UNIVERSITATEA DE TIINE AGRICOLE I MEDICIN VETERINAR "ION IONESCU DE LA BRAD" IAI

Gheorghe rdea

Lucian Creu

GENETICA

2001
CUPRINS

CAPITOLUL 1 BAZELE CELULARE ALE EREDITII I VARIABILITII (CITOGENETICA).... 1 1.1. Structura celulei procariote.... 1 1.2. Structura celulei eucariote. 3 1.3. Organizarea genomului la eucariote...... 11 1.3.1. Morfologia cromozomilor....... 11 1.3.2. Structura molecular a cromozomului. 18 1.3.3. Tipuri particulare de cromozomi. 19 1.4. Organizarea genomului la procariote (bacterii i virusuri). 22 1.5. Reproducerea celulei... 23 1.5.1. Mitoza.. 23 1.5.2. Meioza..27 CAPITOLUL 2 BAZELE MOLECULARE ALE EREDIT|}II.... 2.1. Dovezi privind rolul genetic al ADN.. 34 2.1.1. Transformarea la procariote. 35 2.1.2. Transfec]ia la procariote.. 36 2.1.3. Transformarea la eucariote.. 37 2.1.4. Materialul genetic al ribovirusurilor 38 2.2. Acizii nucleici [i roul lor genetic 38 2.2.1. Structura molecular\ a acidului dezoxiribonucleic (ADN). 38 2.2.2. Acidul ribonucleic (ARN)....41 2.2.3. Denaturarea [i renaturarea ADN.. 44 2.2.4. Replica]ia ADN.... 44 2.3. Codul genetic.. 46 2.4. Biosinteza proteinelor. 49 2.4.1. Transcrip]ia informa]iei genetice. 49 2.4.2. Transla]ia informa]iei genetice 50 2.5. Recombinarea genetic\ la bacterii.. 53 CAPITOLUL 3 EREDITATEA MENDELIAN 57 3.1. Terminologia folosit n genetica mendelian 57 3.2. Legile mendeliene ale ereditii.. 59 3.2.1. Legea segregrii caracterelor (legea puritii gameilor). 59 3.2.2. Legea segregrii independente a perechilor de caractere 62 3.3. ncruciarea analizatoare. 64 CAPITOLUL 4 TEORIA CROMOZOMIC A EREDITII. 66 4.1. Gene i cromozomi. 66 4.2. Plasarea liniar a genelor pe cromozomi 68 4.3. Transmiterea nlnuit a genelor (linkage) 68 4.4. Schimbul reciproc de gene ntre cromozomii omologi (crossing-over). 70 4.5. Hrile cromozomice... 71 4.6. Hrile citologice. 72 CAPITOLUL 5 DETERMINISMUL GENETIC AL SEXULUI....74 5.1. Generaliti.. 74 5.2. Determinismul cromozomic al sexelor... 75 5.3. Sexul n cazul nmulirii partenogenetice... 78 34

5.4. Determinismul genetic al sexului la plante. 78 5.5. Ereditatea caracterelor legate de sex... 80 CAPITOLUL 6 EREDITATEA EXTRANUCLEAR... 84 6.1. Metode de evideniere a ereditii extranucleare.... 84 6.1.1. Fenomenul merogoniei.... 84 6.1.2. Ereditatea extranuclear n hibridarea reciproc.. 86 6.1.3. Testul heterocarion... 86 6.2. Manifestarea ereditii extranucleare.. 87 6.2.1. Ereditatea prin plastide 87 6.2.2. Ereditatea mitocondrial.. 88 6.2.3. Androsterilitatea citoplasmatic i nucleo-plasmatic. 89 CAPITOLUL 7 MUTAII GENETICE... 92 7.1. Clasificarea mutaiilor. 92 7.2. Mutaiile spontane... 93 7.3. Mutaiile artificiale.. 94 7.3.1. Radiaiile mutagene. 95 7.3.2. Temperatura. 96 7.3.3. Substanele chimice mutagene. 96 7.3.4. Factorii mutageni biologici.. 97 7.4. Mecanismul molecular al mutaiilor... 98 BIBLIOGRAFIE SELECTIV.100

Prefa
nceputul mileniului trei se poate caracteriza printr-o explozie de nouti n toate domeniile tiinifice, inclusiv n cel al biologiei. Genetica, tiina ereditii i variabilitii lumii vii, nu putea s nu ofere la rndul ei, prin problemele ce le ridic omenirea, o serie impresionant de realizri n domeniul vegetal, animal i nu n ultimul rnd, n domeniul uman. Succesiunea problemelor prezentate n lucrare a avut n vedere programele analitice actuale ale cursului de Genetic vegetal predat studenilor Facultilor de Agricultur i Horticultur. Am fost tentai s abordm principalele aspecte de genetic ntr-o form aproximativ cronologic, dar analiznd noiunile de genetic predate la liceu, am considerat c este mai util ca studenii s ia contact mai nti cu bazele celulare i moleculare ale ereditii i variabilitii, iar apoi s revenim la aspectele geneticii clasice. Elaborarea unui manual universitar de genetic vegetal este o problem dificil, deoarece ntr-un volum limitat, am cutat s analizm, succint, un numr ct mai mare de aspecte ale ereditii. Lucrarea se adreseaz tuturor celor care se intereseaz de tainele acestei tiine, dar n mod deosebit studenilor care urmeaz forma de nvmnt la distan, pentru care am prezentat materialul ntr-un mod mai concis.

CAPITOLUL 1 BAZELE CELULARE ALE EREDITII I VARIABILITII (CITOGENETICA)

Motto: "Precum istoria Pmntului este nscris n straturile sale geologice, tot astfel istoria unui organism este nscris n cromozomii si" H. Kihara

1.1. STRUCTURA CELULEI PROCARIOTE

Procariotele sunt organisme cu o structur simpl, ce cuprind vieuitoare acelulare, din care fac parte viroizii, virusurile i micoplasmele i vieuitoare celulare, bacteriile i algele albastre-verzi (cianoficeele). Materialul genetic este reprezentat de o molecul de ADN sau ARN, necomplexat cu proteine histonice sau nehistonice. Cromozomul procariotelor se gsete n contact direct cu citoplasma, deoarece compartimentarea celular i specializarea membranelor este abia schiat. Viroizii sunt ageni infecioi reprezentai de o molecul scurt de ARN, lipsii de nveli proteic. Primii viroizi au fost identificai ca ageni ce produc boala cartofilor fuziformi sau stelarea cartofilor, ulterior identificndu-se n cazul mai multor boli grave. Majoritatea viroizilor se gsesc n nucleul celulei gazd, replicarea ARN viroidal depinznd strict de complexul enzimatic al celulei gazd. Virusurile sunt particule infecioase acelulare, submicroscopice, care produc bolile cunoscute sub denumirea de viroze. Virusurile atac toate organismele, de la bacterii (bacteriofagi), pn la celulele animale i vegetale. Virusurile sunt lipsite de complexul enzimatic necesar sintezei de substane energetice i reproducerii. De aceea, virusurile folosesc mecanismele i organitele celulei gazd pentru reproducere, fiind considerate organisme parazite obligatoriu sau, altfel spus, parazite la nivel genetic. Celula gazd produce i furnizeaz precursorii necesari replicrii moleculei de acid nucleic viral i a proteinelor virale, care apoi se asambleaz, rezultnd o nou particul viral. Particulele virale, de obicei, lizeaz (distrug) membrana celulei gazd, putnd produce noi infecii. Structura particulei virale a fost descoperit de A.D. Hershey i M. Chase, n anul 1952. Particula viral este alctuit dintr-un nveli proteic, denumit capsid, format dintr-o singur protein sau din mai multe proteine stratificate, iar la virusurile mai mari se adaug lipide i glucide.

Capsida poate avea diverse forme, n funcie de natura subunitilor proteice, care au fost denumite capsomere. La unele virusuri (R17, F2, virusul herpesului), capsida poate fi nconjurat de un nveli proteic extern (anvelop extern) cu ajutorul cruia fagul ader pe membrana celulei gazd. n interiorul capsidei se gsete materialul genetic reprezentat de o molecul de ADN (dezoxiribovirusuri) sau o molecul de ARN (ribovirusuri), de mrimi diferite, specifice fiecrui tip de virus. La unii bacteriofagi (virusuri ale bacteriilor) capsida se continu cu o coad cu simetrie elicoidal, la ale crei extremiti sunt prezente mai multe filamente codale, ce asigur contactul cu celula parazitat (figura 1.1.).

Fig. 1.1. Structura celulei la procariote:

A-dezoxiribovirus; B-micoplasm; C-bacterie; D-cianoficee (mz-mezozom, rb-ribozom, p-peretele celular, pl-plasmalema, r-produs de rezerv, t-tilacoid) (dup Roland i Szllsi)

Micoplasmele sunt organisme extrem de simple, care nu au perete celular fiind delimitate de plasmalem, n interiorul creia se gsesc cteva sute de ribozomi i un cromozom reprezentat de o molecul de ADN (figura 1.1.). Dei au o structur foarte simpl, sunt capabile s-i sintetizeze n mod independent proteinele i ATP necesare metabolismului. Micoplasmele produc o serie de boli att la animale (pleuropneumonia taurinelor), ct i la plante (stolburul solanaceelor, cloroza asterului, nanismul porumbului etc.). Celula bacterian. Este delimitat la exterior de un perete celular rigid, alctuit din glicoproteine complexe (de tipul mureinelor), care, n funcie de structura chimic, confer acesteia caracteristicile de imunitate i patogenitate. Plasmalema, de natur lipo-proteic este situat pe faa intern a peretelui celular, delimitnd citoplasma (figura 1.1.). Citoplasma nu este omogen din punct de vedere structural, nglobnd o serie de vezicule membranoase, microfibrile, ribozomi, glucide de rezerv etc. Zona central a citoplasmei cuprinde o mas dens de microfibrile, reprezentnd molecula de ADN, ce constituie materialul genetic. ADN este bicatenar, circular, necomplexat cu histone, cu o lungime de aproape 1 mm. Aceast molecul de ADN constituie

cromozomul sau genoforul bacterian. n jurul su citoplasma este mai dens, rezultnd aa numitul nucleoid, care este lipsit de membran i nucleol. Cercetarea electronomicroscopic a bacteriilor a evideniat o serie de invaginri tubulare sau lamelare ale plasmalemei, denumite mezozomi. Mezozomii sunt accesorii ale genoforilor implicai n activitatea respiratorie, replicarea semiconservativ a ADN i diviziunea celulei (F. Jacob, 1966). Cianoficeele (algele albastre-verzi) sunt cele mai vechi organisme cunoscute, unicelulare, de form filamentoas (Oscillatoria), globuloas (Spirulina), care au o organizare destul de apropiat celei bacteriene. La cianoficee, invaginaiile plasmalemice au forme aplatizate, grupate n pachete de vezicule membranoase, denumite tilacoide, ce conin pigmeni fotosintetizatori (figura 1.1.).

1.2. STRUCTURA CELULEI EUCARIOTE

Celula eucariot, vegetal sau animal, delimitat de membrana celular este alctuit din protoplasm, care conine dou componente fundamentale: citoplasma i nucleul. Citoplasma are o compartimentare strict, coninnd organite citoplasmatice lipsite de membran (microtubuli, centrioli, microfilamente, ribozomi), cu membran simpl (reticul endoplasmic, aparatul Golgi, lizozomi, peroxizomi, glioxizomi, lomazomi) i cu membran dubl sau anvelop (nucleu, plastide, mitocondrii) (Toma C. i colab., 1995). Membrana celular. Constituie nveliul extern al celulei i are rol de efector al controlului schimburilor de substane dintre coninutul celulei i mediul ambiant. Ea este reprezentat de stratul bimolecular fosfolipidic, care poart pe faa sa extern un strat proteic bogat n hidrai de carbon, iar pe faa sa intern un singur lan proteic. La microscopul electronic apare format din dou straturi, fiecare de cte 20 grosime, ntre care se afl un spaiu clar de 35 . La animale, celula are la exterior doar membrana plasmatic. La plante, celulele sunt nvelite n plus, la exterior, de un perete celular impregnat cu celuloz, lignin, sruri sau alte substane. Aceasta prezint o mare importan economic, cum ar fi de exemplu n cazul plantelor textile, de la care se obin fibre pentru industria textil. Citoplasma. Reprezint partea celulei situat ntre membrana plasmatic i membrana nuclear. Este alctuit dintr-o matrice citoplasmatic i organite citoplasmatice. Matricea const dintr-o plasm coloidal, reprezentnd un sistem heterogen format din lanuri macromoleculare i agregate moleculare, precum i enzime, substane metabolice de rezerv etc.

Organitele citoplasmatice, caracteristice principial pentru toate celulele sunt: reticulul endoplasmic, mitocondriile, ribozomii, corpusculii Golgi (prezente n toate celulele), cloroplastele (la speciile vegetale fototrofe), centriolii (n celulele animale, la unele alge i ciuperci), lizozomii (n celulele animale i, probabil, ale unor plante). Reticulul endoplasmic. La microscopul electronic n citoplasm a fost descoperit un sistem de cisterne, vezicule i canalicule, denumite de K. Porter (1953) reticul endoplasmic. Canaliculele au un diametru de 500 , iar cisternele pn la 1500 . Starea n care la plante i animale ribozomii sunt ataai de reticulul endoplasmic s-a numit ergastoplasm. Mitocondriile. Sunt organite citoplasmatice care se gsesc n mod obinuit n toate celulele. Ele au fost studiate la animale mai mult dect la plante, dei, n general, au aceeai structur i funcie. Mitocondriile variaz ca mrime, de la 0,2 (limita de rezoluie a microscopului obinuit) pn la civa . Mitocondriile au diferite forme, dup celulele din care fac parte (bastonae, filiforme, sferice etc.). n celula vie ele apar mobile, fiind antrenate de micrile citoplasmice. Numrul acestor organite variaz de la un esut la altul; astfel, se gsesc n numr mare n celulele ce aparin unor esuturi cu activitate intens (celulele meristematice, miofibrile, tuburile renale etc.). Mitocondriile sunt nconjurate de o membran dubl, asemntoare aceleia de la exteriorul celulei. Membrana intern formeaz numeroase invaginri (criste mitocondriale), care mresc foarte mult suprafaa activ a mitocondriilor. Aceste organite constituie centrul unor trepte ale procesului de respiraie aerob. Ele posed enzimele necesare cu rol n oxidarea grsimilor i de fosforilare. Studiul complex al mitocondriilor a relevat existena unui ADN mitocondrial i a unui aparat enzimatic propriu, ce permite sinteza unor proteine caracteristice. ADN din mitocondrii este bicatenar, circular, asemntor ADN bacterian. Pe aceast baz s-a tras concluzia c mitocondriile (ca i plastidele) deriv din organisme procariote, care au invadat celulele eucariotelor i s-au subordonat nucleului acestora. Aparatul genetic mitocondrial explic localizarea unor nsuiri la nivelul citoplasmic, deoarece astzi se tie precis c mitocondriile au proprietatea de a crete, de a se divide i posed continuitate celular i genetic. Genele mitocondriale se transmit pe cale citoplasmatic, pe linie matern. Mutaiile care apar la nivelul mitocondriilor afecteaz n primul rnd funciile de respiraie. Aceste mutaii pot s apar cu o frecven relativ mare i se transmit pe linie matern la descendeni. Ribozomii. Sunt corpusculi submicroscopici cu dimensiuni cuprinse ntre 50-200 , care se gsesc n citoplasm, cloroplaste, mitocondrii. Ribozomii conin acizi ribonucleici ribozomali i proteine ribozomale n proporie de aproximativ 1:1. Din cauza coninutului ridicat n acid ribonucleic ribozomal (ARNr), G. E. Palade

(1953), descoperitorul acestor particule, le-a denumit ribozomi. Ei se gsesc liberi n citoplasm sau fixai de reticulul endoplasmic. n celul, ribozomii ndeplinesc un rol deosebit de important, prin participarea lor la sinteza proteinelor. Ei se gsesc n cantitate mare n esuturile cu diviziuni celulare intense, n care sinteza proteic se realizeaz, de asemenea, intens. n sinteza proteic, ribozomii devin activi prin asocierea lor cu moleculele de acid ribonucleic mesager (ARNm) mpreun cu care formeaz poliribozomi. Ribozomii liberi particip la sinteza proteinelor necesare proceselor de difereniere celular, a unor proteine cu funcii specifice i de formare a organitelor citoplasmatice, n timp ce ribozomii ataai reticulului endoplasmic particip la sinteza proteinelor destinate secreiei celulare i depozitrii proteinelor sintetizate la nivelul celulei. n ceea ce privete originea ribozomilor, cercetrile au artat c la nivelul nucleolului se produce sinteza componentelor de baz ale acestora (ARNr i proteine ribozomale), care la nivelul citoplasmei se asambleaz n proporie egal. Ribozomii au mrimi diferite i se pot clasifica dup constanta de sedimentare (S) la ultracentrifugare n: categoria de 70 S (140-180 ) prezeni la bacterii i alge verzi i de 80 S (260300 ) prezeni n celulele eucariotelor (plante superioare, criptogame i animale). Cloroplastele. Sunt organite prezente n citoplasma celulelor vegetale. Ele conin clorofil ce imprim culoarea verde esutului n care se gsesc, iar prin implicarea lor n procesul de fotosintez dein rolul de productori primari. Prezena cloroplastelor n celule nu este permanent, ele se formeaz, ca i mitocondriile, cu care au trsturi comune, din formaiuni submicroscopice, cu dimensiuni de aproximativ 500 , numite proplastide. Studiile de microscopie electronic au evideniat 3 componente structurale ale cloroplastului: membrana dubl la exterior, stroma sau substana fundamental a cloroplastului i grana, un ansamblu de structuri bogate n clorofil. Membrana cloroplastului este dubl, ntre cea extern i cea intern fiind un spaiu liber. Membrana extern este neted, iar cea intern prezint o serie de cute duble, care mresc suprafaa funcional a acesteia. Stroma este alctuit din substana fundamental i o serie de incluziuni, cum ar fi: granule de amidon, nucleotide grupate n fibrile de ADN, ribozomi, plastoglobule osmiofile. Substana fundamental este constituit din proteine, n mare parte enzime ce particip la replicarea ADN cloroplastic, sinteza ARNm (transcripie) i a moleculelor specifice fotosintezei. Pe lng proteine, substana fundamental conine un numr mare de molecule organice, din grupa zaharurilor, aminoacizilor, nucleotidelor, dar i ioni de Mg2+ i PO3-.

Grana este un sistem membranar complex alctuit din particule verzi denumite granum, bogate n clorofil, de diferite tipuri, implicat n fotosintez. Prin constana i continuitatea celular, cloroplastul ndeplinete caracteristicile de baz ale materialului genetic. ADN cloroplastic este o molecul bicatenar, circular, cu o circumferin de 40-50 , ataat de membrana cloroplastului asemntor cromozomului bacterian. Pe lng ADN, ce stocheaz informaia genetic, cloroplastul posed ntregul complex macromolecular necesar replicaiei, transcripiei i translaiei acesteia. O caracteristic important a plastidelor, i deci i a cloroplastelor, este aceea c, de regul, se transmit pe cale citoplasmatic, cel mai frecvent pe linie matern. Aparatul Golgi. A fost descoperit de Camillo Golgi (1844-1926), n anul 1898, mai nti n celulele nervoase animale. Ulterior, s-a evideniat n toate celulele animale i vegetale. Aparatul Golgi este bine dezvoltat n toate celulele active, reducndu-i extinderea n celulele aflate n repaus i dispare n celulele btrne. Este alctuit din uniti morfologice i structurale denumite dictiozomi, complexate cu vezicule golgiene. Dictiozomii sunt formai din elemente de form tubular sau vezicular, aplatizate, curbate i dilatate la capete, delimitate de o membran lipoproteic. Veziculele golgiene, delimitate de membrane lipoproteice rezult din dictiozomi, printr-un proces de nmugurire lateral a tuburilor sau veziculelor. Complexul Golgi este localizat n apropierea nucleului, avnd un rol deosebit de important n transformarea unor substane sintetizate la nivelul reticulului endoplasmic i orientarea acestora spre plasmalem, pentru a fi utilizate n alte sinteze sau pentru a fi eliminate n exteriorul celulei. n afara rolului deinut de aparatul Golgi n procesele de secreie, la plante, veziculele golgiene particip la formarea fragmoplastului i a lamelei mediane n citokinez i chiar n regenerarea plasmalemei. Dup Fain-Maurel, 1992, aparatul Golgi, prin interaciunile sale cu reticulul endoplasmic granular (ergastoplasma), unde are loc sinteza i descompunerea proteinelor de secreie i biogeneza membranelor celulare, constituie "placa turnant a metabolismului celular i a traficului membranar" (Toma, C. i colab., 1997). Centrozomul. Este o formaie citoplasmic ce se gsete n apropierea nucleului i care apare la microscop sub forma unei zone clare, luminoase, omogene, cu un centru granular opac, alctuit din doi centrioli. El este prezent n toate celulele animalelor i la plantele inferioare (lipsete la angiosperme). n jurul centrozomului se observ filamente radiare ce formeaz aa-numitul aster, precum i tubulii fusului de diviziune. Acestea apar numai n timpul diviziunii mitotice. Centrozomul joac rol important n diviziunea celular. El se divide n doi centrozomi-fii, numii sfere directrice. n jurul fiecruia se formeaz cte un aster. Sferele directrice se deplaseaz apoi spre cei doi poli ai celulei. Datorit autoreplicrii, n fiecare centrozom se gsesc doi centrioli.

Acetia sunt nzestrai, n general, cu continuitate genetic. Centriolii se separ n structuri duplex la nceputul fiecrei noi diviziuni (profaza urmtoare). n citoplasm se afl factorii ereditari responsabili pentru ereditatea extranuclear plasmagenele. O schem general a structurii celulei, alctuit dup imaginile obinute la microscopul electronic este prezentat n figura 1.2.

Fig. 1.2. Schema unei celule alctuit dup datele obinute cu microscopul electronic (dup Brachet, 1961)

NUCLEUL Datorit componentelor sale principale, cromozomii, nucleului i s-a acordat o deosebit atenie n cercetrile de genetic. De peste 100 de ani de cnd se studiaz acest principal element al celulei s-au acumulat multe date n legtur cu structura lui fizic, chimic i funcional.

La organismele eucariote, n majoritatea cazurilor, nucleul are o form ovoid i ocup poriunea central a celulei. La celulele cu metabolism intens, nucleul ia contururi foarte neregulate. De exemplu, nucleii din celulele endospermului leguminoaselor au form spiralat. Forme neregulate iau i nucleii unor esuturi bolnave, a cror activitate metabolic se mrete (celula canceroas). Nucleul ocup, de obicei, 10-20% din volumul celulei i conine 15-25% din azotul acesteia. Excepie fac spermatozoizii i anterozoizii, la care citoplasma ocup un volum foarte mic. Nucleul conine 14% ADN, 12% ARN, 22,5% proteine bazice i 51,5% proteine stabile. Din proteinele bazice fac parte protaminele i histonele, bogate n aminoacizii lizin, histidin i, mai ales, arginin. ADN se gsete n structurile cromatice, n timp ce ARN mai ales n nucleoli. n nucleu se mai gsesc enzime, lipide, ioni de Ca, Mg, Cu etc. Nucleul este delimitat la exterior de o membran nuclear i conine n interior nucleoplasma, cromatina i nucleolii. Aa cum s-a precizat, la procariote, reprezentate de organisme unicelulare, nucleoidul este difuz i fr membran. Nucleoidul nu este complexat cu proteine bazice de tipul histonelor. Acesta se divide prin amitoz. Membrana nuclear. Datele actuale cu privire la membrana nucleului au fost obinute cu ajutorul microscopului electronic. Ea apare format din 2 membrane cu o grosime de 75 , separate de un spaiu de 100-300 . Structura membranei nucleare este foarte asemntoare cu aceea a membranei mitocondriilor i are o compoziie lipoproteic. Spre deosebire de aceasta, ea este prevzut cu un sistem de pori ce permite schimbul de substane ntre nucleu i citoplasm i chiar direct cu exteriorul celulei. Cromatina. Este un complex biochimic constituit din fibre nucleoproteice (proteine i ADN) n proporie de aproximativ 96%, mai multe tipuri de holoproteine i fosfolipide. Unitile structurale ale cromatinei sunt nucleosomii, alctuii din molecule de ADN i 4 fracii de proteine histonice (H2A, H2B, H3 i H4). La fiecare nucleosom se asociaz fracia histonic H1, care joac un rol important n spiralizarea fibrelor de cromatin. Cariolimfa. n interiorul nucleului se gsete un lichid n stare de sol numit cariolimf, nucleoplasm sau suc nuclear. El conine proteine, lipoizi, enzime, acizi nucleici, o serie de cationi (Na, Ca, Mg) .a. Se cunosc puine date n legtur cu structura filamentului de cromatin, deoarece este prea fin pentru puterea de mrire a microscopului obinuit i prea mare pentru aceea a microscopului electronic.

