu compui ce au mase moleculare mici, dializabili i termostabili cofactor Cind aceti compui organici sint strins legai n structura enzimei poart denumirea de grupari prostetice: cind, ins imbinarea lor este usor disociabil-poart denumirea de coenzime. Aceti biocatalizatori se numesc holoenzime, iar componena proteic - apoenzima de care depinde specificitatea. Cofactori pot ti: cationii unor metale, mai rar unii anioni, substanele asemanatoare cu nucleotidele, precum i vitaminele n forma lor activ activ. Coenzimele ndeplinesc diferite roluri : 1. stabilizeaz conformaia activ a moleculei 2. prezint veriga de legatur intre S i CA prin legturi coordinative 3. coenzimele pot indeplini actul de cataliz Ex: transportul electronilor. Rolul ionilor este legat de prezen prezena lor n componenta E. Ex: Cu-citocromoxidaza Substrat (S)- este substana asupra creia actioneaz E. P- produsul reactiei Clasificarea coenzimelor Co vitaminice Tiaminice Flavinice Nicotinamidice Piridoxinice Folice Cobamidice Biotinice lipoice Co nevitaminice (nucleotidice; metaloporfirinice,peptidice) Structura enzimelor Masa moleculara a E e de mii de ori mai mare dec dect masa molecular a substratului i deci E acioneaz nu cu toat molecula dar cu o parte, un anumit sector- acest loc de aciune cu S se numete CA CA - combinarea unical n spaiu i n timp a anumitor resturi de AA care asigur interaciunea cu S i transformarea ulterioar a acestuia Unele particulariti ale centrului activ (CA): Centrul activ este alctuit dintr-un "centru de legare" i un "centru catalitic". Adic n centrul activ unele grupri (sau resturi ale aminoacizilor) sint implicate n legarea substratului, altele asigur asigur cataliza propriuzis. - CA ocup o parte relativ mic din volumul enzimei i majoritatea restului de aminoacizi n molecula enzimei nu contacteaza cu substratul. - CA e o structura tridimensionala (nu e punct, linie, sau plan) - o structur compus la formarea careia particip grupe ce aparin diferitor resturi de aminoacizi, ce n secvena liniar se afl la deprtare - S relativ slab se leag cu E. -CA are forma de "adncitur" sau "cavitate" (ant, dispictur), unde nu-i acces la apa, cu excepia cnd apa este un reagent al reaciei. Fixarea specific e dependent de poziia bine determinat a atomilor n CA. S intra n CA, dac e asemntor dup forma lui. Centrul alosteric (Allo stereos - alt loc) i efectorii alosterici Multe enzime n afar de centrul activ posed i centrul alosteric sau centrul de reglare. Substanele care se combin cu centrul alosteric al enzimei i modific activitatea ei poart denumirea de efectori alosterici (inhibitori sau activatori). Sub aciunea efectorilor se modific configuraia moleculei enzimatice i simultan i conformaia CA ce la rndul su posed proprietatea de a reaciona cu substratul. Efectorii alosterici realizeaz prin urmare reglarea metabolismului. Ce e caracteristic pentru enzimele enzimele alosterice alosterice: au ca i toate enzimele centru catalitic, unde se fixeaz i se modific S, dar mai au un alt centru, centru, pentru fixare a metabolitului reglator, numit efector sau modulator.

moleculele E alosterice sint mai mari, mai complexe i sint oligomere pare; c)au cinetica lor - viteza reaciilor n dependen de concentraia substratului are forma sigmoldal, dar nu hiperbolica, cauzat cauzat de urm urmrile interac interaciunii ntre ntre protomeri ce leag leag S n mod cooperativ (exemplu mioglobina i hemoglobina).