Nucleolul. Nucleolii sunt globuli refringeni, vizibili la microscopul obinuit sau cu contrast de faz, n interfaz. Numrul lor variaz n funcie de specie, fiind ns constant n celulele aceleiai specii. Dimensiunile nucleolilor depind de mrimea nucleului, durata interfazei, funcia celulelor .a. Nucleolii se formeaz n zona constriciei secundare a cromozomilor, asociai cu o anumit regiune denumit organizator nucleolar. n timpul diviziunii mitotice, nucleolii sufer un ciclu de transformri inverse acelora prin care trec cromozomii. Ei sunt vizibili n interfaz, dispar n profaz i reapar la sfritul anafazei. Din punct de vedere chimic nucleolii cuprind dou grupe de substane (proteine i acid ribonucleic), care formeaz un complex ribonucleoproteic. Pe lng aceste substane, nucleolul mai conine i o cantitate mare de fosfolipide i alte lipide. El sintetizeaz o mare cantitate de ARN care migreaz n citoplasm.

1.3. ORGANIZAREA GENOMULUI LA EUCARIOTE

Cromozomii sunt structuri permanente n nucleul celulei i constituie materialul genetic de baz. n cromozomi sunt localizate genele. La microscopul fotonic cromozomii devin vizibili numai n timpul diviziunii celulare. Cu ajutorul unor tehnici perfecionate de investigaie s-a stabilit c ei sunt prezeni tot timpul n celul, dar sufer unele schimbri n diferitele etape care se succed n viaa celulei. Numrul i structura lor genetic rmn ns constante de-a lungul generaiilor.

1.3.1. Morfologia cromozomilor

Aspectul cromozomilor poate fi bine studiat n cursul diviziunii celulare mitotice, n metafaz, cnd se coloreaz foarte intens. Ei sunt constituii din perechi identice, dar diferii ca mrime i form de la pereche la pereche. La speciile dioice exist o pereche de cromozomi, care difer morfologic de la un sex la altul, denumii heterozomi sau cromozomi ai sexului, avnd un rol special n determinarea sexului. Celelalte perechi de cromozomi, care alctuiesc majoritatea cromozomilor poart numele de autozomi. Segmentul cromozomic situat terminal fa de constricia secundar a cptat denumirea de satelit. Satelitul servete la identificarea cromozomilor cu organizator nucleolar. Deci, numrul nucleolilor dintr-un nucleu este egal cu numrul cromozomilor cu satelit. Fiecare cromozom este format din dou cromatide unite printr-o formaie cu diametrul mai mic numit centromer. Deoarece n zona centromerului cromozomul are diametrul mai mic, acestei zone i s-a dat denumirea de constricie primar (spre deosebire de constricia secundar din regiunea organizatorului nucleolar). Centromerul are un rol important n timpul diviziunii celulare deoarece servete la ataarea cromozomilor de fibrele fusului nuclear, este considerat motorul neurochimic ce determin deplasarea cromozomilor n mixoplasma celulei n diviziune, iar n meioz determin sinapsa cromozomilor omologi i constituie locul ce marcheaz separarea cromatidelor la sfritul metafazei i nceputul anafazei. Poziia centromerului n cromozom determin formarea a dou brae egale sau inegale, prin urmare existena mai multor tipuri morfologice de cromozomi: - metacentrici, centromerul este plasat la jumtatea distanei dintre cele dou capete, braele fiind egale; - submetacentrici, centromerul este localizat submedian, braele fiind inegale; - acrocentrici, centromerul este localizat subterminal, braele fiind accentuat inegale (fig. 1.3.).

Cromozomii telocentrici, cu centromerul situat strict terminal, nefiind stabili, s-a renunat la aceast grup morfologic (Swanson i colab., 1981, citai de Crlan, M.,1996).

Fig. 1.3. Tipuri de cromozomi: a-metacentric; b-submetacentric; c-acrocentric; d-cromozomi de Lilium; P-constricie primar; S-constricie secundar, zona organizatorului nucleolar

Extremitile cromatidelor sunt delimitate de formaiuni denumite telomere. Telomerele reprezint zone n care cromatina este puternic condensat, asigurnd stabilitatea i individualitatea cromozomilor pe parcursul diviziunii celulare. Telomerele mpiedic fuzionarea cromozomilor capla-cap n metafaz i anafaz. Forma cromozomilor. Este caracteristic fiecrei specii, dar poate varia i n funcie de specializarea celulei n esut, de starea fiziologic a celulei i de influena diferiilor factori externi. O celul somatic are patru perechi de cromozomi i anume: dou perechi de forma literei V, o pereche de form sferic i o pereche heteromorf: la masculi, alctuit dintr-un cromozom sub form de bastona i unul sub form de crlig, n timp ce la femel ambii cromozomi ai perechii sunt identici. Aceti cromozomi au rol n determinarea sexului (fig. 1.4.). n celulele somatice cromozomii sunt perechi. Cromozomii unei perechi au aceeai form, mrime i aceleai gene alele i se numesc cromozomi omologi.

n fiecare pereche de cromozomi omologi, unul este de provenien matern, iar cellalt, patern, caracteristic determinat de faptul c celula-ou (zigotul), rezultat al fecundrii, cumuleaz setul haploid de cromozomi ai mamei i ai tatlui.

Fig. 1.4. Cromozomii somatici la Drosophila melanogaster ()

Mrimea cromozomilor. Variaz n funcie de specie i, ntr-o msur foarte mic, de unele condiii de mediu. Ca lungime, pot atinge valori cuprinse ntre 1-25 , iar ca grosime valori de 0,1-2 . S-ar prea, n general, c mrimea lor este proporional cu mrimea celulei i invers proporional cu numrul lor. De asemenea, cercetrile arat c lungimea cromozomului este, n general, proporional cu numrul de gene pe care le conine. Anumii factori de mediu pot influena mrimea cromozomilor. De exemplu, scderea temperaturii face ca n celulele vegetale n plin diviziune s apar cromozomi mai contractai, mai scuri. Prezena alcaloidului colchicin, n timpul diviziunii celulare, scurteaz, de asemenea, cromozomii. Numrul de cromozomi. Este relativ constant pentru indivizii ce alctuiesc o specie de plante sau animale. Acest numr variaz n limite mari la diferite specii, de la doi ci ntlnim n celulele somatice la Ascaris megalocephala, pn la cteva sute (Amoeba proteus). n celulele somatice numrul lor este dublu (diploid) i se noteaz cu 2n, iar n celulele sexuale este redus la jumtate (haploid) i se noteaz cu n. n tabelul 1.1. se indic la cteva specii de plante i animale numrul n i 2n de cromozomi. Simbolul x indic numrul haploid de cromozomi ai speciilor diploide strmoeti denumit numr de baz, numr monoploid sau genom. Dei numrul cromozomilor reprezint un caracter de specie, se pot ntlni specii cu acelai numr de cromozomi, cu toate c aparin unor grupe ndeprtate din punct de vedere sistematic. Acest numr nu este legat deci de poziia sistematic a speciei n lanul filogenetic. Tabelul 1.1. Numrul de cromozomi la diferite specii de plante i animale Plante Triticum monococcum Triticum durum Triticum aestivum Zea mays Oryza sativa Secale cereale Hordeum sativum Medicago sativa Trifolium pratense Trifolium repens Vicia faba Pisum sativum Solanum tuberosum n 99 2n 99 Animale Drosophila melanogaster Culex pipiens Bombyx mori Plasmodium malariae Ascaris megalocephala Cyprinus carpio Musca domestica Blatta orientalis Apis melifera Rana esculenta Gallus domestica Columba liva Lepus cuniculus n 99 2n 99

Helianthus annuus Beta vulgaris Cannabis sativa Vitis vinifera Pyrus communis Malus baccata Neurospora crassa Escherichia coli

Mus musculus Cannis familiaris Capra hircus Equus caballus Sus scrofa Ovis aries Bos taurus Homo sapiens sapiens

Constana numrului de cromozomi este totui relativ. Starea organismului i condiiile externe pot produce modificri asupra numrului de cromozomi n celul. Numrul de cromozomi poate varia n funcie de esutul n care se afl celula. Astfel, n ficatul animalelor numrul garniturilor de cromozomi este un multiplu al numrului de cromozomi din celulele sexuale ale aceluiai organism (4x, 8x etc.). La speciile de plante angiosperme, nucleii din celulele endospermului, datorit fenomenului dublei fecundri, conin trei garnituri de cromozomi, fiind simbolizat 3n.

Numrul, forma i mrimea cromozomilor n metafaz, din celulele somatice ale unui organism, sunt indicate prin noiunea de cariotip. n figura 1.5. sunt redate cariotipurile la diferite specii.

Fig. 1.5. Cariotipul la diferite specii de plante

Structura cromozomului. Cromozomii sunt formai din dou uniti alipite n lungul lor numite cromatide. Cu ajutorul microscopului electronic s-a descoperit c aceste uniti se compun, la rndul lor, din cte dou subuniti numite cromoneme. n fiecare cromozom, dou cromoneme alctuiesc cte o cromatid. n preajma diviziunii celulare, cromonemele se spiralizeaz i se scurteaz. Spiralizarea este inegal, aa c exist zone cu spire mai dense i mai puin dense. La microscopul optic aceste poriuni apar ca o succesiune de granule, nirate ca mrgelele ntr-un irag, denumite cromomere. S-a crezut mult timp c aceste cromomere ar reprezenta uniti funcionale - genele. n realitate, aceste ngrori vizibile sunt poriuni de spirale mai dense, ce dau aspectul de granule de culoare mai nchis. Cromomerele includ un numr variabil de gene. O structur important care joac un rol n evoluia cromozomului este heterocromatina. n legtur cu particularitile ei s-au adunat multe date, unele contradictorii, aa nct, pn n prezent, nu s-a cristalizat o concepie unitar asupra acestei formaiuni. Se tie ns precis c n toate stadiile ciclului mitotic unele sectoare ale cromozomului se coloreaz intens. Acestea s-au denumit sectoare heterocromatice, spre deosebire de altele eucromatice, care se coloreaz mai slab. Sectoarele cu heterocromatin se gsesc, n general, n apropierea centromerului. Ele ns, ca localizare, sufer variaii determinate de influena diferiilor factori externi. Se consider c regiunile eucromatice conin, n general, marea majoritate a genelor, n timp ce regiunile heterocromatice sunt practic lipsite de gene. O schem general privind structura microscopic a cromozomului este prezentat n figura 1.6. Compoziia chimic a cromozomilor. Analiza chimic a cromozomilor a relevat faptul c ei sunt constituii din macromolecule de ADN i ARN, proteine cu nsuiri bazice (histone), proteine acide (nehistone), alturi de alte substane n cantiti mai mici: lipide, magneziu, calciu, enzime. Complexul ADN-histone constituie substana structural fundamental a cromozomului, n timp ce ARN, care se formeaz la nivelul cromozomului, este transferat n citoplasm, avnd rol n procesul de biosintez a proteinelor.

Fig. 1.6. Morfologia i structura unui cromozom

Dintre toi componenii cromozomilor, ADN se gsete n cantitate constant. n celulele somatice cantitatea lui este dubl fa de cantitatea din celulele sexuale ale aceluiai organism, variind ns de la specie la specie. ARN se gsete n cromozomi n cantiti foarte variabile, de la 3 la 35%. La fel de variabil este i cantitatea de proteine nehistonice, aceasta fiind sub dependena activitii genelor. n tabelul 1.2. este prezentat compoziia chimic a cromozomilor. Tabelul 1.2 Compoziia chimic a cromozomilor (%) Sursa Embrion de pasre Mugure de mazre Cotiledon de mazre Ficat de obolan Timus de viel Blastul de arici de mare Larv de arici de mare ADN 39,0 40,0 43,5 47,0 40,2 39,0 33,4 Histone 40,0 52,0 34,5 37,0 46,0 41,0 29,0 Nehistone 11,0 4,0 16,0 15,0 13,0 19,0 35,0 ARN 10,0 4,0 6,0 1,0 0,3 1,0 2,6 ADN activ n transcripie 12,0 6,0 32,0 20,0 15,0 10,0 20,0

1.3.2. Structura molecular a cromozomului

S-au acumulat multe date n legtur cu compoziia chimic a cromozomilor. Nu acelai lucru se poate afirma despre structura molecular a cromozomilor de la organismele eucariote, a configuraiei structurale a elementelor ce alctuiesc aceast compoziie chimic. Din aceast cauz, s-a ncercat a se crea diferite modele de structur, care s in seama de prezena unui numr mare de molecule de ADN, de dispunerea unui numr mare de gene pe

cromozomi, de posibilitatea dublrii unei singure cromatide, de stabilirea structurii cromozomice i de replicaia ADN. Pn n prezent, s-au conturat mai multe ipoteze privind modelul de structur molecular al cromozomului: ipoteza polifibrilar, ipoteza structurii monofibrilare, ipoteza fibrei cutate, modelul nucleosomului .a. Dintre toate aceste modele, cel mai acceptat pn la ora actual este cel al nucleosomului. Modelul nucleosomului a fost conceput pe baza cercetrilor de biochimie, de microscopie optic, electronic i de difracie n raze X. n alctuirea cromozomului de tip eucariot ADN este n cantitate de 13-15%, ARN 1213%, iar proteinele de 68-72%. Aceste procente difer de la specie la specie. La aceeai specie ns, mrirea cantitii de ADN se poate realiza prin multiplicarea numrului de garnituri cromozomale, adugarea unui anumit numr de cromozomi, duplicaia genelor i mrirea cantitii de ADN repetitiv. ADN din cromozomii de tip eucariot este format din gene structurale (secvene unice de nucleotide) i poriuni care nu dein informaie genetic i au rolul de a ocupa spaiul dintre gene. A doua categorie sunt secvenele de nucleotide intermediar repetitive i care se gsesc n mai multe copii. A treia categorie sunt secvenele de nucleotide nalt repetitive ce se repet ntr-un numr mare de copii i sunt localizate n heterocromatin. Dintre aceste categorii variaia cantitii de ADN din genom este datorat secvenelor de nucleotide repetitive, care n cea mai mare msur sunt nefuncionale. n afar de aceste categorii de secvene mai exist formaiunile denumite palindroame. Ele sunt formate din secvene inversate dnd natere la nite bucle. Privit la microscopul electronic, cromatina apare format din granule cu diametrul de 70100 , legate ntre ele cu o fibr de 20 . O granul este de fapt un nucleosom, care cuprinde un cilindru turtit de natur histonic n jurul cruia se nfoar un filament de ADN format din 100140 nucleotide. n nucleu, cromatina formeaz un filament de 100 , alctuit din aranjarea liniar a nucleosomilor i un filament cu diametrul de 200-300 format din rsucirea filamentului subire (fig. 1.7.).

Fig. 1.7. Modelul nucleosomului

1.3.3. Tipuri particulare de cromozomi

n afara tipului obinuit al cromozomilor din celulele somatice (autozomi i heterozomi), au fost descoperii n anumite celule i alte tipuri de cromozomi: cromozomi uriai, cromozomi tip "perie de lamp" i cromozomi accesorii sau de tip "B". Cromozomii uriai au fost pui n eviden de Balbiani (1881) n glandele salivare ale larvelor de Chironomus. Ulterior, au fost evideniai i la Drosophila melanogaster, n glandele salivare, n celulele intestinului i a tuburilor lui Malpighi. Aceti cromozomi s-au format prin multiplicarea cromatidelor de peste 1000 de ori, care au rmas ns alipite, neseparate (sinaps mitotic) i despiralizate, fr ca nucleul s se divid. Din cauza numrului mare de cromatide, aceti cromozomi se mai numesc i politeni. Structura cromozomilor politeni este aceeai ca a celorlali cromozomi somatici, deosebindu-se de acetia prin lungimea i grosimea lor mult mai mari. Dimensiunile lor foarte mari permit cercetarea unor detalii de structur. Configuraia cromozomilor uriai este alta comparativ cu aceea a cromozomilor somatici obinuii. De exemplu, la Drosophila melanogaster formeaz cinci brae lungi i unul scurt, unite ntr-un singur punct, numit cromocentru. Cromozomii sexului sunt n prelungire formnd un singur bra, cromozomii perechii a doua i a treia formeaz alte patru brae, iar cromozomii perechii a patra un singur bra, foarte scurt (figura 1.8.). De-a lungul lor, aceste brae formeaz benzi (discuri) ntunecoase, care alterneaz cu alte benzi, luminoase. Unii autori au presupus c aceste discuri ("discurile lui Balbiani") ar reprezenta locul genelor. Sunt aproximativ 6000 asemenea discuri ntunecoase. n anumite locuri, structura dens a lor se deslneaz formnd funde n jurul cromozomului, crora li s-a dat denumirea de "puff"-uri sau "bulbi" (figura 1.8.). Aici are loc sinteza ARN, sugernd activitatea intens a genelor ce se gsesc n aceste segmente.

Fig. 1.8. Cromozomii uriai din glandele salivare ale larvelor de Drosophila melanogaster i formarea "puff"-urilor: 1-cromozomii sexului; 2-cromozomii II; 3-cromozomii III; 4-cromozomii IV; a-un disc; b-formarea inelului lui Balbiani; c-un "puff"; d-ipoteza lui Beerman despre structura unui "puff".

Cromozomii lampbrush (perie de lamp) au fost pui n eviden n ovocitele vertebratelor n timpul profazei meiozei. Ating lungimea de peste 1000 i sunt considerai cei mai lungi cromozomi care se cunosc pn n prezent. Spre deosebire de cromozomii uriai, ei sunt foarte subiri, ajungnd uneori la limita vizibilitii microscopice. Cromozomii perie de lamp posed un ax central, n lungul cruia sunt nirate cromomerele, din care ies lateral perechi de bucle filiforme, dnd aspectul firelor de pr ale unei perii de lamp (fig. 1.9.). Aceste bucle se presupune c sunt spirale ale cromonemei, active din punct de vedere genetic. Ele cresc n profaza I i descresc ctre metafaza I a meiozei. Nu se cunosc cum au aprut aceti cromozomi. Noua configuraie corespunde unei activiti intense, care contribuie la formarea de rezerve viteline n citoplasma ovocitelor.

Fig. 1.9. Cromozomii tip "perie de lamp" (lampbrush) a-schema unui bivalent; b-seciune printr-un cromozom; c-structura unei bucle i a cromonemelor

Cromozomii accesorii se gsesc n plus fa de cromozomii autozomi i ai sexului. Spre deosebire de cromozomii obinuii, notai cu "A", cromozomii accesorii se mai numesc i "cromozomii B". Numrul lor difer de la un organism la altul i de la un esut la altul i nu sunt omologi nici ntre ei i nici cu cromozomii obinuii pe lng care se gsesc. Sunt heterocromatici, mici i ineri din punct de vedere genetic. n meioz i mitoz nu se distribuie n mod egal n celulele n care se formeaz. Nu se cunoate nc originea lor, dar dup toate probabilitile s-au format din poriunile mijlocii ale cromozomilor normali, ale cror extremiti s-au ataat altor cromozomi. Nici rolul lor nu este cunoscut. Ei pot lipsi fr a perturba viaa organismelor. Mai curnd s-ar putea considera pgubitoare existena lor. Astfel, la secara tetraploid, atunci cnd cromozomii "B" sunt prezeni, scade fertilitatea polenului i viabilitatea plantelor. Cromozomii suplimentari au fost pui n eviden la insecte, psri, porumb, secar .a.

1.4. ORGANIZAREA GENOMULUI LA PROCARIOTE (BACTERII I VIRUSURI)

Spre deosebire de eucariote, la procariote cromozomul are o organizare mai simpl, nu ns n ceea ce privete i structura lui molecular, care este aceeai la toate organismele. Aceasta a favorizat cercetrile de genetic, virusurile i bacteriile constituind materialul de baz pentru genetica molecular. Virusurile, care sunt cele mai simple forme de via, conin ca material genetic un singur cromozom, n care genele sunt dispuse liniar. Cu unele excepii, numrul de gene este destul de mic. La bacteriofagul T4, de exemplu, sunt prezente cca 200 de gene, n timp ce la fagul 2 numrul lor este de 4-5. La virusuri genomul viral este destul de variat fiind alctuit fie din ADN, fie din ARN (fig. 1.10.). Aceti acizi pot fi monocatenari sau bicatenari. Volumul moleculei este aproximativ egal cu volumul particulei virale, ceea ce denot c ea este foarte strns torsionat. Virusurile se reproduc pe seama celulei gazd i din aceast cauz manifest o strict specificitate.

Fig. 1.10. Cromozomul (ADN) fagului

Lungimea moleculei de acid nucleic poate fi foarte diferit. La fagul T2 masa este de 1,3 x 10 dal, iar lungimea 56 (2 x 105 perechi de nucleotide). La fagul masa este de 3,2 x 107 dal, iar lungimea 17 (47000 nucleotide). La bacterii, cromozomul este format din ADN. El este circular i nu este separat de citoplasm printr-o membran, nct relaiile lui cu citoplasma sunt directe. Cromozomul bacterian reprezint cea mai mare molecul cu rol genetic i conine 2000-3000 de gene. La bacteria Escherichia coli masa moleculei este de 2 x 109 dal, iar lungimea de 1 mm. Genele situate n molecul constituie un grup de nlnuire. Tot la bacterii, pe lng cromozomul circular, mai pot exista i alte molecule de ADN, tot de form circular, de dimensiuni mult mai mici, localizate n citoplasm sau ataate cromozomului, numite plasmide. Acestea reprezint un material genetic accesoriu. Exist i o clasificare a materialului genetic accesoriu n mai multe categorii: - plasmide propriu-zise, constituite din uniti genetice cu replicaie (reproducere) autonom, cum ar fi factorul col (care determin sinteza de colicine, cu aciune bactericid), factorul F (care determin sexualitatea la bacterii i asigur capacitatea lor de conjugare), factorul R (care transfer rezistena la antibiotice prin conjugare) etc. - plasmide care pot funciona fie sub form autonom, fie integrate n cromozomi.
8

1.5. REPRODUCEREA CELULEI

Una din caracteristicile materialului genetic este continuitatea lui celular. Aceasta este asigurat prin reproducerea sa cu mare fidelitate, transmindu-se de la celul la celul, de la prini la urmai. La eucariote, materialul din cromozomi care dicteaz aceast reproducere este ADN. Procariotele conin n cromozomul lor fie ADN, fie ARN. Reproducerea acestor acizi nucleici dicteaz, n ultim instan, reproducerea materialului genetic, a celulelor organismului.

1.5.1. Mitoza

Reproducerea cromozomilor are loc odat cu reproducerea celulelor. Dintre formele de reproducere celular, mitoza ocup cea mai important cale i cuprinde duplicarea cromozomilor i a centrilor mitotici i separarea cromozomilor la cei doi poli ai celulei, n vederea formrii a dou celule fiice. Dintr-o celul iniial, prin diviziuni repetate mitotice, se formeaz n mod succesiv 2, 4, 8, 16 celule cu acelai numr de cromozomi care exist n celula iniial. Prin mitoz, materialul genetic, cromozomii, se menin n structur i numr constant. n procesul mitozei se desprind dou etape de baz: diviziunea nucleului (kariokineza) i diviziunea citoplasmei (citokineza). n perioada dintre dou diviziuni succesive, nucleul se afl n interkinez (interfaz). Interfaza. n interfaz nucleul crete i se pregtete de o nou diviziune. Cercetrile efectuate cu izotopi radioactivi i puse n eviden prin autoradiografiere au demonstrat c, n interfaz, la nceput, cromozomii sunt monocromatidici, iar apoi, fiecare cromatid i reconstituie cromatida pereche, n urma unui proces de sintez a elementelor ce o compun. Dup unele observaii, aceast faz se mparte n trei perioade: G1, n care are loc sinteza proteic, S, n care se produce dublarea cantitii de ADN din celul i G2, n care nceteaz sinteza ADN i se desfoar kariokineza. n interfaz cromozomii sunt despiralizai i conin gene active. Profaza. Este prima faz a mitozei. n nucleu, structura lui reticular se transform n filamente vizibile, ncolcite sub forma unui ghem numit spirem. Filamentul, prin rsucire (spiralizare) n jurul axei sale, se scurteaz, se ngroa i, prin fragmentare, d natere la cromozomi. nc de la nceputul profazei se observ natura dubl a lor. Prin dizolvarea membranei nucleului, cromozomii rmn liberi n citoplasm. Se disting bine cele dou cromatide ca nite benzi longitudinale, paralele sau ncolcite. De asemenea, se distinge i centromerul, ca un segment ce unete printr-o singur structur, cele dou cromatide. Ctre sfritul profazei, n celul se formeaz un fus central filamentos, orientat ctre cei doi poli ai celulei. Terminarea profazei este indicat de dizolvarea nucleolilor i a membranei nucleare. Apariia fusului constituie cea mai important schimbare structural a celulei de la sfritul profazei. Fusul acromatic este format din fibrile care, privite la microscopul electronic, alctuiesc microtubuli cu diametrul de 200 i din fibre cromozomice ce unesc centromerii de polii fusului. Mitocondriile, microzomii i alte organite citoplasmice nu ptrund n zona din interiorul fusului.

Metafaza. Cromozomii se inser pe filamentele fusului de diviziune prin cte un punct de inserie din regiunea centromerului. Ei se dispun pe un plan perpendicular la mijlocul fusului, formnd placa ecuatorial. n metafaz, planul ecuatorial se mrete, iar odat cu el i fusul. n acest timp, cromozomii se ndeprteaz uor unul de altul i manifest tendina de a-i orienta braele paralel cu lungimea axului fusului. ntotdeauna ei rmn n interiorul fusului, fr a-l depi spre citoplasm. n metafaz, cromozomii pot fi bine studiai la microscop, deoarece sunt spiralizai la maximum, compaci i se coloreaz intens. Anafaza. Cromozomii i despart cromatidele prin clivarea n lungul lor, dup ce, n prealabil, s-a produs diviziunea centromerilor. Ei devin cromozomi monocromatidici i alunec pe fusul nuclear ctre cei doi poli ai si. Simultan cu deplasarea cromozomilor, fusul se stranguleaz n partea de mijloc, grbind astfel alunecarea cromozomilor ctre polii celulei. Centromerii nainteaz spre poli i trag dup ei braele cromozomilor. n cazul n care un cromozom i pierde centromerul, el rmne dezorientat i produce o deviere a mitozei de la mersul normal. Un astfel de cromozom se poate pstra i poate participa la mitoz numai dac se aloc altui cromozom ce posed centromer. Nu se cunoate astzi precis care este cauza i mecanismul de micare al cromozomilor spre cei doi poli ai celulei. n legtur cu explicaia acestor fenomene exist diferite ipoteze, dintre care unele pot fi luate n seam. Astfel, se consider c fiecare cromozom se deplaseaz n urma unei atracii dintre poli i centromeri, altele c ar exista o extindere i apoi o contracie a fibrelor fusului, ceea ce ar contribui la deplasarea cromozomilor. Contractarea fibrelor a fost comparat de unii cercettori cu contracia fibrelor musculare. Telofaza. n cursul telofazei, aparatul mitotic se transform. Fibrele fusului dispar, iar cromozomii ajung la cei doi poli, se despiralizeaz, reconstituind filamentele de cromatin, care se subiaz, se alungesc i iau forma unui ghem. Fragmentele membranei nucleare migreaz spre poli, se agreg n jurul filamentelor de cromatin, dnd natere cte unei membrane pentru fiecare din cei doi nuclei care se formeaz. n timpul acesta are loc procesul de reconstituire a nucleolilor n numrul n care au fost prezeni n nucleul iniial. Totodat, corpul celulei se gtuie i, prin formarea unui perete despritor numit fragmoplast, iau natere dou celule. n figura 1.11. este redat schema mitozei.

Fig. 1.11. Reprezentarea schematic a mitozei la un organism cu 2n=4 cromozomi A-profaz timpurie; B-profaza; C-metafaza; D-anafaza; E-telofaza F-interfaza.

Timpul n care are loc mitoza depinde de esutul n care se gsete celula, de starea fiziologic a organismului i de anumii factori externi. Ea poate dura de la cteva minute pn la 200 minute. S-a stabilit, de asemenea, c mitoza este mai activ n timpul odihnei i somnului la animale sau ntunericului la plante. Dintre toate fazele din tot ciclul mitotic, profaza este cea mai lung (cca 60%), telofaza mai scurt (cca 30%), iar metafaza i anafaza sunt i mai scurte (cca 5%).

1.5.2. Meioza
Meioza reprezint o form de diviziune celular caracteristic organismelor ce se nmulesc pe cale sexuat i n urma creia din celulele somatice cu 2n cromozomi se formeaz celulele sexuale cu n cromozomi. Reducerea numrului de cromozomi este fenomenul invers procesului de dublare al lor, care are loc n urma fecundrii. Dac organismele ar forma celule sexuale cu acelai numr de cromozomi ca n celulele somatice, cu fiecare generaie numrul de cromozomi din celulele organismelor s-ar dubla. Meioza asigur, deci, meninerea constant a numrului de cromozomi de-a lungul generaiilor la organismele ce se nmulesc sexuat. Meioza cuprinde dou diviziuni succesive: meioza primar, numit i heterotipic sau reducional, n care din celulele diploide se formeaz celule haploide i meioza secundar sau homeotipic, n care din celulele haploide se formeaz tot celule haploide. n meioza primar, fazele prin care trece diviziunea celular sunt aceleai ca la diviziunea mitotic, numai c profaza este mult mai complex i cuprinde mai multe stadii: leptonem, zigonem, pachinem, diplonem i diachineza. Profaza I. n stadiul de leptonem, nucleul se mrete n volum. Cromozomii apar iniial sub forma unor filamente foarte fine, n lungul crora se pot distinge nite ngrori, cromomerele, ca urmare a unor zone mai dense de spiralizare a lor. Aparent, filamentul este format dintr-o singur cromatid, din care cauz cromozomii se numesc monovaleni, iar numrul lor este egal cu 2n. Stadiul de zigonem corespunde cu mperecherea cromozomilor omologi, doi cte doi, formnd perechi sau cromozomi bivaleni. Fenomenul de alturare a celor doi cromozomi n lungul lor poart numele de sinaps. n fiecare pereche se gsete un cromozom de origine matern i unul de origine patern. Sinapsa ncepe ntr-un anumit punct de pe lungimea cromozomului i se continu apoi n tot lungul acestuia, fiind att de perfect, nct toate segmentele omoloage se altur fa n fa. Prin omologie se nelege similitudinea structural i funcional a cromozomilor. Dac dintr-un cromozom lipsete un segment, poriunea corespunztoare a cromozomului pereche face o bucl, asigurnd sinapsa pentru celelalte regiuni ale cromozomilor. n stadiul de pachinem, cromozomii se scurteaz, se ngroa, iar legtura dintre perechi devine din ce n ce mai intim, fapt care a determinat denumirea de gemeni cromozomali. n stadiul de diplonem, la fiecare dintre membrii bivalentului se pot observa cte dou cromatide surori, astfel c perechea de cromozomi este constituit din patru cromatide care alctuiesc aa numita tetrad cromozomic. Cromozomii omologi au tendina de a se ndeprta unul de altul; cromatidele nesurori sunt ns reinute n mai multe puncte de contact numite chiasme.

Chiasma este considerat ca reprezentnd manifestarea citologic a crossing-over-ului. Acest fenomen va fi analizat ntr-un capitol urmtor, el prezentnd o mare importan n studiul ereditii. n stadiul de diachinez, cromozomii ce alctuiesc perechile se ndeprteaz, scurtarea lor devenind i mai accentuat. Spaiile dintre chiasme se lrgesc, acestea se deplaseaz ctre extremitile perechilor de cromozomi, aa nct, la sfritul acestui stadiu, ei apar conectai numai la extremitile lor. Cu aceasta se ncheie profaza primar. Metafaza I. Membrana nuclear dispare i se formeaz fusul de diviziune. Tetradele cromozomice se repartizeaz n planul ecuatorial al celulei. Fiecare cromozom omolog alctuit din dou cromatide surori se ataeaz la nivelul centromerului de firele fusului, pentru a conduce cromozomii la polii celulari. Odat cu ndeprtarea lor dispar i ultimele chiasme. Anafaza I. Cromozomii bicromatidici migreaz la polii celulei. Ei pot ns diferi din punct de vedere genetic, n urma schimbului de segmente care a avut loc n stadiile anterioare. Telofaza I. Cromozomii ajuni la cei doi poli ai celulei formeaz cte un nucleu cu un numr haploid de cromozomi. Fenomenul care duce la separarea celor dou celule poart numele de plasmodierez, iar cele dou celule haploide formeaz o diad.

Odat cu ncheierea acestei faze nucleii intr n interchinez. Cromozomii prezint cromatidele perechi separate, dar unite numai prin centromeri, aspect caracteristic numai meiozei. Dup un interval scurt ncepe a doua faz a diviziunii meiotice, homeotipic, care cuprinde urmtoarele faze: Profaza II i metafaza II. Cromozomii apar formai din cromatide surori, care se orienteaz n planul ecuatorial al fusului de diviziune, ce apare la sfritul profazei secundare. Cromozomii se cliveaz imediat dup clivarea centromerilor. Anafaza II i telofaza II. Cele dou cromatide se ndeprteaz spre cei doi poli, unde constituie doi nuclei. Din diada iniial cu celule haploide s-au format, deci, patru celule haploide ce formeaz o tetrad celular. Aceste celule, n urma unor procese, vor da natere la gamei. n figura 1.12. este redat schema general a meiozei.

Test de autoevaluare
1. Dezoxiribovirusurile au un cromozom reprezentat de o molecul de: a. ARNm ? b. ARNs ? c. ARNt ? d. ADN ?

2.

Ribovirusurile au un cromozom reprezentat de o molecul de : a. ADN ? b. ARNv ? c. ARNt ? d. ARNm ? Cromozomul bacterian (genoforul) este reprezentat de: a. o molecul de ADN, bicatenar, circular, cu lungimea de 1000 ? b. o molecul de ADN monocatenar, liniar ? c. mai multe molecule scurte de ADN ? Mezozomul este un accesoriu al cromozomului bacterian implicat n: a. infecia bacterian ? b. recombinarea bacterian ? c. activitatea respiratorie ? d. replicarea semiconservativ ADN ? e. diviziunea celulei bacteriene ? Celula eucariot, vegetal sau animal, posed: a. nucleu delimitat de membran ? b. nucleoid ? c. mai muli nuclei poliploizi ? O celul vegetal creia i s-a ndeprtat membrana pecto-celulozic, poart numele de : a. oosfer ? b. anterozoid ? c. protoplast ? d. meiocit ? Mitocondriile sunt organite citoplasmatice cu rol n: a. reproducere ? b. poliploidizare ? c. respiraie ? d. fotosintez ? Ribozomii sunt corpusculi submicroscopici alctuii din: a. ADN ? b. ARNv ? c. proteine ribozomale ? d. ARNr i proteine ribozomale (50:50) ? Nucleolul este un corpuscul refrigerent, vizibil la microscopul obinuit n: a. metafaz ? b. telofaz ? c. profaz ? d. interfaz ?

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10. Cromozomul eucariot poate fi de mai multe tipuri, n funcie de poziia centromerului: a. policentric ? b. metacentric ? c. submetacentric ? d. subtelocentric ? e. metafazic ? 11. Numrul, forma i mrimea cromozomilor unei specii vegetale sau animale, poart numele de: a. haplofaz ? b. condriom ? c. cariotip ? d. plasmotip ? 12. n celulele somatice i respectiv, n cele sexuale, numrul cromozomilor este:

a. b. c. d.

2n i n ? 4x i 2x ? n i 2n ? n i n ?

13. Mitoza este diviziunea specific celulelor: a. poliploide ? b. sexuale ? c. meristematice ? d. somatice ? 14. n interfaz, replicarea materialului genetic are loc n subfaza : a. G1 ? b. G2 ? c. F2 ? d. S? 15. Cantitatea de ADN ( 2c ) se dubleaz ( 4c ) n urma: a. sintezei proteice ? b. replicrii de tip semiconservativ ? c. anafazei ? d. gametogenezei ? 16. Cromozomii se ataeaz de fibrele fusului nuclear cu ajutorul : a. telomerilor ? b. centromerilor ? c. regiunii eucromatice ? 17. n anafaza timpurie a mitozei, cromozomii sunt : a. bicromatidici, n numr 2n ? b. monocromatidici, n numr n ? c. monocromatidici, n numr 4n ? d. bicromatidici, n numr 4n ? 18. n care dintre cele cinci stadii ale profazei primare are loc recombinarea genetic intercromosomic: a. leptonema ? b. zigonema ? c. pachinema ? d. diplonema ? e. diachineza ? 19. ntre anafaza mitozei i anafaza meiozei primare exist o diferen major, sub aspectul structurii cromozomilor care migreaz spre cei doi poli ai celulei: a. bicromatidici n mitoz i monocromatidici n meioz ? b. bicromatidici n mitoz i bicromatidici n meioz ? c. monocromatidici n mitoz i bicromatidici n meioz ? d. monocromatidici n mitoz i tetracromatidici n meioz ? 20. La sfritul meiozei primare, rezult: a. dou celule fiice cu n cromozomi n nucleu ? b. patru celule fiice cu 2 n cromozomi n nucleu ? c. patru celule fiice cu n cromozomi n nucleu ? d. dou celule fiice cu 2 n cromozomi n nucleu ? 21. La sfritul diviziunii homeotipice rezult: a. dou celule fiice cu 2 n cromozomi ? b. dou celule fiice cu n cromozomi ? c. patru celule fiice cu 2 n + 1 cromozomi ? d. patru celule fiice cu n cromozomi ?

Fig. 1.12. (partea I) - Schema meiozei la un organism cu 2n=4 cromozomi A-leptonem; B-zigonem; C-pachinem; D-diplonem E-metafaza I; F-anafaza I.

Fig. 1.12. (continuare) - Schema meiozei la un organism cu 2n=4 cromozomi G-telofaza I; H-interfaza; I-profaza II; J-metafaza II; K-anafaza II; L-telofaza II

CAPITOLUL 2 BAZELE MOLECULARE ALE EREDITII

Motto: "Genetica molecular a luat natere cnd s-a recunoscut c gena este subdivizibil" Salvador Luria "Structura ADN trebuie neleas n raport cu toate funciile sale, aa cum nelegerea funciei necesit o cunoatere a structurii. Fiecare funcie trebuie descompus, apoi reconstituit n detaliile sale moleculare i, n final, orientat n arhitectura i economia celular"

Progresele nregistrate n genetica clasic au ridicat, ulterior, numeroase probleme legate de natura biochimic a materialului genetic, respectiv a genelor. Identificarea i studierea aprofundat a materialului genetic ridicau numeroase probleme, de aceea nu au putut fi rezolvate dect prin cercetri interdisciplinare de genetic, biochimie, medicin, fiziologie, fizic, matematic i altele. Aceste cercetri constituie realizrile cele mai importante ale tiinei contemporane i au pus bazele geneticii moleculare, care studiaz ereditatea i variabilitatea organismelor la nivelul moleculelor.

2.1. DOVEZI PRIVIND ROLUL GENETIC AL ADN

Teoria cromozomic a ereditii a atribuit cromozomilor i genelor rolul principal n ereditate, dei nu se cunoteau nc prea multe despre structura chimic a materialului genetic. Identificarea materialului genetic constituie imperativul geneticii n perioada de la mijlocul secolului nostru. Pentru aceasta trebuiau descoperite i dovedite structurile chimice care dein caracteristicile de baz ale materialului genetic: de a stoca i transmite informaia ereditar i de a-i menine stabilitatea cantitativ i calitativ pe parcursul diviziunii celulare. Prima ipotez a legturii dintre o gen i sinteza unei enzime a fost elaborat n anul 1908 de ctre medicul englez Garrod care a studiat maladiile ereditare umane ce afecteaz metabolismul intermediar al fenilalaninei.

2.1.1. Transformarea la procariote

n anul 1928, bacteriologul englez F. Griffith a efectuat mai multe experiene cu pneumococi (Diplococcus pneumoniae), o bacterie care produce la mamifere boala numit pneumonie. Virulena ei este determinat de existena unei capsule format din polizaharide care mpiedic fenomenul de fagocitoz. Coloniile acestor bacterii sunt netede i vscoase, motiv pentru care s-au notat cu S (engl. smooth = neted). Dup reacia imunologic, determinat de tipul de polizaharide ce alctuiesc capsula, exist mai multe tipuri de pneumococi S: SI, SII, SIII etc. Tipul S poate da natere prin mutaii spontane la forme lipsite de capsul, a cror colonii au suprafaa rugoas, notat cu R (engl. rough = aspru, rugos), care sunt nevirulente. Pneumococii de tip R pot fi: RI, RII, RIII, n funcie de tipul S din care provin. F. Griffith a injectat la oareci pneumococi neviruleni de tip RII mpreun cu pneumococi viruleni de tip SIII, ns acetia din urm fuseser omori prin cldur. Surprinztor a fost faptul c oarecii au murit de pneumonie, iar din acetia sau separat att pneumococi de tip RII ct i pneumococi de tip SIII. Concluzia care s-a desprins a fost c pneumococii de tip RII s-au transformat n pneumococi de tip SIII. Mutaia este exclus n acest caz deoarece tipul RII ar fi trebuit s muteze n tipul SII. Cauza transformrii pneumococilor necapsulai i neviruleni n pneumococi capsulai i viruleni a rmas necunoscut pn n anul 1944, cnd un grup de cercettori americani, O.T. Avery, C.M. Mac Leod i M. Mc. Carty, au reluat experienele fcute de Griffith cu scopul de a identifica substana chimic ce induce transformarea. Ei au extras ADN de la pneumococii de tip SIII i l-au introdus n mediul de cultur al pneumococilor de tip RII. n cultur, pe lng pneumococii de tip RII au aprut i un numr mic de pneumococi de tip SIII, dovedindu-se c agentul transformator este ADN de tipul donor. Aceast experien poate fi redat sintetic astfel:
RII + ADN de la SIII `n vitro 24 ore RII + SIII

nsuirea de virulen sau nevirulen este legat de prezena sau absena capsulei polizaharidice ce nconjoar pneumococul. ADN transformator a indus pneumococilor neviruleni, acapsulai, nsuirea de virulen, de formare a acestei capsule. Frecvena transformrilor genetice depinde de cantitatea de ADN utilizat i starea fiziologic a bacteriei, denumit i starea de competen a acesteia. Cercetrile recente au demonstrat c starea de competen a celulelor bacteriene depinde de numrul de celule n mediu i nu de rata nmulirii bacteriilor. Starea de competen este maxim cnd n mediu, concentraia atinge 10 milioane celule/cm3. Aceast stare de competen este indus de o protein care, probabil, modific ntr-un anumit fel membrana celular, fcnd posibil ptrunderea ADN exogen.

2.1.2. Transfecia la procariote

Rolul genetic al ADN a fost pus n eviden i printr-o serie de experiene cu bacteriofagi (virusuri ce atac i distrug bacteriile). Importante n acest sens sunt experienele efectuate de A. Hershey i M. Chase (1952) privind infecia viral, constituind i primele experiene de transfecie, care const n introducerea de ADN exogen n celule receptor. Ei au folosit bacteriofagii din seria T i n special bacteriofagul T2, unul din cei mai mari bacteriofagi (2400-2500 ). Bacteriofagul este constituit din cap i coad. Capul conine n interior ADN iar nveliul (capsida) i coada sunt constituite din proteine (figura 2.1). Fagii se reproduc numai n celulele bacteriene cu ajutorul aparatului enzimatic al acestora. Infecia viral are loc astfel: fagul se prinde cu filamentele codale de membrana bacteriei. Enzimele fagului dizolv n acest punct membrana bacteriei, iar ADN fagic este introdus prin coada acestuia n celula bacterian. ntr-un interval de timp destul de scurt, n interiorul bacteriei se formeaz cteva sute de bacteriofagi, bacteria fiind distrus (liza bacteriei) i fagii sunt eliberai putnd infecta alte celule.

Faptul c bacteriofagii se reproduc n interiorul bacteriei, denot c ADN fagic are capacitatea de a sefagilor autoreproduce (funcia autocatalitic) i n acelai timp deine informaia Fig. 2.1. Structura de tip T genetic necesar sintezei proteinelor proprii necesare constituirii capsidei pe baza aminoacizilor liberi din celula bacterian (funcia heterocatalitic). Se pune ntrebarea dac, pe lng ADN fagic, n interiorul bacteriei nu ptrund i proteinele virale. Pentru a clarifica acest aspect A. Hershey i A. Chase au folosit izotopii radioactivi P32 i S35. Fosforul radioactiv marcheaz molecula de ADN iar sulful radioactiv marcheaz proteinele. S-au cultivat bacterii E. coli pe un mediu la care s-a adugat fosfor radioactiv (P32). Dac se infecteaz cultura cu bacteriofagi T2, vor rezulta bacteriofagi marcai radioactiv, deoarece ADN fagic incorporeaz izotopul P35. Cu aceti bacteriofagi marcai s-au infectat alte bacterii neradioactive. ADN fagic radioactiv a ptrund n interiorul bacteriilor, n timp ce capsida fagilor, nemarcat, a rmas la nivelul peretelui celular bacterian. Dac bacteriile au fost infectate cu bacteriofagi marcai cu S35, bacteriile nu devin radioactive pentru c n acest caz izotopul S35 s-a localizat numai la nivelul proteinei din capsid. i ntr-un caz i n altul capsidele au rmas aderente de suprafaa bacteriei, putnd fi izolate prin agitare. n interiorul bacteriei ptrunde numai ADN fagic, care realizeaz procesul de transfecie.

2.1.3. Transformarea la eucariote

Transformarea genetic la organismele superioare a evideniat rolul genetic al ADN. Primele experiene de transformare genetic la eucariote au fost realizate n anul 1959 de J. Benoit, P. Leroy, R. i C. Vendreley. S-a extras ADN din spermatozoizii i eritrocitele masculilor din rasa de rae Khaki Campbell i s-a introdus intraperitoneal la bobocii de rae din rasa Pekin. Adulii din rasa Pekin, rezultai din bobocii tratai au prezentat o serie de modificri morfologice privind culoarea penajului, a ciocului i picioarelor, a taliei, realizndu-se un nou tip de ras denumit Blanche-neige. n anul 1971, C.R. Merril i colab. au transferat gene de la Escherichia coli n celulele umane. Astfel, gena ce metabolizeaz galactoza la E. coli a fost preluat de fagul lambda i apoi transferat de acesta n celulele fibroblastice umane ce proveneau de la un bolnav de galactosemie (nu putea metaboliza galactoza). Fenomenul de transformare a fost realizat i la alte organisme superioare: Drosophila melanogaster, Bombyx mori, Petunia hybrida, Hordeum vulgare .a. La noi n ar, P. Raicu i colab. (1963), au introdus prin vacuum infiltraie ADN de la Triticum durum n boabe de gru de la specia Triticum aestivum. Plantele rezultate din boabele tratate cu ADN exogen prezentau modificri privind culoarea i ritmul de cretere. La plante, obinerea protoplatilor (celulele lipsite de membrana rigid pecto-celulozic) deschide noi ci pentru introducerea ADN n celule.

2.1.4. Materialul genetic al ribovirusurilor

Astzi se consider c virusurile constituie sisteme complexe alctuite din dou componente: nveliul proteic care nu are rol genetic i ADN sau ARN ce dein mesajul genetic. nveliul proteic denumit i capsid conine uniti mai simple denumite capsomere. Exist dou categorii de virusuri, unele au ca material genetic ADN i sunt denumite dezoxiribovirusuri, iar altele conin ARN i sunt denumite ribovirusuri. Ribovirusurile cele mai cunoscute sunt: virusul mozaicului tutunului (VMT), poliomielitei i encefalitei i altele. Rolul genetic al ARN a fost pus n eviden la virusul mozaicului tutunului de C.P. Conrat i R. Williams (1955) i A. Gierer i G. Schranm (1956). Virusul mozaicului tutunului conine aproximativ 6% ARN i 94% proteine. Ei au izolat ARN de proteina viral i au fcut infecii cu ambele componente pe frunze sntoase de tutun. S-a constatat c boala denumit mozaicul sau arsura frunzelor de tutun s-a manifestat numai la frunzele infectate cu ARN. Se poate afirma c la ribovirusuri, ARN este deintorul informaiei genetice necesare sintezei proteinelor virale proprii i transmiterii ei prin replicaie.