Natura chimic (structura) vitaminei, PP i rolul ei ca coenzim Rolul: Particip n reaciile de oxido-reducere: Natura chimic (structura) vitaminei B1 i rolul ei ca coenzim Derivaii vitaminei B1(tiamiana)- TPP Rolul: Decarboxilarea oxidativ a piruvatului Decarboxilarea oxidativ a cetoglutaratului Reacii de transcetolare Natura chimic (structura) vitaminei B2 i rolul ei ca coenzim, Derivai ai vitaminei B2 (FMN sau FAD) Rolul: Particip n reaciile de oxido-reducere: - Dezaminarea AA (aminoacidoxidaza) - Degradarea aldehidelor (aldehidDH) - Degradarea purinelor (xantinoxidaza) - Ciclul Krebs (succinatDH) - Oxidarea AG (dihidrolipoilDH Natura chimic (structura) vitaminei B6 i rolul ei ca coenzim, Ionii de metale cofactori ai E E care n calitate de cofactori conin metale metaloenzime Metalele sunt fixate de apoenzim prin legturi electrostatice la care particip resturile de AA acizi (Asp, Glu) sau bazici (Arg, Lyz, His) Exemple: - citocromii, catalaza (Fe) - Citocromoxidaza (Cu) - Amilaza salivar (Cl) - alcoolDH (Zn) Mecanismul de aciune al enzimelor Pentru ca o reac nu fiecare molecul reacie i i aib aib loc e necesar ca moleculele de S i i E s contacteze ntre ntre ele. ele. ns ns molecul contact contactnd interac ioneaz n condi ii obi nuite. . Ex : H rtia este n n contact permanent cu 02 dar nu se aprinde decit dac, , nu o interac ioneaz condi obi nuite dac aprindem cu chibritul. chibritul. Pot interaciona numai acele molecule la care energia de activare energie exprimat n calorii necesar pentru ca toate moleculele unui mol de substan la o temperatur anumit sa ating starea de trunziie, ce corespunde apixului barieirei energetice. Pentru ca reacia s aib loc e necesar de trodus un exes de energie sau de micorat bariera energetic. E accelereaz, viteza reaciilor chimice (VRC) micornd barierul de activare i reacia decurge dup alt mecanism, ce se caracterizeaz printr-o energie de tranziie mult mai mic. Mecanismul de aciune al enzimelor. Procesul catalizei enzimatice poate fi divizat convenional n trei stadii: Difuzia S spre E i legarea cu CA al E (formarea complexului ES). Prima etap de scurt durat depinde de concentraia Si i de viteza lui de difuzie spre CA al E. Mecanismul interaciunii ntre S i E este explicat prin dou concepte. 2. Transformarea complexului primar enzima-substrat n unul sau cteva complexe activate, indicate n ecuaie prin ES* i ES**. Aceast etap este cea mai lent i depinde de energia de activare a reaciei chimice respective. La aceast etap are loc dereglarea legturilor substratului, ruperea lor sau formarea noilor legturi n urma interaciunii grupelor catalitice ale enzimei. 3. Desprirea produselor reaciei de centrul activ al enzimei i difuzia lor n mediul ambiant (complexul EP disociaz n E i P). Conceptul Conceptul coencidenei inductive coincidena forat (Kochland)

care presupure o flexibilitate (modificare (modificare conforma conformaional) ional) a CA ct i i o modificare (extindere (extindere sau comprimarea leg legturilor , eliberarea dipolilor de ap ap de ce se atinge repede starea de tranzi tranziie) ie) a S. Din punct de vedere termodinamic, cu E reduce la minimum gradele de termodinamic, aezarea cea mai potrivit potrivit a S n n raport libertate n n ce prive privete micarea S, i i mic micoreaz oreaz entropia, entropia, ceea ce favorizeaz favorizeaz atingerea uoar oar a st strii de tranzi tranziie. ie. n enzima liber CA este preformat (tensionat) ceea ce nseamn c el are o configuraie spaial uor diferit de cea necesar fixrii S. Substratul induce o modificare conformaional a CA, care favorizeaz fixarea S.