2.2. ACIZII NUCLEICI I ROUL LOR GENETIC

2.2.1. Structura molecular a acidului dezoxiribonucleic (ADN)
Structura molecular a acidului dezoxiribonucleic (ADN) a fost descoperit n anul 1953 de cercettorii J.D. Watson i F.H.C. Crick care au studiat structura ADN prin difracie n raze X, reuind s precizeze poziia atomilor. Cei doi cercettori au studiat ADN "in vitro", netiindu-se dac structura lui corespunde cu cea existent n materia vie. Tot n anul 1953, M. Wilkins i colab. au efectuat cercetri asupra ADN "in vivo" confirmnd structura stabilit de Watson i Crick. n anul 1962, cei trei cercettori Watson, Crick i Wilkins au fost distini cu premiul Nobel pentru medicin i biologie, pentru contribuiile aduse la elucidarea structurii moleculare a materialului purttor al informaiei genetice. Structura chimic a moleculei de ADN Molecula de ADN este format din uniti simple denumite nucleotide. n componena unei nucleotide intr urmtoarele tipuri de molecule: o baz azotat, un zahar i un radical fosforic (figura 2.2.). Bazele azotate ce intr n alctuirea de ADN sunt de dou tipuri: baze purinice i pirimidinice. Purina este o baz azotat alctuit dintr-un heterociclu ce cuprinde cinci atomi de C i patru atomi de N iar pirimidina este o baz ce deriv din inelul benzenic, cuprinznd patru atomi de C i doi atomi de N. Bazele azotate purinice care intr n constituia moleculei de ADN sunt adenina (A) i guanina (G), iar bazele pirimidinice sunt citozina (C) i timina (T). Zaharul se numete dezoxiriboz ( - D - 2 dezoxiribofuranoz), fiind o pentoz. Radicalul fosforic ce intr n alctuirea acizilor nucleici are trei hidroxili liberi care pot fi esterificai. n cazul acizilor nucleici se esterific doi hidroxizi, deci acizii nucleici sunt fosfodiesteri: OH O=P OH OH Radical fosforic Fosfodiester O=P OH OR2 OR1

Fig. 2.2. Bazele azotate, zaharurile i radicalul fosforic din acizii nucleici

Prin unirea unei baze azotate purinice sau pirimidinice cu un zahar rezult un dezoxiribonucleosid iar prin ataarea la acesta a unui radical fosforic rezult un dezoxiribonucleotid. Ataarea radicalului fosforic se face n mod obinuit prin intermediul carbonului 5' al dezoxiribozei, prin pierderea unei molecule de ap. Radicalul fosforic al unui nucleotid, prin gruprile acide libere, poate s se lege fie cu ali radicali fosforici, fie cu alte nucleotide prin carbonul 3' al dezoxiribonucleotidului. Dac gruprile libere ale radicalului fosforic se leag de ali radicali fosforici, dezoxiribonucleotidele pot apare sub form de monofosfat, difosfat sau trifosfat, purtnd urmtoarele denumiri: adenozin 5'-fosfat (AMP), guanozin 5'-fosfat (GMP), citidin 5'-fosfat (CMP), timidin 5'-fosfat (TMP), ADP, GDP, CDP, TDP, ATP, GTP, CTP, TTP. Cnd nucleotidele (dezoxiribonucleotidele) se leag unele de altele, aceast legtur se realizeaz astfel: un nucleotid se leag de nucleotidul vecin inferior prin C 3', iar de nucleotidul vecin superior prin C 5'.

Se realizeaz un lan polidezoxiribonucleic, cu o form de zig-zag, ce constituie structura primar sau monocatenar a moleculei de ADN. La majoritatea organismelor molecula de ADN este constituit din dou lanuri (catene) polinucleotidice complementare, aceasta fiind structura secundar a ADN stabilit de ctre J.D. Watson i F.H.C. Crick. Rsucirile pe care le sufer o caten sau molecula bicatenar alctuiesc structura teriar iar interaciunea dintre dou sau mai multe molecule bicatenare alctuiesc structura cuaternar a acizilor nucleici. Watson i Crick au stabilit c macromolecula de ADN este alctuit din dou catene polinucleotidice, paralele, nfurate elicoidal n jurul unui ax comun imaginar, o caten avnd un sens ascendent (3' 5') iar cealalt un sens descendent (5' 3').

Fig. 2.3. Modelul structurii bicatenare a moleculei de ADN

Distana dintre dou nucleotide succesive este de 3,4 iar pasul elicei este de 34 , ceea ce corespunde la 10 nucleotide. Diametrul macromoleculei de ADN este de 20 (figura 2.3.). Molecula de ADN are dimensiuni foarte mari fiind cea mai mare molecul biologic, cu o mas molecular ce poate ajunge la 12-16 x 106 daltoni (1 dalton = 1/12 din masa atomului de C). Cele dou catene din molecula de ADN se leag ntre ele prin puni de hidrogen ce se realizeaz ntre o baz azotat purinic de pe un lan i o baz azotat pirimidinic de pe cellalt lan. Prin urmare n macromolecula de ADN exist urmtoarele tipuri de legturi: adenin-timin (A-T), timin-adenin (T-A), guanin-citozin (G-C) i citozin-guanin (C-G). Cele dou catene polinucleotidice din molecula de ADN sunt complementare, n sensul c ordinea nucleotidelor de pe o caten determin ordinea nucleotidelor de pe cealalt caten. Legturile de hidrogen dintre bazele azotate, duble, ntre adenin i timin (A = T) i triple ntre guanin i citozin (G C), dei sunt legturi slabe, sunt destul de numeroase de-a lungul macromoleculei de ADN pentru a-i asigura stabilitatea i coeziunea. Macromolecula de ADN este

stabil la temperaturile fiziologice, datorit att numrului mare de legturi chimice, ct i faptului c moleculele de baze azotate se gsesc n interiorul moleculei i contactul lor cu apa este limitat.

2.2.2. Acidul ribonucleic (ARN)

Structura chimic a moleculei de ARN. Acidul ribonucleic (ARN) are o structur chimic asemntoare cu cea a acidului dezoxiribonucleic (ADN). n structura chimic a ARN intr trei componente: bazele azotate, zaharul i radicalul fosforic. Bazele azotate sunt: purinice, adenina (A) i guanina (G) i pirimidinice, citozina (C) i uracilul (U). Deci, o prim deosebire structural ntre ADN i ARN este prezena uracilului n locul timinei. Uracilul are o structur destul de apropiat de cea a timinei (fig. 2.2.). Zaharul care intr n structura moleculei de ARN este riboza care are o form ciclic. Combinarea unei baze azotate cu zaharul d natere unui ribonucleosid iar prin adugarea unui radical fosfat rezult un ribonucleotid. O alt deosebire important ntre ADN i ARN este faptul c macromolecula de ARN este monocatenar, fiind format dintr-un singur lan poliribonucleotidic. Acest fapt face ca bazele azotate purinice s nu fie n cantitate egal cu cele piridimice. innd seama de rolul pe care l ndeplinete ARN se apreciaz c sunt dou categorii: acidul ribonucleic viral (ARNv) i acidul ribonucleic celular, implicat n sinteza proteinelor. Acidul ribonucleic celular este de trei tipuri: acidul ribonucleic mesager (ARNm), acidul ribonucleic de transport sau solubil (ARNt) i acidul ribonucleic ribozomal (ARNr). Acidul ribonucleic viral (ARNv) constituie materialul genetic al unor ribovirusuri cum ar fi: virusul mozaicului tutunului (VMT), virusul gripal, virusul poliomielitei, virusul stomatitei veziculare, bacteriofagii F2, R17, QB i altele. Studiindu-se molecula de ARNv de la virusul mozaicului tutunului s-a determinat c este alctuit din aproximativ 6.000 ribonucleotide, ntr-o anumit ordine, determinnd coninutul mesajului genetic. La mai multe virusuri molecula de ARNv este format din dou catene complementare nfurate elicoidal n jurul unui ax imaginar. Molecula de ARNv este n general liniar, cu excepia virusului encefalomielitei oarecilor, la care molecula de ARNv este circular. Acidul ribonucleic mesager (ARNm). A fost descoperit n celulele bacteriene infectate cu bacteriofagi, apoi n toate celulele organismelor. A.D. Hershey i colab. (1953) au ajuns la concluzia c sinteza ARNm este dependent de ADN. Ei au identificat ntr-o celul bacterian infectat, pe lng ADN i o mic cantitate de ARN, care era complementar ADN. Acest tip de ARN are rolul de a copia informaia ereditar de pe o poriune din molecula ADN i de a o transmite n citoplasm la ribozomi, organite citoplasmatice la nivelul crora are loc sinteza

proteinelor. De aceea, acest tip de acid ribonucleic a fost denumit ARN mesager (messenger ARN), prescurtat ARNm (F. Jacob i J. Monod, 1961). Acidul ribonucleic mesager se sintetizeaz n procesul de transcripie a informaiei genetice. Acidul ribonucleic solubil sau de transfer (ARNs sau ARNt). Acest tip de acid ribonucleic are o structur chimic asemntoare cu a celorlalte tipuri de ARN. Are o greutate molecular mic i anume 25.000 daltoni, avnd 75-90 nucleotide, este solubil n soluie de NaCl, de aceea i s-a dat numele de ARN solubil. Rolul ARNs este de a transporta aminoacizii din citoplasm la ribozomi, n procesul de sintez a proteinelor. Molecula de ARNs are la un capt tripleta citozin-citozin-adenin (CCA), iar la cellalt capt are un nucleotid ce conine guanina (G). Molecula ARNs este monocatenar, dar are i poriuni bicatenare datorit legturilor de hidrogen dintre A-U i G-C, dndu-i forma caracteristic a unei frunze de trifoi. R.W. Halley de la Universitatea Cornell (SUA) a determinat, n anul 1965, ordinea nucleotidelor unui ARNs care transport alanina la ribozomi, la drojdia de bere (Saccharomyces cerevisiae) (figura 2.4).

Fig. 2.4. Structura ARNs ce transport alanina la ribozomi la drojdia de bere (Saccharomyces cerevisiae)

Macromolecula de ARNs are trei regiuni distincte pentru recunoaterea moleculelor sau structurilor celulare: a) Regiunea pentru recunoaterea aminoacidului este situat pe braul cu codonul CCA de la un capt al moleculei. Aminoacidul se fixeaz de aceast regiune cu ajutorul enzimei aminoacil ARNs - sintetaza, care are o structur foarte variat de la un organism la altul, existnd cte o enzim pentru fiecare aminoacid. b) Regiunea anticodonului este format dintr-o triplet de nucleotide complementar unui codon din ARNm. Numrul anticodonilor este egal cu cel al codonilor.

c) Regiunea pentru recunoaterea ribozomului este alctuit dintr-o secven de cinci nucleotide: G-T-P-C-G (P-pseudouracilul). Aceast regiune realizeaz legtura cu ribozomul n timpul procesului de sintez a proteinelor. Sinteza ARNs este determinat de genele din cromozomi, gene care se gsesc ntr-un numr mare de copii. Teoretic ar trebui s existe attea tipuri de ARNs cte tipuri de codoni exist, dar, n realitate, numrul lor este mai mic deoarece sunt i codoni care servesc pentru punctuaie sau sunt sinonimi. Acidul ribonucleic ribozomal (ARNr). Acidul ribonucleic ribozomal (ARNr) reprezint aproximativ 85% din cantitatea total a ARN din celul, fiind localizat numai n ribozomi. O caracteristic important a ARNr este aceea c se gsete ntotdeauna asociat cu proteinele. ARNr a fost izolat din ribozomii purificai de Escherichia coli i s-a stabilit c are o greutate molecular de 5 x 106, nefiind purttor al informaiei genetice. Acidul ribonucleic ribozomal are o structur bicatenar n proporie de 60-70% iar restul are o structur monocatenar. Sinteza ARNr se realizeaz prin genele din ADN specializate n acest sens i a cror numr este foarte mare datorit necesitii de a se sintetiza o cantitate mare de ARNr ntr-un timp scurt.

2.2.3. Denaturarea i renaturarea ADN

nclzirea unei soluii de ADN la temperaturi de peste 65C, determin ruperea legturilor de hidrogen dintre bazele azotate, cele dou catene se separ rezultnd un ADN monocatenar, iar fenomenul se numete denaturare. Temperatura la denaturare variaz de la o specie la alta, de exemplu la Drosophila melanogaster este de 86C, la Escherichia coli 90C, Mycobacterium phlei 97C. Dac soluia respectiv este rcit brusc, ADN rmne monocatenar, fiind numit ADN denaturat. Dac soluia se rcete treptat, legturile de hidrogen se refac, rezultnd un ADN renaturat, iar fenomenul se numete renaturare. Aceste dou fenomene au o importan deosebit pentru realizarea de hibrizi moleculari ADN-ADN sau ADN-ARN. Hibrizii moleculari ADN-ADN, dar de la specii diferite, ne dau informaii despre gradul de nrudire al speciilor respective. Hibridarea ADN-ARN permite localizarea pe cromozomi a genelor ce intervin n sinteza diferitelor tipuri de ARN.

2.2.4. Replicaia ADN

Una dintre nsuirile de baz ale macromoleculei de ADN este cea de replicaie sau autoreplicaie, constituind funcia autocatalic a materialului genetic. La eucariote replicarea ADN

i deci a genelor care nu sunt dect segmente de ADN, are loc n timpul diviziunii mitotice, asigurndu-se transmiterea exact de la o generaie la alta a caracterelor ereditare.

J.D. Watson i F.H. Crick (1953) n urma elaborrii modelului structural al moleculei de ADN au emis i ipoteza replicrii acestuia dup tipul semiconservativ. Acest tip de sintez const n ruperea punilor de hidrogen dintre cele dou catene complementare. Fiecare caten servete ca matri pentru sinteza unei catene noi. n final, dintr-o molecul veche de ADN vor rezulta dou molecule, dar care sunt noi numai pe jumtate. Modelul replicrii dup tipul semiconservativ, asigur o mare fidelitate n sinteza noilor molecule de ADN. Termenul de replicaie deriv de la faptul c n acest proces fiecare caten servete ca matri pentru catenele noi sintetizate, informaia genetic fiind transmis fidel noilor molecule. Sinteza ADN dup tipul semiconservativ se realizeaz astfel: la o extremitate sau ntr-un punct oarecare al macromoleculei de ADN, punile de hidrogen se rup, fenomen ce continu pe toat lungimea moleculei, asemntor desfacerii unui fermoar. Fiecare caten se rsucete n spaiu cu 180, prin rotirea nucleotidelor n planul exterior, n jurul radicalului fosforic. n citoplasm se gsesc sintetizate cele patru tipuri de nucleotide, care conin bazele azotate purinice i pirimidinice: adenin, guanin, citozin i timin. Pe baza fenomenului de complementaritate dintre bazele azotate purinice i pirimidinice, o nucleotid care conine adenin se va lega prin puni de hidrogen de una ce conine timin, iar una ce conine guanin se va lega de una ce conine citozin. n final, paralel cu catenele vechi s-au sintetizat dou catene noi, rezultnd dou molecule fiice, identice cu molecula mam (figura 2.5.). Replicarea macromoleculei de ADN se realizeaz n trei etape: - n prima etap are loc sinteza precursorilor nucleotidelor ce intr n alctuirea ADN de tipul acidului uridilic i acidului inosinic; - n etapa a doua are loc sinteza nucleotidelor propriu-zise ce intr n structura ADN: dezoxiadenozintrifosfat, dezoxiguanozintrifosfat, dezoxicitidintrifosfat i dezoxitimidintrifosfat;
Fig. 2.5. Modelul replicrii semiconservative a macromoleculei de ADN

- n etapa a treia are loc polimerizarea nucleotidelor sub controlul enzimei ADNpolimeraza.

Enzima ADN-polimeraza determin esterificarea oxidrilului de la carbonul 3' al catenei polinucleotidice de ctre fosfatul ce esterific oxidrilul de la carbonul 5' al nucleotidei, aa nct dac catena veche are polaritatea 5' - 3', catena nou sintetizat va avea polaritatea invers 3' -5'.

2.3. CODUL GENETIC

Dup descoperirea structurii macromoleculei de ADN i a nsuirii ei de a se replica cu mare fidelitate, muli geneticieni i-au pus ntrebarea dac informaia genetic nu este codificat ntr-un anumit fel prin secvena de nucleotide, ce relaii se stabilesc ntre cele patru tipuri de nucleotide i aminoacizii din lanurile polipeptidice. Ciberneticianul G. Gamow (1954) este primul care a descoperit legtura dintre secvena de nucleotide din ADN i ordinea aminoacizilor, emind ipoteza c n macromolecula de ADN se gsete codificat biochimic informaia genetic, necesar sintezei moleculelor proteice. Prin schem teoretic a unui cod genetic a fost elaborat de G. Gamow (1954). Potrivit concepiei acestuia, codificarea celor 20 de aminoacizi nu se poate realiza de un singur nucleotid (41=4) i nici de grupe formate din cte dou nucleotide (42=16), pentru c, n ambele cazuri, numrul total de combinaii este mai mic dect numrul aminoacizilor. Ca urmare, el a considerat c numai secvene de cte trei nucleotide (43=64) pot realiza codificarea celor 20 de aminoacizi (Tabelul 2.1.). Grupul de trei nucleotide care codific un aminoacid a primit denumirea de codon. n cazul codului de tip triplet, numrul codonilor este 64, depind de trei ori numrul aminoacizilor, fapt ce confer o mare eficien i plasticitate n recunoaterea aminoacizilor. n perioada care a urmat, o serie de geneticieni au adus numeroase dovezi experimentale privind codificarea informaiei ereditare, deci a relaiei nucleotide-aminoacizi, culminnd cu descifrarea n totalitate a codului genetic. Descifrarea codului genetic a fost posibil i prin folosirea unor ARNm sintetizai artificial, care conineau o secven cunoscut de nucleotide, pe baza crora au fost sintetizate proteine. Experiene de acest fel au fost realizate de M.W. Nirenberg i J.H. Matthey (1961). Ei au reuit s sintetizeze o caten de polifenilalanin, folosind un ARNm artificial care coninea numai nucleotide cu uracil (U), dovedind c tripleta (UUU) codific aminoacidul fenilalanin. Tabelul 2.1. Diferite tipuri teoretice de coduri
Codul monotipic (4 combinaii) A Codul cu dublete (16 combinaii) AA AG AC AU AAA Codul cu triplete (64 combinaii AAG AAC AAU

G C U

GA CA UA

GG CG UG

GC CC UC

GU CU UU

AGA ACA AUA GAA GGA GCA GUA CAA CGA CCA CUA UUA UGA UCA UUA

AGG ACG AUG* GAG GGG GCG GUG* CAG CGG CCG CUG UAG UGG UCG UUC

AGC ACC AUC GAC GGC GCC GUC CAC CGC CCC CUC UAC UGC UCC UUC

AGU ACU AUU GAU GGU GCU GUU CAU CGU CCU CUU UAU UGU UCU UUU

* codoni iniiatori ai sintezei unei catene polipeptidice codoni nonsens, care nu codific nici un aminoacid reprezentnd codonii terminali ai sintezei unei catene polipeptidice S-au folosit apoi ARNm artificiali ce conineau o secven de dou nucleotide cunoscute. De exemplu ARN artificial ce conine secvena UGUGUG, determin sinteza unui lan polipeptidic n care alterneaz cisteina i valina, deci cisteina este codificat de codonul UGU iar valina de GUG (figura 2.6.).
Prima nucleotid a codonului 5' UUU U UUC UUA UUG CUU CUC CUA CUG AUU AUC AUA AUG GUU GUC GUA GUG A doua nucleotid a codonului U Fen Leu UCU UCC UCA UCG CCU CCC CCA CCG ACU ACC ACA ACG GCU GCC GCA GCG Ser C UAU UAC UAA UAG CAU CAC CAA CAG AAU AAC AAA AAG GAU GAC GAA GAG A Tir Non 2 Non 1 His Glu Asp Liz Ac.asp Ac.glu UGU UGC UGA UGG CGU CGC CGA CGG AGU AGC AGA AGG GGU GGC GGA GGG G Cis Non 3 Tri Arg A treia nucleotid a codonului 3' U C A G U C A G U C A G U C A G

Leu

Pro

Ileu Met Val f-Met

Ser Arg

Tre

Ala

Gli

Fig. 2.6. Codul genetic

Problema cea mai grea, ce a trebuit rezolvat, a fost precizarea poziiei nucleotidelor n cadrul codonului, pentru c cele dou nucleotide pot forma trei combinaii: GUU, UGU i UUG. Exist mai multe ci pentru precizarea ordinii nucleotidelor n cadrul codonului, cea mai folosit

fiind studiul mutaiilor de substituie a unor aminoacizi din unele proteine mai bine cunoscute: hemoglobina, proteina virusului mozaicului tutunului, triptofan-sintetaza din Escherichia coli .a.

Caracteristicile codului genetic

Informaia genetic este codificat n acidul dezoxiribonucleic (ADN) sau n acidul ribonucleic viral (ARNv) la unele virusuri, sub forma unor secvene de trei nucleotide (codoni). Informaia genetic este copiat prin procesul de transcripie de ctre ARNm iar apoi tradus, prin procesul de translaie, ntr-o secven de aminoacizi, n catena polipeptidic. n prezent sunt cunoscui toi codonii de ARNm, care codific diferii aminoacizi (fig. 2.6). Codul genetic cuprinde 64 de codoni. Doi codoni marcheaz nceputul sintezei unei catene polipeptidice i anume AUG i GUG iar trei codoni sunt nonsens: UAA (ocru), UAG (ambr) i UGA (azur). Aceti codoni au rolul de a marca terminarea sintezei unei catene polipeptidice (codoni stop). Codul genetic are urmtoarele caracteristici: este universal, degenerat, ambiguu, neacoperit i fr virgule. Prin universalitatea codului genetic se nelege faptul c un anumit codon, codific acelai aminoacid la orice organism, indiferent de gradul su de evoluie. Dovada cea mai evident a universalitii codului genetic a fost urmtoarea: s-a izolat ARNm ce rspunde de sinteza hemoglobinei la iepure i s-a injectat n ovocitele de broasc. S-a constatat c n ovocitele de broasc se sintetizeaz hemoglobina, dei n mod normal, ovocitele nu sintetizeaz niciodat hemoglobin. Codul genetic este degenerat, n sensul c mai muli codoni codific acelai aminoacid. De exemplu, arginina este codificat de urmtoarele triplete: GGU, GGC, GGA, AGA i AGG. n ceea ce privete importana nucleotidelor din codon s-a constatat c primele dou sunt cele mai semnificative, n timp ce a treia poate fi uor nlocuit. Dac cea de a treia nucleotid este o baz purinic ea poate fi nlocuit tot cu o baz purinic sau dac este o baz pirimidinic, poate fi nlocuit tot printr-o baz pirimidinic. Diferii codoni, care au primele dou nucleotide identice, pot codifica acelai aminoacid. Numai metionina i triptofanul sunt codificai de cte un singur codon (AUG i respectiv UGG). n mod obinuit fiecare codon (triplet) codific un singur aminoacid. S-a constatat, n unele cazuri, c un codon poate codifica mai muli aminoacizi. Aa este cazul codonilor GCG care codific alanina i arginina; CGG-prolina i arginina; GGA-glicerina i acidul glutamic; AGGglicina i fenilalanina. Se afirm c aceast nsuire reprezint un avantaj evolutiv, deoarece nlocuirea unui aminoacid cu altul printr-o mutaie, ntr-o caten polipeptidic este mai puin duntoare, dac cei doi aminoacizi au proprieti asemntoare, conferindu-i codului genetic caracterul de ambiguu.

Codul genetic este neacoperit n sensul c doi codoni vecini nu au nucleotide comune i este fr virgule, ntre doi codoni nu exist spaii sau ali codoni care s joace rolul unor semne de punctuaie. S-a demonstrat c citirea mesajului genetic ncepe dintr-un punct fix, se realizeaz ntr-un singur sens, astfel c, absena unui nucleotid (deleie) sau adugarea altuia (adiie), schimb sensul mesajului.

2.4. BIOSINTEZA PROTEINELOR

Procesul de biosintez a proteinelor este mult mai complex dect cel de sintez a acizilor nucleici i cuprinde dou etape importante: transcripia informaiei genetice i translaia informaiei genetice.