Proenzimele (zimogenii). Unele enzime (proteine) se sintetizeaz sintetizeaz n forma neactiv neactiv de precursor, care se activeaz activeaz n anumite condi condiii. Exemplu: 1) enzimele digestiei: pepsinogenul, himotripsinogenul, tripsinogenul, proelastaza, procarboxipeptidaza - scindeaza proteinele in stomac ~i duoden. 2) coagularea singelui e determinat determinat de cascada de reac reacii cu activitate proteolitic proteolitic; 3) hormonii proteici (insulina); 4) proteinele fibrilare (colagenul). Unul din mecanismele de activare a proenzimelor este proteoliza limitata. Proteoliza limitata - este scindarea ( (nl nlturarea) unui sector al catenei n n rezultat enzima se restructureaz restructureaz i se formeaz formeaz CA. Importanla biologic biologic a prezen prezenei formelor nea neactive . 1. Protejaz Protejaz de proteoliz proteoliz proteinele celulelor produc productoare de E. 2. Este o forma de rezerv rezerv a E, care rapid pot fi activate i intervi intervin n reac reacie. Izoenzimele i rolul lor.Izoenzmele. lor.Izoenzmele. Prezint forme moleculare de E_care apar ca consecin Prezint consecin de ordin genetic deosebindu-se doar prin structura primar primar i mai mult prin propriet ile fizico-chimice. Ele catalizeaz proprietile catalizeaz una i aceia aceiai reac reacie. Se deosebesc prin aceea c c pot modifica direc direcia i viteza transform transformrilor deoarece au afinitate diferit diferit fa fa de S. LDH care transform transform piruvatul n lactat. Izoenzimele Izoenzimele prezint prezint tetrameri de 2 tipuri H- heart inima i M musculus mu muchi. Raportul dintre aceste catene este diferit in fiecare izoenzima. La electroforeza se separa 5 izoenzime: HHHH; HHHM; HHMM; HMMM; MMMM; Rolul acestor E consta n aceia c c ele faciliteaz faciliteaz adaptarea metabolismului n diferite esuturi. Ex: in miocard predomin predomin HHHH aceasta ezoenzima este inhibata de c ctre piruvat deacee deaceea orienteaz orienteaz oxidarea piruvatului pe cale aeroba. Pe cind frac fracia M4 este activat activat de catre piruvat i orienteaz orienteaz transformarea piruvatului pe cale anaerob anaerob spre lactat.

Clasificarea actual a enzimelor. Toate enzimele se mpart n ase clase, clasele n subclase, subclasele n subsubclase, iar aici E i are numrul su de ordin. Clasele, subclasele, sub-subclasele i enzimele individuale se noteaz prin cifre desprite de puncte. Ex: LDH - 1.1.1.27 Clasa reprezint tipul de reacie, catalizat de enzime Subclasa precizeaz aciunea E, deoarece indic natura gruprii chimice a S, atacat de E Subsubclasa precizeaz natura legturii S atacat sau natura acceptorului care particip la reacii Denumirea E denumirea S +tipul reaciei catalizate +aza Nomenclatura (denumirea) Sunt cunoscute mai mult de 2500 enzime fiecare E i onarea ii are denumirea de la denumirea S n latin latin cu adii adiionarea termina terminaiei aza. Amiloid -amilaza, ureaza. S-au p pstrat i denumir denumirile vechi tradi tradiionale pepsina, tripsina. Este utilizat pe larg denumirea sistematic Denumirea S+ tipul reaciei (malat DH;piruvat carboxilaza ) Proprietile generale ale enzimelor Obiectivele: 1. Proprietile generale ale enzimelor (termolabilitatea, specificitatea), aciunea pH-ului asupra activitii enzimatice. 2. Activarea i inhibarea enzimelor: a) mecanismele de activare (proteoliza parial, activarea alosteric, autostructurarea cuaternar, fosforilarea i defosforilarea, reactivarea). b) mecanismele de inhibiie (specific i nespecific, reversibil i ireversibil, alosteric i competitiv).

3. Organizarea enzimelor n celul (ansamblurile enzimatice, compartimentalizarea). Reglarea activitii enzimatice n celul importana principiului de retroinhibitie. 4. Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni (enzimodiagnosticul). 5. Metodele de obinere i purificare ale enzimelor. Cromatografia de afinitate. 6. Utilizarea enzimelor n practica medical. ntrebuinarea enzimelor imobilizate n medicin. 7. Unitile de activitate ale enzimelor. 8. Metodele de determinare a activitii enzimelor. Termolabilitatea (-t) Temperatura influeneaz pronunat activitatea enzimei. La t joase E sunt puin active. Dac lum punctil de plecare 0 grade s-a constatat ca majorarea t cu 10 grade dubleaza activitatea. Aa continu p pn la 40-50 grade. Majorarea de mai departe duce la micorarea activitii. La 100 grade toate E organismului sunt inactive. Unele E a microorganismelor termofile sunt active la T 80 grade. Creterea vitezei reaciei odat cu creterea t este nterpretat prin prisma "energiei de activare". Pentru fiecare enzim se poate stabili o t optim la care viteza ajunge valoarea maxima, mai departe viteza scade din cauza distruciei enzimei, denaturarea proteinei. Specificitatea Deci fiecare E catalizeaz un anumit tip de reac reacii sau transformarea unui anumit S. 1) Specificitatea de reacie: E-catalizeaz un anumit tip de reacie ce st la baza clasificrii enzimelor: o hidroliza, o reacie redox, formarea unei legturi, etc. 2) Enzimele cu o anumit specificitate de reac reacie poate avea specificitate de substrat relativ sau absolut: a. specificitate relativa - asigura transformarea unui grup de substante inrudite chimic i se intlnete n diferite ipostaze: ipostaze: - transforma un numar mare de substrate (proteazele): chimotripsina - legatura peptidica, formata de COOH a Phe, Tyr, Trp; tripsina - de COOH ai Lyz si Arg. - transform mai puine substrate: alcooldehidrogenaza - dehidrogenaza un grup de alcooli monohidroxilici, recunoscind gruparea OH (specificitatea de grup) - lipazele digestive specific recunosc pozitia legaturii esterice intre glicerina i acizi grai: b. specificitate absoluta. E recunoate un singur substrat Anhidraza carbonica, Ureaza. 3) Stereospecificitatea de substrat i de reacie. 0 enzima poate ataca numai un izomer D sau L.. Majoritatea biomoleculelor poseda un atom de C asimetric i fiind chirali pot exista sub forma celor 2 enantiomeri. Ex: Amilaza scindeaz legturile Alfa 1-4 glucozidice din amidon sau glicogen i nu influenteaz asupra legturilor beta din celuloza. Ac i enzimatice Aciunea pH asupra activiti activitii Fiecare enzim are un pH optim la care ii manifest activitatea maximal. In CA al E se afl grupri ionizabile, acide sau bazice, acestea interacioneaz direct cu ionii H+ si OH-, rezultatul fiind creterea sau scderea gradului lor de disociere, acionnd ca adevrai inhibitori ai enzimelor (amilaza n sucul gastric). Ionii H+ si OH- au un efect denaturant asupra enzimelor - rup legturile, ce determin structura teriar. Majoritatea enzimelor celulare au pH-ul optim n jurul pHului fiziologic de 7,4 cu excepii ca hidrolazele acide lizozomale, pentru care este n jur de 5 sau monoaminooxidaza din membrana mitocondriala externa, circa 10. La enzimele digestive pH-lui optim este cel al sediului lor de actiune: 1,5 2 al pepsinei, 7 al amilazei pancreatice, 8 al tripsinei, etc. Deci mrind sau micorind pH-ul mediului, se poate regla activitatea catalitica a enzimelor. Dependena activitii enzimatice de variaia pH-ului este deseori descris de o curb n forma de clopot. Mecanismele de activare a E Sunt : 1. nespecifice: temperatura , iradierea 2. specifice - Se activeaz la majorarea concentraiei S cnd este insuficient - La majorarea cantitii E (crete numrul numrul de molecule de produs, n-tr-o unitate de timp) La introducerea coenzimelor cnd sunt insuficiente Introducerea ionilor metalelor Fe, Cu Modificarea chimica sau covalent a E. proteoliza limitata (pepsinogen - pepsin in HCI) Activarea prin efectori alosterici Autoasamblarea cuaternara . Aici se mai refer i re reactivarea dar noi ne vom opri la mecanismele de inhibiie.