2.4.1. Transcripia informaiei genetice

Transcripia constituie fenomenul prin care informaia genetic de pe o poriune din catena de ADN este transcris (copiat) ntr-o molecul de ARNm. Transcripia mesajului genetic din molecula de ADN pe cea din ARNm se face ntr-o form care servete ca matri pentru sinteza proteinelor. Sinteza ARNm este catalizat de enzima ARN-polimeraza, enzim universal ce a fost identificat n celulele bacteriene, vegetale i animale. Mecanismul propriu-zis al transcripiei informaiei genetice din ADN n molecula de ARNm se realizeaz astfel: enzima ARN-polimeraza se leag specific ntr-o poziie a moleculei de ADN, ce corespunde cu nceputul unei gene. Legturile de hidrogen se rup pe poriunea genei respective, segmentul respectiv de caten se rotete cu 180 n spaiu, servind ca matri pentru sinteza catenei de ARNm. ARN-polimeraza asigur ncatenarea corect a ribonucleotidelor existente n nucleu. Dup ce s-a realizat transcripia, se refac legturile de hidrogen ntre catenele moleculei de ADN. De o foarte mare importan este descoperirea c procesul de transcripie la nivelul unei gene se realizeaz pe o singur caten de ADN. Aa se explic faptul c o gen deine informaia genetic necesar sintezei unei singure proteine. n sens mai larg, transcripia se refer i la sinteza celorlalte dou tipuri de ARN implicate n procesul de biosintez a proteinelor. Acidul ribonucleic solubil sau de transfer (ARNs) se sintetizeaz tot pe o matri de ADN. Fiecare tip de ARNs este codificat de cte o singur secven de nucleotide din ADN, deci de cte o

gen. Acidul ribonucleic ribozomal (ARNr) este produsul direct al mai multor gene. Detalii despre ARNs i ARNr au fost precizate ntr-un paragraf anterior.

2.4.2. Translaia informaiei genetice

Translaia este mecanismul prin care secvena codonilor din ARNm este tradus ntr-o anumit succesiune de aminoacizi ce intr n constituia unui lan polipetidic. Realizarea procesului de translaie implic participarea mai multor componente celulare ce alctuiesc un aparat de translaie. Aparatul de translaie cuprinde urmtoarele elemente: diferite tipuri de ARNs corespunztoare tipurilor de aminoacizi, aminoacizii, ribozomii, enzimele activatoare ale aminoacizilor, cofactorii energetici, ATP i GTP, factori de iniiere, alungire i terminare a sintezei lanului polipeptidic. Pentru sinteza celular a proteinelor este necesar o anumit cantitate de energie, formarea unei singure legturi peptidice necesitnd 0,5 kcal/mol. Aceast energie este asigurat de acidul adenozintrifosforic (ATP) care, prin hidroliz, pune n libertate unul sau doi radicali fosforici elibernd energia corespunztoare: ATP + H2O AMP + P P + 8 kcal/mol. Sinteza proteic se desfoar concomitent cu hidroliza ATP i AMP i doi radicali fosforici din care rezult 8 kcal/mol din care 0,5 kcal/mol sunt folosite pentru realizarea legturii peptidice iar restul de 7,5 kcal/mol pentru meninerea echilibrului reaciei n favoarea sintezei proteice i nu a hidrolizei. O prim etap n sinteza proteinelor o constituie activarea aminoacizilor i formarea complexului aminoacil-ARNs. Activarea aminoacizilor se realizeaz cu ajutorul energiei rezultate din hidroliza ATP i n prezena enzimei aminoacilsintetaza (E). Reacia de activare a aminoacizilor poate fi redat astfel: AA1 + ATP + E AA1 AMP E + ARNs1 ca atare se poate scrie reacia general: aminoacilsintetaza AA1 + ATP + ARNs1 AA1 - ARNs1 + AMP + P P AA1 AMP E + P AA1 - ARNs1 + AMP + E Aminoacizii, dup ce au fost activai, se pot ataa de molecula unui ARNs specific: Cele dou reacii au loc succesiv, sunt catalizate de aceeai enzim (aminoacilsintetaza) i

n urmtoarea faz complexul aminoacil-ARNs se ataeaz de poliribozomi, la nivelul crora are loc iniierea sintezei lanului proteic. Ribozomul asigur de aa manier asocierea acestor elemente nct zona anticodon a ARNs s poat recunoate codonul corespunztor din ARNm, ducnd astfel la o descifrare corect a mesajului genetic. Dup fixarea aminoacidului, ARNs devine

liber putnd transporta alte molecule de aminoacid la nivelul ribozomului. ncatenarea aminoacizilor se realizeaz de ctre enzima peptidiltransferaza i const n realizarea legturilor peptidice ntre gruparea carboxil a unui aminoacid i gruparea aminic a celuilalt (figura 2.7.). Reacia de ncatenare a aminoacizilor poate fi redat astfel: peptidiltransferaza AA1 - ARNs1 + AA2 - ARNs2 + AA3 - ARNs3 + AA1 - AA2 - AA3 + ARNs1 + ARNs2 + ARNs3 +

Fig. 2.7. Reprezentarea schematic a procesului de translaie (dup Kimball, 1978)

ncheierea sintezei catenei polipeptidice se realizeaz cu ajutorul a doi factori proteici care sunt activai n prezena codonilor de ncheiere UAA, UAG i UGA. Ca urmare, catena polipeptidic se detaeaz de ribozomi i de ARNs care a adus ultimul aminoacid. n prezent s-a reuit sinteza unor substane proteice ntr-un sistem celular liber (populaii de celule la care s-a distrus membrana celular), folosind ARNm artificial (M.W. Niremberg, 1961).

Test de autoevaluare
1. Transcripia constituie fenomenul prin care informaia genetic de pe o poriune dintr-o caten de ADN este transcris (copiat) ntr-o molecul de: a. ADN monocatenar ? b. ARN viral ? c. ARN solubil ? d. ARN mesager ? e. ARN ribozomal ? 2. Transcripia mesajului genetic se realizeaz cu ajutorul unei enzime universale denumit: a. ARN polimeraza ? b. ADN polimeraza ? c. reverstranscriptaza ? d. aminoacil - ARNs - sintetaza ? e. fosforilaza ? Enzima aminoacilsintetaza intervine, cu rol catalitic, n urmtoarele etape ale translaiei informaiei genetice: a. legarea amioacidului de ARNs specific ? b. activarea aminoacidului de o molecul de ATP ? c. polimerizarea aminoacizilor n cadrul lanului polipeptidic ? Enzima peptidiltransferaza catalizeaz urmtoarele etape ale translaiei informaiei genetice: a. activarea aminoacidului de o molecul de ATP ? b. polimerizarea aminoacizilor ntr-un lan polipeptidic ? c. ataarea aminoacidului de un ARNs specific ?

3.

4.

5. ncheierea sintezei lanului polipeptidic se realizeaz cu ajutorul a doi factori proteici, activai n prezena codonilor STOP. Acetia sunt: a. CAA, CUA, CGG ? b. UAA, UAG, GUG ? c. CAC, UAG, GUG ? d. UAA, UAG, UGA ? 6. n molecula de ADN, cele patru tipuri de baze azotate se gsesc n urmtoarele combinaii corecte: a. A=T b. A=A c. T=A d. GC e. GG f. CC Bazele azotate pirimidinice din ADN sunt ? a. Adenina i Timina ? b. Citozina i Timina ? c. Adenina i Guanina ? d. Adenina i Uracilul ? e. Citozina i Guanina ? O nucleotid este alctuit din: a. o baz azotat, un radical fosforic i un aminoacid ? b. un zahar, un radical fosforic i o baza azotat ? c. un radical fosforic, o capsomer i un aminoacid ? d. un zahar, un aminoacid i radical fosforic ?

7.

8.

9. Denaturarea i renaturarea ADN sunt determinate de un anumit factor de mediu extern; s se precizeze acest factor: a. radiaia electromagnetic ? b. colchicina ? c. substanele chimice alkilante ? d. temperatura ? e. acidul nitros ? 10. ARNs are trei regiuni distincte; care dintre acestea este responsabil de recunoaterea unui anumit codon din molecula de ARNm: a. regiunea pentru recunoaterea ribozomului ? b. regiunea anticodon ? c. regiunea pentru recunoaterea aminoacidului ? d. regiunea nodoc ? 11. n sinteza replicativ a ADN este implicat enzima: a. ARN polimeraza ? d. ARN fosforilaza ? b. ADN polimeraza ? e. transcriptaza invers ? c. ARN replicaza ? 12. O molecul de ARNm, format numai din uracil (UUUUUU..) codific aminoacidul: a. Triptofan ? b. Arginin ? c. Fenilalanin ? d. Serin ? e. Tirozin ? 13. O molecul de ARNm, format din dou nucleotide, uracil (U) i guanin (G), (UGUGUG..) codific aminoacizii: a. Fenilanalina i Leucina ? b. Tirozina i Histidina ? c. Metionina i Valina ?

d. e.

Cisteina i Valina ? Serina i Lizina ?

14. n codul genetic, trei codoni nu codific aminoacizi ci marcheaz sfritul unui mesaj genetic (codoni STOP); acetia sunt: a. UUU, UAA, UAG ? b. UAA, UAA, UGA ? c. UAA, UAG, UGG ? d. UAG, UAC, UCC ? e. UAA, UAG, UGA ?

2.5. RECOMBINAREA GENETIC LA BACTERII

Recombinarea genetic la bacterii se realizeaz pe urmtoarele ci: transformare, conjugare, sex-ducie i transducie. Transformarea. Prin transformare se nelege transferul intracelular al unui segment de ADN de la o bacterie donor, n genomul unei bacterii receptor. Frecvena cu care se realizeaz transformarea este foarte redus, sub 1%, iar dimensiunea minim a segmentului de ADN transformat este de 450 perechi de nucleotide. Procesul de transformare se realizeaz atunci cnd este o cantitate mare de ADN implicat n proces i n starea de competen a celulelor bacteriene (modificri ale membranei ce permit ptrunderea ADN). Dup ce ADN exogen de la tipul donator a ptruns n bacteria receptoare are loc un fenomen de sinaps ntre cele dou molecule de ADN, n zona complementar, apoi ADN exogen se integreaz n cromozomul bacteriei receptor, n procesul de replicaie al acestuia. Transformarea realizeaz, de obicei, transferul unei singure gene, iar n cazuri mai rare, dou sau trei gene linkate, n cel din urm caz dovedindu-se c genele respective sunt dispuse alturat pe cromozom. Transformarea genetic se realizeaz cu o frecven mai mare la sue diferite ale aceleiai specii de bacterii i mai rar ntre specii diferite, dar nrudite. Conjugarea. Fenomenul de conjugare a fost descoperit n anul 1946 de J. Lederberg i E. L. Tatum, fiind considerat un fenomen de parasexualitate, similar oarecum cu reproducerea sexuat de la organismele eucariote. Conjugarea se realizeaz numai ntre dou bacterii de sex opus, iar sexul este determinat de o plasmid, denumit factor de fertilitate sau sex-factor, notat cu F. Celulele care posed acest factor sunt "mascule", notate cu F+, iar cele ce nu posed acest factor sunt "femele", F-. Factorul de fertilitate se poate gsi liber n citoplasm i n acest caz se replic independent de cromozomul bacteriei, dar n acest caz fenomenul de conjugare se produce cu o frecven destul de redus i anume de 10-5. n unele cazuri, factorul de fertilitate poate fi integrat n cromozomul bacterian, iar aceste celule mascule au fost notate cu Hfr (high frequency of

recombination). ntre celulele Hfr i celulele F-, conjugarea are loc cu o frecven mult mai mare i anume 10-1. Conjugarea a fost studiat la microscopul electronic, descoperindu-se c bacteriile Hfr i F+ posed un apendice filamentos, denumit F-pilus care este absent n celulele femele (F-). Aceti Fpilus (sau sex-pili) realizeaz legtura dintre dou bacterii de sex opus, fiind un fel de tuburi prin care materialul genetic al unei bacterii (F+ sau Hfr) trece total sau parial n celulele F-. Fenomenul de conjugare este strns legat de sinteza ADN. Sex-ducia (F-ducia sau transducia F-mediat) este o alt cale de recombinare genetic la bacterii, descoperit de F. Jacob i E.L. Wollman (1960). Cercetrile care au dus la descoperirea acestui tip de recombinare s-au fcut la E. coli, la o su Hfr, care avea factorul de fertilitate inserat lng gena lac+. n procesul de conjugare dintre o bacterie Hfr lac+ i alta F-lac- ar fi trebuit s apar recombinani pentru gena lac+, foarte trziu, aproape de sfritul transferului de material genetic. S-a constatat c au aprut civa recombinani lac+, foarte devreme. Concluzia a fost urmtoarea: factorul F este eliberat din cromozomul bacterian, dar printr-un proces de crossing-over, ntre cromozom i factorul F are loc un schimb de material genetic, rezultnd un factor de fertilitate recombinat, notat cu F'. Prin trecerea factorului F' ntr-o celul F-, el poate fi inclus n cromozomul bacterian ntr-o regiune omoloag cu regiunea cromozomal pe care o poart, orientnd procesul de conjugare la fel ca n cazul bacteriei Hfr iniiale. Sex-ducia poate fi definit ca fiind procesul prin care gene ale cromozomului bacterian sunt ncorporate n factorul de fertilitate F i pe care le transfer la celulele F- prin procesul de conjugare. n factorul F pot fi incluse diferite gene, deoarece factorul F poate fi integrat n diferite regiuni ale cromozomului. Celulele bacteriene ce prezint factorul F' pot fi transformate n celule Hfr, prin inseria factorului F' n cromozomul bacterian. Transducia este procesul prin care bacteriofagii temperai realizeaz transferul de informaia genetic de la o bacterie la alta. Acest fenomen a fost descoperit de N.D. Zinder i J. Lederberg n anul 1952, la bacteria Salmonella typhimurium, cu ajutorul bacteriofagului P32. Experiena efectuat de cei doi cercettori a constat n urmtoarele: ntr-un tub Davis, separat la mijloc printr-un filtru de sticl poroas ce permite trecerea bacteriofagilor dar nu i a bacteriilor, a introdus n cele dou brae dou sue bacteriene diferite (figura 2.8).

Fig. 2.8. - Evidenierea transduciei bacteriene

Sua LA22 este auxotrof dar cu genotipul fen-tri-met+hia+, deci prezint concomitent dou mutaii biochimice, neputnd sintetiza aminoacizii fenilalanin i triptofan, iar sua LA2 este tot auxotrof dar cu genotipul fen+tri+met-his- pentru alte dou gene, neputnd sintetiza aminoacizii metionin i histidin. Sua LA22 este lizogen, n sensul c, n cromozomul su era integrat profagul P22. Unii bacteriofagi sunt eliberai din cromozomul bacteriei i produc liza acesteia. Bacteriofagii pot trece prin filtrul de sticl, produc liza bacteriei LA2, apoi pot reveni n tubul n care se gsete bacteria LA22 cu care pot stabili din nou relaii lizogene n urma crora pot apare indivizi recombinai prototrofi (de tip slbatic) pentru toate cele patru gene, fen+tri+met+his+. Explicaia acestui fenomen este urmtoarea: bacteriofagul P22 producnd liza bacteriei LA2 include, cu o mic frecven, 1 la 105-107, segmentul de cromozom cu genele fen+tri+ de la aceast su. Stabilind relaii lizogene cu sua LA22, bacteriofagul P22 transfer acest segment n cromozomul acestuia rezultnd recombinani genetici de tip slbatic (fen+tri+met+his+). Cercetrile privind transducia au artat c de obicei se transfer o singur gen, n cazuri rare dou gene i niciodat trei gene. n cazul transferului a dou gene, se demonstreaz c cele dou gene sunt foarte apropiate pe cromozomul bacteriei, servind la stabilirea precis a locilor acestora, deci la alctuirea hrilor genetice cu ajutorul transduciei. Transferul concomitent a dou gene prin fenomenul de transducie a fost denumit cotransducie. Transducia este de dou tipuri: transducie specializat, cnd un bacteriofag transfer numai o anumit gen i generalizat cnd un bacteriofag poate transfera oricare gen dintr-un cromozom bacterian. n cazul transduciei generalizate se poate realiza transferul oricrei gene de la o bacterie donor la o bacterie receptor, deci bacteriofagul transductant poate ncorpora oricare gen i o transfer altei bacterii.

CAPITOLUL 3 EREDITATEA MENDELIAN

Motto: "Gregor Mendel, o figur cu care se poate mndri ntreaga omenire C. Sandu Aldea
Odat cu Mendel, fenomenele biologiei au dobndit dintr-o dat rigoarea matematicienilor. Metodologia, tratarea statistic i reprezentarea simbolic, impun ereditii o ntreag logic intern

Francois Jacob

Apariia lucrrii Versuche ber Pflanzenhybriden n 1866, a naturalistului i matematicianului ceh Gregor Johhan Mendel (1822 1884) a constituit un moment important n istoria biologiei. Gregor Mendel este considerat unul din fondatorii geneticii, datorit teoriei factorilor ereditari, sintez a celor dou legi ale ereditii: legea segregrii caracterelor (legea puritii gameilor) i legea segregrii independente a perechilor de caractere (legea liberei combinaii a factorilor ereditari).

3.1. TERMINOLOGIA FOLOSIT N GENETICA MENDELIAN

n cercetrile sale, G. Mendel a folosit n mod deosebit mazrea, Pisum sativum, plant autogam, care prezint caractere distincte de la o varietate la alta. Caracterele luate n studiu au fost urmtoarele: talia plantelor (nalt sau pitic), culoarea pstilor nemature (galben sau verde),culoarea cotiledoanelor (verde sau galben), suprafaa seminelor (neted sau zbrcit), culoarea tegumentului boabelor (alb sau cenuie), poziia florilor (axial sau terminal), forma pstilor (dreapt sau gtuit ntre semine). Aceste perechi de caractere au fost numite mai trziu alelomorfe (W. Bateson i E. R. Saunders, 1902), din care a rezultat termenul de alele. Determinanii ereditari au fost numii i factori ereditari (indicai ulterior prin noiunea de gen). nainte de a analiza mecanismul de transmitere a caracterelor n procesul de hibridare este necesar s fie definite cteva noiuni de baz, care vor servi pentru nelegerea lui.

Hibridarea este ncruciarea dintre doi indivizi, care se deosebesc prin una sau mai multe perechi de caractere. Prinii (genitorii) care particip la hibridare se noteaz cu P (lat. parentes prini) iar urmaii (descendenii) se noteaz cu F (lat.-fillii-copii). n funcie de numrul de perechi de caractere prin care se deosebesc prinii, exist mai multe tipuri de hibridare: monohibridarea (o pereche de caractere), dihibridarea (dou perechi de caractere) etc. n concepia lui G. Mendel, determinanii genetici au fost numii factori ereditari , n genetica modern fiind nlocuii prin termenul de gene. Gena este unitatea elementar ce deine informaia genetic a unui caracter ereditar, transmis de la prini la urmai. Gena ocup un loc precis n cromozom (locus). n celulele somatice, cromozomii omologi, unul de origine matern, cellalt de origine patern, vor avea i loci omologi, ocupai de gene alele. Dac alelele sunt identice (AA sau aa) indivizii se numesc homozigoi pentru aceast pereche de gene, iar cnd alelele sunt diferite (Aa) indivizii sunt considerai heterozigoi. Ereditatea mendelian presupune, n principal, interaciunea dominan-recesivitate ntre genele alele: alela care se manifest fenotipic la hibrizii F1 este dominant, iar perechea sa, care nu se exteriorizeaz prin caracterul respectiv, este recesiv. Hibridrile de orice nivel, ofer posibiliatea unei duble analize: sub aspect genotipic i sub aspect fenotipic. Genotipul reprezint totalitatea genelor unui individ sau constituia genetic a acestuia. Noiunea de genotip se utilizeaz ns i n sens restrns, numai pentru una sau cteva perechi de gene alele (AA, Aa, aa, AABB, AaBb etc). Fenotipul reprezint totalitatea caracterelor morfologice, fiziologice, biochimice i comportamentale ale individului, care rezult din interaciunea genotipului cu mediul.

3.2. LEGILE MENDELIENE ALE EREDITII

n lucrrile i manualele care s-au ocupat de opera lui Mendel, rezultatele la care a ajuns el au fost prezentate de diferii autori n mod diferit. n legtur cu legile lui Mendel sunt menionate diferite formulri: legea uniformitii hibrizilor n prima generaie, legea dominanei, legea puritii gameilor, legea segregrii caracterelor, legea liberei combinri a caracterelor numit i legea independenei caracterelor. Dup prerea noastr din lectura lucrrii lui Mendel Experiene asupra hibrizilor de plante, se desprind dou legi:

1. Legea segregrii sau a disjunciei caracterelor n generaia a doua hibrid (F2) (datorit separrii sau segregrii n meioza hibridului F1 a alelelor dominante i recesive i unirii ntmpltoare a gameilor pentru formarea generaiei F2). 2. Legea combinrii libere a caracterelor sau a segregrii independente a acestora (apariia la ncruciarea polihibrid, n urma segregrii i combinrii libere a caracterelor, a unor noi combinaii la descendeni).

3.2.1. Legea segregrii caracterelor (legea puritii gameilor)

Gregor Mendel a efectuat un numr impresionant de mono, di i trihibridri la mazre (Pisum sativum L.) i la alte specii din genurile: Phaseolus, Mirabilis, Cirsium, Melandrium, Zea, Antirrhinum, Hieracium etc. Segregarea caracterelor ereditare a fost formulat, n urma analizei fenotipice i genotipice a unor monohibridri, dei poate fi demonstrat i n cazul celorlalte tipuri de hibridare. Monohibridarea este ncruciarea ntre indivizi ce se deosebesc printr-o singur pereche de caractere. G. Mendel a ncruciat o varietate de mazre cu semine galbene, cu o varietate cu semine verzi, ambele homozigote (pure din punct de vedere genetic). n generaia F1, au rezultat numai plante cu semine galbene. Caracterul culoare galben a fost numit dominant, iar perechea sa, culoare verde, recesiv (lat. recesere ascuns). n urma autofecundrii plantelor din generaia F1, a rezultat generaia F2, n care, s-au obinut dou grupe fenotipice: (75%) semine galbene i (25%) semine verzi, prin urmare, un raport de segregare fenotipic de 3:1. Notnd caracterul culoare galben cu A, iar verde cu a, n figura 3.1. se pot analiza sub aspect fenotipic i genotipic, prinii, generaiile F1, F2 i F3.

Fig. 3.1. Structura genotipurilor i a fenotipurilor n cazul monohibridrii G. Mendel a explicat segregarea factorilor ereditari astfel: n celulele somatice, factorii ereditari se gsesc sub form de pereche (AA, Aa, aa). n urma meiozei, factorii ereditari segreg, astfel c, gameii vor avea numai cte un singur reprezentant din fiecare pereche (A sau a), deci sunt puri din punct de vedere genetic. Prinii sunt homozigoi (AA i aa) i vor produce cte un singur tip de gamei (A sau a). n generaia F1 toi indivizii sunt identici fenotipic (semine galbene) i genotipic (Aa). Indivizii generaiei F1, heterozigoi, vor forma dou tipuri de gamei pentru fiecare sex: 50% A i 50% a. Combinarea probabilistic a gameilor de sex diferit, face ca n F2 s rezulte trei combinaii genotipice, (25%) AA, 2/4 (50%) Aa i (25%) aa (raportul de segregare genetic 1:2:1) i dou grupe fenotipice semine galbene i (25%) semine verzi (raportul de segregare fenotipic 3:1). R. R. Punnett imagineaz un ah de combinaii a gameilor celor dou sexe, dnd posibilitatea identificrii rapide a tuturor genotipurilor i fenotipurilor din generaia F2:

Gamei 50% A 50% a

Gamei 50% A 25% AA 25% Aa 50% a 25% Aa 25% aa

Gregor Mendel a efectuat monohibridri i cu alte perechi de caractere, constatnd acelai lucru: n generaia F1 au rezultat indivizi asemntori unui printe, iar n generaia F2, segregarea s-a realizat ntr-un raport foarte apropiat de 3:1 (tabelul 3.1.). Tabelul 3.1. Rezultatele monohibridrilor la mazre (obinute de G. Mendel)
Caracterul Forma seminelor Culoarea cotiledoanelor Culoarea tegumentului Consistena pstilor Culoarea pstilor Dispoziia florilor Forma plantei Total Dominante (D) Neted Galben Colorat Tare Verde Axilar nalt nsuiri Recesive Dominante (r) Zbrcit 5.474 Verde 6.022 Alb 705 Moale 862 Galben 428 Terminal 651 Pitic 187 14.949 Raportul D/r 2,98:1,01 3,01:0,99 3,03:0,96 2,98:1,02 2,95:1,05 3,03:0,96 2,95:1,04 2,99:1,01

Recesive 1.850 2.001 224 299 152 207 277 5010

Monohibridrile efectuate de Gr. Mendel, au fost denumite mai trziu monohibridri de tip Pisum. Dup redescoperirea legilor mendeliene, imediat dup anul 1900, s-au realizat monohibridri i la diferite specii de animale. Obinndu-se rezultate asemntoare celor de la plante, s-a demonstrat, universalitatea legilor mendeliene. n anul 1901, Bateson W. a ncruciat diferite rase de gini, care se deosebeau prin forma crestei: mazre, trandafir i simpl. Formele de creast mazre i trandafir sunt dominante fa de forma "simpl", iar n generaia F2 segregarea s-a produs n raportul 3:1 (Raicu P. 1980). Zoologul francez Cunot L. (1902) a ncruciat oareci cu blana de culoare gri cu oareci de culoare alb, obinnd n generaia F1 oareci gri, iar n generaia F2 segregarea s-a produs n raportul 3:1. Experiene similare s-au fcut apoi la foarte multe specii de animale, ntrind ideea de universalitate a legilor mendeliene.