Reglarea covalent (fosforilare-defosforilare) Activitatea unor E se modific prin fosforilare. Fosforilarea se face prin transferul unui rest fosfat de la ATP pe gruprile hidroxil ale unor resturi de Ser, Tre; Tyr din componena lor. Reaciile de fosforilare snt catalizate de kinaze specifice. Este un proces reversibil E-OH + ATP -------------- E-O-P +ADP Defosforilarea are loc sub aciunea fosfotazei specifice E-OP +H2O -------------- E-OH +H2PO3

unele enzime snt active n forma fosforilat Ex: glicogen fosforilaza, altele n forma defosforilat Ex:glicogen sintaza.

Prot Proteoliz limitat Proteoliza limitata - este scindarea ( (nl nlturarea) unui sector al catenei n n rezultat enzima se restructureaz restructureaz i se formeaz CA. formeaz H+ Pepsinogen ------pepsin -42AA Autostructurarea cuaternar Este caracteristic E ce posed structur cuaternar Fiecare protomer n parte nu posed activitate enzimatic La asamblarea lor se modific conformaia fiecrui protomer i corespunztor se modific i conformaia CA, devenind astfel favorabil pentru fixarea i transformarea S

Inhibi Inhibiia activitii enzimelor. Deosebim: : Deosebim inhibiie specific inhibiie nespecific (T, pH, agenisii denaturrii ) Inhibiiia st la baza aciiunii substanielor medicamentoase, agenilor toxici.

Inhibiia poate fi reversibil i ireversibil. La inhibiiia ireversibil inhibitorul covalent se fixeaz de enzim sau se leag att de puternic nct disociaia are loc foarte incet. Exemple: Diizopropilfluorfosfatul (toxina neuroparalitica) se fixeaz de OH-serinei n CA a acetilholinesterazei (scindeaz acetilcolina) cu formarea enzimei neactive. n rezultat se menine efectul acetilcolinei n permanen ce duce la paralicii musculare i moarte.. La o inhibiiie reversibil - inhibitori se fixeaza slab, necovalent de E

Retroinhibiie Sistemele polienzimatice Fiecare celul a organismului conine setul su specific de enzime. Unele se gsesc n toate celulele, altele sunt prezente doar n anumite celule sau anumite compartimente celulare. Funcia fiecrei enzime, nu este izolat, ci strins legat de funcia altor enzime. Astiel din enzime aparte se formeaza sisteme polienzimatice sau conveiere. Func tia sistemelor polienzimatice depinde de particularitatile de organizare a lor in celule. Functia Se cunosc urmatoarele tipuri de organizare a sistemelor polienzimatice: - funcional, - structural-funcional i - mixt. Tipurile ipurile de organizare a sistemelor polienzimatice: Organizarea funcional - enzimele sunt asociate n sisteme polienzimatice, care ndeplinesc o anumit func funcie. Produsul reaciei prirmei enzime a lanului servete drept substrat pentru enzima urmtoare etc. Ex.de organizare funcional - enzimele glicolizei, unde toate E participante se gsesc n stare solubil; Fiecare reacie este catalizat de enzime aparte. Drept verig de legtura aici servesc metaboliii. Organizarea structural-funcional consta n faptul ca enzimele formeaz sisteme structurale cu o anumit funcie. Ex.- complexul polienzimatic piruvatdehidrogenazic, constituit din cteva enzime, care particip la oxidarea acidului piruvic, sau sintetaza acizilor grai constituit din apte enzime legate structural, care n ansamblu ndeplinesc funcia de sinteza a acizilor grasi.

Afar de complexele multienzimatice e posibila i o alt varianta de organizare structural-funcional. Astfel enzimele se pot aranja n lan, fixindu-se de membrana biologic. Ex.enzimele lanului respirator mitocondrial, care particip la transferul de electroni i protoni i la generarea de energie. Tipul mixt de organizare a sistemelor polienzimatice reprezint o mbinare a ambelor tipuri de organizare, adic o parte din sistemul polienzimatic are organizare structurala, iar cealalt cealalt parte - organizare funcional. Ex.- ciclul Krebs, unde o parte din enzime sunt asociate n complex structural (complexul 2oxoglutaratdehidrogenazic), ar alt parte se leag funcional prin metaboliii de legtur.

Deosebirea privind componena enzimatic a organelor i esuturilor. Enzimele organospecifice. Modificarea activitii enzimatice n diferite afeciuni (enzimodiagnosticul). Enzimele indicatorii sunt localizate intracelular: n citoplasm (lactatdehidrogenaza, aldolaza), n mitocondrii glutamatdehidrogenaza), n lizosomi (-glucoronidaza, fosfataza alcalin). Acestea enzime n norm n plasm se gsesc n concentr concentraii foarte mici. La afeciunile celulare activitatea acestor enzime n plasm este brusc mrit. Unitile de activitate ale enzimelor. Unitatea Internaional (U.I.) cantitatea de E care catalizeaz transformarea 1 mol de S ntr-un minut n condiii standard Katal (kat) cantitatea de E care asigur transformarea unui mol de S ntr-o secund n condiii standard (1U.I.=16,67 nkat) Terapia cu enzime Enzimele sunt ageni terapeutici unici ce produc efecte importante i specifice. Motivele care au limitat folosirea larg a enzimelor ca medicaie sunt legate de natura proteic: - distribuie redus n organism dependena de dimensiuni, sarcina i de fenomenele de glicozilare (prin glicozilare proteinele sunt recunoscute de receptori i fixate n anumite locuri - posibilitate mic de dirijare extrahepatic, ficatul avnd tendin de a cptta i reine proteinele strine; - inactivarea lor sub aciunea proteazelor digestive n cazul administrarii orale, iar proteazele tisulare le scurteaza de asemeni actiunea; - potentialul lor antigenic, anticorpii formati pot genera reacii de hipersensibilizare adesea grave i pot inactiva enzima. Tehnici propuse pentru optimizarea proprietilor terapeutice ale enzimelor. - prin N-acilare a fost crescut semiviata asparaginazei, folosit n leucemie - S-au incercat de asemeni metode de obinere a enzimelor imobilizate. De ex. prin reticularea enzimei, ce conduce la agregate insolubile, prin adsorbie pe polimeri sintetici ori prin ataare covalent, sau prin incorporare ntr-un gel in cursul polimerizarii. Aceste preparate catiga rezistena la enzimele proteolitice i sunt mai putin imunoactive dar pot fi alterate proprietaisile farmacocinetice. Asemenea avantaje au dovedit conjugatii cu polietilenglicol (PEG) ai arginazei, ai glutaminasparaginazei sau ribonucleaza supusa reticularii, enzime cu efect antitumoral. Un succes n terapia defectelor genetice a fost imobilizarea enzimelor din ciclul ureogenetic pe un suport de fibrina. S-au propus noi forme farmaceutice prin incapsularea enzimelor in lipozomi - microsfere cu membrana bistratificata lipido proteica, in hematii umane, in fantome eritrocitare sau in alti transportori celulari. Noile forme obinute prezint un potenial de ntire tisular. De ex. in cazul unor boli genetice cauzate de deficitul unor enzime lizozomale se impune o terape de substitutie, enzima trebuind tintita direct in lizozomi.