3.2.2. Legea segregrii independente a perechilor de caractere

Cea mai simpl form de polihibridare este dihibridarea, denumire introdus pentru prima dat de ctre Hugo de Vries (1900). n acest caz, sunt urmrite dou perechi de caractere. La ncruciarea a dou soiuri de mazre: plante cu semine galbene i netede x, plante cu semine verzi i zbrcite, n F1, G. Mendel a obinut plante cu semine galbene i netede. n F2, perechile de caractere analizate separat, au segregat dup raportul de 3:1 i anume: 75% semine galbene i 25% semine verzi, precum i 75% semine netede i 25% semine zbrcite. Analiznd ns modul cum apar mpreun cele dou perechi de caractere, G. Mendel a constatat c raportul dintre ele este: 56,25% semine galbene i netede; 18,75% semine galbene i zbrcite; 18,75% semine verzi i netede; 6,25% semine verzi i zbrcite. Din aceast analiz, ajunge la concluzia c pentru fiecare pereche de caractere segregarea se produce independent, iar raportul fenotipic pentru ambele caractere este de 9:3:3:1. Caracterele s-au separat n timpul formrii gameilor i s-au combinat n timpul fecundrii n toate modurile posibile, formnd cele patru grupe fenotipice. Aceste rezultate i-au permis lui Mendel s emit legea independenei caracterelor sau a liberei combinri a factorilor ereditari. Dup prerea lui, cei doi gamei care particip la fecundare nu-i contopesc caracterele n hibrid, ci ele stau alturate unele de altele, pentru ca apoi s se despart din nou n meioz spre a produce, prin fecundare, generaia a doua (F2).

Pe baza celor artate la monohibridare se poate alctui n mod analog, un ah de combinaii lund n considerare, de data aceasta, dou perechi de caractere care se pot nota cum urmeaz: A = neted B = galben a = zbrcit b = verde

Mecanismul ahului devine simplu dac se are n vedere faptul c n gamei numrul de cromozomi, respectiv de caractere alele, este pe jumtate dect n celulele somatice. Pentru ncruciarea mazrii cu semine netede i galbene cu mazre cu semine zbrcite i verzi, avnd n vedere c individul este rezultatul fecundrii a doi gamei, formula prinilor va fi: AABB x aabb. Gameii prinilor formai prin reducerea cromatic vor avea formula: AB i ab. Din combinarea lor se va nate generaia F1, cu formula AaBb. Hibridul F1 formeaz patru tipuri de gamei pentru fiecare sex, din combinarea crora, doi cte doi, rezult generaia F2. Gameii se formeaz n numr egal att pentru sexul femel, ct i pentru sexul mascul. Din combinarea ntmpltoare a celor patru grupe de gamei, apar 16 combinaii de caractere, 9 genotipuri i 4 fenotipuri (fig. 3.2.). Fenotipurile apar n raportul de 9:3:3:1, adic: 9/16 indivizi neted galben (AABB, AABb, AaBB, AaBb, AABb, AaBb, AaBB, AaBb, AaBb); 3/16 indivizi verde neted (AAbb, Aabb, Aabb); 3/16 indivizi zbrcit galben (aaBB, aaBb, aaBb); 1/16 indivizi zbrcit verde (aabb). Din analiza celor 16 combinaii de caractere rezult c acestea reprezint 9 genotipuri, care segreg n raportul: 1/16 AABB:2/16 AABb:2/16 AaBB:4/16 AaBb:1/16 AAbb:2/16 Aabb:1/16 aaBB:2/16 aaBb:1/16 aabb (sau 1:2:2:4:1:2:1:2:1)

Fig. 3.2. Dihibridare ntre un soi de mazre cu bobul galben-rotund i unul cu bobul verde-zbrcit

Ceea ce i atrage atenia lui G. Mendel n mod deosebit n aceast experien, este apariia combinaiilor noi de caractere AAbb i Aabb (semine netede i verzi) precum i aaBB i aaBb (semine zbrcite i galbene). Acesta este motivul care l conduce la formularea celei de a doua legi cu privire la independena caracterelor sau combinarea liber a caracterelor. Aceleai constatri se pot face analiznd i o trihibridare. Dac se consider, de exemplu, c prinii au genotipurile AABBCC i aabbcc, hibridul din F1 cu genotipul AaBbCc va forma 8 tipuri de gamei: ABC, ABc, AbC, aBC, Abc, aBc, abC, abc. Grupnd combinaiile hibride n F2 se constat c cele 64 de combinaii genotipice segreg n opt grupe fenotipice, dup cum urmeaz: 27 posed trei caractere dominante (A,B,C) 9 posed dou caractere dominante i unul recesiv (A,B,c) 9 posed dou caractere dominante i unul recesiv (A, b, C) 9 posed dou caractere dominante i unul recesiv (a, B, C) 3 posed un caracter dominant i dou recesive (A, b, c) 3 posed un caracter dominant i dou recesive (a, B, c) 3 posed un caracter dominant i dou recesive (a, b, C) 1 posed trei caractere recesive (a, b, c) Rezult deci opt fenotipuri, repartizate n raportul: 27:9:9:9:3:3:3:1. Rezultatele obinute n urma trihibridrii de tip Pisum, confirm legea segregrii independente a caracterelor.

3.3. NCRUCIAREA ANALIZATOARE

n experienele pe care le-a executat G. Mendel la ncruciarea mazrei cu semine de culoare galben cu mazrea cu semine de culoare verde s-au obinut n F2, aa cum s-a artat, semine de culoare galben i semine de culoare verde n raportul 3:1. Seminele de culoare galben din F1 au produs, deci, n F2 plante cu semine att de culoare galben ct i de culoare verde. Aceasta dovedete c ele aveau structur genetic heterozigot. Pentru a analiza structura genetic a descendenilor hibrizi cu fenotip dominant se folosete retroncruciarea sau backcrossarea cu printele recesiv sau cu un tester recesiv, metod care poart numele de testcross. n fond, testcross-

ul ajut la descoperirea felurilor de gamei formai de un individ dominant, precum i dac el este homozigot sau heterozigot pentru anumite caractere. Homozigoii dominani produc o descenden cu fenotipul parental, n timp ce heterozigoii dominani n descendena testcross segreg (figura 3.3).

Fig. 3.3. Schema segregrii n cazul testcross-ului unor descendeni hibrizi cu fenotip dominant

(AA sau aa)

CAPITOLUL 4 TEORIA CROMOZOMIC A EREDITII

4.1. GENE I CROMOZOMI

Elaborarea teoriei celulare de ctre M. J. Schleiden i T. Schwann (1838) a marcat nceputul unor noi descoperiri la nivel celular. Dup descoperirea i descrierea mecanismului mitozei (W. Fleming, 1882) i a meiozei (E. van Beneden, 1883), W. Waldeyer (1888), descoper c n momentul diviziunii nucleului, acesta se mparte ntr-un anumit numr de corpusculi pe care ia numit cromozomi. Cercetrile efectuate de W. S. Sutton (1902) la cosa (Brachystola magna), aduc dovada localizrii factorilor ereditari mendelieni pe cromozomi, constatnd c fiecare cromozom are o anumit caracteristic, care se pstreaz constant n timpul mitozei i meiozei. Sutton a fost primul citolog care a atras atenia asupra asemnrii dintre disjuncia cromozomilor n meioz i segregarea caracterelor alelomorfe n procesul de formare a gameilor. n 1902, T. Boveri face aceleai constatri la ariciul de mare (Paracentrotus lividus). El studiaz i evoluia ovulelor fecundate concomitent de 2 spermatozoizi din care rezult gamei triploizi (2n=54), constatnd c numai indivizii diploizi (2n=36) sunt normali. Boveri ajunge la concluzia c dezvoltarea normal a indivizilor este condiionat de prezena unor garnituri complete de cromozomi, pe care se afl localizai factorii ereditari. E. B. Wilson (1905) studiind meioza la insectele din genul Protenor, constat c la masculi 2n=13 cromozomi, iar femelele posed n celulele somatice 2n=14 cromozomi. Femelele vor produce gamei identici cu n=7, n timp ce masculii vor avea dou tipuri de gamei, cu n=7 i n=6. Dac un ovul va fi fecundat de un spermatozoid cu 7 cromozomi, va rezulta o femel, iar cnd spermatozoidul are n=6 cromozomi va rezulta un mascul. Aceste constatri au dovedit c sexul organismelor este determinat ereditar, de gene localizate n anumii cromozomi. T.H. Morgan i coala sa a preluat aceast ipotez, dezvoltnd-o i aprofundnd-o, formulnd o teorie unitar denumit teoria cromozomic a ereditii. n concepia lui Morgan, genele sunt plasate n cromozomi n anumite poziii denumite loci (singular locus), sub form de pereche, determinnd nsuiri contrastante ale aceluiai caracter.

Prin mutaia unei gene normale (sau de tip slbatic) a aprut o gen nou, dar care ocup acelai locus n cromozomii omologi. Acest cuplu de gene ce determin nsuirea normal i cea mutant a unui caracter, a primit denumirea de gene alele. Genele ce determin caracterul normal se noteaz cu liter mare sau cu liter mic i cu semnul + (de exemplu A sau a+ ) iar gena alel cu liter mic (a). Gena este considerat unitate ereditar funcional, mutaional i de recombinare genetic. Studiind un numr mare de masculi i femele de Drosophila melanogaster, Morgan a artat c femelele au o pereche de cromozomi identici (XX) iar masculii, un singur cromozom X sub form de bastona i unul neomolog numit cromozom Y sub forma unui bastona frnt. Descoperirea cromozomilor sexului constituie o alt dovad c genele sunt plasate n cromozomi. Tot la Drosophila melanogaster, s-a constatat c la unii indivizi poate lipsi un cromozom sau poate exista un cromozom n plus. Aceasta fiind corelat cu absena unui caracter sau prezena unui caracter , constituie nc un argument c genele sunt plasate n cromozomi (C. B., Bridges, 1921). n urma acestor rezultate experimentale s-au elaborat cele trei teze ale teoriei cromozomice a ereditii: 1. - plasarea liniar a genelor pe cromozomi; 2. - transmiterea nlnuit a genelor( linkage); 3. - schimbul reciproc de gene ntre cromozomii omologi (crossing-over).

4.2. PLASAREA LINIAR A GENELOR PE CROMOZOMI

n experienele sale, Mendel a analizat, n mod ntmpltor, caractere ce erau localizate n perechi diferite de cromozomi, fapt ce permite segregarea i combinarea independent a caracterelor. Morgan a urmrit ntr-un numr foarte mare de ncruciri, transmiterea de la o generaie la alta a unor gene localizate n acelai cromozom. S-a constatat c exist un numr mult mai mare de gene dect cromozomi, chiar dac n unele cazuri, o gen poate determina mai multe caractere. Rezultatele analizelor genetice nu se pot

explica dect dac se admite c genele sunt plasate linear n cromozomi, ocupnd un loc precis denumit locus.

4.3. TRANSMITEREA NLNUIT A GENELOR (LINKAGE)

Segregarea independent a caracterelor i libera combinare a acestora rezult din faptul c n timpul meiozei cromozomii omologi se despart i se distribuie ntmpltor, ntr-un gamet sau altul. Potrivit acestor legi genele alele sunt localizate n perechi diferite de cromozomi. T. H. Morgan i colaboratorii si au efectuat o experien la Drosophila melanogaster (fig. 4.1). S-a ncruciat o femel cu corp gri i aripi normale (b+vg+/b+vg+) cu un mascul ce prezenta caractere mutante, corp negru i aripi vestigiale (bvg/bvg) n prima generaie au rezultat indivizi cu corp gri i aripi normale. Dac un mascul heterozigot din generaia F1 este retroncruciat cu o femel homozigot dubl mutant, n generaia F2 au rezultat numai dou grupe fenotipice de indivizi, ca n cazul unei monohibridri, n raport de 1:1 i nu patru cte ar fi trebui sa apar, n raport de 1:1:1:1. Rezultatele acestei experiene au artat c genele ce determin culoarea corpului i forma aripilor sunt plasate pe acelai cromozom i se transmit mpreun la descendeni, fenomen pe care n denumete linkage n acest exemplu se poate vorbi de un linkage complet fenomen rar ntlnit n natur. La Drosophila melanogaster, la mascul, fiind sexul heterogametic (XY) ,nu are loc recombinarea genetic deoarece cromozomii X i Y nu sunt omologi iar ntre ceilali cromozomi somatici nu se realizeaz n profaza meiozei chiasme (C. D. Darlington, 1935). Fenomenul acesta se mai ntlnete i la alte specii de diptere la care sexul mascul este heterogametic sau la unele specii de lepidoptere, la care sexul femel este heterogamet.

Fig. 4.1. nlnuirea complet a genelor la Drosophila melanogaster Studiul linkage-ului la cele 500 de mutante de la Drosophila, studiate de T. Morgan, manifest tendina de a se grupa n patru grupe: grupa I 141 mutante; grupa II 228 mutante; grupa III 156 mutante i grupa IV 12 mutante. Existena a patru grupe de nlnuire este nc o dovad c genele sunt plasate n cromozomi i n plus, exist o corelaie evident ntre lungimea cromozomilor i numrul de gene pe care le conin. Linkage-ul constituie o tez de baz a teoriei cromozomice a ereditii, conform creia genele localizate pe acelai cromozom se transmit la descendeni n bloc, formnd o singur grup de linkage.

4.4. SCHIMBUL RECIPROC DE GENE NTRE CROMOZOMII OMOLOGI (CROSSING-OVER)

Bateson i Punnett au elaborat teoria cuplrii i repulsiei, prin care cutau s demonstreze c n procesul de hibridare pot avea loc fenomene de cuplare i recombinare a genelor. T. H. Morgan a nlocuit termenul de cuplare cu cel de linkage iar cel de repulsie cu termenul de crossingover. Fenomenul prin care se realizeaz schimbul de gene alele sau segmente cromatidice nesurori ntre cromozomii omologi n timpul meiozei se numete crossing-over. Existena acestui fenomen dovedete c linkage-ul nu este ntotdeauna complet , ca atare ,crossing-over-ul este un linkage incomplet. Pentru a demonstra schimbul de gene ntre cromozomii omologi, Morgan a folosit urmtoarea experien: a ncruciat un mascul de culoare neagr i cu aripi vestigiale cu o femel cu corpul de culoare gri i aripi normale(figura 4.2).

Fig.4.2.-Fenomenul de crossing-over la Drosophila melanogaster n generaia F1 a obinut o descenden uniform fenotipic , cu corpul de culoare gri i aripi normale i genotipic heterozigot. Dac se retroncrucieaz o femel din generaia F1 cu un mascul cu ambele caractere mutante , rezult n generaia F2 patru grupe fenotipice: dou grupe fenotipice parentale i dou grupe fenotipice noi , n urmtoarele proporii: corp gri-aripi normale, 41,5% , corp negru-aripi vestigiale, 41,5% , corp gri-aripi vestigiale , 8,5% , i corp negru-aripi normale ,8,5%. Se observ c raportul de segregare nu este cel ateptat n urma unei retroncruciri 1:1:1:1. Formele noi rezultate ,n proporie mult mai mic dect cele parentale , sunt determinate de schimbul de gene ntre cromatidele nesurori ale cromozomilor omologi , fiind denumite i forme recombinate. Raportul de segregare , deosebit de cel mendelian , se datorete faptului c femela heterozigot formeaz patru tipuri de gamei , dou de tip parental (b+vg+i bvg)i dou de tip nou (b+vg i bvg+) , care se fecundeaz cu unicul tip de gamei ai masculului (bvg). Valoarea crossing-over-ului se exprim n % i ne arat cu ct fora de nlnuire a genelor este mai mic , frecvena crossing-over-ului este mai mare. Valoarea procentual cu care se manifest crossing-over-ul se mai numete i valoare de schimb sau fora nlnuirii.

4.5. HRILE CROMOZOMICE

Tezele teoriei cromozomice a ereditii au constituit baza teoretic i practic pentru elaborarea hrilor cromozomice sau genetice. Hrile cromozomice constituie reprezentarea grafic a cromozomilor i a genelor care alctuiesc diferite grupe de linkage, genele fiind plasate pe cromozomi la distane relative exprimate n procente de crossing-over. Alctuirea hrilor cromozomice presupune trei etape de lucru:

- obinerea mutantelor de la caracter normal sau slbatic; - stabilirea grupelor de linkage; - determinarea ordinii i distanelor dintre gene n cadrul fiecrei grupe de linkage. Dup ce s-au realizat un numr ct mai mare de forme mutante, genele respective se repartizeaz n grupe de nlnuire. Pentru a stabili aceste grupe se efectueaz un numr mare de ncruciri i retroncruciri ntre indivizi normali i mutani sau ntre indivizi mutani. Dac segregarea se face dup raporturile mendeliene, se trage concluzia c genele respective se gsesc n grupe diferite de nlnuire, iar dac n urma retroncrucirilor se obin n proporie mai mare fenotipurile parentale, ntre genele respective se manifest linkage, complet sau incomplet, deci ele sunt plasate n acelai cromozom. Pentru determinarea ordinii i distanei dintre gene s-a plecat de la constatarea c frecvena crossing-over-ului este o funcie direct proporional cu distana dintre gene. Distanele dintre gene se exprim n uniti de recombinare, denumite uniti Morgan sau morganide. Fiecare unitate de recombinare corespunde cu 1% crossing-over, iar 1% crossing-over este egal cu 1 unitate de pe harta cromozomic. Prima hart cromozomic s-a ntocmit la Drosophila melanogaster iar apoi la Zea mays, Antirrhinum majus, Lathyrus odoratus, Hordeum vulgare etc. Frecvena crossing-over-ului nu poate depi valoarea maxim de 50%. Dac se observ cele dou hri cromozomice, se constat c pe hart apar i distane mai mari de 50 uniti. Acest lucru se explic astfel: ntre genele ndeprtate apar crossing-overe duble i n acest caz distanele mari se calculeaz prin nsumarea distanelor mai mici dintre genele intermediare. n concluzie, distane dintre gene figurat pe harta cromozomic nu corespunde cu procentul de crossing-over dect n cazul genelor apropiate ntre care nu pot avea loc crossing-overe duble.

4.6. HRILE CITOLOGICE

Localizarea genelor pe cromozomi s-a putut stabili prin determinarea procentului de crossing-over, alctuindu-se hrile cromozomice. Se pune ntrebarea dac nu se pot localiza genele pe cromozom, folosind elementele de structur ale acestuia, mai precis, diferenele de structur ce apar de-a lungul lui i care s corespund genelor. Acest lucru a devenit posibil, prin descoperirea i studierea cromozomilor gigantici din celulele glandelor salivare ale larvelor de Drosophila melanogaster, deoarece au dimensiuni mari i pot fi studiai uor n interfaz. La aceti cromozomi, s-au evideniat microscopic o serie de benzi transversale, unele heterocromatice (dense) i altele eucromatice (clare). La nivel molecular, cromozomii gigantici pot fi privii ca o multiplicare de

cteva sute sau mii de ori a macromoleculei de ADN, locii suprapunndu-se n paralel i deci, un locus de pe aceti cromozomi reprezint o amplificare a unicului locus de pe fibra de ADN din cromozomii somatici. Acest lucru a permis studierea amnunit a cromozomilor gigantici, la care s-au identificat peste 5000 de benzi transversale, iar fiecare fiind alctuit din 16 puncte. Localizarea acestor benzi este constant pe cei patru cromozomi, fapt ce a permis identificarea i numerotarea lor. Lungimea total a cromozomilor gigantici (1180 ) a fost mprit n 100 de diviziuni, repartizate astfel: cromozomul I, 0 20 diviziuni; cromozomul II, 20 60 diviziuni; cromozomul III, 60 100 diviziuni. Cromozomul IV fiind foarte mic nu a intrat n aceast mprire. Fiecare diviziune a fost mprit n ase subdiviziuni notate cu literele: A, B, C, D, E, F. Fiecare subdiviziune cuprinde un anumit numr de benzi transversale. C. B. Bridges (1944) a stabilit o coresponden ntre genele localizate pe cromozomii obinuii i benzile transversale de pe cromozomii gigantici. Distana dintre genele de pe harta cromozomic i cea citologic nu coincide ntotdeauna, mai ales n regiunile centromerice. Hrile genetice au o importan deosebit din punct de vedere teoretic i practic. Elaborarea hrilor genetice a permis s se cunoasc o serie de aspecte cum ar fi: neomogenitatea funcional liniar a cromozomilor, explicarea unor aberaii cromozomice, importana genetic a fiecrui cromozom, n funcie de felul genelor i numrul lor. Cunoaterea precis a locilor genelor pe cromozomi deschide perspective mari n cunoaterea modului de transmitere a unor caractere i n modificarea constelaiei genetice a organismelor pin metode de manipulare a materialului genetic.

CAPITOLUL 5 DETERMINISMUL GENETIC AL SEXULUI

5.1. GENERALITI
Sexualitatea a aprut pe o anumit treapt a evoluiei plantelor i animalelor, reprezentnd un avantaj, deoarece asigur reproducerea organismelor, recombinarea genetic, vigoarea hibrid a descendenei i trecerea de la starea haploid la cea diploid. Aspectele pe care le ridic acest domeniu al biologiei sunt pe ct de variate, pe att de complexe. Este vorba de biologia, de transmiterea i diferenierea sexului, precum i de posibilitatea de dirijare a lui. Determinarea i dirijarea sexelor prezint un deosebit interes pentru practic. Dei s-a lucrat mult n direcia gsirii unor posibiliti pentru a putea dirija raportul dintre sexe, s-au fcut puine progrese. Ct de important ar fi pentru noi s putem dirija raportul dintre sexe la plante sau animale, dup necesiti de ordin economic? S putem, de exemplu, reduce la animale numrul de masculi, mrind numrul de femele n scopul nmulirii mai rapide a acestui sex (pentru producia de lapte, ou .a.). Pentru plantele de cultur ar prezenta importan, de exemplu, transformarea unor plante dioice n plante monoice sau invers; s putem obine, cum ar fi la cnep, prin tratarea seminei, numai cnep mascul (de var), care s fac posibil recoltatul ei mecanic. Faptul c, n culturile obinuite de cnep, ambele sexe sunt intercalate, recoltatul plantelor mascule se face manual. n direcia acestor probleme s-ar putea gsi multe exemple. Diferenierea sexelor, att n regnul vegetal ct i animal, este legat de modul de nmulire sexuat. Din acest punct de vedere organismele se pot clasifica n: organisme unisexuate, cu diferene exclusiv masculin i feminin; organisme bisexuate (hermafrodite) cu difereniere ambigen, care produc att gamei masculi ct i femeli; organisme pseudohermafrodite cu difereniere ambigen care, dei posed organe pentru producerea gameilor de ambele sexe, produc gamei numai de un sex. Sub aspectul diferenierii sexuale, lumea vie este att de variat, nct o ncercare de clasificare a lor nu este chiar att de uoar. Deosebirea dintre sexe se numete gonochorism i este difereniat prin dou categorii de caractere: caractere sexuale primare i caractere sexuale secundare. Primele sunt datorate prezenei glandelor sexuale, care produc un anumit tip de celule sexuale, diferite la mascul fa de femel i anexele acestor glande sexuale. Caracterele sexuale secundare se evideniaz sub aspect

morfologic i fiziologic diferit de cele dou sexe; sunt determinate de hormonii secretai de glandele genitale i nu asigur direct procesul gametogenezei, dar joac un rol n nmulirea sexual. Caracterele sexuale secundare, spre deosebire de cele primare, apar ntr-o anumit perioad, n cursul dezvoltrii individuale. Totalitatea caracterelor sexuale secundare, care fac ca cele dou sexe s se deosebeasc ntre ele, poart numele de dimorfism sexual. Dimorfismul sexual este mai accentuat la organismele inferioare i mai puin accentuat la cele superioare. El poate merge att de departe la unele specii, nct masculii, fa de femele, pot s aib dimensiuni foarte mici. Aa de exemplu, la viermele marin Bonellia viridis, femela are form de sac, cu o prelungire n form de tromp i o lungime pn la 0,3 m. Masculul este de forma unui filament de 1-2 mm (aproape de 300 ori mai mic dect femela) i triete ca parazit n esofagul sau oviductul femelei. n general, la speciile inferioare i la unele insecte, femela este mai bine dezvoltat dect masculul. La peti, reptile, dimorfismul sexual este aproape imperceptibil. El se accentueaz n favoarea masculului la vertebratele superioare. La psri, deosebirile sunt de culoare, form, mrime etc.; la mamifere aceste deosebiri se refer la mrime, pr, coarne etc.

5.2. DETERMINISMUL CROMOZOMIC AL SEXELOR

Observaiile cu privire la proporia dintre sexe, att la plante ct i la animale, au dus la acumularea de date, din care s-a dedus c, n natur, indivizii masculi i femeli sunt n numr aproximativ egal. La sfritul secolului trecut, cercetndu-se meioza la unele insecte, s-a constatat c exist o distribuire neuniform a cromozomilor; (spermatozoizii aveau un numr inegal de cromozomi). Aceast repartiie inegal a substanei cromatice n unele celule germinale, a fost sesizat de Henking (1891), Mac Clung (1901), Castle (1903) i Wilson (1905 1940). Ei i-au exprimat totodat prerea c, cromozomul impar, deosebit ca form i mrime poate fi pus n legtur cu determinarea sexelor. Repartiia inegal a substanei cromatice duce la stabilirea raportului de 1:1 ntre sexe, iar mecanismul de distribuire inegal a cromozomilor este o problem ereditar. Din cauza distribuirii inegale a cromozomilor, n meioz nu toi au pereche sinaptic. Cromozomul unic migreaz singur la unul din polii celulei, fr ca la cellalt pol s mearg omologul su. Din aceast cauz se nasc celulele sexuale cu un numr par sau impar de cromozomi. Cromozomii sexului pot alctui n celulele somatice perechi n care unul s fie diferit sau la fel cu cellalt: La Drosophila melanogaster unul este drept, iar cellalt puin curbat. Cromozomii

normali au fost notai cu litera X, iar cei curbai cu Y (fig. 5.1.). Sexul care are cei doi cromozomi sexuali identici s-a notat cu XX, iar cellalt, la care ei sunt inegali, cu XY sau XO, cnd Y lipsete. n procesul de gametogenez sexul XX formeaz un tip de gamei (cu cromozomul X) i este denumit sex homogametic, iar sexul XY sau XO formeaz dou tipuri de gamei Fig. 5.1. Cariotipul la Drosophila melanogaster denumit heterogametic. Se cunosc dou tipuri principale de determinare cromozomic a sexelor: tipul Drosophila i tipul Abraxas. Tipul Drosophila. Aa dup cum arat i numele, acest tip cromozomal de determinare a sexului a fost studiat mai nti la Drosophila. El se ntlnete ns i la alte insecte, viermi, molute, echinoderme, peti, batracieni, mamifere i la unele plante. La organismele ce se ncadreaz n acest tip de determinare a sexului, cnd are loc reducerea cromatic n timpul maturaiei celulelor sexuale, toate ovulele primesc un cromozom X, pe cnd spermatozoizii, 50% primesc cromozomul X, iar 50% cromozomul Y. Oul ce va rezulta din fecundarea cu un spermatozoid ce posed cromozomul X va fi femel (XX), pe cnd din ovulul fecundat de un spermatozoid cu cromozomul Y va rezulta un mascul XY. Schematic aceasta se poate prezenta n felul urmtor: P1 (2n).. XX x XY Gamei (n).X X i Y F1 (2n).. XX i XY Tipul Drosophila cuprinde trei subtipuri: - Subtipul Lygaeus, la care femela posed doi cromozomi XX, iar masculul, unul X i altul Y. Este de fapt tipul clasic, cunoscut sub numele de tipul Drosophila; - Subtipul Protenor, la care femela posed cei doi cromozomi XX, iar masculul un singur cromozom X. Se ntlnete la ortoptere, miriapode, la viermii nematozi .a. - Subtipul Ascaris, la care femelele posed doi cromozomi XX, iar masculii un singur X, care nu este independent, ci ataat autozomilor. Tipul Abraxas. Numele vine de la genul de fluturi la care s-a descoperit i studiat acest tip de determinare a sexului. n acest caz, sexul femel este heterogametic XY, iar cel mascul homogametic XX. Femelele (XY) formeaz ovule cu X i ovule cu Y, n timp ce masculii un singur fel de spermatozoizi, care primesc cte un cromozom X. Dup cum spermatozoidul, care posed un cromozom X, va ntlni un ovul cu X sau Y va lua natere un mascul (XX) sau o femel (XY). (cu cromozomul X sau Y sau cu cromozomul X i fr cromozomul sexual Y) i este

Determinarea schematic a sexului se poate nota astfel: P1 (2n).. XY x XX Gamei (n)X i Y X F1 (2n) XY i XX Tipul Abraxas cuprinde i el dou subtipuri: Subtipul clasic descris mai sus, la care femelele sunt heterogametice XY i masculii homogametici XX; Subtipul deficiens, la care, la sexul femel lipsete cromozomul Y i rmne un singur X; masculii posed cromozomii XX. Acest tip de determinare a sexului l ntlnim la psri, la fluturi, la fragi .a. i este mult mai rar dect primul. Se mai numete i tipul pasre. Aceste dou tipuri de determinare cromozomic a sexului au fost studiate mai bine. n afar de ele au mai fost descrise i alte tipuri ntlnite mai rar. Astfel, la unele insecte au fost descrise pn n prezent existena unui numr mare de subtipuri.

5.3. SEXUL N CAZUL NMULIRII PARTENOGENETICE

Prin partenogenez se nelege dezvoltarea ovulului ntr-un individ complet, fr o fecundare prealabil. La albin din ovulele nefecundate rezult masculi, iar din cele fecundate mtci i albine lucrtoare. Determinarea sexului n cazul de fa se face prin ntreaga serie de cromozomi autozomi: n = , 2n = . n procesul de formare a celulelor sexuale, reducerea numrului de cromozomi se face numai la femele, de la 32 la 16. Pentru partenogenez, determinarea sexului pentru femele s-a numit diplogenotipic, iar pentru masculi haplogenotipic.

5.4. DETERMINISMUL GENETIC AL SEXULUI LA PLANTE

Majoritatea plantelor superioare sunt hermafrodite, iar formarea elementelor sexuale este dictat de genele care se gsesc pe cromozomii autozomi. La Zea mays, plant tipic unisexuat monoic, s-au identificat mai multe gene care determin sexul W. R. Singlleton i D. F. Jones (1930) au identificat gena ms1, situat pe cromozomul 6, ce determin androsterilitatea. Studiile ulterioare de genetic a porumbului au avut ca rezultat descoperirea altor gene implicate n determinarea sexului: - gena normal Ts determin formarea paniculului normal n timp ce gena recesiv mutant ts n stare homozigot (tsts), inhib formarea florilor mascule, paniculul transformndu-se ntr-o inflorescen cu flori femele; - gena

Sk, controleaz formarea pistilului, alela sk n stare homozigot (sksk) inhib formarea acestuia; gena Ba rspunde de formarea tiuletelui, iar alela sa ba n stare homozigot (baba) supreseaz formarea tiuletelui. Prin combinarea acestor gene pot rezulta o serie de genotipuri i fenotipuri, unele avnd importan deosebit n procesul de ameliorare a porumbului. De exemplu, genotipul Ts2ts2sksk produce plant mascul cu panicul normal, tiulete steril, fr pistile; genotipul Ts2Ts2baba, plante mascule cu paniculul normal, dar fr tiulete; ts2ts2sksk, plant femel cu pistile n panicul i tiulete fr pistile; ts2ts2baba plant femel cu pistile n panicul i fr tiulete. Dioicizarea plantelor monoice poate avea o importan teoretic i practic deosebit. La plantele dioice ns, mecanismul care asigur determinarea sexelor, separate pe indivizi deosebii, este asemntor animalelor. La baza acestuia st prezena cromozomilor sexului, descoperii pentru prima dat de C.E. Allen (1917) la plantele de muchi dioici Sphaerocarpus donelli. Indivizii femeli posed n celulele somatice 14 cromozomi autozomi i cromozomii sexului XX, n timp ce acei masculi, 14 cromozomi autozomi i cromozomii sexului XY. Mai trziu, cromozomii sexului au fost pui n eviden i la plantele superioare, cum sunt: Melandrium album, Humulus lupulus, Elodea gigantea, Rumex acetosella .a. n ceea ce privete repartizarea cromozomilor sexului la cele dou sexe, plantele se pot clasifica n mai multe categorii. Dup Westergaard (1958) mecanismele determinrii sexelor se pot ncadra n urmtoarele tipuri: - Plante cu sexul mascul heterogametic (XY) i sexul femel homogametic (XX), situaie ntlnit la tipul Drosophila. Din acest tip fac parte specii ca: Melandrium album, Cannabis sativa, Humulus lupulus .a. - Plante cu sexul mascul heterogametic (XO) i sexul femel homogametic (XX) ntlnit la speciile Discorea sinuata, Vallisneria spiralis .a. - Plante cu sexul mascul heterogametic, cu un cromozom n plus fa de cel femel, ntlnit la speciile Phoradendron villosum. Phoradendron flavescens .a. - Plante cu sexul femel heterogametic (XY) i sexul mascul homogametic (XX) aparinnd speciilor Fragaria elatior .a. - Plante cu sexul mascul heterogametic i sexul femel homogametic cu un cromozom sexual compus din mai muli cromozomi legai sub form de lan cu formula, de exemplu, XY1Y2 i XX ntlnit la speciile Humulus japonicus, Rumex hastatulus .a.

Fa de cele artate mai sus trebuie menionat c unisexualitatea plantelor superioare nu este absolut. O analiz n acest sens a fost fcut de C. Correns (1907) folosind dou specii de Bryonia: Bryonia dioica cu sexele separate, cu formula pentru sexul femel XX i sexul mascul XY i Bryonia alba, hermafrodit, cu formula XX. Din ncruciarea intraspecific a plantelor femele de Bryonia dioica cu plantele mascule tot cu Bryonia dioica a obinut 50% plante femele i 50% plante mascule, adic un raport ntre sexe de 1:1. Aceasta a dus la concluzia c la Bryonia dioica un sex este homogametic i altul heterogametic. ncrucind Bryonia alba (hermafrodit) ca form matern cu Bryonia dioica ca form patern a obinut n descenden plante dioice n raport de 50% plante femele i 50% plante mascule. Din ncruciarea invers, folosind Bryonia dioica ca form matern i Bryonia alba ca form patern, a rezultat aproape exclusiv numai plante femele. Rezultatele acestor ncruciri demonstreaz c la Bryonia dioica sexul femel este homogametic, iar cel mascul heterogametic. Spre deosebire de animale i n special la animalele superioare, unde exist o strict determinare a sexelor, la plantele superioare exist specii dioice la care raportul de segregare ntre sexe variaz n limite relativ mari. Aa de exemplu, la Humuls japonicus sau Humulus lupulus predomin indivizii femeli. La cnep, n anumite condiii, apare fenomenul de dubl sexualitate. Raportul dintre sexe poate fi favorabil unuia sau altuia dintre ele. Analizndu-se inflorescenele la cnep s-a constatat c plantele mascule pot forma i flori femele sau diferite forme tranzitorii ntre cele dou sexe.

5.5. EREDITATEA CARACTERELOR LEGATE DE SEX

La hibridri, n general, nu are importan dac un caracter homozigot urmrit se gsete n autozomii mamei sau tatlui. Ei nu afecteaz ntr-un anumit mod segregarea caracterelor n descenden. n cazul n care aceste caractere (gene) se gsesc n cromozomii sexului, caracterul ereditii i al segregrii este condiionat de mediul de comportare a cromozomilor sexului n meioz i mai apoi n procesul fecundrii. Deoarece cromozomul Y este inert nu conine gene, genele care se gsesc n cromozomul X nu au pereche alelic. Ca urmare, distribuirea lor este legat de distribuirea acestor cromozomi. Motenirea caracterelor, care sunt localizate n cromozomii sexului se mai numete i ereditate legat de sex i ea se comport diferit dup cum organismele se ncadreaz n diferite tipuri de determinare a sexelor: Drosophila sau Abraxas.

Ereditatea legat de sex n cazul heterogamiei sexului mascul (Drosophila)

Pentru a ilustra n ce const la organismele care au sexul mascul heterogametic i sexul femel homogametic, mecanismul de transmitere a caracterelor legate de sex, ne vom folosi de o experien efectuat de T. Morgan la Drosophila. El ncrucieaz mascul cu ochi albi (o form mutant) cu femele cu ochi roii (de tip slbatic) i obine n prima generaie n proporii egale, masculi i femele cu ochi roii caracter dominant, culoarea alb fiind un caracter recesiv. ncruciai ntre ei, indivizii din F1 produc n F2 o segregare: dup sex 50% femele i 50% masculi, iar dup caracterul studiat, la trei indivizi cu ochi roii se obine un individ mascul cu ochi albi (raportul 3:1). Notnd cu w+ culoarea roie a ochilor, cu w culoarea alb a ochilor, iar cu linii verticale cromozomii sexului putem obine urmtoarea schem (fig. 5.2.).

Fig. 5.2. Ereditatea caracterelor cuplate cu sexul (culoarea ochilor) n cazul heterogamiei sexului mascul. Faptul c n aceast experien apar masculi att cu ochi roii ct i cu ochi albi de dovedete c ei sunt heterogametici i formeaz dou tipuri de gamei. S vedem ce se ntmpl cnd se ncrucieaz femelele cu ochi albi, cu masculi cu ochi roii. Segregarea are loc deja n F1, unde se produc toate combinaiile posibile. Raportul ntre sexe pentru fiecare culoare a ochilor a fost 1:1. Prin ncruciarea ntre ei a indivizilor din F1, apar n F2 femele i masculi 50% cu ochi roii i 50% cu ochi albi (fig. 5.3.). n experienele descrise se poate sesiza c genele care determin culoarea ochilor sunt situate n cromozomii X.

Fig. 5.3. Ereditatea caracterelor cuplate cu sexul la Drosophila melanogaster (ncruciarea reciproc). Din schemele prezentate reiese c dac femela este homozigot pentru gena dominant a ochilor roii aflat n cromozomul X, atunci culoarea roie a ochilor se transmite n F1 i masculilor. Femelele din F1 primesc cromozomul X cu gena recesiv a culorii albe a ochilor de la tat, iar de la mam al doilea cromozom ce conine gena dominant a culorii roii. Sub influena genei ce produce culoarea roie a ochilor toate femelele au ochii roii. n F2 prin combinarea diferit a gameilor apar combinaii artate la prima experien. n cazul celei de a doua experiene cu ncruciarea reciproc, femelele primesc de la tat un cromozom cu gena dominant a culorii roii a ochilor i de la mam un cromozom cu gena recesiv a culorii albe a ochilor. Din aceast cauz femelele din F1 au ochi roii. Masculii din F1 au ochi albi, deoarece primesc de la tat cromozomul Y care este inert, iar de la mam un cromozom ce conine gena recesiv a culorii albe a ochilor. Gena, dei este recesiv se exteriorizeaz nefiind dominat de alte gene. Ea se gsete ntr-o singur doz, stare numit hemizigot. Motenirea caracterelor legate de sex, de la mam la fiu i de la tat la fiic, poart denumirea de criss-cross. Schemele date pentru ereditatea culorii ochilor legat de sex la Drosophila sunt valabile i pentru alte caractere i alte specii a cror gene sunt situate pe cromozomul X la organismele la care sexul heterogametic se prezint la mascul. Au fost studiate asemenea cazuri la insecte, peti, psri, mamifere. La om se cunosc unele ncruciri cuplate cu sexul: daltonismul, hemofilia .a. Deoarece sexul mascul la om este heterogametic, aceste boli se manifest frecvent la acest sex.

CAPITOLUL 6 EREDITATEA EXTRANUCLEAR

nc din secolul XX, cercetrile au artat c, alturi de nucleu, i citoplasma prezint un rol important n transmiterea caracterelor ereditare. Prin fenomenul de ereditate extranuclear se nelege motenirea caracterelor i nsuirilor organismului prin elementele citoplasmatice. Pentru a pune n eviden rolul citoplasmei n ereditate, trebuie s artm care elemente anume posed aceste nsuiri, dac au sau nu proprietatea de a se reproduce, de a se modifica i a transmite aceste modificri la generaia urmtoare i care sunt metodele de cercetare. S-a artat ntr-un capitol anterior c n citoplasma celulei se gsesc diferite structuri care au rol genetic, fr a analiza ns n ce const acest rol i cum poate fi pus el n eviden. Vom cuta s lmurim aceste probleme n capitolul de fa.

6.1. METODE DE EVIDENIERE A EREDITII EXTRANUCLEARE

Ereditatea extranuclear se poate pune n eviden prin mai multe ci: - fecundarea unui ovul anucleat cu un spermatozoid din alt specie (merogonie); - hibridarea reciproc; - prin intermediul incluziunilor i organitelor citoplasmatice; - testul heterocarion; - segregarea nemendelian.

6.1.1. Fenomenul merogoniei

Prin merogonie se nelege formarea unui embrion prin fecundarea unui ovul anucleat cu un spermatozoid normal. Din fecundarea unui ovul anucleat cu un nucleu strin rezult un zigot haploid, deoarece posed nucleul patern, haploid i citoplasma matern. Este foarte greu de a se obine, n astfel de cazuri, organisme mature deoarece zigoii, din cauza perturbrii raportului dintre nucleu i citoplasm, mor ntr-un stadiu timpuriu. Primele indicaii asupra existenei acestui fenomen au fost experienele embriologului T. Boveri (1899). El s-a folosit de ovule de arici de mare, pe care le-a centrifugat puternic, astfel nct

membrana lor s-a rupt, fcnd loc nucleului s ias afar. Aceste ovule anucleate au fost fecundate cu spermatozoizi de la o specie nrudit - crinul de mare. Larvele obinute erau haploide i conineau, pe lng caracterele tatlui i caracterele materne, transmise prin intermediul citoplasmei ovulului. n afar de metoda centrifugrii, nucleii din ovul pot fi ndeprtai i cu ajutorul micromanipulatorului, prin operaii de microdisecie, sau cu ajutorul unei micropipete, prin aspirare. O alt metod folosit este distrugerea nucleilor din celule cu ajutorul ocurilor de temperatur, a radiaiilor ionizante, raze ultraviolete sau unor substane chimice. Folosind unele din aceste metode I. Danielli i colab. (1957) au nlocuit nucleii de la Amoeba discoides cu nucleii de la Amoeba proteus. Nucleii transplantai au suferit influena citoplasmei strine, modificndu-i forma n sensul nucleilor de la Amoeba discoides. Cercetri interesante de acest gen s-au efectuat i cu specii din genul Triton (Triton palmatus i Triton cristatus) de ctre Paula Hertwig (1936, 1942), V. Curry (1931) .a., n care nucleii din ovule au fost distrui prin iradiere. Ereditatea citoplasmatic a fost pus n eviden la embrionii provenii prin fecundarea acestor ovule cu nucleii de la alt specie. Embrionii ns se dezvoltau numai pn n faza de blastul, apoi mureau. Elveianul E. Hadorn (1955) a reuit s nlture acest neajuns procednd n felul urmtor: fecundeaz ovule anucleate de Triton palmatus cu spermatozoizi de la specia T. cristatus. Din embrionii rezultai a desprins o poriune de epiderm i a transplantat-o pe embrionii unei specii de T. alpestris. Indivizii rezultai aveau poriunea de epiderm transplantat, asemntoare ca aspect i culoare cu aceea a lui T. palmatus. Citoplasma ovulului de T. palmatus i-a imprimat deci caracterele, epidermei transplantate la embrionul nou format.

6.1.2. Ereditatea extranuclear n hibridarea reciproc

n ncrucirile formelor ndeprtate (interspecifice i intergenerice), apare foarte frecvent fenomenul de matroclinie, prin care se nelege transmiterea cu precdere a caracterelor materne. De aceea, la astfel de hibridri nu este indiferent care dintre cele dou specii constituie forma matern sau patern. Practica a demonstrat c la hibridarea dintre Equus caballus i Equus asinus se obin hibrizi a cror mrime i constituie este mai mult asemntoare formei materne. Din hibridarea dintre Equus caballus i Equus asinus rezult catrul (Equus mullus), de mrimea i conformaia lui Equus caballus, iar din hibridarea dintre Equus asinus i Equus caballus rezult bardoul (Equus hinnus), de mrimea i conformaia lui Equus asinus. Cei doi hibrizi se deosebesc foarte mult prin mrime, culoare, for .a., dei n celulele somatice au acelai numr de cromozomi (2n=63).

6.1.3. Testul heterocarion

Prin heterocarion se nelege o celul n care, pe lng nucleul propriu, mai exist inclus un nucleu strin. n urma includerii nucleului strin se formeaz un dicarion, o celul cu doi nuclei. Fenomenul a fost pus n eviden la ciupercile inferioare, care se nmulesc asexuat. Realizri n aceast direcie au fost obinute de ctre R. E. Wright i J. Lederberg (1957) la drojdia de bere, Saccharomyces cerevisiae. Dac notm la o prim celul nucleul cu A i citoplasma cu , iar la a doua celul nucleul cu B i citoplasma cu , dicarionul format prin transferul nucleului B n celula va deveni AB. n descendena acestuia vor rezulta celule cu A i B . Cu aceast ocazie se constat c celulele B manifest caracteristici ale celulei A. Rezult c aceste caracteristici sunt transmise prin citoplasma i nu de nucleu (figura 6.1.).

Fig. 6.1. Schema formrii celulelor heterocarion

6.2. MANIFESTAREA EREDITII EXTRANUCLEARE

Tipurile de manifestare ale ereditii extranucleare mbrac diferite forme i ele depind de structurile din citoplasm, care poart i transmit caractere.

6.2.1. Ereditatea prin plastide

Primii cercettori care au pus n eviden ereditatea prin plastide au fost C. Correns (1909) i E. Baur (1910). E. Baur a studiat ereditatea culorilor mozaicate la Pelargonium zonale. Aceast plant posed frunze pestrie (alb-glbui cu verde). Observnd la microscop seciuni din aceste frunze se constat existena unor grupe de celule cu plastide necolorate n epiderma i subepiderma frunzei, n timp ce n partea central a ei se gsesc plastide verzi (cloroplaste). La aceast plant pot s apar, uneori, att ramuri cu frunze pestrie, ct i ramuri cu frunze cu frunze verzi sau albe. Executnd polenizri ncruciate ntre flori de pe ramuri cu frunze diferite, el obine semine care produc plante ce au caracterele frunzelor de la forma matern. Aceste ncruciri ne arat c transmiterea cloroplastelor la urmai se realizeaz prin citoplasma celulei-ou i ntr-o mic msur de ctre spermatie, care are o cantitate mic de citoplasm.

C. Correns descrie un caz de ereditate citoplasmatic la Mirabilis jalapa. Aceast plant are ramuri cu frunze verzi, albe i mozaicate. El a efectuat polenizarea florilor de pe ramurile verzi, albe i pestrie, cu polenul de la florile acestor trei tipuri. Plantele pe care le obine din semine au purtat numai caracterul mamei n ceea ce privete culoarea frunzelor. Fenomene asemntoare au fost observate la gura leului, patlagin, hamei .a. O dovad gritoare c ntr-adevr cloroplastele se transmit numai pe cale citoplasmatic este faptul c ele posed un mecanism de autodedublare i o continuitate celular. Plantele la care au fost distruse plastidele dau urmai fr plastide, nefiind capabile de a le sintetiza "de novo".

6.2.2. Ereditatea mitocondrial

Primele dovezi asupra localizrii unor structuri ereditare (mutante) la nivelul mitocondriilor de la Neurospora crassa aparin lui Mitchell (1952), iar la Saccharomyces cerevisiae lui Ephrussi (1953) i Slonimski (1953). Ulterior, s-au descoperit i alte tipuri de mutante, cum ar fi acelea ce confer rezistena la antibiotice de la Saccharomyces cerevisiae. Au fost studiate mai bine dou mutante i anume: "petite" la Saccharomyces cerevisiae i "poky" la Neurospora. Aceste mutante se caracterizeaz printr-o cretere insuficient a coloniilor, din cauza unor alterri ale enzimelor din mitocondrii implicate n procesele de respiraie. Analiza genetic a mutantelor de tip "petite" a dus la concluzia c, n cazul de fa, acioneaz un factor citoplasmatic R (normal) sau r (deficien respiratorie) i un factor nuclear P (normal) sau p (deficien respiratorie). Aceti factori acioneaz mpreun. n stare normal o celul haploid va conine RP. Dup constituia lor genetic, coloniile "petite" pot fi de dou feluri: primele se numesc "petite vegetative" (rP). n stare diploid, ele nu formeaz ascospori, dar hibrizii rezultai din ncruciarea haploizilor normali i haploizi de tip "petite vegetative", se comport normal i dau ascospori, fr a da prin segregare tipul "petite". S-a explicat acest rezultat presupunndu-se c n citoplasma celulelor normale se gsesc factori ce lipsesc din citoplasma cu deficien respiratorie. Hibridul haploid primete aceti factori de la tipul normal; al doilea tip de colonii se numete "petite segregante". n acest caz, coloniile au fenotip identic cu acelea "vegetative", dar ele s-au format prin mutaiile genei nucleare P i au genotipul Rp sau rp. Prin ncruciarea unui haploid normal cu un haploid mutant "petite", prin formarea sporilor se produce o segregare de dou celule normale la dou celule "petite". Fenomenul poate fi explicat presupunnd c factorul Rp din citoplasma celulei respective, n prezena genei nucleare p este nefuncional, iar n prezena genei dominante P devine funcional. O gen nuclear influeneaz deci, genele extranucleare.

6.2.3. Androsterilitatea citoplasmatic i nucleo-plasmatic

Androsterilitatea (sterilitatea mascul) este o nsuire a plantelor de a nu produce polen sau de a produce polen steril. Fenomenul acesta este studiat foarte mult la porumb i are importan pentru producerea hibrizilor simpli i dubli, obinui din ncruciarea liniilor consangvinizate. Se cunosc trei tipuri de androsterilitate: nuclear (cromozomic), citoplasmatic i nucleoplasmatic. Prima se cunoate de mult vreme i a fost sesizat la multe plante. La porumb, Emerson, Beadle i Frase (1935) comunicau existena a mai mult de 25 gene ce produc androsterilitatea. Aceast sterilitate nu a putut fi folosit n lucrrile de ameliorare, deoarece, din cauza segregrii, n descenden, apar i plante fertile. Androsterilitatea ce se motenete pe calea citoplasmei se transmite n descenden de ctre partenerul femel i ea se folosete n lucrrile de ameliorare. A fost descoperit la o plant steril de porumb de Peru de ctre Rhoades (1931, 1933). ncrucind repetat descendenele cu aceeai form patern, nu s-a modificat n descenden caracterul de androsterilitate. S-a ajuns la concluzia c, n acest caz, androsterilitatea este determinat exclusiv de citoplasm. Totui, Rhoades d unele date, care ne arat c n unele cazuri, n urma polenizrii libere la porumb, pot aprea n descendene i plante fertile sau parial fertile. Deci, acest caracter depinde i de genele nucleare, care intr n aciune cu genele din citoplasm (androsterilitate nucleoplasmatic). Numeroase linii care posed polen fertil, prin ncruciare, produc forme cu polen steril. n aceste cazuri, genotipul nu influeneaz asupra caracterului de androsterilitate, motenirea ei realizndu-se pe calea citoplasmatic. Au fost totui gsite linii cu factori genotipici capabili de a restabili fertilitatea polenului, n urma ncrucirii cu forme, care dein nsuirea citoplasmatic de sterilitate. Restaurarea fertilitii. Se ntlnesc cazuri rare cnd androsterilitatea la porumb se motenete numai prin citoplasm, n mod independent fa de genotip. Exist cazuri cnd genotipul inhib aciunea citoplasmei ce produce sterilitatea polenului, precum i cazuri cnd, din contra, citoplasma poate influena genotipul, provocnd androsterilitatea nuclear. Caracterul de androsterilitate este condiionat deci de interaciunea dintre genotip i citoplasm.

Cercettorii Jones (1950), Rogers (1954) .a. au emis ipoteza c restabilirea fertilitii polenului se datorete prezenei a dou gene dominante prezente la linia care i restabilete fertilitatea. Dup comportarea lor fa de liniile sterile, liniile consangvinizate pot fi clasificate: 1. Linii fixatoare de sterilitate; 2. Linii restauratoare de fertilitate; 3. Linii semirestauratoare de fertilitate (semifixatoare de sterilitate). Trebuie menionat c liniile consangvinizate de porumb se comport n mod deosebit fa de diferite tipuri de sterilitate. Uneori, aceeai linie poate fi restauratoare pentru un tip de androsterilitate i fixatoare pentru alt tip. Pentru a urmri comportarea plantelor fa de androsterilitate n funcie de aciunea genelor din citoplasm i nucleu, vom nota cu S gena ce produce sterilitatea, cu F gena ce asigur fertilitatea i cu R gena restauratoare de fertilitate (figura 6.2.)

Fig. 6.2. Cele trei tipuri de androsterilitate: nuclear (I), citoplasmatic (II) i nucleo-plasmatic (III)

Folosirea androsterilitii n producerea de hibrizi reduce lucrrile de castrare a plantelor i cheltuielile de producie. Pentru producie se lucreaz la obinerea de linii consangvine, acestea se

ncrucieaz i formeaz hibrizi simpli, iar acetia din urm ncruciai produc hibrizi, dubli cultivai n producie. n figura 6.3. este redat schema pentru obinerea de hibrizi dubli pe baz de androsterilitate.

Fig. 6.3. Schema pentru obinerea de hibrizi dubli pe baz de androsterilitate

CAPITOLUL 7 MUTAII GENETICE

Noiunea de mutaie a fost introdus de Hugo de Vries, nelegnd prin aceasta, o schimbare brusc a nsuirilor ereditare. E. Baur o definete drept o modificare ereditar, care a aprut n afara hibridrii, iar E. Guyenot, o variaie brusc i ereditar, ce poate apare spontan sau sub influena unor factori experimentali. Mutaia este o nsuire a materialului genetic i este tot att de important ca i stabilitatea lui. Ea apare la toate organismele i alturi de recombinarea genetic este principala surs de variabilitate a lor.

7.1. CLASIFICAREA MUTAIILOR

Mutaiile se pot clasifica n mai multe tipuri, fiecare avnd la baz un anumit criteriu: Dup modul de apariie, ele se mpart n mutaii naturale i mutaii artificiale: mutaiile naturale, numite i spontane, apar n condiiile din natur, fr nici o influen din partea omului. Datorit faptului c mediul totalizeaz o mare complexitate de factori ce influeneaz organismul este foarte greu de a descoperi cauzele ce determin apariia acestor mutaii; mutaiile artificiale, numite i induse, sunt provocate de om cu ajutorul diferiilor ageni mutageni. Dup capacitatea de expresie fenotipic (mrimea lor), ele pot fi mari sau mici: mutaiile mari (macromutaiile) se deosebesc prin caracterul lor net vizibil, ceea ce face ca ele s fie foarte uor sesizate; mutaiile mici (micromutaiile), spre deosebire de primele, sunt greu perceptibile, dar mai frecvente i cu un rol important n evoluie. Dup aciunea genei mutante, mutaiile pot fi morfologice, fiziologice sau biochimice: mutaiile morfologice afecteaz trsturile morfologice ale organismelor, de form, mrime, culoare etc. i sunt uor detectabile vizual; mutaiile fiziologice produc schimbri n procesele fiziologice, cum ar fi ritmul de cretere, perioada de vegetaie, rezistena la boli .a.; mutaiile biochimice determin modificarea cantitativ sau calitativ a componenilor chimici din organism, organisme ce acumuleaz anumite substane de rezerv sau toxice, organisme ce nu pot sintetiza anumii compui .a. Dup natura substratului material al ereditii, mutaiile sunt: genice, cromozomice, de genom, citoplasmatice: mutaiile genice (punctiforme) provoac modificarea genei fr a produce o

schimbare n morfologia cromozomului. Ele se refer la schimbri de structur chimic. O alel se transform n alta, fr a schimba locus-ul n cromozom; mutaiile cromozomice se refer la restructurrile ce pot avea loc n cromozom (deficien, deleie, inversie, translocaie, translaie); mutaiile de genom privesc variaia numrului de cromozomi; plasmomutaiile sunt mutaiile plasmonului, a structurilor ereditare din citoplasm. Dup originea lor, mutaiile pot fi germinale i somatice: mutaiile germinale apar n celulele sexuale i ele se manifest n zigoii la a cror formare particip; mutaiile somatice apar n celulele somatice. Cu ct ele apar mai devreme, cu att vor afecta o poriune mai mare de organism. Pentru organismele la care esutul reproductor se difereniaz foarte devreme, aceste modificri nu pot deveni ereditare i dispar odat cu individul. La organismele cu nmulire vegetativ ele se pot menine pe cale vegetativ i pe cale sexuat cnd din esuturile somatice afectate se dezvolt celule sexuale, purttoare a acestor mutaii. Dup direcia lor, mutaiile pot fi progresive (mutaii nainte) i mutaii de reversie (mutaii napoi): mutaiile progresive conin o modificare nou fa de materialul iniial; n mutaiile de reversie, mutantul revine la caracterul normal.

7.2. MUTAIILE SPONTANE

Apariia brusc a unor indivizi deosebii, n cadrul unei populaii cu posibiliti de a transmite modificarea lor la urmai, a fost sesizat nc de foarte mult timp. Unele mutaii, mai deosebite, au rmas nscrise n diferite lucrri. Aa este cazul unei mutaii descoperit n sec. XVI de ctre farmacistul german Sprenger din Heidelberg, la planta Chelidonium majus. Un individ avea frunzele i petalele laciniate (spintecate), caracter care a aprut brusc i s-a transmis ca atare. Noua form a fost denumit Chelidonium laciniatum i a fost meninut prin autofecundare. La fragi exist o mutaie descoperit de Duchesne (1763), care are frunza compus dintr-o singur foliol, numit i fragul monofil. Darwin, n lucrarea sa "Variaia animalelor i plantelor sub influena domesticirii" (1868), descrie diferite mutaii pe care le denumete sporturi. Se folosete de apariia unui piersic, care avea frunzele netede, de apariia unui prun cu fructe de culoare galben .a. La animale citeaz numeroase mutaii: rasa de vite Nistos, cu maxilarul superior mai scurt dect cel inferior, asemntor cinilor buldogi, rasa de oi Ancona cu picioare foarte scurte, puni cu umeri ce au pene de culoare neagr .a. n afar de aceste mutaii, exist foarte multe exemple acumulate n literatura de specialitate: cinii bassei, cunoscui cu 3000 de ani . C., merinosul de Machamp cu lna puin ondulat, dispariia coarnelor la oi, taurine i capre, porcii solipezi, care au o singur copit i nu se

mbolnvesc de febra aftoas, rasa de oi chinez Yang-ti, fr urechi, porumbeii rotai, gulerai, moai, fluturi de culoare neagr .a.

7.3. MUTAIILE ARTIFICIALE

Odat cu descoperirea unor factori ce pot fi folosii de om n obinerea de mutaii, interesul oamenilor de tiin pentru studiul acestora i a efectelor pe care le produc asupra organismelor a crescut foarte mult. Paralel cu acest studiu s-au elaborat i s-au perfecionat i metodele pentru producerea de mutaii, denumite i induse. Dintre factorii mutageni folosii de ctre om pentru prima dat au fost razele X. n anul 1925, G.A. Nadson supunnd ciuperci inferioare la aciunea razelor X a obinut mutaii. O dovad mai convingtoare a aciunii mutagene a razelor X i gamma a fost obinut de G. Muller n 1927 i 1928 la Drosophila. Rezultatele le public n lucrarea "Transmutaia artificial a genei". Tot n aceast perioad, L. J. Staddler, n 1927-1929 obine tot cu ajutorul radiaiilor, mutaii la orz, porumb i tutun. Descoperirea efectului mutagen al radiaiilor a deschis calea unor bogate cercetri tiinifice, cu nsemntate att din punct de vedere teoretic, ct i practic. T. H. Morgan i coala sa au obinut la Drosophila peste 500 de forme mutante (figura 7.1.) Dintre agenii mutageni folosii de om i mai bine studiai fac parte: radiaiile, temperatura i unele substane chimice. Ultimele au fost folosite mai mult i cu succes n obinerea de mutaii.

Fig. 7.1. Indivizi normali de Drosophila melanogaster (a) i diferite mutante (b, c, d)

7.3.1. Radiaiile mutagene

Radiaiile electromagnetice au o gam de lungimi de und foarte ntins care variaz de la 10 m ct au razele gamma, pn la peste 1 m, cum este cazul undelor heriene. ntre aceste limite se gsesc razele X, razele ultraviolete (UV), razele infraroii.
-3

Radiaiile mutagene sunt radiaiile care produc mutaii i din ele fac parte: radiaii ionizante electromagnetice (razele X i gamma); radiaii ionizante corpusculare (raze , , protoni, neutroni, diferite particule grele); radiaii neionizante (razele ultraviolete). Razele X i gamma, prin energia lor absorbit, provoac ionizri n esuturile plantei i modific metabolismul celular. Razele X sunt foarte mult folosite, deoarece aparatele Rentgen sunt mai uor utilizabile. Pentru iradierea cu raze gamma se folosete cobaltul radioactiv. Razele gamma sunt mai penetrante dect razele X. Razele beta () sunt formate din electroni eliberai de radioizotopi de P32 i S35. Cu acetia se realizeaz soluii radioactive, n care se introduc semine uscate sau germinate. Neutronii sunt particule neutre din punct de vedere electric, rezultai din dezintegrarea atomilor. Ei acioneaz prin curentul dens i ionizant de protoni de hidrogen. Efectul iradierii cu neutroni este mai puternic, cu ct elementele celulei au o structur mai dens (plastide, nuclei i cromozomi). Razele ultraviolete (UV) fac parte din spectrul solar invizibil, sunt constituite din fotoni cu o lungime de und ntre 136 i 4000 . Absorbite de organism, transform energia lor n reacii chimice, provocnd diferite efecte genetice. Ele au o mic putere de ptrundere i sunt absorbite la suprafaa esuturilor. n lucrrile de genetic se folosete mai frecvent aciunea mutagen a razelor X, gamma i a neutronilor termici. Studiul i folosirea radiaiilor n genetic a dus la fundamentarea unei noi ramuri a biologiei - radiogenetica - care, n ultimul timp, a cptat o amploare foarte mare.

7.3.2. Temperatura
Temperatura este un agent mutagen slab. Aciunea ei a fost sesizat n special la Drosophila. Odat cu ridicarea temperaturii la care sunt crescute musculiele, frecvena mutaiilor crete. Dar cu creterea sau scderea treptat a temperaturii, frecvena mutaiilor crete nensemnat. Mult mai eficace sunt ocurile de temperatur, aplicate pentru o perioad scurt de timp. Prin tratarea larvelor de Drosophila cu temperaturi de 36-380C timp de 12-24 ore, frecvena mutaiilor letale crete de dou ori fa de acele crescute la temperaturi normale. Dac ocul corespunde temperaturilor sczute de -60C timp de 25-40 minute, frecvena mutaiilor crete de trei ori fa de acele crescute la temperaturi normale.

7.3.3. Substanele chimice mutagene

Aciunea mutagen a unor substane a fost pus n eviden mai ales n ultimele decenii. Oehlkers, n 1943 descoper aciunea de dezintegrare a cromozomilor de Oenothera prin tratarea acesteia cu uretan. Primele rezultate s-au obinut prin tratarea Drosophilei cu iperit (gaz mutar),

prin nregistrarea letalelor legate de sex. S-a obinut pn la 24% spor de letalitate. Ulterior, s-au obinut rezultate i la plantele superioare, la ciuperci i microorganisme. Principalii ageni mutageni chimici sunt: agenii alkilani, acidul nitros, hidroxilamina, acridinele etc. Agenii alkilani, dintre care face parte i iperita, se numesc astfel, deoarece conin un radical numit alkil (metil, etil, propil), care poate fi transferat nucleotidelor. Majoritatea lor opresc diviziunea mitotic, de aceea sunt folosii i n tratamentul cancerului. Ei intr n reacie cu molecula de ADN, unde pot produce urmtoarele modificri: ruperea coloanei glucido-fosforice, alkilarea bazelor azotate, depurinizrile moleculei de ADN, blocarea mitozei prin formarea unei legturi transversale intercatenare. Efectul mutagen al agenilor alkilani a fost pus n eviden la bacterii, Drosophila melanogaster, Neurospora crassa, Vicia faba .a. Substanele alkilante acioneaz n perioada S a ciclului mitotic. Acidul nitros (HNO2) este un agent mutagen care acioneaz asupra bazelor purinice i pirimidinice, dezaminndu-le. S-a artat c prin tratarea ARN din virusul mozaicului tutunului cu acid nitros, se produce dezaminarea bazelor azotate i adenina a trecut n hipoxantin, guanina n xantin i citozina n uracil. Aceste treceri au repercusiuni asupra blocrii biosintezei unei enzime i n consecin asupra unei proteine. Hidroxilamina (NH2OH) acioneaz n special asupra citozinei, care face parte din bazele pirimidinice. Ea provoac o dezaminare a citozinei i transformarea ei n uracil. A fost experimentat asupra virusului mozaicului de la tutun, asupra fagului T4. Acridinele sunt colorani bazici care produc mutaii, acionnd asupra moleculelor de ADN, dar ale cror mecanisme nu sunt nc bine elucidate. n afar de substanele artate mai sus se mai cunosc i altele cu aciune mutagen: hidrazina, formaldehida, clorura de mangan, peroxizii organici, apa oxigenat, clorura feroas .a.

7.3.4. Factorii mutageni biologici

Cercetrile care s-au efectuat n ultimii ani la microorganisme au scos n eviden c virusurile i micoplasmele produc mutaii la plante i animale. Se cunosc ribovirusurile care produc sarcomul la gini i leucemia la psri i mamifere. Dintre dezoxiribovirusuri pot fi menionate: virusul poliomei sau virusul oncogen. Teoria virotic a cancerului uman ctig tot mai mult teren. Este vorba de ribovirusuri defective, care se integreaz n cromozomii umani. Dar ptrunderea virusurilor n celul determin restructurri cromozomice, pulverizri cromozomice. Sunt citate chiar i apariii de mutaii genice.

Micoplasmele, cele mai mici organisme, de dimensiuni cuprinse ntre cele mai mari virusuri i cele mai mici bacterii, capabile i de via independent, introduse n culturi de celule produc restructurri i pulverizri cromozomice. La nivel molecular sinteza ADN micoplasmic oprete sinteza ADN din celula gazd.

7.4. MECANISMUL MOLECULAR AL MUTAIILOR

Deoarece, un anumit tip de secven este purttorul unei anumite informaii ereditare, orice influen care ar schimba aceast secven, schimb i coninutul informaiei. n procesul de diviziune al celulei aceast schimbare se va transmite i celulelor fiice. Se cunosc astzi unele substane chimice, care, venind n contact cu organismele sau numai cu acizii nucleici extrai din ele, modific structura acestora i fac s apar mutaii. Schimbrile se produc n anumite regiuni ale moleculei i nu au nimic comun cu restructurrile cromozomice ce se produc la cromozomi. Schimbarea secvenei nucleotidelor se refer de fapt la schimbarea bazelor azotate, acestea constituind elementul mobil. Exist mai multe modaliti de schimbare a lor: substituia, deleia, adiia i inversia. Prin substituie, se nelege nlocuirea unei baze purinice sau pirimidinice printr-o alt baz purinic sau pirimidinic. Dac aceast nlocuire are loc numai ntr-o caten, odat cu replicarea moleculei, nlocuirea se va transmite i n catena complementar. nlocuirea este i ea de dou tipuri: a) cnd o baz purinic este nlocuit tot cu o baz purinic, iar una pirimidinic tot cu una pirimidinic, ea mai poart numele de tranziie (de exemplu se nlocuiete adenina cu guanina sau timina cu citozina); b) cnd o baz purinic este nlocuit cu o baz pirimidinic sau invers, poart numele de transversie. Deleia este pierderea unuia sau mai multor nucleotide, modificnd mesajul genetic. Adiia este adugarea unuia sau mai multor nucleotide n cadrul secvenei iniiale, iar inversia este schimbarea ordinei unui numr de baze ntr-un segment al catenei din molecula de ADN. Pentru a da o explicaie diferitelor tipuri de modificri structurale a ADN, Watson i Crick au emis teoria copierii greite n procesul de replicare a ADN. Schimbarea de secven a unei baze va comanda n procesul de sintez, baza corespunztoare, cu care se va lega catena nou, complementar. Aceast nou ordine va fi copiat i la o nou replicare a moleculei de ADN. Mutaii ale acizilor nucleici s-au obinut prin aciunea cu diferii ageni mutageni, fie asupra organismului, fie direct asupra acizilor nucleici. n cazul radiaiilor ionizante, mecanismul de obinere a mutaiilor la nivel molecular nu este nc complet elucidat. Exist numai ipoteze, care susin c acestea produc ruperi ale moleculei de ADN, urmate de realipirea fragmentelor n diferite

poziii. Razele ultraviolete cu lungimea de und de 2600 acioneaz asupra bazelor purinice i pirimidinice. S-a demonstrat acest lucru, acionndu-se direct asupra acestor baze. S-a constatat c acestea sunt sensibile la tratamentul cu raze ultraviolete i se descompun n mod difereniat. Temperaturi anormale pot produce alterri n molecula de ADN: disocierea i depurinizarea catenelor de ADN.

BIBLIOGRAFIE SELECTIV
1. ANTOHI, ST., GAVRIL, L., 1981 - Progrese n genetica molecular, Edit. tiinif. i encicloped., Bucureti. 2. BUTNARU, GALLIA, 1985 - Genetic, vol. I i II, Lito, Inst. Agr. Timioara. 3. COLES, N., 1974 - Genetica, Lito, Universitatea Craiova. 4. CRCIUN, T., 1970 - Genetica, Ed. Did. i Ped., Bucureti. 5. CRCIUN, T., PTRACU, MINODORA, 1978 - Mecanismele ereditii. 6. CRCIUN, T., 1981 - Genetica plantelor horticole, Edit. Ceres, Bucureti. 7. CRCIUN, T:, TOMOZEI, I., COLES, N., BUTNARU, GALLIA, 1991 - Genetica, Ed. Did. i Ped., Bucureti. 8. CRLAN, M., 1996 - Elemente de genetic animal normal, Edit. Polirom, Iai. 9. DIACONU, P., 1971 - Ereditatea i factorii mutageni, Edit. Ceres, Bucureti. 10. DRACEA, I., 1972 - Genetica, Edit. Did. i Pedag., Bucureti. 11. DRACEA, I., 1973 - Genetica, Edit. Did. i Pedag., Bucureti. 12. GAVRIL, L., DABALA, I., 1975 - Genetica diviziunii celulare, Edit. Dacia, Cluj-Napoca. 13. GAVRIL, L., DABALA, I., 1981 - Descifrnd tainele ereditii, Edit. Dacia, Cluj-Napoca. 14. LINTS, F., 1991 - Genetique 3, Office International de Librairie, Bruxelles, Technique et Documentation, Paris. 15. MAXIMILIAN, C., IOAN, DOINA MARIA, 1984 - Dicionar enciclopedic de genetic. Edit. tiinif. i encicloped., Bucureti. 16. MENDEL, GR., 1945 - Experiene asupra hibrizilor de plante. Buletinul cultivrii i fermentrii tutunului nr. 3-4. 17. PANFIL, C., 1974 - Genetica, Edit. Did. i Pedag., Bucureti. 18. RAICU, P., 1980 - Genetica, Edit. Did. i Pedag., Bucureti. 19. TOMA, C., NI, MIHAELA, 1995 - Celula vegetal, Edit. Universitii "Al. I. Cuza", Iai. 20. RDEA, GH., 1996 - Genetica, Lito, USAMV, Iai. 21. WATSON, J.D., CRICK, F.H.C., 1953, - The structure of DNA, Cold Spring Harbor Symp., Quant. Biol., 18. 22. WATSON, J.D., 1974 - Biologia molecular a genei, Edit. tiinif., Bucureti. 23. WILKINS, M.H.F., 1961 - The molecular structure of DNA, J. Chim. Phys. 58. 24. WILKINS, M.H.F., 1963 - Molecular configuration of nucleic acids. Science, 140. 25. ZOLYNEAC, C.C., 1982 - Genetica i ameliorarea plantelor i animalelor. Partea I. Xerox, Univ. "Al. I. Cuza", Iai.